第一篇：流感病毒采集規(guī)范

附件5：流感監(jiān)測實驗技術(shù)操作規(guī)范

一、流感監(jiān)測臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、處理及流感病毒株的運(yùn)輸

（一）、流感臨床標(biāo)本的采集

病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標(biāo)本的質(zhì)量，及其保存運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)。多數(shù)標(biāo)本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織。標(biāo)本采集后應(yīng)立即放入適當(dāng)?shù)牟蓸右褐械蜏乇４妗?/p>

采樣液常用的采樣液有以下五種：普通肉湯、pH7.4～7.6的Hank's、Eagle's、水解乳蛋白液或不加抗菌素的生理鹽水（漱喉液）。為防止采樣液生長細(xì)菌和真菌，在采樣液中需加入抗菌素，加入慶大霉素，其終濃度為0.1mg/ml,和抗真菌藥物，其終濃度為2mg/ml。加入抗菌素以后重新調(diào)節(jié)pH值為7.4，配制好以后，分裝每個采樣管4ml,-20℃凍存。采樣方法有以下幾種：

1)鼻拭子：將帶有聚丙烯纖維頭的拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以另一拭子拭另側(cè)鼻孔。將拭子頭浸入采樣液中，尾部棄去。

2)咽拭子：用帶有聚丙烯纖維頭的拭子擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，同樣將拭子頭浸入采樣液中，尾部棄去。注：亦可將鼻、咽拭子收集于同一采樣管中，以便提高分離率，減少工作量。

3)鼻咽抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次。4)漱口液：用10 ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉(zhuǎn)動。然后，用平皿或燒杯收集洗液

5)鼻洗液：患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5 ml生理鹽水注入一側(cè)鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關(guān)閉咽腔。然后讓患者低頭使生理鹽水流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復(fù)此過程洗兩側(cè)鼻孔。

（二）、臨床標(biāo)本運(yùn)送

新鮮的臨床采集標(biāo)本應(yīng)在4℃條件下24小時內(nèi)運(yùn)送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室。未能24小時內(nèi)送至實驗室的，應(yīng)置-70℃或以下保存。標(biāo)本送至實驗室后，病毒分離標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行接種分離，24小時內(nèi)能進(jìn)行接種的可置于4℃保存，如未能接種應(yīng)置-70℃或以下保存。

凍存的臨床采集標(biāo)本應(yīng)在凍存的條件下，低溫送至實驗室。凍存的標(biāo)本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進(jìn)行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標(biāo)本應(yīng)置-70℃或以下保存。

臨床標(biāo)本采集管建議使用帶螺口的塑料管。

（三）、臨床標(biāo)本處理

臨床采集標(biāo)本送至實驗室后，須經(jīng)處理后再進(jìn)行病毒的分離接種。含聚丙烯纖維的拭子的采集標(biāo)本，先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復(fù)擠壓后取出。鼻腔或咽部洗液的標(biāo)本，充分振蕩標(biāo)本管，將粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5 ml。上清液可直接接種或低溫保存。

鼻咽漱液或抽取液：用干凈滅菌過的毛細(xì)吸管，在無菌條件下反復(fù)吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5 ml。上清液可直接接種或低溫保存。

注：如采樣液中尚未加抗菌素，應(yīng)在接種前補(bǔ)加，用量同上前，混勻后置4℃ 過夜或室溫作用數(shù)小時后可接種。

臨床標(biāo)本處理后，將原始標(biāo)本分為三份，一份（40％）用于雞胚接種，一份（30％）用于MDCK細(xì)胞接種，一份（30％）保存待復(fù)核用。對于病毒分離陽性的標(biāo)本－70℃保存6個月，在收到國家流感中心復(fù)核鑒定報告后，按照生物安全有關(guān)規(guī)定處理；病毒分離陰性的標(biāo)本隨時按生物安全的有關(guān)規(guī)定處理。

（四）、血清標(biāo)本的采集與處理

血清標(biāo)本多用于流感暴發(fā)時的血清學(xué)核實診斷及人禽流感待查病例的診斷。血清標(biāo)本采集應(yīng)該包括急性期和恢復(fù)期雙份血清。急性期血樣應(yīng)盡早采集，可在采集病毒分離標(biāo)本時同時采集，但不能晚于發(fā)病后7天?；謴?fù)期血樣則在發(fā)病后2～4周采集。一般采集空腹血。單份血清不能用作診斷。

取一根至少能裝3 ml以上，干凈和滅過菌的血清管做好標(biāo)記，并進(jìn)行登記，登記的內(nèi)容包括：醫(yī)院名稱，患者姓名，性別，急性期（Acute，A）或是恢復(fù)期（Convalescence，C），采樣日期（年，月，日）。

1． 從患者手臂靜脈采2 ml血，放入準(zhǔn)備好的上述血清管中。2． 然后置室溫數(shù)小時待血完全凝固。

3． 1500～2000rpm離心10分鐘，收集血清于1.5 ml 無菌管中，做好標(biāo)記。

4． 血清可置4℃存放一周，存放超過一周需置-20℃或以下保存。

（五）、流感病毒株的運(yùn)輸

需送國家流感中心實驗室檢測的病毒分離物，填寫“流感/人禽流感毒株送檢單”，在凍存后，在低溫條件下，送至中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感中心進(jìn)行復(fù)核，運(yùn)輸時遵守國家生物安全的有關(guān)規(guī)定。

1．流感毒株的送檢要求

（1）自國家級流感樣病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院采樣，所分離到的全部毒株。

（2）自其它流感樣病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院采樣，所分離到的流感病毒，單向血凝抑制效價與國家流感中心提供的標(biāo)準(zhǔn)參照血清相比，有4倍或4倍以上差異的毒株。

（3）自其它流感樣病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院采樣，所分離到的流感病毒，HA<8,且網(wǎng)絡(luò)實驗室不具備RT-PCR鑒定能力。

（4）暴發(fā)時采樣分離到的所有流感毒株。

（5）HA陽性，用國家流感中心提供的標(biāo)準(zhǔn)參照血清進(jìn)行HI試驗，4種血清的HI效價均≤20的毒株。

（6）所送檢的毒株要求每份3ml，并且無細(xì)菌污染。（7）全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室直接將毒株送至國家流感中心，填寫“流感/人禽流感毒株送檢單”。監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室中的市級實驗室送檢毒株時，應(yīng)同時送省級疾控中心實驗室備份。

（8）送檢毒株在HI試驗完成后，每兩周送至國家流感中心。（9）HA陽性，用國家流感中心提供的標(biāo)準(zhǔn)參照血清進(jìn)行HI試驗，4種血清的HI效價均≤20的毒株，應(yīng)在HI試驗完成后24小時內(nèi)送至國家流感中心。

2．寄送流感中心的流感毒株標(biāo)本的包裝、運(yùn)輸

（1）病毒標(biāo)本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊。蓋上蓋子后不應(yīng)有泄漏，推薦使用螺口細(xì)胞保存管保存和運(yùn)輸流感病毒標(biāo)本。

（2）將密閉后的病毒標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封。（3）直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標(biāo)本有關(guān)信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內(nèi)，送檢單應(yīng)單獨(dú)放在防水的袋子里。

（4）將裝標(biāo)本的密封袋放入專用運(yùn)輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料。

（5）標(biāo)本運(yùn)輸：異地運(yùn)輸可以采用郵寄或快遞的方法 國家流感中心聯(lián)系方式為：

中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所國家流感中心 地址：北京市宣武區(qū)迎新街100號 聯(lián)系電話： 010－63580764 傳真： 010－635580764

