第一篇：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)社會實(shí)踐報(bào)告

建立一個(gè)動物細(xì)胞培養(yǎng)室與植物細(xì)胞培養(yǎng)室所需的條件與社會價(jià)值

無菌環(huán)境是細(xì)胞離體培養(yǎng)的最基本條件，所以構(gòu)建一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)室需要保證工作環(huán)境不受微生物和其他有害物質(zhì)污染，并且干燥無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室。

一、基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室配置

⑴消毒間：消毒間主要為了處理實(shí)驗(yàn)器材以及實(shí)驗(yàn)材料，營造一個(gè)無菌的試驗(yàn)環(huán)境，一般消毒間會配備超凈實(shí)驗(yàn)臺、高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、細(xì)菌過濾設(shè)備、干熱消毒柜、電爐、酸缸等。

⑵無菌操作間：一般由緩沖間和操作間兩部分組成。緩沖間在外側(cè)，多用于實(shí)驗(yàn)之前的準(zhǔn)備，例如：更衣，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料，處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等，可放置電冰箱,冷藏器及消毒好的無菌物品等。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱,離心機(jī),倒置顯微鏡等。工作人員進(jìn)入操作間一定要消毒并更衣。

（3）培養(yǎng)基配制間：主要用于配置細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基。主要包括冰箱、天平、微波爐、pH計(jì)、培養(yǎng)基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲藏瓶等。

（4）培養(yǎng)室：用于培養(yǎng)細(xì)胞，放置以接種的培養(yǎng)基等。為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時(shí)間及其強(qiáng)度，培養(yǎng)室的房間不要窗戶，但應(yīng)當(dāng)留一個(gè)通氣窗，并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制，光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè)，一般要分兩間，一為光照培養(yǎng)室，一為暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。培養(yǎng)室應(yīng)配有培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動控時(shí)器等。

（5）洗滌間：主要用于清洗實(shí)驗(yàn)之后的用具。除配置水槽外，還需配置洗液皿、落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等，有需求的還可以配置洗瓶機(jī)。

以上基礎(chǔ)設(shè)施若實(shí)驗(yàn)室條件不夠，可將消毒間，培養(yǎng)基配制間，洗滌間合并一起，但注意實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生以及儀器擺放，房間要保持清潔，明亮。

二、輔助實(shí)驗(yàn)室

細(xì)胞學(xué)鑒定室：其功能是對培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究。要求清潔、明亮、干燥，使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。應(yīng)配置各種顯微鏡、照相系統(tǒng)等。

生化分析室：在以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室中，應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，以便于對培養(yǎng)物的有效成分隨時(shí)進(jìn)行取樣檢查。離心機(jī)、酶聯(lián)免疫檢測儀、天平、PCR儀等。

溫室：用于試管苗的鍛煉和移植，為試管苗提供滿足生長的適宜環(huán)境條件。常用設(shè)備有：溫室、彌霧裝置、蔭棚、移栽床、缽、盆、基質(zhì)等（用于植物細(xì)胞培養(yǎng)室）。

實(shí)驗(yàn)器材匯總： CO2培養(yǎng)箱：37度+/-0.5度；能調(diào)節(jié)溫度和CO2濃度

冰箱：4度或-20度家用冰箱，保存一般制劑；-70度保存蛋白制劑 水質(zhì)純化裝置：凈化水質(zhì)用于清洗或配制培養(yǎng)液

培養(yǎng)器皿分玻璃和塑料兩種，玻璃器皿適用于大部分細(xì)胞生長，可重復(fù)使用，塑料器皿方便，即開即做，無需清洗。

多孔培養(yǎng)板：為塑料制品。可供細(xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑，可同時(shí)測試大量樣本，易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

Oa貯液瓶：主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

Ob吸管：主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉(zhuǎn)移液體，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管，除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外，彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。

手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），用于解剖動物、分離及切剪組織，制備原代培養(yǎng)的材料；眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），用于將組織材料剪成小塊；血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直），用于持取無菌物品（如小蓋玻片）夾持組織等；口腔科探針或代用品，用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。社會價(jià)值： 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的社會價(jià)值在于，為實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)，促進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)的好處如下：

1.直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動。用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)和腫瘤學(xué) 等多種學(xué)科研究.2.直接觀察細(xì)胞的變化可便于攝影。3.研究細(xì)胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。4.便于使用各種技術(shù)：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標(biāo)記等方法觀察和研究細(xì)胞狀況。5.是分子生物學(xué)和基因工程學(xué)的研究對象，也是其主要的組成部分。6.易于施用物理、化學(xué)生物的實(shí)驗(yàn)研究。7.易于提供大量生物性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象,耗資少比較經(jīng)濟(jì)。8.成為生物制品單克隆抗體生產(chǎn)和基因工程等的材料來源。

第二篇：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)

細(xì)胞自主實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)

自主實(shí)驗(yàn)是在老師的指導(dǎo)和幫助下學(xué)生自己設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)且自己準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的一切準(zhǔn)備工作來完成的實(shí)驗(yàn)。平時(shí)做實(shí)驗(yàn)老師占重要地位但自主實(shí)驗(yàn)中學(xué)生占重要地位。自主實(shí)驗(yàn)中學(xué)生自己思考設(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)所需試劑，實(shí)驗(yàn)方法和步驟然后按該方案來做實(shí)驗(yàn)。

老師讓學(xué)生做自主實(shí)驗(yàn)的原因是老師想培養(yǎng)學(xué)生的動手能力，合作能力，想讓學(xué)生獨(dú)立思考，想讓學(xué)生親自動手做實(shí)驗(yàn)，最重要的一點(diǎn)是把理論知識結(jié)合實(shí)踐。

細(xì)胞培養(yǎng)是在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機(jī)體中取出的細(xì)胞，并使之生存和生長的技術(shù)為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

本實(shí)驗(yàn)采用了微量全血培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)人體外周血小淋巴細(xì)胞,使原處于 G0期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞, 進(jìn)而進(jìn)行有絲分裂，增殖成功率高、技術(shù)方法完善。把體外增殖的小淋巴細(xì)胞裂解,對細(xì)胞核染色體進(jìn)行染色和 固定,制得人染色體標(biāo)本,用于進(jìn)行染色體組型分析，取得了令人滿意的效果。

人和動物細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的一項(xiàng)基本技術(shù)。目前,動物細(xì)胞培養(yǎng)主要用于通過大量的細(xì)胞培養(yǎng)獲得有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的生物產(chǎn)品和細(xì)胞本身。1966 年以前基本上用 Mo o r he a d 等，1960年建立的人外周血白細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),該方法比較完善,成功率高。但缺點(diǎn)是取血量多,手續(xù)較麻煩。近30 多年來國內(nèi)外絕大多數(shù)均采用微量全血培養(yǎng)技術(shù),不但取血量少,而且可略去一些繁瑣操作過程,如離心、分離血漿等,做起來既方便,也節(jié)省人力和物力, 比較適于推廣和使用。

本實(shí)驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)操作要求比較高。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%酒精擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺，以70%酒精擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。操作做成中也要保證不污染。

第三篇：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)思考題

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)思考題

1、為什么暗視場照明的視場暗黑，而樣品像明亮？相差顯微鏡鏡檢時(shí)，為什么要用綠色濾色鏡觀察活體樣本？

暗視場顯微鏡照明光線不直接進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的；

為獲得好的效果，要用波長范圍窄的單色光，選用綠色濾光鏡，不但可滿足這個(gè)要求，而且綠色可吸收紅外光，減少發(fā)熱。

2、為什么活細(xì)胞不易染色，從細(xì)胞生物學(xué)角度解釋原因。

染色劑一般有劇毒，而細(xì)胞膜具有選擇透過性，會將一部分對細(xì)胞有害的物質(zhì)阻擋在細(xì)胞外，所以活細(xì)胞難以染色。而當(dāng)細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜失去選擇透過性，染色劑得以進(jìn)入，細(xì)胞就被染色。

3、簡述中性紅染液、詹納斯綠B染液用于細(xì)胞超活染色的原理。

Janus green B活體細(xì)胞染色的機(jī)理：Janus green B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)），呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基（即無色狀態(tài)）。

Neutral red 堿性染料活體染色的機(jī)理：neutral red為弱堿性染料，對液泡系（即高爾基體）的染色有專一性，只將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)完全不著色，這可能與液泡中某些蛋白質(zhì)有關(guān)。

4、什么是細(xì)胞骨架？它有何主要功能？

生物學(xué)中細(xì)胞骨架指真核細(xì)胞中與保持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞運(yùn)動有關(guān)的纖維網(wǎng)絡(luò)。包括微管、微絲和中間絲。

