第一篇：FACSAria流式細胞儀無菌分選的基本流程

FACSAria流式細胞儀無菌分選的基本流程

一、環(huán)境和液流的消毒

1、準備足量的無菌1×PBS（3L左右）和去離子水（10L左右）。PBS和去離子水可高壓滅菌，sheath桶和裝DI水的5L小桶依次用75％醫(yī)用酒精和無菌去離子水各涮洗三次，然后將無菌PBS和去離子水分別注入相應桶內即可。

2、房間在分選前紫外燈照射15－20分鐘；用1:50新潔爾滅拖地；用75％醫(yī)用酒精擦拭工作臺和收集架；用75％醫(yī)用酒精噴灑分選細胞收集區(qū)和上樣區(qū)。

二、開機和管道的消毒

1、將 Sheath液換為活性氯濃度為0.5%的次氯酸鈉溶液（不要用75％的酒精），開機。開機前，先掀起流動室和分選室的罩蓋，開啟電源，打開計算機并等計 算機進入WINDOWS系統(tǒng)后，打開激光電源，運行FACSDiva軟件，聯(lián)機成功后，執(zhí)行Fluidics startup命令。然后從FACSDiva的sort菜單進入sort setup，選擇合適的液流壓力（high、middle、low）。一般來說，100μm的噴嘴選用Low，而70μm的噴嘴選用middle。

2、打開breakoff window，點擊顯示窗上的液流開關，檢查液流是否正好流入廢液槽中間和液流的形態(tài)是否正常。如果出現(xiàn)異常，可以通過調整噴嘴的位置，改變 Breakoff 窗口的Amplitude的大小和打開Attenuation開關等來進行調整。（具體操作可參考Instrument User’s Guide的194－200頁），直至液流形態(tài)和位置符合分選要求。

3、在上樣管中裝入1ml 活性氯濃度為0.5%的次氯酸鈉溶液,將上樣管放在上樣架上，點擊Acquisition窗口的Load開關，運行15－20分鐘后，點擊Unload開關，取下上樣管。

4、將Sheath液換為無菌PBS，先后執(zhí)行Fluidics shutdown和Fluidics startup程序各一次。

通過上述操作完成了環(huán)境和管道的消毒，為分選準備了無菌的環(huán)境，在后續(xù)的操作中應注意保持，以確保分選樣本不被污染。

二、分選相關參數(shù)的調節(jié)

1、在side－stream window中，打開Voltage開關，確定在打開Voltage開關后，液流沒有偏離中心位置，如果有偏離可以調整Voltage center，使其回到中間位置。

2、打開Test Sort，通過調整電壓的大小來調整side stream的位置。讓side stream能夠正好落入收集管的相應位置中。

3、點擊Browser中的Experiment圖標，創(chuàng)立一個新的Experiment，并改名為Accudrop。

4、在Sheet或者Template中創(chuàng)立FSC圖，并畫一個可以包含所有Plot的gate。

5、打開Sort Layout，將Precision mode設置為purify，Target Events設置為continuous。

6、上一管裝有Accudrop Beads的樣品管。

7、調整速率，使獲取速度為2000－4000events每秒。注意速率不要超過4。

8、點擊打開Voltage，點擊sort按鈕，點擊Optical Filter，調節(jié)drop delay，使屏幕左邊的方框中的數(shù)值為98％以上，即調整好了drop delay。Drop delay是影響分選質和量的重要指標，一定要調整好。

通過上述操作即完成了全部的分選前的環(huán)境消毒和某些參數(shù)的調試工作，后續(xù)和分析無較大差別。

在 整個的無菌分選過程中，要時刻注意保持無菌的環(huán)境，注意觀察液流的形態(tài)和位置。當液流出現(xiàn)異常時，一定要停止分選，及時的調整，因為正確的液流形態(tài)和位置 是保證分選純度的前提條件。當分選結束后，應該及時將Sheath液換為去離子水，并執(zhí)行Fluidics shutdown和Fluidics Startup程序各兩次，用去離子水徹底的沖洗管道，以免PBS在管道中沉積，結晶。

