第一篇：二苯胺試劑鑒定DNA

二苯胺試劑：鑒定 DＮA。

二苯胺試劑得配制

A 液：1。５ g 二苯胺溶于 1００ mL 冰醋酸中,再加 1５ mL 濃硫酸，用棕色瓶保存。如冰醋酸呈結(jié)晶狀態(tài)，則需加溫后待其熔化，再使用。

B 液：乙醛得體積分?jǐn)?shù)為 0、2％得溶液.配制：將 0、1 mＬ B 液加入到 10 ｍL A 液中，現(xiàn)配現(xiàn)用.DＮA 得粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)原理

1、DＮA 在ＮａCl 溶液中得溶解度,就是隨著 NａCl 得濃度得變化而改變得。

當(dāng)ＮaＣl 得物質(zhì)得量濃度為０、14 ｍol／L 時(shí)，DNA 得溶解度最低.利用這一原理,可以使溶解在ＮaＣl 溶液中得ＤＮA 析出。

2、ＤNA 不溶于酒精溶液,但就是細(xì)胞中得某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液.利用這一原理,可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少得 DNＡ。

3、DＮA 遇二苯胺(沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定 DNA 得試劑。

注意事項(xiàng)

1、步驟 3 析出含 DＮA 得黏稠物中,蒸餾水要沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入,不能一次快速倒入。

2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，但就是在不同得步驟中玻璃棒得用法不同。

實(shí)驗(yàn)用具

雞血細(xì)胞液（５～1０ mL）;體積分?jǐn)?shù)為 95%得冷酒精,蒸餾水，質(zhì)量濃度為０、１ g/mＬ得檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)得量濃度分別為 2 mol/L 與０.015 mol／L 得 NaCl 溶液,二苯胺試劑；燒杯(10０ mL，1 個(gè), ５０ ｍL，５０0 mL，各 2 個(gè))，漏斗，試管（２0 ｍL,２個(gè)），玻璃棒,滴管,量筒（1０0 ｍL，1 個(gè)），紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺,鐵環(huán)，三角架，酒精燈,石棉網(wǎng),載玻片，試管夾。

實(shí)驗(yàn)原理:

1、析出溶解在 NaC１溶液中得 DＮA。

２、用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少得ＤNA.

３、DNA 在沸水浴時(shí)被二苯胺染成藍(lán)色。

方法步驟:

１．提取細(xì)胞核物質(zhì):順時(shí)針方向攪拌，稍快,稍重.5 ｍin

2.溶解 DＮA:

3。析出含 DNA 得黏稠物：蒸餾水３００mＬ,逆時(shí)針方向攪拌，緩慢

4。過濾：取黏稠物

５。再溶解:順時(shí)針方向攪拌，較慢。３ ｍin

6。過濾:取濾液。

7．提取出含雜質(zhì)較少得 DNA,逆時(shí)針方向攪拌，稍慢.5 min

８．DNA 得鑒定:沸水?。祄in

【實(shí)驗(yàn)十二】DNA 得粗提取與鑒定

實(shí)驗(yàn)原理

DNA 在氯化鈉溶液中得溶解度,就是隨著氧化鈉得濃度得變化而改變得。當(dāng)氯化鈉得物質(zhì)得量濃度為 2 mol/L 時(shí)，DNＡ得溶解度最大，濃度為 0.１4 mol/L 時(shí),ＤNA 得溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中得 DNA 析出.DNA 不溶于９5％得酒精溶液,但就是細(xì)胞中得某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理,可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少得 DNA。

DNA 中含有脫氧核糖,能與二苯胺(沸水浴)反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，因此,二苯胺可以作為鑒定 DNA 得試劑。

