第一篇：微生物實驗關(guān)于空白染菌的幾個情況總結(jié)說明

微生物實驗關(guān)于空白染菌的幾個情況總結(jié)說明

一、空白平板上有細菌生長的原因比較多

1、培養(yǎng)基有可能沒有滅徹底，滅菌鍋沒壞的話這個可能性應(yīng)該不大

2、做空白用無菌水，對吧，是滅菌的蒸餾水。

3、培養(yǎng)基空培養(yǎng)，驗證培養(yǎng)基配制的沒有問題

4、無菌操作。如果染菌的在培養(yǎng)皿邊緣，則是操作過程有誤，比如接菌時碰到下皿了；如果不是邊緣，就是無菌水沒滅徹底

1、培養(yǎng)基是否滅菌徹底?培養(yǎng)基是否是再次使用?培養(yǎng)基的包裝情況和保存時間是否太久了

2、生理鹽水是否滅菌徹底？配制時間是否太久了？

3、平皿、吸管是否滅菌徹底？保存方式和時間

4、操作時，無菌操作是否存在問題？

5、實驗室環(huán)境中微生物的污染狀況？可以用平皿沉降法對空氣菌落作一下測定。

二、檢測自來水的細菌總數(shù)時,為什么做空白對照試驗?如果空白對照試驗有少數(shù)幾個菌落說明

（1）陰性對照試驗?zāi)康模?/p>

1、如果試驗中用到緩沖液、稀釋液等，可以說明該些緩沖液稀釋液是無菌的，不影響正常實驗結(jié)果的。

2、可以說明在整個試驗操作過程中，步驟方法操作都得當(dāng)整確，無微生物帶入。

（2）因此，如果陰性對照平板上有菌落，可能有如下原因：

1、緩沖液、稀釋液被污染

2、實驗過程中操作不當(dāng)，將陽性菌大腸埃希菌不慎帶入陰性對照

3、試驗環(huán)境差，比如潔凈室無菌空氣被污染；或者生物安全柜、凈化工作臺失效。

以排除其他方面帶來的細菌，比如說來自培養(yǎng)基或接種時的空氣等，如果空白對照試驗內(nèi)有少數(shù)菌落，則檢測的自來水細菌數(shù)內(nèi)要扣除對照組的幾個菌落。

三、空白的作用

1、為了驗證實驗前的準(zhǔn)備滅菌是否有效、2、和過程中是否有污染

3、主要是操作不當(dāng)引起的污染引起的污染，如果空白有菌落說明實驗失敗，結(jié)果不可信，最好重做。

第二篇：微生物實驗總結(jié)

微生物實驗總結(jié)

姓名:趙葉鋒班級：食品科學(xué)113學(xué)號：2011013522

大三的第二學(xué)期塊結(jié)束了，這個學(xué)期操作了四個微生物實驗，以及一個自主設(shè)計性實驗。通過前階段對四個實驗的操作和認知的基礎(chǔ)上，展開第五個實驗的自主設(shè)計。實驗分別是菌落總數(shù)測定，霉菌和酵母的檢查和計數(shù)，乳酸菌的檢驗，微生物藥敏試驗以及探討環(huán)境因素對微生物生長的影響。

這學(xué)期的微生物實驗是在上學(xué)期微生物實驗的基礎(chǔ)上的累積和擴展延伸：以培養(yǎng)基的制備與滅菌，玻璃器皿的洗滌、包扎和滅菌，微生物接種技術(shù)和細菌的革蘭氏染色為技術(shù)基礎(chǔ)進行的，以加強學(xué)生基礎(chǔ)理論知識和基本技能的培養(yǎng)為目的。