上述文字是作者在FACSAria流式細胞儀無菌分選的操作中的一點心得體會，愿意與大家分享交流，并希望大家能提出意見和建議，謝謝大家！

上海生命科學研究院健康科學中心 流式細胞儀室 張健

第二篇：無菌操作技術流程（推薦）

無菌技術操作流程

1、尊敬的各位評委老師大家好，我今天操作的項目是：無菌操作技術

2、整理著裝、手消毒液已開啟在有效期——七步洗手法——戴口罩

3、我準備的用物是：清潔治療盤——無菌持物鉗——鑷子筒——無菌治療巾——無菌治療包——無菌手套——無菌生理鹽水——無菌治療缸——碘伏——棉簽——彎盤2個——抹布2塊——物品已備齊，操作開始

4、評估環(huán)境：治療室環(huán)境寬敞、光線充足，治療車、治療臺清潔干燥符合無菌操作

5、拿盤、擦盤——快速洗手——無菌持物鉗及鑷子筒在有效期、包布無潮濕、無破損、3m膠帶變色均勻，滅菌合格——去3m膠帶貼桌上——打包——鑷子筒放好夾出化學指示卡（化學指示卡變色均勻，滅菌合格）——寫開啟時間于3m膠帶上——貼標簽于缸緣下2cm處（已開啟的持物筒有效期為4個小時）——無菌治療巾在有效期、包布無潮濕、無破損、3m膠帶變色均勻——打開治療巾——鑷子夾出化學指示卡（化學指示卡變色均勻，滅菌合格）——鑷子夾治療巾放入治療盤中——打開——鋪巾——檢查無菌治療包——打包（化學指示卡變色均勻，滅菌合格）—夾治療碗放于無菌治療巾上——無菌治療缸已開啟在有效期—夾取紗布——0.9%氯化鈉注射液250ml在有效期——清潔瓶身——快速洗手——檢查溶液——打開鋁蓋——消毒瓶蓋（棉簽、碘伏已開啟在有效期——消毒瓶蓋，打開瓶蓋——瓶簽在掌心，沖洗瓶口——向碗內倒入生理鹽水，蓋好瓶蓋，消毒瓶周2遍，記錄開啟時間（已開啟的生理鹽水有效期為24小時）——鋪好無菌盤——記錄鋪盤人及時間，已鋪好的無菌盤，有效期為4個小時——七步洗手法——選擇合適的無菌手套，檢查手套（無菌手套在有效期，包裝完好，擠壓無漏氣）——取出無菌手套——戴手套（按照規(guī)范方法戴手套）——手套戴好后雙手交叉（調整手套位置），雙手放于胸前——脫手套（按規(guī)范方法脫手套）——放入黃色垃圾袋中——醫(yī)療垃圾分類處理——七步洗手法——操作結束。

無菌技術是指在醫(yī)療護理操作過程中，保持無菌物品不被污染，防止一切微生物侵入或傳播給他人的一系列操作技術和管理方法，是預防醫(yī)院內感染的一項重要的基本措施。

無菌操作原則

1.環(huán)境清潔

進行無菌技術操作前30分鐘，停止清掃工作，減少走動，防止塵埃飛揚。2.工作人員要求

修剪指甲、戴好口罩、帽子。必要時穿無菌衣，戴無菌手套。

3.物品保管

無菌物品和非無菌物品應分別放置，并有明顯標志。無菌物品必須存放在無菌容器或無菌包內，不可暴露在空氣中，無菌包或無菌容器外要注明物品名稱、滅菌日期，物品按有效期先后順序擺放。

4.操作時要求

工作人員面向無菌區(qū)，用無菌持物鉗取無菌物品，手臂須保持在腰部水平或治療臺以上，注意不可跨越無菌區(qū)。操作時不可面向無菌區(qū)講話、咳嗽、打噴嚏。無菌物品懷疑被污染時，給予更換。

