第一篇：誠信制藥施工總結(jié)

江蘇誠信制藥有限公司新建廠區(qū)

施工總結(jié)

一、工程概況：

本工程位于啟東市濱江精細(xì)化工園，上海路以北，江蘇路以南，發(fā)電廠西側(cè)，該工程總用地面積為11247.3m2，總建筑面積27878.9m2，其中綜合樓4289.2 m2，研發(fā)、辦公樓4224.75m2，車間6150.6m2。

工程結(jié)構(gòu)類型為框架結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)抗震等級為三級。本工程承臺、基礎(chǔ)、地梁采用C30砼，電梯井砼采用C30抗?jié)B等級為S6，基礎(chǔ)砼墊層采用C15，框架梁柱、樓板等承重結(jié)構(gòu)均采用C30砼。

砌體工程：±0.000標(biāo)高以下采用砼實(shí)心磚，采用M10水泥砂漿砌筑； ±0.000標(biāo)高以上外墻采用200厚砼多孔磚，內(nèi)墻采用200厚加氣砼塊，±0.000標(biāo)高以上采用M5混合砂漿砌筑。

二、工程進(jìn)度控制：

本工程根據(jù)合同的要求，結(jié)合本工程的特點(diǎn)和我公司的實(shí)際機(jī)械、人員等情況，為保證本合同工程在合同規(guī)定的期限內(nèi)完工，在施工中我們采取以下措施確?？傔M(jìn)度計(jì)劃的實(shí)施：

(一)、從組織管理上保證工期

1、本工程實(shí)行項(xiàng)目法施工，根據(jù)本工程的特點(diǎn)，為便于管理和組織施工，我公司將組織充足精干人員，調(diào)集精良設(shè)備投入本工程項(xiàng)目之中。

2、建立以項(xiàng)目為核心的責(zé)權(quán)利體系，定崗、定人、授權(quán)，各負(fù)其責(zé)。

3、各班組堅(jiān)持每天一次的生產(chǎn)布置會，做到當(dāng)天的問題不留到下一天，并讓每個(gè)生產(chǎn)者清楚明天的工作，及時(shí)安排布置。

4、建立獎(jiǎng)罰嚴(yán)明的經(jīng)濟(jì)責(zé)任制，對提前完成任務(wù)的相關(guān)人員進(jìn)行獎(jiǎng)勵(lì)：未能按時(shí)完成任務(wù)的按拖延的天數(shù)進(jìn)行罰款，誰拖延誰受罰。

(二)、從計(jì)劃安排上保證工期

1、在工程開工前，嚴(yán)格按照《工程施工承包合同》的總工期要求，提出工程施工總體進(jìn)度計(jì)劃，并對其科學(xué)性和合理性，以及能否滿足合同工期的要求并有所提前等問題，進(jìn)行認(rèn)真審查。

2、在工程施工總進(jìn)度計(jì)劃的控制下，還要堅(jiān)持逐周編制出具體的工程施工

計(jì)劃和工作安排。

3、制定周密詳細(xì)的施工進(jìn)度計(jì)劃，對影響到總工期的作業(yè)給予人力和物力的充分保證，確保總進(jìn)度計(jì)劃的順利完成。

4、對生產(chǎn)要素認(rèn)真進(jìn)行優(yōu)化組合、動態(tài)管理。靈活機(jī)動地對人員、設(shè)備、物質(zhì)進(jìn)行調(diào)度安排，及時(shí)組織施工所需的人員、物資進(jìn)場，保障后勤供應(yīng)，滿足施工需要，保證連續(xù)施工作業(yè)。

5、縮短進(jìn)場時(shí)的籌備時(shí)間，早籌備，早施工。有計(jì)劃有程序的科學(xué)施工。

6、工程計(jì)劃執(zhí)行過程中，如發(fā)現(xiàn)未能按期完成計(jì)劃的情況時(shí)，必須及時(shí)檢查分析原因，立即采取有效的措施，調(diào)整下周的工作計(jì)劃，使上周延誤的工期在下周趕回來。

（三）、工期完成時(shí)間

本工程于2011年11月2日開工，至2013年2月25日竣工驗(yàn)收。

三、工程質(zhì)量控制方面

1、工程施工過程中，質(zhì)量控制在工程之初，便確立了明確的質(zhì)量目標(biāo)。在工程質(zhì)量管理方面，以質(zhì)量為中心按照公司有關(guān)質(zhì)量體系要求，建立了質(zhì)量保證機(jī)構(gòu)，由項(xiàng)目經(jīng)理和總工程師直接領(lǐng)導(dǎo)，嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量體系的有關(guān)規(guī)定，突出質(zhì)檢部門的權(quán)限，堅(jiān)持“質(zhì)量第一”的宗旨，切實(shí)將質(zhì)量意識貫徹到整個(gè)施工過程中以及各施工人員，制定了質(zhì)量控制措施：

①、組織技術(shù)人員認(rèn)真會審設(shè)計(jì)文件與圖紙，了解和掌握工程的要求、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，理解設(shè)計(jì)意圖，并對不清楚或不明確之處及時(shí)提交書面報(bào)告業(yè)主和監(jiān)理工程師解決。

②、根據(jù)工程的要求和特點(diǎn)，編制實(shí)施性施工組織設(shè)計(jì)以及專項(xiàng)施工方案，確定施工方法、場地布置、進(jìn)度計(jì)劃及勞動力、機(jī)械、材料計(jì)劃，并于施工過程中及時(shí)修訂以更能夠指導(dǎo)施工。

③、按工程施工時(shí)間段不同配備充足的勞動力資源，配齊工程需要的各類設(shè)備。各種機(jī)械設(shè)備經(jīng)檢驗(yàn)合格后方可以進(jìn)場，設(shè)備的型號、功能滿足施工工藝的要求，并嚴(yán)格執(zhí)行“設(shè)備維修保養(yǎng)管理制度”及“機(jī)械操作規(guī)程”。

④、認(rèn)真作好技術(shù)交底工作，使各級施工人員清楚的掌握將所施部位的施工工藝和方法、技術(shù)要求及控制要點(diǎn)等，作到高標(biāo)準(zhǔn)、高質(zhì)量的作好每道工序的“第一”，以高標(biāo)準(zhǔn)的起點(diǎn)約束日后的施工，確保施工操作的準(zhǔn)確性和規(guī)范性。⑤、嚴(yán)格執(zhí)行工程“三檢”制度，確保符合標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范的要求，對于自檢和監(jiān)理工程師提出的不滿足要求的部位、工序，一律進(jìn)行整改或返工。

⑥、嚴(yán)格實(shí)施測量復(fù)核制度：對工程使用的導(dǎo)線點(diǎn)、水準(zhǔn)點(diǎn)，進(jìn)行復(fù)核，復(fù)核無誤后建立使用于本工程的測量控制網(wǎng)，并報(bào)監(jiān)理驗(yàn)收審批。所有點(diǎn)位、高程測量，在工區(qū)測設(shè)完成后，由測量組復(fù)核，項(xiàng)目測量隊(duì)抽查的方法進(jìn)行，控制所有放樣、水準(zhǔn)測量準(zhǔn)確，誤差符合規(guī)范要求。

