第一篇：微生物實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)（共）

微生物實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)

1.微生物實(shí)驗(yàn)室的注意事項(xiàng)是什么？

答：防止病原微生物的散布，防火，節(jié)約，標(biāo)記，記錄，安全，清潔與秩序。

2.觀察常用什么顯微鏡？它主要有哪幾部分組成？

答：觀察細(xì)菌常用普通光學(xué)顯微鏡（油鏡）。它主要有光學(xué)部分和機(jī)械部分組成，光學(xué)部分由目鏡、物鏡、反光鏡和聚光器組成：機(jī)械部分由鏡座、鏡筒、鏡臂、轉(zhuǎn)換器，鏡臺(tái)、粗細(xì)調(diào)節(jié)器。

3.使用油鏡時(shí)用什么作為物鏡與玻片間的介質(zhì)，有幾種？

答：加拿大樹(shù)膠、二甲苯、石蠟、松柏油、甘油、水、香油

4.觀察細(xì)菌時(shí)顯微鏡的操作步驟是什么？注意事項(xiàng)是什么？

答：操作步驟：放置好顯微鏡；調(diào)節(jié)好光源；低倍鏡觀察，高倍鏡觀察，油鏡觀察；清潔顯微鏡；還原顯微鏡。

注意事項(xiàng)：

5.制備細(xì)菌染色標(biāo)本片時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

答：1）接種環(huán)要充分滅菌，避免帶入新的細(xì)菌

2）加蒸餾水時(shí)，應(yīng)用接種環(huán)取少量蒸餾水于載玻片上，否則自然干燥的時(shí)間會(huì)過(guò)長(zhǎng)

3）釣菌時(shí)，試管口要在酒精燈附近，避免新的細(xì)菌進(jìn)入菌種內(nèi)

4）火焰固定時(shí)，熱干燥的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以不燙手為度

5）水洗時(shí)，先用蒸餾水沖洗平放的玻片，再?zèng)_斜放著的玻片

6）制片完成后，要待玻片完全干燥后才能油鏡進(jìn)行鏡檢

6.圖片固定的意義何在？固定時(shí)應(yīng)注意什么問(wèn)題？

答：意義：a。除去抹片的水分，涂抹材料能很好的貼附在玻片上，以免水洗時(shí)易被沖掉

b.使抹片易于著色或更好的著色，因?yàn)樽冃缘牡鞍踪|(zhì)比非變性的蛋白質(zhì)著色力更強(qiáng)

c．可殺死抹片中的微生物

固定時(shí)注意事項(xiàng)：1）火焰固定時(shí)只略作加熱進(jìn)行固定，但不能太熱，以不燙手為度，同時(shí)加熱時(shí)間和加熱溫度也應(yīng)控制好，以保持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性。2）化學(xué)固定時(shí)，若作姬姆薩染色就不用火焰固定，而用甲醇固定。

7.細(xì)菌染色的原理是什么？

答：細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，約在pH2—5之間，故在中性、堿性或弱堿性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負(fù)電荷，易于帶正電荷的堿性染料如龍膽紫及堿性復(fù)紅等結(jié)合，使細(xì)菌被染成紫色或紅色。

8.試述細(xì)菌革蘭氏染色法的步驟及結(jié)果。

答：1）加草酸銨結(jié)晶紫染色液1—2min，水洗； 2）加革蘭氏稀碘液1—3min，水洗；

3）加95%酒精脫色0.5min，水洗； 4）10倍稀釋石碳酸復(fù)紅液復(fù)染10—30s，水洗

5）結(jié)果藍(lán)紫色：革蘭氏陽(yáng)性菌紅色：革蘭氏陰性菌

9.試述培養(yǎng)基制備的原則和要求。

答：原則：

要求：1）培養(yǎng)基必須含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；2）培養(yǎng)基的材料和裝培養(yǎng)基的容器應(yīng)沒(méi)有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)；3）培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長(zhǎng)的要求；4）所制培養(yǎng)基應(yīng)該透明；5）培養(yǎng)基必須徹底滅菌，不得含有任何活的細(xì)菌。

10.試述普通肉湯培養(yǎng)基的制備方法及其用途。

答：成分：牛肉膏3—5g；蛋白胨10g；氯化鈉5g；水1000mL；

用途：1）用作細(xì)菌的液體培養(yǎng)；2）檢查細(xì)菌的發(fā)育狀況，以及形成的沉淀物、菌膜、菌環(huán)等；3）制作固體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)。

11.試述普通瓊脂培養(yǎng)基的制備方法及其用途。

答：成分：普通肉湯培養(yǎng)基1000mL；瓊脂20—30g

用途：1）細(xì)菌的分離培養(yǎng)、純培養(yǎng)；2）觀察菌落形狀及保存菌種；3)制作特殊培養(yǎng)基的基礎(chǔ)。

12.細(xì)菌分離培養(yǎng)的目的是什么？何為純培養(yǎng)？

答：目的：由于細(xì)菌感染而致病的各種標(biāo)本及帶菌者所需檢查的各種標(biāo)本，往往并非單一的細(xì)菌，而且混有其它非致病菌，因此，當(dāng)對(duì)此標(biāo)本做出細(xì)菌鑒定時(shí)，就必須從標(biāo)本中分離出致病菌。

純培養(yǎng)：只在單一種類(lèi)存在的狀態(tài)下所進(jìn)行的生物培養(yǎng)。純培養(yǎng)技術(shù)：對(duì)已得到的可疑病菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定及菌種保存等培養(yǎng)成為純培養(yǎng)技術(shù)。

13.培養(yǎng)皿培養(yǎng)時(shí)為什么要倒置？

答：1）便于操作；2）使接種的細(xì)菌在培養(yǎng)皿上生長(zhǎng)良好；3）防止空氣中的細(xì)菌進(jìn)入培養(yǎng)皿中造成污染；

4）防止蒸發(fā)的水分形成水珠掉在培養(yǎng)皿上破壞菌落。

14.細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法有哪些？常用什么方法？

答：細(xì)菌分離培養(yǎng)的方法有劃線(xiàn)分離培養(yǎng)法、斜面移植法、肉湯增菌培養(yǎng)等。常用方法是劃線(xiàn)分離培養(yǎng)法。

