第一篇：現(xiàn)代生物制藥技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用及展望

對(duì)現(xiàn)代生物制藥技術(shù)應(yīng)用的認(rèn)識(shí)及展望

（2009級(jí)）

課

程：

現(xiàn)代生物技術(shù)及其應(yīng)用

學(xué)

院： 藝術(shù)設(shè)計(jì)學(xué)院、人文·茶文化學(xué)院 學(xué)生姓名：

應(yīng)

佳

學(xué)

號(hào)：

200907030115

專業(yè)班級(jí)：

廣告學(xué)09

1指導(dǎo)教師：

周 偉

2011年 12 月 15日對(duì)現(xiàn)代生物制藥技術(shù)應(yīng)用的認(rèn)識(shí)及展望

摘要:現(xiàn)代生物制藥技術(shù)是一項(xiàng)與制藥產(chǎn)業(yè)結(jié)合極為密切的高新技術(shù),不斷為醫(yī)藥行業(yè)提供新產(chǎn)品、新劑型,為制藥界開創(chuàng)一條嶄新之路,正在改變生物制藥業(yè)的面貌,為解決人類醫(yī)藥難題提供最有希望的途徑。作者根據(jù)自己短暫的選修課學(xué)習(xí)以及課后上網(wǎng)的查詢?cè)诒疚闹辛信e了幾項(xiàng)生物制藥技術(shù),并利用廣告學(xué)專業(yè)知識(shí)對(duì)生物制藥的未來(lái)應(yīng)用展望進(jìn)行了分析。

關(guān)鍵詞:生物制藥技術(shù) 應(yīng)用 展望

1、生物制藥技術(shù)簡(jiǎn)介

1.1基因工程技術(shù)

激素和許多活性因子是調(diào)節(jié)人體生理代謝與機(jī)能的重要物質(zhì),其活性強(qiáng),臨床療效明顯,但這些物質(zhì)自然界甚為稀少,從人體及動(dòng)物中提取難度大,來(lái)源有限,無(wú)法滿足臨床需要,而現(xiàn)代生物制藥技術(shù)卻為臨床提供了這類廉價(jià)、高效的藥品。胰島素是治療糖尿病的激素類藥物,一般從動(dòng)物中提取,其資源缺乏,價(jià)格昂貴,利用基因工程手段將人或動(dòng)物胰島素合成基因分離后移植到微生物細(xì)胞中,并實(shí)現(xiàn)基因表達(dá),這樣用基因工程手段得到基因重組微生物被稱為基因工程菌,利用基因工程菌在200L發(fā)酵灌中產(chǎn)生10克胰島素相當(dāng)于450千克胰臟中提取的產(chǎn)量。人生長(zhǎng)激素(簡(jiǎn)稱HGH)是腦下垂體前葉分泌的由191種氨基酸組成蛋白質(zhì)類激素,分子量為22000D。以前,人生長(zhǎng)激素只能從人腦垂體前葉中分離純化,應(yīng)用深受限制,而目前利用基因工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工藝可得到,并且與人生長(zhǎng)激素相同,臨床用于治療垂體前葉HGH分泌障礙引起的侏儒癥,促進(jìn)燒傷及骨折等創(chuàng)傷性組織的恢復(fù),也用于改善老年性腎萎縮的癥狀及治療胃潰瘍。

1.2酶及細(xì)胞固定化技術(shù)

微生物轉(zhuǎn)化及酶催化工藝早已在制藥工業(yè)中廣泛應(yīng)用。酶與固定化技術(shù)結(jié)合彌補(bǔ)酶的不足,在制藥界取得顯著發(fā)展,如用大腸桿菌酞化酶生產(chǎn)6一APA、犁頭霉素生產(chǎn)氫化可的松、乳酸菌轉(zhuǎn)化蔗糖制備右旋糖醉等。原西德BeohringerNannhein公司在青霉素酞化酶固定化方面取得了很大的進(jìn)展,他們用聚丙酞胺凝膠包埋法制成微型小球狀固定化酶已投人生產(chǎn),其表面活性為100一150U/g,1kg固定化酶可生產(chǎn)500kg6一APA,能連續(xù)反應(yīng)300次,他們用第二代工程菌的固定化酶轉(zhuǎn)化率達(dá)到85%一90%,反應(yīng)次數(shù)達(dá)900次,有人用固定化后活力可維持100天以上,固定化細(xì)胞、特別微生物細(xì)胞在抗生素、激素、氨基酸等藥物的合成中得到廣泛的研究和應(yīng)用。用固定化酶的膜反應(yīng)器分離布洛芬可得到許多有光學(xué)活性的化合物,體外試驗(yàn)證明其S一異構(gòu)體比R一異構(gòu)體活性高100倍。近年采用多種固定化系統(tǒng)組成的人工腎可在體內(nèi)反復(fù)返轉(zhuǎn)具有顯著臨床效果。

1.3細(xì)胞工程及單克隆抗體

植物細(xì)胞工程培養(yǎng)技術(shù)為開辟藥物新資源、使微生物原料生產(chǎn)工業(yè)化、保護(hù)自然界生態(tài)平衡具有重要意義。中醫(yī)臨床應(yīng)用之中,中草藥數(shù)千種,其中89%來(lái)源地植物,初始靠手集野生資源,最后鑒于野生資源有限,及不斷開發(fā)利用,難以滿足需要,許多名貴藥材如天麻、人參、當(dāng)歸、黃茂等均采用植物細(xì)胞,大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù),其所含有效成份較天然植物含量高。如培養(yǎng)的人參細(xì)胞中Ginselagoside含量較天然植物高5.7倍。培養(yǎng)的煙草細(xì)胞C。QIO含量較天然植物高16.30倍等等。由此可知,植物細(xì)胞工程將為人類創(chuàng)造一代新型中藥制劑造福人類。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要以植物的微生物難以生產(chǎn)出蛋白質(zhì)類藥品,并實(shí)現(xiàn)工業(yè)化、商品化。英國(guó)韋爾科母公司采用8立方米培養(yǎng)罐培養(yǎng)生產(chǎn)a一干擾素為工業(yè)化動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)典型實(shí)例,被稱為“超大規(guī)模”動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得成功。1975年英國(guó)科學(xué)家通過(guò)淋巴細(xì)胞與骨髓細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤,經(jīng)體外培養(yǎng)、分離可得到一些無(wú)性繁殖細(xì)胞株,它們能分泌免疫學(xué)均一抗體。這種抗體為單克隆抗體,單克隆抗體一經(jīng)間世顯示巨大生命力,由于單克隆抗體目前在醫(yī)藥領(lǐng)域具有特異性強(qiáng)、操作方便等特點(diǎn),因此現(xiàn)在已有越來(lái)越多的單克隆抗體代替?zhèn)鹘y(tǒng)的抗血清用于臨床診斷。1981年美國(guó)批準(zhǔn)第一個(gè)單克隆抗體診斷試劑后,1983一1984年又批準(zhǔn)了37種,1985年美國(guó)FDA認(rèn)可就有55種,到1987年底,美國(guó)已批準(zhǔn)單克隆診斷試劑在上百種以上,它主要用于艾滋病、腫瘤性疾病、乙型肝炎及細(xì)菌性感染等疾病的診斷,臨床療效顯著。由于單克隆抗體對(duì)相應(yīng)抗原結(jié)合,具有高度專一性,因此有人試用腫瘤抗原的抗體作為抗腫瘤藥物的攜帶者,將藥物導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞,從而使腫瘤藥物有選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞而不傷害正常細(xì)胞,這種由單克隆抗體和抗癌藥物組成的導(dǎo)向藥物為“生物導(dǎo)彈”。

2、應(yīng)用展望

2.1加大研發(fā)投入,建立高效研發(fā)產(chǎn)品線。

國(guó)內(nèi)大多數(shù)生物醫(yī)藥中小企業(yè)缺乏完善的自主研發(fā)體系,新產(chǎn)品研發(fā)效率低下。這與國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥業(yè)研發(fā)投入嚴(yán)重不足有關(guān)。目前,國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)大多數(shù)研發(fā)投入占銷售收入不足10%,甚至低于2%,遠(yuǎn)低于國(guó)外同類企業(yè)的研發(fā)投入。沒有足夠的研發(fā)投入往往造成后續(xù)產(chǎn)品開發(fā)乏力。國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)需要加大研發(fā)投入,建立或完善從上游構(gòu)建、小試、中試放大、臨床研究到最終生產(chǎn)的高效通用技術(shù)平臺(tái),為企業(yè)發(fā)展提供源源不斷的新產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)少數(shù)企業(yè),如沈陽(yáng)三生,每年的研發(fā)投入占銷售收入的10%,該公司陸續(xù)開發(fā)出了干擾素、IL-

2、EPO、重組人血小板生成素等一系列產(chǎn)品,經(jīng)營(yíng)業(yè)績(jī)良好。

2.2哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)藥物開發(fā)是國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥的重大發(fā)展機(jī)會(huì)。

全球銷售領(lǐng)先品種大部分都采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)平臺(tái),目前,特別是單克隆抗體藥物已經(jīng)成為了生物醫(yī)藥的重要發(fā)展方向。在國(guó)內(nèi),大多數(shù)銷售領(lǐng)先的主要品種不能實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化,往往不是由于專利限制,而是國(guó)內(nèi)基本未能掌握該技術(shù)平臺(tái)。預(yù)期在未來(lái)數(shù)年內(nèi),能真正解決哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)及大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)這一重大技術(shù)平臺(tái)的國(guó)內(nèi)企業(yè),將會(huì)獲得豐厚的利潤(rùn)回報(bào)。

2.3選擇合適的產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目。

醫(yī)藥產(chǎn)品開發(fā)風(fēng)險(xiǎn)大,即使產(chǎn)品開發(fā)成功,一般每10個(gè)新藥中大約只有3個(gè)能獲得超過(guò)其開發(fā)費(fèi)用的收入,而另外7個(gè)新藥的收入還不足以補(bǔ)償其研發(fā)費(fèi)用。與其它化學(xué)藥一樣,大多數(shù)生物醫(yī)藥產(chǎn)品盈利能力低下,甚至虧損。因此,在生物醫(yī)藥研發(fā)立項(xiàng)前,必須對(duì)其進(jìn)行科學(xué)、市場(chǎng)等方面的全面論證,以減少項(xiàng)目研發(fā)及市場(chǎng)銷售失敗風(fēng)險(xiǎn)。

生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)是發(fā)展前景巨大的一個(gè)產(chǎn)業(yè),隨著“人類基因組”等生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展,越來(lái)越多的生物基因藥物將被研發(fā)和投入生產(chǎn),生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)將蓬勃發(fā)展。

參考文獻(xiàn):

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第二篇：自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

一、名詞概念

二、知識(shí)點(diǎn)

自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

吉林大學(xué)現(xiàn)代生物制藥技術(shù))

一、名詞概念 1.生物工程：應(yīng)用生物科學(xué)17微細(xì)胞：是某些細(xì)菌的突變株在生長(zhǎng)期間產(chǎn)生的一類微小的圓形的無(wú)核細(xì)胞，它具細(xì)胞壁及細(xì)胞膜、DNA上，并引入受體細(xì)胞，從而可使受體細(xì)胞獲得外源基因的遺傳信息，并進(jìn)行正常的復(fù)制，表達(dá)和遺傳。細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)。

52半連續(xù)培養(yǎng)法：在反應(yīng)器中投料和接種，培養(yǎng)一段時(shí)間后，將培養(yǎng)液和新鮮培的理論、方法，按照人們?cè)O(shè)計(jì)的藍(lán)圖，改良加工生物或用生物及其制備物作為加工原料，以提供所需生物制品為人類社會(huì)服力的綜合性科學(xué)技術(shù)。

2.養(yǎng)液進(jìn)行交換的掊養(yǎng)方法，稱為半連續(xù)培養(yǎng)法。

53動(dòng)物細(xì)胞工程：根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)及工程學(xué)原理定向改造動(dòng)物細(xì)胞遺傳性、創(chuàng)造新物種，通過(guò)工程化為人類提供名貴藥品服務(wù)的技術(shù)，稱為動(dòng)物細(xì)胞工程。54動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：在一定條件下，通過(guò)人工供給營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生長(zhǎng)因子，使離體動(dòng)物細(xì)胞或組織生長(zhǎng)繁殖的方法，稱為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

55細(xì)胞塊培養(yǎng)法：將動(dòng)物組織切成直徑1～2mm小塊，進(jìn)行培養(yǎng)的方法，稱為組織塊培養(yǎng)法。

56細(xì)胞單層培養(yǎng)法：動(dòng)物組織塊經(jīng)銷化分散成單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊后，粘附于培養(yǎng)容器表面培養(yǎng)成新生細(xì)胞單層的培養(yǎng)法，稱為細(xì)胞單層培養(yǎng)法。

57單細(xì)胞分離培養(yǎng)：動(dòng)物組織分散后，將其單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成純系細(xì)胞集群的技術(shù)，稱之為單胞分離培養(yǎng)。58確立細(xì)胞株：正常細(xì)胞在移植繼代過(guò)程中，有些細(xì)胞增殖力突增強(qiáng)，在特定條件下可無(wú)限繁殖，與初代細(xì)胞相比，其形態(tài)、生理生化特性，病毒敏感生，抗原性及染色體結(jié)構(gòu)均發(fā)生變化，具有致癌性，這些細(xì)胞稱為確立細(xì)胞株。

59動(dòng)物體細(xì)胞雜交技術(shù)：在外力作用下，令兩上或兩上以上異源細(xì)胞合并為一個(gè)多核細(xì)胞的過(guò)程，稱為動(dòng)物體細(xì)胞雜交技術(shù)。

60核體：細(xì)胞核連同其外表薄層細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成的顆粒稱為核體。

61胞質(zhì)體：不具有細(xì)胞核的細(xì)胞稱為胞質(zhì)體。

62微核雜種細(xì)胞：按完整細(xì)胞之間的融合方式，將微核與另一完整細(xì)胞融合，使后者獲得另一種細(xì)胞中的若干個(gè)染色體，所獲融合子稱為微核雜種細(xì)胞。

63抗藥性篩選系統(tǒng)：利用生物細(xì)胞對(duì)藥物敏感性差異篩選雜種細(xì)胞的方法。64營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞：在一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的合成能力上出現(xiàn)缺陷，因此必須在基本培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的有機(jī)成分才能正常生長(zhǎng)的變異細(xì)胞。

65營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)選擇法：利用兩種親本細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)作用原理篩選雜種細(xì)胞的方法稱為營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)選擇法。66雜交瘤技術(shù)：骨髓瘤細(xì)胞與免疫淋巴細(xì)胞融合制自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

備雜種細(xì)胞的方法為雜交瘤技術(shù)。

67雜合瘤：骨髓瘤細(xì)胞與免疫淋巴細(xì)胞融合制備的雜種細(xì)胞稱為雜合瘤。68微載體培養(yǎng)法：將細(xì)胞吸附于微載體表面的培養(yǎng)方法。

69酶工程：應(yīng)用酶的特異性催化功能并通過(guò)工程化為人類生產(chǎn)有用產(chǎn)品及提供有益服備的技術(shù)為本酶工程。

70酶：生物體內(nèi)具有特殊催化功能的蛋白質(zhì)稱為酶。85腫瘤壞死因子：是一種由巨噬細(xì)胞分泌能產(chǎn)生細(xì)胞素，使腫瘤細(xì)胞溶解的因子。

