第一篇：細(xì)菌鑒定工作的注意問題

細(xì)菌鑒定工作的注意問題

（一）、選用合適的鑒定系統(tǒng)

細(xì)菌鑒定系統(tǒng)并非分類模式，盡管它們表面看來有些相似，對一群病原體的鑒定系統(tǒng)設(shè)計，基于一種或多種該細(xì)菌都具備，而其他群細(xì)菌皆不具備的特征譜．用于該群鑒定的特性，通常不是用來分類，如分類用ＤＮＡ／ＤＮＡ雜交研究，而鑒定則基于與基因信息密切相關(guān)的表現(xiàn)型特征．常規(guī)鑒定試驗應(yīng)該選擇方法簡單，反應(yīng)判斷明確，價廉等如ＴＳＩ瓊脂．ＭＩＵ瓊脂。

血清學(xué)反應(yīng)在分類上價值有限，但在鑒定中常常有極大作用，由于方法學(xué)上操作簡單、快速，而且特異性高，它給細(xì)菌鑒定提供快速診斷方法。對許多菌屬、種的鑒定，常用整試驗圖譜得出，腸桿菌科菌種是個例子，為減少需要大量培養(yǎng)基，已設(shè)計種簡便、快速多試驗系統(tǒng)，并有商品供應(yīng)，用于各種微生物鑒定，特別是醫(yī)學(xué)重要微生物鑒定。每個制造商提供的圖、表、編碼、計算機數(shù)據(jù)和鑒定概率等，皆以配合各自出產(chǎn)的多試驗系統(tǒng)運用。因此盲目接受一種鑒定模式，而不去考設(shè)計者所要求的特定條件，如接種量、育溫度、時間、培養(yǎng)基的 分，培養(yǎng)基的表面化與容量的比率及確定陰性、陽性結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)，就會導(dǎo)致錯誤。雖然商品性多試驗統(tǒng)，因嚴(yán)格的培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量控制，給各實驗室提高標(biāo)準(zhǔn)化系帶來好處，但至今還沒有一種系統(tǒng)對各種病原菌鑒定均達(dá)到很高的符合率．因此，當(dāng)選用鑒定具有種特性的 檢菌時，應(yīng)與已知的典型或標(biāo)準(zhǔn)菌株作對照比較，以保證在自已實驗條件下，試驗結(jié)果的可靠性．

（二）正確判斷陽性與陰性的反應(yīng)界限

現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，一些試驗是基于質(zhì)?；蚴删w介導(dǎo)的有較高可變的特性，因而用于鑒定是不可靠的。理想中某試驗應(yīng)當(dāng)給予明顯的陽性或陰性可重復(fù)試驗結(jié)果，而沒有模糊反應(yīng)。某些細(xì)菌的革蘭染色是可變的，只形成少量芽胞的細(xì)菌，僅通過染色和對熱耐受試驗確定也很困難。糖類分解試驗很難把產(chǎn)少量酸從不產(chǎn)酸中區(qū)分開，用于鑒定系統(tǒng)試驗，精確、具體的陽性和陰性結(jié)果反應(yīng)界限很重要。

（三）純化培養(yǎng)物的必要性

人們在使用表現(xiàn)型特征進(jìn)行鑒定病原菌之前，純培養(yǎng)物幾乎是必需折。從選擇性平板佻單個菌落不能保證純度?；畹牡簧L的污染菌，常可在于挑選的菌落之中或附近，并隨選擇菌一起行次代培養(yǎng)。因此，選擇性培養(yǎng)基更適用于最后分離。純培養(yǎng)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上，菌落總是彼此相像，顯示分純的跡象。另一種純度的標(biāo)準(zhǔn)是形態(tài)學(xué)，純培養(yǎng)細(xì)菌在染色涂片上，通常表達(dá)形態(tài)學(xué)高度相似性。雖然如此，但也有例外，如Ｓ---R變異莢膜變異、色素－無色素變異，可在某一基質(zhì)、溫度或其他生長條件下出現(xiàn)，也因培養(yǎng)物菌齡、所用培養(yǎng)基以包括球形體、包、芽胞形式和多形態(tài)性等發(fā)生改變．