⑦、嚴(yán)格進(jìn)行材料控制。工程所使用的材料經(jīng)過檢驗(yàn)合格、報(bào)驗(yàn)允許使用的情況下方可用于本工程；除甲供材料外，所有自行采購的材料，在按程序?qū)┴浄降墓┴涃|(zhì)量、信譽(yù)、供貨能力等方面進(jìn)行評價(jià)，選取合的供貨方；⑧、嚴(yán)格的過程檢驗(yàn)及試驗(yàn)。嚴(yán)格執(zhí)行“過程檢驗(yàn)和試驗(yàn)控制程序”，作業(yè)班組長、專兼職質(zhì)檢員對施工作業(yè)的全過程進(jìn)行檢查、指導(dǎo)及反饋，作到每個(gè)部位、每道工序均達(dá)到優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)。

⑨、質(zhì)量記錄控制各種資料形成過程中執(zhí)行“文件及資料控制程序”。項(xiàng)目部各職能部門對各自形成的各類資料、質(zhì)量記錄進(jìn)行收集、保存、歸檔的工作，同時(shí)以技術(shù)部、質(zhì)檢部牽頭，對整個(gè)資料的形成、收集及歸檔進(jìn)行檢查，確保工程資料的準(zhǔn)確性、及時(shí)性及完整性。在工程后期，根據(jù)工程檔案編制要求進(jìn)行竣工資料的編制，保證按時(shí)、合格的移交竣工資料。

2、有效的質(zhì)量控制措施的實(shí)施，工程分別在2012年5月對綜合樓，研發(fā)樓主體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了驗(yàn)收工作，2012年6月對車間主體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了驗(yàn)收。兩次的驗(yàn)收工作全部一次性通過，工程質(zhì)量合格率達(dá)到100%。，得到了業(yè)主的一致好評。

四、工程安全文明施工控制方面

（一）、確定安全生產(chǎn)目標(biāo)

本項(xiàng)目安全目標(biāo)確定為“三無一杜絕一創(chuàng)建”，“三無”即：無工傷死亡事故；無交通死亡事故；無火災(zāi)事故；“一杜絕”即杜絕重傷事故；“一創(chuàng)建”即：創(chuàng)建文明工地。

(二)、建立安全生產(chǎn)體系

1、建立健全安全生產(chǎn)管理機(jī)構(gòu)，成立以項(xiàng)目經(jīng)理為組長的安全生產(chǎn)領(lǐng)導(dǎo)小組，全面負(fù)責(zé)并領(lǐng)導(dǎo)本項(xiàng)目的安全生產(chǎn)工作。

2、本項(xiàng)目實(shí)行安全生產(chǎn)三級管理，即：一級管理由項(xiàng)目經(jīng)理負(fù)責(zé)，二級管理由專職安全員負(fù)責(zé)，三級管理由領(lǐng)工員(或班組長)負(fù)責(zé)，各作業(yè)點(diǎn)設(shè)立安全監(jiān)督崗。

3、按照我公司頒布的《安全生產(chǎn)責(zé)任制》的要求，落實(shí)各級管理人員和操作人員的安全生產(chǎn)責(zé)任制做到縱向到底，橫向到邊，各自作好本崗位的安全工作。

4、本項(xiàng)目在開工前，由項(xiàng)目經(jīng)理部編制實(shí)施性安全施工組織設(shè)計(jì)，認(rèn)真執(zhí)行安全生產(chǎn)“五同時(shí)”原則，采取安全技術(shù)措施，確保施工安全。

5、實(shí)行逐級安全技術(shù)交底制，由經(jīng)理部組織有關(guān)人員對工程項(xiàng)目或?qū)ｍ?xiàng)進(jìn)行書面詳細(xì)安全技術(shù)交底，凡參加安全技術(shù)交底的人員要履行簽字手續(xù)，并保存資料。項(xiàng)目經(jīng)理部專職安全員要對安全技術(shù)措施的執(zhí)行情況進(jìn)行監(jiān)督檢查，并作好記錄。

6、加強(qiáng)施工現(xiàn)場安全教育：

1)針對工程特點(diǎn)，對所有從事管理和生產(chǎn)的人員進(jìn)行全面的安全教育，重點(diǎn)對專(兼)職安全員、領(lǐng)工員：班組長、電工、機(jī)械工、場內(nèi)機(jī)動車輛以及新工上崗、工人變崗和改變工藝等進(jìn)行培訓(xùn)教育。

2）對從事施工管理和生產(chǎn)的人員，未經(jīng)安全教育的不準(zhǔn)上崗；新工人(含民工、臨時(shí)工)未進(jìn)行三級教育的不準(zhǔn)上崗；變換工種或采用新技術(shù)、新工藝、新設(shè)備、新材料沒有進(jìn)行培訓(xùn)不準(zhǔn)上崗。

3)通過安全教育，增強(qiáng)職工安全意識，樹立“安全第一、預(yù)防為主”，的思想；掌握基本生產(chǎn)知識和安全操作技能；提高職工遵守施工安全紀(jì)律的自覺性，認(rèn)真執(zhí)行安全操作規(guī)定，做到不違章指揮、不違章操作、不傷害自己、不被他人傷害，達(dá)到提高職工整體安全防護(hù)意識和自我防護(hù)能力。

7、認(rèn)真執(zhí)行安全檢查制度

經(jīng)理部要保證檢查制度的落實(shí)，要規(guī)定定期檢查日期及參加檢查的人員，經(jīng)理部每周進(jìn)行一次；作業(yè)班組每天進(jìn)行一次，非定期檢查應(yīng)視工程情況如施工準(zhǔn)備前、施工危險(xiǎn)性、采取新工藝、天氣變化時(shí)、交接班中等要進(jìn)行檢查，并要有領(lǐng)導(dǎo)值班，對檢查中發(fā)現(xiàn)的安全問題按照“三不放過”的原則制定整改措施，定人限期進(jìn)行整改。使“管生產(chǎn)必須管安全”的原則真正落實(shí)。

（三）、文明施工

現(xiàn)場文明施工的程度直接關(guān)系到企業(yè)的形象，為保證工程施工文明有序，采取如下措施：

1、加強(qiáng)對施工人員的法制教育，杜絕一切非法活動。

2、場地內(nèi)按施工組織設(shè)計(jì)挖排水溝，形成排水系統(tǒng)，保持場內(nèi)不積水。場內(nèi)設(shè)專人打掃衛(wèi)生，保持環(huán)境清潔。

3、在編制施工組織設(shè)計(jì)時(shí)把文明施工作為一項(xiàng)主要內(nèi)容之一，現(xiàn)場由專人分管文明施工。

4、工地適當(dāng)位置處設(shè)標(biāo)牌，標(biāo)明工程名稱、施工單位、工期、工程主要負(fù)責(zé)人姓名和監(jiān)督電話，自覺接受社會監(jiān)督。

5、工程材料、構(gòu)件分類分規(guī)格存放整齊。機(jī)具設(shè)備定人保養(yǎng)，停放要整齊有序。

6、現(xiàn)場施工注意工程完成后對現(xiàn)場進(jìn)行清理，做到“工完料盡場地清”。

六、總結(jié)經(jīng)驗(yàn)和體會

整個(gè)項(xiàng)目的施工過程中，為了保證施工工期順利完成，我們在施工過程中克服了種種困難和不便，為的就是把我們負(fù)責(zé)的這項(xiàng)工程更快更好地完成，我們本著認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度做好這項(xiàng)工作，寄希望于這是一項(xiàng)績優(yōu)工程。