（六）、標(biāo)本的接收 送檢的標(biāo)本（毒株）送到實驗室后，由專人在生物安全柜內(nèi)打開標(biāo)本的包裝。記錄收到日期、送檢實驗室名稱、核對并記錄送檢標(biāo)本（毒株）標(biāo)編號是否與送檢單相同。收到的毒株后，國家流感中心給送檢單位及時反饋。

附件3.人豬流感（H1N1）病例標(biāo)本采集和實驗室檢測指南

（暫行）

豬流行性感冒（H1N1病毒）病毒的檢測

所有豬流行性感冒（H1N1病毒）疑似病例應(yīng)該采集上呼吸道標(biāo)本來檢測豬流行性感冒（H1N1病毒）的病毒。

推薦采集的呼吸道標(biāo)本：

疾病發(fā)病后應(yīng)盡快采集如下標(biāo)本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔沖洗液/吸取物。如果不能收集這些標(biāo)本，可合并鼻拭子與口咽拭子。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標(biāo)本應(yīng)置于無菌病毒運(yùn)輸液（VTM），并立即用冰塊或冰排保存或置于4 ℃（冰箱），并馬上運(yùn)送至實驗室。臨床樣品收集人員及實驗室人員的感染控制指導(dǎo)請見相關(guān)文件。

拭子

理想的情況下，標(biāo)本應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維），用鋁或塑料做桿。不推薦棉拭子和木桿。不能用海藻酸鈣做的拭子收集標(biāo)本。標(biāo)本采集管應(yīng)包含3毫升病毒運(yùn)輸液（例如，含有蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，阻止細(xì)菌和真菌生長的抗生素，緩沖液）。

臨床標(biāo)本儲存

所有呼吸道標(biāo)本應(yīng)保存在4℃，并盡快放置在-70℃。如果沒有-70℃度冰箱，標(biāo)本應(yīng)保存在4℃，但不應(yīng)超過4天。

臨床標(biāo)本運(yùn)輸

臨床標(biāo)本應(yīng)按照A類包裝要求運(yùn)送，并用干冰運(yùn)輸。

所有標(biāo)本應(yīng)標(biāo)示清楚。疑似病例標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)包含的信息請參照禽流感標(biāo)本運(yùn)輸。

檢測程序

呼吸道標(biāo)本應(yīng)首先應(yīng)用real time RT-PCR方法檢測A型流感病毒的M基因、Swine（H1N1）的HA基因和NP基因，以及質(zhì)控對照RNP基因。同時，接種MDCK細(xì)胞或SPF雞胚進(jìn)行病毒分離，并測定病毒的全基因組序列。

推薦的檢測方法

用Real-time RT-PCR方法檢測豬流行性感冒（H1N1病毒）病毒。

其他檢測方法 快速流感抗原檢測

一些商用快速檢測可以區(qū)分A和B型流感病毒?？焖贆z測實驗A型流感陽性的病例符合可能病例的標(biāo)準(zhǔn)（見上文）。這些實驗對檢測人感染豬流行性感冒（H1N1病毒）病毒臨床標(biāo)本的敏感性和特異性未知，而且檢測季節(jié)性流感病毒的靈敏度不佳。因此，快速檢測陰性結(jié)果可能是假陰性，不能作為豬流感感染的最后診斷。

免疫熒光法（或裝配的IFA）

免疫熒光試驗可以區(qū)分A和B型流感病毒。檢測A型流感陽性的病例符合可能病例的標(biāo)準(zhǔn)（見上文）。免疫熒光試驗的結(jié)果取決于臨床標(biāo)本的質(zhì)量，操作技能，對檢測人感染豬流行性感冒（H1N1病毒）病毒臨床標(biāo)本的敏感性和特異性未知。因此，免疫熒光試驗陰性結(jié)果可能是假陰性，不能作為豬流感感染的最后診斷。病毒培養(yǎng)

可用MDCK細(xì)胞和SPF雞胚分離豬流感（H1N1病毒）病毒可以診斷感染，但無法為臨床診斷及時提供結(jié)果。病毒分離陰性并不能排除感染豬流感（H1N1病毒）病毒。

第二篇：細(xì)菌標(biāo)本采集規(guī)范

臨床微生物學(xué)標(biāo)本采取和處理的規(guī)范化要求

正確的采取、處理與運(yùn)送用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本是臨床細(xì)菌檢驗成功的關(guān)鍵。標(biāo)本采取與處理的規(guī)范化是準(zhǔn)確、及時地向臨床提供重要的臨床感染信息的基礎(chǔ)；而標(biāo)本采取與處理不當(dāng)將嚴(yán)重影響檢驗結(jié)果，給臨床以誤導(dǎo)，延誤對患者的正確治療。為此，我們提出初步的參考意見，并希望在實踐中不斷完善。

一、血液細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集和處理

臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者，需做血液細(xì)菌培養(yǎng)以明確病原。

1.采血時機(jī)：在患者發(fā)熱期間越早越好，最好在抗菌治療前，以正在發(fā)冷發(fā)熱時或發(fā)冷發(fā)熱前半小時為宜。

2.采血次數(shù)及間隔：在急性發(fā)熱性疾病如腦膜炎、細(xì)菌性肺炎，需馬上做抗菌治療；或急性骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎等要緊急手術(shù)的患者，應(yīng)立即從兩臂分別取2份標(biāo)本。對感染性心內(nèi)膜炎患者，建議在24h內(nèi)取血3次，每次間隔不少于30 min；必要時次日再做血培養(yǎng)2次。對發(fā)熱原因不明者兩次抽血間隔60 min；必要時于24～48h后再抽血2次。因為1次血培養(yǎng)不足以說明問題，可能會遺漏陽性結(jié)果。

3.采血部位：多次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌叢污染的可能。要避免從血管插管內(nèi)取血，因插管常被污染，其培養(yǎng)結(jié)果不能反映真實情況。在不同部位取血，2次分離出同樣菌種才是確定病原菌的有力證據(jù)。

4.采血量：采血量與血培養(yǎng)的檢出率相關(guān)，所以采血量一定要足夠。成人一般為10ml，新生兒與嬰幼兒為1～2 ml。

二、下呼吸道分泌物(痰培養(yǎng))的標(biāo)本采取和處理

下呼吸道分泌物(痰)的細(xì)菌學(xué)檢查對病原學(xué)診斷起著重要作用，但痰標(biāo)本的質(zhì)量往往難以保證，造成病原學(xué)診斷和實際引起感染的病原菌脫節(jié)，直接影響抗菌藥物的應(yīng)用、甚至耐藥菌的出現(xiàn)或流行。痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗地帶網(wǎng)檢查應(yīng)注意如下幾個問題。

1.標(biāo)本的采?。鹤匀豢忍担阂蠡颊咔宄苛羧?，留取標(biāo)本前用清水漱口3次，之后用力咳出?？忍递^困難者可用霧化蒸氣吸入以利痰液咳出。幼兒可用手指輕叩胸骨柄上方以誘發(fā)咳痰。

2.氣管穿刺法：僅用于昏迷患者，由臨床醫(yī)師 進(jìn)行操作。

3.纖維支氣管鏡抽吸：通常用于在給患者行纖維支氣管鏡檢查時順便抽取。

4.胃液抽取法：多用于可疑患有肺結(jié)核的患者在有可能將痰液咽下的情況時采用。

5.標(biāo)本的運(yùn)送：標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以避免雜菌過度生長。