下面我來談?wù)勎以趯嶒炛械男牡皿w會。

第一個實驗是菌落總數(shù)測定。讓我重新認識了一下這個名詞：菌落形成單位，我現(xiàn)在的理解就是：1ml或者1g待測樣品中菌落的個數(shù)，一定要注意的是單位是CFU/ml或CFU/g。還有就是要掌握好對高壓蒸汽滅菌鍋的操作。實驗之前要充分做好預(yù)習(xí)工作，以便實驗的進行。由于是測定微生物實驗，就要尤其小心其他雜菌的混入影響實驗結(jié)果。因此要做好實驗儀器和各種試劑的滅菌，有培養(yǎng)皿，試管，移液槍頭（裝在盒子中），按要求配置好的瓊脂培養(yǎng)基和生理鹽水，按各自要求用紗布和報紙包扎好，送入高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌。玻璃儀器在包扎前要進行清洗，并烘干，以免水分沾濕報紙。滅完菌后取出物品進入超凈工作臺，超近工作臺的紫外燈在進入20分鐘前開啟，并在進入時關(guān)閉，以免影響人體。要對臺面進行消毒處理，用酒精擦拭?？梢栽诘却傊囵B(yǎng)基冷卻到50攝氏度左右前對待測樣品進行10倍系列稀釋至需要的濃度。要注意的是一定要標(biāo)記好濃度或者按順序排列在試管架上以免弄混，同一個試管里吸取樣品才能用同一個槍頭進行移液。再進行平板接種。待瓊脂培養(yǎng)基冷卻好后，用右手打開紗布并將錐形瓶拿住，將瓶口靠近酒精燈再進行滅菌，左手拿培養(yǎng)皿用大拇指和食指稍微打開培養(yǎng)皿蓋，將瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中心內(nèi)，不用倒很多，使瓊脂培養(yǎng)基沒過培養(yǎng)皿表面即可。培養(yǎng)皿一定是平拿在手上的，倒好后輕輕蓋上培養(yǎng)皿蓋，緩慢地平方在超凈工作臺臺面邊緣處，再推至中間。再用移液槍取1ml樣品快速打入培養(yǎng)皿中央，蓋上培養(yǎng)皿蓋，然后用手輕輕搖晃，千外不要太大力。然后貼上標(biāo)簽記號，靜置。如此依次操作下去。靜置一段時間待培養(yǎng)基凝固后倒置放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一段時間再取出進行觀察計數(shù)。

我們組的實驗結(jié)果不甚理想，培養(yǎng)皿中的微生物都是連成一片的，或者是培養(yǎng)皿壁上也都長著，主要是由于待測樣品打入培養(yǎng)皿后，搖晃不均勻或者太大力了，以至于菌液沒分散開來或是跑到培養(yǎng)皿壁上去了。

第五個實驗是自主設(shè)計實驗環(huán)境因素對微生物生長的影響。選取3個環(huán)境因素物理、化學(xué)和生物因素均可進行設(shè)計。根據(jù)前四個實驗的基礎(chǔ)，通過小組探討和交流設(shè)計出實驗方案。并加以驗證。通過自主設(shè)計實驗可以結(jié)合小組的智慧，加強團隊協(xié)作精神和創(chuàng)新思維，通過實驗可以驗證理論，增加感性認識，培養(yǎng)獨立工作能力和思考能力，并使具有過硬的專業(yè)技術(shù)水平。

通過這次的實驗，我明白了任何事情丟不是一蹴而就的，而是一個慢慢積累的過程。雖然實驗結(jié)果不是很理想，但是我參與了過程，通過小組討論我們也分析了失敗的原因，找到了解決的方法，避免了下一次失誤。并且從中理解了團隊討論和合作的重要性。以上即是我的全部感想。

第三篇：微生物實驗總結(jié)

食品衛(wèi)生綜合檢驗試驗總結(jié)

食品質(zhì)量091金秀建2009016521

為期五天（2012年6月11日-15日）的食品衛(wèi)生綜合檢測實驗已經(jīng)告一段落了，在這一周的微生物實驗主要包括牛奶中大腸菌群的計數(shù)、雞蛋中沙門氏菌的檢驗和牛奶中金黃色葡萄球菌的檢驗三個實驗，經(jīng)過三個綜合實驗的課程，能讓我更能理解試驗時要掌握的細節(jié)，也要保持頭腦的時刻清醒。同時讓我對這三種微生物有了更進一步的認識，同時讓我也對實驗也更加熟悉了。