86干擾素：是一類在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及RNA和蛋白質(zhì)的合成。

87集落刺激因子：CSF為一組糖蛋白物質(zhì)，由淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞自然產(chǎn)生，有刺激紅細(xì)胞系以外造血細(xì)胞增殖和分化的作用。

質(zhì)粒。

11．雄性大腸桿菌表面的性纖毛是一種接合質(zhì)粒形成的表面物質(zhì)。12．根據(jù)質(zhì)粒在細(xì)胞中拷貝數(shù)的不同，可把質(zhì)粒分為松馳型質(zhì)粒和嚴(yán)緊型質(zhì)粒。13．嚴(yán)緊質(zhì)粒大多為具有自身傳遞能力的大質(zhì)粒。14．分子量較大，自身傳遞上嚴(yán)緊型質(zhì)粒的特點(diǎn)。15．分子量較小，不具自身傳遞性是松馳型質(zhì)粒的特點(diǎn)。16．基因工程中使用的質(zhì)粒39．大腸桿菌DNA連接酶只能催化DNA雙鏈的單鏈缺口和帶粘性末端的雙鏈DNA。

40．TDT即末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶。

41．DNA連接酶的最適溫度

0

是37C。42．連接反應(yīng)溫度應(yīng)介于催化反應(yīng)與末端粘合之間。43．根據(jù)受體系統(tǒng)不同，基因工程可分為微生物基因工程、動(dòng)物基因工程和植物基因工程。44．關(guān)于感受態(tài)本質(zhì)的假說(shuō)71固定比酶：限制或定位于特定空間位置的酶稱為固定化醇。

72固定化細(xì)胞：被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。

73載體結(jié)合法：將細(xì)胞懸浮液直接與水不溶性轂體相結(jié)合的固定化方法。74包埋法：將細(xì)胞定位于凝膠網(wǎng)格內(nèi)的技術(shù)稱為包埋法。

75偶聯(lián)效率：偶聯(lián)固定化反應(yīng)過(guò)程中載體結(jié)合蛋白質(zhì)的能力稱為偶聯(lián)效率。QQ：806235356 76酶活力：醇類催化特定化學(xué)反應(yīng)的能力稱為酶活力。

77酶比活：指每毫克酶蛋白所表現(xiàn)的活力。

78固定化反應(yīng)的酶活力回收串：固定醇所顯示的活力與加入偶聯(lián)液中酶總活力的比值稱為固定化反應(yīng)的酶活力回收率。

79酶試劑盒；將酶、反應(yīng)試劑、穩(wěn)定劑、激活劑，填充劑、及緩沖劑等配成檢測(cè)用的混合制劑稱酶試劑盒。80細(xì)胞因子：是人類或動(dòng)物的各類細(xì)胞分泌的具有多樣生物活性的因子，是可溶性物質(zhì)，是一組不均一的蛋白質(zhì)分子，能調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化。

81白細(xì)胞介素：由白細(xì)胞或其它細(xì)胞產(chǎn)生的又在白細(xì)胞間起調(diào)節(jié)作用和介導(dǎo)作用的因子。

82.IL-3：即白細(xì)胞介素3，由激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，能刺激多能造血干細(xì)胞和各系細(xì)胞的分化和增殖，促進(jìn)和維持肥大細(xì)胞的增殖，增殖中性粒細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞的活性，促進(jìn)NX細(xì)胞殺傷實(shí)體瘤的活性。

83.IL-10：由TH2細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制TH1細(xì)胞合成因子的能力，是一種糖蛋白。84.IL-12：是由B淋巴細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，分子量為75KD的糖蛋白，其主要作有得促進(jìn)PHA活化的PBMC增殖以及亞適劑量IL-2協(xié)同促進(jìn)作用。88超誘導(dǎo)：是指細(xì)胞在某都是松馳型質(zhì)粒。種大分子合成抑制物的適17．松馳型質(zhì)?？杀宦让顾禺?dāng)作用，誘生蛋白合成增加擴(kuò)增。的現(xiàn)象。

18．細(xì)菌收獲可通過(guò)離心進(jìn)89生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑：是生行。

物體體內(nèi)的某些細(xì)胞和某19．細(xì)菌裂爭(zhēng)可采用：非離些分子，它們既是機(jī)體對(duì)內(nèi)子型或離子型去污劑，有機(jī)外環(huán)境刺激應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)溶劑，堿處理及加熱處理。制，也是機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境的20．λ噬菌體長(zhǎng)約48.5kb。穩(wěn)定因素。21．野生型λ噬菌體為雙鏈

線形分子，具有12個(gè)堿基

二、知識(shí)點(diǎn) 的粘性末端，進(jìn)入大腸桿菌

包括局部原生質(zhì)體化假說(shuō)及酶受體假說(shuō)。45．大腸桿菌感受的制備方法包括Hanahan法，氯化鈣法及電轉(zhuǎn)化法。46．局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)只能轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主染色體上少數(shù)基因。47．普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)可轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主染色體上任何基因。

48．β-半乳糖基因插入失活法的重組質(zhì)粒產(chǎn)生白色菌落。

49．不帶β-半糖苷酶活性蛋白的菌落中央也可出現(xiàn)淡藍(lán)色斑點(diǎn)。50．動(dòng)植物病毒也可作為外源基因的載體。51．目的基因重組克隆的篩選方法包括：根據(jù)重組體表型篩選，重組體結(jié)構(gòu)分析法，檢測(cè)目的基因法及檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)的法。52．原核生物中基因表達(dá)以操縱子形式進(jìn)行。

53．原核生物細(xì)胞沒有核膜，因此表達(dá)過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄與翻譯往往同時(shí)進(jìn)行。54．原核生物的mRNA在翻譯完畢之后，隨即被水解掉。

55．真核生物轉(zhuǎn)錄成不均-RNA之后，還需加工，如

去掉內(nèi)含子，修飾，加工5，末端和3，末端。56．基因工程中基因表達(dá)的研究，是指外源基因在某一種細(xì)胞中的表達(dá)活動(dòng)。57．大腸桿菌，酵母與哺乳動(dòng)物細(xì)胞三大基因表達(dá)體系已成為當(dāng)前基因工程工業(yè)性生產(chǎn)的核心。58．基因表達(dá)合成功能蛋白的基本條件是依賴于基因的有效轉(zhuǎn)錄，mRNA正確的轉(zhuǎn)譯和轉(zhuǎn)譯后的加工。59．閱讀框架是由起始密碼子決定的。60．用于保證目的基因處于正確的閱讀框架中的方法有：選用適當(dāng)?shù)拿盖形稽c(diǎn)；用人工接頭調(diào)節(jié)閱讀框架；構(gòu)建一組適合不同閱讀框架的載體。61．基因的表達(dá)受到啟動(dòng)子等調(diào)控元件的控制。62．基因的高效表達(dá)必須依賴一個(gè)強(qiáng)的啟動(dòng)子。自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

63．適當(dāng)?shù)膯?dòng)子，只能保證目的基因的正確轉(zhuǎn)錄，而并不能保證基因的完全正確表達(dá)。64．對(duì)已知功能的基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)，可以采用蛋白質(zhì)電泳，免疫擴(kuò)散和凝集，酶聯(lián)免疫和放射免疫等方法。65．對(duì)未知目的基因功能的表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)方法是在18．水的主要生理功能是參與代謝反應(yīng)，作為反應(yīng)的價(jià)質(zhì)，提供氫、氧元素；參與物質(zhì)運(yùn)輸；傳遞熱量，調(diào)節(jié)體溫。19．培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因素的主要功能是作為酶的重要組成成分。20．化學(xué)物質(zhì)來(lái)菌只適用于局部空間或某些器械消毒。21．用于輻射滅菌的射線有性營(yíng)養(yǎng)環(huán)境不利于放線菌

孢子形成。

43．一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)放線菌孢子形成。

44．霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麥米、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。45．細(xì)菌的斜面基多采用碳源限量而氮源豐富的配方。4．植物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)法是懸浮、微室、平板、看護(hù)、懸滴及單花粉等多種培養(yǎng)方式。

5．懸浮培養(yǎng)特點(diǎn)是培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞總數(shù)不斷增加，一定時(shí)間后產(chǎn)量達(dá)最高點(diǎn)，生長(zhǎng)趨于停止。

6．植物細(xì)胞接種濃度通常

4為2.5×10～5.0×10細(xì)胞/毫升。

攜帶有重組體分子的細(xì)胞中尋找新合成的蛋白質(zhì)。66．應(yīng)用大細(xì)胞系統(tǒng)檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)，主要是利用質(zhì)粒或λ載體擴(kuò)增的途徑。67．微細(xì)胞不含有染色體DNA。

68.HbsAg是指乙肝表面抗原。

69．HGH是指人生長(zhǎng)激素。70．HGH可以治療侏儒癥，促進(jìn)燒傷及骨折等創(chuàng)傷性組織的恢復(fù)。

7．植物細(xì)胞單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有平板培養(yǎng)法，微室培養(yǎng)法、看護(hù)培養(yǎng)法等。

8．微室培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)是可直接觀察分裂繁殖及分化全過(guò)程，胞質(zhì)環(huán)流規(guī)律及線粒體生長(zhǎng)與分裂活動(dòng)，亦可進(jìn)行連續(xù)觀察原生質(zhì)體融合，細(xì)胞壁再生及融合后細(xì)胞分裂活動(dòng)，同時(shí)可進(jìn)行顯微攝像。

9．看護(hù)培養(yǎng)法培養(yǎng)時(shí)間較微室培養(yǎng)長(zhǎng)。10．細(xì)胞突變的主要原因是染色體缺失、重復(fù)、倒位、異位、堿基順序轉(zhuǎn)換、顛換及移碼所引起。11．植物細(xì)胞培養(yǎng)物易發(fā)生自發(fā)突變，其突變頻率在10-7～10-6

之間。12．人工誘發(fā)植物細(xì)胞突變的化學(xué)因素主要有堿基類似物、烷化劑、抗生素等。13．篩選植物突變細(xì)胞的目的在于獲得某些藥物高產(chǎn)細(xì)胞株或某些物質(zhì)轉(zhuǎn)化的高產(chǎn)酶細(xì)胞株。14．篩選細(xì)胞突變體主要依據(jù)細(xì)胞表型變化。15．自離體植物細(xì)胞培養(yǎng)物中篩選細(xì)胞突變體的方法有直接選擇法，間接選擇法及綠島法。16．植物細(xì)胞培養(yǎng)物處于無(wú)組織無(wú)器官分化的分散狀態(tài)時(shí)許多重要基因并不表達(dá)。17．目前已建立植物細(xì)胞種質(zhì)保存法有：干燥保存法，液體石蠟覆蓋法，低溫保存法，低壓低氧保存法及超低溫深凍保存法。18．超低溫深凍保存法系將

植物種質(zhì)于-1960

C的液氮中保存。

19．常用的凍凍保護(hù)劑有DMSO，甘油，PEG，葡萄糖、山梨糖及蔗糖。20．為提高存活力，凍存材料應(yīng)選用抗寒力強(qiáng)的幼齡培養(yǎng)細(xì)胞。

21．對(duì)于種子、花粉、球莖等高度脫水材料可以采用快速降溫的凍存。22．對(duì)于不耐寒植物細(xì)胞需采用慢速冰凍法。23．對(duì)于木本植物冬芽?jī)龃?/p>

物需于00

C慢速化凍。24．深凍細(xì)胞活力及存活率測(cè)定的方法有再培養(yǎng)法、二醋酸熒光素染色法及氯化自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

三笨四氮唑還原法。25．再培養(yǎng)法是檢查細(xì)胞活力的根本方法。26．植物原生質(zhì)體制備的材49．以組織塊為材料的培養(yǎng)方法叫組織塊培養(yǎng)法。50．細(xì)胞培養(yǎng)包括細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)塊單層培養(yǎng)及單細(xì)胞程謂之電場(chǎng)誘導(dǎo)融合作用。72．完整細(xì)胞間融合是擴(kuò)大生物變異的有效手段。73．兩種完整細(xì)胞融合時(shí)，95．微載體培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)在于兼有固定化培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)的雙重特點(diǎn)。

95．動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，又料應(yīng)用較多的是葉片，愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。27．高等植物細(xì)胞壁主要成分為纖維素，其次為半纖維素，果膠質(zhì)及蛋白質(zhì)。28．植物原生質(zhì)體制備時(shí)的脫壁酶有纖維素酶，果膠酶，斗纖維素酶，蝸牛酶及崩潰酶。

29．纖維素酶使用時(shí)的pH值為5.4。

30．果膠酶最適pH值為5.8。31．纖維素酶及果膠酶混合使用的pH值為5.4～5.6之間。

32．脫壁酶液采用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾除菌。33．純化植物原生質(zhì)體的方法有離心法、飄浮法、界面法及滴洗法。34．植物原生質(zhì)體活力測(cè)定方法有：根據(jù)形態(tài)特征判斷其活力，活體染色法及光染料活體染色法。35．大多數(shù)植物原生質(zhì)培養(yǎng)1～3day，即再生新細(xì)胞壁。36．大多數(shù)植物原生質(zhì)體通常在1～2周內(nèi)發(fā)生

具有錨地依賴依。96．組織纖維溶酶原激活劑是一川絲氨酸蛋白酶。97．抗乙型肝炎表現(xiàn)抗原單克隆抗體是專一性識(shí)別HbsAg的單一抗體。98．體外法生產(chǎn)單克隆抗體是使雜交瘤細(xì)胞在人工反應(yīng)器內(nèi)大規(guī)模培養(yǎng)并表達(dá)相應(yīng)抗體。99．體內(nèi)法生產(chǎn)克隆抗體是利用生物體為細(xì)胞反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體的方法。

100．檢出分泌特異抗體細(xì)胞后，應(yīng)即時(shí)進(jìn)行克隆化篩選與鑒定，以免非必需細(xì)胞過(guò)分生長(zhǎng)。QQ：806235356

定的是IFNa。37．干擾素的受體主要存在于細(xì)胞膜中。

38．白介素-2的生物學(xué)作用主要是刺激細(xì)胞增生。39．酵母屬于真核生物，大腸肝菌，放線菌及蘭細(xì)菌等屬于原核生物，但它們均為單細(xì)胞生物。

40．NK細(xì)胞對(duì)射線照射最為敏感。

41．CTL細(xì)胞對(duì)射線照射最為敏感。

42．B細(xì)胞具有表面球蛋白，而T細(xì)胞、NK細(xì)胞，K細(xì)胞的表面則不具有表面球蛋白。

44．TNF對(duì)蛋白酶最為敏感。45．具有生物活性的腫瘤壞死因子為三聚體構(gòu)型。46．細(xì)胞因子使用的最終效應(yīng)部位在細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。47．細(xì)胞因子多為單鏈分子，其基因多由多個(gè)外顯子和內(nèi)含子組成，但其基因均為單拷貝。

48．IL-5對(duì)細(xì)胞的作用包括增強(qiáng)B細(xì)胞的功能，促進(jìn)活性B細(xì)胞分泌，并可誘導(dǎo)B細(xì)胞表達(dá)IL-2受體。49．IL-8可來(lái)源于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、T細(xì)胞等。

