第一篇：HIV、梅毒檢測工作要點(diǎn)

黔東南州預(yù)防艾滋病、梅毒及乙肝母嬰傳播項(xiàng)目

工作方法要點(diǎn)

一，乙肝

乙肝表面抗原陽性母親所生的新生兒，須對新生兒免費(fèi)注射“乙肝免疫球蛋白”1針（100單位）。并按計(jì)免程序注射“乙肝疫苗”。相關(guān)工作數(shù)據(jù)在月報(bào)表中反應(yīng)出來，不需填個(gè)案表。

二、梅毒

必須明確一點(diǎn)：不論是哪一級醫(yī)院，只要用兩種不同的檢測方法（兩種方法：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)、非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)），就可以確診患者是不是梅毒，不必要到上級醫(yī)院確診。

1、若孕期“確診”為梅毒的孕婦，按國家方案中的“梅毒治療方案”正規(guī)治療兩個(gè)療程。其所生的新生兒在出生時(shí)檢測新生兒血清中的梅毒抗體（用非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測）。可能出現(xiàn)以下三種情況：

（1)新生兒檢測陰性：可用國家方案“梅毒治療方案”中的預(yù)防性治療方法進(jìn)行治療。(梅毒治療參看國家方案中的梅毒治療方案）

（2）新生兒檢測陽性：必須對母親及新生兒做滴度試驗(yàn)，并比較新生兒及母親的滴度：若小兒的滴度小于母親分娩前滴度的4倍的，采用預(yù)防治療方法進(jìn)行治療。若小兒的滴度大于母親分娩前滴度的4倍的，診為先天梅毒，按先天梅毒治療方案治療。（滴度試驗(yàn)法見附件一）

2、對孕期沒有接受兩個(gè)療程正規(guī)治療的母所生的新生兒，不論檢測是否是陰性，都要進(jìn)行預(yù)防性治療。

3、沒有進(jìn)行滴度檢測的，不能診新生兒為先天梅毒，也就不存在進(jìn)行先天梅毒的治療。目前診斷先天梅毒的唯一方法也就是進(jìn)行滴度試驗(yàn)及對比，因此請各縣一定要把這項(xiàng)工作開展起來。

4、因做滴度所消耗的試劑多一些，請各縣在做經(jīng)費(fèi)使用方案時(shí)，對作滴度試驗(yàn)的給預(yù)提高報(bào)銷費(fèi)用，才有利于工作的開展。

5、對當(dāng)月的陽性個(gè)案須在當(dāng)月的月報(bào)中反應(yīng)出來，同時(shí)填報(bào)個(gè)案表上報(bào)我州保健院。

三、HIV

1、孕期HIV快速檢測陽性的孕婦，須做“確認(rèn)試驗(yàn)”（州級以上疾控中心方可做確認(rèn)試驗(yàn)）。待確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果出來后，證實(shí)為陽性的孕婦才進(jìn)行管理（具體用藥“國家方案”中的治療法）。

2、產(chǎn)時(shí)用“快速檢測方法”檢測產(chǎn)婦為陽性的，對所生的新生兒要在24小時(shí)內(nèi)服用抗病毒藥，并對其母親其做“確認(rèn)試驗(yàn)”（州疾控中心），將會(huì)出現(xiàn)以下兩種情況：

（1）母親確認(rèn)試驗(yàn)為陰性的，新生兒停止服藥。

（2）母親確認(rèn)試驗(yàn)陽性的，新生兒繼續(xù)服藥6周。并指導(dǎo)其要進(jìn)行人工喂養(yǎng)。每三個(gè)月對嬰兒進(jìn)行體檢，并網(wǎng)絡(luò)直報(bào)個(gè)案表及隨訪表。

附件一

非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)室滴度檢測）方法 采用倍數(shù)稀釋法對血清進(jìn)行稀釋（新生兒須用靜脈血）a、吸50ul血清+TRUST或RPR試劑液懸液1滴＝1：1液 b、吸50ul血清到試管+50ul生理鹽水＝1：2液 c、取1：2液50ul+50ul生理鹽水＝1：4液 d、取1：4液50ul+50ul生理鹽水＝1：8液 e、取1：8液50ul+50ul生理鹽水＝1：16液 f、取1：16液50ul+50ul生理鹽水＝1：32液 g、取1：32液50ul+50ul生理鹽水＝1：64液.......................以此類稀釋進(jìn)行