三、尿液細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集和處理

尿液的細(xì)菌培養(yǎng)檢查對于膀胱和腎臟感染的及早發(fā)現(xiàn)和病原學(xué)診斷很有價值。對于尿道、前列腺以及內(nèi)、外生殖器炎癥的診斷也有一定價值。

1.標(biāo)本收集時間：需在應(yīng)用抗菌藥物之前或停用抗菌藥5 d之后留取尿液標(biāo)本；尿液在膀胱內(nèi)應(yīng)停留6～8h以上，使細(xì)菌有足夠時間繁殖。

2.標(biāo)本收集方法：

(1)清潔排尿法：女患者以手指將陰唇分開，用肥皂水或碘伏清洗外陰，然后以清水沖洗尿道口周圍，擦干并排出前段尿液后，用無菌容器接取中段尿；男患者應(yīng)翻轉(zhuǎn)包皮沖洗，用碘伏消毒尿道口；嬰兒消毒其陰部后，將無菌小瓶直接對準(zhǔn)尿道口排尿后立即送檢。

(2)膀胱穿刺法：為避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厭氧菌檢查時必須采用膀胱穿刺法。穿刺時膀胱應(yīng)充盈，皮膚嚴(yán)格消毒后用裝有19或20號針頭的注射器在恥檢驗地帶網(wǎng)骨聯(lián)合距臍1/3處穿刺。膀胱穿刺的適應(yīng)癥有：①有尿道感染的臨床癥狀，但中段尿培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)很低，而又難以確定感染源者。②嬰幼兒、新生兒、不能用導(dǎo)管者。③懷疑有厭氧菌感染時。

(3)腎盂尿采集法：若取左右兩側(cè)腎盂尿，應(yīng)請泌尿科醫(yī)生采取，左右側(cè)的標(biāo)本要標(biāo)記明確，以免出現(xiàn)錯誤。

(4)對用封閉式引流裝置的留置導(dǎo)尿患者留取尿液標(biāo)本培養(yǎng)時，用適當(dāng)?shù)南緞﹪?yán)格消毒引流管和導(dǎo)尿管連接處的管壁，用裝有21號針頭的注射器穿刺導(dǎo)尿管壁吸取尿液。不可打開導(dǎo)尿管和引流管連接處收集標(biāo)本，培養(yǎng)用的尿液標(biāo)本也不能從引流袋中留取。(5)膀胱鏡檢查、輸尿管插管或逆行腎盂造影時，收集的尿液可用來做細(xì)菌培養(yǎng)。

(6)做病毒學(xué)檢測時用容器收集清潔的標(biāo)本即可，不需特殊方法收集。標(biāo)本中加入抗生素可抑制細(xì)菌的過度生長，且標(biāo)本需冷藏。

2.標(biāo)本的運(yùn)送和保存：用無菌帶螺帽的容器盛標(biāo)本，標(biāo)本應(yīng)在1 h之內(nèi)送檢，超過2 h者應(yīng)重送，否則易致假陽性結(jié)果。

四、糞便標(biāo)本微生物學(xué)檢查的質(zhì)量要求

1.標(biāo)本采集：糞便標(biāo)本應(yīng)在發(fā)病早期并且盡量在用抗生素治療前采集，直接用棉拭子，也可用直腸拭子，置小瓶中送檢。

2.顯微鏡檢查：糞便直接涂片革蘭染色，可作為艱難梭菌、弧菌、彎曲菌、葡萄球菌、白色念珠菌等初步篩查，鹽水滴片用作腸道寄生蟲檢查。

3.標(biāo)本保存和運(yùn)送：標(biāo)本置密封好的小瓶中，記錄姓名、日期、標(biāo)本號、及時送檢，一般不長于2小時。

五、生殖道標(biāo)本的采集和處理 1.男性標(biāo)本：

(1)如疑為急性淋病奈瑟菌或其他化膿性細(xì)菌感染應(yīng)在清洗龜頭部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒劑消毒后，擠出分泌物立即以無菌棉拭子采取，立即送檢，或以專用的細(xì)拭子插入尿道口1～2cm，旋轉(zhuǎn)采取。

(2)如疑為前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染應(yīng)由醫(yī)師按摩前列腺，以無菌手續(xù)自尿道口采取前列腺液送檢。

2.女性標(biāo)本：

(1)成年婦女自宮頸采取標(biāo)本，應(yīng)在擴(kuò)陰器的支持下，選取有炎癥或分泌物部位，先以無菌棉拭子拭去表淺層分泌物，再用另一拭子取分泌物送檢。如做厭氧或真菌培養(yǎng)應(yīng)另外采取標(biāo)本。

(2)如未成年幼女疑患性傳播疾病時，不應(yīng)使用擴(kuò)陰器，應(yīng)以無菌拭子在陰道口處采取分泌物送檢。

六、胸腹水、腦脊液標(biāo)本的采集

均由醫(yī)師以無菌手續(xù)穿刺取得，必須應(yīng)用帶蓋的無菌容器，立即送檢。

七、對不合格標(biāo)本的處理

微生物室對于下列標(biāo)本收集不符合規(guī)定的標(biāo)本將予拒收，并通知臨床，按標(biāo)本要求復(fù)送：

1.申請單項目與標(biāo)本不符。

2.申請單姓名、科別、床號與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。3.標(biāo)本已有明顯的污染跡象(如開塞)。

4.標(biāo)本量過少或已明顯干燥。

第三篇：甲型H1N1流感病毒實驗活動管理工作規(guī)范

甲型H1N1流感病毒實驗活動管理工作規(guī)范

為做好我省甲型H1N1流感防控工作，確保我省甲型H1N1流感病毒實驗室檢測質(zhì)量與生物安全，特制定本規(guī)范。本規(guī)范是從事甲型H1N1流感檢測實驗室的最低要求，是對申請開展甲型H1N1病毒實驗活動的實驗室進(jìn)行審批的技術(shù)依據(jù)。

一、工作原則

㈠甲型H1N1流感病毒的生物學(xué)特性和變異趨勢尚不完全明確，且傳染性較強(qiáng)，甲型H1N1流感病毒目前暫時按照病原微生物危害程度分類中的二類進(jìn)行管理。必要時，將依據(jù)甲型H1N1流感疫情的發(fā)展和病毒毒力變異情況，以及動態(tài)風(fēng)險評估結(jié)果，適時調(diào)整其危害分類等級。

㈡從事甲型H1N1流感檢測實驗室必須經(jīng)過省衛(wèi)生廳組織的生物安全論證，合格后方可開展甲型H1N1流感病毒檢測工作。

㈢從事甲型H1N1流感檢測實驗室所在單位要加強(qiáng)實驗室生物安全組織領(lǐng)導(dǎo)，建立健全實驗室生物安全管理體系，明確生物安全管理責(zé)任。

㈣未經(jīng)培養(yǎng)的臨床樣本檢測在生物安全二級實驗室進(jìn)行。㈤需要開展甲型H1N1流感病毒分離工作的單位，必須在帶負(fù)壓的生物安全二級以上實驗室進(jìn)行，通過省衛(wèi)生廳組織的生物安全論證后方可開展。

㈥臨床檢測樣本檢測結(jié)果為甲型H1N1陽性的，實驗室要按照有關(guān)規(guī)定，及時通知患者就診醫(yī)院，由患者就診醫(yī)院進(jìn)行疫情報告。其陽性樣本及時送當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心國家級流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室進(jìn)行病原分離工作。

二、管理制度

㈠根據(jù)各實驗室具體情況和特點(diǎn)，建立甲型H1N1流感病毒實驗室生物安全風(fēng)險評估制度。

㈡建立并健全甲型H1N1流感病毒相關(guān)的體系文件，包括程序文件、標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）和記錄等文件。

