第一篇：微生物實驗報告

微生物實驗報告

姓名：阿曼古麗

學號：09070401042

班級：生物科學08-班

微生物實驗課程已經(jīng)接近尾聲，同時訓練我們實際動手能力的實驗課程也已經(jīng)全部結(jié)束，通過自己切身動手設(shè)計，操作實驗，感到收獲頗多。

我覺得最重要的就是實驗過程中操作實驗的重要性。實驗操作可以說是實驗成功與否的關(guān)鍵部分，可是馬虎不得。對于需要團隊合作的實驗，個人認為要有強勢的人員搭檔，不說是精通實驗操作規(guī)程，最少也得知道實驗的基本操作，掌握要做實驗的基本放法，這對于后續(xù)的實驗無疑是有決定性作用的。對于個人的實驗?zāi)芰?，關(guān)鍵還是要看平時的實驗積累，有些實驗操作繁瑣復雜，需要極大的耐心，這些都應(yīng)該是逐漸培養(yǎng)起來的。

在這里我以學過的幾個實驗為例，簡單談一下自己的心得體會。

（一）環(huán)境因素對微生物生長的影響

溫度對微生物學報的大分子（蛋白質(zhì)、核酸等）穩(wěn)定性、酶的活性、細胞膜的流動性和完整性等方面有重要的影響。過高溫度會導致蛋白質(zhì)（酶）及核酸變性失活，細胞膜破壞等，而過低溫度會使酶活性受抑制，細胞新陳代謝活動減弱

pH值過高或過低會使蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子所帶電荷發(fā)生變化，影響其生物活性，甚至導致變性失活，還可以引起細胞膜電荷變化，影響學報對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，同時還會改變環(huán)境中物質(zhì)的可給性及有害物質(zhì)的毒性。紫外線誘導形成胸腺嘧啶二聚體和DNA交聯(lián)，從而抑制DNA的復制。此外，細菌具有光復合效應(yīng)。紫外線穿透力弱，加一張蠟光紙即可阻止其穿過。

在自然界中普遍存在微生物間的拮抗現(xiàn)象，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性地抑制或殺死其他微生物。

常用化學消毒劑包括有機溶劑（酚、醇、醛等）、重金屬、鹵素元素及其化合物、染料和表面活性劑。有機溶劑使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，破壞細胞膜；重金屬鹽也可使使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，或與細胞代謝產(chǎn)物螯合使之變成無效化合物；碘與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活；低濃度染料可抑制細菌生長，革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌對染料更加敏感。

影響微生物生長的外界因素很多，其一是前面討論過的營養(yǎng)物質(zhì)，其二是許多物理、化學因素。當環(huán)境條件的改變，在一定限度內(nèi)，可引起微生物形態(tài)、生理、生長、繁殖等特征的改變；當環(huán)境條件的變化超過一定極限時，則導致微生物的死亡。研究環(huán)境條件與微生物之間的相互關(guān)系，有助于了解微生物在自然界的分布與作用，也可指導人們在食品加工中有效地控制微生物的生命活動，保證食品的安全性，延長食品的貨架期。

（二）革

蘭

氏

染

色

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

革蘭氏陰性菌，以[大腸桿菌]為代表。大腸桿菌為兼氣性菌種，一般生存於腸道中及厭氧的還境中。革蘭氏陰性菌細胞壁的特徵為有一層out member 與陽性菌種不同。目前對大腸桿菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指標外，很多分子生物學方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當作實驗宿主。

臨床應(yīng)用：用于革蘭氏細菌分類形態(tài)觀察前的染色。主要應(yīng)用于細菌分類和鑒定，革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。

適用范圍：適宜石蠟切片、涂片等染色。

（三）活菌計數(shù)

菌計數(shù)法

此法又稱活菌計數(shù)法，其原理是每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。將待測樣品經(jīng)一系列 10 倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取 0.2ml 放入無菌平皿，再倒入適量的已熔化并冷至 45 ℃ 左右的培養(yǎng)基，與菌液混勻，冷卻、待凝固后，放入適宜溫度的培養(yǎng)箱或溫室培養(yǎng)，長出菌落后，計數(shù)，按下面公式計算出原菌液的含菌數(shù)：