細(xì)胞骨架不僅在維持細(xì)胞形態(tài)，承受外力、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的有序性方面起重要作用，而且還參與許多重要的生命活動，如：在細(xì)胞分裂中細(xì)胞骨架牽引染色體分離，在細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸中，各類小泡和細(xì)胞器可沿著細(xì)胞骨架定向轉(zhuǎn)運(yùn)；在肌肉細(xì)胞中，細(xì)胞骨架和它的結(jié)合蛋白組成動力系統(tǒng)；在白細(xì)胞(白血球)的遷移、精子的游動、神經(jīng)細(xì)胞軸突和樹突的伸展等方面都與細(xì)胞骨架有關(guān)。另外，在植物細(xì)胞中細(xì)胞骨架指導(dǎo)細(xì)胞壁的合成。

5、列舉你所知道的動、植物細(xì)胞中由微絲組成的結(jié)構(gòu)。

肌原纖維、微絨毛、應(yīng)力纖維

6、顯示細(xì)胞骨架的原理是什么？說明實(shí)驗(yàn)中使用的TritonX-100、戊二醛、考馬斯亮藍(lán)R-250的作用。

原理：用考馬斯亮藍(lán)對細(xì)胞骨架進(jìn)行染色，染色觀察前，應(yīng)首先用去垢劑抽提掉胞質(zhì)中的除骨架以外的其他蛋白。

TritonX-100：非離子型去垢劑，可使細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提。

戊二醛：固定細(xì)胞

考馬斯亮藍(lán)R-250：蛋白質(zhì)染料，對細(xì)胞骨架染色。

7、顯示脂類時(shí)，制片及染色有何特殊之處？

制片時(shí)需要用10%甲醛鈣固定液進(jìn)行固定，要求用蘇丹Ⅲ飽和溶液染色，但是對不同部位的脂類進(jìn)行處理時(shí)有區(qū)別。

8、簡述Fenulgen反應(yīng)的原理和實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。

原理：DNA經(jīng)弱酸水解后，嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵打開，并且使脫氧核糖與磷酸間的磷脂鍵打開，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基，醛基在原位與Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色復(fù)合物，使細(xì)胞內(nèi)含有DNA的部位呈紫紅色的陰性反應(yīng)。關(guān)鍵步驟：①Schiff試劑遮光染色30min，一定要遮光；

②壓片時(shí)，一定要壓均勻，否則細(xì)胞會重疊，影響觀察； ③洗玻片上的試劑，要注意樣品不被洗掉。

9、試述差速離心法分離細(xì)胞器的原理。

在一定的離心場中（選用離心機(jī)的一定轉(zhuǎn)速），球心顆粒的沉降速度取決于它的密度、半徑和懸浮介質(zhì)的黏度。在一均勻的懸浮介質(zhì)中離心一定時(shí)間，組織勻漿中的各種細(xì)胞器及其它內(nèi)含物由于沉降速度不同將停留在高低不同的位置。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能夠使這些顆粒按其大小、輕重分批沉降在離心管底部，從而分批收集。

10、試述密度梯度離心法分離細(xì)胞器的原理。

用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。

11、為什么要事先向小鼠腹腔注射淀粉肉湯懸浮液？吞噬細(xì)胞的變形運(yùn)動及吞噬作用的生物學(xué)機(jī)理是什么？

①誘導(dǎo)小鼠腹腔大量產(chǎn)生巨噬細(xì)胞，使其聚集； ②細(xì)胞膜具有一定的流動性。

第四篇：《細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)大綱

《細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)大綱

課程名稱：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

課程編號：12030037

課程類別：專業(yè)基礎(chǔ)課/必修課

學(xué)時(shí)/學(xué)分： 24/0.75

開設(shè)學(xué)期：第四學(xué)期

說明

一、課程性質(zhì)

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是生物科學(xué)和生物工程專業(yè)一門重要的必修基礎(chǔ)課程，在生命學(xué)科的本科教學(xué)中有著十分重要的地位。通過實(shí)驗(yàn)，不僅使學(xué)生加深對細(xì)胞生物學(xué)理論知識的理解和認(rèn)證，同時(shí)通過對細(xì)胞生命現(xiàn)象的觀察和親手操作，使學(xué)生獲得有關(guān)細(xì)胞生命活動的感性知識，有效地提高理論課的教學(xué)效果，并使學(xué)生掌握細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本原理、方法和技能，培養(yǎng)和提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和應(yīng)用各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)的能力，培養(yǎng)和訓(xùn)練學(xué)生的創(chuàng)新意識和創(chuàng)新能力，培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和實(shí)事求是的作風(fēng)，提高發(fā)現(xiàn)問題、分析問題和解決問題的能力，為今后獨(dú)立從事教學(xué)或科學(xué)研究打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

二、教學(xué)目標(biāo)

通過細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生們更加牢固地掌握細(xì)胞生物學(xué)基本知識和基本理論，對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能有全面、真實(shí)的認(rèn)識，使學(xué)生們掌握細(xì)胞生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法和技能。

三、學(xué)時(shí)分配表 序號

實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn) 時(shí)數(shù) 實(shí)驗(yàn)

類型

內(nèi)容與要求 小計(jì)實(shí)驗(yàn)1細(xì)胞膜的滲透性及細(xì)胞凝集反應(yīng)4設(shè)計(jì)性了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度，掌握細(xì)胞凝集反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法及細(xì)胞凝集的原理實(shí)驗(yàn)2葉綠體的分離與熒光觀察3驗(yàn)證性掌握熒光顯微鏡的原理和使用方法；觀察葉綠體的自發(fā)熒光與次生熒光；

通過對植物葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法實(shí)驗(yàn)3植物細(xì)胞骨架的觀察4驗(yàn)證性掌握光學(xué)顯微鏡觀察植物細(xì)胞骨架的原理和方法實(shí)驗(yàn)4雞血細(xì)胞的體外融合6綜合性了解PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的基本原理，通過PEG誘導(dǎo)雞紅細(xì)胞之間的融合實(shí)驗(yàn)，初步掌握細(xì)胞融合技術(shù)實(shí)驗(yàn)5巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察7綜合性通過對小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞血紅細(xì)胞的活動觀察，加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程和意義；掌握小白鼠腹腔注射給藥方法和頸椎脫臼處死法合計(jì)24

四、實(shí)驗(yàn)方法與要求建議

本課程采用傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法，2人一組操作，結(jié)合多媒體、小組討論與集體討論、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、教學(xué)錄像、細(xì)胞生物學(xué)小知識和小技巧介紹等多種教學(xué)手段，幫助學(xué)生通過本課程的學(xué)習(xí)全面地掌握細(xì)胞生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法與技能以及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思路，以提高學(xué)生從事教學(xué)和科學(xué)研究的綜合素質(zhì)。

要求學(xué)生認(rèn)真預(yù)習(xí)，熟悉實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容，了解所用的儀器用具；實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，仔細(xì)觀察，及時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象及結(jié)果，認(rèn)真做好每一天的實(shí)驗(yàn)報(bào)告；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后仔細(xì)分析和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；使用貴重精密儀器時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，對任何自己不熟悉的實(shí)驗(yàn)儀器都不要隨意操作；在操作過程中發(fā)現(xiàn)任何意外現(xiàn)象都要及時(shí)向任課教師報(bào)告；在實(shí)驗(yàn)過程中制造的任何垃圾都要丟到垃圾筐里（或先放在自己的桌面廢物缸內(nèi)），嚴(yán)禁隨地投棄。

五、考核方式及要求

1.考核方式：考試（√）；考查（）

2.成績評定：

計(jì)分制：百分制（√）；五級分制（）；兩級分制（）

成績構(gòu)成：實(shí)驗(yàn)成績（100分）=實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)（10％）+實(shí)驗(yàn)態(tài)度、衛(wèi)生、安全（10％）+實(shí)驗(yàn)操作（25％）+實(shí)驗(yàn)報(bào)告（25％）+實(shí)驗(yàn)考試（30％）。

本文

實(shí)驗(yàn)一 ?細(xì)胞膜的滲透性及細(xì)胞凝集反應(yīng)

一、實(shí)驗(yàn)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)類別：專業(yè)基礎(chǔ)課/必修

實(shí)驗(yàn)類型：設(shè)計(jì)性

計(jì)劃學(xué)時(shí)：4學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)分組：2人/組