50．IFN的蛋的產(chǎn)物包括IFN-α，IFN-β及IFN-y。51．IFN-β在成纖維細(xì)胞中誘生。

52．IFN也可誘生IFN。53．TNF也可誘生IFN。54．IFN可抑制病素的生活周期的許多階段，包括病毒的吸附和脫殼、早期病毒轉(zhuǎn)錄、病毒轉(zhuǎn)譯、蛋白合成及從細(xì)胞表面芽生。

55．EPO的主要來(lái)源為腎小管，腎間質(zhì)細(xì)胞。56．可導(dǎo)致EPO生成增加的因素包括高原氣候、冠心病、肺心病、溶血性貧血等。57．細(xì)胞因子研究發(fā)展前景包括細(xì)胞因子的加工改造，細(xì)胞因子的受體及其免疫調(diào)節(jié)的信息傳遞，細(xì)胞因子基因表達(dá)的調(diào)控，分子水平上了解在疾病治療中的作用以及作為有效的免疫佐自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

劑。58．天然干擾素是一種糖蛋白。

59．干擾素對(duì)蛋白酶敏感。60．干擾素可導(dǎo)致病毒繁殖中斷。61．干擾素具有廣泛的抗病毒活性。62．干擾素基因在正常生理狀態(tài)下不表達(dá)。

63．IFN對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用包括增強(qiáng)巨噬細(xì)胞活力，使補(bǔ)體水平下降及延長(zhǎng)同種移植物的排斥反應(yīng)。84．細(xì)胞因子很難用常規(guī)方法純化。

86．TNF具有抗腫瘤作用。87．誘導(dǎo)TEF合成須經(jīng)過(guò)兩個(gè)階段：起動(dòng)期、促發(fā)期。88．TNF經(jīng)鑒定有兩類：TNFα，TNFβ。

89．TNF分子量因來(lái)源不同，制備方法不同及測(cè)定方法不同相差較大。

90．TNF與其它細(xì)胞因子，化療藥物聯(lián)合作用可以降低TNF劑量及副作用，提高療效。制，是以雙鏈DNA庫(kù)間媒介；利于體外純化；（2）不論單鏈DNA還是雙鏈復(fù)制形式DNA均能夠感染大腸桿菌；（3）單鏈DNA噬菌體顆粒的大小，是受其DNA多制約，而不存在包裝限制問題；（4）可以容易地測(cè)定出外源DNA片段的插入取向。

9．T4DNA連接酶的作用機(jī)制：（1）T4DNA連接酶與輔因子ATP形成酶-AMP復(fù)合物；25mMTris-HCL(pH8.0),10m

M EDTA Ph8.0）中劇烈振蕩；（4）加200μl親配制液溶液II（0.2M NaOH1%SDS）,混合內(nèi)容物，不要振蕩，置冰上；（5）加150μl冰預(yù)冷溶液III（5M Kac60ml,冰乙酸11.5ml,水28.5ml），溫和振蕩10s置

0

于闊步3-5min；（6）4C。12000rpm離心5min，轉(zhuǎn)移上清；（7）上清加等量酚；

0

氯仿抽提，4C，12000rpm離心2min，收集上清；（8）64．人白細(xì)胞干擾素制劑的半成品檢定包括比活性測(cè)定、無(wú)菌試驗(yàn)、余毒試驗(yàn)、安全試驗(yàn)及硫氰酸鉀殘余量檢測(cè)。65．干擾素制劑大劑量使用的最佳途徑是批注，皮下注射。66．干擾素制劑的局部用藥多采用噴霧、貼敷、滴鼻。67．干擾素臨床應(yīng)用的適應(yīng)癥包括急性病毒性感染、慢性病毒性感、惡性腫瘤、器官移植患者、乙型腦炎等。68．T細(xì)胞的激活與增殖包括三個(gè)時(shí)期，即細(xì)胞產(chǎn)生白介素-2及其受體表達(dá)，細(xì)胞進(jìn)入不依賴白介-2的增殖期。

69．白介素-2的臨床應(yīng)用包括抗病毒感染、抗細(xì)菌感染、抗腫瘤及艾滋病的治療等。70．關(guān)于集落刺激因子的特性，目前認(rèn)為四種集落刺激因子無(wú)序列同源性，均為糖蛋白分子，四種集落刺激因子各有特征的膜受體。71．紅細(xì)胞生成素的臨床應(yīng)用包括慢性腎功能衰竭、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌性貧血、早產(chǎn)嬰兒自體輸血及用于外科手術(shù)的輔助治療等。72．細(xì)胞因子大都是糖蛋白類物質(zhì)。73．糖基成份對(duì)細(xì)胞因子活性影響不大。

74．IL-lα與IL-1β可識(shí)別相同的受體。

75．LPS可誘導(dǎo)單核細(xì)胞但不能誘導(dǎo)皮膚纖維母細(xì)胞產(chǎn)生IL-8。76．去除糖鏈后IL-10的抗原性不受影響。

77．TNF發(fā)揮作用有相對(duì)的細(xì)胞周期特異性。

78．TNF直接注入是很有效的。79．體內(nèi)IFN通常在嚴(yán)格的誘導(dǎo)控制下產(chǎn)生。

80．IFN可以抑制正常細(xì)胞的生長(zhǎng)。

81．對(duì)晚期癌癥IFNy不優(yōu)于IFNα。82．體外實(shí)CSF可引起腫瘤細(xì)胞增殖。83．高原居民的EPO年成增加。

（2）酶-AMP復(fù)合物再結(jié)合三、重點(diǎn)問題 到具有5，一磷酸基與3，羥1．重組DNA技術(shù)通常包括： 基切口的DNA上，使DNA（1）基因重組載體的選擇腺苷化。（3）產(chǎn)生一個(gè)新的和制備；（2）目的基因的分磷酸二酯鍵，把缺口封起離純化；（3）目的基因與載來(lái)。

體的重組；（4）重組克隆的10．DNA連接反應(yīng)中的注意轉(zhuǎn)化與感染；（5）重組克隆事項(xiàng)： 的篩選與鑒定；（6）目的基（1）連接及反應(yīng)溫度；（2）因的表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的分防止粘末端的自身環(huán)化應(yīng)離與提純；

采取以下措施：①控制載體2．載體的基本條件： 與外源DNA分子的濃度與（1）本身是一個(gè)復(fù)制子，比例；②用堿性磷酸酶處理能自我復(fù)制；（2）分子量要載體防止自身環(huán)化；③定向小；（3）帶選擇標(biāo)記，以便克隆；（3）用λDNA和科斯進(jìn)入宿主細(xì)胞后有可辨認(rèn)質(zhì)粒的載體時(shí)的連接；①λ的表型特征；（4）對(duì)幾種限D(zhuǎn)NA載體應(yīng)考慮兩個(gè)參數(shù)：制性酶有單一切點(diǎn)：（5）有插入分子左右臂的比例，兩一定的非必要區(qū)，在這段插者的濃度；②科斯質(zhì)粒常用入外源基因不影響其復(fù)制。兩種方法連接，一種是用堿3．可作為載體的有： 性磷酸酶處理，另一種是多（1）質(zhì)粒；（2）λ噬菌體；酶反應(yīng)進(jìn)行的克隆。（3）M13噬菌體；（4）科11．受體細(xì)胞一般具有的性斯質(zhì)粒；（5）動(dòng)、植物病毒。能：

4．選擇裂解細(xì)菌的方法?。?）有接受外源DNA的能決于：

力；（2）限制系統(tǒng)缺陷或限（1）質(zhì)粒的大?。唬?）大制與修飾系統(tǒng)均缺陷型；腸桿菌菌株；（3）裂解后用（3）DNA重組缺陷型；（4）于純化質(zhì)粒DNA的技術(shù)； 不適于在非培養(yǎng)條件下生5．選擇裂解細(xì)胞的一般準(zhǔn)存。

則：

12．DNA分子轉(zhuǎn)化機(jī)理：（1）大質(zhì)粒（大于15Kb）（1）吸附：完整的雙鏈DNA易受損，故應(yīng)采用溫和裂解分子吸附在受體菌的表面；法（SDS裂解法）從細(xì)胞中（2）轉(zhuǎn)入：雙鏈DNA分子釋放出來(lái)；

解鏈，單鏈DNA進(jìn)入受體（2）對(duì)于小質(zhì)粒，可加入菌，另一鏈降解；（3）自穩(wěn)：EDTA后采用溶菌酶處理，外源質(zhì)粒DNA分子在細(xì)胞再通過(guò)煮沸或堿處理使之內(nèi)又復(fù)制成雙鏈環(huán)狀DNA裂解。

（4）表達(dá)：供體基因隨同6．λ噬菌體作為克隆載體復(fù)制子同時(shí)復(fù)制，并被轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn)是：

和翻譯。（1）λ噬菌體可在體外包13．基因表達(dá)的三個(gè)基本條裝成病毒顆粒，高效地轉(zhuǎn)染件：

大腸桿菌；（2）λDNA的長(zhǎng)（1）基因的密碼區(qū)不能被度只有在野生λ噬菌體的插入序列所中斷；（2）基因75%-105%之間才能夠包裝；必須在啟動(dòng)子控制之下；（3）λ噬菌體適于克隆大（3）mRNA必須相當(dāng)穩(wěn)定并片段DNA及組建基因文庫(kù)。有效轉(zhuǎn)譯，產(chǎn)生的外源蛋白7．科斯質(zhì)粒的特點(diǎn)是： 不被宿主很快降解。

（1）具有λ噬菌體的特性，14．堿裂解法制備質(zhì)粒DNA能高效地轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，但的方法：

它不含λ噬菌體的全部必（1）接種菌落于含抗生素要基因，不能裂解生成噬菌的LB中，370

C劇烈振蕩反斑；（2）具有質(zhì)粒載體的特應(yīng)；（2）培養(yǎng)液性，帶有質(zhì)粒的抗性基因而40

C12000rpm30min離心；易于篩選。

（3）重懸細(xì)菌于100μl8．M13載體的優(yōu)點(diǎn)： 冰預(yù)冷的溶液I（50mM葡萄（1）單鏈DNA噬菌體的復(fù)

糖，加入2倍體積乙醇，振蕩混合，室溫放置2min；（9）40

C，12000rpm，離心5min，棄上清；（10）倒置離心管，傾干液體；（11）1ml70%乙

醇40

C洗滌沉淀，棄上清，空氣中干燥10min；（12）用500μl含無(wú)DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振蕩，貯于

-200

C。15．配制工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的一般要求：（1）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的組成比較豐富，濃度恰當(dāng)，能滿蹉力種發(fā)芽和生長(zhǎng)繁殖成大量的有生理功能的菌絲體之需要；（2）在一定條件下，所采用的原料彼此之間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，理化性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定；

（3）粘度適中，最有適當(dāng)?shù)臐B透壓；（4）要考慮所采用的原材料的品種和濃度，與代謝產(chǎn)物生物合成過(guò)程中的調(diào)節(jié)關(guān)系；（5）生產(chǎn)過(guò)程中，既不影響通氣與攪拌的效果，又不影響產(chǎn)物的分離，精制，以及廢物的處理。（6）原材料盡量做到因地制宜，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉，成本低。16．培養(yǎng)基的配制原則：1）營(yíng)養(yǎng)成分配制原則：2）營(yíng)養(yǎng)成分配比應(yīng)恰當(dāng)；（3）滲透壓應(yīng)合適；（34）pH值應(yīng)合適；（5）氧化還原電位需符合要求。17．工業(yè)微生物篩選一般要求：（1）穩(wěn)定而高產(chǎn)的遺傳特性；（2）抗噬菌體能力強(qiáng)；（3）發(fā)酵過(guò)程泡沫少；（4）需氧量低；（5）底物轉(zhuǎn)化率高；（6）對(duì)培養(yǎng)基和前體耐受力強(qiáng)；（7）營(yíng)養(yǎng)特性；（8）最適溫度高；（9）菌種既要高的遺傳穩(wěn)定性，又要有基因操作的可修飾性；（10）產(chǎn)物微生物常用的分離篩選途徑： 18．工業(yè)微生物常用的分離篩選途徑：（1）從菌種保存機(jī)構(gòu)的已知菌種中分離；（2）從自然界中分離篩選；（3）從生產(chǎn)過(guò)程中分離篩選。

19．單孢子懸液的制備方法：（1）對(duì)于細(xì)菌，因其在固體斜面培養(yǎng)基上常粘在一起，故要求轉(zhuǎn)接到新鮮肉自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

湯液體中進(jìn)行培養(yǎng)，以取笪分散且生長(zhǎng)活躍的菌體；（2）對(duì)放線菌和霉菌的孢子，采用玻璃珠或石英砂振蕩打散孢子后，用濾紙或棉花過(guò)濾。20．原生質(zhì)體融合技術(shù)的特點(diǎn)：（1）打破物種界限，可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交；（2）可實(shí)現(xiàn)兩上以上同種或不同種微生物細(xì)胞融合；（3）原生質(zhì)體易于受到誘變劑的作用而成為較好的誘變對(duì)象；（4）可使重組頻率大大提高。

21．微生物菌種保存方法：及基因型變異；2）森林及土地?zé)o止盡開發(fā)利用，自然種質(zhì)庫(kù)破壞，需建產(chǎn)人工種質(zhì)庫(kù)；（3）細(xì)胞工程中獲得的中草藥及農(nóng)作物優(yōu)良品種的特殊變異細(xì)胞及雜種細(xì)胞，常規(guī)保存法易于變異，需進(jìn)行種質(zhì)資源廣泛收集與長(zhǎng)期保存；（4）細(xì)胞培養(yǎng)建立的人工種質(zhì)庫(kù)可節(jié)省土地與勞務(wù)。29．植物原生質(zhì)體制備的預(yù)處理方法：（1）預(yù)質(zhì)壁分離；（2）預(yù)培養(yǎng)；（3）暗處理；（4）光處理；（5）低溫處理； 38．動(dòng)物細(xì)胞融合的基本過(guò)

程：取數(shù)量(10-10個(gè)/ml)的兩種親本細(xì)胞充分混合，離心除去上清液，取下層細(xì)胞懸液0.1ml，逐滴加入

0

0.4ml37C的40%PEG溶液，0

37C靜置90s，緩慢加入5-10ml無(wú)血清培養(yǎng)液，輕搖離心管4-5次，離心去上清液，按每0.1ml融合混合液加25ml完全培養(yǎng)基，以每孔0.1ml分裝于96孔培養(yǎng)板及每孔0.5ml分裝于

0

24孔培養(yǎng)板上，于37C CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)之。39．脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞融合量與常規(guī)單層培養(yǎng)相同，通

過(guò)增加培養(yǎng)罐體積即可達(dá)到擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模的目的，減少?gòu)S房及設(shè)備投資，節(jié)約動(dòng)力消耗及人力，又便于對(duì)反應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)控制。46．利用有限稀法篩選雜交瘤細(xì)胞的過(guò)程：于克隆前一日向96孔板中加入0。1ml