每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個以上重復平皿

菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)× 5

此法還可以將稀釋的菌液取 0.2m 1 加到已制備好的平板上，然后用無菌涂棒將菌液涂布整個平板表面，放入適宜溫度下培養(yǎng)，計算菌落數(shù)，再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數(shù)。此法可因操作不熟練造成污染，或因培養(yǎng)基溫度過高損傷細胞等原因造成結(jié)果不穩(wěn)定。盡管如此，由于該方法能測出樣品中微量的菌數(shù)，仍是教學、科研和生產(chǎn)上常用的一種測定細菌數(shù)的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養(yǎng)體等。

隨著微生態(tài)學的發(fā)展，微生態(tài)療法通過調(diào)整腸道菌群作為部分疾病的輔助治療已應(yīng)用于臨床。糞便標本腸道菌群的定量檢測方法——平板活菌計數(shù)法能夠較好地判定其療效以及腸道菌群是否存在失調(diào)和失調(diào)的程度。此種方法計數(shù)的線性范圍大，能較好的反映菌落的疏密程度。重復性、平行性好，但操作較繁瑣，且測定值常受各種因素的影響，需要操作者有熟練的技術(shù)。

在同學們的相互配合和老師的耐心指導下，這門實驗課也接近了尾聲，在這一學的這門實驗課中我也學到了很多的實驗室知識。為了保證實驗過程高質(zhì)高量完成，除了實驗準備及實驗過程外，還要求實驗技術(shù)人員必須具備相應(yīng)的素質(zhì)，實驗操作人員必須具備較扎實的專業(yè)基礎(chǔ)、熟練的實驗技能及高度的責任心，在工作中要善于總結(jié)，同時一定要和老師積極溝通，不懂得地方及時向他請教，在以后的學習和工作中，我會繼續(xù)保持這種態(tài)度，認真完成老師交給的各項任務(wù)。

第二篇：微生物觀察實驗報告

廣西大學環(huán)境工程基礎(chǔ)實驗

實驗題目: 湖塘水體和沉積物中微生物的觀察

姓名：學號：

班級：組別：

指導教師：

實驗（1）湖塘水體和沉積物中微生物的觀察和計數(shù)

1.實驗概述

1.1實驗?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場所。本實驗通過實地調(diào)查和實驗室觀察實驗，對湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對水體凈化的正面和負面的影響。

1.2實驗原理

（1）顯微鏡的原理

（2）血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和計算方法。

血球計數(shù)板是一塊比較厚的特制玻片。玻片中央刻有4條槽，中央兩條槽之間的平面比其他平面略低，中央有一個小槽，槽兩邊的平面上刻有9個大方格，中間的一個大方格為計數(shù)室，其長和寬均為1mm，深度0.1mm，體積0.1m3。計數(shù)室的規(guī)格是把大方格分成16個中方格，每一個中方格有分成25個小方格，總共有400個小格。

血球計數(shù)板的計算方法是：先求得每個中方格中微生物的平均值，乘以中格數(shù)，即為一個大格中的總微生物數(shù)，再乘以10000，即為稀釋后的溶液中的總微生物數(shù)。如要換成原液中的微生物總數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)即可。

為簡化計，通常取4個角上的4個中格進行計數(shù)，取其平均值，作為每個中格中微生物的平均值。

計算公式：微生物數(shù)（mL）=（100個小格內(nèi)的微生物數(shù)/100）*400*10000*稀釋倍數(shù)

2.實驗內(nèi)容

2.1實驗方案設(shè)計

選擇一個池塘，對湖塘和水體和沉積物采樣，觀察其中微生物并計數(shù)。要求手繪觀察圖像，計算微生物數(shù)量。

2.1.1實驗設(shè)備和材料

（1）實驗設(shè)備

顯微鏡、血球計數(shù)板、載玻片、蓋玻片、滴管、移液管

（2）實驗材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實驗過程（實驗步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）用壓滴法制作表本片

取一塊潔凈的載玻片置于實驗平臺上，用滴管吸取湖水或含有沉積物的混合液，滴加在載玻片中央，用干凈的蓋玻片覆蓋在滴液上，不要有氣泡，即制成標本片。

（2）用顯微鏡觀察標本片上的微生物。

（3）加被測樣品到血球計數(shù)板

取干凈的血球計數(shù)板，用蓋玻片蓋住計數(shù)室，用細口滴管吸取少量已經(jīng)充分搖勻的湖水和沉積物的混合液，滴于蓋玻片邊緣，微生物自行深入計數(shù)室，靜止5-10min，待微生物自然沉降穩(wěn)定后計數(shù)。

