第一篇：環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)教案（大全）

實(shí)驗(yàn)一顯微鏡使用與細(xì)菌染色法

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)掌握顯微鏡的結(jié)構(gòu)、功能和使用方法。2．學(xué)習(xí)掌握細(xì)菌簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色方法。

二、顯微鏡的結(jié)構(gòu)與功能 1．顯微鏡的結(jié)構(gòu)

顯微鏡有機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。機(jī)械裝置主要作用是使光學(xué)系統(tǒng)，緊固在一個(gè)光軸直線上，而且可精確地調(diào)節(jié)各光學(xué)系統(tǒng)部件之間的距離，使顯微鏡產(chǎn)

生清晰的物象。其組成包括：①鏡座和鏡臂；②鏡筒；③物鏡轉(zhuǎn)換器；④載物臺(tái)；⑤調(diào)焦裝置（粗調(diào)節(jié)器和細(xì)調(diào)節(jié)器）。光學(xué)系統(tǒng)使顯微鏡最主要地部分，起分辨和放大目的物地作用。其組成包括：①目鏡；②物鏡；③集光器；④反光鏡；⑤光源（自然光源和電光源）。

光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)：

1.照明燈(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.載物臺(tái)和切片夾(Mechanical stage and specimenretainer)4.推進(jìn)器(Mechanicalstage adjustment knob)5.物鏡(Objectives)6.粗細(xì)螺旋(Course andfine focus knob)7.目鏡(Oculars)8.照相機(jī)等接口(Connection to camera, etc.)2．顯微鏡的成像原理

標(biāo)本得到足夠的照明由標(biāo)本反射或折射出的光線經(jīng)物鏡進(jìn)入使光軸與水平面傾 斜45 度的棱鏡，在目鏡的焦平面上，即在目鏡的視場(chǎng)光闌處，成放大的側(cè)光實(shí)像，該實(shí)像在經(jīng)目鏡的接目透鏡放大成虛像，所以人們看到的實(shí)虛像。3．分辨力與數(shù)值孔徑

顯微鏡的光學(xué)技術(shù)參數(shù)包括：數(shù)值孔徑、分辨率、放大率、焦深、視場(chǎng)寬度、覆 蓋差、工作距離等等。這些參數(shù)并不都是越高越好，它們之間是相互聯(lián)系又相互制約的，在使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)鏡檢的目的和實(shí)際情況來協(xié)調(diào)參數(shù)間的關(guān)系，但應(yīng)以保證分辨率為準(zhǔn)。1． 數(shù)值孔徑

數(shù)值孔徑（又稱開口率numerical aperture 簡(jiǎn)寫NA）是物鏡和聚光鏡的主要技術(shù)參數(shù)，是判斷兩者（尤其對(duì)物鏡而言）性能高低的重要標(biāo)志。其數(shù)值的大小，分別標(biāo)刻在物鏡和聚光鏡的外殼上。數(shù)值孔徑是光線投射到物鏡上的最大開口角度一半的正弦，乘上標(biāo)本與物鏡間介質(zhì)的折射率的乘積。用公式表示如下：NA=nsinu/2 成正比，與焦點(diǎn)的距離成反比。顯微鏡觀察時(shí)，若想增大NA 值，孔徑角是無法增大的，唯一的辦法是增大介質(zhì)的折射率n 值。基于這一原理，就產(chǎn)生了水浸物鏡和油浸物鏡，因介質(zhì)的折射率n 值大于1，NA 值就能大于1。2． 分辨率

顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)的最小間距。其計(jì)算公式 是σ = λ/NA 式中σ 為最小分辨距離；λ 為光線的波長(zhǎng)；NA 為物鏡的數(shù)值孔徑?？梢娢镧R的分辨率是由物鏡的NA 值與照明光源的波長(zhǎng)兩個(gè)因素決定。NA 值越大，照明光線波長(zhǎng)越短，則σ 值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即減小σ 值，可采取以下措施

（1）降低波長(zhǎng)λ 值，使用短波長(zhǎng)光源。（2）增大介質(zhì)n 值以提高NA 值（NA=nsinu/2）。（3）增大孔徑角u 值以提高NA 值。（4）增加明暗反差。3． 放大率和有效放大率

由于經(jīng)過物鏡和目鏡的兩次放大，所以顯微鏡總的放大率應(yīng)該是物鏡放大率和目 鏡放大率的乘積。顯然，和放大鏡相比，顯微鏡可以具有高得多的放大率，并且通過調(diào)換不同放大率的物鏡和目鏡，能夠方便地改變顯微鏡的放大率。放大率也是顯微鏡的重要參數(shù)，但也不能盲目相信放大率越高越好。顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率。分辨率和放大倍率是兩個(gè)不同的但又互有聯(lián)系的概念。當(dāng)選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大，即分辨率不夠高時(shí)，顯微鏡不能分清物體的微細(xì)結(jié)構(gòu)，此時(shí)即使過度地增大放大倍率，得到的也只能是一個(gè)輪廓雖大但細(xì)節(jié)不清的圖像，稱為無效放大倍率。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率不足，則顯微鏡雖已具備分辨的能力，但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見。所以為了充分發(fā)揮顯微鏡的分辨能力，應(yīng)使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理匹配。4．鏡頭的識(shí)別

低倍、高倍和油鏡接物鏡的識(shí)別方法，可直接讀它上面刻的倍數(shù)，簡(jiǎn)便方法是低 倍鏡較短，高倍鏡較長(zhǎng)，油鏡更長(zhǎng)且上面刻有黑圈。使用時(shí)一定要識(shí)別清楚，不可認(rèn)錯(cuò)，否則在轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)會(huì)碰壓鏡頭，損壞物鏡的危險(xiǎn)。放大倍數(shù)越高的接物鏡它的焦距越小，工作距離也越小，因此油鏡觀察時(shí)鏡頭和玻片極為接近，使用時(shí)應(yīng)該注意。

三、實(shí)驗(yàn)方法

1．用枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）作簡(jiǎn)單染色： 涂片→干燥→固定→染色→鏡檢

（1）涂片：在玻片中央滴一滴蒸餾水，然后取菌少許，洗入蒸餾水滴中，做成薄薄一層。

（2）干燥：細(xì)菌涂片一般應(yīng)讓他自然風(fēng)干。有時(shí)為使它干得快些，可以把涂片小心在酒精燈火焰上微微加熱烘干。

（3）固定：細(xì)菌涂片常用火焰固定法。即將涂片不快不慢地在火焰上通過2-3 次，菌體受熱固著于玻片上。

（4）染色：細(xì)菌簡(jiǎn)單染色常用石炭酸復(fù)紅或草酸銨結(jié)晶紫為染色劑。在已固定的涂片上加一大滴石炭酸復(fù)紅染色液，使蓋住整個(gè)涂抹面，靜置染色1 分鐘。（5）水洗：染色完畢用自來水把玻片上的染色液沖洗干凈。

（6）鏡檢：將染色片晾干，或用吸水紙把多余的水吸去晾干，再用顯微鏡觀察。2．用大腸桿菌(E.coli)和金色葡萄球菌(staphylococcua aureus)作革蘭氏染色: 染色方法的要點(diǎn)及原理：先用結(jié)晶紫染色，再加碘液固定，酒精處理后用番紅復(fù) 染。革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

染色的具體步驟：涂片→固定→初染→媒染→脫色→復(fù)染→鏡檢（1）取菌按常法涂片、干燥、固定。（2）草酸銨結(jié)晶紫染色1 分鐘。（3）充分水洗后加碘液處理1 分鐘。

（4）水洗后酒精脫色15-20 秒。（用酒精連續(xù)滴洗，至不溶出顏色為止）。（5）水洗后加番紅染色1 分鐘。

（6）充分水洗，吸去余水后晾干，鏡檢。

四、作業(yè)

1．畫出你在油鏡下觀察到的細(xì)菌形態(tài)并注明放大倍數(shù)？ 2．在染色中，固定一步起何作用？酒精脫色一步為何是關(guān)鍵？ 3．用油鏡觀察應(yīng)注意哪些問題？滴加香柏油起什么作用？ 4．油鏡使用完后應(yīng)如何處理？

實(shí)驗(yàn)二放線菌與霉菌形態(tài)觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)掌握插片法和水浸片法觀察放線菌和霉菌的方法。2．學(xué)習(xí)掌握低倍鏡和高倍鏡觀察絲狀菌體的技能。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1．用插片法觀察繪圖放線菌的形態(tài)并注意“三絲”分化。將滅菌的蓋玻片斜插在涂布放線菌孢子的培養(yǎng)基的平板上，一半露在外面，恒溫培養(yǎng)后在培養(yǎng)基表面和蓋玻片上部都有放線菌生長(zhǎng)，小心取出蓋玻片，放在干凈的載玻片上，在顯微鏡下直接觀察。

2．用水浸片法觀察：青霉（Penicillium.sp）、曲霉（Aspergillus.sp）的形態(tài)和分生孢子。根霉（Rhigopus.sp）的假根和孢囊孢子。梨頭霉（Absidia.sp）的接合孢子，木霉（Trichederma.sp）的形態(tài)，注意分枝形態(tài)。

霉菌菌絲一般可從培養(yǎng)體上直接調(diào)取，作成水浸片。具體方法：在清潔載玻片中央，加蒸餾水一滴，用解針挑取少量菌絲放入水滴中，這時(shí)兩手各持針一支，將菌絲分開，不使纏結(jié)成團(tuán)。挑開菌絲后，輕輕加上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡，先用低倍鏡后用高倍鏡觀察。

三、作業(yè)

1．繪圖、記錄南昌鏈霉菌、青霉、木霉、曲霉和根霉的形態(tài)。2．繪圖、記錄梨頭霉的接合孢子形態(tài)。3．用水浸片法觀察絲狀真菌應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

實(shí)驗(yàn)三污水環(huán)境細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性與原生動(dòng)物、藻類的形態(tài)觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)掌握用懸滴法觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的方法和技術(shù)。2．學(xué)習(xí)掌握用水浸片法觀察原生動(dòng)物和藻類的形態(tài)。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1．用懸滴法觀察污水中細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性，注意運(yùn)動(dòng)方向。2．用水浸片法觀察原生動(dòng)物的形態(tài)、運(yùn)動(dòng)性并注意分類。（1）鞭毛蟲類（Flagellata）：綠眼蟲、波豆蟲（2）肉足蟲類（Sarcoclina）：變形蟲、太陽蟲

（3）纖毛蟲（Ciliata）：草蟲、腎形蟲、鐘蟲、豆形蟲、漫游蟲等 3．用水浸片法觀察藻類的形態(tài)、種類并注意分類。（1）綠藻：空球藻屬（Fudoria）珊藻屬（Scendesmus）鼓藻屬（Cosmarium）小球藻屬（Chlorella）盤星藻屬（Pediastrum）

（2）裸藻：眼蟲藻屬（Euglena）（3）硅藻：舟形藻屬（Navicula）直鏈藻屬（Melosira）平板藻屬（Tabellaria）

三、作業(yè)

1．繪圖記錄細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)方向，懸滴法觀察應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？ 2．繪圖記錄原生動(dòng)物、藻類的形態(tài)、種類和名稱。

實(shí)驗(yàn)四 微生物的大小測(cè)定與數(shù)量的測(cè)定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)了解測(cè)微尺的結(jié)構(gòu)，掌握測(cè)定微生物大小的方法。2．觀察酵母菌的形態(tài)，掌握鑒別死活酵母菌的方法。