（四）細(xì)菌鑒定的步驟

鑒定是一個未知株按其生物學(xué)特征，經(jīng)過與有已知的菌種進(jìn)行比較后劃歸到一已知菌種的分析過程。

１、明確鑒定菌種已獲得純培養(yǎng)。

２、２確定革蘭染色形態(tài)，然后按科、屬、種走步驟鑒定下去。

３、利用已具備條件，盡可能地縮小鑒定范圍。

４、把知識、經(jīng)驗運用于每一鑒定步驟。

５、應(yīng)用最小數(shù)量的試驗方法作出鑒定。

６、將分離菌株與相關(guān)的典型或參考菌作比較，以保證實際應(yīng)用鑒定系統(tǒng)，在你的個別實驗條件下是有效的。

細(xì)菌鑒定錯誤的常見三個因素是形態(tài)、革蘭染色反應(yīng)和動力。在多數(shù)情況下，鑒定分離到屬級水平不會發(fā)生困難，而明確至種級和亞種，需要特殊參考實驗室的幫助。

第二篇：全自動細(xì)菌鑒定

全自動細(xì)菌鑒定

儀器簡介：

法國生物梅里埃公司最新一代應(yīng)用經(jīng)典生化方法進(jìn)行細(xì)菌鑒定的全自動儀器，采用了國際金標(biāo)準(zhǔn)ApI的數(shù)據(jù)庫并繼承發(fā)展了VITEK第一代產(chǎn)品的自動化處理技術(shù)，集成了生物梅里埃幾十年的技術(shù)和創(chuàng)新于一體，為當(dāng)今最先進(jìn)的細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)，全自動細(xì)菌鑒定。

技術(shù)參數(shù)：

一、鑒定原理：終點法、閾值法;比色、比濁動態(tài)分析法

二、菌液濃度控制：液晶數(shù)顯比濁儀，測量細(xì)菌濃度范圍0.0-7.5麥?zhǔn)蠁挝?。多點測量，自動顯示平均值。

三、自動加樣：真空批量加樣法，每批可同時處理10個試劑卡，每卡需菌懸液小于4ml

四、自動處理測試卡：自動掃描卡片條碼、自動核查卡片與標(biāo)本資料、自動密封卡片、自動上載試卡，自動孵育，自動每15分鐘進(jìn)行一次檢測、自動卸載完成卡，自動報告結(jié)果。

五、操作軟件：Windows Xp操作系統(tǒng)，簡易易用圖形界面，鑒定材料《全自動細(xì)菌鑒定》。

六、打印機：激光打印機，自動打印實驗結(jié)果。

七、一次性試卡：64孔鑒定/藥敏卡片，帶有條形碼可指示卡片的序列號和測試的種類。

八、鑒定細(xì)菌范圍：可全自動鑒定菌種400種，包括：

革蘭氏陰性桿菌(含大腸桿菌0157及非發(fā)酵菌);革蘭氏陽性菌(含豬鏈球菌1型、2型和7種李斯特菌);酵母菌;需氧芽胞桿菌(含炭疽芽孢桿菌);奈瑟菌、嗜血桿菌、彎曲菌;厭氧菌

九、鑒定速度：95%常見細(xì)菌≤5小時;其中革蘭氏陰性菌(GN)2～10小時，革蘭氏陽性菌(Gp)2～8小時

十、藥敏試驗：滿足革蘭氏陰性及革蘭氏陽性兩大類細(xì)菌藥敏試驗，速度4—15小時，95%常見細(xì)菌藥敏≤6小時;抗生素已含第4代頭孢等

十一、工作容量：30個試驗卡

十二、操作步驟：自動真空批量接種、自動掃描卡片條碼、自動核查卡片與標(biāo)本資料、自動密封卡片、自動上載試卡，自動孵育，自動檢測、自動卸載廢卡，自動報告結(jié)果