（4）計數(shù)

先用低倍鏡尋找大方格網(wǎng)的位置（視野不要太亮），找到計數(shù)格后，換用40倍物鏡觀察計數(shù)。

2.3結(jié)論

手繪觀察到的微生物的形狀，相對大小(見附圖)

計算樣品微生物數(shù)量

2.4 建議（如果有）

實驗（2）湖塘水體和沉積物中微生物的革蘭氏染色和定性

1.實驗概述

1.1實驗?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場所。本實驗通過實地調(diào)查和實驗室觀察實驗，對湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對水體凈化的正面和負面的影響。

1.2實驗原理

微生物細胞由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其它成分組成，表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。細菌的等電點pI在2-5之間，所以當pH>5時，細菌帶負電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。微生物體內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)和染料的結(jié)合能力不同，故可用不同染料對微生物的不同結(jié)構(gòu)分別染色。

2.實驗內(nèi)容

2.1實驗方案設(shè)計

對池塘水體和沉積物中得細菌進行革蘭氏染色和定性，進行微生物形態(tài)圖的繪制。

2.1.1實驗設(shè)備和材料

（1）實驗設(shè)備

顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。

（2）試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、95%乙醇、番紅

（3）實驗材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實驗過程（實驗步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）涂片

取干凈的載玻片于實驗臺上，在正面邊角作記號，滴一滴無菌蒸餾水在玻片中央，灼燒接種環(huán)，冷卻后取樣品，與玻片上水滴混勻，在玻片上涂布成一層均勻的薄層，涂布面不宜過大。

（2）固定

即干燥，干燥過程最好在空氣中晾干。為加速干燥，可在微小火焰上烘干，烘干后在火焰上方快速通過3-4次，使菌體完全固定在載玻片上。不宜長時間高溫烘烤，易致急速失水使菌體變形。

（3）初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液染色1-2min，水洗。

（4）媒染

滴加革蘭氏碘液，染1-2min，水洗。

（5）脫色

滴加95%乙醇，洗約45s，接著水洗?；虻渭?5%乙醇，將玻片搖晃幾次即傾倒乙醇，如此重復2-3次后水洗。

（6）復染

滴加番紅，染2-3min，水洗并干燥。

（7）鏡檢

顯微鏡觀察。

2.3結(jié)論

觀察顏色，并判斷是G（紫色）還是G（紅色）。手繪觀察到的微生物圖像，標明顏色。

2.3.1注意事項：

（1）涂片所用載玻片要潔凈無油漬。

（2）細菌不宜多，涂片不宜厚，宜薄而均勻。

（3）染色過程中勿使染色液干涸。用水洗后，應(yīng)該甩去玻片上殘水以免染色液被稀釋而影響染色效果。

（4）革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時間是否合適。如脫色過度，G易被誤認為G。而脫色時間過短，G易被誤認為G。脫色時間長短還受涂片厚薄，脫色時玻片晃動程度影響。

2.4 建議（如果有）

2.思考題

（1）涂片為何要固定？固定時要注意什么？

答：原因有三

1、固定細菌，防止沖掉

2、變形蛋白易染色

3、殺死細菌，防止感染。實驗中固定是用酒精燈烘干水樣，應(yīng)注意控制溫度，控制時間，防止將菌體燒成灰燼，無法染色。固定時用載玻片背面靠近火源，而不是直接烘載玻片正面。

（2）革蘭氏染色如果只做1-4步，不用番紅復染，能否分辨革蘭氏染色結(jié)果？為什么？

答：能。在酒精脫色后，不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G＋），被酒精脫色為革蘭氏陰性菌。最后一步用番紅染液復染，是為了讓結(jié)果更清楚。

（3）革蘭氏染色在微生物學中有何實踐意義？

指導教師評語及成績：

成績：指導教師簽名

批閱日期

第三篇：微生物分離實驗報告（定稿）

微生物分離實驗報告

實驗儀器及材料

土樣：18號土樣 試劑及培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：果膠酶篩選培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶真菌篩選培養(yǎng)基；果膠酶劃線分