5.一人一物 一份無菌物品，僅供一位患者使用，防止交叉感染。

一 無菌持物鉗的使用

目的：

用于取放或傳遞無菌物品

注意事項：1無菌持鉗使用時，取出和放入時必須垂直提起和放入，不可觸碰到筒壁 和邊緣。夾取物品時也是垂直夾取。不可倒置和橫置。

2取遠處物品時，應當連同容器一起移至物品旁進行操作。

3無菌持物鉗不能夾取未滅菌的物品，也不能夾取油紗布（條、球）。

4無菌鉗使用時不能低于腰部。

5打開包后的干持物筒、持物鉗使用的有效期，≤4小時。

6不可直接從蓋孔中取、放無菌持物鉗。

7避免無菌持物鉗在空氣中暴露過久。

二無菌容器的使用

目 的：

無菌容器是用于盛放無菌物品并保持其無菌狀態(tài)的容器。

注意事項：1.夾取無菌容器內物品時，無菌持物鉗及無菌物品不可觸及容器的邊緣

2.移動無菌容器時，應托住底部，手不可觸及無菌容器邊緣 3.從無菌容器內取出的無菌物品，雖未使用，也不得在放回無菌容器內。4.無菌容器應定期滅菌，一般有限期為7天。

三.無菌包的使用

目 的：

用無菌包布包裹無菌物品，使無菌物品保持無菌狀態(tài)。

注意事項：1.一般無菌包布的有效期：夏季為7天，冬季為14天，如超過有效期則

不可使用。

2.開包時手不可觸及無菌區(qū)域，且包布的任何一角不能到操作臺面以下。3.如包布內有剩余物品，其有效期為24h。

四 無菌溶液取用法

目 的：

供無菌操作使用

注意事項：1.檢查溶液質量時要倒轉瓶體，對光檢查。

2.翻開瓶蓋時，手不可觸及瓶口。

3.倒無菌液時，瓶簽置于掌心，瓶口不可觸及無菌容器。4.已倒出的溶液雖未使用，也不可倒回瓶內。5.剩余的溶液如繼續(xù)使用，有效期為24h。

五.鋪無菌盤法

目 的：

通過鋪無菌治療巾，形成以無菌區(qū)域，放置無菌物品，供治療護理使用。

注意事項：1.操作時，非無菌物品及身體應與無菌盤保持適當?shù)木嚯x，身體部位不可跨域無菌區(qū)。

2.無菌盤應保持干燥，避免潮濕污染。

3.已鋪好的無菌盤應盡早使用，保留時間不得超過4h。

六.戴無菌手套法

目 的：

在某些醫(yī)療護理操作時為確保無菌效果操作者需戴無菌手套。

注意事項：1.未戴手套的手不可觸及無菌手套的外面，已戴手套的手不可觸及未戴手套的手及手套的內面。

2.戴手套后如發(fā)現(xiàn)手套有破損或不慎污染，應立即更換。

3.戴手套后，手臂不可下垂，應保持在腰以上，肩以下，兩側腋中線之間 的范圍內活動。

第三篇：無菌技術操作流程

無菌技術

用物準備：治療推車、治療盤2個、彎盤1個、無菌持物鉗、無菌治療包、無菌治療碗、無菌手套、無菌紗布缸、無菌溶液、棉簽、啟蓋器、碘伏。操作臺清潔、干燥、操作前禁止打掃衛(wèi)生