㈢建立并健全甲型H1N1流感病毒及樣本使用審批制度。㈣建立并健全甲型H1N1流感實驗室意外事故的應(yīng)急處理預(yù)案。㈤實驗室所在的機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)立生物安全委員會，負(fù)責(zé)咨詢、指導(dǎo)、評估、監(jiān)督實驗室的生物安全相關(guān)事宜。實驗室負(fù)責(zé)人必須是所在機(jī)構(gòu)生物安全委員會成員。

㈥建立并健全嚴(yán)格的實驗室準(zhǔn)入制度，實驗室入口處應(yīng)標(biāo)明所從事的生物因子、負(fù)責(zé)人和緊急聯(lián)系電話。

㈦實驗室指定專人負(fù)責(zé)工作人員的健康及感染監(jiān)測工作，開展工作人員崗前及定期健康體檢、保留本底血清并要求進(jìn)行預(yù)防接種，建立個人健康檔案。

㈧建立實驗室設(shè)施、設(shè)備的定期維護(hù)制度，并設(shè)專人負(fù)責(zé)管理。㈨建立正確的生物安全標(biāo)示使用制度。㈩建立嚴(yán)格的毒種及樣本的保存和銷毀制度。

（十一）建立嚴(yán)格的實驗室廢物處理管理制度。

三、人員要求

㈠實驗室應(yīng)具有確保工作正常運(yùn)行的相應(yīng)數(shù)量的管理、技術(shù)、安保、設(shè)施維護(hù)等工作人員。

㈡工作人員應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心，健康狀況良好，接受必要的健康監(jiān)測。

㈢從事甲型H1N1流感病毒實驗室活動人員須經(jīng)實驗室生物安全管理和專業(yè)知識培訓(xùn)，培訓(xùn)合格后，持證上崗。工作人員須具備全面的實驗室生物安全管理知識和流感專業(yè)知識，具備一定流感病毒實驗工作經(jīng)驗，熟悉流感實驗活動的各項制度和流程。

㈣工作人員應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格審批和登記后方可進(jìn)入實驗室。當(dāng)實驗活動進(jìn)行時，要限制該實驗室工作人員的出入。

㈤實驗室管理層應(yīng)按工作的復(fù)雜程度定期評價員工的表現(xiàn)，至少每12個月一次。

㈥實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入實驗室進(jìn)行工作。出現(xiàn)下列情況，不應(yīng)進(jìn)入上述區(qū)域。

1、身體出現(xiàn)開放性損傷；

2、患發(fā)熱性疾??；

3、感冒、上呼吸道感染或其他導(dǎo)致抵抗力下降的情況；

4、妊娠期間；

5、已經(jīng)在實驗室連續(xù)工作4小時以上或其他原因造成的疲勞狀態(tài)。6、16歲以下兒童不應(yīng)被授權(quán)進(jìn)入實驗室工作區(qū)。

四、甲型H1N1流感實驗室布局及操作

㈠疑似或確診甲型H1N1流感病例的未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作實驗室布局

1、實驗室入口處應(yīng)標(biāo)明所從事的生物因子、負(fù)責(zé)人、緊急聯(lián)系電話。

2、實驗室主入口的門、放置生物安全柜實驗室的門應(yīng)可自動關(guān)閉。

3、大量的備用物品應(yīng)存儲在實驗室工作區(qū)域外。

4、實驗室工作區(qū)域外應(yīng)具備存放個人衣物的條件。

5、至少應(yīng)在實驗室工作區(qū)配備簡易洗眼裝置。

6、實驗室所在的建筑內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器或其它適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。

7、實驗室工作區(qū)應(yīng)配備生物安全柜。

8、生物安全柜的排風(fēng)應(yīng)通過獨(dú)立于建筑物公共通風(fēng)系統(tǒng)的管道排出。

9、在風(fēng)險評估和確保 HEPA 功能正常的基礎(chǔ)上，生物安全柜的排風(fēng)可以在室內(nèi)循環(huán)；但實驗室應(yīng)具備通風(fēng)換氣的條件。

10、有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。㈡核酸檢測操作

1、除滿足四㈠所要求的條件外，從事甲型H1N1流感RT-PCR核酸檢測應(yīng)具有四個獨(dú)立物理分區(qū)，分別為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，每個區(qū)均具有獨(dú)立的緩沖間，并保證風(fēng)向從外到內(nèi)的定向氣流。

2、從事Real-Time RT-PCR核酸檢測應(yīng)具有三個獨(dú)立物理分區(qū)，分別為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增、產(chǎn)物分析區(qū)，每個區(qū)均具有獨(dú)立的緩沖間，并保證風(fēng)向從緩沖間往試驗區(qū)定向氣流。㈢甲型H1N1流感病毒分離培養(yǎng)的操作

甲型H1N1流感病毒分離培養(yǎng)的操作除滿足四㈠所要求的條件外，實驗室應(yīng)有可控的通風(fēng)系統(tǒng)，確保實驗室由外向內(nèi)的定向氣流。實驗室排風(fēng)不可再循環(huán)至建筑物其他區(qū)域。當(dāng)實驗室內(nèi)的氣體要排放到室外時，必須能快速從排氣管道及所在建筑物派出，氣體可通過HEPA過濾排放。

㈣實驗室生物安全

1、工作人員應(yīng)穿戴個人防護(hù)設(shè)備，包括一次性手套、反穿衣、隔離衣、連體衣、帽子、鞋套或?qū)Ｓ眯?，眼部保護(hù)裝備。其中工作人員須佩戴生物防護(hù)型N95（1860）口罩，應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)且每個人須通過密合度測試。

2、對標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測時，標(biāo)本接收分裝、核酸操作、PCR反應(yīng)體系配制、電泳操作應(yīng)當(dāng)在不同房間進(jìn)行。不同房間的移液器和槍頭不應(yīng)混用，標(biāo)本分裝和PCR反應(yīng)體系配制的區(qū)域不應(yīng)接觸到核酸，并有單獨(dú)的實驗防護(hù)用品。

3、所有感染性或潛在感染性材料的操作應(yīng)在年檢合格的生物安全柜中進(jìn)行。

4、應(yīng)使用帶有密封離心杯或轉(zhuǎn)子的離心機(jī)，并且在生物安全柜中打開離心杯或轉(zhuǎn)子。

五、甲型H1N1流感實驗室儀器設(shè)備配置

1、核酸檢測

甲型H1N1流感實驗室須配置以下儀器才能開展甲型H1N1流感核酸檢測工作：Ⅱ級生物安全柜、PCR儀、Real-time PCR儀、臺式高速低溫離心機(jī)、凝膠成像儀、混勻器、高壓鍋、電泳儀及-30℃冰箱各一臺，同時需配置不同刻度的100～1000?l、20～200?l和2～20?l移液器各二。如果只進(jìn)行Real-time PCR檢測，可不需要PCR儀、凝膠成像儀、電泳儀。

2、病毒培養(yǎng)

甲型H1N1流感實驗室須配置以下儀器才能開展甲型H1N1流感病毒分離工作：Ⅱ級生物安全柜、CO2培養(yǎng)箱、－70℃冰箱、離心機(jī)（高速）、倒置顯微鏡、高壓鍋和普通冰箱各一臺，同時需配置不同刻度的100～1000?l、20～200?l和2～20?l移液器各兩個。