南通英雄誠信制藥項(xiàng)目部

2013年3月5日

第二篇：生物技術(shù)制藥總結(jié)

生物技術(shù)：人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的的技術(shù)

1基因工程制藥：利用基因重組技術(shù)將外援基因?qū)胨拗骶蚣?xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，以獲得蛋白質(zhì)藥物的過程。

2.載體：是攜帶外源目的基因或DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)外援基因或DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。

細(xì)胞傳代passage：將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)器皿中消化、分散并接種至另一個(gè)培養(yǎng)器皿中的操作。細(xì)胞克隆培養(yǎng)（clonal culture）：即單細(xì)胞分離培養(yǎng)，是將動物組織分散后，將一個(gè)細(xì)胞從群體細(xì)胞中分離出來，由單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成純系細(xì)胞集群。

動物細(xì)胞的復(fù)蘇：其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。

細(xì)胞融合（cell fusion）：是指在外力（誘導(dǎo)劑或促融劑）作用下，兩個(gè)或兩個(gè)以上的異源（種、屬間）細(xì)胞或原生質(zhì)體相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合并形成雜種細(xì)胞的現(xiàn)象，或稱細(xì)胞雜交。

轉(zhuǎn)基因動物（transgenic animal）：采用基因工程技術(shù)將外源目的基因?qū)雱游锷臣?xì)胞、胚胎干細(xì)胞和早期胚胎，并在受體動物的染色體上穩(wěn)定整合，在經(jīng)過發(fā)育途徑將外源目的基因穩(wěn)定地傳給子代，通過這項(xiàng)技術(shù)所獲得的動物即為轉(zhuǎn)基因動物。

胚胎干細(xì)胞（embryo stem cell）：簡稱ES細(xì)胞，是從早期胚胎細(xì)胞團(tuán)分離出來并能在體外培養(yǎng)的一種高度未分化的、具有形成所有成年細(xì)胞類型能力的全能干細(xì)胞。它是正常二倍體型，像早期胚胎細(xì)胞一樣具有發(fā)育上的全能性。

抗體工程制藥（antibody engineering pharmaceutics）：利用基因工程、細(xì)胞工程（包括動物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程）和轉(zhuǎn)基因動物及轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)生產(chǎn)抗體藥物的過程。

單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）：簡稱單抗，將能大量擴(kuò)增和永生的骨髓瘤細(xì)胞和能合成分泌特異性抗體的B細(xì)胞（僅識別一種抗原表位）進(jìn)行融合得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細(xì)胞僅能合成及分泌抗單一抗原表位的特異性抗體。

雜交瘤細(xì)胞克隆化（cloning）：是指將陽性孔中分泌抗體的單個(gè)細(xì)胞分離出來。融合后的雜交瘤細(xì)胞一般要經(jīng)過3次克隆化才能達(dá)到100%的陽性克隆。

雙特異性抗體（bispecific antibody，bsAb）：亦稱雙功能抗體，是含有兩個(gè)不同配體結(jié)合位點(diǎn)的抗體分子，它有兩個(gè)不同的抗原結(jié)合部位（兩個(gè)臂），可分別結(jié)合兩種不同的抗原表位。嵌合抗體（chimeric antibody）：是利用DNA重組技術(shù)，將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的抗體，表達(dá)的抗體分子中輕、重鏈的V區(qū)是異源的，而C區(qū)是人源的，即整個(gè)抗體分子的60%~70%是人源的。

人源化抗體（humanized antibody，hAb）：通過CDR移植即把鼠抗體的CDR（互補(bǔ)決定區(qū)）序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)所得到的抗體，也稱CDR移植抗體或改型抗體。該抗體既具有鼠源性單抗的特異性又保持了人抗體的功能（C區(qū)的功能）。

免疫原性（immunogenicity）：抗原能刺激機(jī)體特異性免疫細(xì)胞，使其活化、增值、分化，最終產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)（抗體或致敏淋巴細(xì)胞）的特性。

免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）：抗原與相應(yīng)免疫效應(yīng)物質(zhì)在體內(nèi)或體外相遇時(shí)，可發(fā)生

特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)的特性。

減毒活疫苗（live attenuated vaccine）：是通過不同的方式手段使病原體的毒性即致病

性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。

滅活疫苗（inactivated）：是將病原體經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活純化處理，使其完全喪失感染性，但保留了病原體的幾乎全部組分因此滅活疫苗具有較好的免疫原性和安全性。

亞單位疫苗（subunit vaccine）：利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原）制成、能誘發(fā)

機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗。

分解代謝阻遏（catabolite repression）：在菌體的生長階段被菌體快速利用的碳源會產(chǎn)

生大量的分解產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物阻遏次級代謝酶系的合成，只有當(dāng)這類碳源被消耗完后，阻遏作用被消除，菌體才由生長階段轉(zhuǎn)入次級代謝產(chǎn)物合成階段，這種發(fā)酵過程中的次級代

謝產(chǎn)物在碳源被消耗盡時(shí)才產(chǎn)生和積累的現(xiàn)象稱為分解代謝阻遏。

生物技術(shù)：人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原

理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的的技術(shù)。

種齡（inoculumage）：種子罐中培養(yǎng)的菌絲轉(zhuǎn)入下一級種子罐或發(fā)酵罐時(shí)得培養(yǎng)時(shí)間

生物技術(shù)藥物的特性？

（1）理化性質(zhì)特性（1）相對分子量大（2）結(jié)構(gòu)復(fù)雜：蛋白質(zhì)和核酸均為生物大分子，蛋

白質(zhì)含有四級結(jié)構(gòu)（3）穩(wěn)定性差（2）藥理學(xué)作用特性（1）活性與作用機(jī)制明確：活性物

質(zhì)對生理功能的調(diào)節(jié)機(jī)制比較清楚（2）作用針對性強(qiáng)：有特定的靶分子、靶細(xì)胞或靶器官

（3）毒性低：生物技術(shù)藥物本身是體內(nèi)天然存在的物質(zhì)或它們的衍生物（4）體內(nèi)半衰期短

（5）有種屬特異性（6）可產(chǎn)生免疫原抑制（3）生產(chǎn)制備特性（1）藥物分子在原料中的含量低（2）原料液中常存在降解目標(biāo)產(chǎn)物的雜質(zhì)：應(yīng)采取快速分離純化的方法以除去影響

目標(biāo)產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)（3）制備工藝條件溫和：目的產(chǎn)物不穩(wěn)定（4）分離純化困難：需要

多種不同原理的層析單元操作才能達(dá)到要用的純度（5）產(chǎn)品易受有害物質(zhì)（4）質(zhì)量控制特

性

質(zhì)粒的特點(diǎn)：（1）是指獨(dú)立于原核生物染色體之外具有自主復(fù)制能力的遺傳物質(zhì)。（2）質(zhì)粒

具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力（3）質(zhì)粒具有不相容性：兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒不