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度，分析影響細(xì)胞膜滲透性的因素；

2.理解凝集素使細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)的原理，觀察細(xì)胞的凝集現(xiàn)象。

三、實(shí)驗(yàn)的基本內(nèi)容和要求

1.制備羊血細(xì)胞懸液，加1份羊血和10份0.17mol/LNaCl溶液。

2.制備土豆凝集素的。

3.取10支試管分別加入1mL稀釋羊血和10mL不同濃度的試劑，觀察是否溶血，如不溶血，觀察溶液的顏色有無深淺的變化。

4.用滴管吸取土豆凝集素和2%紅細(xì)胞懸液各一滴，置載玻片上，充分混勻，靜置20min后于低倍鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。以PBS液加2%紅細(xì)胞懸液作對照實(shí)驗(yàn)。

四、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及材料

10ml移液管、1ml移液管、試管架、試管、燒杯、顯微鏡、粗天平、載玻片、蓋玻片、土豆塊莖、0.17mol/L氯化鈉、0.17mol/L硝酸鈉、0.12mol/L硫酸鈉、0.17mol/L氯化銨、0.17mol/L醋酸銨、0.12mol/L草酸銨、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮、新鮮羊血（加抗凝劑）、PBS緩沖液

五、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1.血細(xì)胞懸液的制備

2.低滲溶液

3.血紅細(xì)胞的滲透性實(shí)驗(yàn)

4.土豆凝集素的制備

5.凝集反應(yīng)

六、實(shí)驗(yàn)教學(xué)建議

先讓學(xué)生通過查資料和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書提前預(yù)習(xí)該實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)課上讓1-2位學(xué)生來講實(shí)驗(yàn)原理，操作步驟，其他同學(xué)做補(bǔ)充，老師做點(diǎn)評和總結(jié)，指出實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)等。學(xué)生自己以小組為單位配置所有藥品并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)二 葉綠體的分離與熒光觀察

一、實(shí)驗(yàn)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)類別：專業(yè)基礎(chǔ)課/必修

實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性

計(jì)劃學(xué)時(shí)：3學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)分組：2人/組

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.通過植物細(xì)胞葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法；

2.觀察葉綠體的自發(fā)熒光和次生熒光，并熟悉熒光顯微鏡的使用方法。

三、實(shí)驗(yàn)的基本內(nèi)容和要求

葉綠體的分離與觀察、菠菜葉片徒手切片觀察。

四、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及材料

研缽、粗天平、紗布、量筒、離心管、滴管、普通離心機(jī)、熒光顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡、0.35mol/L的NaCl、0.01%丫啶橙、新鮮菠菜

五、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1.葉綠體的分離與觀察

2.菠菜手切片觀察

六、實(shí)驗(yàn)教學(xué)建議

先讓學(xué)生通過查資料和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書提前預(yù)習(xí)該實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)課上讓學(xué)生來講實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟，其他同學(xué)做補(bǔ)充，老師做點(diǎn)評和總結(jié)，指出實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)之后學(xué)生再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)等。

實(shí)驗(yàn)三 植物細(xì)胞骨架的觀察

一、實(shí)驗(yàn)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)類別：專業(yè)基礎(chǔ)課/必修

實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性

計(jì)劃學(xué)時(shí)：4學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)分組：1人/組

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)特征及制備技術(shù)。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

制備植物細(xì)胞骨架、用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞骨架的原理和方法。

四、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備與試劑

1.材料：洋蔥鱗莖

2.試劑

(1).磷酸鹽緩沖液

(2)M緩沖液

(3)1% TritonX-100：用M緩沖液配置。

(4).2%考馬斯亮藍(lán)R-250： 46.5ml甲醇、7 ml 冰醋酸、46.5ml蒸餾水。

(5).3%戊二醛：用6mmol/L磷酸鹽緩沖液配置。

(6).0.2M磷酸鹽緩沖液。

3.器材和儀器：小燒杯 鑷子 滴管 載玻片 蓋玻片 顯微鏡

五、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1.取材：撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞（約1cm2大小）置于裝有6mmol/L磷酸鹽緩沖液的燒杯中，使其下沉；

2.抽提：吸去磷酸鹽緩沖液，用1% TritonX-100處理20~30min.；

3.沖洗：吸去TritonX-100，用M緩沖液洗3次，每次10min；

4.固定：3%戊二醛固定30min；

5.沖洗：6mmol/L磷酸鹽緩沖液洗3次，每次10min；

6.染色：0.2%考馬斯亮藍(lán)R-250染色20min；

7.制片：用蒸餾水洗1-2次，將標(biāo)本置于載玻片上，加蓋片；

8.觀察：光鏡下可見表皮細(xì)胞的輪廓，細(xì)胞內(nèi)存在著染成藍(lán)色、粗細(xì)不等的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，即為構(gòu)成細(xì)胞骨架的微絲束。

六、實(shí)驗(yàn)教學(xué)建議

先讓學(xué)生通過查資料和指導(dǎo)書提前預(yù)習(xí)該實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)課上讓學(xué)生來講實(shí)驗(yàn)原理，其他同學(xué)做補(bǔ)充，老師做點(diǎn)評和總結(jié)，指出實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)，學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)四 雞血細(xì)胞的體外融合一、實(shí)驗(yàn)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)類別：專業(yè)基礎(chǔ)課/必修

實(shí)驗(yàn)類型：綜合性

計(jì)劃學(xué)時(shí)：6學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)分組：2人/組

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握細(xì)胞融合原理，應(yīng)用PEG融合細(xì)胞的方法以及細(xì)胞融合率的計(jì)算。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

動物細(xì)胞的制備、融合和觀察。

四、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備與試劑

1.材料：家雞

2.試劑：

(1).50%PEG（MW4000）

(2).Hanks液

(3).0.85%生理鹽水

(4).肝素

3.器材和儀器

注射器、試管、離心管、移液管、酒精燈、載玻片、蓋玻片、水浴鍋、普通光學(xué)顯微鏡、離心機(jī)

五、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1.雞血細(xì)胞的獲得

2.促融劑的配制

3.雞紅細(xì)胞的收集

4.細(xì)胞融合反應(yīng)

5.終止反應(yīng)

6.鏡檢

六、實(shí)驗(yàn)教學(xué)建議

先讓學(xué)生通過查資料和指導(dǎo)書提前預(yù)習(xí)該實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)課上讓學(xué)生來講實(shí)驗(yàn)原理，其他同學(xué)做補(bǔ)充，老師做點(diǎn)評和總結(jié)，指出實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)，學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)五 巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察

一、實(shí)驗(yàn)性質(zhì)

實(shí)驗(yàn)類別：專業(yè)基礎(chǔ)課/必修

實(shí)驗(yàn)類型：綜合性

計(jì)劃學(xué)時(shí)：7學(xué)時(shí)

實(shí)驗(yàn)分組：2人/組

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.通過對小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活動的觀察，加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程及其意義；

2.掌握小鼠腹腔注射給藥和脊椎脫臼處死方法。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與要求

對小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活動的觀察、理解細(xì)胞吞噬作用的過程；掌握小鼠腹腔注射給藥和脊椎脫臼處死方法。

四、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備與試劑

（一）器材

顯微鏡、解剖盤、剪刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、注射器、吸管、吸水紙

（二）試劑

1.0.85%生理鹽水

2.Alsever溶液

3.4％臺盼藍(lán)染液

4.6％淀粉肉湯(含臺盼藍(lán)染液)

（三）材料

1.小白鼠

2.1% 雞紅細(xì)胞懸液

自健康雞翼靜脈采血或從集市殺雞處接血lml(防止污染)，放入盛有4ml AlseVer溶液瓶中，混勻置4℃冰箱保存?zhèn)溆?一周內(nèi)使用)。使用前加入0.85％生理鹽水離心(1 500r／min 10min)洗滌二次，再用生理鹽水配成l％濃度懸液。

五、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1.在實(shí)驗(yàn)前—天，給小白鼠腹腔注射6％淀粉肉湯(含臺盼藍(lán))1m1。注射時(shí)，先用右手抓住鼠尾提起，放在實(shí)驗(yàn)臺上，用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳和頭頸皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，用左手的無名指和小指按住尾巴與后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后l／2處的一側(cè)注射。進(jìn)針勿過深，否則易損害肝及血管等，造成出血致死；

2.?實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取一只注射過淀粉肉湯的小白鼠，腹腔注射l％雞紅細(xì)胞懸液lml，輕按小白鼠腹部，使懸液分散；

3.?20min后，用脊脫臼法處死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指與食指同時(shí)向下按住鼠頭，使脊髓與腦髓間斷開致鼠死亡)；?