操作步驟：“兩位老師好，我考試的項目是無菌技術，用物已經(jīng)準備齊全，請問可以開始了嗎？”→洗手，戴口罩→攜用物至操作臺前→取治療盤放置于操作臺上→查看無菌持物鉗滅菌是否有效，包布有無破損、潮濕，是否在有效期內，取出鑷子罐置于治療臺上，在罐底端注明使用日期及時間→查看無菌治療巾包滅菌是否有效，包布有無破損、潮濕，是否在有效期內，解系帶放包布下，無菌包放置無障礙臺上依次打開，查看滅菌指示卡→用鑷子夾取無菌巾放于治療盤內→按原折痕包回無菌包包布，注明開包日期、時間并放置治療車上→無菌巾鋪巾【①單巾：雙手打開無菌巾雙層平鋪于治療盤內呈扇形折疊→開口邊向外；②雙巾：雙手持無菌巾近身一面兩角→由對側向近側平鋪于治療盤中，無菌面朝上→取另一塊無菌巾，用同樣的方法打開無菌巾，無菌面朝下，由近側向對側覆蓋于第一塊無菌巾上→雙手持上層無菌巾外面的兩角呈扇形折疊于對側，開口邊向外】→放無菌治療碗【查看無菌包滅菌是否有效，包布有無破損、潮濕，是否在有效期內→在手中打開無菌包布，查看滅菌指示卡→包布包裹手反放無菌治療碗至無菌盤中】→取無菌紗布【查看無菌容器有效期→打開無菌容器時，其蓋子朝上放在穩(wěn)妥處或拿在手中→用鑷子夾取無菌紗布放于無菌治療碗內→用畢及時蓋好】→倒無菌溶液【檢查藥液瓶簽、是否在有效期內、瓶口有無松動、藥液質量是否符合要求→打開瓶蓋，沖洗瓶口→倒液體于治療碗內】→折無菌巾（寬邊向上雙折，窄邊向下單折）→注明鋪盤時間→消毒瓶口，注明開瓶日期時間→開啟無菌盤→戴無菌手套（先查對手套有效期及型號）→雙手取無菌治療碗→脫手套→整理用物，按院感要求分類處理→洗手（完成時間：4分鐘）

第四篇：基本流程（推薦）

基本流程

1月22日。1126個分團團長，參加2011年廣西十萬大學生寒假社會服務活動授旗儀式。（具體時間、地點另行通知）

1月24日。組織分團成員在鄉(xiāng)鎮(zhèn)政府會議室進行培訓。（到鄉(xiāng)鎮(zhèn)組織委員處領取社會各界為本次活動捐贈的物品并分發(fā)到對應的小組，準備文藝演出節(jié)目和熟悉工作紀律、采訪提綱、政策宣講內容）

1月25日。分團17個小組開展對應采訪活動。（第1組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委書記、第2組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)紀檢委員、第3組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)綜治辦主任、第4組采訪縣統(tǒng)戰(zhàn)部部長、第5組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)派出所所長、第6組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)司法所所長、第7組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)交通管理站站長、第8組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)國土資源管理所所長、第9組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)計生服務所所長、第10組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)初中校長、第11組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務中心主任、第12組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院院長、第13組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)高中校長、第14組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)團委書記、第15組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)林業(yè)站站長、第16組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)文化站站長、第17組采訪鄉(xiāng)鎮(zhèn)郵政儲蓄銀行行長）

1月26日。組織分團全體成員在鄉(xiāng)鎮(zhèn)街上開展文藝演出和政策宣講活動，分發(fā)并收集問卷調查。

1月27日。根據(jù)鄉(xiāng)鎮(zhèn)行政村數(shù)量，按順序分配分團小組開展采訪村支書或村主任（例如：該鄉(xiāng)鎮(zhèn)有9個行政村，就分9個小組采訪，每個小組采訪一個村支書或村主任），其他小組志愿加入?yún)f(xié)助采訪。采訪小組要同時在對應的行政村開展老黨員慰問、關愛農(nóng)民工子女、給返鄉(xiāng)青年和回鄉(xiāng)大學生上黨課、開展科技知識培訓、開展金融和創(chuàng)業(yè)政策宣傳活動、放紅色經(jīng)典電影、收集入黨積極分子名單等活動。

1月28日-30日。組織分團成員在鄉(xiāng)鎮(zhèn)開展籃球賽，繼續(xù)完成分團未完成的工作。

1月31日，組織分團成員與鄉(xiāng)鎮(zhèn)政府開展總結交流會，做好交流記錄，與鄉(xiāng)鎮(zhèn)政府領導合影留念。

第五篇：跟單員基本流程

1.全面準備并了解訂單資料（客戶制單、生產(chǎn)工藝、最終確認樣、面/輔料樣卡、確認意見或更正資料、特殊情況可攜帶客樣,或者大貨樣，船樣之類），確認所掌握的所有資料之間制作工藝細節(jié)是否統(tǒng)一、詳盡。對指示不明確的事項詳細反映給相關工廠技術部和業(yè)務部，以便及時確認。