能在同一宿主細(xì)胞中穩(wěn)定共存。4..共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(ccDNA)，開環(huán)DNA(ocDNA)，線狀

DNA(lDNA)在瓊脂糖凝膠電泳中

5.復(fù)制子松弛型復(fù)制子的復(fù)制和宿主蛋白的合成功能

無關(guān)，宿主染色體DNA復(fù)制受阻時(shí)，質(zhì)粒仍可復(fù)制；嚴(yán)謹(jǐn)型復(fù)制子的復(fù)制與宿主蛋白質(zhì)的合成相關(guān)，因此在每個(gè)宿主細(xì)胞中為低拷貝數(shù)，僅1~3個(gè)。

6.克隆表達(dá)的質(zhì)粒載體涉及三個(gè)要素：

（1）復(fù)制子（2）選擇標(biāo)記：由質(zhì)粒攜帶的賦予宿主細(xì)胞新的表型的基因，用于鑒定和篩選

轉(zhuǎn)化有質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。常見的標(biāo)記：氨芐西林（Amp），卡那霉素（Kan）（3）多克隆位點(diǎn)

（MCS）：質(zhì)粒載體中由多個(gè)限制性內(nèi)切酶識別序列密集排列形成的序列。

7.目的基因常用制備方法

(1)化學(xué)合成法（2）PCR法：在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通

過下列步驟擴(kuò)增DNA：a）變性：雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；b）退火：降

低溫度，引物與單鏈模板結(jié)合；c）延伸：溫度調(diào)整至DNA聚合酶最適宜溫度，最終與單鏈

模板形成雙鏈，并開始下一個(gè)變性、退火、延伸循環(huán)。（3）基因文庫法（4）cDNA文庫法

8.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

9.（1）DNA片段之間的連接方式：粘性末端的連接效率高于平頭末端。（2）目的基因與載

體的濃度和比例：增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因與載體DNA的摩爾數(shù)比應(yīng)大

于1.（3）連接溫度、時(shí)間、連接酶的活性及緩沖液。

9.重組DNA導(dǎo)入大腸桿菌，常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法：氯化鈣法

10.重組子的篩選與鑒定：

（1）載體遺傳標(biāo)記法：a)抗生素抗性篩選法

b)互補(bǔ)篩選法：重組子轉(zhuǎn)化成宿主細(xì)胞，載體的表達(dá)產(chǎn)物與宿主細(xì)胞中營養(yǎng)缺陷性突變發(fā)生

互補(bǔ)作用，從而實(shí)現(xiàn)重組子的篩選。藍(lán)白斑篩選：lacZα基因可編碼β—半乳糖苷酶α氨基

端的α互補(bǔ)肽段，與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β—半乳糖苷酶α實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)，可分解底物5-溴-4-

氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，形成藍(lán)色菌落。由于lacAα基因的插入失活而成白色，空載體的宿主細(xì)胞呈藍(lán)色。c)營養(yǎng)缺陷篩選法d噬菌斑篩選法(2)核酸分子雜交法

(3)限制性內(nèi)切酶圖譜法(4)DNA序列測定法：雙脫氧終止法(5)目的基因表達(dá)產(chǎn)物測定法

12.外源基因在大腸桿菌中的表達(dá)形式：

(1)胞內(nèi)表達(dá)：(a)非融合蛋白的胞內(nèi)表達(dá)：形成包涵體（B）融合蛋白的胞內(nèi)表達(dá)：在大腸桿

菌內(nèi)較穩(wěn)定（2）分泌表達(dá)：（a)分泌至周質(zhì)（b）分泌至胞外

11.外源基因在原核生物中表達(dá)的重要調(diào)控元件

(1)啟動子：是DNA鏈上能與RNA聚合酶結(jié)合并起始mRNA合成的一段序列，是決定外源基

因在原核生物中表達(dá)效率的關(guān)鍵因素。(2)核糖體結(jié)合位點(diǎn)：SD序列(3)終止子

13.大腸桿菌中外源蛋白表達(dá)效率的影響因素：(1)外源基因密碼子：偏好密碼子（蛋白質(zhì)合成迅速，錯(cuò)配率低）和稀有密碼子(2)mRNA結(jié)構(gòu)：減少G、C含量，增加A、T含量(3)表達(dá)

載體：高拷貝數(shù)、適用范圍廣、穩(wěn)定性高、表達(dá)產(chǎn)物容易純化(4)外源蛋白穩(wěn)定性

14.分離純化技術(shù)應(yīng)滿足下列要求：(1)技術(shù)條件要溫和，能保持目的產(chǎn)物的生物活性；(2)選

擇性要好(3)回收率要高(4)兩個(gè)技術(shù)之間要能直接銜接(5)整個(gè)分離純化過程要快

15.基因重組蛋白的主要分離技術(shù)

(1)離心(2)沉淀(3)膜分離(4)雙水相萃取

16基因重組蛋白的主要純化技術(shù):

(1)離子交換層析(2)親和層析(3)凝膠過濾層析(4)反相層析和疏水層析

17.選擇分離純化方法的依據(jù)：

（元，層析分離次序的選擇也同樣重要。(3)根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇(a)具有良好的穩(wěn)

定性、重復(fù)性和較高的安全性(b)盡可能減少組成工藝的步驟(c)分離純化工藝所用的時(shí)間要

盡可能的短(d)工藝和技術(shù)必須高效

18．基因工程藥物的質(zhì)量控制要點(diǎn)

(1)蛋白質(zhì)含量的測定(2)蛋白質(zhì)純度檢測(3)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量測定(4)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定(5)蛋

白質(zhì)序列分析(6)內(nèi)毒素分析、宿主蛋白與核酸殘留分析

19.蛋白質(zhì)含量的測定

(1)紫外吸收法(2)BCA法(3)Lowry法(4)考馬斯亮藍(lán)法(5)SDS-PAGE掃描分析法

20.蛋白質(zhì)純度的檢測：電泳法、層析法、質(zhì)譜法、末端氨基酸殘基分析法

21.蛋白質(zhì)Mr測定有SDS-PAGE法、凝膠層析法、質(zhì)譜法

22.蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定的常用方法：等電聚焦法。

23.蛋白質(zhì)序列的分析:N-端氨基酸序列分析，C-端氨基酸序列分析

根據(jù)體外培養(yǎng)時(shí)動物細(xì)胞對生長基質(zhì)的依賴性，可將動物細(xì)胞分為

(1)貼壁依賴性細(xì)胞(2)非貼壁依賴性細(xì)胞(3)兼性貼壁細(xì)胞

1.動物細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境條件

(1)培養(yǎng)溫度（哺乳類37℃，昆蟲25~28℃）(2)pH值（大多數(shù)7.2~7.4）(3)通氧量（一定量的CO2）(4)防止污染(5)基本營養(yǎng)物質(zhì)(6)滲透壓

3.動物細(xì)胞的培養(yǎng)特性

(1)比微生物細(xì)胞大得多，無細(xì)胞壁，抗機(jī)械強(qiáng)度低，對剪切力敏感，適應(yīng)環(huán)境能力差；(2)