3．學(xué)習(xí)了解血球計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)，掌握微生物數(shù)量測(cè)定的方法。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1．在低倍鏡和高倍鏡下求出目鏡測(cè)微尺的校正值。（1）目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺

目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，在玻片的中央刻有一小尺，它是在5 毫米內(nèi)作50 等分刻制的，每一等份為0.1 毫米。另一規(guī)格是5 毫米作100 等分，每等分為0.05 毫米。鏡臺(tái)測(cè)微尺是刻在載玻片中央的小尺，它是在1 毫米內(nèi)作100 等分刻成的，每等分10 微米。

（2）目鏡測(cè)微尺校正的方法

將鏡臺(tái)測(cè)微尺上面的透鏡片取下，把目鏡測(cè)微尺放在光闌上，刻度朝下。把鏡臺(tái) 測(cè)微尺置于載物臺(tái)上，用低倍物鏡檢視，使測(cè)微尺位于視野中央。注意區(qū)分視野內(nèi)兩把尺哪個(gè)是目鏡測(cè)微尺，哪個(gè)是鏡臺(tái)測(cè)微尺。利用推進(jìn)器或轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使兩尺的第一條線（0 線）互相重合，然后找出另一條重合線。如重合線較多選取距0 線最遠(yuǎn)的重合線。記下兩條重合線之間兩尺的刻度，依公式算出目鏡測(cè)微尺的校正值。目鏡測(cè)微尺校正值（每刻度微米數(shù)）= 兩重疊刻度間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)×10 兩重疊刻度間目鏡測(cè)微尺格數(shù)

2．用美蘭水浸片法觀察釀酒酵母（saccharomyces cerevisiac）的形態(tài)，注意出芽繁殖

和死活酵母菌的染色形態(tài)，并測(cè)量大小。3．用血球板計(jì)算黑曲霉孢子的數(shù)量。（1）血球計(jì)數(shù)板

利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常見的微生物計(jì)總數(shù)的方法。因?yàn)橛?jì) 數(shù)板載片和蓋片間的容積一定，所以可以根據(jù)顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來計(jì)算單位體積內(nèi)微生物總數(shù)。血球計(jì)數(shù)板是一只特制載玻片。載片上有兩個(gè)方格網(wǎng)，每一方 格網(wǎng)共分九個(gè)大方格，其中間的一個(gè)大方格用來做微生物計(jì)數(shù)，所以又稱為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種，一種是每個(gè)大方格分成16 個(gè)中方格，每中方格又分成25個(gè)小方格。另一種是一個(gè)大方格分25 個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成16 個(gè)小方格，不論哪一種，一個(gè)大方格，都等分成（25×16 或16×25）400 個(gè)小方格。因?yàn)槊總€(gè)大方格邊長(zhǎng)為1 毫米，載片與蓋片間距離為0.1 毫米，所以每個(gè)計(jì)數(shù)室（1 個(gè)大方格）體積為0.1 立方毫米。測(cè)出每個(gè)中方格菌數(shù)，就可以算出一個(gè)大方格的菌數(shù)，由此推算出1 毫升菌液內(nèi)所含的菌數(shù)。一個(gè)大方格是16 個(gè)中方格時(shí)，應(yīng)當(dāng)數(shù)4 角4 個(gè)中方格（即100 個(gè)小方格）的菌數(shù)，一個(gè)大方格是25 個(gè)中方格時(shí)，除取4 角4 個(gè)中方格外，還要數(shù)中央一個(gè)中方格（即為80 個(gè)小方格）的菌數(shù)。計(jì)算公式如下： 16×25 計(jì)數(shù)板：

總菌數(shù)/ml= ×400×10000×稀釋倍數(shù)=每個(gè)小方格內(nèi)菌數(shù)×4×106×稀釋倍數(shù) 25×16 計(jì)數(shù)板：

總菌數(shù)/ml= ×400×10000×稀釋倍數(shù)=每小方格內(nèi)菌數(shù)×4×106×稀釋倍數(shù)（2）血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)方法

①視待測(cè)菌懸液濃度，加無菌水適當(dāng)稀釋，以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。②取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。

③將黑曲霉孢子懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上，不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高。然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。

④靜置片刻，將血球計(jì)數(shù)板置載物臺(tái)上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。

⑤計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16 個(gè)大方格組成，按對(duì)角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4 個(gè)大方格（即100 小格）的菌數(shù)。如果是25 個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個(gè)大方格外，還需數(shù)中央l 個(gè)大方格的菌數(shù)（即80 個(gè)小格）。如菌體位于大方格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。

⑥測(cè)數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。

三、作業(yè)

1．測(cè)量酵母菌的大?。ǜ弑剁R）： 菌名 寬（目鏡格數(shù)）長(zhǎng)（目鏡格數(shù)）平均

2．在不改變目鏡和目尺，而改變物鏡來測(cè)定同一酵母菌時(shí)，其結(jié)果是否相同，為什么？

3．根據(jù)你的操作，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差，力求準(zhǔn)確？

實(shí)驗(yàn)五 培養(yǎng)基的制備與滅菌

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)掌握培養(yǎng)基的制備原理與方法。2．學(xué)習(xí)掌握玻璃器皿的包扎與滅菌方法。

3．學(xué)習(xí)掌握高壓蒸汽滅菌，干熱滅菌的原理與方法。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．玻璃器皿的包扎

（1）每4-5 人為一組包扎：直徑9 厘米培養(yǎng)皿3 包，每包6 皿，1ml 吸管2 支，5ml吸管2 支，玻璃刮鏟3 支。

（2）每一小組制備18×180mm 試管無菌水5 支，每支4.5ml 自來水，250ml 三角瓶帶玻璃珠無菌水1 瓶，裝自來水45ml，以上塞好棉塞包扎后待滅菌。2．培養(yǎng)基制備

（1）培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。（2）制備流程：稱量→溶解→蒸煮→調(diào)pH→分裝→包扎→滅菌（3）高氏一號(hào)培養(yǎng)基配方

可溶性淀粉 20g K2HPO4 0.5g KNO3 1g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 10mg 瓊脂 20g 蒸餾水 1000ml PH 值 7.2—7.4（4）每小組制備高氏培養(yǎng)基250ml，分裝15*150mm 試管8-10 支，余液分裝250ml 三角瓶2 瓶，塞棉塞包扎待滅菌。（5）關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng) ①要嚴(yán)格按配方配制。②調(diào)pH 不要過頭。

③干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時(shí)間控制，70oC 以下放物、取物。

④高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。3．消毒（disinfection）與滅菌（sterilization）消毒：用化學(xué)或物理的方法殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)體。滅菌：用物理或化學(xué)的方法殺滅物體上一切微生物。

（1）干熱滅菌法：把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160oC，恒溫1 小時(shí)即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。

（2）高壓蒸汽滅菌法（一般121oC，30min，適用培養(yǎng)基）：把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的，以大量蒸汽使其中壓力升高。由于蒸汽壓的上升，水的沸點(diǎn)也隨之提高。在蒸汽壓達(dá)到1.055 公斤/厘米2 時(shí)，加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的溫度可達(dá)到121oC。在這種情況下，微生物（包括芽孢）在15-20 分鐘便會(huì)被殺死，而達(dá)到滅菌目的。如滅菌的對(duì)象是砂土、石蠟油等面積大、含菌多、傳熱差的物品，則應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。

（3）間歇滅菌法：待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1 次，每次煮沸1h，連續(xù)3d 重復(fù)進(jìn)行。在每?jī)纱握糁笾g，將物品（指培養(yǎng)基）放在37oC 恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。

（4）巴氏滅菌法：有些食物會(huì)因高溫破壞營(yíng)養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味，又進(jìn)行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法一般在62oC，30 分鐘既可達(dá)到消毒目的。此法為法國(guó)微生物學(xué)家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。4．棉塞的制作

三、作業(yè)

1．高氏一號(hào)培養(yǎng)基屬于何種性質(zhì)培養(yǎng)基？有沉淀嗎？為什么？

2．高壓蒸汽滅菌的過程中，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)，最關(guān)鍵的因素是什么？為什么？

實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境微生物的分離與生理鑒定實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)掌握平板稀釋法分離環(huán)境微生物的技術(shù)。2．學(xué)習(xí)掌握微生物生理生化鑒別的基本方法。3．學(xué)習(xí)掌握無菌操作技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．土壤微生物的分離

分離微生物是，一般是根據(jù)該微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)、pH、氧氣等要求的不同，供給 它們適宜的生活條件，或加入某種抑制劑造成只利于該菌種生長(zhǎng)，不利于其他菌 種生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰不需要的菌種。分離方法用稀釋平板分離法，其最終目 的是要在培養(yǎng)基上出現(xiàn)欲分離微生物的單個(gè)菌落，同時(shí)還可以測(cè)定分離的微生物 的數(shù)量。

（1）方法：將土樣隨機(jī)稱取10g，加入至裝有90 ml 無菌水帶玻璃珠的三角 瓶中，旋轉(zhuǎn)震蕩30min，作逐級(jí)分離，逐級(jí)稀釋見下圖，用無菌吸管吸取不同稀 釋度菌懸液0.1ml 涂布平板。（2）稀釋度選擇：

①牛肉膏培養(yǎng)基：10 皿(稀釋度10﹣4,10﹣5,10﹣6,三個(gè)重復(fù),一個(gè)備用)； ②高氏一號(hào)培養(yǎng)基：10 皿(稀釋度10﹣3,10﹣4,10﹣5,三個(gè)重復(fù)，一個(gè)備用)； ③真菌培養(yǎng)基：10 皿(稀釋度10﹣3,10﹣4,10﹣5,三個(gè)重復(fù),一個(gè)備用)；

2．用大腸桿菌和枯草芽孢桿菌分別接種糖發(fā)酵培養(yǎng)基、石蕊牛乳培養(yǎng)基、蛋白 胨培養(yǎng)基和淀粉培養(yǎng)基作生理鑒別實(shí)驗(yàn)。（1）糖發(fā)酵試驗(yàn)

各種細(xì)菌由于具有不同的酶系統(tǒng)，致使它們能利用不同的底物，或雖然可 以利用相同的底物，卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此可以利用各種生理生化反應(yīng) 來鑒別細(xì)菌。糖發(fā)酵是最常用的生化反應(yīng)，存在于大多數(shù)細(xì)菌中。不同的細(xì)菌 在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細(xì)菌能分解某種糖并產(chǎn)生酸性物質(zhì)(如 乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細(xì)菌只產(chǎn)生酸 不產(chǎn)生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，普通變形桿菌分解 葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但不能分解乳糖。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判斷。在培養(yǎng)基 中加入溴甲酚紫(pH5．2 為黃色，pH6．8 為紫色)，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，使培養(yǎng)基由 紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵試管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡的出 現(xiàn)來驗(yàn)證。（2）石蕊牛乳試驗(yàn)