２、務必保證本公司與外加工廠之間所有要求及資料詳細并明確、一致?。ㄗ詈靡形淖肿C明）

３、事先盡可能多地了解各加工廠的生產(chǎn)、經(jīng)營狀況并對工廠的優(yōu)/劣勢進行充分評估，做到知根知底。４、跟單員言行、態(tài)度均代表本公司,因此與各業(yè)務單位處理相應業(yè)務過程中，須把握基本原則、注意言行得體、態(tài)度不卑不亢。嚴禁以任何主觀或客觀理由對客戶（或客戶公司跟單員）有過激的言行。處理業(yè)務過程中不能隨意越權表態(tài),有問題及時請示公司決定。

５、預先充分估量工作中問題的潛在發(fā)生性，相應加強工作力度，完善細化前期工作，減少乃至杜絕其發(fā)生的可能性。不以發(fā)現(xiàn)問題為目的，預先充分防范、工作中重復發(fā)掘、及時處理問題并總結經(jīng)驗，對以后的工作方式和細則進一步完善方為根本之道。

６、訂單跟單員與訂單負責人（操作員）要保持密切的聯(lián)系，出于雙方的利益著想，雙與對方溝通，將問題降到最低限度。

二、生產(chǎn)過程中的驗貨工作程序：

１、面/輔料到廠后，督促工廠最短時間內根據(jù)發(fā)貨單詳細盤點，并由工廠簽收。若出現(xiàn)短碼/少現(xiàn)象要親自參與清點并確認。

２、如工廠前期未打過樣品，須安排其速打出投產(chǎn)前樣確認，并將檢驗結果書面通知工廠負責人和工廠技術科。特殊情況下須交至公司或客戶確認,整改無誤后方可投產(chǎn)。３、校對工廠裁剪樣版后方可對其進行版長確認，詳細記錄后的單耗確認書由工廠負責人簽名確認，并通知其開裁。

４、根據(jù)雙方確認后的單耗要與工廠共同核對面/輔料的溢缺值，并將具體數(shù)據(jù)以書面形式通知公司。如有欠料，須及時落實補料事宜并告知加工廠。如有溢余則要告知工廠大貨結束后退還我司，并督促其節(jié)約使用，杜絕浪費現(xiàn)象。

５、投產(chǎn)初期必須每個車間、每道工序高標準地進行半成品檢驗，如有問題要及時反映工廠負責人和相應管理人員，并監(jiān)督、協(xié)助工廠落實整改。

６、每個車間下機首件成品后，要對其尺寸、做工、款式、工藝進行全面細致地檢驗。出具檢驗報告書（大貨生產(chǎn)初期/中期/末期）及整改意見，經(jīng)加工廠負責人簽字確認后留工廠一份，自留一份并傳真公司。

７、每天要記錄、總結工作，制定明日工作方案。根據(jù)大貨交期事先列出生產(chǎn)計劃表，每日詳實記錄工廠裁剪進度、投產(chǎn)進度、產(chǎn)成品情況、投產(chǎn)機臺數(shù)量,并按生產(chǎn)計劃表落實進度并督促工廠。生產(chǎn)進度要隨時匯報公司。８、針對客戶跟單員或公司巡檢到工廠所提出的制作、質量要求，要監(jiān)督、協(xié)助加工廠落實到位，并及時匯報公司落實情況。

９、成品進入后整理車間,需隨時檢查實際操作工人的整燙、包裝等質量，并不定期抽驗包裝好的成品，要做到有問題早發(fā)現(xiàn)、早處理。盡最大努力保證大貨質量和交期。

１０、大貨包裝完畢后，要將裁剪明細與裝箱單進行核對，檢查每色、每號是否相符。如有問題必須查明原因并及時相應解決。

１１、加工結束后，詳細清理并收回所有剩余面料、輔料。

１２、對生產(chǎn)過程中各環(huán)節(jié)（包括本公司相應部門和各業(yè)務單位）的協(xié)同配合力度、出現(xiàn)的問題、對問題的反應處理能力以及整個定單操作情況進行總結,以書面形式報告公司主管領導。

１３、在檢查過程中一定要公平，真實。不能收到廠家的一點點好處，而忘了自己的職責