4.將小鼠置于解剖盤中，剪開腹部，把內(nèi)臟推向一側(cè)，用不裝針頭的注射器或吸管吸取腹腔液；

5.?每人取一張干凈載玻片，滴一滴腹腔液，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。

六、實(shí)驗(yàn)教學(xué)建議

先讓學(xué)生通過查資料和指導(dǎo)書提前預(yù)習(xí)該實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)課上讓學(xué)生來講實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路，其他同學(xué)做補(bǔ)充，老師做點(diǎn)評和總結(jié)，指出實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)、學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

參考教材

[1]細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第二版).楊漢民主編，高等教育出版社 [2]細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo).李素文主編，高等教育出版社

[3]細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.安利國主編，科學(xué)出版社

第五篇：提交 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案匯總

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

Cell Biology Experiment

目 錄

1.顯微鏡的結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)觀察、大小測量和死活細(xì)胞鑒定 2.液泡系和線粒體的活體染色 3.葉綠體的分離與觀察

4.DNA的細(xì)胞化學(xué)——Feulgen反應(yīng) 5.多糖的顯示——PAS反應(yīng)

6.細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和總體蛋白的原位顯示 7.細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微觀察和永久制片技術(shù) 8.植物原生質(zhì)體的制備與融合 9.蠶豆根尖微核試驗(yàn) 10.膜的通透性

11.血細(xì)胞的分化和不同類型血細(xì)胞的觀察

實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求

1．注意頁面四邊留白，不要擠到頁邊！2．抬頭填寫完整。

3．注意事項(xiàng)自己總結(jié)，不要抄襲！4．組長檢查后上交存檔。

生物繪圖注意事項(xiàng)

1．2H 以上繪圖鉛筆削尖、繪圖橡皮、直尺

2．邊看顯微鏡邊按視野中實(shí)際情況繪圖，以精確為主，不能藝術(shù)加工。

3．應(yīng)找到最典型、最能說明繪圖目的的物像來繪圖。先輕勾出輪廓，檢查無誤后，再以準(zhǔn)確清晰的線作最后描繪。

①實(shí)線表示輪廓，虛線表示被遮蔽但需表現(xiàn)的輪廓，線粗細(xì)應(yīng)均勻有規(guī)律

②圓點(diǎn)的疏密表示明暗、凹凸（越暗的地方點(diǎn)越多）點(diǎn)點(diǎn)時(shí)筆尖直立，點(diǎn)大小、疏密要均勻、整齊、渾圓，不能像“，”。

4．用尺向右側(cè)引出水平指示線，線右端平齊字注在右側(cè)。圖下方寫上所畫圖的名稱及放大倍數(shù)。圖的右側(cè)和下方需寫文字說明，所以圖應(yīng)繪在繪圖紙上偏左上方的位置。

5．一幅圖只要詳細(xì)畫出部分結(jié)構(gòu)，其余勾畫出輪廓即可。

規(guī)范

不規(guī)范

實(shí)驗(yàn)一 普通顯微鏡的使用及細(xì)胞形態(tài)觀察、大小測量和死活細(xì)胞鑒定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．熟悉普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造和性能，掌握使用方法。2．了解細(xì)胞的一般形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)。

3．掌握顯微測微尺的使用，對細(xì)胞大小有一直觀認(rèn)識。4．了解鑒定死活細(xì)胞的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

1．顯微測微尺的使用

鏡臺測微尺：表示絕對長度，長1 mm，分成100小格，每小格為0.01mm。不被用來直接測量，而是用它來校正目鏡測微尺，故其質(zhì)量對所測微體影響極大。

目鏡測微尺：是一塊比目鏡筒內(nèi)徑稍小的有標(biāo)尺的圓形玻璃片，標(biāo)尺長10毫米、分為100格。需要鏡臺測微尺校正為絕對長度再測定細(xì)胞大小。

2．死活細(xì)胞鑒定:臺盼藍(lán)是一種低毒的活體染色劑，只能透過質(zhì)膜受損的細(xì)胞或死細(xì)胞。

三、實(shí)驗(yàn)用品 1．試驗(yàn)材料：

洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞

口腔上皮細(xì)胞、（人的口腔上皮細(xì)胞是扁平、多邊形的，形狀不很規(guī)）

2．試劑

0.2%臺盼藍(lán)溶液 3．儀器

測微尺（2套）、普通光學(xué)顯微鏡、刀片、鑷子、玻璃滴管、吸水紙、牙簽。

四、試驗(yàn)方法

一、細(xì)胞死活的鑒定

0.2%臺盼藍(lán)染色5-10分鐘后進(jìn)行觀察。

二、細(xì)胞大小測量

1）測量時(shí)，鏡臺微臺尺換成樣本，2)目鏡測微尺來測量細(xì)胞的大小

3)改變顯微鏡的放大倍率，則需對目鏡測微尺重新進(jìn)行標(biāo)定。

三、細(xì)胞形態(tài)的觀察

五、注意事項(xiàng)

取口腔黏膜上皮細(xì)胞注意的問題

1．口腔上皮細(xì)胞主要分布在口腔兩側(cè)頰部。用消毒牙簽的鈍端，在漱凈的口腔任意一側(cè)的頰部，輕輕刮幾下。

2．取材前，口腔一定要用清水漱凈，去除口腔內(nèi)的食物殘?jiān)?/p>

3．用方簽在口腔壁上輕輕刮動，不要刮在牙縫里，因?yàn)檠例X上刮下來的是食物碎屑，不是口腔上皮細(xì)胞。

六、作業(yè)

1．繪制口腔黏膜上皮細(xì)胞及洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞圖（2-3個(gè)細(xì)胞）

2．列表寫出洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞長軸、短軸長度，并計(jì)算平均值。（取3個(gè)細(xì)胞）3．取口腔黏膜上皮細(xì)胞注意的問題 4．生物繪圖注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)二 線粒體和液泡系的超活染色與觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解細(xì)胞和細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。

2、觀察動、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡的形態(tài)、數(shù)量和分布,了解植物細(xì)胞液泡系的發(fā)育過程。

二、實(shí)驗(yàn)原理

活體染色是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡?；钊炯夹g(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。

根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識別的目的。

體外活染又稱超活染色，它是由活的動、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。

活體染色之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的電化學(xué)特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對細(xì)胞無毒性或毒性極小的染料，而且總要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)的特性，易于被細(xì)胞吸收，Janus green B和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色各有專一性。

線粒體是細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，線粒體內(nèi)膜上分布有細(xì)胞色素氧化酶，該酶能使詹姆斯綠B保持在氧化狀態(tài)，呈現(xiàn)藍(lán)綠色從而使線粒體顯色，而細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原成無色。液泡 5

是細(xì)胞內(nèi)濃縮產(chǎn)物的主要場所，有十分重要的功能。中性紅是液泡的特殊染色劑，將液泡染成紅色。在活細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不著色。如果細(xì)胞死亡，染料會彌散開來，使核著色。

三、實(shí)驗(yàn)用品

（一）器材

顯微鏡、恒溫水浴鍋、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙等。

（二）試劑

1、Ringer 溶液 生理鹽水、緩沖液

氯化鈉0.85g（變溫動物用0.65g）；氯化鉀 0.25g ；

氯化鈣 0.03g ；蒸餾水100ml 2、10%、1/3000中性紅溶液

稱取0.5中性紅溶于50ml Ringer溶液，稍加熱（30-40度）使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。

臨用前，取已配制的1%中性紅溶液1ml，加入29mlRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。3．1%、1/5000詹姆斯綠B溶液

稱取50mg詹姆斯綠B溶于5ml Ringer溶液中，稍加 微熱（30-40度）使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料

人口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞、小麥幼根根尖。

四、實(shí)驗(yàn)方法

(一)線粒體的超活染色與觀察

1、人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察

載玻片→ 37℃水浴鍋的金屬板→滴兩滴詹納斯綠B染液

牙簽→從口腔粘膜刮取上皮細(xì)胞→放入載玻片染液→染色10-15分鐘（注意不可使染液干燥, 必要時(shí)可再加滴染液）→蓋上蓋玻片用吸水紙吸去四周溢出的染液→觀察 2.洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒體的超活染色

載玻片→撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮滴→一滴詹納斯綠B染液→染色10-15分鐘 吸去染液→加一滴Ringer液，注意使洋蔥內(nèi)表皮展平→蓋上蓋玻片→觀察