十三、認(rèn)證：ISO9001認(rèn)證:OK;CE或FDA認(rèn)證:OK;進(jìn)口醫(yī)療器械注冊證：OK

主要特點：

1、自動化程度高，操作簡單易用。

2、數(shù)據(jù)庫齊全，鑒定準(zhǔn)確。

內(nèi) 容 概 述

關(guān)于全自動細(xì)菌鑒定等部分檢驗項目收費標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)函

內(nèi) 容 全 文

天津市衛(wèi)生局：

你局《關(guān)于請批準(zhǔn)部分新增檢驗項目收費標(biāo)準(zhǔn)的函》(津衛(wèi)財函389號)收悉。經(jīng)審核，對全自動細(xì)菌鑒定等4項檢驗項目收費標(biāo)準(zhǔn)予以核定，具體收費標(biāo)準(zhǔn)(見附件)，自2011年11月20日起執(zhí)行。

二〇一一年十一月二十八日。

第三篇：細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

博檢革蘭氏陰性菌鑒定系統(tǒng)科學(xué)可行的鑒定系統(tǒng)

本系統(tǒng)由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司聯(lián)合山東省出入境檢驗檢疫局共同研發(fā)設(shè)計，經(jīng)CDC、CIQ等部門驗證完全符合GB/T 4789.4、GB/T 4789.5、GB/T 4789.6、GB/T4789.7、GB/T4789.8、GB/T 4789.36、GB/T 4789.40，具有與ApI20E和VITEK GNI+相同的鑒定效果，可廣泛用于革蘭氏陰性細(xì)菌的鑒定，細(xì)菌鑒定系統(tǒng)。

方便有效的編碼程序

不同種屬的細(xì)菌具有不完全相同的生化特征。本系統(tǒng)選取21種典型生化試驗，并把生化反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為一個8進(jìn)制數(shù)，通過提供的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫查詢系統(tǒng)可得到實驗菌株歸屬的相對概率、T值和R值，對菌株的歸屬進(jìn)行一定程度的鑒定。

強大的數(shù)據(jù)庫支持

當(dāng)前可鑒定的革蘭氏陰性細(xì)菌有112種，基本上涵蓋了常見的革蘭氏陰性細(xì)菌。

共有20種生化管及一個氧化酶試紙條，另附配套鑒定系統(tǒng)程序（博檢鑒定系統(tǒng)），用于各種革蘭氏陰性菌的生化檢測

在該套試驗系統(tǒng)中,21種生化試驗分別為ONpG、精氨酸(ADH)、賴氨酸(LDH)、鳥氨酸(ODC)、檸檬酸鹽利用實驗(CIT)、產(chǎn)硫化氫試驗(H2S)、脲酶(URE)、乳糖(LAC)、吲哚(IND)、Vp、明膠(GEL)、葡萄糖(GLU)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、山梨醇(SOR)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)、蜜二糖(MEL)、苦杏仁甙(AMY)、阿拉伯糖(ARA)、氧化酶(OX)。博檢鑒定系統(tǒng)的原理是：不同種屬的細(xì)菌具有不完全相同的生化特征。本系統(tǒng)選取21種典型生化試驗，并把生化反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為一個8進(jìn)制數(shù)，通過提供的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫查詢系統(tǒng)可得到實驗菌株歸屬的相對概率、T值和R值，對菌株的歸屬進(jìn)行一定程度的鑒定。將細(xì)菌各項生化反應(yīng)結(jié)果填入附贈的記錄卡中，依次每三項為一組，若這三項反應(yīng)均為陽性，則分別記為1、2、4，若為陰性，則相應(yīng)項記為0，鑒定材料《細(xì)菌鑒定系統(tǒng)》。將每組三項的數(shù)值相加，共七組，組成一個七位數(shù)。將所得七位數(shù)輸入數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)中即可進(jìn)行查詢。若某項生化反應(yīng)結(jié)果較難判斷，則按照陰性進(jìn)行記錄，但查詢時，應(yīng)在不定的生化反應(yīng)前打鉤。這樣，及時是不確定生化同樣可以做出鑒定結(jié)果。經(jīng)過我們的反復(fù)試驗校正，該實驗準(zhǔn)確率大大提高，同時系統(tǒng)的準(zhǔn)確率接近100%，大大縮短了生化鑒定的時間，提高了鑒定效率。