在各比例倍數(shù)液中加入TRUST或RPR試劑，則可以知道其滴度結(jié)果。請各縣將此法與縣里各醫(yī)療單位的化驗(yàn)人員進(jìn)行操作培訓(xùn)，務(wù)必會(huì)作才行。

黔東南州婦幼保健院 2012.4.12

第二篇：2009HIV抗體檢測工作總結(jié)

2009HIV抗體檢測工作總結(jié)

一年來，我們一如既往的認(rèn)真貫徹和落實(shí)《中國預(yù)防和控制艾滋病中長期規(guī)劃（1998-2010）》。HIV抗體檢測工作嚴(yán)格遵照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2004年版）和《江蘇省艾滋病檢測工作管理辦法》認(rèn)真執(zhí)行。3月份對臨床醫(yī)生進(jìn)行了醫(yī)療安全教育和個(gè)人防護(hù)培訓(xùn)，對護(hù)理人員進(jìn)行標(biāo)本采集和個(gè)人防護(hù)講座，保證了分析前質(zhì)量控制，確保了HIV篩查實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量，防范了醫(yī)療糾紛。應(yīng)臨床需要，HIV抗體檢測工作從每周1次增加為每周2次，為患者和臨床提供了更及時(shí)的服務(wù)。

今年，我院共檢測HIV抗體標(biāo)本1381份，比去年增加了50%。門診免費(fèi)檢測168人，檢出1例HIV抗體待復(fù)查標(biāo)本，均按程序上報(bào)市疾控中心。參加了省臨檢中心傳染病質(zhì)控，成績合格。著重強(qiáng)調(diào)個(gè)人防護(hù)，全年無職業(yè)暴露事件發(fā)生。

艾滋病問題是全世界面臨的重大公共衛(wèi)生問題和社會(huì)問題，在下一個(gè)工作階斷，我們要繼續(xù)做好HIV抗體的質(zhì)量控制，防止漏檢漏報(bào)；加強(qiáng)宣傳教育，提高檢測覆蓋面，防止艾滋的漫延。

泗洪縣人民醫(yī)院HIV篩查實(shí)驗(yàn)室

2009-9-25

第三篇：預(yù)防HIV、梅毒、乙肝母嬰傳播試卷(含答案)

預(yù)防艾滋病母嬰傳播知識試題

科室 姓 名 分 數(shù)

一、填空題

1、艾滋病母嬰傳播途徑包括宮內(nèi)傳播、產(chǎn)時(shí)傳播、產(chǎn)后母乳喂養(yǎng)傳播。

2、HIV感染母親所生的嬰兒在生后 12-18個(gè)月內(nèi)，體內(nèi)含有從母體帶來的抗體，此時(shí)嬰兒檢測艾滋病可能是 假陽性，但這并不表示 嬰兒已經(jīng)感染了艾滋病病毒。

3、預(yù)防艾滋病、梅毒、乙肝母嬰傳播信息數(shù)據(jù)的收集、上報(bào)實(shí)行月報(bào)制，每月數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)段為上月21日至當(dāng)月20日。

三、簡答題

1、簡述預(yù)防HIV母嬰傳播孕產(chǎn)期保健的目的與要求。

答：①孕早期及早發(fā)現(xiàn)HIV的孕產(chǎn)婦；②加強(qiáng)產(chǎn)前保健、注意監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育、及早確定抗病毒治療方案，為HIV感染的孕產(chǎn)婦及所生嬰兒備好孕期、分娩及產(chǎn)后需用的抗病毒藥物。③孕晚期指導(dǎo)HIV感染孕產(chǎn)婦及時(shí)服用抗病毒藥物，提供嬰兒喂養(yǎng)的咨詢。④產(chǎn)時(shí)按照用藥方案繼續(xù)產(chǎn)時(shí)用藥；提供安全助產(chǎn)服務(wù)；評估、建議人工喂養(yǎng)。⑤安全處理HIV感染產(chǎn)婦的惡露和排泄物；建議正確和堅(jiān)持使用安全套預(yù)防性傳播和避孕；指導(dǎo)人工喂養(yǎng)的母親回奶注意問題及乳房護(hù)理。