倍增時(shí)間長，生長緩慢，正常二倍體細(xì)胞的生長壽命是有限的；(3)對培養(yǎng)基要求高，易受

微生物污染，培養(yǎng)時(shí)需要添加抗生素；(4)生長大多需貼附于基質(zhì)，相互粘連以集群形式存

在，并有接觸抑制現(xiàn)象；(5)多半將產(chǎn)物分泌在細(xì)胞外，便于收集和純化；(6)對蛋白質(zhì)的合成條件和修飾功能與細(xì)菌不同，動物細(xì)胞可對蛋白質(zhì)進(jìn)行完善的翻譯后修飾，特別是糖基化，與天然產(chǎn)品更一致，更適合于臨床應(yīng)用。

4.原代培養(yǎng)的主要步驟

(1)從健康動物體內(nèi)無菌條件下取出適量組織，剪切成小薄片；(2)加入適宜濃度的胰蛋白酶

或膠原酶和EDTA等進(jìn)行消化作用使細(xì)胞分散；(3)將分散的細(xì)胞進(jìn)行洗滌并純化后，以2×

10^6~7×10^6 /ml的濃度加到培養(yǎng)基中，37℃下進(jìn)行原代培養(yǎng)，并適時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。分為

組織塊培養(yǎng)和單層細(xì)胞培養(yǎng)兩種方法。

5.動物細(xì)胞深低溫保存的基本原理

在-70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于完全停滯狀態(tài)，故可以長期保存。

在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)

生機(jī)械損傷、電解質(zhì)濃度升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白質(zhì)變性等，能引起細(xì)胞

死亡。目前為了保存細(xì)胞，都采用液氮低溫（-196℃）凍存的方法。

6.動物細(xì)胞的復(fù)蘇

其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍

存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。

7.動物細(xì)胞營養(yǎng)要求特點(diǎn)

(1)碳源不能為無機(jī)物，大多為葡萄糖；(2)氮源不能為無機(jī)物，主要為各種氨基酸；(3)在很

多情況下尚需添加5%~20%的小牛血清或適量的動物胚胎浸出液。

8.動物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法

(1)懸浮培養(yǎng)法(2)微載體培養(yǎng)法(3)多孔載體培養(yǎng)法(4)微囊化培養(yǎng)法(5)中空纖維培養(yǎng)法

9.誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法主要有:(1)病毒法(2)PEG法(3)電擊法(4)激光法

10.轉(zhuǎn)基因動物生物反應(yīng)器（整體掌握？）

(1)轉(zhuǎn)基因動物乳腺生物反應(yīng)器（藥用蛋白，如抗凝血Ⅲ、抗胰蛋白酶、葡萄糖苷酶、C蛋白）

(2)轉(zhuǎn)基因動物血液生物反應(yīng)器（人血紅蛋白、抗體或非活性狀態(tài)的融合蛋白）(3)轉(zhuǎn)基因動

物尿液生物反應(yīng)器（促性腺激素）(4)轉(zhuǎn)基因雞（蛋）生物反應(yīng)器（人干擾素）

1.單克隆抗體技術(shù)的基本原理

基于動物細(xì)胞融合技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)的，即骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞的融合。骨髓瘤細(xì)胞在體外

培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；抗原免疫的B細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后形成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了兩個(gè)親代

細(xì)胞的特性，既具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特異性抗

體的能力。通常使用HAT（H為次黃嘌呤、A為氨基蝶呤、T為胸腺嘧啶核苷）選擇培養(yǎng)基

對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選。未融合的脾細(xì)胞因不能在體外長期存活而死亡，未融合的骨髓瘤細(xì)

胞合成DNA的從頭合成途徑被培養(yǎng)基中的A阻斷，又因缺乏HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸

核糖轉(zhuǎn)移酶）和TK（胸腺嘧啶核苷激酶），不能利用培養(yǎng)基中的H和T完成DNA的合成過

程而死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養(yǎng)基

中長期存活與繁殖并分泌抗體。

2.單克隆抗體的大量制備主要方法:（1）體內(nèi)培養(yǎng)法（2）體外培養(yǎng)法

6.重組ScFv的應(yīng)用:(1)用于構(gòu)建和生產(chǎn)免疫毒素(2)用于腫瘤的影像分析和治療

7.噬菌體抗體庫技術(shù)的基本原理:用PCR技術(shù)從人免疫細(xì)胞中擴(kuò)增出整套的VH和VL基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達(dá)在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗

體基因的存在，同時(shí)在其表面又有抗體分子的表達(dá)，可以方便地利用抗原-抗體特異性結(jié)合而篩選出所需要的抗體，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。

7.噬菌體抗體庫構(gòu)建過程

(1)從外周血或脾、淋巴結(jié)等組織中分離B細(xì)胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；

(2)應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增不同的抗體基因片段；

(3)構(gòu)建噬菌體載體；(4)用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化細(xì)菌，構(gòu)建全套抗體庫。

通過多輪的抗原親和吸附（結(jié)合）-洗脫-擴(kuò)增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。其中，噬

菌體抗體庫的篩選是關(guān)鍵環(huán)節(jié)和步驟。

減毒活疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：

（1）通過自然感染途徑接種，可以誘導(dǎo)包括體液免疫、細(xì)胞免疫和粘膜免疫在內(nèi)的更全面的免疫應(yīng)答，使機(jī)體獲得更廣泛的免疫保護(hù)；（2）由于使用的是活的微生物他們可以在體內(nèi)

長時(shí)間起作用而誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，且由于活的微生物有增殖的特性，理論上只需要接

種一次，即可達(dá)到滿意的免疫效果；（3）可能引起水平傳播擴(kuò)大免疫效果，增強(qiáng)群體免疫屏

障；(4)一般不需要再疫苗中添加佐劑，生產(chǎn)工藝一般不需要濃縮純化，價(jià)格低廉。

缺點(diǎn)：

(1)一般減毒活疫苗均保留一定殘余毒力，對一些個(gè)體如免疫缺陷者可能誘發(fā)嚴(yán)重疾病，并

且由于種種原因如基因修飾等，減毒活疫苗可能出現(xiàn)毒力回復(fù)即“返祖”現(xiàn)象；(2)減毒活

疫苗是活的微生物制劑，可能造成環(huán)境污染而引發(fā)交叉感染等，并可能滯留在環(huán)境中形成傳

染源；(3)缺損顆?？赡芨蓴_免疫效果，因此產(chǎn)品分析評估較為困難；(4)保存運(yùn)輸?shù)葪l件要

求較高，如需冷藏等。

1.滅活疫苗的特點(diǎn)：(1)滅活疫苗常需多次接種；(2)接種滅活疫苗產(chǎn)生的抗體滴度隨著時(shí)

間而下降；(3)滅活疫苗需要量大。

第七章 發(fā)酵工程制藥

1.發(fā)酵類型：(1)微生物菌體發(fā)酵(2)微生物的酶(3)微生物的代謝產(chǎn)物發(fā)酵(4)微生物轉(zhuǎn)化發(fā)