15.細(xì)菌菌落特征怎樣描述？

答：大小、表面性狀、形狀、邊緣、隆起度、顏色及透明度、硬度、溶血。

16.在挑取固體培養(yǎng)基上的細(xì)菌做平板分區(qū)劃線(xiàn)時(shí)，為什么在每區(qū)之間都要將接種環(huán)上剩余的細(xì)菌燒掉？ 答：目的是為了達(dá)到使被檢材料適當(dāng)?shù)南♂專(zhuān)垣@得單一的菌落，防止發(fā)育成菌苔，能更好的鑒別菌落的性狀。

17.革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟是什么？

答：酒精脫色，過(guò)度時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性菌易被誤認(rèn)為是革蘭氏陰性菌；時(shí)間過(guò)短時(shí)，革蘭氏陰性菌易被誤認(rèn)為革蘭氏陽(yáng)性菌。

18.當(dāng)你對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣保證操作正確，結(jié)果可靠？

答：先做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，取已知革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌進(jìn)行革蘭氏染色，如實(shí)際染色結(jié)果與理論結(jié)果相等，則用這個(gè)實(shí)驗(yàn)參數(shù)（染色、脫色、水洗、復(fù)染時(shí)間），否則應(yīng)改變實(shí)驗(yàn)參數(shù)再試驗(yàn)，直到在當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境時(shí)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)可以確保染色正確，然后再去染未知菌。

19.解釋所做生化實(shí)驗(yàn)的原理？作生化實(shí)驗(yàn)時(shí)有哪些注意事項(xiàng)？

答：原理：微生物生化反應(yīng)是微生物分類(lèi)鑒定中的重要依據(jù)之一。細(xì)菌生化實(shí)驗(yàn)就是檢測(cè)細(xì)菌是否利用某種物質(zhì)并進(jìn)行代謝及合成產(chǎn)物。判斷和確定細(xì)菌合成和分解代謝物的特征，借此來(lái)鑒定細(xì)菌的種類(lèi)。理論依據(jù)：不同的細(xì)菌含有不同的分解代謝酶，具有不同的分解代謝途徑，對(duì)同一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解代謝及其產(chǎn)物有所不同。

注意事項(xiàng)：1）純培養(yǎng)物方可進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)；2）接種時(shí)避免交叉污染；3）標(biāo)記必須準(zhǔn)確；4）試劑可用標(biāo)準(zhǔn)菌株作對(duì)照。

20.在圓紙片法中判定細(xì)菌對(duì)藥物敏感程度的方法是什么？

答：根據(jù)藥物紙片周?chē)袩o(wú)抑菌圈及其直徑大小來(lái)判斷該菌對(duì)各種藥物的敏感程度，分為高度敏感、中度敏感、低度敏感和不敏感。不同敏感程度在指導(dǎo)臨床用藥時(shí)可加劑量。

21.多殺性巴氏桿菌的培養(yǎng)特征及生化特征有哪些？

答：培養(yǎng)特征：在鮮血平板上生長(zhǎng)良好，菌落呈淡灰色、圓形、濕潤(rùn)、呈露珠樣小菌落，無(wú)溶血。在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，在麥糠凱培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。

生化特性：不分解乳糖、吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性、硫化氫陽(yáng)性等。

22.結(jié)合微生物實(shí)驗(yàn)室診斷要求簡(jiǎn)述動(dòng)物尸體剖解的注意事項(xiàng)

答：1)懷疑死于炭疽的動(dòng)物嚴(yán)禁尸體剖解；2）有針對(duì)性的采集病料；3）做好個(gè)人的防護(hù)和環(huán)境消毒工作；

4）盛裝病料的容器要求無(wú)菌；5）無(wú)菌操作；6）病料必須注明名稱(chēng)；7）必須低溫保存，及早送檢；8）動(dòng)物尸體必須妥善處理（深埋、焚燒）

23.簡(jiǎn)述瑞氏染色和姬姆薩染色方法及結(jié)果

答;瑞氏染色法：1）組織觸片或推片，自然干燥；2）在干燥的組織涂片上加瑞氏染液染1—3min，勿使染液干；3）直接滴加與瑞氏染液等量的蒸餾水到涂片上，吹氣混勻，繼續(xù)染3—5min，水洗，干燥，鏡檢。姬姆薩染色法：1）組織涂片，自然干燥；2）置于無(wú)水甲醇中固定3—5min；3）置于新配置的姬姆薩染液中（一份染色液原液加9份中性蒸餾水）染30—60min（過(guò)夜也可）；4）水洗、干燥、鏡檢；5）結(jié)果：細(xì)菌呈藍(lán)青色，組織、細(xì)胞呈其它顏色，視野呈淡紅色。

24.多殺性巴氏桿菌在純培養(yǎng)和病料組織中的形態(tài)特征有什么差別？檢查時(shí)各用什么方法？

答：在純培養(yǎng)中的形態(tài)是淡灰色，圓形，濕潤(rùn)，露珠樣小菌落，菌落周?chē)鸁o(wú)溶血圈，檢查時(shí)用革蘭氏染色法。在病料組織中形態(tài)：呈典型的兩級(jí)著色，檢查時(shí)用姬姆薩染色、美藍(lán)染色或瑞氏染色。

25.雞胚接種時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？

答：1）操作過(guò)程應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；2）照蛋時(shí)，要注意避開(kāi)頭部和血管劃圈；3）接種時(shí)要將雞蛋注

射部位消毒，再打孔注射；4)吸取尿囊液時(shí)，避免使血管、卵黃破壞而污染尿囊液；5）去殼時(shí)，剪刀、鑷子要消毒，注射后用石蠟封閉小孔。

26.常用雞胚接種方法有哪些？

答：絨毛尿囊腔接種法、絨毛尿囊膜接種法、人工氣室法、卵黃囊內(nèi)接種法、羊膜腔內(nèi)接種法。

27.病毒凝集紅細(xì)胞是不是一種特異的抗原體反應(yīng)？為什么？

答：病毒凝集紅細(xì)胞不是一種抗原體反應(yīng)，目的是檢測(cè)病毒的存在。原理是病毒表面血凝集與雞紅細(xì)胞表面糖蛋白受體結(jié)合，產(chǎn)生凝集反應(yīng)。

28.HI實(shí)驗(yàn)是不是特異的抗原體反應(yīng)？為什么？

答：HI實(shí)驗(yàn)是特異的抗原體反應(yīng)，HI實(shí)驗(yàn)是特異性抗體與相應(yīng)病毒結(jié)合，使病毒失去凝紅細(xì)胞的能力，從而抑制血凝現(xiàn)象。