2、簡述妊娠期梅毒的治療原則及其治療目標(biāo)的特殊性。

答：治療原則：①診斷明確，未確診不能隨便治療；②早期診斷，及時(shí)治療；③劑量足夠，療程規(guī)則；④嚴(yán)格定期隨訪；⑤傳染源或性伴侶同時(shí)接受檢查和治療；⑥治療期間不應(yīng)有性生活。

治療目標(biāo)的特殊性：①妊娠早期治療：使胎兒不受感染；②妊娠晚期治療：是受感染的胎兒在分娩前治愈；③禁止使用四環(huán)素；④母體治療梅毒可影響胎傳梅毒的進(jìn)展，而一旦發(fā)展至胎兒肝腫大和腹水階段，則母體治療對胎傳梅毒進(jìn)展影響不大。

3、簡述梅毒感染孕產(chǎn)婦及所生兒童治療方案。

答：推薦方案：①普魯卡因青霉素G，80萬U/日,肌肉注射，連續(xù)15日；②芐星青霉素240萬U，兩臀肌注，每周一次，連續(xù)3次。

替代方案：①可用頭孢曲松，1克/日，肌內(nèi)注射或靜脈給藥，連續(xù)10天；②青霉素過敏者可用紅霉素治療（禁用四環(huán)素、多西環(huán)素），紅霉素500mg,每日4次，口服，連服15天。

梅毒感染所生兒童的預(yù)防性治療方案：出生后應(yīng)用芐星青霉素G，5萬單位/公斤體重，分兩臀肌肉注射。

4、簡述乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦及所生兒童干預(yù)措施。

答、對乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)詳細(xì)了解其肝炎病史及治療情況，密切監(jiān)測肝臟功能，給予科學(xué)的營養(yǎng)支持和指導(dǎo)。對乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦所生新生兒在出生后24內(nèi)注射乙肝免疫球蛋白（100國際單位）。再按照國家免疫規(guī)劃要求，完成24小時(shí)內(nèi)及1月齡和6個(gè)齡兒童的三次乙肝免疫接種。

預(yù)防艾滋病母嬰傳播知識試題

科室 姓 名 分 數(shù)

一、填空題

1、艾滋病母嬰傳播途徑包括、、。

2、HIV感染母親所生的嬰兒在生后 內(nèi)，體內(nèi)含有從母體帶來的抗體，此時(shí)嬰兒檢測艾滋病可能是

，但這并不表示。

3、預(yù)防艾滋病、梅毒、乙肝母嬰傳播信息數(shù)據(jù)的收集、上報(bào)實(shí)行月報(bào)制，每月數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)段為。

三、簡答題

1、簡述預(yù)防HIV母嬰傳播孕產(chǎn)期保健的目的與要求。

2、簡述妊娠期梅毒的治療原則及其治療目標(biāo)的特殊性。

3、簡述梅毒感染孕產(chǎn)婦及所生兒童治療方案。

4、簡述乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦及所生兒童干預(yù)措施

第四篇：預(yù)防HIV、梅毒、乙肝母嬰傳播試卷(含答案)

預(yù)防艾滋病母嬰傳播知識試題

科室 姓 名 分 數(shù)

一、填空題

1、艾滋病母嬰傳播途徑包括宮內(nèi)傳播、產(chǎn)時(shí)傳播、產(chǎn)后母乳喂養(yǎng)傳播。

2、HIV感染母親所生的嬰兒在生后 12-18個(gè)月內(nèi)，體內(nèi)含有從母體帶來的抗體，此時(shí)嬰兒檢測艾滋病可能是 假陽性，但這并不表示 嬰兒已經(jīng)感染了艾滋病病毒。

3、預(yù)防艾滋病、梅毒、乙肝母嬰傳播信息數(shù)據(jù)的收集、上報(bào)實(shí)行月報(bào)制，每月數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)段為上月21日至當(dāng)月20日。