BBLCrystalTM半自動自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)

微生物分離，鑒定的傳統(tǒng)方法繁雜，周期長，準(zhǔn)確性差，靈敏度低，對實驗室技術(shù)人員的專業(yè)技術(shù)、操作技能、工作經(jīng)驗要求極高。

BBLCrystalTM半自動/自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)是BD公司專為中小型微生物實驗室及科研結(jié)構(gòu)而設(shè)計的經(jīng)濟(jì)型鑒定系統(tǒng)。該系統(tǒng)可在保持鑒定板高度專業(yè)性及數(shù)據(jù)庫強大分析能力的前提下，有效利用微生物實驗室常規(guī)配置--普通恒溫孵育箱進(jìn)行鑒定板孵育后進(jìn)行差距自動或自動低度器進(jìn)行結(jié)果判讀，可最大程度實現(xiàn)資源共享，并在保證實驗的準(zhǔn)確性、快速性的基礎(chǔ)上達(dá)到節(jié)約試驗成本的目的。而其便攜式設(shè)計則尤其適合于偏遠(yuǎn)地區(qū)用戶及臨床科研機構(gòu)流行病學(xué)異地考察。鑒定試驗原理：

將傳統(tǒng)的酶、底物生化呈色反應(yīng)與先進(jìn)的BD專利熒光增強顯色技術(shù)結(jié)合以設(shè)計鑒定反應(yīng)最佳組合，使BBL? CrystalTM鑒定系統(tǒng)具備獨特、準(zhǔn)確、快速、靈敏的特點

鑒定板配置：

配套提供獨立分裝的鑒定用肉湯試管，確保無菌狀態(tài)，使用方便。

第四篇：細(xì)菌分離鑒定

細(xì)菌分離鑒定

目的要求：

熟悉臨床標(biāo)本中常見的病原性細(xì)菌的分離鑒定方法，細(xì)菌分離鑒定。

實驗內(nèi)容：

一、膿汁、咽拭子等標(biāo)本中病原性細(xì)菌的分離與鑒定

(一)標(biāo)本采集

1.膿拭子：用無菌棉簽蘸取患處深部膿液或分泌物少許，置入無菌空試管內(nèi)，送檢。

2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用無菌棉簽挑取膿稠痰塊，置入無菌空試管內(nèi)，送檢。

3.咽拭子：囑病人把口張大，用壓舌板壓住舌根，用無菌棉簽迅速蘸取咽部分泌物，置入無菌空試管內(nèi)，送檢。

4.血標(biāo)本：疑為敗血癥患者，在嚴(yán)格無菌操作下，靜脈采血，床旁直接加入含50ml的肉湯瓶內(nèi)，立即搖勻后送培養(yǎng)。

5.腦脊液：對疑似流腦患者，作腰椎穿刺取腦脊液，立即行直接床旁接種(送檢過程中應(yīng)注意保溫)。

6.尿道、陰-道分泌物：對可疑淋病患者，男性可從尿道取材，取材時導(dǎo)尿管應(yīng)進(jìn)入尿道1cm～2cm，如為剛排尿，應(yīng)等待1h左右;女性則可以從宮頸口取分泌物，當(dāng)內(nèi)窺器插入宮頸口后應(yīng)稍等片刻，再旋轉(zhuǎn)取出，取材應(yīng)立即送檢，不可放置冰箱。

(二)分離鑒定程序

待檢標(biāo)本可直接做涂片染色檢查鑒定，必要時可做分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)及致病性鑒定。常見的致病性球菌檢查程序如下。

直接涂片、革蘭染色、鏡檢(形態(tài)、排列、染色性)

膿、痰、咽拭子

分泌物、腦脊液 觀察菌落性狀、溶血性、色素

血瓊脂平板→ 涂片、染色、鏡檢

↑ 挑取可疑菌落 生化反應(yīng)