離培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶劃線培養(yǎng)基；細菌半固體培養(yǎng)基；淀粉培養(yǎng)基；葡萄糖酵解培養(yǎng)基；乳糖酵解培養(yǎng)基；蛋白胨水培養(yǎng)基

a)試劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、番紅復染液等各種染料以及盧戈氏碘液、95%

乙醇、5%孔雀綠水溶液、無菌水等

儀器

錐形瓶（500mL×2；300mL×2；100mL×3）、培養(yǎng)皿（20套）、試管（20支）、移液管（3支）、燒杯、玻璃棒、載玻片、蓋玻片、光學顯微鏡、涂布棒、U型管、德漢氏小管、酒精燈、漏斗、接種環(huán)、濾紙、棉塞、牛皮紙、無菌操作臺、滅菌鍋、紗布等

細菌的篩選，分離純化及鑒定 細菌的篩選

土樣處理

配制生理鹽水：在燒杯中配置200ml0.85％的生理鹽水，用移液管各移取9ml于五支潔凈試管，再移取90ml配置好的生理鹽水于三角燒瓶，并放入少許玻璃珠，包好滅菌；

加土樣：冷卻后準確稱取10g土樣放入盛有90ml無菌生理鹽水并帶有少許玻璃珠的三角燒瓶中，充分震蕩搖勻，然后放在30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置15min。

果膠酶菌種篩選

梯度稀釋：用一支無菌吸管吸取1ml土壤懸液加入到盛有9ml無菌水的試管中充分混勻，此為10-1稀釋液，以此類推制成10-

2、10-3兩種稀釋度的土壤溶液（如下圖）；

涂布：配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號筆做好標記，分別寫上10-

1、10-3兩種稀釋度字樣，每稀釋度標記三皿，然后用無菌吸管分別由10-

3、10-1兩管土壤稀釋液中吸取適量對好放入已寫好稀釋度的平板中央位置，每皿準確放入0.2ml，用無菌玻璃棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，其方法是將菌液先沿一條直線輕輕地來回推動，使之均勻分布，然后改變方向90度沿另一垂直線來回推動，平板內(nèi)邊緣處改變方向用涂布棒再涂布幾次；

培養(yǎng)：將平板倒置于30℃恒溫箱中培養(yǎng)1-2天；

果膠酶透明圈平板檢測：取10-1涂布平皿，用0.5％的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，則說明水解圈內(nèi)的菌有水解果膠的能力；

菌落描述：取此菌進行菌落形態(tài)描述，就菌落的大?。ù蟆⒅?，小），顏色（白，黃，粉紅等），干濕（干、濕），邊緣（整齊，不整齊），表面（光滑，粗糙，有無突起等）分別進行闡述并詳細記錄； 細菌的分離純化

劃線分離：制備果膠酶劃線培養(yǎng)基，滅菌后倒平板，挑取具有水解圈的菌種，第一次劃線分離培養(yǎng)1-2天后取分離所得單菌落再進行第二次劃線分離，劃線分離的具體方法是：先在平皿上劃定區(qū)域，然后將接種針在火焰上進行滅菌操作，取含菌種的培養(yǎng)皿，在火焰上方（注意：不

圖 細菌的劃線分離示意圖

能離火焰太近）打開培養(yǎng)皿蓋，先拿接種針在上蓋處劃線以降溫，然后用接種針輕挑所選菌落一到兩下，將平皿蓋上放好，再取剛剛冷卻了的干凈平皿在1區(qū)進行劃線接種操作。操作完畢后對接種針進行滅菌操作，完成后在火焰上方打開平皿蓋，將接種針冷卻后從1區(qū)引線到2區(qū)，再如圖所示劃線，劃完后引線到3區(qū)，同上進行劃線，劃線完畢后蓋蓋平放；