三、簡答題

1、簡述預(yù)防HIV母嬰傳播孕產(chǎn)期保健的目的與要求。

答：①孕早期及早發(fā)現(xiàn)HIV的孕產(chǎn)婦；②加強(qiáng)產(chǎn)前保健、注意監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育、及早確定抗病毒治療方案，為HIV感染的孕產(chǎn)婦及所生嬰兒備好孕期、分娩及產(chǎn)后需用的抗病毒藥物。③孕晚期指導(dǎo)HIV感染孕產(chǎn)婦及時(shí)服用抗病毒藥物，提供嬰兒喂養(yǎng)的咨詢。④產(chǎn)時(shí)按照用藥方案繼續(xù)產(chǎn)時(shí)用藥；提供安全助產(chǎn)服務(wù)；評估、建議人工喂養(yǎng)。⑤安全處理HIV感染產(chǎn)婦的惡露和排泄物；建議正確和堅(jiān)持使用安全套預(yù)防性傳播和避孕；指導(dǎo)人工喂養(yǎng)的母親回奶注意問題及乳房護(hù)理。

2、簡述妊娠期梅毒的治療原則及其治療目標(biāo)的特殊性。

答：治療原則：①診斷明確，未確診不能隨便治療；②早期診斷，及時(shí)治療；③劑量足夠，療程規(guī)則；④嚴(yán)格定期隨訪；⑤傳染源或性伴侶同時(shí)接受檢查和治療；⑥治療期間不應(yīng)有性生活。

治療目標(biāo)的特殊性：①妊娠早期治療：使胎兒不收感染；②妊娠晚期治療：是受感染的胎兒在分娩前治愈；③禁止使用四環(huán)素；④母體治療梅毒可影響胎傳梅毒的進(jìn)展，而一旦發(fā)展至胎兒肝腫大和腹水階段，則母體治療對胎傳梅毒進(jìn)展影響不大。

3、簡述梅毒感染孕產(chǎn)婦及所生兒童治療方案。

答：推薦方案：①普魯卡因青霉素G，80萬U/日,肌肉注射，連續(xù)15日；②芐星青霉素240萬U，兩臀肌注，每周一次，連續(xù)3次。

替代方案：①可用頭孢曲松，1克/日，肌內(nèi)注射或靜脈給藥，連續(xù)10天；②青霉素過敏者可用紅霉素治療（禁用四環(huán)素、多西環(huán)素），紅霉素500mg,每日4次，口服，連服15天。

梅毒感染所生兒童的預(yù)防性治療方案：出生后應(yīng)用芐星青霉素G，5萬單位/公斤體重，分兩臀肌肉注射。

4、簡述乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦及所生兒童干預(yù)措施。

答、對乙肝表面抗原陽性孕產(chǎn)婦，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)詳細(xì)了解其肝炎病史及治療情況，密切監(jiān)測肝臟功能，給予科學(xué)的營養(yǎng)支持和指導(dǎo)。對乙肝表面抗原孕產(chǎn)度所生新生兒沒在出生后24內(nèi)注射乙肝免疫球蛋白（100國際單位）。再按照國家免疫規(guī)劃要求，完成24小時(shí)內(nèi)及1月齡和6個(gè)齡兒童的三次乙肝免疫接種。

預(yù)防艾滋病母嬰傳播知識試題

科室 姓 名 分 數(shù)

一、填空題

1、艾滋病母嬰傳播途徑包括、、。

2、HIV感染母親所生的嬰兒在生后 內(nèi)，體內(nèi)含有從母體帶來的抗體，此時(shí)嬰兒檢測艾滋病可能是

，但這并不表示。

3、預(yù)防艾滋病、梅毒、乙肝母嬰傳播信息數(shù)據(jù)的收集、上報(bào)實(shí)行月報(bào)制，每月數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)段為。

三、簡答題

1、簡述預(yù)防HIV母嬰傳播孕產(chǎn)期保健的目的與要求。

2、簡述妊娠期梅毒的治療原則及其治療目標(biāo)的特殊性。

3、簡述梅毒感染孕產(chǎn)婦及所生兒童治療方案。

第五篇：HIV不同病程分子生物學(xué)檢測

HIV不同病程分子生物學(xué)檢測及結(jié)果解讀

1310115117 劉航齊

一、HIV核酸檢測

HIV核酸檢測有定性和定量兩類,前者用于HIV感染的輔助診斷,后者常用于監(jiān)測HIV感染者病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。