（二）液泡系的超活染色與觀察

刀片→小麥幼苗根尖→切一縱切面→中性紅染色5-10分鐘

吸去染液→加一滴Ringer液→蓋上蓋玻片→鑷子輕輕下壓蓋玻片→觀察 五．實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在小麥根尖細(xì)胞制片中，可見細(xì)胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡。然后，由生長點(diǎn)向延長區(qū)觀察，在一些已分化長大的細(xì)胞內(nèi)，液泡的染色較淺，體積增大，數(shù)目變少。在成熟區(qū)細(xì)胞中，一般只有一個(gè)淡紅色的巨大液泡，占據(jù)細(xì)胞的絕大部分空間，將細(xì)胞核擠到細(xì)胞一側(cè)貼近細(xì)胞壁處。六．注意事項(xiàng)

1、詹姆斯綠B溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充 分氧化能力。

2、實(shí)驗(yàn)中速度要快，以免組織細(xì)胞死亡。

七、作業(yè) ．畫出你所觀察到的線粒體和液泡的圖像.2 ．總結(jié)實(shí)驗(yàn)成功或失敗的原因.實(shí)驗(yàn)三 葉綠體的分離與觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過植物細(xì)胞葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞器分離的過程包括兩個(gè)主要階段：破碎細(xì)胞和細(xì)胞組分的分離。葉綠體的分離采用在等滲溶液中進(jìn)行組織勻漿、分離。葉綠體的分離采用差速離心或密度梯度離心法進(jìn)行。差速離心主要是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細(xì)胞器。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。差速離心的分辨率不高，沉降系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開，常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1.材料： 菠菜葉片

2.試劑：蒸餾水，0.35mol/L氯化鈉溶液

3.儀器：普通離心機(jī)、天平、顯微鏡、鑷子、載玻片、蓋玻片、離心管、吸水紙等

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.菠菜葉片(去葉脈)3g → 0.35mol/L氯化鈉15ml→研磨(冰浴)→勻漿過濾(6層紗布)→濾液在1000rpm離心2min→棄沉淀，上清液3000rpm離心5min →去上清液→沉淀為葉綠體(混有部分細(xì)胞核)，用0.35mol/L氯化鈉溶液懸浮 →滴片觀察

2.取葉綠體懸液1滴置于載玻片上，加蓋玻片后用用普通光學(xué)顯微鏡觀察葉綠體的形態(tài)結(jié)構(gòu) 3.菠菜葉手切片觀察

新鮮菠菜葉，刀片切出一斜面置于載玻片上，滴加1-2滴NaCl溶液，蓋上蓋片，顯微鏡下觀察。用鑷子攝取或刀片刮取新鮮菠菜葉片葉肉，滴加1-2滴NaCl溶液，作臨時(shí)裝片。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖型，高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色顆粒，即基粒。

2.菠菜葉手切片在普通光鏡下可以看到三種細(xì)胞：表皮細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞、葉肉細(xì)胞。葉肉細(xì)胞呈長方形或類方形，內(nèi)含大量帶有綠色的葉綠體顆粒。另外，視野下還可見到大量散在的點(diǎn)狀或類圓狀葉綠體顆粒。

3.紅辣椒細(xì)胞中有許多紅色小顆粒，這就是雜色體。雜色體分散在細(xì)胞質(zhì)中。

六、注意事項(xiàng)

1.葉綠體的分離應(yīng)在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉)中進(jìn)行,以免滲透壓的改變使葉綠體受到損傷。

2.分離過程最好在0-5℃的條件下進(jìn)行；如果在室溫下，要迅速分離和觀察。3.離心機(jī)使用：離心管要平衡

七、作業(yè)

1.根據(jù)顯微觀察結(jié)果，繪制菠菜葉的結(jié)構(gòu)模式圖。

實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微觀察和永久制片技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握植物細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架的光學(xué)觀察方法，了解細(xì)胞骨架在細(xì)胞內(nèi)的分布特點(diǎn)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長、運(yùn)動、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩?/p>

光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀察多用1% Triton X-100處理細(xì)胞，可將細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)被保存，再用考馬斯亮藍(lán)R250染色，使得胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。

Triton X-100：是非離子型表面活性劑（去污劑）。適當(dāng)濃度的Triton X-100處理細(xì)胞時(shí)，可將細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不受破壞而被保存。這樣，使細(xì)胞骨架圖像更清晰。

考馬斯亮藍(lán)R250是一種普通的蛋白質(zhì)染料，它可以使各種細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)著色，并非特異地顯示微絲，但是由于有些細(xì)胞骨架纖維在該實(shí)驗(yàn)條件下不夠穩(wěn)定，例如微管；還有些類型的纖維太細(xì)，在光學(xué)顯微鏡下無法分辨，因此我們看到的主要是微絲組成的應(yīng)力纖維（微絲束），直徑約40nm左右。

戊二醛能固定，較好的保存細(xì)胞骨架成分。

M－緩沖液： 穩(wěn)定F-肌動蛋白使得細(xì)胞骨架纖維保持聚合狀態(tài)并且較為舒張，便于觀察。磷酸緩沖液（PBS）：含有生理鹽水，可使細(xì)胞不被破壞，能保持原有狀態(tài)下的結(jié)構(gòu)。

三、實(shí)驗(yàn)用品 1.實(shí)驗(yàn)材料

新鮮洋蔥鱗莖的內(nèi)表皮。2.實(shí)驗(yàn)器材

普通光學(xué)顯微鏡、10mL小燒杯、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、載玻片、蓋玻片、、擦鏡紙、PH 計(jì)、水浴鍋。3.試劑：

M－緩沖液、磷酸緩沖液（PBS）、3%戊二醛、1%Triton-100、0.2%考馬斯亮藍(lán)R250

四、試驗(yàn)方法

21.用鑷子撕取洋蔥鱗葉內(nèi)側(cè)的表皮若干片（約0.5cm大小若干片），置于1.5ml離心管中，加入PBS（1.5mL左右），使其下沉（10min左右）。2.吸去緩沖液，用1%Trion X-100處理15-20min。3.吸去Trion X-100，用M緩沖液洗3次，每次5min。4.用3%戊二醛固定30min。

5.PBS（1.5ml左右）洗3次，每次3min，濾紙吸去殘液。6.0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色至少30min。

7.蒸餾水洗滌2次，然后將樣品置于載玻片上，加蓋玻片，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。8.選取觀察效果好的制作永久切片于脫水劑中每級5-10min，第一滴阿拉伯樹膠封片。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

觀察：鏡下可見洋蔥表皮細(xì)胞輪廓，微絲束呈深藍(lán)色。轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察，轉(zhuǎn)動微調(diào)，可見細(xì)胞骨架的立體結(jié)構(gòu)。

六、注意事項(xiàng)：

1.撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮不可帶莖肉，樣本要展開鋪平。

2.去垢時(shí)間不要超過30min。

3.染色時(shí)間需掌握好，必要時(shí)可分別設(shè)不同染色時(shí)間比較。

4.由微絲組成的應(yīng)力纖維（張力纖維）是一種動態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞充分貼壁鋪展時(shí)纖維挺直、豐富；反之，細(xì)胞收縮變圓，應(yīng)力纖維彎曲，甚至部分解聚消失而顯稀少。

七、作業(yè)

繪出植物細(xì)胞骨架微絲的分布圖。（2-3個(gè)細(xì)胞）補(bǔ)充：

① 6mmol/L PBS(pH6.8)A液：NaH2PO4·2H2O 936mg/1000ml B液：Na2HPO4·12H2O 2148mg/1000ml

工作液：A液53.7ml + B液46.3ml（用NaHCO3調(diào)pH值至6.8）② M緩沖液（pH值7.2）咪唑 50mmol/L KCl 50mmol/L MgCl2 0.5mmol/L EGTA 1 mmol/L EDTA 0.1 mmol/L 巰基乙醇1 mmol/L 甘油4 mmol/L 加蒸餾水至1000ml，用1mol/L HCL調(diào)pH值為7.2。

③ 1%TritonX-100: TritonX-100 1ml M緩沖液99ml ④ 0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染液： 考馬斯亮藍(lán)R250 0.2g 甲醇 46.5ml 冰醋酸 7ml 蒸餾水 46.5ml 5.3%戊二醛

25%戊二醛12ml PBS（2液）88ml ⑤脫水劑 50%乙醇 70%乙醇 95%乙醇 100%乙醇 二甲苯

實(shí)驗(yàn)五 DNA的顯示—— Feulgen反應(yīng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解Feulgen染色反應(yīng)原理；