目得要求 1、學(xué)會(huì) DNA 得粗提取與鑒定得方法。

２、觀察提取出來得 DNA 物質(zhì)得顏色與形狀。

材料用具

材料：活雞或鮮血雞血。

儀器:離心機(jī)、恒溫水裕鍋、載玻片，玻璃棒，濾紙，滴管，量簡（100 mL,ｌ個(gè)),燒杯（10０ mL，l 個(gè),50 mL、5０0 mL 各 ２個(gè))，試管（２0 mL,2 個(gè)）,漏斗,試管夾,紗布.試劑:酒精得體積分?jǐn)?shù)為 95%得溶液（實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻 24 h),蒸餾水,檸檬酸鈉得質(zhì)量濃度為 0。1g/mＬ得溶液,氯化鈉得物質(zhì)得量濃度分別為 2 mol/L 與 0．015 mol/L 得溶液，二苯胺試劑。

方法步驟

實(shí)驗(yàn)前需要制備雞血細(xì)胞液(由教師完成)，制備得方法就是：取檸檬酸鈉得質(zhì)量濃度為 0。1 g/ｍＬ得溶液（抗凝劑)1０0 mＬ,置于500 mL燒杯中.將宰殺活雞流出得雞血（約１80 mL)注入燒杯中,同時(shí)用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合,以免凝血.然后,將血液倒入離心管內(nèi)，用 １000 ｒ/min 得離心機(jī)離。２ｍiｎ,此時(shí)血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí),用吸管除去離。心管上部得澄清液,就可以得到雞血細(xì)胞液.１．提取雞血細(xì)胞得細(xì)胞核物質(zhì)

將制備好得雞血細(xì)胞液 5 mL～１0ｍＬ，注入到 50 ｍL 燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水 20 mL,同時(shí)用玻璃棒充分?jǐn)嚢?5 min,使血細(xì)胞加速破裂。然后，用放有紗布得漏斗將血細(xì)胞液過濾至５00mL.取其濾液。

２．溶解細(xì)胞核內(nèi)得ＤNA

將氯化鈉得物質(zhì)得量濃度為 2 mｏｌ得溶液 40ｍＬ加入到濾液中,并搖動(dòng)燒杯,使其混合均勻,這時(shí) DNＡ在溶液中呈溶解狀態(tài)。

３．析出含 DNA 得粘稠物

沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)得粘稠物會(huì)越來越多.當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)停止加入蒸餾水(這時(shí)溶液中氯化鈉得物質(zhì)得量濃度相當(dāng)于０、1４ moｌ/Ｌ）。

4。濾取含 DNＡ得粘稠物

用放有多層紗布得漏斗，過濾步驟 3 中得溶液至 500ｍL 得燒杯中,含 DNA 得粘稠物被留在紗布上。

5.將ＤＮA 得粘稠物再溶解

取 １個(gè) 5０ mL 燒杯,向燒杯內(nèi)注入氯化鈉得物質(zhì)得量濃度為 2 mol／L 得溶液 ２0ｍL。用鈍頭鑷子將紗布上得粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃擇不停地?cái)嚢瑁拐吵砦锉M可能多地溶解于溶液中。

６。過濾含有 DNA 得氯化鈉溶液

?。眰€(gè)１00 mL 燒杯，用放有兩層紗布得漏斗過濾步驟 5 中得溶液。取其濾液,DＮＡ溶于濾液中。

７．提取含雜質(zhì)較少得 DNＡ

在上述濾過得溶液中，加入冷卻得、酒精得體積分?jǐn)?shù)為 ９５％得溶液 50ｍＬ(使用冷卻得酒精，對 DNA 得凝集效果較佳）,并用玻璃棒攪拌，溶液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少得絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起,并用濾紙吸取上面得水分。這種絲狀物得主要成分就就是DNA。注意觀察絲狀物就是什么顏色得.8.ＤNA 得鑒定

取兩支20 mL得試管，各加入氯化鈉得物質(zhì)得量濃度為0.01５ ｍｏl/L得溶液5 ｍL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解.然后,向兩支試管中各加入4mｌL 得二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱 ５ ｍin，待試管冷卻后,觀察并且比較兩支試管中溶液顏色得變化。將觀察得結(jié)果填寫在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊》上。