29.血凝試驗(yàn)中為什么要加補(bǔ)充液？

答：補(bǔ)充液是代替抗體，加補(bǔ)充液是為了使各孔的溶液量相等，這樣方便和準(zhǔn)確的進(jìn)行比較。

30.為什么加病毒液和紅細(xì)胞懸液時(shí)要反向加？

答：在加病毒液時(shí)，從左至右的濃度依次降低。在加紅細(xì)胞懸液時(shí)，若不反向加，操作時(shí)會(huì)將高濃度的觸到低濃度的孔，影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以要反向加。

31.血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)中空白對(duì)照的意義。

答：通過(guò)空白對(duì)照，更準(zhǔn)確的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較，是結(jié)果判定的依據(jù)。

血清對(duì)照：檢測(cè)血清有無(wú)影響；紅細(xì)胞對(duì)照：檢測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)血凝；病毒對(duì)照：檢測(cè)病毒是否能引起血凝現(xiàn)象。

第二篇：微生物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本復(fù)習(xí)總結(jié)

微生物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本復(fù)習(xí)總結(jié)（王莉莉口述+教授整理版）

分類(lèi) 球菌

標(biāo)本名稱(chēng) 葡萄球菌

屬 鏈球菌屬 肺炎 鏈球菌

腦膜炎 球菌

淋病 奈瑟菌 革蘭染色陰性桿菌

弧菌屬

弧菌屬

泌尿生殖道分泌物 糞便/ 血標(biāo)本/c.s.f 米泔水樣糞便、嘔吐

物

分枝桿菌屬

抗酸 陽(yáng)性菌

G G

標(biāo)本來(lái)源 血標(biāo)本/ 膿汁標(biāo)本/c.s.f 同上 鐵銹色 痰液 c.s.f

G 染色方法

G

鏡下描述（參考）革蘭陽(yáng)性，球形，呈葡萄串狀排列 革蘭陽(yáng)性，球形或卵圓形，呈鏈狀排列 革蘭陽(yáng)性雙球菌，菌體呈矛頭狀，寬端相對(duì)，尖端向外 革蘭陰性雙球菌，腎形或豆形，排列成單個(gè)、成雙或4個(gè)相聯(lián) 革蘭陰性雙球菌，成雙排列；有莢膜（致病菌株可見(jiàn)菌毛）革蘭陰性，菌體兩端鈍圓，散在排列 革蘭陰性，菌體只有一個(gè)彎曲，呈逗點(diǎn)狀，散在排列

90%開(kāi)放性肺

結(jié)核/結(jié)核性腦

膜炎

無(wú) 流行性腦脊髓膜炎（流腦）

淋病 醫(yī)學(xué)意義 敗血癥/化膿性感染/化膿性腦

膜炎 同上 大葉性肺炎

G G

腸桿菌科

G

無(wú)/敗血癥 /化膿性腦膜炎

霍亂

痰標(biāo)本/c.s.f 抗酸染色 桿菌，被染成紅色，細(xì)長(zhǎng)、直或彎曲、有時(shí)著色不均，呈顆粒

狀排列

窄而深傷口、壞死組

織

G

革蘭陽(yáng)性細(xì)長(zhǎng)桿菌；無(wú)莢膜，芽胞圓形、比菌體粗、位于菌體頂端，使細(xì)菌呈鼓槌

G

狀

革蘭陽(yáng)性粗大桿菌；可見(jiàn)明顯莢膜，芽胞橢圓形、位于次極端、不比菌體粗

食物、嘔吐

物、糞便

G

革蘭陽(yáng)性粗大桿菌，單獨(dú)或成雙排列，有時(shí)可見(jiàn)短鏈；無(wú)莢膜，芽胞橢圓形、位于次極端、粗于菌體，使細(xì)菌呈湯匙狀或網(wǎng)球

拍狀

厭氧性 細(xì)菌 破傷風(fēng) 梭菌

產(chǎn)氣莢膜梭菌

壞死組織 氣性壞疽

肉毒梭菌 無(wú)

分類(lèi) 螺旋體

標(biāo)本名稱(chēng) 鉤端 螺旋體

標(biāo)本來(lái)源 血標(biāo)本/ 尿標(biāo)本

染色方法 鍍銀

鏡下描述（參考）菌體呈棕色或黑色，菌體粗大，細(xì)密的螺旋看不清楚，菌體的一端或兩端彎曲成鉤狀 菌體呈棕黑色，周?chē)M織呈黃色，菌體粗大，螺旋較細(xì)密而規(guī)則

棉蘭

可見(jiàn)體積較小，只有一個(gè)細(xì)胞，呈圓形、卵圓形、梨形或棍棒形的G

小分生孢子

革蘭陽(yáng)性，菌體較大，圓形；可見(jiàn)芽生孢子及假菌絲，出芽細(xì)胞呈卵圓形，比葡萄球菌大2-5

倍

墨汁負(fù)染 菌體呈圓形，大小不等；

外被莢膜，透明發(fā)亮，可見(jiàn)芽生孢子，無(wú)假菌絲

教授注:

1.為便于分類(lèi)，特意將標(biāo)本名稱(chēng)前置； 2.鏡下描述僅供參考；

3.“/”符號(hào)前后標(biāo)本來(lái)源與醫(yī)學(xué)意義呈一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，注意分辨； 4.G---革蘭染色；c.s.f-----腦脊液；

正常菌群 或條件致病菌

廯病 醫(yī)學(xué)意義 鉤體病

梅毒 螺旋體

硬下疳滲出液 皮膚、指（趾）甲

鍍銀 梅毒

真菌 皮膚廯 真菌

白假絲 酵母菌

刮屑、試子或膿、痰標(biāo)本

新生 隱球菌

c.s.f

隱球菌性 腦膜炎

祝大家考試順利!