六、消毒及廢物處理

㈠儲備有效滅活甲型H1N1流感病毒消毒劑，如含氯消毒劑、酒精、過氧化物、四價的氨化合物。

㈡確保使用合格的消毒劑。

㈢實驗室產(chǎn)生的廢物應(yīng)按照《醫(yī)療廢物管理條例》、《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》的規(guī)定進(jìn)行處理。

七、運(yùn)輸

嚴(yán)格按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》的要求，開展甲型H1N1流感病毒及樣本運(yùn)輸工作。

㈠甲型H1N1流感樣本可按照B類感染性物質(zhì)

（UN3733）包裝運(yùn)輸；甲型H1N1流感病毒培養(yǎng)物須按照A類感染性物質(zhì)（UN2814）包裝運(yùn)輸。㈡標(biāo)本運(yùn)輸須通過省衛(wèi)生廳批準(zhǔn)并備案。

㈢實驗室應(yīng)儲備充足的符合上述要求的包裝材料。㈣運(yùn)輸工作人員須經(jīng)過相關(guān)生物安全知識培訓(xùn)。

㈤陸路運(yùn)輸應(yīng)有專車，護(hù)送人員不少于兩人，同時應(yīng)具備有必要的個人防護(hù)裝備及消毒用品。

第四篇：臨床檢驗標(biāo)本采集規(guī)范

臨床檢驗標(biāo)本采集規(guī)范

一

血常規(guī)檢驗標(biāo)本 用EDTA-2K（EDTA-K22H2O）1.5~2.2mg/ml抗凝（EDTA抗凝管、紫色帽）采血。

.2 注意事項：

A 按抗凝管刻度準(zhǔn)確采血至2ml。

B 采血后立即上下顛倒混勻5~10次，不可用強(qiáng)力震蕩，以免造成溶血。C 采血后盡快送檢（為保證結(jié)果準(zhǔn)確，必須在2h內(nèi)完成檢測）。

二

紅細(xì)胞沉降率（血沉、ESR）檢驗標(biāo)本 靜脈采集枸櫞酸鈉（109mmol/L，即32.06g/L）抗凝血（枸櫞酸鈉抗凝管、黑色帽）。2 注意事項：

A 單獨(dú)采1管血，按抗凝管刻度準(zhǔn)確采血至2ml（抗凝劑:全血=0.4:1.6）。B 采血后立即上下顛倒混勻5~10次，不可用強(qiáng)力震蕩。C 采血后盡快送檢（為保證結(jié)果準(zhǔn)確，必須在2h內(nèi)完成檢測）。

三

凝血檢測（PT、APTT、Fbg、TT、D2-聚體）標(biāo)本 靜脈采集枸櫞酸鈉（109mmol/L，即32.06g/L；抗凝劑:全血=0.2:1.8）抗凝血（枸櫞酸鈉抗凝管、藍(lán)色帽）。注意事項：

A 單獨(dú)采1管血，按抗凝管刻度準(zhǔn)確采血至2ml。B 采血后立即上下顛倒混勻5~10次，不可有凝塊。

C 采血后盡快送檢（為保證結(jié)果準(zhǔn)確，必須在2h內(nèi)完成檢測）。D 空腹采血（餐后脂血會影響檢驗結(jié)果）。

四

血型與交叉配合標(biāo)本 用EDTA-2K（EDTA-K22H2O）1.5~2.2mg/ml抗凝（EDTA抗凝管、藍(lán)色帽）采血。

.2 注意事項：

A 按抗凝管刻度采血至2~3ml。最好單獨(dú)采血，便于標(biāo)本保存。B 采血后立即上下顛倒混勻5~10次，不可用強(qiáng)力震蕩，以免造成溶血。

五 血流變檢查標(biāo)本 用肝素鈉抗凝管（肝素鈉、綠色帽）2 注意事項：

A 按抗凝管刻度采血至4~5ml。

B 采血后立即上下顛倒混勻5~10次，不可用強(qiáng)力震蕩，以免造成溶血。

六

尿液常規(guī)檢查標(biāo)本 住院病人盡量留取晨尿（安靜狀態(tài)下留取清晨第一次尿）。2 門急診病人可留取隨機(jī)尿，但結(jié)果受多種因素影響。尿液采集于潔凈尿杯中，不可使用其它未經(jīng)洗滌的器皿如藥瓶、試劑瓶等。標(biāo)本留取后盡快送檢（為保證結(jié)果準(zhǔn)確，必須在2h內(nèi)完成檢測）。

七

尿液特殊檢查標(biāo)本 尿液成分定量檢查應(yīng)根據(jù)檢查目的選擇并在檢驗科領(lǐng)取防腐劑。

A 尿愛迪氏計數(shù)或3h計數(shù)：甲醛（40%），5ml/L尿液；3h和12h尿沉渣計數(shù)的留尿時間分別為（5：30-8：30）和（20：00-次日8：00）。B 尿蛋白或尿糖定量：甲苯，5~20ml/L尿液。

C 尿17-羥、17-酮、腎上腺素、兒茶酚胺和尿鈣等：濃鹽酸，10ml/L尿液。2 尿稀釋濃縮試驗：試驗日正常進(jìn)餐，上午8點(diǎn)排尿棄去，沒隔2h留尿一次，至晚上8點(diǎn)共六次標(biāo)本；晚8點(diǎn)至次晨8點(diǎn)為夜尿，收集于一個容器中，分別標(biāo)記時間后送檢。

八

糞便常規(guī)檢查標(biāo)本 一般應(yīng)為新鮮的自然排出的糞便3~5g，必要時可肛試子取出，但需注明。2 樣品置于潔凈容器中，最好用帶蓋塑料盒。

3糞便應(yīng)選取含膿、血、粘液等異常成分進(jìn)行檢查。做隱血試驗時，應(yīng)囑病人檢查前3天禁食肉類、含動物血的食物。

九

漿膜腔積液檢查標(biāo)本 標(biāo)本一般由臨床醫(yī)師無菌穿刺采取。送檢標(biāo)本量：常規(guī)檢查、生化檢查、細(xì)胞學(xué)檢查各留取2ml；細(xì)菌學(xué)檢查用無菌管采集標(biāo)本，結(jié)核菌檢查留取10ml。標(biāo)本采集后必須立即送檢，否則可因標(biāo)本凝固、細(xì)胞變性等導(dǎo)致標(biāo)本無法檢測或結(jié)果不準(zhǔn)確。用于細(xì)胞學(xué)檢查時，可在標(biāo)本中加適量EDTA抗凝，但還需留1管不加抗凝劑的標(biāo)本用于觀察積液的凝固性。

十臨床化學(xué)檢驗標(biāo)本 一般生化檢查（肝功、腎功、血脂、血糖、免疫、電解質(zhì)、心肌酶等）留取不抗凝血（紅色帽、真空負(fù)壓管），采血量視檢查項目多少而定，一般為4~5ml。2 糖化血紅蛋白需用EDTA抗凝管，操作規(guī)程同血常規(guī)標(biāo)本。3 血鉀檢測標(biāo)本須立即送檢，2h內(nèi)完成檢測。4 空腹采血。如為餐后標(biāo)本，應(yīng)在申請單上注明。

十一

臨床免疫檢驗及化學(xué)發(fā)光檢驗標(biāo)本 一般免疫學(xué)檢驗（乙肝病毒、丙肝病毒、HIV、梅毒螺旋體、結(jié)核、自身免疫病等）和化學(xué)發(fā)光檢驗（各種激素、腫瘤標(biāo)志物等）留取不抗凝血（紅色帽、真空負(fù)壓管），采血量視檢查項目多少而定，一般為4~5ml。2 嚴(yán)格按生物安全有關(guān)規(guī)定采血?？崭共裳Ｈ鐬椴秃髽?biāo)本，應(yīng)在申請單上注明。