血液、穿刺液 →肉湯培養(yǎng)基 純分離 致病性測定

↓ 藥敏試驗

如培養(yǎng)液混濁時可涂片、染色、鏡檢

(三)常見臨床標(biāo)本的檢查方法

1．膿拭子

在膿汁中除了球菌外，也有桿菌存在，例如革蘭陽性的有炭疽桿菌、白喉桿菌、結(jié)核桿菌、枯草桿菌等，革蘭陰性的有大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌等，此外尚可有真菌、放線菌、螺旋體等。

材料

(1)標(biāo)本：膿拭子

(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板

(3)兔血漿、白色濾紙片、無菌生理鹽水、載玻片

方法 膿汁 → 革蘭染色 → 鏡檢

↓ ↑

血瓊脂平板 →觀察菌落形態(tài)及溶血情況

↓

致病力試驗

(1)將膿拭子作革蘭染色，鏡檢(先作培養(yǎng)再涂片以免污染)，鑒定材料《細(xì)菌分離鑒定》。標(biāo)本放置4℃冰箱保存，待報告發(fā)出后再丟棄。

(2)將膿汁涂布于血瓊脂平板上，再以滅菌接種環(huán)作劃線分離。置培養(yǎng)37℃培養(yǎng)18h～24h。

(3)經(jīng)培養(yǎng)后據(jù)菌落特點及涂片檢查結(jié)果進(jìn)行初步識別，根據(jù)需要再作進(jìn)一步鑒定。若菌落較大、溶血透明、產(chǎn)生金黃色色素、涂片為革蘭陽性球菌并成堆排列時可能系葡萄球菌，應(yīng)確定其為何種葡萄球菌;必要時再作血漿凝固酶試驗及甘露醇發(fā)酵試驗，確定其致病力。

2.咽拭子

咽喉中存在的細(xì)菌較多，可以有厭氧及需氧性鏈球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、四聯(lián)球菌、腦膜炎球菌、卡他球菌、喉桿菌、結(jié)核桿菌枯草桿菌、百日咳桿菌肺炎桿菌及綠膿桿菌等。此外也可有白色念珠菌奮森螺旋體等。本實驗以咽拭子作為標(biāo)本，重點檢查病原性球菌。

材料

(1)標(biāo)本:咽拭子。

(2)培養(yǎng)基:血瓊脂平板。

方法

咽拭子

↓

血瓊脂平板

↓

觀察菌落形態(tài)及溶血性

↓

革蘭染色，鏡檢

取標(biāo)本涂布于血瓊脂平板，再以滅菌接種環(huán)劃線分離，置37℃培養(yǎng)18h～24h培養(yǎng)。標(biāo)本放置4℃冰箱保存，待報告發(fā)出后再丟棄。

可根據(jù)下述特點進(jìn)行鑒別：

(1)在菌落周圍產(chǎn)生2mm～4mm寬、界線分明、完全透明的溶血環(huán)、涂片為革蘭陽性球菌并呈鏈狀排列，可能是乙型溶血性鏈球菌。

(2)菌落細(xì)孝半透明、有草綠色溶血環(huán)、涂片為革蘭陽性球菌呈鏈狀排列，可能為甲型溶血性鏈球菌。需要進(jìn)一步與肺炎球菌區(qū)別時，可做膽汁溶菌試驗及菊糖發(fā)酵反應(yīng)。

菌落細(xì)小半透明、不溶血、涂片為革蘭陽性鏈狀排列的球菌時，為丙型鏈球菌。

(4)菌落扁平邊緣隆起、中央稍凹、半透明、呈草綠色溶血、革蘭染色為陽性雙球菌、呈矛頭狀排列時為肺炎球菌，應(yīng)以膽汁溶菌及菊糖發(fā)酵反應(yīng)與甲型溶血性鏈球菌區(qū)分。

(5)菌落中等大孝表面光滑、呈灰色、革蘭染色為陰性雙球菌，呈腎形排列時，可能為腦膜炎球菌，需要進(jìn)一步作氧化酶試驗及糖發(fā)酵試驗(接種于含血清之葡、麥、蔗糖發(fā)酵管中)。