1.PCR檢測法(多聚酶鏈反應(yīng))PCR就是利用DNA聚合酶復(fù)制DNA的特性,把生物體內(nèi)的 半保留增殖DNA的過程在體外實(shí)驗(yàn)條件下完成。傳統(tǒng)的PCR技術(shù)比較簡便、快捷,但是容易導(dǎo)致“污染”,出現(xiàn)假陽性結(jié)果.另外,HIV基因多樣性,沒有一套引物可覆蓋所有HIV序列,使檢測敏感性受到限制。從而限制了PCR臨床診斷HIV。

不同病株存在遺傳變異性，進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)應(yīng)選擇病毒基因組中的高度保守序列區(qū)設(shè)計(jì)引物。當(dāng)核酸檢測陽性，應(yīng)重復(fù)采集樣品進(jìn)行復(fù)測，復(fù)測結(jié)果呈核酸陽性反應(yīng)則判斷為核酸陽性，復(fù)測結(jié)果為核酸陰性反應(yīng)則判為不確定結(jié)果，需進(jìn)一步隨訪檢測。HIV核酸檢測陰性，只報(bào)告本次試驗(yàn)結(jié)果陰性。2.刷狀DNA檢測法

刷狀DNA檢測法是定量檢測血漿中HIV-1型RNA的一種方法。該技術(shù)基于分支DNA信號擴(kuò)大系 統(tǒng),是人工合成的帶有側(cè)鏈DNA片段,在每條鏈上都可以標(biāo)記可被激活的標(biāo)記物。通過發(fā)光強(qiáng)度來定量,發(fā)光強(qiáng)度與HIV-RNA含量呈比例。

3.核酸序列擴(kuò)增系統(tǒng)

核酸序列擴(kuò)增系統(tǒng)又稱自主序列復(fù)制系列或再生長序列復(fù)制技術(shù),是以RT-PCR為基礎(chǔ),但它無需將逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增分作兩部進(jìn)行，將靶核酸RT-DNA擴(kuò)增和信號放大擴(kuò)增。4.基因芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)是 20 世紀(jì) 90 年代末發(fā)展起來的新技術(shù),是在厘米見方的固相載體上,將基因以微點(diǎn)陣的形式排列,應(yīng)用核酸雜交的原理來檢測未知基因,具有操作簡單、自動(dòng)化程度高、檢測靶分子種類多、成本低、結(jié)果客觀性強(qiáng)等特點(diǎn)基因表達(dá)、腫瘤診斷、遺傳病診斷、基因分型等諸多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。對于抗 HIV逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶藥物的耐藥性分析、型檢測結(jié)果較好,但對非B亞型的耐藥性檢測存在漏檢和錯(cuò)檢。

二、HIIV抗體的確證 目前我國HIV抗體確證實(shí)驗(yàn)采用的方法是免疫印跡法，也就是westen blotting實(shí)驗(yàn)，簡稱WB。WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果有3種，陰性，陽性，和不確定。對于不確定結(jié)果每3個(gè)月隨訪1次，共2次，仍屬可疑，則報(bào)告陰性；如隨訪期間HIV抗體出現(xiàn)陽性反應(yīng)則報(bào)告陽性。雖然抗體確證不屬于分子生物學(xué)檢驗(yàn)，但由于它在臨床中經(jīng)常應(yīng)用，因此列舉出來。下面是HIV抗體篩查流程。

三、分型

在HIV-1型內(nèi)，根據(jù)env基因和gag基因序列的同源性差異可分為三個(gè)組：M組、O組和N組。M組內(nèi)又分為A~K11個(gè)亞型，各亞型的基因離散率是25％~35％、同一亞型內(nèi)的基因離散率是7％~20％。不同亞型可發(fā)生重組形成很多流行重組型。