酵(5)生物工程菌發(fā)酵

2.微生物發(fā)酵生產(chǎn)藥物的分類：(1)抗生素類(2)氨基酸類(3)核苷酸類(4)維生素類(5)甾體類

激素(6)多糖類(6)治療酶及酶抑制劑

3.菌種保藏方法：(1)斜面低溫保藏法(2)石蠟油封存法(3)沙土管保藏法(4)麩皮保藏法(5)甘

油懸液保藏法(6)冷東真空干燥保藏法(7)液氮超低溫保藏法(8)宿主保藏法

4.種子液具備的條件：(1)菌種的生長活力強(qiáng)，轉(zhuǎn)種至發(fā)酵罐后能迅速生長，延遲期短；(2)

生理狀態(tài)穩(wěn)定；(3)菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求；(4)無雜菌污染，保證純種培養(yǎng)；()保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力

5.微生物的發(fā)酵方式：（1）分批發(fā)酵（2）補(bǔ)料—分批發(fā)酵（3）半連續(xù)發(fā)酵（4）連續(xù)發(fā)酵

5.發(fā)酵過程的中間分析項(xiàng)目：（1）產(chǎn)物產(chǎn)量（2）PH值（3）糖（4）氨基氮（5）菌絲形

態(tài)

6.發(fā)酵過程的影響因素及控制：（1）菌體濃度的影響及控制（2）營養(yǎng)物質(zhì)對發(fā)酵的影響

及控制（3）溫度的影響及控制（4）PH的影響及控制（5）溶氧的影響及控制（6）二氧化碳的影響及控制（7）泡沫的影響及控制（8）染菌對發(fā)酵的影響

第三篇：制藥質(zhì)量總結(jié)樣板（定稿）

第一部分 2017工作總結(jié)

一、成績

1、QA團(tuán)隊(duì)管理

2017年QA團(tuán)隊(duì)由年初4人增加到6人。

2、體系管理

2017年結(jié)合公司ISO9001由2008升級到2015，重新修訂和完善公司質(zhì)量管理體系文件。

3、審計(jì)管理

2017年接受管理評審、內(nèi)部審核、認(rèn)證審核、監(jiān)督審核和客戶審核56次。

4、產(chǎn)品質(zhì)量改進(jìn)/產(chǎn)品質(zhì)量回顧 2017年完成公司36種產(chǎn)品質(zhì)量回顧。

5、放行管理

2017年完成50種物料，30000批次放行；36種中間產(chǎn)品1800批次產(chǎn)品放行；36種產(chǎn)品3600批次放行。

6、驗(yàn)證管理

2017年完成年初既定的20項(xiàng)驗(yàn)證項(xiàng)目。

7、生產(chǎn)過程監(jiān)控

2017年按照公司要求完成所有的監(jiān)控項(xiàng)目。

8、偏差/投訴管理

2017年共完成偏差調(diào)查報(bào)告20份，其中設(shè)備管理方面4份、生產(chǎn)過程5份，其他11份。

9、供應(yīng)商管理

2017年按照年初計(jì)劃完成供應(yīng)商審計(jì)42家。

10、召回/追溯管理

2017年完成模擬召回和追溯演練20批次。

11、變更管理

2017年完成變更16項(xiàng)，其中物料變更2項(xiàng)、設(shè)備設(shè)施變更7項(xiàng)，其他7項(xiàng)。

12、培訓(xùn)

2017年按照年初計(jì)劃，完成42項(xiàng)培訓(xùn)。

13、法規(guī)/標(biāo)準(zhǔn)管理

2017年收集和識別法律法規(guī)12項(xiàng)目，并將其轉(zhuǎn)化為公司相關(guān)文件并實(shí)施。

14、計(jì)量管理

2017年新成立計(jì)量室后，按照國家相關(guān)計(jì)量法規(guī)對公司計(jì)量器具進(jìn)行管理，其中送外檢62次，內(nèi)部校驗(yàn)260次。

15、其他

配合公司其他部門完成相關(guān)工作。

二、不足

1、QA團(tuán)隊(duì)成員知識和能力略顯不足

2、計(jì)量管理與技能不足

3、驗(yàn)證管理知識欠缺

4、偏差管理不足

三、改進(jìn)

1、針對QA人員職責(zé)和知識水平，制定和實(shí)施相關(guān)知識培訓(xùn)。

2、加外部計(jì)量管理知識和技能培訓(xùn)

3、參加外部驗(yàn)證和偏差管理培訓(xùn)

第二部分 2018工作計(jì)劃 1、2018年管理評審、內(nèi)部審核（自檢）計(jì)劃 2、2018年體系轉(zhuǎn)版計(jì)劃 3、2018年驗(yàn)證計(jì)劃 4、2018年供應(yīng)商審計(jì)計(jì)劃 5、2018年項(xiàng)目變更計(jì)劃 6、2018年質(zhì)量培訓(xùn)計(jì)劃 7、2018年檢定/校驗(yàn)計(jì)劃 8、2018年產(chǎn)品質(zhì)量改進(jìn)計(jì)劃

第四篇：制藥實(shí)驗(yàn)總結(jié)

1、溶液1，2，3，的作用？

溶液Ⅰ的作用：懸浮大腸桿菌菌體，而且加溶液I后，必須要將菌體懸浮徹底，不得有塊狀大顆粒狀呈現(xiàn)，是質(zhì)粒DNA提取的首要關(guān)鍵。且其中含有的溶霉菌可以水解菌體細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵，因而具有溶菌作用。

溶液

2、提供堿性條件，在NaOH與SDS的共同作用下使大腸桿菌瞬間裂解，并變性核DNA。當(dāng)細(xì)胞懸浮于NaOH和十二烷基酸鈉（SDS）溶液中使，在高pH（堿性環(huán)境）的作用下細(xì)胞發(fā)生裂解，此外蛋白質(zhì)和染色體DNA發(fā)生變性與細(xì)胞碎片一起沉淀下來。溶液3：（醋酸鉀和醋酸），該溶液所含有的高濃度鉀離子與溶液體系中的十二烷基硫酸鈉（即SDS與NaOH所形成的可溶性物質(zhì)）發(fā)生反應(yīng)形成十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate,PDS），從而將與之結(jié)合的絕大部分大腸桿菌蛋白質(zhì)以及很長的基因組DNA一起沉淀沉淀，與質(zhì)粒分離開來；中和氫氧化鈉使質(zhì)粒DNA復(fù)性。

因?yàn)榛蚪MDNA太長了，長長的DNA自然容易被PDS給共沉淀了，盡管SDS并不與DNA分子結(jié)合。

2、各試劑的作用？ 溶液

1、葡萄糖的作用是使懸浮后的大腸桿菌不會很快沉積到管子的底部，增加溶液的粘度，維持滲透壓及防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+ 和Mg2+等二價(jià)金屬離的螯合劑，在溶液I中加入EDTA，是要把大腸桿菌細(xì)胞中的二價(jià)金屬離子都螯合掉，從而起到抑制 DNase對DNA的降解和抑制微生物生長的作用。另外也可保證溶菌酶活性。任何生物化學(xué)反應(yīng)，首先要控制好溶液的pH，因此用適當(dāng)濃度的和適當(dāng)pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不過的了

溶液

2、提供堿性條件，在NaOH與SDS的共同作用下使大腸桿菌瞬間裂解，并變性核DNA。當(dāng)細(xì)胞懸浮于NaOH和十二烷基酸鈉（SDS）溶液中使，在高pH（堿性環(huán)境）的作用下細(xì)胞發(fā)生裂解，此外蛋白質(zhì)和染色體DNA發(fā)生變性與細(xì)胞碎片一起沉淀下來。溶液