牛乳中通常含有蔗糖、乳糖、蛋白質(zhì)、酪素等成分。微生物對(duì)牛乳的利用主 要是指乳糖及酪蛋白的分解利用。牛乳中常加入石蕊作酸堿指示劑和氧化還原指 示劑。微生物對(duì)牛乳的利用可分三種情況：①酸凝固作用：微生物發(fā)酵乳糖后產(chǎn) 生許多酸，使石蕊變紅，同時(shí)酸度很高時(shí)，可使牛乳凝固。②凝乳酶凝固作用： 某些微生物能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，這種凝固作用在中性環(huán)境中 發(fā)生，通常這類微生物還具有水解蛋白質(zhì)的能力，從而會(huì)產(chǎn)生一些堿性物質(zhì)，是 石蕊變藍(lán)。③胨化作用：酪蛋白被水解變得清亮而透明，胨化作用可以在酸性或 堿性條件下進(jìn)行，并且一般石蕊色素還原脫色。（3）產(chǎn)氨和產(chǎn)硫化氫試驗(yàn)

某些微生物具有脫氨酶，能使氨基酸在各種作用下脫去氨基而生成氨，氨的 產(chǎn)生可用紅色石蕊試紙夾懸于培養(yǎng)試管的棉塞下檢驗(yàn)，培養(yǎng)后試紙變藍(lán)，即判為 產(chǎn)氨。

某些微生物能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸生成硫化氫?？捎么姿徙U試紙，接 種試驗(yàn)菌于培養(yǎng)液中，立即將試紙懸夾于棉塞下，紙條下端與液面接近，但不可 接觸。如試紙變黑為正反應(yīng)即產(chǎn)硫化氫。（4）淀粉水解試驗(yàn)

某些微生物具有淀粉酶，可以使淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖，而另一些微生 物則沒有這種特性。將試驗(yàn)菌在淀粉水解培養(yǎng)基的平板上劃“+”接種。培養(yǎng)后打開皿蓋，滴加碘液于培養(yǎng)基，輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使碘液鋪滿整個(gè)平板。因培養(yǎng)基內(nèi)含淀粉，遇碘立即變蘭，但如果供試菌能分解淀粉，則菌落周圍淀粉已被水解，此時(shí)遇碘不變色，因而菌落外圍出現(xiàn)無色透明圈。

三、培養(yǎng)基的配制 1．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g NaCl 0.5g 瓊脂 20g 蒸餾水 1000ml PH 值 7.2—7.4 2．高氏一號(hào)培養(yǎng)基 可溶性淀粉 20g K2HPO4 0.5g KNO3 1g MgSO4.7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO4 10mg 瓊脂 20g 蒸餾水 1000ml PH 值 7.2—7.4 使用時(shí)加1%重鉻酸鉀溶液0.5ml/250ml 培養(yǎng)基。3．馬丁培養(yǎng)基 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g KH2PO4 1g 瓊脂 20g MgSO4.7H2O 0.5g 自然PH 值

蒸餾水 1000ml 煮溶后加1%孟加拉紅3.3ml,攪勻。（8 磅即112℃滅 菌30min）4．糖發(fā)酵培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 葡萄糖 5 g 水 1000 ml PH 值 7.2-7.4 加溴甲酚紫1.6%的酒精溶液1ml（8 磅即112℃滅菌30min）

溴甲酚紫1.6%酒精溶液的配制：稱溴甲酚紫1.6g 溶于50ml 酒精（95%），再加 入蒸餾水50ml，用濾紙過濾后用三角瓶裝，放冰箱備用。5．石蕊牛乳培養(yǎng)基

牛奶（1000g）→煮沸→離心（4500 轉(zhuǎn)/分鐘，5 分鐘）→去脂→調(diào)PH 值 7.2→加入石蕊液使牛奶成蘭色→分裝15×150ml 試管→8 磅滅菌20 分鐘。石蕊液配制：稱2.5g 石蕊，加50ml 蒸餾水研磨，研磨石蕊時(shí)，先加少許蒸餾水 研磨，研磨過程中慢慢滴加蒸餾水，研磨到無顆粒為止，再進(jìn)行抽濾。6.淀粉水解培養(yǎng)基 蛋白胨 10g NaCl 5g 牛肉膏 5 g 可溶性淀粉 5g 瓊脂 20g 蒸餾水 1000 ml PH 值 7.2 7．產(chǎn)硫化氫培養(yǎng)基 蛋白胨 20g NaCl 5g 牛肉膏 2.5 g 檸檬酸鐵銨 0.5g 硫代硫酸鈉 0.5g 蒸餾水 1000 ml

三、作業(yè)

1．平板稀釋分離環(huán)境微生物應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？ 2．生理鑒別試驗(yàn)的原理與反應(yīng)有哪些？

實(shí)驗(yàn)七 環(huán)境微生物分離與生理鑒定結(jié)果檢查

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．學(xué)習(xí)掌握四大類微生物菌落形態(tài)的識(shí)別。

2．學(xué)習(xí)掌握環(huán)境微生物生理鑒定結(jié)果分析的原理與方法。3．學(xué)習(xí)掌握微生物純化培養(yǎng)接種的無菌操作技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1．四大類微生物菌落形態(tài)識(shí)別

（1）細(xì)菌：菌落表面光滑或粗糙，邊緣整齊或不規(guī)則，奶油狀。

（2）放線菌：菌落表面呈絨狀，粉狀或絨毛狀，有些產(chǎn)色素，有同心環(huán)，不易 調(diào)起。

（3）酵母菌：菌落大而厚，濕潤(rùn)粘稠，易調(diào)起，多數(shù)呈乳白色，少數(shù)紅色。（4）霉菌：菌落大而疏松，呈絨毛狀、絮狀或蜘網(wǎng)狀，有色素，比細(xì)菌大數(shù)倍 到幾十倍。

2．土壤中細(xì)菌、放線菌、霉菌分離的結(jié)果統(tǒng)計(jì) 3．生理生化鑒定結(jié)果檢查 項(xiàng)目 E.coli B.subtilis CK 備注 糖發(fā)酵 產(chǎn)酸 產(chǎn)氣 產(chǎn)酸 產(chǎn)氣 石蕊牛乳 凝固 液化 凝固 液化 蛋白胨 產(chǎn)NH3 產(chǎn)H2S 產(chǎn)NH3 產(chǎn)H2S 產(chǎn)淀粉酶

4．菌落純培養(yǎng)斜面接種

將分離到的放線菌單菌落，通過無菌操作技術(shù)移接到斜面培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)5-7 天。

實(shí)驗(yàn)八 水中總大腸菌群的測(cè)定－多管發(fā)酵法

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

結(jié)合水凈化工程中的細(xì)菌檢驗(yàn)，掌握水環(huán)境監(jiān)測(cè)中和給水水質(zhì)檢驗(yàn)中大腸桿菌群 數(shù)的測(cè)定方法，同時(shí)通過大腸桿菌群的測(cè)定，了解大腸桿菌群的生化特性。

二、原理

總大腸菌群可用多管發(fā)酵法或?yàn)V膜法檢驗(yàn)。多管發(fā)酵法的原理是根據(jù)大腸菌群細(xì) 菌能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣以及具備革蘭氏染色陰性，無芽孢，呈桿狀等有關(guān)特性，通過初發(fā)酵試驗(yàn)、平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)等三個(gè)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)求得水樣中的總大腸菌群數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果以最可能數(shù)（most probable number），簡(jiǎn)稱MPN 表示。

三、儀器

高壓蒸氣滅菌器；恒溫培養(yǎng)箱；冰箱；生物顯微鏡；載玻片；酒精燈；鎳鉻絲接 種棒；培養(yǎng)皿（直徑100mm）；試管（18×180mm）；吸管（1、5、10mL）；燒杯；錐形瓶；采樣瓶等等。

四、培養(yǎng)基的制備：

1.乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：將10g 蛋白胨、3g 牛肉膏、5g 乳糖和5g 氯化鈉加熱溶解于1000mL 蒸餾水中，調(diào)節(jié)溶液pH 為7.2—7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于試管中，于115℃高壓滅菌器中滅菌20min，貯存于冷暗處備用。

2.三倍濃縮乳糖蛋白陳培養(yǎng)液：按上述乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的制備方法配制。除蒸 餾水外，各組分用量增加至三倍。3.品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基

（1）貯備培養(yǎng)基的制備：于2000mL 燒杯中，先將20—30g 瓊脂加到900mL 蒸 餾水中，加熱溶解，然后加入3.5g 磷酸氫二鉀及10g 蛋白胨，混勻，使其溶解，再用蒸餾水補(bǔ)充到1000mL，調(diào)節(jié)溶液pH 至7.2—7.4。趁熱用脫脂棉或絨布過濾，再加10g 乳糖，混勻，定量分裝于250 或500mL 錐形瓶?jī)?nèi)，置于高壓滅菌器中，在115℃滅菌20min，貯存于冷暗處備用。

（2）平皿培養(yǎng)基的制備：將上法制備的貯備培養(yǎng)基加熱融化。根據(jù)錐形瓶?jī)?nèi)培 養(yǎng)基的容量，用滅菌吸管按比例吸取一定量的5%堿性品紅乙醇溶液（1000mL 培養(yǎng)基約加20mL5%堿性品紅乙醇溶液），置于滅菌試管中；再按比例稱取無水亞硫酸鈉（1000mL 培養(yǎng)基約加5g 無水亞硫酸鈉），置于另一滅菌空試管內(nèi)，加滅菌水少許使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（滅菌）。用滅菌吸管吸取已滅菌的亞硫酸鈉溶液，滴加于堿性品紅乙醇溶液內(nèi)至深紅色再退至淡紅色為止（不宜加多）。將此混合液全部加入已融化的貯備培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻（防止產(chǎn)生氣泡）。立即將此培養(yǎng)基適量（約15mL）傾入已滅菌的平皿內(nèi)，待冷卻凝固后，置于冰箱內(nèi)備用，但保存時(shí)間不宜超過兩周。如培養(yǎng)基已由淡紅色變成深紅色，則不能再用。

五、測(cè)定水源水總大腸菌群實(shí)驗(yàn)步驟

1、初發(fā)酵試驗(yàn)

于各裝有5mL 三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5 個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），分別加入 10mL 水樣；于各裝有10mL 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5 個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），分別加入1mL 水樣；再于各裝有10mL 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5 個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），分別加入1mL1： 10 稀釋的水樣。共計(jì)15 管，三個(gè)稀釋度。將各管充分混勻，置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。（2）平板分離：上述各發(fā)酵管經(jīng)培養(yǎng)24h 后，將產(chǎn)酸、產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管分別接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，挑選符合下列特征的菌落。

2、平板分離

品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上：紫紅色，具有金屬光澤的菌落；深紅色，不帶或略帶金 屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落。取有上述特征的群落進(jìn)行革蘭氏染色：

①用已培養(yǎng)18—24h 的培養(yǎng)物涂片，涂層要薄。②將涂片在火焰上加溫固定，待冷卻后滴加結(jié)晶紫溶液，1min 后用水洗去。③滴加助染劑，1min 后用水洗去。④滴加脫色劑，搖動(dòng)玻片，直至無紫色脫落為止（約20—30s），用水洗去。⑤滴加復(fù)染劑，1min 后用水洗去，晾干、鏡檢，呈紫色者為革蘭氏陽性菌，呈紅色者為陰性菌。

3、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)

上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢的桿菌，則挑選該菌落的另一部分接 種于裝有普通濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中（內(nèi)有倒管），每管可接種分離自同一初發(fā)酵管（瓶）的最典型菌落1—3 個(gè)，然后置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣者（不論倒管內(nèi)氣體多少皆作為產(chǎn)氣論），即證實(shí)有大腸菌群存在。根據(jù)證實(shí)總大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查后附表1“最可能數(shù)（MPN）表”，即求得每100mL 水樣中存在的總大腸菌群數(shù)。我國(guó)目前系以1L 為報(bào)告單位，故MPN 值再乘以10，即為1L 水樣中的總大腸菌群數(shù)。

例如，某水樣接種10mL 的5 管均為陽性；接種1mL 的5 管中有2 管為陽性； 接種1：10 的水樣1mL 的5 管均為陰性。從最可能數(shù)（MPN）表中查檢驗(yàn)結(jié)果5-2-0，得知100mL 水樣中的總大腸菌群數(shù)為49 個(gè)，故1L 水樣中的總大腸菌群數(shù)為 49×10=490 個(gè)。對(duì)污染嚴(yán)重的地表水和廢水，初發(fā)酵試驗(yàn)的接種水樣應(yīng)作1：

10、1：100、1：1000 或更高倍數(shù)的稀釋，檢驗(yàn)步驟同“水源水”檢驗(yàn)方法。如果接種的水樣量不是10mL、1mL 和0.1mL，而是較低或較高的三個(gè)濃度的水 樣量，也可查表求得MPN 指數(shù)，再經(jīng)下面公式換算成每100mL 的MPN 值。

六、思考題

1、你認(rèn)為要得到正確的革蘭氏染色結(jié)果必須注意哪些操作?關(guān)鍵在哪一步?為什么?