首先我們做的是大腸菌群的計數(shù)，它是采用MPN（最大可能數(shù)法）的計數(shù)來測定的。大腸菌群的特性為：在37℃，24小時內(nèi)能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，好氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。其檢測原理為細菌在樣品內(nèi)的分布是隨機的，所以檢測細菌時，可按概率理論計算菌數(shù)。大腸菌群MPN計數(shù)的檢驗程序為樣品的稀釋、初發(fā)酵試驗、復(fù)發(fā)酵試驗和最后的大腸菌群最可能數(shù)(MPN)的報告。那么在第一天的上午，老師基本給我們講了實驗的原理和步驟，以及一些需要注意的地方，我們便開始計算自己需要配制的實驗試劑的量，并且稱取試劑的量和清洗所要用的實驗器皿，首先配置的是生理鹽水和LST肉湯，并且把生理鹽水和LST肉湯分裝到試管內(nèi)，蓋好蓋子包扎好進行滅菌，滅完菌也就到了吃飯時間，等下午來接種培養(yǎng)了。

牛奶樣品與生理鹽水以1:9的比例進行混合，搖勻后做10倍系列的稀釋，做了3個稀釋度。隨后將三個稀釋度的樣品勻液以每個稀釋度3支試管接種到內(nèi)裝小導(dǎo)管的含LST肉湯的試管中，最后放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。在經(jīng)過24h的培養(yǎng)后，所有的試管內(nèi)均產(chǎn)生氣體，而后我們要將培養(yǎng)后的有菌落的LST肉湯接種到BGLB肉湯試管中進行培養(yǎng)24-48h，觀察后發(fā)現(xiàn)所有的BGLB管都產(chǎn)氣，顏色也有原來的綠色變成暗黃色，證明也產(chǎn)生了酸，所以記為所有產(chǎn)氣管為大腸菌群陽性管。最后查MPN表可得出每毫升樣品中大腸菌群的MPN為大于等于1100ml/MPN。

我們小組在做大腸菌群測定還是很順利的，中途沒有出現(xiàn)什么錯誤，實驗很順利，小組成員的配合和分工也都很好。

第二個實驗是雞蛋中的沙門氏菌的檢測，他的特性是：沙門氏菌需氧或兼性

厭氧，10-42℃都可生長，最適溫度為37℃，大部分可發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，是革蘭氏陰性的無芽孢桿菌。在營養(yǎng)瓊脂平板上生長產(chǎn)生光滑，濕潤，半透明，邊緣整齊的菌落。在血平板上產(chǎn)生透明溶血環(huán)，形成大小中等的灰白色菌落。實驗過程可分為前增菌、選擇性增菌、選擇性平板分離、生物化學(xué)篩選四個階段。

實驗首先配制BPW溶液，進行分裝和高壓滅菌，在無菌條件下，移取5ml雞蛋液樣品于盛有45mlBPW的組織培養(yǎng)瓶中，混勻，放置于36℃±1℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h±2h，觀察生長現(xiàn)象。接下來的增菌階段，需要配制TTB增菌液和SC增菌液，移取1ml的前增菌液接種到10mlTTB增菌液內(nèi)，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h～24h，SC增菌液過程與TTB一樣。接下來需要制備BS平板和HE平板，等平板凝固后便可以開始接種了，是采用平板分多區(qū)劃線的方法，然后放在37度溫箱培養(yǎng)18~24h。最后要進行生化實驗，要先配制三糖鐵瓊脂，從培養(yǎng)皿的平板上挑取可疑菌落，接種到三糖鐵瓊脂，先與底層穿刺，再在斜面劃線。同時把菌落接種到各種生化試劑里，封口后一起放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h。取出培養(yǎng)皿和生化小試管觀察結(jié)果，記錄。

第三個實驗是金黃色葡萄球菌的檢驗，它的特性一般是無芽孢，鞭毛。大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性，它培養(yǎng)的營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上就能生長良好，需氧或兼性厭氧。在血平板上培養(yǎng)會使紅細胞破裂，形成透明的溶血環(huán)。在顯微鏡下可以看到是紫色的，排列成葡萄狀的圓形的菌。