3、醋酸中和堿。

25/24/1的酚/氯仿/異戊醇：

A．水飽和酚的比重略比水重，碰到高濃度的鹽溶液，離心后酚相會跑到上層，不利于含質(zhì)粒的水相的回收；加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始終在下層，方便水相的回收；

B．酚與水有很大的互溶性，如果單獨(dú)用酚抽提后會有大量的酚溶解到水相中，而酚會抑制很多酶反應(yīng)。而且含質(zhì)粒DNA的水相會部分進(jìn)入到酚中，造成損失！C．添加異戊醇，主要是為了讓離心后上下層的界面更加清晰，方便了水相的回收。

無水乙醇：回收后的水相含有足夠多的鹽，DNA在無水乙醇中的溶解度小，因此只要加入2倍體積的乙醇，在室溫放置幾分鐘后離心就可以將質(zhì)粒DNA沉淀出來。70%乙醇：如果感覺發(fā)生了鹽的沉淀，就用70％的乙醇多洗幾次。（除鹽），3、注意事項(xiàng)

（2）用不新鮮的0.4 M NaOH，即便有SDS也無法有效溶解大腸桿菌。因此必須使用新鮮的0.4 M NaOH試劑進(jìn)行配制。

（3）SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?。?）變性時(shí)間不宜過長。

（5）用移液器操作時(shí)一定要小心，特別是加入溶液二、三后一定不要?jiǎng)×艺鹗?，以免切碎DNA。

質(zhì)粒DNA的酶切鑒定及瓊脂糖凝膠電泳

1、限制性核酸內(nèi)切酶的特性，在基因工程中的作用？ 特性（基因工程）、定義。

作用基因工程的重要工具，能切割DNA獲得目的基因，切割質(zhì)粒留下連接位點(diǎn)。此外，雙切酶能保證基因的定向插入，提高重組率。產(chǎn)生粘性末端惑平末端。

目前, 基因工程上, 限制酶主要應(yīng)用于以下兩方面

（1）目的基因與載體的重組

細(xì)菌細(xì)胞中的限制酶能水解外源DNA , 因此必須通過適當(dāng)?shù)妮d體(質(zhì)?；蚴删w)的幫助才能將外源DNA引人受體細(xì)胞并在其中增殖和表達(dá)。將供體DNA與載體用同樣的限制酶處理, 使載體帶上各種各樣的外源DNA片斷, 然后引人受體細(xì)菌細(xì)胞增殖, 菌細(xì)胞增殖, 再篩選出所需的菌株, 便獲得帶有某一目的基因的繁殖系.用這種方法, 已成功地將酵母菌的咪哇甘油磷酸脫水酶基因、夕一異丙基蘋果酸脫氫酶基因和色氨酸合成酶基因通過幾噬菌體轉(zhuǎn)人大腸桿菌。2）建造新的基因載體作為基因載體,在引人受體細(xì)胞后, 必須有較高的復(fù)制率, 以求獲得大量的基因產(chǎn)物；必須具備一個(gè)選擇性標(biāo)志, 以便篩選；還要有一至多種限制酶的作用位點(diǎn)（每種酶只有一個(gè)切口）；

2、瓊脂糖凝膠電泳的注意事項(xiàng)?

一、配膠：

1、電子稱的使用，要時(shí)刻保持電子稱的精確性，清潔性，根據(jù)不同濃度的膠配置瓊脂糖。

2、加TAE的量要適當(dāng)，以免配出的膠太薄導(dǎo)致膠孔太淺或濃度太低。

3倒膠前，膠托要洗干凈，并擦干，倒膠時(shí)要待膠冷到一定溫度搖勻，盡量不要產(chǎn)生氣泡。若膠的溫度過高要頂著膠托，防止膠變形。

二、點(diǎn)樣電泳

1孔板要干凈，loading點(diǎn)樣要均勻，控制1~2ul的量，并做好對應(yīng)標(biāo)記。2點(diǎn)樣后及時(shí)蓋上膠墊注意不要蓋反。

5加樣時(shí)槍頭要上緊，吸樣均勻準(zhǔn)確，排液時(shí)槍頭不要有殘留

3點(diǎn)電泳前要檢查膠是否合格，點(diǎn)樣要對準(zhǔn)膠孔，盡量點(diǎn)完所有的樣。4不要忘記點(diǎn)marker并擺正膠位，正負(fù)極不要接反。

三、EB染色

1切膠要準(zhǔn)，取膠要穩(wěn)，泡膠要慎以免EB濺起。2碰到EB的手套要及時(shí)丟棄 3 EB要適時(shí)更換，盤子及時(shí)清洗 4抹布要分清，不可交叉使用。

四、圖像分析儀的使用

1使用前要清潔，避免影響膠圖清新度。2 照膠時(shí)應(yīng)經(jīng)量減少開紫外燈的時(shí)間。

5觀察時(shí)要帶防護(hù)眼鏡，避免眼睛被紫外損傷。

3拍照時(shí)先關(guān)攝像頭再關(guān)紫外燈，嚴(yán)格按照照膠流程操作。4照好的膠要及時(shí)丟棄。

3、膠回收試劑盒在回收DNA時(shí)各試劑的作用？ PCR

一、降低退火溫度對反映有何影響？

1在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時(shí)還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合。

2如果溫度過低，擴(kuò)增特異性差，雜帶較多，背景深。PCR擴(kuò)增在變性階段吸熱,在退火和延伸階段放熱,每一個(gè)PCR循環(huán)呈現(xiàn)放熱效應(yīng),同時(shí)退火溫度高導(dǎo)致平臺期的前移和焓值的降低，4、退火溫度與時(shí)間，取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。

二、延長變性時(shí)間對反映有何影響？

變性時(shí)間延長會導(dǎo)致酶活性的降低。

GC含量過高的片段，可以適當(dāng)延長變性時(shí)間。

三、循環(huán)次數(shù)是不是越多越好？

不是的，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，酶會逐漸失活、dNTP等原料會逐漸消耗掉。

PCR敏感性太高,循環(huán)過多容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，比方說把試劑中原本極其微量的雜質(zhì)序列片段放大擴(kuò)增，影響對正常結(jié)果的判斷。

因此在一定范圍內(nèi)，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，產(chǎn)物會增多；但超過了就不好了。一般設(shè)置30-35個(gè)循環(huán)就很夠了

四、PCR的五大元素？

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：

引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C 含量，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)，這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。引物量：引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

(2)酶及其濃度 目前有兩種Taq DNA聚合酶供應(yīng)，一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反應(yīng)約需酶量2。5U(指總反應(yīng)體積為100ul時(shí))，濃度過高可引起非特異性擴(kuò)增，濃度過低則合成產(chǎn)物量減少。