結(jié)論

步驟８得 2 支試管中溶液顏色得變化說明了什么？將得出得結(jié)論填寫在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊》上.討論

1。提取雞血中得 DNA 時(shí),為什么要除去血液中得上清液？

2．步驟回與步驟 3 中都需要加入蒸餾水,兩次加入得作用相同嗎？為什么？ 3。ＤNA 得直徑約為 20×10-1０ ｍ,實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)得絲狀物得粗細(xì)就是否表示 1 個(gè) DNＡ分子直徑得大?。?/p>

第二篇：二苯胺鑒定dna

二苯胺鑒定dna

實(shí)驗(yàn)原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的，二苯胺鑒定dna。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14 mol/L時(shí),DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。3.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

DNA分子中2-脫氧核糖殘基在酸性溶液中加熱降解，產(chǎn)生2-脫氧核糖并形成ω-羥基-γ-酮基戊酸，后者與二苯胺試劑反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色化合物，其反應(yīng)如下圖。藍(lán)色化合物在595nm處有最大吸收，且DNA在40μg ~400μg范圍內(nèi)時(shí)，吸光度與DNA濃度成正比。在反應(yīng)液中加入少量乙醛，可以提高反應(yīng)靈敏度。

甲基綠能把DNA染成綠色，為什么在DNA粗提取與鑒定試驗(yàn)中則用二苯胺鑒定?帶著這個(gè)問題我上網(wǎng)查資料，經(jīng)過我反復(fù)的思考，哈哈.....終于想明白了。我們在觀察DNA、RNA的分布實(shí)驗(yàn)中用的是甲基綠和吡羅紅混合染色劑染色，由于甲基綠和吡羅紅與DNA、RNA的親和力不一樣，呈綠色的是DNA，呈紅色的是RNA，我們很容易用顯微鏡觀察到DNA、RNA主要分布在那里?里面強(qiáng)調(diào)的是用甲基綠和吡羅紅混合染色劑，所以隱含的意思是不能單獨(dú)使用一種染色劑，要是單獨(dú)用甲基綠染色就會(huì)把RNA染成綠色，鑒定材料《二苯胺鑒定dna》。DNA粗提取與鑒定這個(gè)實(shí)驗(yàn)，DNA鑒定則換成用二苯胺，在這個(gè)DNA粗提取過程中，用改變氯化鈉濃度辦法將蛋白質(zhì)與DNA分開，用冷酒精處理進(jìn)一步將DNA與RNA、蛋白質(zhì)分開。一系列的操作就是要獲得純度較高的DNA，最后獲得的純度較高的DNA不能排除有RNA，所以此時(shí)用甲基綠鑒定DNA、RNA都被染成綠色，所以不能說綠色一定是DNA拍賣公司而改用二苯胺就不一樣了，DNA和二苯胺反應(yīng)的產(chǎn)物成藍(lán)色，RNA則沒有這種顏色反應(yīng)。所以用二苯胺鑒定呈藍(lán)色的一定是DNA，并且藍(lán)色深淺與DNA含量高低有關(guān)。

1、二苯胺與甲基綠能否混用

這是用于鑒定DNA的存在的兩種試劑，二苯胺加熱法中，呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)。用甲基綠溶液直接滴在有DNA絲狀物的載玻片或玻棒上，呈藍(lán)綠色反應(yīng)。只用一種即可，不混合用。前者要加熱，后者不加熱。

2、兩者都可以和DNA反應(yīng)，應(yīng)該怎樣區(qū)分它們呢

甲基綠甲基綠是堿性染料。它是綠色粉末狀，能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基綠是最有價(jià)值的細(xì)胞和染色劑，細(xì)胞學(xué)上常用來染染色質(zhì)，跟酸性品紅一起可作植物木質(zhì)部的染色

3、DNA的鑒定→DNA的鑒定可用二苯胺法，DNA遇到二苯胺變?yōu)樗{(lán)色;還可以用“甲基綠”法，“甲基綠”使DNA變?yōu)樗{(lán)綠色。