首先是樣品的處理，稱取22g7.5%氯化鈉肉湯溶解于250ml水中，在每個均質(zhì)瓶內(nèi)移取45ml，同時制取Baird-Parker培養(yǎng)基，高壓滅菌后吸取牛奶樣品5ml到均質(zhì)瓶內(nèi)。放入恒溫箱培養(yǎng)18-24h。然后用接種環(huán)取培養(yǎng)物分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板上，培養(yǎng)18-24h，Baird-Parker平板有可能需要培養(yǎng)45-48h。最后進行血漿凝固酶試驗，挑取BP平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5ml左右BHI肉湯中，36±1℃培養(yǎng)18-24h。取新鮮兔血漿0.5ml，加入BHI培養(yǎng)物0.2-0.3ml，振蕩搖勻，置36±1℃溫箱培養(yǎng)，半小時觀察一次，6小時觀察，直至出現(xiàn)凝固，判為陽性結(jié)果。也有小組6h后也沒凝固的，則判為陰性。最后進行革蘭氏染色實驗，觀察細菌的形態(tài)特征。最后記錄結(jié)果。

三個實驗雖然不多，但是三個實驗的跨度剛好是一個星期，所以我們實驗剛

好可以做完，實驗從剛開始的懵懂到慢慢的熟悉，到最后的成功，少不了的是小組合作和老師的幫助。經(jīng)過三個微生物的實驗，讓我對微生物實驗的過程。不過對于微生物的實驗一定要細心，一個是它需要的時間很長，要滅菌和培養(yǎng)，如果做錯都得重新再來，并且實驗過程中不能被污染，否則會對實驗結(jié)果造成一定的污染或完全不可用。對實驗流程一定要熟悉，現(xiàn)象一定要觀察仔細，因為類似的菌類有很多，其生產(chǎn)的習(xí)性也類似，若不觀察仔細，就會有結(jié)果的偏差。我們小組的實驗都很順利，中途雖有一點點過失，但對實驗的進度和結(jié)果沒有什么大的影響，實驗結(jié)果也是讓我們蠻有成就感的，感謝小組的配合。操作不像理論，只有多次練習(xí)才有體會，在今后的實驗中，我會更加努力。

第四篇：《發(fā)酵染菌應(yīng)急預(yù)案》

發(fā)酵染菌應(yīng)急預(yù)案

一、染菌確認與報告

1、染菌確認

a、連續(xù)3個樣品鏡檢發(fā)現(xiàn)有雜菌且有增多趨勢，無菌試驗樣品發(fā)現(xiàn)染菌，發(fā)酵各項理化指標(biāo)有明顯異常變化的，可判斷為染菌；

b、懷疑染菌的罐，在不影響正常生產(chǎn)安排的前提下，繼續(xù)培養(yǎng)，且取無菌樣進行肉湯培養(yǎng)，同時做平皿劃線分離，直到結(jié)論明確。

2、染菌報告

發(fā)酵車間員工發(fā)現(xiàn)染菌和疑似染菌的情況，必須立即報告車間主任，發(fā)酵車間主任了解情況后做初步判斷，并通知菌種車間、中試車間及生產(chǎn)部經(jīng)理，共同判斷、分析。

發(fā)酵車間應(yīng)首先發(fā)現(xiàn)本車間的發(fā)酵染菌情況，否則車間主任和工藝員應(yīng)負有責(zé)任。

二、染菌現(xiàn)象描述

對染菌罐樣品，應(yīng)做以下描述：

1、發(fā)現(xiàn)染菌的時間

確定從哪一個樣品開始發(fā)現(xiàn)染菌（或懷疑染菌），之后的樣品有沒有同樣的現(xiàn)象、雜菌量有無變化。

2、鏡檢描述

菌體形態(tài)（結(jié)合美蘭和品紅兩種染色方法染色同時判斷，比較所染雜菌與生產(chǎn)菌變化情況的形態(tài)），染色深淺，大小，數(shù)量（與生產(chǎn)菌比較）。