十二

微生物學(xué)檢驗標(biāo)本 標(biāo)本采集、運(yùn)送、驗收和處理注意事項 ① 標(biāo)本采集

A 申請單標(biāo)記必須清楚（姓名、性別、年齡、臨床診斷、標(biāo)本來源、采集時間、檢查項目、抗生素應(yīng)用情況等），以便實驗室合理選用培養(yǎng)基。B 盡量在抗生素應(yīng)用前采集標(biāo)本。C 標(biāo)本采集應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。

D 采集標(biāo)本的容器必須經(jīng)滅菌處理或使用一次性無菌專用容器。

② 標(biāo)本運(yùn)送

A 標(biāo)本采集后盡快送微生物室。

B 標(biāo)本采集后在室溫下超過2h未送達(dá)實驗室，視為不合格標(biāo)本。③ 標(biāo)本驗收

A 實驗室只能接受和處理合格標(biāo)本。

B 實驗室對不合格標(biāo)本退回時，須注明原因，并及時與臨床聯(lián)系。2 微生物檢驗標(biāo)本采集和處理

① 尿液標(biāo)本采集和處理：通常留取晨起第一次尿液，及時送檢，并保證2h內(nèi)接種；不能及時送檢時，標(biāo)本應(yīng)置冰箱保存，并于8h內(nèi)送檢。懷疑沙門氏菌感染時，應(yīng)于發(fā)病2周左右采集標(biāo)本；懷疑鉤端螺旋體感染時，應(yīng)于發(fā)病后2周左右采集標(biāo)本。常用的標(biāo)本采集方法如下：

A 中段尿采集法：成年男性和女性分別用肥皂水清洗尿道口和外陰部，再用滅菌水

沖洗尿道口，然后排尿棄去前段尿液，于帶蓋的無菌試管中留取中段尿液5~10ml。B 導(dǎo)尿法：用導(dǎo)尿管導(dǎo)取5~10ml尿液于無菌試管中；長期留置導(dǎo)尿管者應(yīng)更換導(dǎo)尿 管留尿；留置導(dǎo)尿時，用無菌消毒法消毒導(dǎo)尿管外部及導(dǎo)尿管口，用無菌注射器通過導(dǎo)尿管抽取尿液送檢，不可采集尿液收集袋中的尿液送檢。

C 其它方法：膀胱穿刺或腎盂尿采集法須由臨床醫(yī)師采集。

② 糞便標(biāo)本采集和處理

A 采集時間：腹瀉患者處于急性期，盡量在用藥前采集糞便；懷疑傷寒患者在發(fā)病兩周以后采集糞便；懷疑霍亂時應(yīng)立即采集糞便送檢。

B 采集方法：一般患者，取新鮮糞便的黏液、膿血或絮狀物等有意義成分2~3g或1~3ml，盛無菌容器內(nèi)送檢；難以獲得糞便或排便困難的患者和嬰幼兒，可用直腸試子采集標(biāo)本，再插入滅菌試管中送檢。③ 痰及下呼吸道標(biāo)本采集和處理

A 自然咳痰法：晨痰為佳；先嗽口，清潔牙齒和口腔；再用力咳出呼吸道深部的痰；痰量不得少于1ml；咳痰困難者可先做霧化處理。

B 小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將試子深入咽部，小兒因壓舌板刺激引起咳嗽，噴出的肺或氣管分泌物粘在試子上送檢。

C 支氣管鏡、支氣管穿刺、支氣管肺泡灌洗等采集法：由臨床醫(yī)師實施。④ 血液及骨髓培養(yǎng)標(biāo)本

A 抗生素治療前，嚴(yán)格無菌靜脈采血8~10ml（兒童1~4ml）；骨髓1~2ml。B 無菌注入專用培養(yǎng)瓶中送檢。

C 如已用抗生素不能停用時，可在48h內(nèi)分別于下次抗生素使用前，多次采集血液標(biāo)本送檢。

D 疑為心內(nèi)膜炎時，為提高陽性檢出率，可酌情不同部位、不同時間多次采血送檢。⑤ 腦脊液培養(yǎng)標(biāo)本

A 懷疑腦膜炎時應(yīng)立即采集腦脊液，最好在抗生素使用前采集。B 無菌腰穿采集腦脊液1~2ml，立即送檢。⑥ 穿刺液培養(yǎng)標(biāo)本

A 包括胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。B 在抗生素使用前采集或在停用抗生素2~3天后采集。C 無菌穿刺采集，標(biāo)本量不少于1ml。

D 為防標(biāo)本凝固，可在無菌盛器中加入適量滅菌肝素。⑦ 胃液及膽汁培養(yǎng)

A 采集方法：抽取空腹胃液5ml，置無菌管內(nèi)送檢；膽汁培養(yǎng)標(biāo)本由十二指腸引流法或膽囊穿刺法或手術(shù)中留取膽汁5ml，置無菌管內(nèi)送檢。B 標(biāo)本采集后必須立即送檢。⑧ 膿汁和病灶分泌物培養(yǎng)

A 標(biāo)本采集前，先對病灶周圍消毒，然后用無菌方法采取膿汁或病灶分泌物或組織。B 標(biāo)本采集后立即置無菌管內(nèi)送檢。⑨ 眼、耳、鼻、咽試子分泌物培養(yǎng)標(biāo)本 A 用無菌試子常規(guī)采集標(biāo)本。

B 標(biāo)本采集過程中應(yīng)注意避免被粘膜上的正常菌群污染。C 標(biāo)本采集后連同試子一起置無菌管內(nèi)送檢。⑩ 泌尿生殖道培養(yǎng)標(biāo)本

A 尿道分泌物：清洗尿道后采取尿道溢出的膿性分泌物，或用無菌試子插入尿道2~4cm處輕輕轉(zhuǎn)動后取出，置無菌試管中立即送檢。

B 陰道、宮頸分泌物：通過陰道擴(kuò)張器，用滅菌試子采取陰道口或?qū)m頸管1~2cm處分泌物，置無菌試管中送檢。

C 前列腺液：清洗尿道、沖洗膀胱后用前列腺按摩法采集前列腺液于無菌試管中，立即送檢。

D 精液：受檢者應(yīng)5天以上未派精，清洗尿道后用手淫或體外排精法，射精于無菌試管中立即送檢。

E 潰瘍分泌物：滅菌生理鹽水清洗患處，用無菌試子取其邊緣或基底部的分泌物，置無菌試管中立即送檢。⑾

燒傷感染培養(yǎng)標(biāo)本

燒傷12h后用無菌棉試子采集標(biāo)本；要注意從多個創(chuàng)面取樣；燒傷嚴(yán)重感染時易發(fā)生敗血癥，創(chuàng)面取樣的同時應(yīng)采集血樣送做血培養(yǎng)。

⑿

真菌感染培養(yǎng)標(biāo)本

A 淺部真菌感染標(biāo)本采集：皮癬者常規(guī)消毒皮膚，從皮損邊緣刮取鱗屑，置無菌平皿中送檢；皮膚潰瘍則采集皮損周圍膿汁或組織；毛發(fā)則采集其根部折斷處，至少5~6根送檢；指（趾）甲：消毒指（趾）甲并去掉其表面部分，取可疑病變部分，用刀片修成小薄片5~6片，置無菌容器中送檢。B 深部真菌感染標(biāo)本采集：