第三篇：微生物,真菌實(shí)驗(yàn)（范文模版）

青 島 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué)

獸醫(yī)微生物學(xué)課程論文

題 目：姓 名：學(xué) 院：專(zhuān) 業(yè)：班 級(jí)：學(xué) 號(hào)：指導(dǎo)教師：

病原真菌的分離鑒定

動(dòng)物科技學(xué)院 動(dòng)物醫(yī)學(xué)

2014年月 13 日

病原真菌的分離鑒定

動(dòng)醫(yī)1205

李春成20121450 摘要：制作固體培養(yǎng)基，將A、B、D三種真菌接種到培養(yǎng)基和蓋玻片上進(jìn)行3-5d的培養(yǎng)（溫度為28℃，觀察真菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)，在顯微鏡下觀察小培養(yǎng)中的真菌形態(tài)，用美藍(lán)染色液染酵母菌，進(jìn)一步觀察其形態(tài)。關(guān)鍵詞：真菌；分離；形態(tài)；接種 引言：

真菌在自然界分布廣、數(shù)量大、種類(lèi)多。有些真菌可引起人和畜禽疾病，有些霉菌還產(chǎn)生毒素，直接或間接的危害人類(lèi)和動(dòng)物健康。了解真菌的培養(yǎng)方法，認(rèn)識(shí)其形態(tài)十分重要。

真菌中的酵母菌是單細(xì)胞微生物，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)有明顯的分化，個(gè)體直徑比真菌大10倍左右，多為圓形或卵圓形。酵母菌無(wú)性繁殖主要是出芽生殖，在特殊的情況下能形成假菌絲，有性繁殖是通過(guò)結(jié)合產(chǎn)生子囊孢子。用美藍(lán)染色液制成水浸片，不僅可以觀察其外形，還可以區(qū)分死活細(xì)胞。

霉菌的營(yíng)養(yǎng)體是分支的絲狀體，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲又分化出繁殖菌絲，不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。

霉菌的菌絲較大，細(xì)胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以指標(biāo)本是常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。此染色液制成霉菌標(biāo)本片的特點(diǎn)是：細(xì)胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長(zhǎng)的時(shí)間，溶液本身呈藍(lán)色，有一定的染色效果。

利用培養(yǎng)在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料，可以得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)。

制作霉菌封閉標(biāo)本，一般用石炭酸棉染色液封片，其中含有甘油，不易干燥，石炭酸有防腐作用，棉藍(lán)有一定的染色作用，便于觀察。1材料和方法 1.1材料

待鑒定的三種真菌A、B、D

1.1.1培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基 1.1.2儀器

懸液、載玻片、蓋玻片、無(wú)菌培養(yǎng)皿、濕盒，1mL無(wú)菌注射器、生理鹽水、酒精燈等 1.2方法

1.2.1劃線(xiàn)分離：將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌冷卻后，取待測(cè)的真菌，按照細(xì)菌的平板劃線(xiàn)分離法進(jìn)行平板劃線(xiàn)，即用接種環(huán)從待測(cè)培養(yǎng)基上蘸取菌種在平板上劃1/5-1/4，劃畢灼燒滅菌接種環(huán)，待冷卻后，于第二段處再做劃線(xiàn)，且從第一段處引線(xiàn)，劃畢，灼燒滅菌接種環(huán)。冷卻后，于第三段再做劃線(xiàn)，且從第二段處引線(xiàn)，劃畢，灼燒滅菌接種環(huán)。冷卻后，于第四段再做劃線(xiàn)，且從第三段處引線(xiàn)，劃畢，灼燒滅菌接種環(huán)。

1.2.2小培養(yǎng)：用注射器吸取液體培養(yǎng)基于載玻片上，將接種環(huán)在火焰下滅菌，挑取待檢菌放于液體培養(yǎng)基上，待液體培養(yǎng)基將要凝固，但仍有部分呈液體狀時(shí)，蓋上蓋玻片，標(biāo)記好菌種。

1.2.3酵母菌水浸片的制備：先取干凈的載玻片滴上生理鹽水1-2滴，將接種環(huán)在火焰下滅菌，挑取酵母菌少許，均勻涂在液滴中，再將美藍(lán)染色液滴于載玻片上，染色2-3min后加蓋玻片。（注意切勿產(chǎn)生氣泡）然后低倍鏡和高倍鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)、芽殖方式。2.結(jié)果與分析 2.1觀察三個(gè)培養(yǎng)基：A菌在固體培養(yǎng)基上菌落呈油脂狀，表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，顏色呈黃色。B菌在固體培養(yǎng)基上菌落為氈狀，顏色是綠色，具有典型的放射狀皺紋。D菌在固體培養(yǎng)基上菌落密集，最初呈白色，孢子呈黑色。

2.2實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象

2.2.1小培養(yǎng)形態(tài)鑒定現(xiàn)象

前三圖均在40X下觀察）

A菌體呈圓形、卵形或橢圓形，內(nèi)有細(xì)胞核、液泡和顆粒體物質(zhì)。光鏡下可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)所在范圍及細(xì)胞壁的影子，高倍鏡中可現(xiàn)細(xì)胞核。B菌菌絲呈無(wú)色，有分隔，其分生孢子梗經(jīng)過(guò)多次分支，產(chǎn)生幾輪對(duì)稱(chēng)或不對(duì)稱(chēng)的小梗，形如掃帚，稱(chēng)為掃帚體。D菌菌絲無(wú)隔，有匍匐菌絲和假根，假根著生處有直立向上孢子囊梗，其頂端彭大成孢子囊，孢子囊底部有半球形囊軸。

2.2.2美蘭染色現(xiàn)象

顯微鏡下看到的是單細(xì)胞, 不形成菌落的真菌，無(wú)色細(xì)胞為活酵母菌細(xì)胞，藍(lán)色細(xì)胞為已死的酵母菌細(xì)胞。

3.討論

本次試驗(yàn)做的還可以，試驗(yàn)結(jié)果都能看到，現(xiàn)象比較明顯，不過(guò)，顯微鏡聚焦不是很好，看的不是很清楚，現(xiàn)象也不太明顯，在做小培養(yǎng)時(shí)充分發(fā)揮了團(tuán)隊(duì)合作精神，使得試驗(yàn)做的很快（因?yàn)樽鲂∨囵B(yǎng)時(shí)，液體培養(yǎng)基溫度不那么高了，凝固時(shí)間很快），做美蘭染色時(shí)，也很注意沒(méi)有弄進(jìn)氣泡，不影響觀察。4.結(jié)果

經(jīng)以上試驗(yàn)可得出，A為酵母菌；B為青霉菌；D為根霉菌。

4.參考文獻(xiàn)

獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)教程

胡貴學(xué)