注:鏡檢應(yīng)觀察5個視野以上，Bt、桿菌肽發(fā)酵液樣品應(yīng)稀釋10倍再涂片鏡檢。

3、理化指標(biāo)

pH變化情況，菌濃變化情況，對效價的影響，發(fā)酵液氣味

附樣品描述記錄：

染菌分析記錄表

生產(chǎn)批號：

罐號

取樣時間

鏡檢情況

備注

分析討論情況：

結(jié)論：

簽名：

****年**月**日

處理措施：

簽名：

****年**月**日

預(yù)防措施：

簽名：

****年**月**日

三、染菌檢查與分析

1、思想認知

發(fā)生染菌情況后，各車間負責(zé)人應(yīng)實事求是，主動查找車間范圍內(nèi)的問題，杜絕本位主義，做到通力協(xié)作、齊心分析、查閱書籍、邏輯推理、認真檢查、嚴格試驗、廣泛討論、不辭辛苦。

2、染菌原因初步分析

a、種子罐早中期染菌：母瓶種子帶菌。

空氣過濾器“漏菌”。

滅菌不到位。

接種操作不嚴密。

其他意外事件（如停電、閥門壞等）。

b、發(fā)酵罐早中期染菌：種子罐帶菌。

空氣過濾器“漏菌”。

滅菌不到位。

移種操作不嚴密。

補料操作或補料液有問題。

其他意外事件（如停電、閥門壞、設(shè)備漏等）。

3、雜菌分離、培養(yǎng)

對已確定染菌和隱性染菌的罐批，應(yīng)取染菌發(fā)酵液（或疑似染菌的發(fā)酵液）無菌樣,在平皿上標(biāo)明樣品的品名、來源與取樣時間，然后在超凈工作臺上進行平皿劃線分離,在37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),每天在燈光下檢查有無雜菌生長。觀察雜菌菌落特征，并涂片鏡檢，確定所染雜菌的類型。

4、雜菌耐熱性實驗

取染菌發(fā)酵液（或疑似染菌的發(fā)酵液）4瓶，標(biāo)明品名、來源與取樣時間取1瓶作對照，另3瓶分別在110℃、115℃、121℃滅菌30分鐘。然后將四個樣品定量接入肉湯培養(yǎng)基，在37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),觀察肉湯的培養(yǎng)情況。

5、設(shè)備檢查

a、空氣凈化系統(tǒng)

打開預(yù)、精過濾器殼體，拆檢過濾器橡皮墊圈，檢查是否有老化、斷裂而失去密封效能；拆檢預(yù)、精過濾器濾芯，檢查是否有老化、斷裂，濾芯外觀孔目是否有堵塞、變形現(xiàn)象。

拆檢結(jié)束，安裝殼體并對過濾器法蘭接口、排污閥、空氣取樣閥、壓力表絲口、空氣閥、焊接縫等進行試壓、試漏，密封性能需達到無泄漏標(biāo)準(zhǔn)；且預(yù)濾、精濾的壓差應(yīng)在≤0.05MPa的范圍之內(nèi)。

b、罐體、閥門試漏

準(zhǔn)備好洗衣粉水、刷子，蓋好罐蓋，關(guān)閉排氣閥，開啟進氣閥，給發(fā)酵罐加壓，當(dāng)罐壓≥0.10MPa時，即可對該罐進行試漏。

試壓試漏方法：試外漏時，把洗衣粉水噴涂在閥門閥蓋、法蘭或絲口上，及閥門整體外部和管路焊縫等可能泄漏的地方。試內(nèi)漏時，關(guān)閉待試閥門，把洗衣粉水噴涂在閥門排氣管孔上，經(jīng)涂抹部分如有氣泡產(chǎn)生，可以確定有漏點，應(yīng)及時復(fù)檢。

c、蛇管、夾層試漏

放盡罐內(nèi)積水,開空氣吹干或用布擦干罐內(nèi)壁.將蛇管、夾套內(nèi)充滿水，注意觀察是否有水滲出。也可將夾套內(nèi)的水放盡，將壓縮空氣通入蛇管、夾套內(nèi)，用洗衣粉水噴涂，注意觀察是否有氣泡冒出。