用“甲基綠”法鑒別DNA時(shí)，可將“甲基綠”直接滴到玻璃棒的絲狀物上后，要用水充分沖洗掉浮色后再觀察。

配制二苯胺試劑→取0.1毫升B液，滴入到10毫升A液中，混勻。⑦鑒定→取4毫升DNA提取液放入試管中，加入4毫升二苯胺試劑，混勻后觀察溶液顏色(不變藍(lán))。用沸水浴(100°)加熱10分鐘。在加熱過程中，隨時(shí)注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現(xiàn)淺藍(lán)色)。

第三篇：鑒定dna的方法

鑒定dna的方法

如何做親子鑒定? 首先根據(jù)做dna親子鑒定的目的的不同可將親子鑒定分為司法鑒定和個(gè)人鑒定，鑒定dna的方法。個(gè)人鑒定只需要提供被鑒定者的樣本無需提供任何證件就可以做，但是個(gè)人dna檢測的結(jié)果僅供個(gè)人參考了解不可用作為司法用途使用;司法鑒定必須按照嚴(yán)格的司法程序進(jìn)行，被鑒定人必須提供身份證、戶口本、結(jié)婚證或者出生證明等能夠證明身份的相關(guān)證件還必須提供相關(guān)單位(比如：派出所、法院、律師或者公安機(jī)關(guān))出具的委托函才可以進(jìn)行，這樣做出的鑒定結(jié)果才具有法律效力。

如何做親子鑒定能夠得到準(zhǔn)確無誤的鑒定結(jié)果?

為保證dna 親子鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確無誤，對于選擇dna鑒定的終端用戶一定要選擇專業(yè)權(quán)威機(jī)構(gòu)，確保dna鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確權(quán)威、司法公正、科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)!

做dna鑒定如何取樣? dna親子鑒定的樣本可以是血液、血痕、毛發(fā)、口腔細(xì)胞、體液、骨骼、牙齒、胎兒羊水等，只要能夠提取dna其鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確度是一樣的，若您在取樣的過程中有任何的疑問都可以撥打0371-61719977進(jìn)行電話咨詢，我們的專家醫(yī)生會(huì)為您答疑解惑!

胎兒親子鑒定是指利用基因技術(shù)鑒定胎兒遺傳意義上的父親，鑒定材料《鑒定dna的方法》。當(dāng)胎兒遺傳意義上的父親是誰不得而知時(shí)，“產(chǎn)前親子鑒定”可從孕婦的羊水中提取細(xì)胞，通過鑒定胎兒的DNA(脫氧核糖核酸)確認(rèn)父子關(guān)系。

胎兒親子鑒定必須提供的樣本為：胎兒樣本(羊水、絨毛)、母親DNA樣本、假定父親DNA樣本

懷孕多久可以做胎兒親子鑒定呢?

在懷孕期做胎兒鑒定的最早時(shí)間可以在妊娠時(shí)間滿8周以后通過抽取胎兒絨毛組織來做或者在懷孕16周也就是4個(gè)月的時(shí)候通過抽取羊水進(jìn)行鑒定，不管是絨毛還是羊水做胎兒dna鑒定都和孩子出生后用血液做親子鑒定的結(jié)果同樣準(zhǔn)確不會(huì)出現(xiàn)出現(xiàn)不同的檢測結(jié)果。

為什么胎兒鑒定中一定要提供母親DNA樣本?

因?yàn)檠蛩畼颖境樽阅阁w，其中含有母親DNA成份，如果在實(shí)驗(yàn)中從羊水中提取的是母親DNA而非胎兒DNA，那么在沒有母親DAN樣本對比的情況下，就和假定父親DNA樣本進(jìn)行鑒定對比，其結(jié)果就沒有準(zhǔn)確性可言了，所以在胎兒羊水鑒定中必須提供母親DNA樣本。