2006

第四篇：微生物實(shí)驗(yàn)教案

《微生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)教案[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目] 實(shí)驗(yàn)一 微生物學(xué)試驗(yàn)常用玻璃儀器洗滌及干熱滅菌 [教學(xué)時(shí)數(shù)]

3學(xué)時(shí) [實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1．認(rèn)識(shí)微生物實(shí)驗(yàn)所需要的各種器皿，了解常用工具和儀器的名稱(chēng)、用途。2．掌握對(duì)玻璃器皿的清洗、包扎方法與干熱滅菌的操作過(guò)程。[實(shí)驗(yàn)原理]

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求較高的無(wú)菌狀態(tài)，因此，實(shí)驗(yàn)所用的器皿，大多數(shù)要進(jìn)行消毒、滅菌從而用以培養(yǎng)微生物，所以對(duì)其質(zhì)量、規(guī)格、洗滌和包扎方法均有一定要求。

清潔的玻璃器皿是實(shí)驗(yàn)得到正確結(jié)果的先決條件，包扎方法要能保證防止污染雜菌。

干熱滅菌的原理，空的玻璃器皿一般用干熱滅菌。干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān)，在菌體受熱時(shí)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度要高（160～170℃），時(shí)間要長(zhǎng)（1～2h），但干熱滅菌溫度不能超過(guò)180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦，甚至引起燃燒。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備]

1．培養(yǎng)皿、大試管、三角瓶6只、燒杯（500ml）2只、燒杯（1000ml）1只、小試管6只、吸管（0.2ml 2支，0.5ml 2支，1ml 2支，5ml 2支）共8支。2．去污粉、肥皂、清洗劑、毛刷。3．棉花、扎繩、包扎紙。[實(shí)驗(yàn)步驟]

（一）學(xué)習(xí)下列常用儀器的種類(lèi)、規(guī)格和應(yīng)用范圍 1.培養(yǎng)皿

由一底一蓋組成一套，常用的培養(yǎng)皿皿底直徑90 mm，高15mm,皿底皿蓋均為玻璃制成。制成平板，可用于分離、純化、鑒定菌種、活菌計(jì)數(shù)以及測(cè)定抗生素、噬菌體的效價(jià)等。2.試管

(1)大試管(約18mm×180mm): 可裝倒平板用的培養(yǎng)基，可作制備斜面用（需要大量菌體時(shí)用），裝液體培養(yǎng)基用于微生物的振蕩培養(yǎng)。

(2)中試管[(13～15)mm×(100～150)mm]: 裝液體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌或做斜面用，用于細(xì)菌、霉菌、病毒等的稀釋和血清學(xué)試驗(yàn)。

(3)小試管[(10～12)mm×100mm]:一般用于糖發(fā)酵或血清學(xué)試驗(yàn)，和其它需要節(jié)省材料的試驗(yàn)。3.三角瓶 規(guī)格有100mL、250mL、500mL和1000 mL用來(lái)裝無(wú)菌水、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)微生物等。4.燒杯

規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL和1000mL 用來(lái)配制培養(yǎng)基與各種溶液等。5.吸管 規(guī)格有0.1mL、1mL、2mL、5mL、10mL用來(lái)量取轉(zhuǎn)移各種溶液等。6.量筒 規(guī)格有50mL、100mL、250mL、500mL。

（二）學(xué)習(xí)玻璃器皿的洗滌方法 1.新玻璃器皿的洗滌

在2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，用自來(lái)水沖洗干凈。2.舊玻璃器皿的洗滌

（1）試管、培養(yǎng)皿、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自來(lái)水沖洗 A 裝有固體培養(yǎng)基：刮掉，洗滌

B 帶菌的器皿：2%來(lái)蘇爾或0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時(shí)或煮沸0.5小時(shí)，然后洗滌 C 帶病原菌培養(yǎng)物的器皿：先高壓蒸汽滅菌，倒去培養(yǎng)物（2）玻璃吸管：吸管尖端與裝在水龍頭上的橡皮管連接，反復(fù)沖洗

A 吸過(guò)血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管：立即投入盛有自來(lái)水的容器中浸泡，實(shí)驗(yàn)后集中沖洗。B 塞有棉花的吸管：用水將棉花沖出，然后沖洗

C 吸過(guò)含有微生物培養(yǎng)物的吸管：2%來(lái)蘇爾或0.25%新潔爾滅消毒液中浸泡24小時(shí)然后洗 D 吸管內(nèi)壁有油垢：洗滌液中浸泡數(shù)小時(shí)，再?zèng)_洗

(三)學(xué)習(xí)各種器皿的包扎

1.培養(yǎng)皿的包扎：牛皮紙或舊報(bào)紙包緊，一般以5～8套培養(yǎng)皿包成1包 2.吸管的包扎：

在上端約0.5cm處，塞入一小段1.5 cm長(zhǎng)的棉花（勿用脫脂棉），目的是避免將外界或嘴中雜菌吹入管內(nèi)，或不慎將菌液吸出管外。用4～5 cm寬的長(zhǎng)紙條卷起來(lái)3.試管和三角瓶等的包扎：用橡皮塞和牛皮紙。(四)干熱滅菌 1．裝入待滅菌物品

將包好的待滅菌物品（培養(yǎng)皿、吸管等）放入電烘箱內(nèi)，關(guān)好箱門(mén)。物品不要擺太擠，以免妨礙空氣流通；不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。

2．升溫 接通電源，撥動(dòng)開(kāi)關(guān)，打開(kāi)電烘箱排氣孔，讓溫度逐漸上升。當(dāng)溫度升至100℃時(shí)，關(guān)閉排氣孔。3．恒溫 當(dāng)溫度升達(dá)到160～170℃時(shí)，恒溫調(diào)節(jié)器會(huì)自動(dòng)控制調(diào)節(jié)溫度，保持此溫度2h。干熱火菌過(guò)程。嚴(yán)防恒溫調(diào)節(jié)的自動(dòng)控制失靈而造成安全事故。

4．降溫 切斷電源、自然降溫。

5．開(kāi)箱取物 待電烘箱內(nèi)溫度降到70℃以下后，打開(kāi)箱門(mén)，取出滅菌物品。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)?zāi)阏J(rèn)識(shí)了微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的哪些器皿？ 2.簡(jiǎn)述玻璃器皿洗滌的基本要求。3.簡(jiǎn)述干熱滅菌的操作步驟。[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的制備與滅菌 [教學(xué)時(shí)數(shù)]