6、無菌試驗

發(fā)現(xiàn)染菌的設(shè)備處理后應(yīng)做無菌試驗：

a、培養(yǎng)基配方

原料名稱

配比（％）

酵母粉

0.5

玉米漿

葡萄糖

氯化鈉

0.5

消前pH6.5～7.0。

b、培養(yǎng)條件

37±2℃，48hr以上

注：消后應(yīng)取樣涂片鏡檢，作為鏡檢對照。

7、菌種車間接種后，將肉湯培養(yǎng)基15～20ml倒入接種瓶中，與殘留液混合，37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48hr以上。

8、環(huán)境檢查與清潔

a、超凈工作臺沉降菌檢測

b、菌種、發(fā)酵車間環(huán)境清潔

三、染菌處理

1、染菌料液的處理

參照《發(fā)酵異?，F(xiàn)象的處理SOP》

2、設(shè)備處理

在染菌料液處理完后，在再次投料之前,先徹底清洗染菌發(fā)酵罐罐體、附件,同時進行嚴密程度檢查,以防滲漏，然后用甲醛等化學(xué)物質(zhì)熏蒸處理,再用蒸汽滅菌〈包括各種附屬設(shè)備〉。

四、預(yù)防措施與基礎(chǔ)研究

1、空氣系統(tǒng)

定時放水，保持干燥。

定期拆檢,在過濾器滅菌時要防止過濾介質(zhì)被沖翻或燒灼,還要防止發(fā)酵液倒流入空氣過濾器內(nèi)。

2、設(shè)備檢修

發(fā)酵罐及其附屬設(shè)備應(yīng)做到無“滲漏”,無“死角”。定期試漏。

無菌操作室和菌種培養(yǎng)間定期消毒,以保持無菌狀態(tài)。

定期用甲醛熏消。

3、操作要求

發(fā)酵罐放罐之后,對罐體和附屬設(shè)備進行全面清洗和檢查,清除罐內(nèi)的殘渣,除盡罐壁上的污垢,清除罐內(nèi)附件處的堆積物。

培養(yǎng)基配制時要防止物料結(jié)塊或帶入異物,配料罐和輸送料液系統(tǒng)要定時清洗消毒。

對進入無菌室的全部物料、器械實行滅菌。

4、人員培訓(xùn)

a、對新員工培訓(xùn)，應(yīng)采取學(xué)徒制，指定有資質(zhì)的技術(shù)工當(dāng)師傅，并對新員工的學(xué)習(xí)進程做好跟蹤考核，保證其操作水平。

b、對員工進行劃線分離、無菌取樣等基本操作培訓(xùn)，保證操作的準(zhǔn)確性、一致性。

c、定期開展崗位操作競賽，對員工的操作質(zhì)量進行考核，提高員工進行日常操作培訓(xùn)的積極性。

5、整理出公司各發(fā)酵產(chǎn)品正常生產(chǎn)時各周期的典型鏡檢照片各一套，收集典型的染菌料液鏡檢照片和各種雜菌的鏡檢照片。

6、研究不同的雜菌單獨培養(yǎng)時的情況，如形態(tài)，生長速度，培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、通氣、計數(shù)式接種量等因素的影響。

7、研究不同的雜菌和生產(chǎn)菌種混合培養(yǎng)時的情況，重點是觀察在不同的混合時間混合時，雜菌和生產(chǎn)菌種的表現(xiàn)情況，如形態(tài)，生長速度，培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、通氣、計數(shù)式接種量等因素的影響。

五、記錄與存檔

發(fā)生染菌情況后所做的現(xiàn)象描述、各項檢查、分析討論、糾正預(yù)防措施、日常培訓(xùn)、基礎(chǔ)研究等工作均應(yīng)做好記錄，并將記錄送交工藝質(zhì)量可歸檔保存。

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END

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第五篇：微生物實驗個人總結(jié)

微生物實驗總結(jié)