2、大腸菌群測(cè)定利用了它的哪些生化特性？

表1 最可能數(shù)(MPN)表

（接種5 份10mL 水樣、5 份1mL 水樣、5 份0.1mL 水樣時(shí)，不同陽性及陰 性情況下100mL 水樣中細(xì)菌數(shù)的最可能數(shù)和95%可信限值）

實(shí)驗(yàn)九

空氣微生物檢測(cè)（平皿落菌法）

實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮驮恚河脿I(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌；用查氏瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)霉菌；用高氏淀粉瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)放線菌。通過實(shí)驗(yàn)了解空氣中微生物的分布，學(xué)習(xí)習(xí)近平皿落菌法檢測(cè)空氣微生物。

實(shí)驗(yàn)器材：高壓蒸汽消毒鍋，恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)，玻璃皿，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，查氏瓊脂培養(yǎng)基，高氏淀粉瓊脂培養(yǎng)基。方法與步驟： 一．培養(yǎng)基制備

1．營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，瓊脂10g，加水至500ml，加熱、攪拌至瓊脂溶解，調(diào)pH7.2~7.4，121℃蒸汽滅菌20分鐘。

2．查氏瓊脂培養(yǎng)基：NaNO3 1g，KCl 0.25g，K2HPO4 0.5g，MgSO4 0.25g，F(xiàn)eSO4 0.005g，瓊脂10g，蔗糖15g，加水500ml，加熱、攪拌至瓊脂溶解，115℃蒸汽滅菌20分鐘。

3.高氏淀粉瓊脂培養(yǎng)基：可溶性淀粉10g先用少量冷水調(diào)成糊狀，在火上加熱，然后加水及KNO30.5g，K2HPO4 0.25g NaCl 0.25g，MgSO4 0.25g，F(xiàn)eSO4 0.25g，瓊脂10g，加熱溶化，調(diào)pH7.0~ 7.2，補(bǔ)足水至500ml，121℃滅菌20分鐘。二.每組15個(gè)平皿滅菌將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、查氏瓊脂培養(yǎng)基、高氏淀粉瓊脂培養(yǎng)基，三種培養(yǎng)基各倒5個(gè)平板，冷凝。

2.在一定面積房間或室外，按4角和中央5點(diǎn)，每種培養(yǎng)基每點(diǎn)放一個(gè)平板，打開蓋，室內(nèi)放置10分鐘，室外放置3分鐘后蓋蓋，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)24h，查氏和高氏培養(yǎng)基在28℃培養(yǎng)48h。

3.培養(yǎng)結(jié)束，觀察各種微生物的菌落形態(tài)，將微生物種類、菌落數(shù)和計(jì)算結(jié)果記錄于下表：

三．計(jì)算：空氣微生物數(shù)(個(gè)/m3)=5個(gè)皿平均菌落數(shù)×50000÷平皿底面積（cm2）÷暴露時(shí)間（min）

四．衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：我國(guó)還無統(tǒng)一的空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，室內(nèi)一般以500～1000/m3作為參考指標(biāo)。

地點(diǎn)

采樣時(shí)間

細(xì)菌菌落

霉菌菌落

放線菌菌落

計(jì)算結(jié)果（個(gè)/m3）

細(xì)菌數(shù)量

霉菌數(shù)量

放線菌數(shù)量

實(shí)驗(yàn)九 菌種保藏

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)并掌握菌種保藏的基本原理。2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微生物個(gè)體微小、代謝旺盛、生長(zhǎng)繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法

三、試劑與器材

1.材料大腸桿菌、青霉菌、放線菌

2.試劑液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無水氯化鈣、食鹽、干冰

3.器材無菌吸管、無菌滴管、無菌培養(yǎng)皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.斜面保藏法 2.液體石蠟法 3.穿刺保藏法 4.砂土管保藏法

5.冷凍真空干燥保存法

五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1.清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)不同要求選擇適宜的保藏方法。2.熔封安瓶時(shí)防止封閉不嚴(yán)。3.液氮凍存操作應(yīng)防止凍傷。

六、思考題

根據(jù)你自己的實(shí)驗(yàn)。談?wù)?--2種菌種保藏方法的利弊?

第二篇：微生物實(shí)驗(yàn)教案

《微生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目] 實(shí)驗(yàn)一 微生物學(xué)試驗(yàn)常用玻璃儀器洗滌及干熱滅菌 [教學(xué)時(shí)數(shù)]

3學(xué)時(shí) [實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1．認(rèn)識(shí)微生物實(shí)驗(yàn)所需要的各種器皿，了解常用工具和儀器的名稱、用途。2．掌握對(duì)玻璃器皿的清洗、包扎方法與干熱滅菌的操作過程。[實(shí)驗(yàn)原理]

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求較高的無菌狀態(tài)，因此，實(shí)驗(yàn)所用的器皿，大多數(shù)要進(jìn)行消毒、滅菌從而用以培養(yǎng)微生物，所以對(duì)其質(zhì)量、規(guī)格、洗滌和包扎方法均有一定要求。

清潔的玻璃器皿是實(shí)驗(yàn)得到正確結(jié)果的先決條件，包扎方法要能保證防止污染雜菌。

干熱滅菌的原理，空的玻璃器皿一般用干熱滅菌。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度要高（160～170℃），時(shí)間要長(zhǎng)（1～2h），但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦，甚至引起燃燒。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備]

1．培養(yǎng)皿、大試管、三角瓶6只、燒杯（500ml）2只、燒杯（1000ml）1只、小試管6只、吸管（0.2ml 2支，0.5ml 2支，1ml 2支，5ml 2支）共8支。2．去污粉、肥皂、清洗劑、毛刷。3．棉花、扎繩、包扎紙。[實(shí)驗(yàn)步驟]

（一）學(xué)習(xí)下列常用儀器的種類、規(guī)格和應(yīng)用范圍 1.培養(yǎng)皿

由一底一蓋組成一套，常用的培養(yǎng)皿皿底直徑90 mm，高15mm,皿底皿蓋均為玻璃制成。制成平板，可用于分離、純化、鑒定菌種、活菌計(jì)數(shù)以及測(cè)定抗生素、噬菌體的效價(jià)等。2.試管

(1)大試管(約18mm×180mm): 可裝倒平板用的培養(yǎng)基，可作制備斜面用（需要大量菌體時(shí)用），裝液體培養(yǎng)基用于微生物的振蕩培養(yǎng)。

(2)中試管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 裝液體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌或做斜面用，用于細(xì)菌、霉菌、病毒等的稀釋和血清學(xué)試驗(yàn)。

(3)小試管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖發(fā)酵或血清學(xué)試驗(yàn)，和其它需要節(jié)省材料的試驗(yàn)。3.三角瓶 規(guī)格有100mL、250mL、500mL和1000 mL用來裝無菌水、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)微生物等。4.燒杯

規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用來配制培養(yǎng)基與各種溶液等。5.吸管 規(guī)格有0.1mL、1mL、2mL、5mL、10mL用來量取轉(zhuǎn)移各種溶液等。6.量筒 規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL。

（二）學(xué)習(xí)玻璃器皿的洗滌方法 1.新玻璃器皿的洗滌

在2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，用自來水沖洗干凈。2.舊玻璃器皿的洗滌

（1）試管、培養(yǎng)皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自來水沖洗 A 裝有固體培養(yǎng)基：刮掉，洗滌

B 帶菌的器皿：2%來蘇爾或0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時(shí)或煮沸0.5小時(shí)，然后洗滌 C 帶病原菌培養(yǎng)物的器皿：先高壓蒸汽滅菌，倒去培養(yǎng)物（2）玻璃吸管：吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，反復(fù)沖洗

A 吸過血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自來水的容器中浸泡，實(shí)驗(yàn)后集中沖洗。B 塞有棉花的吸管：用水將棉花沖出，然后沖洗

C 吸過含有微生物培養(yǎng)物的吸管：2%來蘇爾或0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時(shí)然后洗 D 吸管內(nèi)壁有油垢：洗滌液中浸泡數(shù)小時(shí)，再?zèng)_洗

(三)學(xué)習(xí)各種器皿的包扎

1.培養(yǎng)皿的包扎：牛皮紙或舊報(bào)紙包緊，一般以5～8套培養(yǎng)皿包成1包 2.吸管的包扎：

在上端約0.5cm處，塞入一小段1.5 cm長(zhǎng)的棉花（勿用脫脂棉），目的是避免將外界或嘴中雜菌吹入管內(nèi)，或不慎將菌液吸出管外。用4～5 cm寬的長(zhǎng)紙條卷起來3.試管和三角瓶等的包扎：用橡皮塞和牛皮紙。(四)干熱滅菌 1．裝入待滅菌物品

將包好的待滅菌物品（培養(yǎng)皿、吸管等）放入電烘箱內(nèi)，關(guān)好箱門。物品不要擺太擠，以免妨礙空氣流通；不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。

2．升溫 接通電源，撥動(dòng)開關(guān)，打開電烘箱排氣孔，讓溫度逐漸上升。當(dāng)溫度升至100℃時(shí)，關(guān)閉排氣孔。3．恒溫 當(dāng)溫度升達(dá)到160～170℃時(shí)，恒溫調(diào)節(jié)器會(huì)自動(dòng)控制調(diào)節(jié)溫度，保持此溫度2h。干熱火菌過程。嚴(yán)防恒溫調(diào)節(jié)的自動(dòng)控制失靈而造成安全事故。

4．降溫 切斷電源、自然降溫。

5．開箱取物 待電烘箱內(nèi)溫度降到70℃以下后，打開箱門，取出滅菌物品。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.通過本次實(shí)驗(yàn)?zāi)阏J(rèn)識(shí)了微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的哪些器皿？ 2.簡(jiǎn)述玻璃器皿洗滌的基本要求。3.簡(jiǎn)述干熱滅菌的操作步驟。[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的制備與滅菌 [教學(xué)時(shí)數(shù)]

4學(xué)時(shí)[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]1．了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2．了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。[實(shí)驗(yàn)原理]

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制 方法。

從培養(yǎng)基的組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。

2.半合成培養(yǎng)基：一部分純化學(xué)物質(zhì)和一部分天然物質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成。