2細(xì)胞懸液，于37℃CO培養(yǎng)箱中溫育，然后從陰性孔中吸取細(xì)胞計(jì)數(shù)，用完全培養(yǎng)基稀釋成30個(gè)／ml加入96孔板中，每孔0.1ml，余下細(xì)胞再稀釋成10／ml，再加于兩塊96孔板中，每孔（1）斜面低溫保藏法；（2）液體石蠟封存法；（3）沙土管保存法；（4）冷凍干燥保存法；（5）超低溫保藏法。22．工業(yè)微生物表面培養(yǎng)法的優(yōu)缺點(diǎn)：（1）優(yōu)點(diǎn)：①簡(jiǎn)單易行；②投資少；③適于小型生產(chǎn)（2）缺點(diǎn)：①勞動(dòng)強(qiáng)度大；②占地面積大；③產(chǎn)量低；④易污染。23．工業(yè)發(fā)酵中提高發(fā)酵液的溶氧水平的措施：（1）提高通氣強(qiáng)度；（2）增加攪拌轉(zhuǎn)速；（3）增加罐壓；（4）增加擋板；（5）通氣中摻入純氧；（6）控制基質(zhì)培養(yǎng)基；（7）控制補(bǔ)料率；（8）調(diào)節(jié)溫度；（9）添加表面活性劑；（10）中間補(bǔ)水；11）液化培養(yǎng)基。24．影響微生物原生質(zhì)體制備的因素：1）菌體的預(yù)處理；（2）菌體的培養(yǎng)時(shí)間；3）酶濃度；（4）酶解溫度；（5）酶解時(shí)間；（6）滲透壓穩(wěn)定劑。25．微生物工程產(chǎn)品主要類型：（1）微生物菌體；（2）初級(jí)代謝物；（3）次級(jí)代謝物；（4）生物活性大分子； 26．微生物工程在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用：（1）抗生素類；（2）氨基酸類；（3）核苷酸類；（4）維生素類；（5）甾體類激素；（6）治療酶及酶抑制劑。

27．植物細(xì)胞培養(yǎng)的特性：（1）植物細(xì)胞較微生物細(xì)胞大得多，有纖維素細(xì)胞壁，細(xì)胞耐拉不耐扭，抵抗剪切力差；（2）培養(yǎng)過(guò)程生長(zhǎng)速度緩慢，易受微生物污染，需用抗生素；（3）細(xì)胞生長(zhǎng)的中期及對(duì)數(shù)期，易凝聚成團(tuán)塊，懸浮培養(yǎng)較難；（4）培養(yǎng)時(shí)需供氧，培養(yǎng)液粘度大，不能耐受強(qiáng)力通風(fēng)攪拌；（5）具有群體效應(yīng)，無(wú)錨地依賴性及接觸抑制性；（6）培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物滯留于細(xì)胞內(nèi)，且產(chǎn)量較低；（7）培養(yǎng)過(guò)程具有結(jié)構(gòu)與功能全能性。

28．種質(zhì)保存意義：（1）植物組織及細(xì)胞移植繼代培養(yǎng)過(guò)程可能導(dǎo)師致染色體30．植物細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)過(guò)程：動(dòng)物細(xì)胞破碎后，經(jīng)養(yǎng)成份：H2O、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物、差分分離出線粒體及溶酶維生素、碳源、天然物、植體等細(xì)胞器，或采用生化技物激素、氨基酸類、核酸及術(shù)分離出的DNA，mRNA，逆其水解物以及其它成分。轉(zhuǎn)錄酶及其它生物大分子30．制備原生質(zhì)常用酶：（1）并將其包裝成脂質(zhì)體，然后纖維素酶；（2）果膠酶；（3）按完整細(xì)胞之間的融合方崩潰酶；（4）半纖維素酶；式，將脂體與另一種細(xì)胞融（5）蝸牛酶。合，即或獲得相應(yīng)雜種細(xì)31．測(cè)定植物原生質(zhì)體活力胞。的方法：（1）根據(jù)形態(tài)特征40．雜種動(dòng)物細(xì)胞篩選系統(tǒng)判斷其活力；（2）活體染色及方法：（1）HAT選擇系統(tǒng)；法；（3）熒光染料活體染色（2）抗藥性篩選系統(tǒng)；（3）法?；パa(bǔ)選擇法；（4）原位雜交32．植物細(xì)胞分化培養(yǎng)基與法；（5）基因探針選擇法。原生質(zhì)體培養(yǎng)基的差別：41．動(dòng)物雜種細(xì)胞遺傳表現(xiàn)（1）分化培養(yǎng)基中只有蔗型：（1）互補(bǔ)作用是指兩種糖為碳源，不加滲透壓穩(wěn)定親本細(xì)胞生物學(xué)特征在雜劑；（2）原生質(zhì)體培養(yǎng)基中，種細(xì)胞中共同表達(dá)的現(xiàn)象；生長(zhǎng)素濃度高于細(xì)胞分裂（2）激活作用是指一個(gè)親素濃度，分化培養(yǎng)基正相本細(xì)胞的非活動(dòng)基因在雜反；

種細(xì)胞中得到表達(dá)的現(xiàn)象。33．植物細(xì)胞融合的特點(diǎn)：（3）消失作用指親本細(xì)胞（1）可以實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交，某些遺傳性狀在雜種細(xì)胞獲得種間雜種，克服有性雜中消失的現(xiàn)象；（4）激活與交配系不親和性；（2）可獲消失作用指在雜種細(xì)胞中得另一親本非整倍性雜種原親本非活動(dòng)基因被激活，或胞質(zhì)雜種，且獲得的遺傳而同一親本某些遣傳性狀變異范圍極廣；（3）一次操同時(shí)消失的現(xiàn)象。作可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)以上親本的42．MCAb的基本特性：（1）融合作用；（4）可獲得呈現(xiàn)MCAb為高純度單一抗性，雙親個(gè)體基因型總和的雜檢測(cè)靈敏度極高；（2）可通種；（5）可形成有性生殖障過(guò)雜交瘤大規(guī)模培養(yǎng)進(jìn)行礙植物種間雜種；（6）獲得生產(chǎn)；（3）雜交瘤可用液氮具有不同后生遺傳變化親深凍法長(zhǎng)期保；（4）可在分本的雜種。子水平上解析出存在于病34．篩選植物雜種細(xì)胞的方毒表面的抗原或受體；（5）法；1）遺傳互補(bǔ)篩選法；可用不純抗原制備純（2）抗性互補(bǔ)篩選法；（3）MCAb；（6）但MCAb專一性利用物理特性篩選法；4）太強(qiáng)，難于檢出微生物突變利用生長(zhǎng)特性篩選法。株，有時(shí)不能產(chǎn)生與抗原交35．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括：（1）聯(lián)的功能易受PH、溫度及鹽組織塊培養(yǎng)法；（2）細(xì)胞單濃度影響，又親和力較低，層培養(yǎng)法；（3）單細(xì)胞分離半衰期短，又需長(zhǎng)期持之以培養(yǎng)；（4）二倍體細(xì)胞株培恒的艱苦工作。

養(yǎng)。

43．單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)；36．二倍體細(xì)胞特征：（1）（1）體外培養(yǎng)法；（2）體具有兩倍性染色體（2n），內(nèi)培養(yǎng)法。組型正常；（2）培養(yǎng)條件下44．無(wú)血清培養(yǎng)基分類：（1）呈有限生命力，不能無(wú)限期基本合成培養(yǎng)基；（2）基本分裂繁殖；（3）無(wú)致癌性。合成培養(yǎng)基加生長(zhǎng)因子；37．動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程的促（3）基本合成培養(yǎng)加組織融因素：（1）病毒誘導(dǎo)融合；抽提物。（2）PEG誘導(dǎo)融合；（3）45．微載體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：兼電場(chǎng)誘導(dǎo)融合；（4）聚乙烯有固定培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)雙醇分離心力也能促進(jìn)融合。

重特點(diǎn)，培養(yǎng)過(guò)程細(xì)胞產(chǎn)物

板中，每孔0.1ml。再制備3個(gè)／ml細(xì)胞懸液，加入另外兩塊96孔板中，將上述

各板置37℃CO

2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3周，待出現(xiàn)可見細(xì)胞集落后，檢查培養(yǎng)液中抗體活性，選出陽(yáng)性孔，擴(kuò)大培養(yǎng)，如上法進(jìn)行反復(fù)克隆，直至選出純雜交瘤細(xì)胞為止。47．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中所具有的特性：（1）細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，易受微生物污染，培養(yǎng)時(shí)需用抗生素；(2）動(dòng)物細(xì)胞較微生物大得多，無(wú)細(xì)胞壁，機(jī)械強(qiáng)度低，適應(yīng)環(huán)境能力差；(3）培養(yǎng)過(guò)程需氧量少，且不耐受強(qiáng)力通風(fēng)與攪拌；(4）在機(jī)體中，細(xì)胞相互粘連以集群形式存在，培養(yǎng)過(guò)程具有群體效應(yīng)、錨地依賴性、接觸抑制性及功能全能性；（5）培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)物分布于細(xì)胞內(nèi)外，反應(yīng)過(guò)程成本較高，但產(chǎn)品價(jià)格昂貴；（6）大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)，不可套用微生物反應(yīng)的經(jīng)驗(yàn)；（7）原代培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡。48．深凍植物細(xì)胞復(fù)蘇后測(cè)其生命活力與存活率的三種方法：

（1）再培養(yǎng)法：將復(fù)蘇后細(xì)胞立即接種于新鮮培養(yǎng) 基上再培養(yǎng)，同時(shí)測(cè)定細(xì)胞增殖量，愈傷組織形成情況及人化為新植株能力；（2）二醋酸光素染色法：用1滴0.1%熒光素染料溶液與一滴化凍后細(xì)胞懸浮液混合，活細(xì)胞染色，死細(xì)胞不著色，用普通顯微鏡觀察計(jì)數(shù)得細(xì)胞總數(shù)，用紫外光顯微鏡觀計(jì)數(shù)得活細(xì)胞數(shù)，據(jù)此可計(jì)算出凍存細(xì)胞存活率；

（3）TTC法：根據(jù)活細(xì)胞內(nèi)脫氫酶可將氯化三苯四氮唑還原為for mazam,后者溶于乙醇而不溶于水，故前者與凍細(xì)胞保溫反應(yīng)用乙醇抽提，再用分光光度法測(cè)定吸收度，用以判斷細(xì)胞存活率及生活力。49．動(dòng)物細(xì)胞固定化培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：（1）細(xì)胞可維持在較自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

小體積培養(yǎng)液中生長(zhǎng)；（2）細(xì)胞損傷程度低；（3）易于更換培養(yǎng)液；4）細(xì)胞和培養(yǎng)液易于分離；5）培養(yǎng)液中產(chǎn)物濃度高，簡(jiǎn)化了產(chǎn)品分離純化操作。

50．中空纖維培養(yǎng)器優(yōu)點(diǎn)：（1）細(xì)胞生長(zhǎng)密度高；（2）營(yíng)養(yǎng)牧質(zhì)可有效分布，代謝產(chǎn)物可及時(shí)排除；（3）細(xì)胞培養(yǎng)可達(dá)數(shù)日，易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)；（4）細(xì)胞分泌蛋白質(zhì)濃度高；（5）反應(yīng)器體積小并可用于培養(yǎng)多種細(xì)胞。液，混合均勻，再冷卻凝固成型和破碎即成固定化酶；(2)微囊化包埋法是將醇定位于具有豐透性膜的微小囊內(nèi)的技術(shù)，其基本制備方法有界面沉降法及界面聚合法兩類。

58.固定化酶反應(yīng)器：(1)攪拌罐型反應(yīng)器；(2)固定床型反應(yīng)器；(3)流化床型反應(yīng)器；(4)膜型反應(yīng)器；(5)鼓泡塔型反應(yīng)器； 59．固定化酶的形狀：（1）顆粒狀固定化酶；（2）纖維應(yīng)液，置于沸水中，加熱使

酶失知；（2）立即加入適宜的酶變性劑，使酶變性失活；3）加入酸或堿溶液，使反應(yīng)液的pH值迅速遠(yuǎn)離酶催化應(yīng)的最適pH值；（4）將取出的反應(yīng)液立即置于冰，或冰鹽溶液中，使反應(yīng)

0

液的溫度迅速低至10C以下。

63．酶與一般催化劑相比，所具有的優(yōu)點(diǎn)：（1）催化效率高；（2）專一性強(qiáng)；（3）反應(yīng)條件溫和；（4）酶的活體酶的合成，釋放增強(qiáng)，促

進(jìn)過(guò)氧化物酶合增強(qiáng)；（3）可促使白血病細(xì)胞分化及抑制白血病細(xì)胞生長(zhǎng)。74．集落刺激因子的臨床應(yīng)用：（1）治療血細(xì)胞減少癥；（2）治療再生障礙性貧血、骨髓發(fā)育不良和自體骨髓移植后的恢復(fù)；（3）治療癌癥；（4）治療AIDS。75．細(xì)胞因子受體的信息傳遞途徑：（1）通過(guò)受體本身的酷氨酸激傳遞遞信息；（2）通過(guò)

息。76．用于制備細(xì)胞因子的培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)十分嚴(yán)格，對(duì)這些細(xì)胞的要求包括：（1）細(xì)胞來(lái)源要清楚；（2）細(xì)胞建株的鑒定資料要記錄清楚；（3）了解細(xì)胞系的生長(zhǎng)特性和在培養(yǎng)條件下的細(xì)胞的穩(wěn)定性；（4）培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)所用的血清不含細(xì)菌、病菌、真菌和支原體。77．干擾素的基本特性：（1）種屬特異性；（2）作用廣譜性和選擇性；（3）相對(duì)無(wú)害性；（4）特殊穩(wěn)定性。78．真核基因在原核細(xì)胞中獲得表達(dá)必須具備的三個(gè)條件：（1）要有原核細(xì)胞的啟動(dòng)子；（2）要有能與原核細(xì)胞16SrRNA3’端相配合的順序；（3）表達(dá)的干擾素多肽要不被細(xì)胞酶類所迅速降解。

79．IL-2的生物學(xué)作用：（1）促T細(xì)胞增殖；（2）對(duì)自然殺傷細(xì)胞（NK）的作用；（3）誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和增殖；（4）誘導(dǎo)淋巴因子活化淋巴細(xì)胞產(chǎn)生；（5）促B細(xì)胞增殖分化作用；（6）IL-2與其他白介素協(xié)同作用。

80．集落刺激因子的功能：（1）刺激造血細(xì)胞增殖；（2）維持細(xì)胞存活；（3）分化定型；（4）刺激終末細(xì)胞的功能活性。81．三種檢測(cè)重組基因工程CSF的方法（1）生物學(xué)檢測(cè)法；（2）分子生物學(xué)檢測(cè)法；（3）免疫學(xué)檢測(cè)法。82．TNF抗腫瘤作用的可能機(jī)制：（1）細(xì)胞的直接細(xì)胞毒及細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用；（2）腫瘤內(nèi)血管陰塞引起腫瘤缺血性壞死；（3）TNF的免疫調(diào)節(jié)作用可能在其抗瘤效應(yīng)中起一定的作用。QQ：806235356 83．細(xì)胞因子共有特性：（1）多源性；（2）多效性；（3）高效性；（4）快速反應(yīng)性；（5）理化性質(zhì)：①化學(xué)本質(zhì)為大分子多肽或蛋白；②多為單鏈分子；③多具有“分泌型激素”的特性；④基因多由數(shù)個(gè)外顯子和內(nèi)含子組成；⑤基因均為單拷自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