目前HIV分型的方法主要集中在env、gag和pol區(qū)的某一段基因片段的分析。常用的方法有：SBT法、異源雙鏈核酸涌動(dòng)實(shí)驗(yàn)(HMA)、DNA酶聯(lián)免疫技術(shù)、基因芯片法、多重PCR法。

1.HMA：在HIV分型檢測中，利用PCR擴(kuò)增evn或者gag一段核酸序列，同時(shí)將各亞型的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增，將病毒擴(kuò)增產(chǎn)物和質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行混合，經(jīng)過變性和復(fù)性形成異源雙鏈產(chǎn)物，然后進(jìn)行電泳，根據(jù)涌動(dòng)速度確定亞型。

2.DEIA：該方法是將特異性DNA探針固定在酶標(biāo)板上，用病毒基因的擴(kuò)增產(chǎn)物與探針進(jìn)行雜交，產(chǎn)物與探針形成雜交鏈，結(jié)合抗DNA雙鏈單克隆抗體后通過酶標(biāo)二抗進(jìn)行顯色，從而確定待測樣品的亞型。

3.多重PCR：利用多重PCR進(jìn)行HIV亞型分析可以直接區(qū)別多種亞型。近年來，已針對gag、gp41基因區(qū)的亞型特異性引物用于多重PCR進(jìn)行HIV基因分型，尤其是針對不同流行區(qū)的優(yōu)勢流行株設(shè)計(jì)具有針對性的多種PCR引物，直接通過電泳進(jìn)行亞種鑒別，不失為一種簡便易行的方法。

四、病毒載量的分子生物學(xué)檢測

病毒載量測定是對感染者或病人體內(nèi)游離病毒核酸RNA含量的定量測定。通常使用血漿作為檢測樣品,根據(jù)不同要求改進(jìn)的RNA提取技術(shù)使該試驗(yàn)也可使用多種體液和組織。目前使用的病毒載量測定技術(shù)主要有3種:RT-PCR、分支DNA信號擴(kuò)大系統(tǒng)和核酸序列擴(kuò)增系統(tǒng)。三種技術(shù)均由核酸提取、擴(kuò)增或信號放大、定量檢測四部分組成。

五、基因型耐藥性的分子生物學(xué)檢測

目前，HIV-1耐藥性基因型檢測主要是鑒定病毒基因組的特定區(qū)域是否存在與特定抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物的易感性降低相關(guān)的特定突變。

耐藥性基因型檢測方法種類很多，各類方法主要集中在耐藥性突變位點(diǎn)的檢測能力和耐藥性突變位點(diǎn)的評價(jià)能力上。耐藥性突變位點(diǎn)檢測即指得到序列信息，目前采用的方法主要是序列測定和雜交法等。

1.序列測定法

序列測定法是直接檢測HIV基因中與耐藥性相關(guān)聯(lián)的基因突變，方法是從HIV感染者血漿中提取病毒RNA，采用PT-PCR方法擴(kuò)增和耐藥性密切相關(guān)的基因片段進(jìn)行序列測定后，使用相關(guān)工具軟件，根據(jù)已建立的耐藥性突變位點(diǎn)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行耐藥位點(diǎn)分析。2.POLA分析法

美國凱斯西儲大學(xué)傳染病系A(chǔ)RTS實(shí)驗(yàn)室研發(fā)了一種針對HIV-1pol基因片段的寡核苷酸鏈接分析法。該技術(shù)原理基于DNA連接酶的酶活性結(jié)構(gòu)域?qū)λ采w的4個(gè)堿基識別的高度敏感性以及結(jié)構(gòu)域?qū)λ采w的4個(gè)堿基識別的高度敏感性記憶液相芯片檢測的高通量，能同時(shí)對20中最常見的耐藥突變進(jìn)行檢測。