血液：無菌采血8~10ml，注入血培養(yǎng)瓶中，立即送檢；如不能立刻送檢時血培養(yǎng)瓶應(yīng)放室溫，但不可超過8h。

腦脊液：采樣量不少于3ml，分別注入兩支無菌試管中送檢（一支做真菌培養(yǎng)和墨汁染色，一支做普通培養(yǎng)）。

呼吸道及泌尿生殖道標(biāo)本：采集方法同普通培養(yǎng)。⒀

厭氧菌感染培養(yǎng)標(biāo)本

A 標(biāo)本采集：嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，避免標(biāo)本污染和與空氣接觸；用注射器抽取胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、膽汁、腦脊液或無菌手術(shù)抽取膿液；抽出液體標(biāo)本后，要盡快排除注射器內(nèi)的空氣。

B 標(biāo)本運(yùn)送：標(biāo)本采集后不得冰箱儲存，必須盡快（半小時內(nèi)）送檢；標(biāo)本運(yùn)送可采用注射器（已驅(qū)氧）或含運(yùn)送培養(yǎng)基的無氧小瓶或厭氧罐。

第五篇：細(xì)菌標(biāo)本采集規(guī)范

臨床微生物學(xué)標(biāo)本采取和處理的規(guī)范化要求

正確的采取、處理與運(yùn)送用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本是臨床細(xì)菌檢驗成功的關(guān)鍵。標(biāo)本采取與處理的規(guī)范化是準(zhǔn)確、及時地向臨床提供重要的臨床感染信息的基礎(chǔ)；而標(biāo)本采取與處理不當(dāng)將嚴(yán)重影響檢驗結(jié)果，給臨床以誤導(dǎo)，延誤對患者的正確治療。為此，我們提出初步的參考意見，并希望在實踐中不斷完善。

一、血液細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集和處理

臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者，需做血液細(xì)菌培養(yǎng)以明確病原。

1．采集方法：靜脈采血，以無菌操作方法抽取血液后，直接注入血培養(yǎng)瓶中，輕輕顛倒混勻，以防血液凝固。如果同時作需氧和厭氧培養(yǎng)，應(yīng)先將標(biāo)本接種到厭氧瓶中，再注入需氧瓶，嚴(yán)格防止將空氣注入?yún)捬跗恐小?/p>

2.采血時間以及血培養(yǎng)份數(shù)：在患者發(fā)熱期間越早越好，最好在抗菌治療前，用藥前24小時內(nèi)采集2～3次血液標(biāo)本，可使細(xì)菌檢出率高達(dá)99%。對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱的患者，應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5～1小時采血，亦可在寒戰(zhàn)或發(fā)熱后1小時采集血液標(biāo)本。特殊感染患者采血培養(yǎng)時應(yīng)遵循以下原則：（1）可疑急性發(fā)熱性菌血癥、敗血癥患者：應(yīng)在使用抗菌藥物之前，在24小時內(nèi)從不同部位采集2～3份血液標(biāo)本培養(yǎng)。

（2）可疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎患者、感染性心內(nèi)膜炎患者：在1～2小時內(nèi)采集3份血標(biāo)本培養(yǎng)，如果24小時后陰性，再采集兩份血標(biāo)本培養(yǎng)。

（3）不明原因發(fā)熱患者：先采集2～3份血標(biāo)本，抽血間隔60 min，24～36小時后體溫升高之前，再采集2份血標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。因為1次血培養(yǎng)不足以說明問題，可能會遺漏陽性結(jié)果。

（4）可疑菌血癥但血培養(yǎng)持續(xù)陰性時；應(yīng)改變血培養(yǎng)方法，以獲得罕見或苛養(yǎng)的微生物。

（5）在急性發(fā)熱性疾病如腦膜炎、細(xì)菌性肺炎，需馬上做抗菌治療；或急性骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎等要緊急手術(shù)的患者，應(yīng)立即從兩臂分別取2份標(biāo)本。3.采血部位：采血部位通常為肘靜脈。疑為亞急性心內(nèi)膜炎的患者，以肘動脈或股動脈采血為宜。疑為細(xì)菌性骨髓炎或傷寒患者，在病灶或髂前（后）上棘處嚴(yán)格消毒后抽取骨髓。多次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌叢污染的可能。要避免從血管插管內(nèi)取血，因插管常被污染，其培養(yǎng)結(jié)果不能反映真實情況。在不同部位取血，2次分離出同樣菌種才是確定病原菌的有力證據(jù)。采血時要求嚴(yán)格無菌操作，防止皮膚正常菌群污染。

4.采血量：采血量與血培養(yǎng)的檢出率相關(guān)，所以采血量一定要足夠。成人一般為8～10ml/瓶，新生兒與嬰幼兒為1～5 ml/瓶，骨髓采血量為1～2ml/瓶。5.標(biāo)本運(yùn)送與保存：含血樣的培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送往實驗室；不能及時送檢的標(biāo)本，應(yīng)將其放在室溫，切忌冰箱存放，因為某些苛養(yǎng)菌可在低溫環(huán)境中死亡，而使培養(yǎng)陽性率下降。

二、下呼吸道分泌物(痰培養(yǎng))的標(biāo)本采取和處理

下呼吸道分泌物(痰)的細(xì)菌學(xué)檢查對病原學(xué)診斷起著重要作用，但痰標(biāo)本的質(zhì)量往往難以保證，造成病原學(xué)診斷和實際引起感染的病原菌脫節(jié)，直接影響抗菌藥物的應(yīng)用、甚至耐藥菌的出現(xiàn)或流行。痰標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗地帶網(wǎng)檢查應(yīng)注意如下幾個問題。

1.標(biāo)本的采集：痰液標(biāo)本最好在應(yīng)用抗菌藥物之前采集，以深咳晨痰最好，主要有自然咳痰法、支氣管鏡采集法、胃內(nèi)采痰法、小兒采痰法和氣管穿刺法等。

(1)自然咳痰法：為最常用的采集痰液方法。留取標(biāo)本前，囑咐患者用清水漱口數(shù)次，然后將痰吐入無菌帶蓋的痰杯中。對無痰或少痰的患者可采用霧化吸入加溫至45℃的10%NaCl水溶液，使痰液易于排出。對咳痰少的幼兒，可輕壓胸骨上部的氣管，促進(jìn)痰液的排出。

(2)氣管穿刺法：僅用于昏迷患者，由臨床醫(yī)師進(jìn)行操作，主要用于厭氧培養(yǎng)。

(3)支氣管鏡采集法：用氣管鏡在肺部病灶附近用導(dǎo)管吸引或者用支氣管刷直接取材，患者不易接受，故不常用。

(4)胃內(nèi)采痰法：無自覺癥狀的肺結(jié)核患者（尤其嬰幼兒）不會咳嗽，有時將痰誤咽入胃中，可采集胃內(nèi)容物做結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)。清晨空腹時將胃管插入患者胃內(nèi)抽取胃液送檢。

(5)小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子深入咽部，小兒收到刺激咳嗽時，可咳出肺部或氣管分泌物粘在拭子上。

2.標(biāo)本的運(yùn)送與保存：痰液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以防止某些細(xì)菌在外環(huán)境中死亡。做結(jié)核分枝桿菌和真菌培養(yǎng)的標(biāo)本不能及時送檢時，可放4℃保存，以免雜菌生長。

三、尿液細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集和處理 尿液的細(xì)菌培養(yǎng)檢查對于膀胱和腎臟感染的及早發(fā)現(xiàn)和病原學(xué)診斷很有價值。對于尿道、前列腺以及內(nèi)、外生殖器炎癥的診斷也有一定價值。