4學(xué)時(shí)[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]1．了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2．了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法。[實(shí)驗(yàn)原理]

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類(lèi)和配制 方法。

從培養(yǎng)基的組成成分可分為: 1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。

2.半合成培養(yǎng)基：一部分純化學(xué)物質(zhì)和一部分天然物質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物配制而成。

從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為: 1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀

態(tài)的培養(yǎng)基或農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。察氏一號(hào)培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的霉菌培養(yǎng)基。

高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到1.055kg/cm2時(shí)，鍋內(nèi)溫度可達(dá)到121℃，一般維持20min,即可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體或芽孢，而達(dá)到滅菌目的。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備]

1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、鑷子等。2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1.稱(chēng)量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查 2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物

3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查 4.過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌 關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.要嚴(yán)格按配方配制。2.調(diào)pH不要過(guò)頭。

3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過(guò)緊，注意溫度的時(shí)間控制，70oC以下放物、取物。4.高壓滅菌要注意物品不要過(guò)多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。

5.過(guò)濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的? 2.在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題?為什么? 3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么? 4.培養(yǎng)基的配制原則是什么? [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)三 環(huán)境和人體微生物的檢測(cè)及無(wú)菌操作技術(shù)[教學(xué)時(shí)數(shù)]3學(xué)時(shí) [實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.通過(guò)檢測(cè)環(huán)境和人體中微生物的存在，體會(huì)微生物分布的廣泛性。

2.學(xué)習(xí)無(wú)菌操作的技術(shù)，掌握利用稀釋涂布平板法從土壤中分離微生物的方法。[實(shí)驗(yàn)原理] 自然環(huán)境中和人及動(dòng)物的體表、體內(nèi)都存在大量的微生物，它們一遇到適合的條件就會(huì)大量繁殖。當(dāng)把取自不同來(lái)源的含菌樣品接種于含有生長(zhǎng)發(fā)育需要的各種營(yíng)養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基時(shí)，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的微生物集體群落-菌落。每種微生物菌落都有其獨(dú)有的特點(diǎn)，如大小、顏色、表面干燥或濕潤(rùn)、隆起或扁平、粗糙或光滑、邊緣整齊或不整齊等。因此，可以通過(guò)平板培養(yǎng)來(lái)檢測(cè)不同環(huán)境下微生物的數(shù)量、種類(lèi)和特點(diǎn)。[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 1.恒溫培養(yǎng)箱、磁力攪拌器、移液槍

2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、察氏一號(hào)培養(yǎng)基；地面以下5-10cm的土壤； 3.酒精燈、無(wú)菌棉棒、無(wú)菌生理鹽水、涂布棒、記號(hào)筆、培養(yǎng)皿、吸管、試管、三角瓶 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1.無(wú)菌操作技術(shù) 在酒精燈火焰旁操作，將融化并冷卻至不燙手的滅菌固體培養(yǎng)基倒入無(wú)菌的培養(yǎng)皿，倒量為容積的1/3~1/2或者覆蓋皿底5毫米左右，然后平放到桌面待其凝固即為無(wú)菌平板。

2.土樣的稀釋分離

制備土樣懸濁液：稱(chēng)取土樣1g，迅速倒入盛有99ml無(wú)菌水和玻璃球的三角瓶中，置入磁力棒，攪拌10-15min，使土樣充分打散，即成10-2的土壤懸濁液。稀釋?zhuān)河脽o(wú)菌移液管吸10-2的土壤懸液0.5mL，放入4.5mL無(wú)菌水中即為10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-3～10-6的稀釋液。(注意：操作時(shí)每一個(gè)稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。)3.環(huán)境及人體各部位取菌樣 4.標(biāo)記、培養(yǎng)

標(biāo)記： A-Ⅰ-1-10-5姓名

按培養(yǎng)基類(lèi)別：細(xì)菌培養(yǎng)基--A，霉菌培養(yǎng)基--B 按3個(gè)大組：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、按4個(gè)中組：1-4 按樣品類(lèi)別：10-

5、10-

6、口腔--a、鼻腔--b、頭發(fā)--c、空氣--d按個(gè)人標(biāo)記：姓名

培養(yǎng)：將接種的平板分別放入細(xì)菌和霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。霉菌保持25-27℃，3-5天；細(xì)菌35-37℃，1-2天。

[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1、無(wú)菌倒平板時(shí)注意的事項(xiàng)有哪些？

2、平板接種后為什么要倒置培養(yǎng)？

3、通過(guò)本次試驗(yàn)?zāi)銓W(xué)到了什么？有什么體會(huì)？ [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)六 細(xì)菌的單染色與革蘭氏染色 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 3學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.學(xué)習(xí)對(duì)細(xì)菌的涂片、染色和無(wú)菌操作技術(shù)。

2.了解染色原理、學(xué)習(xí)并掌握單染色和革蘭氏染色技術(shù)。[實(shí)驗(yàn)原理] 細(xì)菌的細(xì)胞小而透明，在普通的光學(xué)顯微鏡下不易識(shí)別，染色后，菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

微生物學(xué)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。染色部位分芽孢、鞭毛、莢膜染色

其機(jī)理主要是由于兩類(lèi)細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。G+菌，肽聚糖多，脂質(zhì)少，酒精不易進(jìn)入； G-菌，肽聚糖少，脂質(zhì)多，酒精易進(jìn)入 [實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 1.菌種：E.coli（大腸桿菌）、B.subtilis（枯草芽孢桿菌）、玉米細(xì)菌等

2.試劑：石炭酸復(fù)紅染色液、革蘭氏染色液(草酸銨結(jié)晶紫、碘液、95%乙醇、沙黃染色液）3.其他：顯微鏡、載玻片、生理鹽水、酒精燈、接種環(huán)、吸水紙、擦鏡紙等 [實(shí)驗(yàn)步驟]

一、單染色法： 滴無(wú)菌水→ 涂片→自然干燥→ 固定→染色→水洗→干燥→鏡檢（高倍鏡、油鏡）

二、革蘭氏（Gram）染色法

1.涂片

2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1-1.5分鐘，傾去染液，流水沖洗至無(wú)紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面14.脫色：除去殘水后，滴加

95%酒精進(jìn)行脫色約

分鐘，后水洗。

秒，后立即用流水沖洗。

5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染1-1.5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案]