貝；⑥分子量均小于80KD。84．細(xì)胞因子的受體，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和功能分類：抗細(xì)菌、抗真菌作用；（8）熱原質(zhì)作用；（9）參與骨質(zhì)重吸收。

種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因與調(diào)節(jié)基因廣泛地存在于脊椎動(dòng)物以上的細(xì)胞內(nèi)，在一般2激活的細(xì)胞表面抗原標(biāo)

志，也說(shuō)明LAK殺傷腫瘤細(xì)胞效應(yīng)是白介素—2激恬（1）細(xì)胞因子受體的新家族；（2）腫瘤壞死因子受體家族；（3）免疫球蛋白超級(jí)家族受體； 85．基因工程細(xì)胞因子制備的基本步驟：1）制備含特異性細(xì)胞因子基因的cDNA文庫(kù)；（2）從cDNA文庫(kù)中篩選目cDNA克??；（3）構(gòu)建表達(dá)性載體，制備高級(jí)表達(dá)性工程菌（細(xì)胞）。86．干擾素的生物功能本質(zhì)：（1）抗細(xì)胞內(nèi)侵害；①抑制病毒繁殖；②抑制胞內(nèi)的其它微生物繁殖；（2）抗細(xì)胞分裂活性；（3）調(diào)節(jié)免疫功能活性；①調(diào)節(jié)免疫監(jiān)視功能；②調(diào)節(jié)免疫自穩(wěn)功能； 87．基因工程干擾素的制備方法：（1）干擾素工程菌的組建；①分離提取干擾素基因；②制備人工重組質(zhì)粒；③轉(zhuǎn)化宿主菌；（2）基因工程干擾素的制備；（3）基因工程干擾素的質(zhì)量控制； 88．集落刺激因子的檢測(cè)方法：（1）生物活性檢測(cè)法；①骨髓細(xì)胞集落形成法；②依賴細(xì)胞株；（2）分子生物學(xué)檢測(cè)法；斑點(diǎn)雜交法；（3）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)；雙抗體夾心ELISA法。89．CSFs制檢的一般步驟：（1）制備工程菌（或細(xì)胞）；2）工程菌（或細(xì)菌）的培養(yǎng)；（3）分離純化；①工程菌的破碎，沉淀；②離心；③層析：離子交換層析、親和層析；④超濾濃縮，分子篩層析；（4）除菌過(guò)濾，分裝，凍干；（5）半成品檢定，主要包括下列檢定項(xiàng)目：①蛋白含量測(cè)定②活性測(cè)定③比活性測(cè)定；④分子量測(cè)定；⑤純度測(cè)定；⑥核酸含量測(cè)定；⑦鼠lgG含量測(cè)定；⑧等電測(cè)定；⑨無(wú)菌試驗(yàn)；⑩熱原質(zhì)等檢定項(xiàng)目；（6）成品檢定：①外觀檢查；②活性測(cè)定；③水分測(cè)定；④無(wú)菌試驗(yàn)；⑤安全毒性試驗(yàn)；⑥熱原質(zhì)試驗(yàn)；⑦肽圖測(cè)定等檢測(cè)等檢測(cè)項(xiàng)目；（7）分包裝；（8）貯存。90．紅細(xì)胞生成素的測(cè)定方法：（1）生物體內(nèi)測(cè)定法；（2）生物體外測(cè)定法；（3）放射免疫測(cè)定法。91．腫瘤壞死因子生物學(xué)活性：（1）抗腫瘤活性；①TNF直接抗腫瘤細(xì)胞的作用；②TNF在體內(nèi)的抗腫瘤作用；（2）抗炎癥活性；（3）促凝血活性；（4）對(duì)脂肪細(xì)胞合成脂蛋白脂酶（LPL）和LPL活性的抑制作用；（5）促進(jìn)細(xì)胞因子分泌；（6）免疫調(diào)節(jié)作用（7）抗病毒、92．IL-13的作用：（1）強(qiáng)生理狀態(tài)下，細(xì)胞的干擾素烈報(bào)制外周血單核細(xì)胞分基因呈靜止?fàn)顟B(tài)，只有在特泌IL-

6、IL-1β、TNF-α、定誘生劑的作用下，細(xì)胞的IL-8和gro-β；（2）能抑干擾素基因才活動(dòng)，轉(zhuǎn)錄合制細(xì)胞培養(yǎng)分化的巨噬細(xì)成相應(yīng)的mRNA，進(jìn)而轉(zhuǎn)譯胞產(chǎn)生HIV，并能抑制體外出具有種屬特異性的干擾HIV復(fù)制；（3）較小程度直素蛋白； ③干擾素本身并接作用于大顆粒淋巴細(xì)胞不能直接滅活病毒，干擾素（LGL）合成IEN-y，并與作用于細(xì)胞后，使后者又產(chǎn)適量和亞適量的IL-2的協(xié)生多種其它蛋白質(zhì)(抗病毒同作用；（4）它能影響B(tài)蛋白)，從而阻斷病毒的繁淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)其增殖并能殖； ④干擾素必須具有廣表達(dá)CD23表面抗原；（5）譜的抗病毒活性，如果某一有抗炎作用（敗血性休克和種抗病毒物質(zhì)僅對(duì)特定的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）并刺激體液病毒有作用，就不能稱為干免疫應(yīng)答；（6）增強(qiáng)由IL-2擾素。

誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子激活96．人淋巴細(xì)胞幾—2的制的殺傷細(xì)胞活性。備產(chǎn)物檢定方法：

93．基因工程重組細(xì)胞因子(1)活性檢定：采用CTLL的制備質(zhì)控：(1)詳細(xì)記錄細(xì)胞株的3H摻人法進(jìn)行活表達(dá)載體和宿主細(xì)胞，包括性測(cè)定，比活性必須在克隆基因的來(lái)源和鑒定，以106IU／mg以上；

及表達(dá)載體的構(gòu)建、遺傳學(xué)(2)純度檢定：①SDS—和結(jié)構(gòu)等，此外還要介紹載PAGE檢測(cè)，用銀染色，在體引入宿主細(xì)胞的方法，和15KD處呈單一條帶，后掃載體在宿主細(xì)胞中的狀況； 描測(cè)得幾—2條帶占95％(2)應(yīng)有詳細(xì)的插入基因和以上；

表達(dá)載體側(cè)翼調(diào)控區(qū)核苷 ②HPLC檢測(cè)，反相柱(C4、酸序列的資料；(3)在生產(chǎn)C8、C18等)或正相分子篩柱中啟動(dòng)和控制有關(guān)基因的測(cè)得IL—2主峰占95％以表達(dá)方法要有詳細(xì)記錄；(4)上；

產(chǎn)品純化方法要有明確詳(3)氨芐青霉素測(cè)定：因?yàn)楸M記載，如采用單抗法和層大腸桿菌發(fā)酵的基因工程析法，要采取適當(dāng)措施，保產(chǎn)品均采用氨芐青霉素抗證這些單抗或其它潛在污性菌株生產(chǎn)，所以必須檢定染物不損害終產(chǎn)品的質(zhì)量氨芐青霉素殘余量； 和安全性。(4)殘余DNA檢測(cè)：采用同94．細(xì)胞因子的分子生物學(xué)位素探針法，每劑殘余DNA測(cè)定法：

量不得超過(guò)100pg；

目前采用的分子生物學(xué)技 還有生物制品要求的常規(guī)術(shù)有RNA印跡法、核酸酶保實(shí)驗(yàn)檢定，如熱原質(zhì)測(cè)定、護(hù)分析、原位雜交和多聚酶制劑水分測(cè)定、安全試驗(yàn)、鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。均為通過(guò)檢測(cè)相急性毒性實(shí)驗(yàn)、無(wú)菌試驗(yàn)等應(yīng)的mRNA量、推算出幾量均必須合格。的方法。多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)97．LAK細(xì)胞的殺腫瘤細(xì)胞(PCR)是目前檢測(cè)幾最敏感作用：LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)的方法，尤其適用于極微量胞分如下三個(gè)階段： 的標(biāo)本，或僅有極少數(shù)細(xì)胞(1)識(shí)別階段：LAK細(xì)胞對(duì)才能表達(dá)幾基因，或幾基因正常細(xì)胞無(wú)損傷作用，而對(duì)以低水平表達(dá)的標(biāo)本，目前腫瘤細(xì)胞結(jié)合進(jìn)而殺傷，而已可作半定量分析，且對(duì)多種腫瘤細(xì)胞結(jié)合而95．干擾素的定義及含義： 殺傷，說(shuō)明多種腫瘤的細(xì)胞(1)干擾素的定義：干擾素表面存在著共同抗原決定是一類在同種細(xì)胞上具有簇，可被LAK細(xì)胞所識(shí)別；廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，正常細(xì)胞表面可能不存在其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基腫瘤抗原決定簇，就不能被因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及LAK細(xì)胞所殺傷；關(guān)于LAKRNA和蛋白質(zhì)的合成； 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞結(jié)合分子(2)目前認(rèn)為，干擾素是一特性研究發(fā)現(xiàn)了“淋巴因子種類似多肽激素的細(xì)胞功活化細(xì)胞相關(guān)抗原”(LAA)，能的調(diào)節(jié)物質(zhì)，是一種細(xì)胞而用LAA制備了單克隆抗素，這一定義的含義如下：體(KBA MoAb)可以抑制LAK①干擾素必須是一種蛋白細(xì)胞殺傷活性，提示了LAK質(zhì)，它對(duì)蛋白酶類是敏感細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)的，而對(duì)DNA酶或RNA酶卻基礎(chǔ)，從分子水平認(rèn)識(shí)LAA有抵抗；天然干擾素是一種抗原為兩條鏈的糖蛋白組糖蛋白，采用DNA重組技術(shù)成的二聚體，LAA只存在受由大腸桿菌表達(dá)的人干擾白介素—2激活后的細(xì)胞素多肽不帶糖分子； ②這

表面，說(shuō)明LAA是白介素—

的結(jié)果；

(2)殺傷階段：LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞主要是通過(guò)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷；LAK細(xì)胞內(nèi)含有溶細(xì)胞顆粒(C．C)，該顆粒中含有一種穿孔蛋白質(zhì)，所謂穿孔因子(Peffoin)；LAK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞結(jié)合時(shí)，LAK細(xì)胞發(fā)生極化，首先高爾基體向與腫瘤細(xì)胞接觸點(diǎn)方向移動(dòng)，通過(guò)微管將顆粒分泌到兩

種細(xì)胞接觸面上，在Ca2+

激活下，LAK細(xì)胞也釋放一種腫瘤壞死因子樣毒素，對(duì)腫瘤細(xì)胞作用慢，不需Ca2+，又稱之為不依賴鈣離子的殺傷作用，常常使腫瘤細(xì)胞DNA變性和細(xì)胞核裂解，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)；

(3)裂解階段：瘤細(xì)胞受到攻擊后，經(jīng)上述兩階段后，完成裂解，抑制腫瘤生長(zhǎng)。98．集落刺激因子的功能：

各種CSF的活性是以半固體培養(yǎng)基中CSF刺激造血細(xì)胞形成集落的能力來(lái)衡量的。其功能可分為四個(gè)方面：(1)刺激造血細(xì)胞增殖。集落形成細(xì)胞的分裂需要CSF持續(xù)存在，如從培養(yǎng)基中撤掉CSF，則細(xì)胞分裂停止，CSF的濃度決定細(xì)胞周期長(zhǎng)短和產(chǎn)生子代細(xì)胞的總數(shù)目；(2)CSF既維系祖細(xì)胞的存活，也延長(zhǎng)成熟細(xì)胞的壽命；(3)分化定型；(4)刺激終末細(xì)胞的功能活性。目前已知CSF能影響細(xì)胞作用、膜抗原的表達(dá)、吞噬作用、過(guò)氧化物的產(chǎn)生、殺傷微生物及腫瘤細(xì)胞，并產(chǎn)生許多重要的生物活性物質(zhì)，如前列腺素E、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素—

1、丫干擾素、血纖溶酶原活化因子等。

99．C—CSF和GM—CSF的異同點(diǎn)：

由于G—CSF和GM—CSF在許多相關(guān)的臨床病例中可能有用，所以它們之間生物學(xué)特性差異，對(duì)某些疾病發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)有一定的意義；

(1)C—CSF特異性刺激中性白細(xì)胞，而GM—CSF則是所有粒細(xì)胞的總刺激因子，例如若要通過(guò)提高嗜酸性效應(yīng)細(xì)胞水平來(lái)治療寄生蟲感染，則GM—CSF作用比G—CSF為好；

(2)GM—CSF是單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的強(qiáng)激活劑，則G—CSF則不是，這種激活包括誘導(dǎo)產(chǎn)生諸如腫瘤壞死因子和IL—1類的其他自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

細(xì)胞因子，如需提高單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活性，可選用CM—CSF，而不是C—CSF； 的主要部位，也是參與炎癥的主要組織，內(nèi)皮細(xì)胞本身也是產(chǎn)生細(xì)胞因子的重要

（另附：工藝流程圖）

(3)CM—CSF是中性白細(xì)胞移動(dòng)的強(qiáng)抑制劑，然而G—CSF則增強(qiáng)中性白細(xì)胞的移 動(dòng)，例如當(dāng)局部損傷時(shí)，GM—CSF可在局部產(chǎn)生，起弱的化學(xué)引誘劑作用，抑制炎癥細(xì)胞離開炎癥部位，而G—CSF則可增強(qiáng)炎癥狀細(xì)胞向炎癥部位移動(dòng)，這可能是兩種造血生長(zhǎng)因子共同提高宿主防御力的一種途徑，在細(xì)菌性膿毒癥時(shí)，接觸內(nèi)毒素可刺激單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生G—CSF，然后G—CSF刺激T細(xì)胞產(chǎn)生GM—CSF和IL—3，以增加骨髓內(nèi)的骨髓細(xì)胞生成和進(jìn)一步增強(qiáng)白細(xì)胞應(yīng)答。100．CSFs三種檢測(cè)方法的特點(diǎn)：

(1)生物活性檢測(cè)法，特點(diǎn)是靈敏、方便，但因造血前體細(xì)胞、依賴株細(xì)胞一般都受幾種因子的影響，因此，該法不能明確因子的特性； 質(zhì)產(chǎn)物合成；

(3)免疫學(xué)檢測(cè)法，特點(diǎn)是特異、靈敏，更高，缺點(diǎn)是不能證明有功能性蛋白缺點(diǎn)是不能證明被檢CSF是否為具有(2)分子生物學(xué)檢測(cè)法，特點(diǎn)是敏感性完整生物活性結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)而非變性蛋白質(zhì)，因此檢測(cè)時(shí)最好將

自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

名詞概念

1、生物工程：應(yīng)用生物科學(xué)的理論、方法、按照人們?cè)O(shè)計(jì)的藍(lán)圖，改良加工生物或用生物及其制備物作為加工原料，以提供所需生物制品為人類社會(huì)服務(wù)的綜合性科學(xué)技術(shù)。2、51、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)：在人工控制下高密度大朗養(yǎng)有益植物細(xì)胞即植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)。

52、半連續(xù)培養(yǎng)法：在反應(yīng)器中投料和接種，培養(yǎng)尸段時(shí)間后，將培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的培養(yǎng)方法，稱為半連續(xù)培養(yǎng)法。