1.標(biāo)本收集時間：需在應(yīng)用抗菌藥物之前或停用抗菌藥5 d之后留取尿液標(biāo)本；尿液在膀胱內(nèi)應(yīng)停留6～8h以上，使細(xì)菌有足夠時間繁殖。最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本。2.標(biāo)本收集方法：

(1)清潔排尿法：女患者首先用肥皂水或碘伏清洗會陰部及尿道口，再用清水沖洗，擦干并排出前段尿液后，用無菌容器接取中段尿10～20ml；男患者應(yīng)翻轉(zhuǎn)包皮沖洗，用碘伏消毒尿道口；嬰兒消毒其陰部后，將無菌小瓶直接對準(zhǔn)尿道口接取尿液；均加蓋立即送檢。

(2)膀胱穿刺法：為避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厭氧菌檢查時必須采用膀胱穿刺法。穿刺時膀胱應(yīng)充盈，皮膚嚴(yán)格消毒后用裝有19或20號針頭的注射器在恥檢驗地帶網(wǎng)骨聯(lián)合距臍1/3處穿刺。膀胱穿刺的適應(yīng)癥有：①有尿道感染的臨床癥狀，但中段尿培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)很低，而又難以確定感染源者。②嬰幼兒、新生兒、不能用導(dǎo)管者。③懷疑有厭氧菌感染時。(3)腎盂尿采集法：若取左右兩側(cè)腎盂尿，應(yīng)請泌尿科醫(yī)生采取，左右側(cè)的標(biāo)本要標(biāo)記明確，以免出現(xiàn)錯誤。

(4)對用封閉式引流裝置的留置導(dǎo)尿患者留取尿液標(biāo)本培養(yǎng)時，用適當(dāng)?shù)南緞﹪?yán)格消毒引流管和導(dǎo)尿管連接處的管壁，用裝有21號針頭的注射器穿刺導(dǎo)尿管壁吸取尿液。不可打開導(dǎo)尿管和引流管連接處收集標(biāo)本，培養(yǎng)用的尿液標(biāo)本也不能從引流袋中留取。

(5)膀胱鏡檢查、輸尿管插管或逆行腎盂造影時，收集的尿液可用來做細(xì)菌培養(yǎng)。(6)做病毒學(xué)檢測時用容器收集清潔的標(biāo)本即可，不需特殊方法收集。標(biāo)本中加入抗生素可抑制細(xì)菌的過度生長，且標(biāo)本需冷藏。

3.標(biāo)本的運(yùn)送和保存：尿液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢、及時接種，室溫下保存時間不能超過2小時，4℃冷藏時間不能超過8小時，否則尿液細(xì)菌迅速繁殖，使尿中細(xì)菌計數(shù)不準(zhǔn)確。但疑為淋病奈瑟菌感染患者的標(biāo)本不能冷藏保存。

四、糞便標(biāo)本微生物學(xué)檢查的質(zhì)量要求

1.采集方法：糞便標(biāo)本多采用自認(rèn)排便法，特殊情況下可采用直腸拭子法。（1）自然排便法：患者用藥前自然排便后，采集有膿血、黏液部分糞便2～3克；外觀無異常的糞便應(yīng)從糞便不同部位取材；液體糞便取絮狀物，盛于無菌容器或保存液中送檢。（2）直腸拭子法：對于不易獲得糞便或排便困難的患者，可采用直腸拭子法采集。將拭子前端用無菌甘油或鹽水濕潤，然后插入肛門約4～5cm（幼兒2～3cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦去直腸表面黏液后取出，盛入無菌試管或保存液中送檢。

2.標(biāo)本保存和運(yùn)送：糞便標(biāo)本應(yīng)立即送檢；如不能立即送檢，放入Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0的磷酸鹽甘油（0.033mol/L PBS與等體積的甘油混合）中運(yùn)送和保存。標(biāo)本置密封好的小瓶中，記錄姓名、日期、標(biāo)本號、及時送檢，一般不長于2小時。

五、生殖道標(biāo)本的采集和處理 1.男性標(biāo)本：

(1)如疑為急性淋病奈瑟菌或其他化膿性細(xì)菌感染應(yīng)在清洗龜頭部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒劑消毒后，擠出分泌物立即以無菌棉拭子采取放入無菌試管中，立即送檢，或以專用的細(xì)拭子插入尿道口2～3cm，旋轉(zhuǎn)采取。(2)如疑為前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染應(yīng)由醫(yī)師按摩前列腺，以無菌手續(xù)自尿道口采取前列腺液送檢。2.女性標(biāo)本：

(1)成年婦女自宮頸采取標(biāo)本，應(yīng)在擴(kuò)陰器的支持下，選取有炎癥或分泌物部位，先以無菌棉拭子拭去表淺層分泌物，再用另一拭子取分泌物放入無菌試管中立即送檢。如做厭氧或真菌培養(yǎng)應(yīng)另外采取標(biāo)本。

(2)如未成年幼女疑患性傳播疾病時，不應(yīng)使用擴(kuò)陰器，應(yīng)以無菌拭子在陰道口處采取分泌物放入無菌試管中立即送檢。

六、胸腹水、腦脊液標(biāo)本的采集

1.采集方法：（1）腦脊液多由臨床醫(yī)生采集，通過腰穿法無菌操作采集腦脊液3～5ml，盛于無菌試管或培養(yǎng)瓶中。

（2）胸腹水均由醫(yī)師以無菌手續(xù)穿刺取3～5ml，必須應(yīng)用帶蓋的無菌容器，立即送檢。

2.標(biāo)本運(yùn)送與保存：收集到的腦脊液標(biāo)本應(yīng)立即送檢，15分鐘內(nèi)送到實驗室，同時注意保溫，不可置于冰箱保存，否則會使一些細(xì)菌死亡（如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和嗜血桿菌），影響細(xì)菌的檢出率。

七、對不合格標(biāo)本的處理

微生物室對于下列標(biāo)本收集不符合規(guī)定的標(biāo)本將予拒收，并通知臨床，按標(biāo)本要求復(fù)送：

1.申請單項目與標(biāo)本不符。

2.申請單姓名、科別、床號與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。3.標(biāo)本已有明顯的污染跡象(如開塞)。4.標(biāo)本量過少或已明顯干燥。

5.尿培養(yǎng)應(yīng)留樣于無菌試管或帶蓋無菌杯中。（不合格標(biāo)本大部分是因為留在尿常規(guī)杯中）。尿培養(yǎng)標(biāo)本不合格者，多以污染而致三種以上雜菌生長居多。特別需杜絕的是一些患者見無菌容器太小直接留取中段尿有難度，于是把小便拉在痰盂等大容器中，再把小便倒在無菌容器中送檢。

6.痰培養(yǎng)應(yīng)留樣于帶蓋無菌痰杯中。（不合格標(biāo)本大部分是因為留在尿常規(guī)杯中）。痰培養(yǎng)標(biāo)本不合格者，多以口水居多或口腔污染嚴(yán)重。挑取痰標(biāo)本直接涂片鏡檢，WBC＜10/LP，上皮細(xì)胞＞25/LP不適合做細(xì)菌培養(yǎng)。

7.大便培養(yǎng)標(biāo)本不合格者，多以送檢時間過長導(dǎo)致標(biāo)本干燥無法培養(yǎng)，故大便標(biāo)本須及時送檢（1小時內(nèi)，最好在上班時間直接送細(xì)菌室檢驗）。