1.革蘭氏染色過(guò)程中大腸桿菌、枯草桿菌、玉米細(xì)菌、金黃葡萄球菌等分別被染成什么色，分別為革蘭氏反應(yīng)的什么菌 ？

2.涂片用的玻璃片為什么不得有油污？為什么涂片要求菌膜要均勻、??？ 3.革蘭氏染色的原理 4.染色注意事項(xiàng)有哪些？ [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)七 微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)、大小測(cè)量和酵母菌的死活鑒別 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 5學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.學(xué)習(xí)并掌握利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的基本方法。2.了解并掌握酵母菌的死活鑒別染色的原理和技術(shù) [實(shí)驗(yàn)原理] 1.兩種常用計(jì)數(shù)方法，即直接計(jì)數(shù)法（血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法）和間接計(jì)數(shù)法（平板菌落計(jì)數(shù)法）。本實(shí)驗(yàn)是利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行直接計(jì)數(shù)。

2.利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的，所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來(lái)?yè)Q算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱(chēng)為總菌計(jì)數(shù)法。3.美蘭（氧化型呈藍(lán)色，還原型呈無(wú)色），活的酵母菌具有將氧化型美蘭還原成還原型的能力，故染色后是透明的，而死的酵母菌則被染成了藍(lán)色。

計(jì)數(shù)方法：計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)（或四個(gè)）中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。設(shè)被選作計(jì)數(shù)的中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/4×16×104×B=40000A·B（個(gè)）[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 酵母菌懸液（市售的干酵母粉）血球計(jì)數(shù)板、蓋玻片、吸水紙顯微鏡、接種環(huán)、分類(lèi)計(jì)數(shù)器 0.1%的美藍(lán)染色液 [實(shí)驗(yàn)步驟] 1 制備菌懸液、染色 用吸管吸取菌懸液（1滴）加入試管，用生理鹽水（8滴）進(jìn)行稀釋?zhuān)渭樱?滴）美蘭染色液。加菌懸液樣品 將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液（注意一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡）。3 顯微鏡計(jì)數(shù) 加樣后靜止1 min，先用低倍鏡然后換成高倍鏡，計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)位于線(xiàn)上酵母菌，一般只數(shù)上方和左邊線(xiàn)上的，當(dāng)酵母菌芽體達(dá)到母細(xì)胞大小的二分之一時(shí)，可記作兩個(gè)細(xì)胞。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的值來(lái)計(jì)算樣品的含菌量。清洗血球計(jì)數(shù)板 計(jì)數(shù)完畢，將計(jì)數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用電吹風(fēng)吹干。5.計(jì)算 ：利用相應(yīng)公式進(jìn)行計(jì)算（見(jiàn)前面公式或者課本公式），并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入作業(yè)中的表格內(nèi)。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.要正確使用顯微鏡，光線(xiàn)亮度要調(diào)的合適。

2.菌液制備要精準(zhǔn)，稀釋倍數(shù)要合適。如果濃度過(guò)大就再稀釋?zhuān)绻^(guò)小再重做。3.計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)一半

4.濃度稀釋標(biāo)準(zhǔn)：以每小方格內(nèi)含有5-10個(gè)酵母細(xì)胞為宜，一般稀釋10倍即可。5.計(jì)數(shù)室內(nèi)一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡。

6.其他微生物孢子技術(shù)與酵母菌類(lèi)似，基本操作一樣。7.確保血球計(jì)數(shù)板清洗干凈。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案] 1.使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)注意什么？ 2.將計(jì)數(shù)結(jié)果填入表格中。

3.簡(jiǎn)單說(shuō)明酵母菌死活染色的原理。[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目]

實(shí)驗(yàn)八 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定 [教學(xué)時(shí)數(shù)] 3學(xué)時(shí)

[實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求]

1.了解測(cè)微尺的構(gòu)造和使用，學(xué)習(xí)并掌握測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法。[實(shí)驗(yàn)原理] 微生物細(xì)胞的大小的測(cè)量是在顯微鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)進(jìn)行的，但由于測(cè)量的是放大后的圖像，故目鏡測(cè)微尺在不同放大倍率下每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度也隨之變化，因此，需用物鏡測(cè)微尺來(lái)校正在不同放大倍率下目鏡測(cè)微尺每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度。

物鏡測(cè)微尺是中央刻有精確刻度的載玻片，一般是將1 mm等分為100格，每格長(zhǎng)0．01mm，即10 um，它不直接用于測(cè)量細(xì)胞大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺的每格的相對(duì)長(zhǎng)度。

[實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備] 酵母菌懸液（市售的干酵母粉）或者制作的霉菌裝片

目鏡測(cè)微尺，物鏡測(cè)微尺、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、吸水紙、0.1%的美藍(lán)染色液 [實(shí)驗(yàn)步驟]（—）裝目鏡測(cè)微尺

（二）校正目鏡測(cè)微尺

1.將物鏡測(cè)微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺(tái)上

2.先用低倍鏡觀察，將目鏡測(cè)微尺刻度與物鏡測(cè)微尺的刻度平行。使兩尺的第一條刻度線(xiàn)相重合，再尋找兩尺的另 10 一條重合的刻度線(xiàn)，分別記錄兩重合線(xiàn)之間物鏡測(cè)微尺和目鏡測(cè)微尺所占的格數(shù)，由公式計(jì)算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。

3.用同樣的方法換成高倍鏡進(jìn)行校正，記錄并計(jì)算在每種倍率下目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。

（三）酵母細(xì)胞大小的測(cè)定

制備菌懸液、染色： 用吸管吸取菌懸液（1滴）加入試管，用生理鹽水（8滴）進(jìn)行稀釋?zhuān)渭樱?滴）美蘭染色液。

制片： 用吸管吸取1滴上述菌懸液滴加到干凈的載玻片上，蓋上蓋玻片（注意一定不要有溢出和產(chǎn)生氣泡），將多余菌液用吸水紙吸干。

顯微鏡下觀察、測(cè)量：在不同倍率下測(cè)量菌體的長(zhǎng)度和寬度，記錄測(cè)定值，并計(jì)算出酵母的長(zhǎng)、寬值。[指導(dǎo)與訓(xùn)練方案] 1.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正? 2.如何校正目鏡測(cè)微尺？ ３．如何測(cè)定細(xì)菌的大?。?/p>