這個學(xué)期操作了四個微生物實驗，以及一個自主設(shè)計性實驗。通過前階段對四個實驗的操作和認知的基礎(chǔ)上，展開第五個實驗的自主設(shè)計。實驗分別是菌落總數(shù)測定，霉菌和酵母的檢查和計數(shù)，乳酸菌的檢驗，微生物藥敏試驗以及探討環(huán)境因素對微生物生長的影響。

這學(xué)期的微生物實驗是在上學(xué)期微生物實驗的基礎(chǔ)上的累積和擴展延伸：以培養(yǎng)基的制備與滅菌，玻璃器皿的洗滌、包扎和滅菌，微生物接種技術(shù)和細菌的革蘭氏染色為技術(shù)基礎(chǔ)進行的，以加強學(xué)生基礎(chǔ)理論知識和基本技能的培養(yǎng)為目的。

下面我來談?wù)勎以趯嶒炛械男牡皿w會。

第一個實驗是菌落總數(shù)測定。讓我重新認識了一下這個名詞：菌落形成單位，我現(xiàn)在的理解就是：1ml或者1g待測樣品中菌落的個數(shù)，一定要注意的是單位是CFU/ml或CFU/g。還有就是要掌握好對高壓蒸汽滅菌鍋的操作。實驗之前要充分做好預(yù)習(xí)工作，以便實驗的進行。由于是測定微生物實驗，就要尤其小心其他雜菌的混入影響實驗結(jié)果。因此要做好實驗儀器和各種試劑的滅菌，有培養(yǎng)皿，試管，移液槍頭（裝在盒子中），按要求配置好的瓊脂培養(yǎng)基和生理鹽水，按各自要求用紗布和報紙包扎好，送入高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌。玻璃儀器在包扎前要進行清洗，并烘干，以免水分沾濕報紙。滅完菌后取出物品進入超凈工作臺，超近工作臺的紫外燈在進入20分鐘前開啟，并在進入時關(guān)閉，以免影響人體。要對臺面進行消毒處理，用酒精擦拭?？梢栽诘却傊囵B(yǎng)基冷卻到50攝氏度左右前對待測樣品進行10倍系列稀釋至需要的濃度。要注意的是一定要標(biāo)記好濃度或者按順序排列在試管架上以免弄混，同一個試管里吸取樣品才能用同一個槍頭進行移液。再進行平板接種。待瓊脂培養(yǎng)基冷卻好后，用右手打開紗布并將錐形瓶拿住，將瓶口靠近酒精燈再進行滅菌，左手拿培養(yǎng)皿用大拇指和食指稍微打開培養(yǎng)皿蓋，將瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中心內(nèi)，不用倒很多，使瓊脂培養(yǎng)基沒過培養(yǎng)皿表面即可。培養(yǎng)皿一定是平拿在手上的，倒好后輕輕蓋上培養(yǎng)皿蓋，緩慢地平方在超凈工作臺臺面邊緣處，再推至中間。再用移液槍取1ml樣品快速打入培養(yǎng)皿中央，蓋上培養(yǎng)皿蓋，然后用手輕輕搖晃，千外不要太大力。然后貼上標(biāo)簽記號，靜置。如此依次操作下去。靜置一段時間待培養(yǎng)基凝固后倒置放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一段時間再取出進行觀察計數(shù)。

我們組的實驗結(jié)果不甚理想，培養(yǎng)皿中的微生物都是連成一片的，或者是培養(yǎng)皿壁上也都長著，主要是由于待測樣品打入培養(yǎng)皿后，搖晃不均勻或者太大力了，以至于菌液沒分散開來或是跑到培養(yǎng)皿壁上去了。第一個實驗的操作室下面四個實驗的操作基礎(chǔ)。基本操作步驟都是相似的，只是待測微生物不同和根據(jù)不同微生物要配置不同的瓊脂培養(yǎng)基。

第二個實驗是霉菌和酵母的檢查和計數(shù)。用到的培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和孟加拉紅培養(yǎng)基，都是用于培養(yǎng)霉菌和酵母的。要注意的地方與第一個實驗一樣是滅菌和避免引入雜菌，還有就是，混勻菌液時要慢慢地、輕輕地移動培養(yǎng)皿。這個實驗有兩個菌要觀察，不過由于兩個菌的菌落形態(tài)差異比較大，所以還是比較簡單就能識別的：