從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為: 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀

態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。察氏一號(hào)培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的霉菌培養(yǎng)基。

高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到1.055kg/cm2時(shí)，鍋內(nèi)溫度可達(dá)到121℃，一般維持20min,即可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體或芽孢，而達(dá)到滅菌目的。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備]

1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1.稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查 2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物

3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查 4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌 關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.要嚴(yán)格按配方配制。2.調(diào)pH不要過頭。

3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時(shí)間控制，70oC以下放物、取物。4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。

5.過濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的? 2.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么? 3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么? 4.培養(yǎng)基的配制原則是什么? [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)三 環(huán)境和人體微生物的檢測(cè)及無菌操作技術(shù)[教學(xué)時(shí)數(shù)]3學(xué)時(shí) [實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.通過檢測(cè)環(huán)境和人體中微生物的存在，體會(huì)微生物分布的廣泛性。

2.學(xué)習(xí)無菌操作的技術(shù)，掌握利用稀釋涂布平板法從土壤中分離微生物的方法。[實(shí)驗(yàn)原理] 自然環(huán)境中和人及動(dòng)物的體表、體內(nèi)都存在大量的微生物，它們一遇到適合的條件就會(huì)大量繁殖。當(dāng)把取自不同來源的含菌樣品接種于含有生長(zhǎng)發(fā)育需要的各種營(yíng)養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基時(shí)，就會(huì)形成肉眼可見的微生物集體群落-菌落。每種微生物菌落都有其獨(dú)有的特點(diǎn)，如大小、顏色、表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整齊或不整齊等。因此，可以通過平板培養(yǎng)來檢測(cè)不同環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類和特點(diǎn)。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 1.恒溫培養(yǎng)箱、磁力攪拌器、移液槍

2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、察氏一號(hào)培養(yǎng)基；地面以下5-10cm的土壤； 3.酒精燈、無菌棉棒、無菌生理鹽水、涂布棒、記號(hào)筆、培養(yǎng)皿、吸管、試管、三角瓶 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1.無菌操作技術(shù) 在酒精燈火焰旁操作，將融化并冷卻至不燙手的滅菌固體培養(yǎng)基倒入無菌的培養(yǎng)皿，倒量為容積的1/3~1/2或者覆蓋皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即為無菌平板。

2.土樣的稀釋分離

制備土樣懸濁液：稱取土樣1g，迅速倒入盛有99ml無菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，攪拌10-15min，使土樣充分打散，即成10-2的土壤懸濁液。稀釋：用無菌移液管吸10-2的土壤懸液0.5mL，放入4.5mL無菌水中即為10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-3～10-6的稀釋液。(注意：操作時(shí)每一個(gè)稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。)3.環(huán)境及人體各部位取菌樣 4.標(biāo)記、培養(yǎng)

標(biāo)記： A-Ⅰ-1-10-5姓名

按培養(yǎng)基類別：細(xì)菌培養(yǎng)基--A，霉菌培養(yǎng)基--B 按3個(gè)大組：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、按4個(gè)中組：1-4 按樣品類別：10-

5、10-

6、口腔--a、鼻腔--b、頭發(fā)--c、空氣--d按個(gè)人標(biāo)記：姓名

培養(yǎng)：將接種的平板分別放入細(xì)菌和霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。霉菌保持25-27℃，3-5天；細(xì)菌35-37℃，1-2天。

[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1、無菌倒平板時(shí)注意的事項(xiàng)有哪些？

2、平板接種后為什么要倒置培養(yǎng)？

3、通過本次試驗(yàn)?zāi)銓W(xué)到了什么？有什么體會(huì)？ [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)六 細(xì)菌的單染色與革蘭氏染色 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 3學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.學(xué)習(xí)對(duì)細(xì)菌的涂片、染色和無菌操作技術(shù)。

2.了解染色原理、學(xué)習(xí)并掌握單染色和革蘭氏染色技術(shù)。[實(shí)驗(yàn)原理] 細(xì)菌的細(xì)胞小而透明，在普通的光學(xué)顯微鏡下不易識(shí)別，染色后，菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

微生物學(xué)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。染色部位分芽孢、鞭毛、莢膜染色

其機(jī)理主要是由于兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。G+菌，肽聚糖多，脂質(zhì)少，酒精不易進(jìn)入； G-菌，肽聚糖少，脂質(zhì)多，酒精易進(jìn)入 [實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 1.菌種：E.coli（大腸桿菌）、B.subtilis（枯草芽孢桿菌）、玉米細(xì)菌等

2.試劑：石炭酸復(fù)紅染色液、革蘭氏染色液(草酸銨結(jié)晶紫、碘液、95%乙醇、沙黃染色液）3.其他：顯微鏡、載玻片、生理鹽水、酒精燈、接種環(huán)、吸水紙、擦鏡紙等 [實(shí)驗(yàn)步驟]

一、單染色法： 滴無菌水→ 涂片→自然干燥→ 固定→染色→水洗→干燥→鏡檢（高倍鏡、油鏡）

二、革蘭氏（Gram）染色法

1.涂片

2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1-1.5分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面14.脫色：除去殘水后，滴加

95%酒精進(jìn)行脫色約

分鐘，后水洗。

秒，后立即用流水沖洗。

5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染1-1.5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.革蘭氏染色過程中大腸桿菌、枯草桿菌、玉米細(xì)菌、金黃葡萄球菌等分別被染成什么色，分別為革蘭氏反應(yīng)的什么菌 ？

2.涂片用的玻璃片為什么不得有油污？為什么涂片要求菌膜要均勻、??？ 3.革蘭氏染色的原理 4.染色注意事項(xiàng)有哪些？ [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)七 微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)、大小測(cè)量和酵母菌的死活鑒別 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 5學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.學(xué)習(xí)并掌握利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的基本方法。2.了解并掌握酵母菌的死活鑒別染色的原理和技術(shù) [實(shí)驗(yàn)原理] 1.兩種常用計(jì)數(shù)方法，即直接計(jì)數(shù)法（血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）和間接計(jì)數(shù)法（平板菌落計(jì)數(shù)法）。本實(shí)驗(yàn)是利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行直接計(jì)數(shù)。

2.利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的，所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計(jì)數(shù)法。3.美蘭（氧化型呈藍(lán)色，還原型呈無色），活的酵母菌具有將氧化型美蘭還原成還原型的能力，故染色后是透明的，而死的酵母菌則被染成了藍(lán)色。

計(jì)數(shù)方法：計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)（或四個(gè)）中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。設(shè)被選作計(jì)數(shù)的中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/4×16×104×B=40000A·B（個(gè)）[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 酵母菌懸液（市售的干酵母粉）血球計(jì)數(shù)板、蓋玻片、吸水紙顯微鏡、接種環(huán)、分類計(jì)數(shù)器 0.1%的美藍(lán)染色液 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1 制備菌懸液、染色 用吸管吸取菌懸液（1滴）加入試管，用生理鹽水（8滴）進(jìn)行稀釋，滴加（1滴）美蘭染色液。加菌懸液樣品 將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液（注意一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡）。3 顯微鏡計(jì)數(shù) 加樣后靜止1 min，先用低倍鏡然后換成高倍鏡，計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)位于線上酵母菌，一般只數(shù)上方和左邊線上的，當(dāng)酵母菌芽體達(dá)到母細(xì)胞大小的二分之一時(shí)，可記作兩個(gè)細(xì)胞。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的值來計(jì)算樣品的含菌量。清洗血球計(jì)數(shù)板 計(jì)數(shù)完畢，將計(jì)數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用電吹風(fēng)吹干。5.計(jì)算 ：利用相應(yīng)公式進(jìn)行計(jì)算（見前面公式或者課本公式），并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入作業(yè)中的表格內(nèi)。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.要正確使用顯微鏡，光線亮度要調(diào)的合適。

2.菌液制備要精準(zhǔn)，稀釋倍數(shù)要合適。如果濃度過大就再稀釋，如果過小再重做。3.計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)一半

4.濃度稀釋標(biāo)準(zhǔn)：以每小方格內(nèi)含有5-10個(gè)酵母細(xì)胞為宜，一般稀釋10倍即可。5.計(jì)數(shù)室內(nèi)一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡。

6.其他微生物孢子技術(shù)與酵母菌類似，基本操作一樣。7.確保血球計(jì)數(shù)板清洗干凈。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案] 1.使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)注意什么？ 2.將計(jì)數(shù)結(jié)果填入表格中。

3.簡(jiǎn)單說明酵母菌死活染色的原理。[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)八 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 3學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.了解測(cè)微尺的構(gòu)造和使用，學(xué)習(xí)并掌握測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法。[實(shí)驗(yàn)原理] 微生物細(xì)胞的大小的測(cè)量是在顯微鏡下用目鏡測(cè)微尺來進(jìn)行的，但由于測(cè)量的是放大后的圖像，故目鏡測(cè)微尺在不同放大倍率下每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度也隨之變化，因此，需用物鏡測(cè)微尺來校正在不同放大倍率下目鏡測(cè)微尺每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度。

物鏡測(cè)微尺是中央刻有精確刻度的載玻片，一般是將1 mm等分為100格，每格長(zhǎng)0．01mm，即10 um，它不直接用于測(cè)量細(xì)胞大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺的每格的相對(duì)長(zhǎng)度。

[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 酵母菌懸液（市售的干酵母粉）或者制作的霉菌裝片

目鏡測(cè)微尺，物鏡測(cè)微尺、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸水紙、0.1%的美藍(lán)染色液 [實(shí)驗(yàn)步驟]（—）裝目鏡測(cè)微尺

（二）校正目鏡測(cè)微尺

1.將物鏡測(cè)微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺(tái)上

2.先用低倍鏡觀察，將目鏡測(cè)微尺刻度與物鏡測(cè)微尺的刻度平行。使兩尺的第一條刻度線相重合，再尋找兩尺的另 10 一條重合的刻度線，分別記錄兩重合線之間物鏡測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺所占的格數(shù)，由公式計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。

3.用同樣的方法換成高倍鏡進(jìn)行校正，記錄并計(jì)算在每種倍率下目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。

（三）酵母細(xì)胞大小的測(cè)定

制備菌懸液、染色： 用吸管吸取菌懸液（1滴）加入試管，用生理鹽水（8滴）進(jìn)行稀釋，滴加（1滴）美蘭染色液。

制片： 用吸管吸取1滴上述菌懸液滴加到干凈的載玻片上，蓋上蓋玻片（注意一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡），將多余菌液用吸水紙吸干。

顯微鏡下觀察、測(cè)量：在不同倍率下測(cè)量菌體的長(zhǎng)度和寬度，記錄測(cè)定值，并計(jì)算出酵母的長(zhǎng)、寬值。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案] 1.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正? 2.如何校正目鏡測(cè)微尺？ ３．如何測(cè)定細(xì)菌的大?。?/p>

[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1]實(shí)驗(yàn)1 常用玻璃儀器包扎及干熱滅菌；培養(yǎng)基的制備（口述）與高壓蒸汽滅菌（操作-必做）1.1 培養(yǎng)皿、試管、吸管的洗滌包扎及干熱滅菌（操作-必做）1.2 培養(yǎng)基分裝到三角瓶和試管與高壓蒸汽滅菌（操作）[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目2 實(shí)驗(yàn)2 無菌操作技術(shù)，倒平板和接種（操作-必做）1.倒平板，以清水代替；試管接試管；試管接培養(yǎng)皿 [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3] 實(shí)驗(yàn)3 細(xì)菌的革蘭氏染色（操作-必做）1.枯草桿菌 [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目4] 實(shí)驗(yàn)4 微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)（操作-必做）