[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1]實(shí)驗(yàn)1 常用玻璃儀器包扎及干熱滅菌；培養(yǎng)基的制備（口述）與高壓蒸汽滅菌（操作-必做）1.1 培養(yǎng)皿、試管、吸管的洗滌包扎及干熱滅菌（操作-必做）1.2 培養(yǎng)基分裝到三角瓶和試管與高壓蒸汽滅菌（操作）[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目2 實(shí)驗(yàn)2 無(wú)菌操作技術(shù)，倒平板和接種（操作-必做）1.倒平板，以清水代替；試管接試管；試管接培養(yǎng)皿 [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3] 實(shí)驗(yàn)3 細(xì)菌的革蘭氏染色（操作-必做）1.枯草桿菌 [實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目4] 實(shí)驗(yàn)4 微生物的顯微鏡計(jì)數(shù)（操作-必做）

酵母菌[實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目5]實(shí)驗(yàn)5 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定（操作）會(huì)校正和測(cè)量酵母菌或真菌菌絲

第五篇：微生物實(shí)驗(yàn)總結(jié)

微生物實(shí)驗(yàn)總結(jié)

姓名:趙葉鋒班級(jí)：食品科學(xué)113學(xué)號(hào)：2011013522

大三的第二學(xué)期塊結(jié)束了，這個(gè)學(xué)期操作了四個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)，以及一個(gè)自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)。通過(guò)前階段對(duì)四個(gè)實(shí)驗(yàn)的操作和認(rèn)知的基礎(chǔ)上，展開(kāi)第五個(gè)實(shí)驗(yàn)的自主設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)分別是菌落總數(shù)測(cè)定，霉菌和酵母的檢查和計(jì)數(shù)，乳酸菌的檢驗(yàn)，微生物藥敏試驗(yàn)以及探討環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。

這學(xué)期的微生物實(shí)驗(yàn)是在上學(xué)期微生物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上的累積和擴(kuò)展延伸：以培養(yǎng)基的制備與滅菌，玻璃器皿的洗滌、包扎和滅菌，微生物接種技術(shù)和細(xì)菌的革蘭氏染色為技術(shù)基礎(chǔ)進(jìn)行的，以加強(qiáng)學(xué)生基礎(chǔ)理論知識(shí)和基本技能的培養(yǎng)為目的。

下面我來(lái)談?wù)勎以趯?shí)驗(yàn)中的心得體會(huì)。

第一個(gè)實(shí)驗(yàn)是菌落總數(shù)測(cè)定。讓我重新認(rèn)識(shí)了一下這個(gè)名詞：菌落形成單位，我現(xiàn)在的理解就是：1ml或者1g待測(cè)樣品中菌落的個(gè)數(shù)，一定要注意的是單位是CFU/ml或CFU/g。還有就是要掌握好對(duì)高壓蒸汽滅菌鍋的操作。實(shí)驗(yàn)之前要充分做好預(yù)習(xí)工作，以便實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。由于是測(cè)定微生物實(shí)驗(yàn)，就要尤其小心其他雜菌的混入影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此要做好實(shí)驗(yàn)儀器和各種試劑的滅菌，有培養(yǎng)皿，試管，移液槍頭（裝在盒子中），按要求配置好的瓊脂培養(yǎng)基和生理鹽水，按各自要求用紗布和報(bào)紙包扎好，送入高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌。玻璃儀器在包扎前要進(jìn)行清洗，并烘干，以免水分沾濕報(bào)紙。滅完菌后取出物品進(jìn)入超凈工作臺(tái)，超近工作臺(tái)的紫外燈在進(jìn)入20分鐘前開(kāi)啟，并在進(jìn)入時(shí)關(guān)閉，以免影響人體。要對(duì)臺(tái)面進(jìn)行消毒處理，用酒精擦拭。可以在等待瓊脂培養(yǎng)基冷卻到50攝氏度左右前對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行10倍系列稀釋至需要的濃度。要注意的是一定要標(biāo)記好濃度或者按順序排列在試管架上以免弄混，同一個(gè)試管里吸取樣品才能用同一個(gè)槍頭進(jìn)行移液。再進(jìn)行平板接種。待瓊脂培養(yǎng)基冷卻好后，用右手打開(kāi)紗布并將錐形瓶拿住，將瓶口靠近酒精燈再進(jìn)行滅菌，左手拿培養(yǎng)皿用大拇指和食指稍微打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，將瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中心內(nèi)，不用倒很多，使瓊脂培養(yǎng)基沒(méi)過(guò)培養(yǎng)皿表面即可。培養(yǎng)皿一定是平拿在手上的，倒好后輕輕蓋上培養(yǎng)皿蓋，緩慢地平方在超凈工作臺(tái)臺(tái)面邊緣處，再推至中間。再用移液槍取1ml樣品快速打入培養(yǎng)皿中央，蓋上培養(yǎng)皿蓋，然后用手輕輕搖晃，千外不要太大力。然后貼上標(biāo)簽記號(hào)，靜置。如此依次操作下去。靜置一段時(shí)間待培養(yǎng)基凝固后倒置放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一段時(shí)間再取出進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)。

我們組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不甚理想，培養(yǎng)皿中的微生物都是連成一片的，或者是培養(yǎng)皿壁上也都長(zhǎng)著，主要是由于待測(cè)樣品打入培養(yǎng)皿后，搖晃不均勻或者太大力了，以至于菌液沒(méi)分散開(kāi)來(lái)或是跑到培養(yǎng)皿壁上去了。

第五個(gè)實(shí)驗(yàn)是自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。選取3個(gè)環(huán)境因素物理、化學(xué)和生物因素均可進(jìn)行設(shè)計(jì)。根據(jù)前四個(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，通過(guò)小組探討和交流設(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案。并加以驗(yàn)證。通過(guò)自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)可以結(jié)合小組的智慧，加強(qiáng)團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神和創(chuàng)新思維，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以驗(yàn)證理論，增加感性認(rèn)識(shí)，培養(yǎng)獨(dú)立工作能力和思考能力，并使具有過(guò)硬的專(zhuān)業(yè)技術(shù)水平。

通過(guò)這次的實(shí)驗(yàn)，我明白了任何事情丟不是一蹴而就的，而是一個(gè)慢慢積累的過(guò)程。雖然實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是很理想，但是我參與了過(guò)程，通過(guò)小組討論我們也分析了失敗的原因，找到了解決的方法，避免了下一次失誤。并且從中理解了團(tuán)隊(duì)討論和合作的重要性。以上即是我的全部感想。