2、掌握Feulgen染色的方法，觀察染色結(jié)果。

二、實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)DNA經(jīng)鹽酸水解后，打開了嘌呤堿基和脫氧核糖連接的鍵，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈現(xiàn)為紫紅色。

Feulgen反應(yīng)是特異性顯示DNA的最經(jīng)典方法，即可進(jìn)行DNA定位顯示，又可用顯微分光光度計(jì)進(jìn)行定量分析。Feulgen反應(yīng)對組織中DNA的檢測具有高度專一性。組織中除DNA外還有多糖、RNA和其他自由醛基可以被鹽酸酸解掉。

三、實(shí)驗(yàn)用品

四、實(shí)驗(yàn)方法

①取小麥根尖和洋蔥內(nèi)表皮（綠豆大?。┙腩A(yù)熱至60℃的1N HCl中水解，時(shí)間10 min。10

②蒸餾水洗后，轉(zhuǎn)入Schiff液中避光染30 min，待根尖變?yōu)樯罴t色； ③在新配亞硫酸水中洗3次，每次 1 min；

④自來水洗 5 min，在載玻片上切下深紅色根尖備用； ⑤制片鏡下觀察，根尖鑷子搗碎壓片。

五、注意事項(xiàng)

六、作業(yè)

繪圖描述所觀察到的試驗(yàn)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)六 多糖的顯示——PAS反應(yīng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過PAS反應(yīng)，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細(xì)胞中的分布。

二、實(shí)驗(yàn)原理

PAS反應(yīng)是顯示多糖的最經(jīng)典、也是最直接的細(xì)胞化學(xué)方法。用具有強(qiáng)氧化作用的過碘酸處理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化成兩個(gè)游離的醛基，醛基與Schiff試劑結(jié)合可形成紫紅色的化合物，顏色深淺與多糖含量成正比。單糖易被抽提掉，多糖包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纖維素。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1.材料：馬鈴薯塊莖

2.試劑：0.5%高碘酸、schiff試劑、亞硫酸水、70％酒精 3.器材：顯微鏡、刀片、鑷子、載玻片、蓋玻片、水浴鍋

四、實(shí)驗(yàn)方法

1、取馬鈴薯塊莖切成薄片，浸入過碘酸溶液10分鐘；

2、用70％的酒精沖洗1次；

3、將薄片放入Schiff試劑中20－25分鐘；

4、在新配亞硫酸水中洗3次，每次 1 min；

5、蒸餾水洗片刻；

6、將薄片放在載玻片上吸去水分，加上蓋玻片，鏡下觀察。

五、注意事項(xiàng)

按上述操作，細(xì)胞中水溶性糖類已喪失，被染色的是不溶性的碳水化合物。

六、作業(yè)

繪制實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并描述。

實(shí)驗(yàn)六 細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和總體蛋白的原位顯示

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握細(xì)胞內(nèi)酸、堿性蛋白的鑒別方法； 2.了解酸、堿性蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。

二、實(shí)驗(yàn)原理

蛋白質(zhì)是一種兩性電解質(zhì)，在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)帶負(fù)電，在酸性環(huán)境中，蛋白質(zhì)帶正電。所以，利用各種蛋白質(zhì)在不同ph下，因等電點(diǎn)不同而產(chǎn)生的與固綠染液（一種弱酸性染料它對堿性物質(zhì)的親和力強(qiáng)）結(jié)合能力的差異。對細(xì)胞中的蛋白質(zhì)染色，可使細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白（等電點(diǎn)偏向酸性）和堿性蛋白（等電點(diǎn)偏向堿性）分別顯示?？傮w蛋白pI4.7-6.75，組蛋白pI8.5。試驗(yàn)用酸性染料pH2.2，堿性染料pH8.0 核酸的存在會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用三氯醋酸處理可提出核酸。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、試驗(yàn)材料

洋蔥鱗莖內(nèi)表皮或根尖

2、試劑

10%福爾馬林、5%三氯醋酸、0.1%酸性固綠染料（酸染）、0.1%堿性固綠染料（堿染）

3、器材

顯微鏡、水浴鍋、載玻片、蓋玻片、吸水紙

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.材料固定 洋蔥鱗莖內(nèi)表皮若干片，10%福爾馬林固定液中固定15min，蒸餾水洗2次。2.抽提核酸 5％三氯醋酸中90℃，15min，蒸餾水洗數(shù)次（3min以上）以沖去痕跡的三氯醋酸。3.染色

①一張片滴加0.1％堿性固綠(pH8.0)中染色5～10min。

②另一張片滴加0.1％酸性固綠(pH2.2)中染色5～10min(視染色深淺而定)。

蒸餾水沖洗（3min），蓋上蓋片鏡檢。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

用PH2.2酸性固綠染液染色結(jié)果，細(xì)胞中蛋白質(zhì)均被染成綠色，此即總體蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布?？傮w蛋白-堿性蛋白=酸性蛋白。

用pH8.0堿性固綠染液染色結(jié)果，只有細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)被染綠色（或淺藍(lán)色），此即堿性蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布。

六、注意事項(xiàng)

使用三氯醋酸處理的目的？

用5%TCA提取DNA是該實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵。DNA必須被提取，以使染色質(zhì)的負(fù)電荷下降，用熱TCA提取核酸后，固綠在堿性pH下，堿性蛋白可以選擇性地被染色，如未被提取，不能染色，或整個(gè)切片染成藍(lán)綠色，水洗或進(jìn)入酒精即褪色。

七、作業(yè)

1、繪制酸、堿性蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布圖。

2、總結(jié)本次實(shí)驗(yàn)的得失。

實(shí)驗(yàn)八 植物原生質(zhì)體的制備與融合

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)植物原生質(zhì)體的分離制備技術(shù)，觀察原生質(zhì)體形態(tài)。2.學(xué)習(xí)細(xì)胞融合技術(shù)，觀察融合細(xì)胞的形態(tài)及變化。

二、實(shí)驗(yàn)原理

除去植物細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞，稱為原生質(zhì)體，是開展基礎(chǔ)研究的理想材料。植物細(xì)胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠質(zhì)組成，常用酶解法分離原生質(zhì)體，其原理是使用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細(xì)胞壁成分，除去細(xì)胞壁。

細(xì)胞融合又稱細(xì)胞雜交指離體條件下用人工的方法把不同的細(xì)胞通過無性方式融合成一個(gè)雜合細(xì)胞的技術(shù)。許多化學(xué)、物理學(xué)和生物學(xué)方法可誘導(dǎo)原主質(zhì)體融合，現(xiàn)在被廣泛采用并證明行之有效的融合方法是聚乙二醇(PEG)法、高Ca高pH法和電融合法。PEG作為一種高分子化合物，20～50％的濃度能對原生質(zhì)體產(chǎn)生瞬間沖擊效應(yīng)，原生質(zhì)體很快發(fā)生收縮與粘連，隨后用高Ca高pH法進(jìn)行清洗，使原生質(zhì)體融合得以完成。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1.器具：顯微鏡、離心機(jī)、離心管、剪刀、鑷子、吸管、小培養(yǎng)皿、載片、蓋片、300目濾網(wǎng)。

2.試劑：酶混合液、洗滌液、20%蔗糖液、PEG溶液、高鈣高pH溶液

(1)酶混合液(9CPW):

(2)洗滌液（9CPW）1％纖維素酶

pH 5.6 0.5-0.7％果膠酶

27．2 mg／L KH2PO4 101.0 mg／L KNO3 1480．0 mg／L CaCl2·2H2O 246．0 mg／L MgSO4 0．16 mg／L KI 0．025 mg／L CuSO4 9％ W／V甘露醇

500mg／L MES pH 5.6(3)PEG融合液（pH 5.6）40% PEG(MW 1000-6000)0.3 mol/L葡萄糖 3.5mmol/L CaCl2·2H2O 0.7mm0l/L KH2PO4（4）高鈣高pH溶液（pH 10.5）0.1mol/L CaCl2·2H2O 0.1mol/L甘露醇 0.05mol/L Tris 3.材料：菠菜、韭菜葉片

四、實(shí)驗(yàn)方法

1、分離原生質(zhì)體

① 撕葉下表皮

② 酶解 將撕去下表皮的葉片剪成0.5mm寬小塊，放在盛有5mL酶液的小培養(yǎng)皿或帶蓋三 角瓶中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25-28℃下酶解60-90分鐘?？社R檢有較 多原生質(zhì)體后停止。

2、收集純化

①用300目網(wǎng)過濾除去未完全消化的殘?jiān)?/p>

②酶解液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，配平，以800rpm離心5分鐘以上，使原生質(zhì)體沉降。移液管吸上清，剩下原生質(zhì)體及殘?jiān)诠艿住?/p>