53、動(dòng)物細(xì)胞工程：根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)及工程學(xué)原理定向改造動(dòng)物細(xì)胞遺傳性、創(chuàng)造新物種，通過(guò)工程化為人類提供名貴藥品服務(wù)的技術(shù)，稱為動(dòng)物細(xì)胞工程。

54、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：在一定條件下，通過(guò)人工供給營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生長(zhǎng)因子，使離體動(dòng)物細(xì)胞或組織生長(zhǎng)繁殖的方法，稱為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

55、細(xì)胞塊培養(yǎng)法：將動(dòng)物組織切成直徑1-2mm小塊，進(jìn)行培養(yǎng)的方法，稱為組織塊培養(yǎng)法。

56、細(xì)胞單層培養(yǎng)法：動(dòng)物組織塊經(jīng)消化分散成單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊后，粘附于培養(yǎng)容器表面培養(yǎng)成新生細(xì)胞單層的培養(yǎng)法，稱為細(xì)胞單層培養(yǎng)法。

57、單細(xì)胞分離培養(yǎng)：動(dòng)物組織分散后，將其單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成純系細(xì)胞集群的技術(shù)，稱之為單細(xì)胞分離培養(yǎng)。

58、確立細(xì)胞株：正常細(xì)胞在移植繼代過(guò)程中，有些細(xì)胞增殖力突然增強(qiáng)，在特定條件下可無(wú)限繁殖，與初代細(xì)胞相比，其形態(tài)、生理生化特性，病毒敏感性，抗原性及染色體結(jié)構(gòu)均發(fā)生變化，具有致癌性，這些細(xì)胞稱為確立細(xì)胞株。

59、動(dòng)物體細(xì)胞雜交技術(shù)：在外力作用下，令兩個(gè)或兩個(gè)以上異源細(xì)胞合并為一個(gè)多核細(xì)胞的過(guò)程，稱為動(dòng)物體細(xì)胞雜交技術(shù)。60、核體：細(xì)胞核連同其外表薄層細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成的顆粒稱為核體。61、胞質(zhì)體：不具有細(xì)胞核的細(xì)胞稱為胞質(zhì)體。62、微核雜種細(xì)胞：按完整細(xì)胞之間的融合方式，將微核與另一完整細(xì)胞融合，使后者獲得另一種細(xì)胞中的若于個(gè)染色體，所獲融合子稱為微核雜種細(xì)胞。63、抗藥性篩選系統(tǒng)：利用生物細(xì)胞對(duì)藥物敏感性差異篩選雜種細(xì)胞的方法。64、營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞：在一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的合成能力上出現(xiàn)缺陷，因此必須在基本培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的有機(jī)成分才能正常生長(zhǎng)的變異細(xì)胞。65、營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)選擇法：利用兩種親本細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)作用原理篩選雜種細(xì)胞的方法稱為營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)選擇法。66、雜交瘤技術(shù)：骨髓瘤細(xì)胞與免疫淋巴細(xì)胞融合制備雜種細(xì)胞的方法為雜交瘤技術(shù)。67、雜合瘤：骨髓瘤細(xì)胞與免疫淋巴細(xì)胞融合制備的雜種細(xì)胞稱為雜合瘤。68：微載體培養(yǎng)法；將細(xì)胞吸附于微載體表面的培養(yǎng)方法。69、酶工程：應(yīng)用酶的特異性催化功能并通過(guò)工程化為人類生產(chǎn)有用產(chǎn)品及提供有益服務(wù)的技術(shù)為酶工程。70、酶：生物體內(nèi)具有特殊催化功能的蛋白質(zhì)稱為酶。71、固定化酶：限制或定位于特定空間位置的酶稱為固定化酶。

72、固定化細(xì)胞：蘋限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。73、載體結(jié)合法：將細(xì)胞懸浮液直接與水不溶性載體相結(jié)合的固定化方法。74、包埋法：將細(xì)胞定位于凝膠網(wǎng)格內(nèi)的技術(shù)稱為包埋法。75、偶聯(lián)效率：偶聯(lián)固定化反應(yīng)過(guò)程中載體結(jié)合蛋白質(zhì)的能力稱為偶聯(lián)效率。76、酶活力：酶類催化特定化學(xué)反應(yīng)的能力稱為酶活力。77、酶比活：指每毫克酶蛋白所表現(xiàn)的活力。78、固定化反應(yīng)的酶活力回收率：固定酶所顯示的活力與加入偶聯(lián)液中酶總活力的比值稱為固定化反應(yīng)的酶活力回收率。

79、酶試劑盒：將酶、反應(yīng)試劑、穩(wěn)定劑、激活劑、填充劑、及緩沖劑等配成檢測(cè)用的混合制劑稱酶試劑盒。80、細(xì)胞因子：是人類或動(dòng)物的各類細(xì)胞分泌的具有多樣生物活性因子，是可溶性物質(zhì)，是一組不均一的蛋白質(zhì)能調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化。81、白介素細(xì)胞：郵包細(xì)胞或其它體細(xì)胞產(chǎn)生的又在細(xì)胞間起調(diào)節(jié)作用和介導(dǎo)作用的因子。82、IL-3：即白細(xì)胞介素3，有激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，能刺激多能造血干細(xì)胞和各系細(xì)胞的分化和增值，促進(jìn)和維持肥大細(xì)胞的增值，增值中性粒細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞的活性，促進(jìn)NK細(xì)胞殺傷實(shí)體瘤的活性。

83、IL-10：由TH2細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制TH1細(xì)胞合成細(xì)胞因子的能力，是一種糖蛋白。84、IL-12：是由B淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，分子量為75KD的糖蛋白，其主要作用是促進(jìn)PHA活化的PBMC增殖自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

以及亞適劑量IL-2協(xié)同促進(jìn)作用。85、腫瘤壞死因子：是一種由巨噬細(xì)胞分泌能產(chǎn)生細(xì)胞毒，使腫瘤細(xì)胞溶解的因子。86、干擾素：是一類在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)與控制，涉及RNA和蛋白質(zhì)的合成。

87、集落刺激因子：CSF為一組糖蛋白物質(zhì)，由淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞自然產(chǎn)生，有刺激紅細(xì)胞系以外造血細(xì)胞增殖和分化作用。88、超誘導(dǎo)：是指細(xì)胞在某種大分子合成抑制物的適當(dāng)作用下，誘生蛋白合成增加的現(xiàn)象。89、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑：是生物體體內(nèi)的某些細(xì)胞和某些分子，它們既是機(jī)體對(duì)內(nèi)外環(huán)境刺激應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)制，也是機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定因素。

第三篇：現(xiàn)代生物制藥技術(shù)的研究進(jìn)展

燕京理工學(xué)院

Yanching Institute of Technology（2016）屆化工與制藥專業(yè)現(xiàn)代制藥技術(shù)論文 題目：現(xiàn)代生物制藥技術(shù)的研究進(jìn)展

學(xué)院： XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX 專業(yè)：

XXXXX

學(xué)號(hào)： XXXXXXX

姓名：

Dream

指導(dǎo)教師：林貝

教研室主任（負(fù)責(zé)人）：林貝 2015 年 6 月 4 日

現(xiàn)代生物制藥技術(shù)的研究進(jìn)展 Dream 化工與材料工程學(xué)院化藥1204班學(xué)號(hào)XXXXXXX 指導(dǎo)教室林貝 摘要

本文簡(jiǎn)述了近年來(lái)基因工程在生物制藥技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。其中主要從基因操作中大分子的分離、PCR技術(shù)、基因芯片、外源基因的表達(dá)這4個(gè)方面敘述基因工程相關(guān)技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展,以及基因工程藥物的產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)。關(guān)鍵詞：生物技術(shù)基因工程基因操作技術(shù)生物制藥 1 基本概念 1.1 生物技術(shù)

廣義的生物技術(shù)是指人類對(duì)生物資源(包括動(dòng)物、植物、微生物)的利用、改造的相關(guān)技術(shù)。其發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)不同的階段——以釀造為代表的傳統(tǒng)生物技術(shù)，以微生物發(fā)酵為代表的近代生物技術(shù)，以基因工程、細(xì)胞工程、酶工程和蛋白質(zhì)工程為代表的現(xiàn)代生物技術(shù)。

現(xiàn)代生物技術(shù)可以理解為是直接操縱有機(jī)體細(xì)胞和基因的一種全新技術(shù)是二十世紀(jì)70年代開始異軍突起的高技術(shù)領(lǐng)域，在醫(yī)療、制藥、農(nóng)業(yè)、輕工食品及環(huán)保業(yè)發(fā)展迅速。[1]以上的生物技術(shù)成果集中應(yīng)用于醫(yī)藥工業(yè)。1.2 現(xiàn)代生物技術(shù)兩大核心工程 1.2.1 工程 概念：基因工程是分子遺傳學(xué)和工程技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物。是現(xiàn)代生物技術(shù)的核心它能按人類需要把遺傳物質(zhì)DNA分子從生物體中分離出來(lái)，進(jìn)行剪切、組合、拼裝合成新的DNA分子。再將新的DNA分子植入某種生物細(xì)胞中，使遺傳信息在新的宿主細(xì)胞或個(gè)體中得到表達(dá)，以達(dá)到定向改造或重建新物種的目的。1.2.2 細(xì)胞工程 概念：利用細(xì)胞融合技術(shù)把含有不同遺傳物質(zhì)的細(xì)胞合成雜種細(xì)胞。并使之分裂生長(zhǎng)成為雜種生物。它包括體細(xì)胞融合、核移植、細(xì)胞器攝取和染色體片段的重組等。 1.3 現(xiàn)代生物制藥

主要指基因重組的蛋白質(zhì)分子類藥物的制造過(guò)程，即利用基因工程、抗體工程或細(xì)胞工程技術(shù)生產(chǎn)的源自生物體內(nèi)的天然物質(zhì)，用于體內(nèi)診斷、治療或預(yù)防藥物的生產(chǎn)過(guò)程(也可稱基因工程制藥)。2 基因操作技術(shù)

基因大分子的分離主要指質(zhì)粒(plasmid DNA)和基因組DNA的分離。質(zhì)粒分離的常用方法有堿變性抽提法、煮沸法、去污劑裂解法、質(zhì)粒DNA釋放法、酸酚法等。質(zhì)粒在基因工程中最常用來(lái)做成各種克隆載體(cloning vector)或表達(dá)載體(expression vector)。質(zhì)粒載體還可用于RNA干擾(RNA inter-ference)的研究[1](由于這一技術(shù)的研究和應(yīng)用,美國(guó)科學(xué)家Andrew Z.Fire博士和Craig C.Mello博士獲得了2006的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng))?；蚪MDNA的分離通常采用酚-氯仿法、基因文庫(kù)(gene library)、Southern雜交以及PCR擴(kuò)增技術(shù)等。其中基因文庫(kù)是指含有某種生物基因組不同基因片段的一群DNA重組體克隆,包括cDNA文庫(kù)(com-plementaryDNA library, cDNA library)和基因組DNA文庫(kù)(genomic library)。最近又有研究者利用名為chum-RNA的小分子RNA建立非PCR擴(kuò)增的單細(xì)胞cDNA文庫(kù)[2]。2.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是一種在體外模擬天然DNA復(fù)制過(guò)程的核酸擴(kuò)增技術(shù)。該法由Mullis等人于1985年發(fā)明,并于1993年獲得了諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。PCR技術(shù)可分為定性PCR和定量PCR。2.2 定性PCR技術(shù)

定性PCR技術(shù)包括:反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR),是從非常少量的mRNA樣品構(gòu)建大容量cDNA文庫(kù)的方法,還發(fā)展出實(shí)時(shí)RT-PCR用于定量實(shí)驗(yàn)[3];多重PCR(multiplex PCR),是指在同一PCR反應(yīng)體系中加入多對(duì)不同的引物,以擴(kuò)增同一模板的不同區(qū)域;反向PCR(inverse PCR),該法可以對(duì)一個(gè)已知DNA片段兩側(cè)的未知序列進(jìn)行擴(kuò)增和研究;錨定PCR(an-chored PCR),現(xiàn)稱為cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(rap-id amplification of cDNA ends,RACE)[4]。2.3 熒光標(biāo)記分子

定量PCR技術(shù)以實(shí)時(shí)PCR(real time PCR)為代表,其基本原理是在PCR反應(yīng)體系中引入熒光標(biāo)記分子,對(duì)每一反應(yīng)時(shí)刻的熒光信號(hào)積累進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),計(jì)算出PCR產(chǎn)物量,或通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法得出初始模板量。2.4 基因芯片

基因芯片(gene chip ormicroarray),是生物芯片的一種,其基本技術(shù)包括:核酸方陣的構(gòu)建、樣品的制備、雜交和雜交圖譜的檢測(cè)及讀出。根據(jù)用途不同可分為表達(dá)譜芯片(expression profile chip)、測(cè)序芯片和診斷芯片。其中表達(dá)譜芯片的應(yīng)用最為廣泛,可用于基因功能分析、疾病發(fā)生機(jī)制的探討及藥物研究和篩選[5]。(1)確定藥靶基因:通過(guò)比較正常細(xì)胞與異常細(xì)胞表達(dá)譜之間的差異,從而確定藥靶基因。(2)監(jiān)測(cè)藥物治療前后的基因表達(dá)變化:該監(jiān)測(cè)可有3方面的作用。一是用于研究藥物作用機(jī)制,通過(guò)監(jiān)測(cè)基因表達(dá)的變化,可研究藥物作用途徑和對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響,從而了解該藥物的作用機(jī)制;二是用于研究藥物毒理,從表達(dá)譜的改變和異常表達(dá),便可分析藥物毒理;三是用于藥物篩選,利用用藥前后表達(dá)譜的改變,通過(guò)分析病理、生理、生化原理,能高效地篩選出新的藥物或先導(dǎo)化合物。N A 芯片技術(shù)在藥物基因組學(xué)的應(yīng)用, 一方面可加速藥物基因組學(xué)的發(fā)展;另一方面: D N A 芯片利用藥物基因組學(xué)的研究成果, 根據(jù)基因型將人群劃分為各種類型。D N A芯片可自動(dòng)快速地檢測(cè)哪些可影響藥物效應(yīng)的基因(為藥物代謝酶、藥物作用靶標(biāo)等)例如設(shè)計(jì)一種淋巴白血病藥物基因組芯片, 包括所有可能影響病人化療反應(yīng)的基因, 借助于這種芯片, 根據(jù)病人的基因型分類, 醫(yī)生為每一個(gè)病人選擇合適的治療藥物和劑量。2.5 外源基因

導(dǎo)入宿主細(xì)胞的外源基因,通過(guò)基因表達(dá)得到相應(yīng)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物。根據(jù)宿主細(xì)胞的不同可分為原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。在外源基因表達(dá)時(shí),通常把一個(gè)報(bào)告蛋白的基因與一個(gè)目的蛋白的基因融合在一起,形成融合蛋白,用于目的蛋白的檢測(cè)與純化。常用的報(bào)告蛋白有β-半乳糖苷酶(β-gal-actosidase)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione s-transfer-ase,GST)、綠色熒光蛋白(green fluorescence protein,GFP)以及硫還蛋白(thioredoxin, Trx)等。其中值得一提的是GFP,2008年8月有3位科學(xué)家因此獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng):日本科學(xué)家Osamu Shimomura、美國(guó)科學(xué)家Martin Chalfie、美籍華人科學(xué)家錢永健。除了直接標(biāo)記目的蛋白用于檢測(cè)與純化外,還可利用某些GFP具有熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescence resonanceenergy transfer,FRET)的現(xiàn)象,用于蛋白質(zhì)折疊[6]、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用[7]、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等[8]方面的研究。3 現(xiàn)代生物制藥的現(xiàn)狀