(3)dNTP的質(zhì)量與濃度 dNTP的質(zhì)量與濃度和PCR擴(kuò)增效率有密切關(guān)系，dNTP粉呈顆粒狀，如保存不當(dāng)易變性失去生物學(xué)活性。dNTP溶液呈酸性，將其PH調(diào)節(jié)到7.0～7.5，小量分裝，-20℃冰凍保存。多次凍融會使dNTP降解。尤其是注意4種dNTP的濃度要相等(等摩爾配制)，如其中任何一種濃度不同于其它幾種時(shí)(偏高或偏低)，就會引起錯(cuò)配。濃度過低又會降低PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量。dNTP能與Mg2+結(jié)合，使游離的Mg2+濃度降低。(4)模板(靶基因)核酸 模板核酸的量與純化程度，是PCR成敗與否的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，傳統(tǒng)的DNA純化方法通常采用SDS和蛋白酶K 來消化處理標(biāo)本。SDS的主要功能是： 溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì)，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，并解離細(xì)胞中的核蛋白，SDS還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀； 蛋白酶K 能水解消化蛋白質(zhì)，特別是與DNA結(jié)合的組蛋白，再用有機(jī)溶劑酚與氯仿抽提掉蛋白質(zhì)和其它細(xì)胞組份，用乙醇或異丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作為模板用于PCR反應(yīng)。一般臨床檢測標(biāo)本，可采用快速簡便的方法溶解細(xì)胞，裂解病原體，消化除去染色體的蛋白質(zhì)使靶基因游離，直接用于PCR擴(kuò)增。RNA模板提取一般采用異硫氰酸胍或蛋白酶K 法，要防止RNase降解RNA。

(5)Mg2+濃度 Mg2+對PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量有顯著的影響，Mg2+濃度過高，反應(yīng)特異性降低，出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，濃度過低會降低Taq DNA聚合酶的活性，使反應(yīng)產(chǎn)物減少。酵母菌原生質(zhì)體的分離與再生

高壓蒸汽滅菌的注意事項(xiàng)？（微生物實(shí)驗(yàn)）

第一，無菌包不宜過大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。消毒前，打開貯槽或盒的通氣孔，有利于蒸汽流通。而且排氣時(shí)使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒滅菌完畢，關(guān)閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無菌狀態(tài)。

第二，布類物品應(yīng)放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進(jìn)入包裹中央，嚴(yán)重影響滅菌效果。

⑥瓶裝液體滅菌時(shí)，要用玻璃紙和紗布包扎瓶口；如有橡皮塞時(shí)，應(yīng)插入針頭排氣；⑦應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，每次滅菌前，應(yīng)檢查安全閥的性能，以防壓力過高發(fā)生爆炸，保證安全使用；

第五篇：制藥公司實(shí)習(xí)總結(jié)

制藥公司實(shí)習(xí)總結(jié)

2010年7月7日，我們藥學(xué)專業(yè)一行三十人來到了山東博士倫福瑞達(dá)制藥有限公司（以下簡稱福瑞達(dá)），開始了為期一個(gè)月的實(shí)習(xí)。在這一個(gè)月里，我們做了很多，想了很多，收獲也很多。

行在福瑞達(dá)

福瑞達(dá)在濟(jì)南共有兩個(gè)廠區(qū)，一個(gè)是坐落于山大路南口的老廠區(qū)，一個(gè)是位于高新技術(shù)開發(fā)區(qū)的新廠區(qū)。我們?nèi)吮环殖扇齻€(gè)小組，我們組的實(shí)習(xí)路線是新廠區(qū)——老廠區(qū)——新廠區(qū)。由于新廠區(qū)離學(xué)校較遠(yuǎn)而且坐公交車不方便，因此我們每天要先坐公交車到達(dá)較近的老廠區(qū)，然后再坐二十分鐘的公司班車去新廠區(qū)。雖然時(shí)間有點(diǎn)漫長，但是和同學(xué)們這一路上的歡聲笑語卻是美好一天的開始。一路上總是會有看不完的風(fēng)景，美輪美奐的奧體中心、川流不息的人群車輛、枝葉繁茂的青翠柏楊、平地而起的高樓大廈……細(xì)細(xì)觀察車窗外的濟(jì)南，你會發(fā)現(xiàn)這座四千年的古城每一天都有新的變化。

吃在福瑞達(dá)

要說起在福瑞達(dá)實(shí)習(xí)期間的伙食，豈一個(gè)爽字了得！據(jù)我所知，我們整個(gè)院里也就我們的伙食最好了，不但經(jīng)濟(jì)實(shí)惠而且美味可口。去新廠實(shí)習(xí)的第一天中午，剛進(jìn)食堂就驚喜于眼前的情景，一排排桌椅整齊的排列著，白色的地面一塵不染，打飯的師傅統(tǒng)一著裝，帶著白色的口罩和帽子。我不由得感嘆：“哇，真是太干凈了！”旁邊的同學(xué)說：“顯然啊，人家gmp都能認(rèn)證上，更別說這區(qū)區(qū)一個(gè)食堂了?！拔液苷J(rèn)同的使勁點(diǎn)了點(diǎn)頭。這個(gè)餐廳是半自助式的，每人中午三份菜是限量的，米飯、饅頭和湯是不限量的，我觀察了一會兒發(fā)現(xiàn)這里沒有一個(gè)人會大把大把地浪費(fèi)糧食，大家都盡量將自己的米飯或饅頭吃干凈后才倒入收殘桶中，這讓我不由得感慨福瑞達(dá)人的自覺性和高素質(zhì)。公司的飯菜質(zhì)量很不錯(cuò)，而且懂得科學(xué)搭配，每頓有葷有素，每周有粗有細(xì)。在那里吃了一個(gè)星期的飯，我都覺得自己胖了不少。后來我們再到老廠區(qū)的時(shí)候，由于原食堂搬遷在即，飯菜是由快餐店送過來的，所以不如以前那么可口，但是已經(jīng)算是很不錯(cuò)了。雖然現(xiàn)在實(shí)習(xí)已經(jīng)結(jié)束了，但是福瑞達(dá)的美味飯菜給我留下了深刻的印象。

穿在福瑞達(dá)

眾所周知，按空間中細(xì)菌的數(shù)量可將藥廠劃分為a、b、c、d四個(gè)等級，其中a 區(qū)級別最高，因此針對于不同的工作區(qū)域也有不同的著裝要求。還沒有開始正式實(shí)習(xí)之前，老師就要求我們在實(shí)習(xí)期間不能穿短褲，不能穿涼鞋、拖鞋，雖然在如此炎熱的天氣里做出這樣的規(guī)定似乎有點(diǎn)不近人情，但我們理解這也是為達(dá)到生產(chǎn)條件，保障藥品質(zhì)量而要求。剛開始的幾天我們是在外沿區(qū)域打掃衛(wèi)生，因此只需要穿上隔離衣，戴上帽子，穿上鞋套就可以了。后來我們進(jìn)b區(qū)工作時(shí)就要按更嚴(yán)格的規(guī)定換成專門的無菌衣，從頭武裝到腳，只能露出兩個(gè)眼睛，雖說這衣服有透氣孔，但整個(gè)人被裝在里面也是很不舒服的，半天下來身上的衣服都被汗給浸透了?？墒撬麄冇行┕ぷ魅藛T卻要一穿穿一整天，想想他們真的很不容易，若不是沒有吃苦耐勞的精神還真是撐不下來，由此，我不禁更加佩服他們了。

學(xué)在福瑞達(dá)