孟加拉紅培養(yǎng)基中，菌落的紅色比培養(yǎng)基的紅色顏色更重，菌落顏色是大紅色，培養(yǎng)基顏色是粉紅色。在孟加拉紅培養(yǎng)基表面的酵母菌菌落是圓形，邊緣整齊，表面比較光滑濕潤，形態(tài)較小。位于孟加拉紅培養(yǎng)基內(nèi)的菌落則是三角形和四角形，還有多角形。邊緣都是整齊的，不像霉菌菌落的邊緣有菌絲。霉菌形成的菌落較稀松，多成絨毛狀，絮狀，形態(tài)與酵母相比較大。

第三個實驗是乳酸菌的檢驗。用到的培養(yǎng)基是MRS培養(yǎng)基、莫匹羅星鋰鹽改良 MRS 培養(yǎng)基和MC 培養(yǎng)基，MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)的是乳酸菌，莫匹羅星鋰鹽改良 MRS 培養(yǎng)基培養(yǎng)的是雙歧桿菌，MC 培養(yǎng)基培養(yǎng)的是嗜熱鏈球菌。乳酸菌總數(shù)結(jié)果減去雙歧桿菌與嗜熱鏈球菌計數(shù)結(jié)果之和即得乳桿菌計數(shù)。

要注意的是該實驗用的是平板涂布法接種，是待培養(yǎng)基凝固后吸取1ml酸奶樣品稀釋勻液，用無菌涂布棒涂抹均勻。倒置培養(yǎng)一段時間，觀察菌落形態(tài)及計數(shù)菌落。由于乳酸菌和雙歧桿菌都是需要厭氧培養(yǎng)的，所以要求從樣品稀釋到平板涂布要求在15分鐘內(nèi)完成。

第四個實驗是微生物藥敏試驗。本實驗主要用了2種方法：紙片擴散法和牛津杯法。紙片擴散法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，隨著擴散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對數(shù)減少，從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時，紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的菌株不能生長，而抑菌范圍外的菌株則可以生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈，不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂中擴散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度，并與該藥物對測試菌的最小抑菌濃度（MIC）呈負相關(guān)。牛津杯法加的是試劑，卡那霉素試劑和醫(yī)用酒精，查看它們對細菌的抑菌效果。

要注意2種方法都需要空白對照試驗實驗，前者為不加任何東西的滅菌小圓濾紙片，后者為無菌水。用的也是平板涂布法接種。1法：鑷子在夾有抗菌物質(zhì)的紙片和不加任何東西的滅菌小圓濾紙片時都要進行酒精燈滅菌，以免影響實驗準(zhǔn)確度。2法：在涂布好的培養(yǎng)基表面用鑷子輕輕置滅好菌的牛津杯。注意不用按壓的，不然擠壓會致培養(yǎng)基表面破裂，會影響實驗結(jié)果。待培養(yǎng)好后取出觀察并測量抑菌圈直徑，結(jié)果單位用毫米計。

第五個實驗是自主設(shè)計實驗環(huán)境因素對微生物生長的影響。選取3個環(huán)境因素物理、化學(xué)和生物因素均可進行設(shè)計。根據(jù)前四個實驗的基礎(chǔ)，通過小組探討和交流設(shè)計出實驗方案。并加以驗證。通過自主設(shè)計實驗可以結(jié)合小組的智慧，加強團隊協(xié)作精神和創(chuàng)新思維，通過實驗可以驗證理論，增加感性認識，培養(yǎng)獨立工作能力和思考能力，并使具有過硬的專業(yè)技術(shù)水平。

通過這次的實驗，我明白了任何事情丟不是一蹴而就的，而是一個慢慢積累的過程。雖然實驗結(jié)果不是很理想，但是我參與了過程，通過小組討論我們也分析了失敗的原因，找到了解決的方法，避免了下一次失誤。并且從中理解了團隊討論和合作的重要性。以上即是我的全部感想。