③加入3ml CPW洗滌液，輕輕吹打均勻，相同條件下離心2-5分鐘，棄上清，以徹底去除酶液。

④加入少量CPW洗滌液，輕輕吹打均勻，用注射器向離心管底部緩緩注入20%蔗糖約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質(zhì)體懸浮液。

⑤以600rpm離心10分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體，注射器針頭輕輕插入離心管底部吸取碎片和蔗糖溶液，再吸去上清。

3、制備效果檢測（1）血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)（2）原生質(zhì)體活力測定

形態(tài)識別（完整、飽滿、顏色鮮艷）

中性紅染色（液泡變紅）

臺盼藍(lán)染色（不能顯色）

觀察10個(gè)視野計(jì)算：

存活率=（活性原生質(zhì)體/原生質(zhì)體總數(shù)）×100%

4、原生質(zhì)體融合

（1）取原生質(zhì)體液兩滴，間隔5mm滴于載玻片上，靜置8—10分鐘，使原生質(zhì)體沉降。

（2）在兩液滴之間滴加一滴40％的PEG溶液，使三液滴相連（可轉(zhuǎn)動載玻片使其混勻）室溫下（15-20 ℃）靜置5-10分鐘，觀察原生質(zhì)體聚集（粘連）現(xiàn)象。

（3）滴加高鈣高PH洗液，轉(zhuǎn)動載玻片使其混勻，觀察原生質(zhì)體融合過程。

五、作業(yè)

1.按鏡下觀察繪制2-3個(gè)原生質(zhì)體。2.計(jì)算原生質(zhì)體濃度和存活率。

3.描述原生質(zhì)體融合過程。

實(shí)驗(yàn)九 蠶豆根尖微核檢測技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解細(xì)胞微核形成的機(jī)理及其形態(tài)特點(diǎn)，2、學(xué)習(xí)植物根尖細(xì)胞的微核檢測技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微核試驗(yàn)(The micronucleus test，MNT)是以動植物為材料，采用細(xì)胞生物學(xué)手段，觀測其出現(xiàn)的微核率來表示材料受遺傳損傷程度的一種檢測遺傳毒物的方法。微核是指位于細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立于主核、直徑小于主核，完全與主核分開的圓形或橢圓形的微小核。是真核生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，它是由于細(xì)胞受到損傷后，由細(xì)胞分裂過程中喪失著絲粒的染色體斷片或落后染色體產(chǎn)生的。這些斷片或染色體在分裂過程中行動滯后，在分裂末期不能進(jìn)入主核，便形成了主核之外的核塊。

蠶豆根尖細(xì)胞微核技術(shù)已發(fā)展的相當(dāng)成熟，具有較高的靈敏性，作為檢測化學(xué)品遺傳毒性的方法，得到了廣泛應(yīng)用。而且在測定監(jiān)測淡水污染物和檢測化學(xué)誘變劑的研究已列入國家生物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（水環(huán)境部分），并推廣應(yīng)用于大氣、廢水、土壤等的致突變活性檢測。

三、實(shí)驗(yàn)用品 1.材料：蠶豆 2.器材

顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、紗布、鑷子、載玻片及蓋玻片等。3.藥品

鹽酸（5mol/L）、70%乙醇、卡諾固定液（用乙醇和冰醋酸以3:1（v/v)混合配制）、石炭酸品紅、硫酸銅、待測液。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、浸種催芽

將實(shí)驗(yàn)用蠶豆按需要量放入盛水燒杯中，在25℃下浸泡24～48小時(shí)，此間至少換水兩次，所換水應(yīng)25℃預(yù)溫。

種子吸脹后，用紗布松散包裹置瓷盤中，保持溫度，在25℃溫箱中催芽12～24小時(shí)。

待初生根長出2～3mm時(shí)，再取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿濾紙的瓷盤中，25℃繼續(xù)催芽，經(jīng)約36-48小時(shí)，大部分初生根長至1～2cm左右，此時(shí)可用來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2、根尖染毒：

選取初生根生長良好，根長一致的6～8粒種子，放入盛有待測液的培養(yǎng)皿中，陽性檢測采用200mg/L硫酸銅,對照用蒸餾水處理，處理時(shí)間6-24h，處理液浸沒根尖。

3、恢復(fù)培養(yǎng)：處理后的根尖用自來水浸洗3次，每次2～3min，洗凈后在蒸餾水中恢復(fù)培養(yǎng)24h。

4、固定：切取1cm左右的根尖，用卡諾氏固定液固定24h后棄去固定液，固定后的根如不及時(shí)制，可換入70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

5、酸解：用蒸餾水浸洗固定好的幼根2～3次，每次5分鐘，吸凈蒸餾水，加入5mol/L鹽酸將幼根浸沒，室溫下酸解10min，幼根軟化即可，棄去鹽酸，漂洗根尖2～3次，每次1～2分鐘，徹底洗凈鹽酸。

6、染色：截下1-2mm長的根尖，滴加適量的石炭酸品紅染液，染色10min，加蓋玻片，壓片觀 15

察。

五、注意事項(xiàng)

1、培養(yǎng)蠶豆時(shí)需勤換水

2、處理蠶豆時(shí)要將根部浸沒于處理液中

3、固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

污染指數(shù)PI值評價(jià)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)表

污染指數(shù)PI值 水質(zhì)污染等級

基本無污染 0 ～ 1.5 輕污染 1.5 ～ 2.0 中污染 2.0 ～ 3.5 重污染 3.5以上

七、作業(yè)

繪圖、計(jì)算微核千分率和污染指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)十 細(xì)胞膜的滲透性

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解溶血現(xiàn)象及其發(fā)生機(jī)制。

2.了解細(xì)胞膜的滲透性及各種物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞膜是細(xì)胞與環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的選擇通透性屏障，是一種半透膜，可選擇性控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞。小的、親脂性的、非極性分子（如O2、CO2、N2、苯）容易溶解于脂雙層，可迅速透過脂雙層。小的、不帶電荷的極性分子（如水、脲、甘油等）如果足夠小時(shí)，也能很快透過脂雙層；大的、不帶電荷的極性分子（如葡萄糖，蔗糖等）以協(xié)助擴(kuò)散或主動運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞；對于帶電荷的分子或離子，由于這些分子的電荷及高的水化度，因此不管多小，都很難透過脂雙層的疏水區(qū)，它們要通過載體介導(dǎo)的主動運(yùn)輸方式跨膜運(yùn)輸。

將紅細(xì)胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細(xì)胞內(nèi)，可使細(xì)胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，由不透明的紅細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細(xì)胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細(xì)胞膜對各種溶質(zhì)的通透性不同，有的溶質(zhì)可進(jìn)入，有的溶質(zhì)不能進(jìn)入，進(jìn)入紅細(xì)胞的溶質(zhì)能提高紅細(xì)胞的滲透壓，使水進(jìn)入紅細(xì)胞，引起溶血。由于不同溶質(zhì)透入速度不同，溶血時(shí)間也不同，因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時(shí)間長短可作為測量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)選用紅細(xì)胞作為細(xì)胞膜透性的實(shí)驗(yàn)材料，將其放入不同的介質(zhì)溶液中，觀察紅細(xì)胞的變化。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1．材料: 雞血溶于含有抗凝劑的等滲液中（肝素鈉0.2mg/mL,一般范圍在 0.01-0.2mg/mL；等滲液為0.85% NaCl）2．器材：

試管，試管架，滴管，載玻片，蓋玻片，光學(xué)顯微鏡。3．試劑：

低滲溶液：0.0085% NaCl和0.032mol/L葡萄糖；

等滲溶液：0.85% NaCl、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇。10% TritonX-100、2%TritonX-100。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、制備血液稀釋液

①抗凝劑的制備：首先稱取1克肝素鈉粉末，然后加入0.17 M NaCl溶液ml（1∶10的比例），混合均勻，制成肝素抗凝劑。

②血液稀釋液的制備：雞翼下靜脈取新鮮血液，按比例（肝素抗凝劑:血液=1∶10）混合均勻，配制成經(jīng)肝素抗凝的血液。

③按比例（經(jīng)肝素抗凝的血液∶0.17 M NaCl 溶液=1∶10）混合均勻，形成一種不透明的紅色液體。

2、低滲溶液溶血現(xiàn)象觀察：

取試管一支加蒸餾水3ml和稀釋的雞血1滴或2滴輕混一下，然后靜止注意觀察溶液的顏色變化。結(jié)果：由于紅細(xì)胞發(fā)生破裂，造成100%紅細(xì)胞溶 血，使光線比較容易透過溶液，溶液顏色由渾濁的紅色逐漸變透明，此即為溶血現(xiàn)象。記錄下這個(gè)過程所要的時(shí)間。