酵母菌[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目5]實(shí)驗(yàn)5 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定（操作）會(huì)校正和測(cè)量酵母菌或真菌菌絲

第三篇：實(shí)驗(yàn)3 環(huán)境微生物的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)三 環(huán)境微生物的檢測(cè)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解周圍環(huán)境中微生物的分布情況。2.懂得無菌操作在微生物實(shí)驗(yàn)中的重要性。3.了解四大類微生物的菌落特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

在我們周圍的環(huán)境中存在著種類繁多的、數(shù)量龐大的微生物。土壤、江河湖海、塵埃、空氣、各種物體的表面以及人和動(dòng)物體的口腔、呼吸道、消化道等都存在著各種微生物。由于它們體積微小，人們用肉眼無法觀察到它們個(gè)體的存在。但是只要稍加留意，我們就可以在發(fā)霉的面包、朽木上看到某些微生物群體。這些現(xiàn)象表明，自然界只要有微生物可以利用的物質(zhì)和環(huán)境條件，微生物就可以在其上生長(zhǎng)繁殖。據(jù)此，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室里就可以用培養(yǎng)基來培養(yǎng)微生物。

培養(yǎng)基是用人工配制的、適合微生物生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合養(yǎng)料。其中含有微生物所需要的六大營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、氣體和水分。此外，根據(jù)不同的微生物的要求，在配制培養(yǎng)基時(shí)還需用酸液或堿液調(diào)節(jié)至適宜的pH。配制好的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌。所謂滅菌是指采用各類的物理或化學(xué)因素，使物體內(nèi)外的所有微生物喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施。經(jīng)過滅菌后的物體是無菌的。消毒是與滅菌完全不同的概念，它是指用較溫和的物理因素殺死物體表面和內(nèi)部病原微生物的一種常用的衛(wèi)生措施。

滅菌的方法較多，廣泛使用的是高溫滅菌，其中最常用的是高壓蒸汽滅菌法。此法是把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的。在1.05kg/cm2的蒸汽壓力下，溫度可達(dá)121℃。一般只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體和它們的各種孢子。

微生物的接種技術(shù)是生物科學(xué)研究中的一項(xiàng)最基本操作技術(shù)。為了確保純種不被雜菌污染，在整個(gè)接種過程中，必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。在實(shí)驗(yàn)過程中必須牢固樹立無菌概念，經(jīng)常保持實(shí)驗(yàn)臺(tái)及周圍環(huán)境的清潔，嚴(yán)格無菌操作，避免雜菌的污染，這是保證實(shí)驗(yàn)成功的必要條件。如將微生物接種到適合其生長(zhǎng)的固體培養(yǎng)基表面，在適宜的溫度下(一般細(xì)菌37℃：霉菌等28℃)，培養(yǎng)一段時(shí)間(一般24~48h)后，少量分散的菌體或孢子就可生長(zhǎng)繁殖成肉眼可見的細(xì)胞群體，此即菌落。如平板上的菌落是由單個(gè)細(xì)胞(或單個(gè)孢子)生長(zhǎng)繁殖而成的，就是一個(gè)純種細(xì)胞群或克隆；若培養(yǎng)后大量菌落聚集在一起形成的為菌苔。不同種的微生物可形成大小、形態(tài)各異的菌落，根據(jù)微生物菌落形態(tài)的不同，可初步鑒別出四大類微生物：細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌。

細(xì)菌的菌落呈圓形、較小而薄、透明或不透明、質(zhì)地“細(xì)膩”，有的具有色澤，有的邊緣不整齊，有的表面濕潤(rùn)、光滑，有的表面干燥有褶皺。此外，細(xì)菌常因分解含氮化合物而產(chǎn)生臭味。

酵母菌的菌落通常比細(xì)菌菌落大，圓形、厚、不透明、色素單一，多為乳白，少數(shù)為橙或紅色。酵母菌因普遍能發(fā)酵含碳有機(jī)物產(chǎn)醇，故菌落多伴有酒香味。

防線菌菌落小而致密，或堅(jiān)硬、或呈粉狀。不少放線菌還產(chǎn)生特殊的土腥味。

霉菌菌落大而疏松、或大而緊密。氣生菌絲會(huì)發(fā)育形成一定形狀、構(gòu)造和色澤的子實(shí)器官，所以菌落表面往往有肉眼可見的構(gòu)造和顏色。

三、實(shí)驗(yàn)材料

人體表和空氣中的微生物。

四、實(shí)驗(yàn)器材與試劑

1.器材

恒溫培養(yǎng)箱、無菌平皿、電爐、酒精燈、火柴、無菌棉簽和記號(hào)筆。2.試劑

牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、酵母膏葡萄糖培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱YPD)、高氏一號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基。

五、實(shí)驗(yàn)操作

I.融化培養(yǎng)基

將裝有無菌培養(yǎng)基的三角瓶置水浴中煮沸，待培養(yǎng)基融化后取出，當(dāng)冷至50~60℃左右時(shí)，進(jìn)行下一步。II、倒平板

有持皿法和疊皿法，操作要點(diǎn)如下： 1.持皿法

(1)將無菌培養(yǎng)皿疊放在酒精燈左側(cè)，以便拿取。(2)點(diǎn)燃酒精燈。

(3)酒精燈旁，左手握三角瓶底部，傾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手小指與小尾魚際(即小指邊緣)夾住棉塞并將其拔出(切勿將棉塞放在桌上)，隨之將瓶口在火焰上過一下(不可灼燒，以防爆裂)，以殺死可能沾在瓶口的雜菌。然后將三角瓶從左手換至右手(用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部)。操作中瓶口應(yīng)保持在火焰2~3cm，瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。左手拿起一套平皿，用無名指和小指托住皿底，用中指和拇指夾住皿蓋，食指于皿蓋上為支點(diǎn)，在火焰旁，打開皿蓋，讓三角瓶伸入，隨后倒入培養(yǎng)基。一般倒入15ml左右培養(yǎng)基即可鋪滿整個(gè)皿底。蓋上皿蓋，置水平位置待凝。然后將三角瓶移至左手，瓶口在次過火并塞緊瓶蓋。2.疊皿法

此法適于在超干凈臺(tái)上操作，基本步驟同持皿法。不同之處是左手不必持皿，而是將瓶皿疊放在酒精燈的左側(cè)并靠近火焰。按上述方法用右手拿三角瓶，左手打開最上面的皿蓋，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋后即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平皿。操作中瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。

III、貼標(biāo)簽

待培養(yǎng)基完全凝固后，在皿底帖上標(biāo)簽，注明檢測(cè)類型，組別及日期(也可用記號(hào)筆書寫在皿底)IV、檢測(cè)方法

環(huán)境中微生物種類多樣，檢測(cè)方法也各異，先選幾種列舉如下： 1.空氣 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室空氣中的微生物時(shí)，只要打開無菌平板的皿蓋，讓其暴露在空氣中一段時(shí)間(5~10min)然后將皿蓋蓋上即可。

2.桌面 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌面微生物是，可用一根無菌棉簽，先在無菌平板的

圖4-1 含菌棉簽平板劃線示意圖

左：開啟皿蓋法

右：劃線示意圖

一個(gè)區(qū)域內(nèi)濕潤(rùn)和試劃幾下，然后用其擦抹桌面等物體表面，在以此棉簽在平板的另一區(qū)域作來回劃線接種(如圖4-1)。本操作應(yīng)以無菌操作要求進(jìn)行，即在火焰旁用左手拿起平板，用中指 無名指和小指托住皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并開成一縫，右手持棉簽在培養(yǎng)基表面劃線接種，無菌棉簽濕潤(rùn)和試劑區(qū)可作為無菌對(duì)照。

3.頭發(fā) 移去放在桌面上的無菌平板的皿蓋，是頭發(fā)部位位于平板的上方，并用手指撥動(dòng)頭發(fā)數(shù)次，在蓋上皿蓋即可。

4.手指 可用未洗的手指先在無菌平板的培養(yǎng)基一側(cè)(約一半的面積)作劃線接種，并在皿底作好標(biāo)記。然后用肥皂、流水洗手，用洗凈的手指于平板培養(yǎng)基的另一側(cè)作同樣的劃線接種，蓋好皿蓋。待培養(yǎng)后比較兩雜菌生長(zhǎng)的情況。

5.口腔 打開無菌平板培養(yǎng)基的皿蓋，使口對(duì)著平板培養(yǎng)基的表面，以咳嗽或打噴嚏的方式接種，然后蓋上皿蓋。

V、培養(yǎng)

將以上各種檢測(cè)平板倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至下周實(shí)驗(yàn)時(shí)觀察并計(jì)數(shù)各平板上的菌落數(shù)。

VI、觀察

注意觀察不同類型菌落的大小、外形和顏色等特征，將觀察結(jié)果記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。

VII、清洗

觀察記錄完畢后，將含菌平板放在沸水中煮30min以上，殺死培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的各種微生物，然后清洗并晾干培養(yǎng)皿。

六、思考題

1.通過本實(shí)驗(yàn)后，談?wù)勀銓?duì)微生物的分布以及數(shù)量的認(rèn)識(shí)。2.本實(shí)驗(yàn)中那些步驟屬無菌操作？為什么？ 3.如何描述菌落的形態(tài)特征？

第四篇：微生物實(shí)驗(yàn)心得體會(huì)

微生物實(shí)驗(yàn)心得

姓名：關(guān)琦琦

學(xué)號(hào)：09070401048 班級(jí)：生物科學(xué)09-2班

指導(dǎo)老師：吾爾恩 微生物實(shí)驗(yàn)心得

本學(xué)期已臨近尾聲，我們即將告別微生物實(shí)驗(yàn)這門課程，在這一學(xué)期，八個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)中，我們學(xué)到了許多知識(shí)，這些知識(shí)將會(huì)陪伴我們一生，下面我們就來通過一些實(shí)驗(yàn)來回顧一下本學(xué)期的微生物實(shí)驗(yàn)。

我選取的實(shí)驗(yàn)是《環(huán)境因素對(duì)微生物的影響》，之所以選擇這則實(shí)驗(yàn)是因?yàn)檫@則實(shí)驗(yàn)比較簡(jiǎn)單，而且涉及面非常多。首先我們來分析一下這則實(shí)驗(yàn)所涉及到的知識(shí)面。環(huán)境對(duì)微生物生長(zhǎng)影響主要分以下幾種

溫度：通過影響蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)入細(xì)胞膜的流動(dòng)性及完整性來影響微生物的生長(zhǎng)、繁殖和新陳代謝。微生物群體生長(zhǎng)、繁殖最快的溫度為其最適生長(zhǎng)溫度。

PH: H+影響菌體細(xì)胞質(zhì)膜上電荷性質(zhì)，微生物吸收物質(zhì)變化，影響代謝，高濃度H+或引起菌體表而蛋白質(zhì)和核酸水解以及影響酶和活性.滲透壓：微生物在等滲溶液中可正常生長(zhǎng)繁殖；在高滲溶液中細(xì)胞失水，生長(zhǎng)受到抑制；在低滲溶液中，細(xì)胞吸水膨脹，因?yàn)榇蠖鄶?shù)微生物具有較為堅(jiān)韌的細(xì)胞壁，細(xì)胞一般不會(huì)裂解，可以正常生長(zhǎng)，但低滲溶液中溶質(zhì)含量低，在某些情況下也會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)。