DNA和RNA的鑒別，較常用的方法是利用兩類核酸中不同的戊糖各自具備的不同的顏色反應(yīng)，而得以定性鑒別。其中鑒定DNA的方法稱為二苯胺法，鑒定RNA的方法稱為地衣酚(苔黑酚，3，5-二羥基甲苯)法。上述顏色反應(yīng)不但可用于兩類核酸的定性鑒定，也是定糖法定量測定核酸的依據(jù)。

第四篇：dna胎兒性別鑒定

dna胎兒性別鑒定

在沒有出現(xiàn)母血DNA胎兒性別檢測方法前，一般是利用羊水穿刺術(shù)、絨毛采檢術(shù)、B超等方法來測試，dna胎兒性別鑒定。這些方法不僅需要懷孕的周數(shù)長，而且對母體和胎兒具有一定的創(chuàng)傷，可導(dǎo)致1%的流產(chǎn)率。

其實(shí)在香港早就出現(xiàn)了這種準(zhǔn)確率高達(dá)98%的胎兒性別鑒定方法：母血DNA胎兒性別檢測，該項(xiàng)技術(shù)運(yùn)用先進(jìn)精確的DNA基因工程科學(xué)技術(shù)，自手臂抽取血液進(jìn)行檢測，是目前最早最安全的檢測胎兒性別方法，只需8周即可進(jìn)行檢驗(yàn)。

醫(yī)學(xué)家們已經(jīng)證明早在妊娠8周母血循環(huán)中就可監(jiān)測出胎兒性別。通過母血細(xì)胞分離、純化、可用于早期胎兒性別鑒定與遺傳學(xué)診斷，常用的胎兒細(xì)胞類型滋養(yǎng)細(xì)胞和有核紅細(xì)胞，從母血中分離、純化胎兒細(xì)胞在技術(shù)和臨床研究上取得了很大的進(jìn)展，作為無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法其有著一定的臨床應(yīng)用價(jià)值，及深遠(yuǎn)的意義。

在香港這項(xiàng)檢測已經(jīng)相當(dāng)成熟，費(fèi)用也較為便宜。而且，因?yàn)闇?zhǔn)確率高、對孕婦和胎兒均無任何的傷害，是目前最受歡迎的性別鑒定方法!

很多內(nèi)地孕婦通過咨詢我們赴港生子的好處，才得知香港有這項(xiàng)技術(shù)。在香港不是每個(gè)醫(yī)生都做這項(xiàng)服務(wù)的，其中有一個(gè)我們長期合作的私家醫(yī)生有做母血DNA胎兒性別鑒定，性別鑒定《dna胎兒性別鑒定》。

香港天愛母嬰收集所有性別鑒定方法比較如下：、DNA 驗(yàn)血：孕婦懷孕經(jīng)B超確認(rèn)有7-8周，胎兒正常的情況下可測出胎兒性別，準(zhǔn)確率是98%，對孕婦和胎兒沒有任何影響。、羊膜穿刺術(shù)：主要是為了診斷胎兒是否有染色體方面或神經(jīng)管的缺陷，通常在懷孕16～20周實(shí)施。準(zhǔn)確度可達(dá)99%，但是有1%的流產(chǎn)機(jī)率。、絨毛采檢術(shù)：在懷孕12～14周左右即能判斷胎兒的性別，但它可能造成流產(chǎn)(3%～5%)，還可能傷害胎兒，造成其手腳的殘缺。、超聲波掃描：超聲波是一種聲波，它對胎兒沒有不良影響，嬰兒必須在3～4月準(zhǔn)確度較高。利用超聲波診斷胎兒性別時(shí)，男嬰的準(zhǔn)確度可達(dá)95%以上，女嬰的可靠度則只有85%左右，但是受到醫(yī)生主觀視覺，胎兒體位等因素影響。