圖1中,A:野生型和突變型模板各50%混合,進(jìn)行連接識別反應(yīng);B:退火過程中,突變BCO的3’端和野生型模板之間發(fā)生一個(gè)錯(cuò)配(左)而與含突變位點(diǎn)的模板完全互補(bǔ)(右);C:只有與突變模板完全互補(bǔ)的突變BCO與RCO,才能被DNA連接酶連接,而與突變模板有一個(gè)錯(cuò)配的野生型BCO與RCO不能被連接酶作用;D:連接酶識別反應(yīng)的產(chǎn)物與負(fù)載了抗標(biāo)簽序列的微球共育。固定在微球上的RCOs 的生物素結(jié)合鏈霉親和素-R-藻紅蛋白報(bào)告分子。通過檢測報(bào)告分子的熒光強(qiáng)度確定樣品中突變模板的比例。該方法針對每個(gè)待檢突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)2種探針:上游的微球捕獲探針（BCO）和下游的報(bào)告分子捕獲探針（RCO）。BCO的5’末端是24個(gè)寡糖核苷酸的標(biāo)簽序列，能與特定微球上的抗體標(biāo)簽序列互補(bǔ)結(jié)合,3’末端與待檢位點(diǎn)上游模板互補(bǔ)結(jié)合。針對每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對BCO,一個(gè)與突變密碼子(如TAC編碼逆轉(zhuǎn)錄酶215位點(diǎn)處AZT(抗病毒藥物齊多夫定)抗性的Tvr)配對,另一個(gè)與野生型密碼子(如AAC編碼逆轉(zhuǎn)錄酶215位點(diǎn)處的Tyr)配對;每一對BCO的標(biāo)簽序列不同,可結(jié)合不同熒光微球。RCO與待檢位點(diǎn)下游模板互補(bǔ),其3 7端標(biāo)記了生物素,與鏈霉親和素一R.藻紅蛋白(SA-PE)結(jié)合后,可通過液相芯片工作站進(jìn)行定量檢測。研發(fā)人員又特別設(shè)計(jì)了用丁補(bǔ)償耐藥突變之外的模板多態(tài)性的競爭寡核苷酸(CMO)和用于去除降低敏感性的非特異性二級結(jié)構(gòu)的寡核苷酸(DNO)。加入反應(yīng)體系后,進(jìn)一步提高了檢測的敏感陛,對其中17個(gè) 突變的檢測其敏感性低于0.1%,能全面揭示患者體內(nèi)優(yōu)勢及劣勢耐藥突變情況。

六、HIV的分子生物學(xué)治療

目前艾 滋病的防治研究主要是針對 HIV-1 進(jìn)行的。自從 20 世紀(jì) 90 年代后高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)應(yīng)用于艾滋病的臨床,使 HIV-1 患者的病毒載量下降及 CD4+T 細(xì)胞水平升高 ,降低了 HIV 的發(fā)病率和病死率,顯著地改變了 HIV-1 感染者發(fā)展到 AIDS 的進(jìn)程。

1.反義 RNA 反義 RNA(antisense RNA)是指與 mRNA 或DNA 互補(bǔ)的小單鏈 RNA 分子,通過堿基配對形成 mRNA/ RNA 或 DNA/ RNA 的雜交雙鏈,從而抑制基 因表達(dá)并加速其降解。天然的反義 RNA 廣泛存在于 各類生物中,是細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控的一種方式。近幾年來很多研究通過人工合成的反義 RNA 靶向 HIV-1 蛋白及靶細(xì)胞受體等的基因,與靶基因配對形成無功能的雙鏈從而封閉或調(diào)節(jié)靶基因功能及產(chǎn)物表達(dá),有效地阻斷 HIV 在細(xì)胞中的復(fù)制。

2.RNA 干擾

RNA 干擾(RNA interference,RNAi)是指小雙鏈RNA 在細(xì)胞內(nèi)特異性地誘導(dǎo)與之同源互補(bǔ)的 mRNA 降解,抑制相應(yīng)基因的表達(dá),從而引起轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象。目前研究的有微小 RNA(microRNA, miRNA)、小干擾 RNA(small interfering RNA,siRNA)、短發(fā)夾 RNA(short hairpin RNA,shRNA)均能夠介導(dǎo) RNA 干擾作用。miRNA 是一類廣泛存在于真核生物中的單鏈非編碼小分子 RNA,通過與細(xì)胞內(nèi)靶 mR-NA 3’端-UTR 區(qū)不完全互補(bǔ)配對或與靶mRNA 完全 互補(bǔ)配對來發(fā)揮抑制mRNA翻譯或降解靶mRNA的作用。

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