抗生素：在自然界中普遍存在微生物間的拮抗作用，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性的抑制或殺死其他微生物。

微生物的實(shí)驗(yàn)其實(shí)簡(jiǎn)單來說步驟幾乎相同：制作培養(yǎng)基、倒平板、接種微生物、培養(yǎng)、觀察菌種生長(zhǎng)情況從而得出結(jié)論。本次實(shí)驗(yàn)也是這樣首先制作培養(yǎng)基，在進(jìn)行倒平板步驟時(shí)，對(duì)平板環(huán)境進(jìn)行區(qū)分，然后進(jìn)行接種。

在進(jìn)行倒平板的時(shí)候，要注意在無菌條件下進(jìn)行倒置，同時(shí)也要保持平板的厚度均勻。

在進(jìn)行菌種接種的時(shí)候，選擇合適的劃線方式，一般是選擇Z字形劃線法，注意不要把平板弄破，等到平板凝固后才可以進(jìn)行接種。接種時(shí)也要注意在無菌條件下接種。經(jīng)過培養(yǎng)后，再觀察最后得出結(jié)論。

通過一學(xué)期的實(shí)驗(yàn)，我越發(fā)的明白實(shí)驗(yàn)操作對(duì)于結(jié)果的重要性。實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)操作可以說是實(shí)驗(yàn)成 功與否的關(guān)鍵部分，可是馬虎不得。對(duì)于需要團(tuán)隊(duì)合作的實(shí)驗(yàn)，個(gè)人 認(rèn)為要有強(qiáng)勢(shì)的人員搭檔，不說是精通實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，最少也得知道實(shí)驗(yàn)的基本操作，掌握要做實(shí)驗(yàn)的操作方法，這對(duì)于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)無疑 是與決定性作用的。對(duì)于個(gè)人的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰ΓP(guān)鍵還是要看平時(shí)的積累，有些實(shí)驗(yàn)操作繁瑣復(fù)雜，需要極大的耐心，這些都應(yīng)該是逐漸培養(yǎng)起 來的。最后，簡(jiǎn)單談一下自己在微生物實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)的心得體會(huì)。剛開始的時(shí)候，最令我頭痛的就是培養(yǎng)基的配制、消毒滅菌，培養(yǎng)基的配制和消毒與滅菌兩個(gè)實(shí)驗(yàn)可以說是微生物實(shí)驗(yàn)的最近本課程，內(nèi)容有配制培養(yǎng)基、分裝培養(yǎng)基、為下次試驗(yàn)準(zhǔn)備菌種及無菌器材等，內(nèi)容顯得非常繁多緊湊，需要準(zhǔn)備的器材、藥品及用具較多、較雜、較細(xì)。最后只能是提前參照微生物實(shí)驗(yàn)教材，將實(shí)驗(yàn)過程中所涉及到的藥品、器材及儀器等統(tǒng)統(tǒng)羅列出來，計(jì)算出實(shí)驗(yàn)時(shí)大小材料需用的數(shù)量，這樣，一方面可以有效避免在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備時(shí)遺忘相關(guān)物品，另一方面也可為以后同一實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作提供依據(jù)，使實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作逐步趨于程序化，從而在有效低實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作量的同時(shí)，最大限度地提高準(zhǔn)備效率。還有一點(diǎn)很重要，在科研型實(shí)驗(yàn)室里就不能不說導(dǎo)師和師兄師姐，其實(shí)他們才是最具價(jià)值的“活文獻(xiàn)”，他們就是實(shí)驗(yàn)室里的參考文獻(xiàn)，活參考書。生物就是一門實(shí)驗(yàn)的科學(xué)，其中科研經(jīng)驗(yàn)的積累就是一個(gè)非常重要的組成部分，導(dǎo)師和師兄師姐的一句話往往可以事半功倍，大幅提高實(shí)驗(yàn)的成功率和效率?？傊?，為了保證實(shí)驗(yàn)過程高質(zhì)高量完成，除了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備及實(shí)驗(yàn)過 程外，還要求實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員必須具備相應(yīng)的素質(zhì)，實(shí)驗(yàn)操作人員必須 具備較扎實(shí)的專業(yè)基礎(chǔ)、熟練的實(shí)驗(yàn)技能及高度的責(zé)任心，在工作中要善于總結(jié)，同時(shí)還要和理論課老師積極溝通，這樣才能夠真正的學(xué)好微生物實(shí)驗(yàn)這門課程。

第五篇：微生物實(shí)驗(yàn)工作總結(jié)

一、教學(xué)實(shí)驗(yàn)室的改建與新建工作

XX 年初我院對(duì) qj05 樓一樓進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室改造，成果如下：

1.更換中央實(shí)驗(yàn)臺(tái) 8 只

2.qj05 樓 108、112 兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室原為工藝實(shí)驗(yàn)室和書庫，經(jīng)改造建成微生物實(shí)驗(yàn)室，可兼做化學(xué)類實(shí)驗(yàn)。

3.改建預(yù)備室 1 個(gè)

4.改建微生物培養(yǎng)室 1 個(gè)

5.改建飼料工藝實(shí)驗(yàn)室 1 個(gè)

6.改建計(jì)算機(jī)房 1 個(gè)

此次改造后，我院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室增加面積 200 多平方米，并且將本科教學(xué)實(shí)驗(yàn)室集中在 qj05 樓一樓，可基本滿足本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)的需要，也便于管理。

二、教學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的購(gòu)置計(jì)劃

最近幾年食品學(xué)院在調(diào)整教學(xué)計(jì)劃，增開大型綜合實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，也加強(qiáng)了實(shí)驗(yàn)室條件建設(shè)，基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)分室的儀器設(shè)備得到補(bǔ)充更新，大大改善了學(xué)生的實(shí)驗(yàn)條件，因此實(shí)踐教學(xué)的質(zhì)量也有所提高，生均儀器設(shè)備占有量已超過 1000 元。

XX 年食品學(xué)院新開了一個(gè)食品質(zhì)量與安全專業(yè)，需要進(jìn)行必要的建設(shè)，另外由于我院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)分室經(jīng)改造后，在原信控大樓一樓成立了本科教學(xué)實(shí)驗(yàn)室，有五個(gè)實(shí)驗(yàn)室，比原先增加了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室，以前由各研究所承擔(dān)的部分實(shí)驗(yàn)課現(xiàn)在也由院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)，現(xiàn)在承擔(dān)的實(shí)驗(yàn)課增加了 14 門學(xué)院基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)分室承擔(dān)的實(shí)驗(yàn)課程增加，需要添置儀器設(shè)備；部分儀器設(shè)備需要更新；部分 實(shí)驗(yàn)分室的 儀器設(shè)備需要配套；學(xué)院新辦專業(yè)食品質(zhì)量與安全也需要進(jìn)行必要的建設(shè)，由于以上原因?qū)W院向校教務(wù)處申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室條件建設(shè)項(xiàng)目預(yù)計(jì)需要建設(shè)經(jīng)費(fèi) 80 萬元（表 1），但該項(xiàng)目 XX 年初批準(zhǔn)后，實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)同志從寒假開始就進(jìn)行了采購(gòu)工作，在上半年全部完成。本項(xiàng)目建成后，所有實(shí)驗(yàn)室，包括儀器設(shè)備全部可對(duì)食品學(xué)院三個(gè)專業(yè)的學(xué)生開放，除教學(xué)實(shí)驗(yàn)課外，對(duì)本科生畢業(yè)論文也可提供較好的條件。每年受益的學(xué)生人數(shù)約 600（進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的學(xué)生有兩屆）多人，并為 XX 年《食品分析》這門食品學(xué)院公共課程的教學(xué)實(shí)驗(yàn)提供一定的準(zhǔn)備，該項(xiàng)目完成后也為學(xué)院的研究生實(shí)驗(yàn)課提供了較好的條件。尤其是工藝實(shí)驗(yàn)分室購(gòu)置了一套肉制品的小型實(shí)驗(yàn)室加工設(shè)備，為本科教學(xué)實(shí)驗(yàn)以及科研項(xiàng)目的進(jìn)行提供了必要的條件。本期建設(shè)項(xiàng)目結(jié)束后，教學(xué)實(shí)驗(yàn)室已向教務(wù)處遞交了總結(jié)報(bào)告。

表 1 XX 年完成的實(shí)驗(yàn)室建設(shè)項(xiàng)目一覽表

項(xiàng)目名稱

實(shí)驗(yàn)分室名稱

申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)金額（元）

執(zhí)行金額（元）

食品專業(yè)綜合實(shí)驗(yàn)條件建設(shè)

工藝實(shí)驗(yàn)分室

304100

353605（還未完成）

新專業(yè)食品質(zhì)量與安全條件建設(shè)與儀器購(gòu)置

基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)分室

440899

293934

焙烤實(shí)驗(yàn)分室條件建設(shè)

焙烤實(shí)驗(yàn)分室

63299

63762

工藝實(shí)驗(yàn)分室條件建設(shè)

工藝實(shí)驗(yàn)分室

18000

共計(jì)（元）

826298

三、實(shí)驗(yàn)室崗位聘任工作

XX 年我院實(shí)驗(yàn)室工作人員的聘期已經(jīng)到期，學(xué)院結(jié)合實(shí)驗(yàn)室調(diào)整的機(jī)會(huì)，通盤考慮崗位的設(shè)置，按照學(xué)校《江南大學(xué) XX-XX 崗位聘任與崗位津貼的實(shí)施辦法》的有關(guān)規(guī)定學(xué)院開展了 XX-XX 的崗位聘任工作，在實(shí)施崗位聘任與崗位津貼的過程中，學(xué)院對(duì)教職工加強(qiáng)思想教育工作，組織教職工深入學(xué)習(xí)有關(guān)深化教育體制改革等方面的文件、要破除平均主義，堅(jiān)持以責(zé)定崗、以崗定酬、按勞分配、優(yōu)勞優(yōu)酬的原則，強(qiáng)化聘任，嚴(yán)格考核，崗位聘任工作在 XX 年 2 月底之前完成。通過本輪崗位聘任工作消除了部分同志的思想顧慮，充分調(diào)動(dòng)了教職工的積極性，完善了學(xué)院實(shí)驗(yàn)室的管理，有利于完成學(xué)院的實(shí)驗(yàn)教學(xué)任務(wù)和科研任務(wù)。

表 2 各實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員安排情況一覽表

實(shí)驗(yàn)室名稱

實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員姓名

重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 樓

史小華

肖剛 樓

朱雅東

檀亦兵 樓

聞芳

陸建安 樓

袁信華

院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室

主任

王希東

基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)分室

徐榕榕

姜瑞霞

黃文利

呂源玲

暫缺編 1 人

工藝實(shí)驗(yàn)分室

孫定紅

王革新

薛其生

鄒建新

焙烤實(shí)驗(yàn)分室

王領(lǐng)軍

學(xué)院儀器設(shè)備管理員

錢玲

學(xué)院維修電工

王錫棟

食品科學(xué)研究所

朱衛(wèi)紅

袁博

歷凡

食品營(yíng)養(yǎng)與安全研究所

代卉

張?zhí)?/p>

糧油科學(xué)研究所

潘秋琴

楊慶萍

四、教學(xué)實(shí)驗(yàn)室大型儀器設(shè)備的購(gòu)置、安裝、調(diào)試

我院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室 XX 年完成了 2 臺(tái)大型儀器設(shè)備安裝、調(diào)試工作。