3、雞紅細(xì)胞的滲透性記時(shí)比較

1）分別取2只試管，各加入3ml的0.85% NaCl、0.0085% NaCl和0.032mol/L葡萄糖 加入2-3滴血紅細(xì)胞懸液；

2）分別取3只試管，各加入3ml的 0.32 mol／L葡萄糖，0.32 mol／L甘油，0.32 mol／L乙醇，加入2-3滴血紅細(xì)胞懸液；

3）分別取2只試管，各加入3ml的10% TritonX-100、2%TritonX-100；加入2-3滴血紅細(xì)胞懸液，觀察反應(yīng)現(xiàn)象。記下時(shí)間（自加入稀釋血液到溶液逐漸由紅色變?yōu)橥该鞒吻?，紅血球全部溶血所需時(shí)間），填入表一的空格中。

4、溶血結(jié)果的判斷

不溶血：液體分2層，上層淺黃色透明，下層紅色不透明，鏡檢紅細(xì)胞完好。不完全溶血：溶液混濁，上層變紅色，鏡檢有部分紅細(xì)胞破裂。完全溶血：液體變紅而且透明，鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全成碎片。

5、顯微觀察

血液紅細(xì)胞的觀察滴一滴稀釋的血液于載玻片上，蓋上蓋玻片。用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的種類、形狀和顏色。

細(xì)胞破碎的觀察在上一步的載玻片的一端滴加清水，在另一端吸水，并在顯微鏡下觀察細(xì)胞的破裂。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將觀察到的現(xiàn)象記錄，并進(jìn)行分析。

編號

試

劑

是否溶血

時(shí)間

分析原因 2 3 4 5 6

0.85% NaCl 0.0085% NaCl 0.32 M葡萄糖 0.32 M 甘油 0.32 M 乙醇 10% TritonX-100

六、注意事項(xiàng)

1.試管中有紅細(xì)胞和測試溶液時(shí)，不應(yīng)強(qiáng)力搖晃，以免造成人為的紅細(xì)胞破裂。

2.取雞血動作要非常迅速，否則雞血會凝固。或者先把抗凝劑加入到燒杯中，再加入新鮮的雞血，邊加邊震蕩即可。

3.長時(shí)間在等滲溶液中，由于活細(xì)胞會產(chǎn)生代謝產(chǎn)物積累，也會產(chǎn)生溶血，試驗(yàn)時(shí)間不宜超過1h。

4.裝不同試劑試管注意編號，吸管也要專用切勿混淆，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。補(bǔ)充：

一、細(xì)胞膜的功能

分隔形成細(xì)胞和細(xì)胞器，為細(xì)胞的生命活動提供相對穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境，膜的面積大大增加，提高了發(fā)生在膜上的生物功能；

屏障作用，膜兩側(cè)的水溶性物質(zhì)不能自由通過； 選擇性物質(zhì)運(yùn)輸，伴隨著能量的傳遞；

生物功能：激素作用、酶促反應(yīng)、細(xì)胞識別、電子傳遞等；

物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能：細(xì)胞與周圍環(huán)境之間的物質(zhì)交換，是通過細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)功能實(shí)現(xiàn)的，其主要轉(zhuǎn)運(yùn)方式有四種，即單純擴(kuò)散、易化擴(kuò)散、主動轉(zhuǎn)運(yùn)、入胞和出胞作用。

細(xì)胞膜的受體功能：受體是細(xì)胞識別和結(jié)合化學(xué)信息的特殊結(jié)構(gòu)，其本質(zhì)是蛋白質(zhì)。

二、常用抗凝血劑包括：

1.非腸道用藥抗凝血劑：如肝素；

2.香豆素抗凝血劑類：常用的有雙香豆素、華法令和新抗凝等，通過拮抗維生素K使肝臟合成凝血酶原及因子Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ減少而抗凝；

3.抗血小板凝集藥物：如阿司匹林，對血小板環(huán)氧化酶有抑制作用；

4.蛇毒溶栓劑：如去纖酶、抗栓酶和清栓酶，可溶解已形成的血栓使血管再通，從而起到抗凝血作用。

肝素的作用機(jī)理

肝素在體內(nèi)、體外均有強(qiáng)大抗凝作用。與其帶大量負(fù)電荷有關(guān)，可使多種凝血因子滅活。這一作用依賴于抗凝血酶III（antithrombin

III，AT

III）。At

III是凝血酶及因子Ⅻα、Ⅺα、Ⅸα、Ⅹα等含絲氨酸的蛋白酶的抑制劑。它與凝血酶通過精氨酸-絲氨酸肽鍵相結(jié)合，形成At

III凝血酶復(fù)合物而使酶滅活，肝素可加速這一反應(yīng)達(dá)千倍以上。

實(shí)驗(yàn)十一 血細(xì)胞的分化和不同類型血細(xì)胞的觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、學(xué)習(xí)掌握人血涂片和染色的方法。

2、了解各種血細(xì)胞的形態(tài)特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

瑞氏染色液主要染料由堿性美藍(lán)和酸性伊紅兩種成分組成, 它們與細(xì)胞內(nèi)的嗜酸性和嗜堿性的各種物質(zhì)既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用, 各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣，因此使細(xì)胞呈現(xiàn)出不同的色彩.伊紅和美藍(lán)只能溶解在有機(jī)溶劑中，而滴在水中很快形成沉淀，所以染色液必須配成甲醇等有機(jī)溶液，臨用時(shí)加到水或緩沖液中，才能在一定的環(huán)境下離解成有色的陰離子伊紅和陽離子美藍(lán)，而與細(xì)胞中的不同物質(zhì)相親和被染色。如滴加到水中很快發(fā)生沉淀，容易形成沉渣。

甲醇兼溶劑和起固定細(xì)胞兩種作用。甲醇具有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞對染料吸收作用，同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。緩沖液作用：

染色對氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察pH值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。緩沖液須保持一定的pH使染色穩(wěn)定，PBS的pH 一般在6.8，偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使pH恒定。緩沖液配制（pH6.4-6.8，弱酸性）。

A：紅細(xì)胞，B：嗜酸性粒細(xì)胞，C：單核細(xì)胞，D：中性粒細(xì)胞，E：嗜堿性粒細(xì)胞，F(xiàn)：淋巴細(xì)胞

三、實(shí)驗(yàn)用品

顯微鏡、載玻片、采血針、75%酒精、消毒棉球、瑞氏染液、PBS、吸耳球。

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.消毒 先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒取血部位（如無名指指尖、耳垂）。2.取血 待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，或擠壓出血。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中4～5毫米處，注意手指持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚。必須兩人密切配合，抓緊時(shí)間，一人取血，另一人迅速推片。

3.推片 這步最重要，但又不易推均勻。以左手拿該片的兩端，迅速用右手取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處，成一直線。然后使推片與載片呈30°～40°角，輕輕移動，然后由前向后推為一均勻的薄片。涂片推好后，迅速在空氣中搖，使之自然干燥。

4.染色 將瑞氏染液(伊紅-亞甲基藍(lán))滴在血膜上，至染液淹沒全部血膜，染半分鐘。加等量蒸餾水(或緩沖液)與染液，加好后，立即用嘴將兩液吹勻?；旌显偃?分鐘。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。5.觀察

五、注意事項(xiàng)

1.染色時(shí)間與染液濃度,室溫高低,細(xì)胞多少有關(guān)。染液越淡,室溫越低, 細(xì)胞越多,所需染色時(shí)間越長或應(yīng)適當(dāng)增加染液量,因此染色時(shí)間應(yīng)視具體情況而定。特別是更換新染料時(shí)必須經(jīng)試染,摸索最佳染色條件。

2.染液不可過少,以防蒸發(fā)干燥染料沉著于血片上難沖洗干凈。沖洗時(shí)應(yīng)用流水將染液沖去,不能先倒掉染液,以免染料沉著于血片上。

3.判斷染液是否起到了染色的作用，可在沖洗染色液前觀察染液有無一層黃色的金屬光澤，如果沒有，則表示染色失敗。

4.如染色太淺，可按照原來步驟重染。

六、作業(yè)

1.繪制自制血涂片中的各種血細(xì)胞（至少一種白細(xì)胞）。2.用簡練的語言概括血液的主要成分和作用。