純種保藏：再配制一份普通細菌培養(yǎng)基，分裝試管后滅菌，制得斜面，將純種劃線接種在斜面上培養(yǎng)保存并進行下一步的鑒定。

a)純種果膠酶水解能力的測定

配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號筆做好標記，將分離純化的細菌點種于平板上（注意：點種的量不宜過多，以3～4個為宜），在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2天，取培養(yǎng)后的平皿用0.5％的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，測量并記錄透明圈的大小

b)簡單染色步驟 i.涂片 取一塊載玻片，在上邊用膠頭滴管加半滴無菌水，用接種環(huán)無菌操作將沾有菌的接種環(huán)置于載玻片上的無菌水種涂抹，待看到微弱的渾濁即可；（注意取菌不要太多）

ii.干燥與固定

涂菌面朝上，通過火焰以干燥并固定菌物，固定過程應(yīng)使載玻片通過火焰2-3次，注意溫度的控制，過熱的溫度會將細菌殺死，溫度以手背感覺微微發(fā)燙為標準；

iii.染色

將載玻片平放于載波片支架上，滴加結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位即可，染色1.5min iv.水洗

傾去染液，將載玻片的涂菌面朝下，自來水沖洗，水流不宜太急、太大，至洗出水無色為止；

v.干燥

用吸水紙吸去多余水分后自然干燥； vi.鏡檢

將制備好的樣片置于顯微鏡下進行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細菌的形態(tài)。

c)革蘭氏染色步驟 i.涂片

先在載玻片一側(cè)用記號筆標記間隔的四個區(qū)域，在另一側(cè)四個區(qū)域的位置分別滴加半滴無菌水。分別取四種活躍生長期菌種（大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草桿菌和一種自選菌）按常規(guī)方法涂片（不宜過厚），用酒精燈按照簡單染色中所述干燥和固定的方法對四種菌進行干燥和固定。

ii.初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染液使之覆蓋涂菌部位，染色1.5min后水洗； iii.媒染

先用盧戈氏碘液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1min后水洗； iv.脫色

先用乙醇沖去水跡，然后用95%乙醇覆蓋脫去色素，脫色約30s，立即用水沖洗；

v.復染

先用番紅洗去水跡，然后滴加番紅復染1.5min后水洗； vi.鏡檢

將制備好的樣片置于顯微鏡下進行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細菌。分別以大腸桿菌與金黃色葡萄球菌所染顏色作為對照，來判斷枯草桿菌以及另一種自選菌的染色結(jié)果。

d)芽孢染色步驟 i.涂片，加熱干燥及固定

在潔凈蓋玻片接近中部兩處分別滴一滴無菌水，分別接種枯草芽孢桿菌及梭狀芽孢桿菌。然后按照常規(guī)方法加熱干燥及固定；

ii.孔雀綠加熱染色

用木夾夾住載玻片，向載玻片上滴加5%孔雀綠水溶液使之完全覆蓋涂菌部位，然后在酒精燈上微微加熱（孔雀綠著色能力強，加熱可使較難染色的芽孢染成綠色，且再難洗脫）至染液冒蒸汽開始計時并維持5min，注意加熱時應(yīng)以有蒸汽微微冒出為宜，過熱或加熱不足均會影響觀察效果，且加熱時在載玻片上隨時補加染液，切勿讓涂片干涸；

iii.水洗

水洗一定要等載玻片冷卻后進行，否則可能導致載玻片的破裂。具體水洗按常規(guī)方法進行； iv.復染

用0.5%番紅水溶液復染2min； v.水洗并干燥

按常規(guī)方法水洗后自然干燥； vi.鏡檢

先在低倍鏡下尋找視野范圍，然后換用高倍鏡調(diào)焦，最后加香柏油在油鏡下仔細尋找兩種細菌以及其周圍或內(nèi)部染成綠色的芽孢。

e)半固體穿刺法觀察細菌運動性 i.配制培養(yǎng)基

配制半固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，分裝于4支試管內(nèi)，110度滅菌20-30分鐘，正立于燒杯中冷卻至室溫；

ii.在無菌操作臺上右手握接種針,以針挑取菌苔.垂直刺入半固體瓊脂培養(yǎng)的中心直至接近(但勿觸及)試管底,然后循原路退出。如圖所示：

iii.接種完成后在30℃條件下培養(yǎng)兩天觀察并判斷其運動性。

第四篇：食品微生物綜合實驗報告

食品微生物綜合實驗報告

項目一:食品中細菌總數(shù)的測定…………………………1

項目二： 革蘭氏染色技術(shù)………………………………5

項目三：飲用水中大腸菌群測定………………………7

指導老師：郭永班級:食品1002班學號：2010040734

姓名：任冠華

食品微生物綜合實驗報告

項目一：食品中細菌總數(shù)的測定

1.目的

本方法規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法。本方法適合于各類食品中菌落總數(shù)的測定。2.設(shè)備和材料