表 3 XX 年食品學(xué)院大型儀器設(shè)備安裝調(diào)試一覽表

儀器設(shè)備名稱

實(shí)驗(yàn)室名稱

安裝調(diào)試責(zé)任人

安裝調(diào)試完成日期

雙螺桿擠出機(jī)

工藝實(shí)驗(yàn)分室

孫定紅

XX.5.13

超高溫瞬時(shí)殺菌裝置

工藝實(shí)驗(yàn)分室

王革新

XX.2.19

五、教學(xué)實(shí)驗(yàn)室的教學(xué)任務(wù)

XX 年年底學(xué)院對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了調(diào)整，原研究所的教學(xué)實(shí)驗(yàn)分室全部撤消，成立教學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，下轄三個(gè)實(shí)驗(yàn)分室：基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)分室、工藝實(shí)驗(yàn)分室、焙烤實(shí)驗(yàn)分室。學(xué)院教學(xué)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)全部實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)任務(wù)。

表 4 XX 年食品學(xué)院本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)任務(wù)完成情況一覽表

學(xué)期

實(shí)驗(yàn)課名稱

課時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)人數(shù)

實(shí)驗(yàn)人時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)員姓名

05-06 學(xué)年

（第 2 學(xué)期）

食品基礎(chǔ)、專業(yè)綜合實(shí)驗(yàn)（02 級(jí)）

160

244

39040

徐榕榕

1952

姜瑞霞

1952

呂源玲

1952

黃文利

1952

王革新

5205

孫定紅

5205

薛其生

5205

王領(lǐng)軍

3904

潘秋琴

3904

史小華

生物化學(xué)（包括動(dòng)物生物化學(xué)）

355

5325

徐榕榕

5325

姜瑞霞

飼料工藝

561

鄒建新

飼料加工綜合實(shí)驗(yàn)

1000

鄒建新

孫定紅

飼料工藝

飼料加工綜合實(shí)驗(yàn)

呂源玲

黃文利

儀器分析（04 級(jí)食質(zhì)）

472.5

呂源玲

儀器分析（04 級(jí)食質(zhì)）

472.5

黃文利

06-07 學(xué)年

（第 1 學(xué)期）

微生物學(xué)

353

5295

呂源玲

5295

黃文利

現(xiàn)代食品微生物學(xué)和方法

665

呂源玲

665

黃文利

儀器分析（食科試點(diǎn)班）

240

呂源玲

240

黃文利

食品化學(xué)

1174.5

徐榕榕

1174.5

姜瑞霞

感官評(píng)定

169

3042

袁 博

多糖與糖化合物分析

210

徐榕榕

210

姜瑞霞

食品質(zhì)構(gòu)與流變

256.5

徐榕榕

256.5

姜瑞霞

食品生物檢測(cè)技術(shù)

220

徐榕榕

220

姜瑞霞

食品基礎(chǔ)、專業(yè)綜合實(shí)驗(yàn)（03 級(jí)）

120

259

1554

徐榕榕

1554

姜瑞霞

1554

呂源玲

1554

黃文利

4144

王革新

4144

孫定紅

4144

薛其生

6216

王領(lǐng)軍

3108

鄒建新

3108

王希東

動(dòng)物解剖與組織學(xué)

208

王希東

飼料化學(xué)

234

王希東

動(dòng)物生理

390

王希東

動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)綜合實(shí)驗(yàn)

3440

代卉

袁信華

合計(jì)

107002

表 5 XX 年食品學(xué)院研究生實(shí)驗(yàn)教學(xué)任務(wù)完成情況一覽表

學(xué)期

實(shí)驗(yàn)課名稱

課時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)人數(shù)

實(shí)驗(yàn)人時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)員姓名

05-06 學(xué)年

（第 2 學(xué)期）

食品酶學(xué)

1328

呂源玲

1328

黃文利

現(xiàn)代食品微生物學(xué)和方法

380

呂源玲

380

黃文利

06-07 學(xué)年

（第 1 學(xué)期）

淀粉化學(xué)

182

徐榕榕

182

姜瑞霞

食品酶學(xué)

120

1920

呂源玲

1920

黃文利

天然產(chǎn)物化學(xué)

378

王希東

現(xiàn)代毒理學(xué)與方法

378

徐榕榕

378

姜瑞霞

合計(jì)

8754

表 6 XX 年食品學(xué)院短學(xué)期實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)任務(wù)完成情況一覽表

學(xué)期

實(shí)驗(yàn)課名稱

課時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)人數(shù)

實(shí)驗(yàn)人時(shí)數(shù)

實(shí)驗(yàn)員姓名

XX 年暑假（03、04 級(jí)培訓(xùn)）

生物化學(xué)（03 級(jí)）

307

767.5

徐榕榕

767.5

姜瑞霞

生物化學(xué)（04 級(jí)）

353

882.5

徐榕榕

882.5

姜瑞霞

微生物學(xué)（03 級(jí)）

307

767.5

呂源玲

767.5

黃文利

飼料工藝（03 級(jí)）

172

鄒建新

合計(jì)

5007

六、實(shí)驗(yàn)室的本科教學(xué)迎評(píng)工作

按照校評(píng)估辦以及教務(wù)處的工作要求，學(xué)院首先組織實(shí)驗(yàn)室工作人員認(rèn)真學(xué)習(xí)有關(guān)評(píng)估工作的各項(xiàng)文件及評(píng)估方案，正確理解評(píng)估方案的內(nèi)涵。通過學(xué)習(xí)評(píng)估工作文件，理解了評(píng)估工作的目的、原則、方法和內(nèi)容。大家認(rèn)識(shí)到我們的工作不僅僅是為了評(píng)估，更重要的是要搞好本科教學(xué)工作，在做材料工作時(shí)候注意到首先要注意材料的真實(shí)性，提供的材料必須是真實(shí)的，數(shù)據(jù)必須是可靠的；第二個(gè)就是材料必須要有針對(duì)性，即材料必須是針對(duì)評(píng)估方案的，不要有關(guān)無關(guān)的材料都放在一起；第三就是材料要有層次性；第四是材料要有原始性，最好是把原來有的文件、制度拿出來。因此每個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)基本情況和數(shù)據(jù)進(jìn)行了仔細(xì)認(rèn)真的整理和統(tǒng)計(jì)。

按照學(xué)校有關(guān)部門的要求，做好教學(xué)檔案的歸檔、教學(xué)資料的整理工作，以及評(píng)估的材料工作。教學(xué)檔案和教學(xué)資料的整理歸檔工作應(yīng)該是看實(shí)驗(yàn)室平時(shí)工作的基礎(chǔ)，但我們平時(shí)沒有注重這方面的工作，因此工作量是比較大的，通過這次評(píng)估工作要把教學(xué)檔案的歸檔工作規(guī)范起來。

（一）按照規(guī)定學(xué)校的六種規(guī)章制度（《學(xué)生實(shí)驗(yàn)守側(cè)》、《儀器設(shè)備管理辦法》、《實(shí)驗(yàn)室防火安全管理制度》、《儀器設(shè)備損壞、丟失賠償制度》、《低值耐用品管理辦法》、《開放實(shí)驗(yàn)室管理辦法》和學(xué)院的有關(guān)規(guī)章制度已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)分室上墻。

（二）各種帳冊(cè)、記錄本已經(jīng)按照規(guī)定填寫。

（三）各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照學(xué)校的規(guī)定收集整理各種工作資料。

七、開放性實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)

XX 年我院為了加強(qiáng)開放性實(shí)驗(yàn)室的管理工作，制定了《開放實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》和《開放實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度》。

（一）本科生課余研究項(xiàng)目進(jìn)展情況

XX-XX 學(xué)年我院有 7 個(gè)本科生課余研究項(xiàng)目，XX 年完成了 5 個(gè)項(xiàng)目。

表 7 XX-XX 年 食品學(xué)院本科生課余研究項(xiàng)目一覽表

序號(hào)

課余研究項(xiàng)目名稱

指導(dǎo)教師姓名

學(xué)生姓名

備注

豬肉中沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)

呂文平

路靜、徐文婷

抗菌肽的抑菌作用及制備

樂國(guó)偉

劉衛(wèi)云、王婷婷

完成

血脂代謝與機(jī)體抗氧化狀況的關(guān)系

樂國(guó)偉

孫國(guó)棟、龔如

完成

寡糖的微波固相合成及生物活性評(píng)價(jià)

施用暉

原雪琦、劉意

完成

方便面的營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)

施用暉

周成成

完成

花式香腸的研究與開發(fā)

王海鷗

王芳

完成

黑豆制品加工工藝研究

王海鷗

張海明、胡茂浩

XX 年在大三年級(jí)（XX 屆）招聘一批本科生利用已學(xué)到的知識(shí)，在教師的指導(dǎo)下利用課余時(shí)間進(jìn)行研究活動(dòng)，這樣做有利于提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，并有更多的機(jī)會(huì)鍛煉學(xué)生的動(dòng)手能力，也使院實(shí)驗(yàn)室建成真正意義上的開放性實(shí)驗(yàn)室。今年的課余研究項(xiàng)目中有 4 個(gè)項(xiàng)目是由學(xué)生自己提出的，這在往年是沒有的。本期項(xiàng)目原則上應(yīng)該在 XX 年 4 月 30 日 之前結(jié)束，因此目前正在進(jìn)行中，但在本科評(píng)估中得到評(píng)估專家的好評(píng)。

鐘 芳

平向莉 *、徐優(yōu)、陳敏敏

食品化學(xué)研究室

紅棗軟糖加工（學(xué)生立項(xiàng)）

王海鷗

呂建功 *、趙明思、王娜、仇美娟、龐安平、金鳳

本科生課余研究實(shí)驗(yàn)室

膨化食品

錢 和

朱勇進(jìn) *、姜森、馮園、張嬪娉

食品安全與質(zhì)量控制研究室

注 1 ： * 者為課題組長(zhǎng)。：本科生課余研究實(shí)驗(yàn)室為開放實(shí)驗(yàn)室，位于 qj05 樓 102 室。

（二）焙烤實(shí)驗(yàn)分室開放情況

一年來，焙烤實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)了一次本科生的大型綜合實(shí)驗(yàn)，兩期學(xué)生焙烤俱樂部培訓(xùn)班，研究生實(shí)驗(yàn)，以及有各學(xué)科組的本科生與研究生的課題。

本科生的大型綜合實(shí)驗(yàn)：食品科學(xué)與工程學(xué)科共八個(gè)班 240 人，進(jìn)行為期 3 周四個(gè)實(shí)驗(yàn)的遁環(huán)。

XX 年實(shí)驗(yàn)室舉辦了兩期學(xué)生焙烤俱樂部培訓(xùn)班，第 1 期為 60 人，第 2 期為 77 人，每期 11 周，每周一次，每次下午 1 點(diǎn)到 5 點(diǎn)進(jìn)行焙烤理論與實(shí)踐操作培訓(xùn)（先講解后操作），培訓(xùn)結(jié)束后進(jìn)行實(shí)踐操作考核和理論考試，共有 112 名通過者獲得焙烤中心發(fā)的合格證書。