國(guó)際上,生物制藥業(yè)主要集中在美國(guó)日本和歐洲,其中美國(guó)作為生物制藥的發(fā)源地,無(wú)論是在經(jīng)費(fèi)投入、產(chǎn)品開發(fā)和研制,還是在產(chǎn)品生產(chǎn)和市場(chǎng)卜都居于國(guó)際領(lǐng)先地位,其它開發(fā)的產(chǎn)品和市場(chǎng)銷售額占全球的90%以上。目前, 美國(guó)共有生物制藥公司約1400家,具中形成規(guī)模生產(chǎn)的有Alzlgen、Seherir一g一Plougll、EliIJ1l一yMcrk、Gelexlteell等20多家公司。日本在生物技術(shù)的開發(fā)僅次美國(guó), 目前共有生物制藥公司約600家,其中麒麟啤灑、中外制藥、味之素等著名廠商不僅在日本習(xí)內(nèi)處與生物制藥各方面的領(lǐng)先地位,而不斷加強(qiáng)世界市場(chǎng)的開拓,進(jìn)入歐洲和亞洲市場(chǎng)。歐洲在生物技術(shù)的開發(fā)上稍落后于日本但近兩年來(lái)歐洲在生物技術(shù)的投入和新公司成眾的數(shù)量上急速增長(zhǎng),目前歐洲的生物制藥公司約有300家但還處在發(fā)展的開始階段。

3.1 我國(guó)生物制藥的現(xiàn)狀

至2004年我國(guó)有現(xiàn)代生物制藥企業(yè)114家，其中疫苗生產(chǎn)企業(yè)28家，可以生產(chǎn)27種基因工程藥物和26種病毒的41種疫苗。按現(xiàn)價(jià)統(tǒng)計(jì)規(guī)定，生物生化制品生產(chǎn)企業(yè)全國(guó)409家，總產(chǎn)值220億元，銷售收入196億元。“十五”前四年，平均每年大于20%的速度增長(zhǎng)用于該領(lǐng)域的投資不斷加大于固定資產(chǎn)平均增長(zhǎng)32.5%。我國(guó)現(xiàn)已成為世界疫苗最大生產(chǎn)國(guó)年產(chǎn)量超過(guò)了10億個(gè)計(jì)量單位。兒科常見病疫苗年產(chǎn)量達(dá)5億人民幣除滿足自用外還向世界衛(wèi)生組織(WHO)提供疫苗產(chǎn)品用于其他國(guó)家。3.2 我國(guó)生物制藥存在的問題及應(yīng)采取的措施

我國(guó)生物制藥存在一系列問題開發(fā)水平低缺少創(chuàng)新產(chǎn)品生物制藥產(chǎn)業(yè)下游技術(shù)薄弱重復(fù)生產(chǎn)嚴(yán)重、資源浪費(fèi)過(guò)大產(chǎn)業(yè)化規(guī)模小、市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)無(wú)序?？刹扇〉拇胧┮苑轮拼龠M(jìn)創(chuàng)新最終以創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)飛躍，多渠道建立融資網(wǎng)絡(luò)改革科研體制建立新的產(chǎn)學(xué)研一體化的機(jī)制，加強(qiáng)國(guó)際交流與合作積極應(yīng)對(duì)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)加強(qiáng)宏觀調(diào)控強(qiáng)化和規(guī)范財(cái)稅優(yōu)惠政策。4 基因工程在生物制藥中的發(fā)展趨勢(shì)

目前基因工程藥物的研發(fā)趨勢(shì)是:(1)發(fā)展表達(dá)載體:目前最主要的用于生產(chǎn)的表達(dá)載體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞和大腸桿菌。大腸桿菌屬于原核表達(dá)系統(tǒng),沒有糖基化功能,只能用于表達(dá)功能蛋白不需要糖基化的重組藥物,如胰島素等,且目的蛋白大量表達(dá)之后易形成包涵體,不易復(fù)性。而功能蛋白需要糖基化的則主要在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。也有用真核化的原核表達(dá)載體[9]。目前還有“人源化”酵母表達(dá)體系和植物表達(dá)體系正在發(fā)展。(2)對(duì)現(xiàn)有的重組藥進(jìn)行基因工程改造和修飾:通過(guò)基因工程的改造和修飾使蛋白藥物在臨床應(yīng)用上更安全更有療效,如G-CSF和EPO等突變體藥物研究與開發(fā)。目前,由于天然基因工程藥物品種的研究已經(jīng)相當(dāng)普遍,因此采取對(duì)現(xiàn)有的重組藥進(jìn)行基因工程改造和修飾的策略,既可以避免侵犯知識(shí)產(chǎn)權(quán),又可以為新藥研究開辟出新途徑。(3)改變給藥途徑:在繼續(xù)改進(jìn)注射用溶液和注射用無(wú)菌粉末的穩(wěn)定性之外,還發(fā)展出化學(xué)修飾型、控釋微球型和脈沖式給藥系統(tǒng)。而在鼻腔、口服、直腸、口腔、肺部給藥方面也已取得重大進(jìn)展。5 生物制藥研究新進(jìn)展

5.1 計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)技術(shù)發(fā)展

計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展和向藥物化學(xué)學(xué)科的滲透，促進(jìn)了藥物設(shè)計(jì)的發(fā)展。20世紀(jì)90年代計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)取得突破性進(jìn)展，現(xiàn)已成為藥物研究和開發(fā)的重要方法和工具。

計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)利用了計(jì)算機(jī)快速、全方位的邏輯推理功能、圖形顯示控制功能，并將量子化學(xué)、分子力學(xué)、藥物化學(xué)、生物化學(xué)和信息科學(xué)結(jié)合起來(lái)，研究受體生物分子與藥物結(jié)合部位的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、藥物與受體復(fù)合物的構(gòu)型和立體化學(xué)特征、藥物與受體結(jié)合的模式和選擇性、特異性、、藥物分子的活性基團(tuán)和藥效構(gòu)象關(guān)系等，從藥物機(jī)理出發(fā)，改進(jìn)現(xiàn)有生物活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，快速發(fā)現(xiàn)并優(yōu)化先導(dǎo)化合物，使其盡早進(jìn)入臨床前研究，減少傳統(tǒng)的新藥研究的盲目性，縮短新藥研制的時(shí)間。

計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)有兩類方法，一類是基于機(jī)理的藥物設(shè)計(jì)（MBDD），另一類是基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)（SBDD），基于機(jī)理的藥物設(shè)計(jì)要針對(duì)藥物作用機(jī)理，從靶點(diǎn)出發(fā)，考慮藥物與受體的作用過(guò)程，并要模擬藥物在體內(nèi)的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝等動(dòng)態(tài)過(guò)程，比基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)更合理，但該法還不成熟。目前的計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)主要還是基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)，今后的計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的目標(biāo)是向基于機(jī)理的藥物設(shè)計(jì)方向發(fā)展。相信隨著生命科學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)的發(fā)展，考慮藥物不同作用機(jī)理和全部作用過(guò)程的計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)技術(shù)將逐步建立并不斷完善。

5.2 組合化學(xué)與高通量篩選技術(shù)發(fā)展

組合化學(xué)是近20年發(fā)展起來(lái)的一種合成大量化合物的新方法，它是建立在高效平行的合成之上，在同一個(gè)反應(yīng)器內(nèi)使用相同條件同時(shí)制備出多種化合物，建立各類化合物庫(kù)的策略。組合化學(xué)通常采用操作、分離簡(jiǎn)便的固相化學(xué)合成。液相化學(xué)合成技術(shù)也在快速發(fā)展和完善中。

在藥物研究過(guò)程中，通過(guò)化合物活性篩選而獲得具有藥物活性的先導(dǎo)化合物是新藥研究的基礎(chǔ)。隨著分子水平的藥物篩選模型的建立，篩選方法和技術(shù)都發(fā)生了根本性的變化，出現(xiàn)了高通量篩選的新技術(shù)，大大加快了先導(dǎo)化合物的尋找和發(fā)現(xiàn)，并促進(jìn)了高通量有機(jī)合成。近年來(lái)，組合化學(xué)與高通量篩選結(jié)合，使組合化學(xué)的化合物庫(kù)種類、數(shù)量不斷擴(kuò)大，篩選的先導(dǎo)化合物數(shù)量和種類也在不斷地增多，使新藥的種類和數(shù)量也在不斷地增加。組合化學(xué)實(shí)現(xiàn)的自動(dòng)化合成僅20世紀(jì)90年代后得到的各類化合物總和已超過(guò)了人類有史以來(lái)所發(fā)現(xiàn)化合物的總和，故有人把組合化學(xué)與高通量篩選結(jié)合技術(shù)稱為“新藥發(fā)現(xiàn)的高速公路”，據(jù)文獻(xiàn)記載，1992年～1998年的幾年，經(jīng)過(guò)組合化學(xué)化合物庫(kù)與高通量篩選，確定的候選藥物已有46個(gè)，并已進(jìn)入人體測(cè)試階段。[10]顯然，組合化學(xué)與高質(zhì)量篩選的結(jié)合技術(shù)，大大地加快了新藥研制的步伐。雖然如此，組合化學(xué)建立的大型化合物庫(kù)，為篩選也帶來(lái)了困難，因此，利用組合化學(xué)設(shè)計(jì)，構(gòu)建具有結(jié)構(gòu)多樣性的小型而便于篩選的組合化合物庫(kù)，結(jié)合化學(xué)信息學(xué)和高通量篩選，將是組合化學(xué)與高通量篩選結(jié)合的一項(xiàng)重要課題。5.3 藥物手性合成技術(shù)發(fā)展

化學(xué)合成技術(shù)在新藥發(fā)現(xiàn)過(guò)程中發(fā)揮著十分重要的作用。近年來(lái)由于有機(jī)化學(xué)學(xué)科新理論、新反應(yīng)、新技術(shù)不斷發(fā)現(xiàn)，使得合成反應(yīng)具有化學(xué)選擇性成為現(xiàn)實(shí)，并促進(jìn)了藥物合成技術(shù)的快速發(fā)展，其中手性合成技術(shù)使新藥研制的領(lǐng)域不斷擴(kuò)大。

手性是自然界的本質(zhì)屬性。在生物體手性環(huán)境，如酶、受體、離子通道、蛋白質(zhì)、載體中，分子之間手性匹配是分子識(shí)別的基礎(chǔ)，受體與配體的專一作用，酶與底物的高度、區(qū)域、位點(diǎn)和立體催化專一性，抗原與抗體的免疫識(shí)別都與手性有關(guān)，同時(shí)藥物的生物應(yīng)答常受到手性影響，包括藥物在體內(nèi)的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、分配、位點(diǎn)活性的作用以及代謝和消除。所以，手性藥物的開發(fā)是當(dāng)前醫(yī)藥界重點(diǎn)研究的熱點(diǎn)之一，并取得了令人注目的成就。目前已上市的藥物中手性藥物約占1/3，如2000年全球手性藥物銷售額達(dá)1233億美元。手性藥物的制備技術(shù)主要有拆分法、化學(xué)合成法和生物合成等三大類，發(fā)展較快的是后二類?；瘜W(xué)合成法是在不對(duì)稱催化劑存在下，利用化學(xué)反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)不對(duì)稱性，進(jìn)行單一對(duì)映體合成。在已上市的手性藥物中，其手性中間體均可通過(guò)現(xiàn)有的重（雙）鍵不對(duì)稱還原技術(shù)，特別是不對(duì)稱氫化和不對(duì)稱轉(zhuǎn)移氫化來(lái)合成。至今為止在不對(duì)稱催化合成中，昂貴的手性配體和貴金屬的使用，以及手性催化劑的催化效率仍是制約其在手性技術(shù)上應(yīng)用的關(guān)鍵。因而，手性催化劑的設(shè)計(jì)和合成，以及催化劑的回收循環(huán)使用是當(dāng)今不對(duì)稱催化合成研究的方向。

生物合成法則利用催化劑, 酶-催化反應(yīng)的高度、底物、區(qū)域、位點(diǎn)和立體選擇性來(lái)合成手性藥物。生物合成法具有選擇性高、產(chǎn)率高、反應(yīng)條件溫和等特點(diǎn)，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，生物合成法將成為手性制備的高效手段。5.4 藥物生物技術(shù)發(fā)展[11] 生物技術(shù)藥物是指利用DNA重組技術(shù)或單克隆抗體技術(shù)或其它生物技術(shù)研制的蛋白質(zhì)、抗體或核酸類藥物，它是目前生物技術(shù)研究最為活躍的領(lǐng)域，給生命科學(xué)的研究和生物制藥工業(yè)帶來(lái)了革命性變化。參考文獻(xiàn)

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第四篇：生物制藥的進(jìn)展及展望

生物制藥的進(jìn)展及展望

生物制藥是現(xiàn)代生物技術(shù)在制藥工業(yè)中應(yīng)用形成的, 集生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)的先進(jìn)技術(shù)為一體, 以組合化學(xué)、藥學(xué)基因、蛋白組學(xué)、基因治病、功能抗原學(xué)、生物信息學(xué)、高通量篩選、基因組學(xué)等高技術(shù)為依托, 以分子遺傳學(xué)、分子生物、分子病理、生物物理等基礎(chǔ)學(xué)科的突破為后盾形成的產(chǎn)業(yè), 是一個(gè)多學(xué)科支撐的知識(shí)體系。生物制藥就是把生物工程技術(shù)應(yīng)用到藥物制造領(lǐng)域的過(guò)程, 其中最為主要的是基因工程方法, 即利用克隆技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù), 對(duì)進(jìn)行切割、插人、連接和重組, 從而獲得生物制藥制品。生物藥品是以微生物、寄生蟲、動(dòng)物毒素、生物組織為起始材料, 采用生物學(xué)工藝或分離純化技術(shù)制備并以生物學(xué)技術(shù)和分析技術(shù)控制中間產(chǎn)物和成品質(zhì)量制成的生物活化制劑, 包括菌苗、疫苗、毒素、類毒素、血清、血液制品、免役制劑、細(xì)胞因子、抗原、單克隆抗體及基因工程產(chǎn)品重組產(chǎn)品、體外診斷試劑等。目前, 生物制藥產(chǎn)品主要包括三大類基因工程藥物、生物疫苗和生物診斷試劑。其在診斷、預(yù)防、控制乃至消滅傳染病, 保護(hù)人類健康延長(zhǎng)壽命中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。

近年來(lái)發(fā)展迅猛,人類以上的生物技術(shù)成果集中應(yīng)用于制藥工業(yè), 用以開發(fā)特色新藥或?qū)鹘y(tǒng)醫(yī)藥進(jìn)行改良, 由此引起了制藥工業(yè)的重大變革, 生物技術(shù)制藥得以迅速發(fā)展, 現(xiàn)在全世界范圍內(nèi), 生物技術(shù)新藥產(chǎn)業(yè)中心正在迅速崛起, 生物制藥業(yè)成為最活躍、進(jìn)展最快的產(chǎn)業(yè)之一。