溫箱：36±1℃。恒溫水浴：46±1℃。電爐 吸管。廣口瓶或三角瓶：容量為500ml玻璃珠：直徑約5mm。平皿：直徑為90mm。試管。酒精燈。試管架。滅菌刀或剪子。滅菌鑷子。3.測定步驟 檢樣稀釋及培養(yǎng)

（1）以無菌操作，將檢樣25g(或mL)剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1∶10的均勻稀釋液。（2）用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水 或其他稀釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成1∶100的稀釋液。（3）另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1mL火菌吸管。

（4）根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)吮疚廴厩闆r的估計，選擇2～3個適宜稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46±1℃水浴保溫)注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照

（6）待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。菌落計數(shù)方法

做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

菌落計數(shù)的報告

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（1）平板菌落數(shù)的選擇

選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。（2）稀釋度的選擇

應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。

若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。菌落數(shù)的報告

菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮4.出現(xiàn)的問題

①接種過程操作速度太慢，導致培養(yǎng)基與接種液無法充分混合。②平板劃線不規(guī)律。③儀器使用不熟練，配合不夠默契。5.參照國標得出結(jié)論部分食品國標 短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。

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瓶（桶）裝飲用水菌落總數(shù)限量是≤20CFUmL，/總大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出，耐熱大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出，大腸埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出常溫液態(tài)奶≤10cfu/ml。6.結(jié)論：

自來水（或啤酒）的培養(yǎng)基均未培養(yǎng)出菌落，表示自來水（或啤酒）中菌落總數(shù)合格。土壤（或污水）的培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)有大量菌落，則自來水和啤酒中無超標現(xiàn)象，符合衛(wèi)生標準。

項目二:細菌涂片制作及革蘭氏染色技術(shù)

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一．目的

學習金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等細菌涂片制作、干燥和固定技術(shù)。掌握細菌的簡單染色和革蘭氏染色技術(shù) 二．設(shè)備和材料

菌種

大腸桿菌16h 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌16h 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物。溶液和試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液，革蘭氏碘液，95%乙醇，番紅復染液等。儀器和其他用品

酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，接種環(huán)，試管架，鑷子，載玻片夾子，濾紙，滴管和無菌生理鹽水等。三．測定步驟

1、細菌涂片制作

（1）涂片。用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中取一環(huán)菌，于載玻片中央涂成薄層即可，或先滴一滴無菌水于載玻片中央，用接種環(huán)從斜面挑出少許

（2）干燥。涂片后自然干燥，也可在酒精燈上略加熱，使之迅速干燥。

（3）固定。固定的方法主要取決于勇什么染色方法，常用的有火焰固定法和化學固定法，火焰固定法的主要操作要領(lǐng)是：手持載玻片一端，標本面向上，在燈的火焰外側(cè)迅速來回移動3~4次，約3~4s.2、革蘭氏染色法

涂片→干燥→草酸銨結(jié)晶紫（60s）→水洗→革蘭氏碘液媒染（60s）→95%酒精脫色（30s）→水洗→番紅（2min）→水洗→干燥→鏡檢。

脫色是革蘭氏染色關(guān)鍵的一步，可直接用95%酒精沖洗脫色，直到流下的酒精無明顯的紫色為止。然后，應(yīng)立即用水沖洗，以避免脫色時間過長而影響最終染色結(jié)果。另外，挑菌量、固定溫度、染色時間也是影響結(jié)果的重要因素，只有通過反復實踐，才能獲得滿意的結(jié)果。

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四．注意事項: 1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。

2.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。

項目三：飲用水中大腸菌群測定

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一、目的：

1.學習食品中大腸菌群檢測程序、方法。2.掌握食品中大腸菌群檢測結(jié)果的報告方式

二、實驗器材

1.培養(yǎng)基：乳糖膽鹽發(fā)酵管，伊紅美藍瓊脂、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨 2.試劑：革蘭氏染液

3.器皿：水浴、均質(zhì)器或乳缽、載片等 三．內(nèi)容、方法與步棸 1.檢樣稀釋

以無菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)予置適當數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。