香港天愛母嬰服務(wù)公司聲明： 本公司主營業(yè)務(wù)是服務(wù)內(nèi)地孕婦赴香港生孩子咨詢及赴港生子全程一條龍服務(wù)。因之前很多內(nèi)地孕婦做完母血DNA胎兒性別鑒定，不是她們想要的就打掉了。我們公司負(fù)責(zé)人和員工都有自己的信仰，看到這種事情的發(fā)生心里都不舒服。所以從今年下半年開始，孕婦需報(bào)自己的出生年月及末次月經(jīng)，經(jīng)我公司算完是你想要的性別，再幫孕婦預(yù)約香港私家醫(yī)生抽血做性別鑒定。

第五篇：dna粗提取和鑒定

dna粗提取和鑒定

實(shí)驗(yàn)用具

洋蔥或其他植物、洗潔精、食鹽、攪拌機(jī)或研缽(我們采用的是家用豆?jié){機(jī))、紗布、漏斗、燒杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、試管(20mL兩支)、天平，dna粗提取和鑒定。95%酒精、蒸餾水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑。

實(shí)驗(yàn)材料的選取

凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大。

原理

①加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂

蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。

②加入洗滌劑和食鹽的作用

洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響

研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。

④此步驟獲得的濾液中可能含有的細(xì)胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。例如，提取洋

.蔥的DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。

2.去除濾液中的雜質(zhì)

方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA;方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

注意事項(xiàng)

①用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

②方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。

DNA的析出與鑒定

將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2～3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA，鑒定材料《dna粗提取和鑒定》。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。

取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.稱取30克已切碎的洋蔥，放入研缽中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化鈉溶液，充分研磨。

洋蔥含有揮發(fā)性刺激物，有效減少刺激，才能使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。上課前，教師可先將洋蔥放入冰箱冷凍一會(huì)兒，使其涼透但又不能結(jié)冰;或?qū)⒀笫[切成幾大塊，放入清水泡一會(huì)兒，讓其揮發(fā)性刺激物溶于水，可以減輕刺激。然后將洋蔥切碎備用。研磨的目的主要是使洋蔥細(xì)胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化鈉溶液，沒必要將洋蔥研成粥糊狀，后者既浪費(fèi)時(shí)間又影響實(shí)驗(yàn)效果。研磨時(shí)，切忌使用攪拌器(榨汁機(jī))。使用攪拌器雖可以提高研磨效率，但攪拌器將洋蔥切成極細(xì)小的顆粒，無法通過過濾將洋蔥顆粒剔除。只能將酒精直接倒入濾液中，許多洋蔥小顆粒因?yàn)檩p會(huì)漂浮起來，DNA藏在其中，無法分辨。學(xué)生看不到白色纖維狀粘稠物的DNA。

2.研磨后，用漏斗和紗布將汁液過濾到小燒杯中，得到濾液。

3.向?yàn)V液中加入95%的酒精溶液20mL，沿?zé)诰従彽谷?，不要震?dòng)或攪拌。

此時(shí)，燒杯中的液體分為上、下兩層，下層較渾濁，上層澄清，很快上層溶液中就會(huì)有白色纖維狀粘稠物析出，用玻璃棒可將其輕輕卷起。這就是記錄生命遺傳信息的重要物質(zhì)——DNA。DNA析出的過程中，切忌震動(dòng)和攪拌(不震動(dòng)易于分層，我們就能很容易觀察到上清液中的絲狀物;攪拌會(huì)使非常柔軟的DNA斷裂成小段，不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙簽，DNA提取物就纏繞在牙簽上了。

4.鑒定：取兩支試管，編為1、2號，各加入2mol/L的氯化鈉溶液2mL，向1號試管中加入一些白色纖維狀物，振蕩使其溶解，然后向兩支試管中各加入2mL二苯胺試劑，沸水浴加熱5分鐘。

注意事項(xiàng)

1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉防止血液凝固。

2.加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。

3.二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定的效果。

4.DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關(guān)系：

當(dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí)，隨濃度的升高，DNA的溶解度降低;當(dāng)NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時(shí)，隨濃度升高，DNA的溶解度升高。

5.盛放雞血細(xì)胞液的容器，最好是塑料容器。

雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會(huì)更少。因此，實(shí)驗(yàn)過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程的DNA的損失。