目前，我國(guó)為了發(fā)展具有科技優(yōu)勢(shì)和自主創(chuàng)新特點(diǎn)的生物

制藥產(chǎn)品，需要重點(diǎn)研究和開發(fā)以下幾個(gè)領(lǐng)域：1.中草藥及其有效生物活性成分的發(fā)酵生產(chǎn)；2.改造抗生素工藝技術(shù)；3.人源化的單克隆抗體的研究和開發(fā)；4.核酸類藥物研究；5.血液替代品的研究與開發(fā)；6.基因芯片（DNA 芯片）技術(shù)；7.拓展人類基因組的研究成果；8.發(fā)展氨基酸工業(yè)化的研究和開發(fā)甾醇激素；9.開發(fā)活性蛋白與多肽類藥物以及治療性抗體。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，運(yùn)用基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)等現(xiàn)代生化與分子生物學(xué)技術(shù)，結(jié)合基因工程、蛋白質(zhì)工程、細(xì)胞工程、酶工程、生物芯片等常用技術(shù)，在將一些疾病的發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)清楚的基礎(chǔ)上，針對(duì)生物制藥研究中存在的問題，展開綜合研是生物制藥發(fā)展的趨勢(shì)。同時(shí)，生物制藥的發(fā)展不僅依賴于生物科學(xué)和生

物技術(shù)的自身發(fā)展，同時(shí)也依賴于很多相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)步，一些新技術(shù)的出現(xiàn)對(duì)于新藥物的開發(fā)有著很大的推動(dòng)作用：例如計(jì)算機(jī)模擬和分子圖像處理技術(shù)相結(jié)合可以提高設(shè)計(jì)具有特定功能特性的分子的能力，這一技術(shù)很可能成為藥物研究和藥物設(shè)計(jì)的得力工具。藥物與使用該藥物的生物系統(tǒng)相互作用的模擬在理解藥效和藥物安全方面會(huì)成為越來(lái)越有用的工具。隨著人類基因組計(jì)劃的成功完成，人類遺傳結(jié)構(gòu)的秘密正逐步被人類所了解。這些遺傳信息必定是寶貴的醫(yī)藥資源，是生物制藥研究的重要依據(jù)，對(duì)以后生物制藥發(fā)展的有著重大的意義和深遠(yuǎn)的影響。

總之, 綜合多學(xué)科的研究成果, 不斷的利用新技術(shù)可以大大拓展生物制藥的研究空間，開發(fā)我國(guó)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新生物藥物；改進(jìn)現(xiàn)有的制備、檢測(cè)方法，提高藥物質(zhì)量。通過(guò)我國(guó)科研人員的不斷努力，我國(guó)的生物制藥研究必將達(dá)到國(guó)際領(lǐng)先水平。

下面試舉例說(shuō)明下生物制藥的發(fā)展。

美國(guó)是現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)源地, 又是應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)研制新型藥物的第一個(gè)國(guó)家。多數(shù)基因工程藥物都首創(chuàng)于美國(guó)。自年第一家生物制藥公司公司在美國(guó)成立開始試生產(chǎn)生物藥品至今, 已有多家生物技術(shù)公司占全世界生物技術(shù)公司三分之二, 正式投放市場(chǎng)的生物工程藥物多個(gè), 已成功地創(chuàng)造出個(gè)重要的治療藥物, 并廣泛應(yīng)用于治療癌癥、多發(fā)性硬化癥、貧血、發(fā)育不良、糖尿病、肝炎、心力衰竭、血友病、囊性纖維變性及一些罕見的遺傳性疾病。歐洲在發(fā)展生物藥品方面也進(jìn)展較快, 英、法、德、俄羅斯等國(guó)在開發(fā)研制和生產(chǎn)生物藥品方面也成績(jī)斐然, 在生物技術(shù)的某些領(lǐng)域甚至趕上并超過(guò)美國(guó)。如德國(guó)赫斯特集團(tuán)公司把經(jīng)營(yíng)重點(diǎn)改為生命科學(xué), 俄羅斯科學(xué)院分子生物學(xué)研究所、莫斯科大學(xué)生物系、莫斯科婦產(chǎn)科研究所及俄羅斯醫(yī)學(xué)遺傳研究中心等多個(gè)科研機(jī)構(gòu)近年來(lái)在研究和應(yīng)用基因治療方面都取得了重大進(jìn)展。

日本在生命科學(xué)領(lǐng)域亦有一定建樹, 目前已有的生物技術(shù)公司從事于生物醫(yī)藥研究, 日本麒麟公司生物醫(yī)藥方面的實(shí)踐亦列世界前列。新加坡政府最近宣布劃出一塊科技園區(qū)并耗巨資建設(shè)用于吸引世界幾家大的生物醫(yī)藥公司落戶其中。韓國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣在該方面也雄心勃勃。年全球生物技術(shù)藥品市場(chǎng)額達(dá)億美元, 到年則可達(dá)億美元, 估計(jì)占同期世界藥品市場(chǎng)總銷售額的以上。市場(chǎng)占有率較高的品種主要有重組人胰島素占干擾素及集落刺激因子各占巧人生長(zhǎng)激素纖維蛋白溶酶原活化劑占, 其它藥品類占37%。

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第五篇：生物制藥技術(shù)在制藥工藝中的應(yīng)用

生物制藥技術(shù)在制藥工藝中的應(yīng)用

【摘要】生物制藥技術(shù)在近些年來(lái)的發(fā)展速度極快，而且被廣泛的應(yīng)用到西藥制藥中，通過(guò)在大量的臨床實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用，對(duì)提高西藥制藥效果以及促進(jìn)制藥發(fā)展有著深遠(yuǎn)的影響。

【關(guān)鍵詞】生物制藥技術(shù) 制藥工藝 應(yīng)用

一、前言

隨著科技的發(fā)展，生物制藥技術(shù)日新月異。技術(shù)的研究程度也上升到了更高水平，更加準(zhǔn)確細(xì)致地改善人們身體的各個(gè)部分的機(jī)能，使人們的身體素質(zhì)得到更有效的提升。諸如基因工程技術(shù)、酶及細(xì)胞固定化技術(shù)、細(xì)胞工程及單克隆抗體等，也已成為生物制藥方面的熱點(diǎn)詞匯，而腫瘤藥物、免疫性藥物、冠心病治療藥物等也成為了人們生活中常見的藥品。由此可以看出，生物制藥技術(shù)在制藥工藝方面的應(yīng)用已經(jīng)十分廣泛，同時(shí)也達(dá)到了一定的水平。生物制藥技術(shù)逐漸成為制藥工藝的中流砥柱，成為制藥工藝發(fā)展的強(qiáng)心劑。

二、生物制藥技術(shù)在制藥中的應(yīng)用

1.在研制冠心病治療藥物方面的應(yīng)用。冠心病是現(xiàn)代社會(huì)常見的一種疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年死于冠心病的患者約有100萬(wàn)。在冠心病防治方面，目前市場(chǎng)上出現(xiàn)多種防治藥物，冠心病防治藥物的需求在一定程度上推動(dòng)西藥制藥行業(yè)的快速發(fā)展。隨著生物制藥技術(shù)的日益發(fā)展，基因操作技術(shù)得到迅速地發(fā)展，其中，基因測(cè)序技術(shù)及基因治療的發(fā)展前景廣闊，目前已經(jīng)逐漸進(jìn)入商業(yè)化開發(fā)階段，促進(jìn)冠心病臨床治療的進(jìn)展。

2.在研制抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。腫瘤是現(xiàn)代社會(huì)常見的疾病之一，隨著生物制藥技術(shù)的不斷進(jìn)步，抗腫瘤藥物日益增多，預(yù)計(jì)在未來(lái)的5年內(nèi)，我國(guó)抗腫瘤藥物將得到迅速的發(fā)展，比如可以運(yùn)用基因治療法治療腫瘤，主要運(yùn)用γ-干擾素基因治療骨髓瘤；可以運(yùn)用基因藥物抗體，抑制患者體內(nèi)腫瘤的擴(kuò)散，可以運(yùn)用IL-2受體的融合毒素，促進(jìn)CTCL腫瘤患者疾病的治療；運(yùn)用基質(zhì)金屬蛋白酶（TNMPs），可以抑制患者腫瘤血管的擴(kuò)散，同時(shí)可以阻攔腫瘤在機(jī)體內(nèi)的轉(zhuǎn)移。關(guān)于這方面的藥物，未來(lái)將成為抗腫瘤的主要藥物之一，給腫瘤患者帶來(lái)新的希望。目前，在腫瘤臨床治療中，已經(jīng)有三種化合物進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，相信不久就可以得到廣泛地應(yīng)用。

3.在研制免疫性藥物方面的應(yīng)用。無(wú)數(shù)的臨床試驗(yàn)表明，現(xiàn)代社會(huì)大多的疾病都與患者自身的免疫系統(tǒng)有著密切的關(guān)系，免疫力低下或者免疫缺陷都可以引發(fā)多種疾病，比如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥以及哮喘等等。隨著生物制藥技術(shù)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的制藥公司開始研制出相關(guān)的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物。比如，美國(guó)Cetor′s公司目前已經(jīng)研制出TNF-α抗體，這種抗體在治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面，可以取得滿意的療效，有效率可達(dá)80%以上。在哮喘疾病治療中，Genentech公司已經(jīng)研制出單克隆人源化免疫球蛋白E抗體，這種藥物可以有效地改善哮喘患者的疾病癥狀，促進(jìn)患者疾病的治療，目前進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段。此外，在糖尿病治療方面，一些公司還研制出基因療法，即在糖尿病患者的皮膚細(xì)胞中，注入胰島素基因，使工程細(xì)胞能夠全程供應(yīng)胰島素。

4.在研制蛋白質(zhì)治療藥物及基因重組多肽藥物方面的應(yīng)用?；蛑亟M，主要指將兩種不同生物的DNA進(jìn)行有機(jī)結(jié)合的技術(shù)。通過(guò)基因重組技術(shù)，可以將兩種完全不同的生物基因進(jìn)行融合，使一種基因進(jìn)入到另一種基因中，擺脫生物物種之間的束縛，并在分子水平上對(duì)一些重要基因進(jìn)行相關(guān)的操作。運(yùn)用基因重組技術(shù)，可以研制出相關(guān)的蛋白質(zhì)治療藥物及基因重組多肽藥物，比如，運(yùn)用基因重組技術(shù)可以研制出激素、多肽、細(xì)胞因子、蛋白質(zhì)、酶、單克隆抗體及疫苗等等。

5.在研制神經(jīng)性藥物方面的應(yīng)用。運(yùn)用生物制藥技術(shù)可以制造多種神經(jīng)性藥物，這些神經(jīng)藥物對(duì)腦中風(fēng)、脊椎損傷、老年癡呆癥、帕金森氏病等疾病的治療有著非常重要的意義。目前，已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的有胰島素成長(zhǎng)因子rhIGF-1。同時(shí)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段還有腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）與因子（NGF），這兩種因子主要用在腦萎縮硬化癥患者及末梢神經(jīng)炎患者的疾病治療中。

中風(fēng)是現(xiàn)代社會(huì)常見的一種疾病，臨床試驗(yàn)表明，由生物制藥技術(shù)研制出的CerestaL可以有效地改善中風(fēng)患者腦力方面的癥狀，對(duì)中風(fēng)患者的疾病治療起著非常重要的作用，目前，在我國(guó)臨床醫(yī)學(xué)中，CerestaL已經(jīng)逐漸進(jìn)入Ⅲ期臨床階段，相信未來(lái)會(huì)在中風(fēng)疾病治療方面發(fā)揮重要的作用

三、生物制藥技術(shù)的發(fā)展前景

1.生物制藥技術(shù)的發(fā)展面臨的挑戰(zhàn)

伴隨著生物制藥產(chǎn)業(yè)與人們生活的關(guān)系愈加緊密，生物制藥技術(shù)的發(fā)展的步伐刻不容緩。我國(guó)生物制藥技術(shù)和產(chǎn)業(yè)在發(fā)展過(guò)程中更多的是借鑒國(guó)外的先進(jìn)技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)，雖然在人才方面，我國(guó)所擁有的數(shù)量已經(jīng)十分龐大，但真正擁有科技創(chuàng)新能力的精英少之又少。同時(shí)，與國(guó)外相比，我國(guó)生物制藥產(chǎn)業(yè)缺乏技術(shù)高超的帶頭人。一個(gè)新興的產(chǎn)業(yè)，倘若沒有高素質(zhì)、高水平的并且深謀遠(yuǎn)慮的領(lǐng)頭羊，即使擁有再多的科技研發(fā)人員、再先進(jìn)的技術(shù)及設(shè)備，那也是一盤散沙，成不了氣候。當(dāng)然，我們也不能閉門造車，即使我過(guò)生物制藥技術(shù)發(fā)展迅猛，但仍舊存在許多不足之處，依舊需要與國(guó)外合作交流。因此，只有加強(qiáng)國(guó)內(nèi)外合作，取其精華去其糟粕，才能使我國(guó)在激烈的競(jìng)爭(zhēng)中取得好的結(jié)果。

2.生物制藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)

隨著科技的發(fā)展，生物制藥技術(shù)的研究領(lǐng)域也到達(dá)了分子水平。同時(shí)，對(duì)人體遺傳物質(zhì)的研究以及對(duì)各種疾病的致病機(jī)理的探索，也為生物技術(shù)的發(fā)展注入了強(qiáng)大的活力，使得生物制藥技術(shù)發(fā)展的方向和目的更加明確。在未來(lái)，生物制藥技術(shù)的發(fā)展不再僅僅局限與藥品的研發(fā)，更滲透到有關(guān)人體生長(zhǎng)發(fā)育和生存的各個(gè)方面。

畢竟，生物制藥技術(shù)的產(chǎn)生本生就是為了人們能夠擁有更加強(qiáng)健的身體和更長(zhǎng)的壽命。而科學(xué)家的關(guān)注點(diǎn)，也逐步轉(zhuǎn)移到提高產(chǎn)品研制的成功率、降低試驗(yàn)制造成本、拓寬藥物適用市場(chǎng)范圍上?？傊c各個(gè)學(xué)科的結(jié)合與發(fā)展，再試圖通過(guò)科學(xué)技術(shù)手段使生物制藥技術(shù)帶來(lái)更多收益，為醫(yī)藥行業(yè)提供更多價(jià)格低廉、效果明顯的藥物是生物制藥產(chǎn)業(yè)未來(lái)發(fā)展的方向。

四、結(jié)語(yǔ)

生物制藥技術(shù)的發(fā)展，關(guān)系到人們身體健康和生活質(zhì)量的提高，也關(guān)系到其他各個(gè)領(lǐng)域的發(fā)展，關(guān)系到國(guó)家的長(zhǎng)治久安和經(jīng)濟(jì)建設(shè)，是在社會(huì)主義發(fā)展的新時(shí)期不可忽視的方面之一。而它的發(fā)展，也需要國(guó)家的大力支持，依賴大量科技人才和資金的投入，也需要正確的引導(dǎo)。生物制藥技術(shù)在制藥工藝中的運(yùn)用，也暗示著更方便、更有效的生物制藥的出現(xiàn)，給和諧社會(huì)的建設(shè)更添一絲活力。

【參考文獻(xiàn)】

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