二、糞便標(biāo)本中腸道桿菌的分離與鑒定

(一)標(biāo)本收集

取患者的糞便或肛-門拭子。

(二)鑒定程序

腸道桿菌為一大群革蘭陰性桿菌，從形態(tài)及染色性上無法鑒別為何種菌，只能依靠生化反應(yīng)和血清學(xué)反應(yīng)進(jìn)行鑒定。

患者糞便(粘液、膿血)→腸道選擇、鑒別培養(yǎng)基(如ss、中國藍(lán)、伊紅美蘭)

↓

挑取可疑菌落(據(jù)大孝顏色、透明度而定)

↓

雙糖鐵及其他鑒別培養(yǎng)基

↓

據(jù)結(jié)果分析鑒定

↓

玻片凝集(做出特異性診斷)

葡萄糖乳糖動力H2S尿素

⊕⊕±--艾希菌屬非致病菌

⊕+---克雷伯菌屬

⊕±+++變形桿菌

⊕-++-乙型副傷寒致病菌

⊕-+±-甲型副傷寒

+-++-傷寒桿菌

+----痢疾桿菌

第五篇：細(xì)菌鑒定手冊

細(xì)菌鑒定手冊

一本有代表性的、參考價值極高、比較全面系統(tǒng)的細(xì)菌分類手冊，細(xì)菌鑒定手冊。由美國布瑞德等人主編。1923年第1版，后于1925、1930、1934、1939、1948、1957、1974年相繼出版了第2至第8版，每個版本都反映了當(dāng)時細(xì)菌學(xué)發(fā)展的新成就。其中第8版有美、英、德、法等 14個國家的細(xì)菌學(xué)家參加了編寫工作，對系統(tǒng)內(nèi)的每一屬和種都做了較詳細(xì)的屬性描述。近年來，由于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的滲透，大大促進(jìn)了細(xì)菌分類學(xué)的發(fā)展，使分類系統(tǒng)與真正反映親緣關(guān)系的自然體系日趨接近。第9版(1984，1986)中實質(zhì)性的變化，象征著細(xì)菌分類學(xué)的發(fā)展進(jìn)入新的階段。第一，手冊更名，原書名為《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊》，第9版由于內(nèi)容增加，范圍擴(kuò)大，提高了手冊的實用性，同時指出各類細(xì)菌間的關(guān)系，所以改名為《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊》;第二，由1卷分成4卷，這是考慮到能及時反映新進(jìn)展和使用者的方便;第三，細(xì)菌在生物界的地位，8、9版間無變動，但它們的高級分類單位有很大變化，尤其嗜鹽細(xì)菌和產(chǎn)甲烷細(xì)菌，根據(jù)胞壁分析和DNA序列分折，另列疵壁菌門，古細(xì)菌綱;第四，趨近自然體系，在各級分類單位中全面應(yīng)用核酸研究;在表型特征的基礎(chǔ)上，以DNA資料給予決定性的判斷，鑒定材料《細(xì)菌鑒定手冊》。使人為的分類體系過渡到自然體系的理想進(jìn)一步付諸實現(xiàn)。

本書是在《一般細(xì)菌常用鑒定手冊》一書的基礎(chǔ)上編寫而成的。全書分兩大部分:第一部分主要介紹了伯杰(Bergey)系統(tǒng)、常見細(xì)菌的檢索表、屬的提要及種的鑒別等;第二部分介紹了幾種鑒定方法,包括常用的傳統(tǒng)分類基本方法和目前通用的分子生物學(xué)方法及快速鑒定和自動化鑒定系統(tǒng)等。

常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊

編者評論004km.cn

常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊東秀珠蔡妙英等編著科學(xué)出版社目錄序使用說明緒論第一部分常見 細(xì)菌屬的特征描述第一章光合細(xì)菌第二章產(chǎn)芽孢細(xì)菌第三章好氧或兼性厭氧發(fā)酵型革蘭氏...閱讀完整評論內(nèi)容

常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊

編者評論-004km.cn

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