另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。

根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)z樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管、2.乳糖發(fā)酵試驗

將待檢樣品接種于乳糖 膽鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)24±2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進 7

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行。3.分離培養(yǎng)

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)18-24h,然后取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實試驗。4.證實試驗

在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發(fā)酵管,置 36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。5.報告

根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù),查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。

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四．總結(jié)

1.實驗步驟多且繁瑣，因此需要小組成員的共同協(xié)作，從實驗器材的刷洗到檢樣的稀釋，以及培養(yǎng)基的配制等等都是需要每個成員認真密切配合的，如果哪位成員粗心大意或者偷懶少做步驟都會導致實驗結(jié)果的變化，而這是我們食品工作者的禁忌。所以說，與隊友的配合

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和一絲不茍、任勞任怨的精神是至關(guān)重要的。

2.作為一個學生，很多東西都不懂，因此做實驗的時候，必須要閱讀實驗步驟和實驗要求，最重要的是認真聽取老師的觀點和方法以及注意事項。

3.實驗過程中，我們每個人都難免會有出錯或者是不懂得地方，這時候一定要虛心求教，不能不懂裝懂。尤其是當隊友提出我們不正確的時候，不能不服氣，更不能莽撞惡語傷人。

5.做實驗時我覺得我的技術(shù)還不嫻熟，一些細節(jié)還掌握不夠比如涂片始終涂不均勻，導致鏡檢時觀察到的現(xiàn)象總是一團一團或一對一對的。還有一個問題就是，雖然按照嚴格的步驟進行了操作，但就是做不出結(jié)果，現(xiàn)實與期望的相差太遠，我想這里面的原因就是因為技術(shù)和細節(jié)沒有達到標準要求。

6.通過這次試驗我認識到團隊的力量是無窮的，個人太過渺小了。一粒沙雖微不足道，但聚沙能成塔；一滴水渺小無比，但匯集能成海。這個實驗要想成功團隊各個成員要有明確的分工，我們小組做的實驗之所以不太成功，一方面的原因就是分工不太明確，每個人對自己的任務(wù)都不太清楚，尤其是我自己更不清楚，做實驗時有點無所事事。7.這次做實驗雖然出現(xiàn)了諸多問題，但是我還是受益匪淺學到了很多知識。

第五篇：西南科技大學微生物實驗報告

西南科技大學

實驗報告 專業(yè)班級：姓名：學號：課程名稱：

指導教師：

環(huán)境與資源學院 年月日

一實驗?zāi)康膶W習環(huán)境工程微生物實驗最基本的操作，從實驗基礎(chǔ)準備、污水中細菌分純培養(yǎng)、污水中細菌計數(shù)到菌落觀察和菌體染色鏡檢，掌握與環(huán)境工程相關(guān)微生物檢驗的基本操作技能。

二實驗儀器與藥品

2.1 實驗儀器：每組試管13支，培養(yǎng)皿13個，1mL移液管10支，5mL移液管3支，100mL與250mL錐形瓶各1個，400mL燒杯1只，吸耳球1個，鑷子1把，剪刀1把，酒精燈1個，火柴1盒，接種針與接種環(huán)各1個，記號筆1支，試管架1個，顯微鏡1臺。漏斗、量筒、天平、高壓蒸汽消毒器、電爐等分別3套共用。

2.2 實驗藥品：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂粉、氯化鈉等。

三實驗內(nèi)容與方法

3.1實驗準備（1）每組做試管、錐形瓶和移液管的棉塞；配制固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基（每兩組共同配600mL）、0.85％生理鹽水（每兩組共同配600mL）；分裝固體培養(yǎng)基——6支試管（每支5mL）做斜面，剩余裝入250mL錐形瓶中；統(tǒng)一包扎消毒。（2）在高壓消毒過程中，開啟操作臺紫外燈消毒30min左右。（3）取水樣。（見書P299）

3.2 細菌分純與培養(yǎng)：

3.2.1 細菌分純

3.3.2 細菌計數(shù)

（1）平板涂布法計數(shù)

（2）傾倒法計數(shù)

四實驗結(jié)果

注：以圖表形式反映結(jié)果

五個人總結(jié)

注：總結(jié)自己在實驗過程中的感受和建議。