第一篇：痕跡檢驗在交通肇事中的應(yīng)用

痕跡檢驗在交通肇事中的應(yīng)用

近幾年，隨著社會經(jīng)濟的不斷發(fā)展，各種機動車保有量快速增長，再加上車輛駕駛?cè)藛T培訓(xùn)時間短，不能完全適應(yīng)道路交通環(huán)境的要求，道路交通事故與日俱增，交通肇事逃逸案件不斷上升，這不僅給國家、集體和人民生命財產(chǎn)造成重大損失，更給受害人及其家屬在精神上造成了極大的痛苦，在生活上帶來了許多困難。作為公安交通管理機關(guān)，如何通過對交通事故現(xiàn)場痕跡物證進行分析、提取，迅速、及時偵破案件，嚴厲打擊交通肇事犯罪嫌疑人，是擺在我們面前的一項艱巨任務(wù)。

一、概述

（一）痕跡檢驗與痕跡檢驗技術(shù)

痕跡檢驗是運用科學(xué)的理論和方法檢驗刑事案件中的痕跡，確定痕跡與案件的事實、痕跡與一定的人或物的關(guān)系的一種技術(shù)手段與司法鑒定工作。

痕跡檢驗技術(shù)是指運用痕跡檢驗學(xué)的理論、方法檢驗案件中的各種痕跡物證，確定痕跡與案件、痕跡與一定人或物之間關(guān)系的一種刑事技術(shù)。

（二）交通事故痕跡及鑒定依據(jù)

所謂交通事故的痕跡是指交通事故形成的一切痕跡，具體指在交通事故和逃逸案件的發(fā)生過程中，車輛與其他車輛或物體相接觸和相互作用時，在彼此間的作用面上形成的形象痕跡、整體分離痕跡和表面附著痕跡。

交通事故鑒定的主要依據(jù)是指事故發(fā)生后遺留在現(xiàn)場路面、車輛、人體及有關(guān)物體表面能夠證明事故事實的各種印痕和破損的狀態(tài)。

利用痕跡檢驗技術(shù)對交通事故進行有針對性的現(xiàn)場勘察工作可以確定案件性質(zhì)，主要依據(jù)以下幾個方面出發(fā): 1.現(xiàn)場是否有輪胎印

對于現(xiàn)場中的輪胎印，關(guān)鍵是要分析此輪胎與被撞車輛或行人是否有關(guān)。我 們主要通過輪胎印痕反映出的行駛方向、軌跡、通行及變異情況還有現(xiàn)場被撞車輛或行人的倒地位置、痕跡等來綜合分析現(xiàn)場遺留的輪胎印痕是否是由事故形成的。

2.現(xiàn)場是否有汽車零部件、玻璃碎屑及其他散落物

我們要分析現(xiàn)場的散落物屬于肇事車輛的哪個部位并盡量收集；檢驗被撞車輛或者行人有無油漆、玻璃碎片或其他附著物粘附；還要檢驗受傷者的受傷部位、程度和形態(tài)，來推斷肇事車輛的碰撞部位及行人致傷的情節(jié)。

3.鈍器傷的特點

交通事故中的身上多為鈍器傷，應(yīng)根據(jù)受傷者損傷部位、形態(tài)、受力方向來分析肇事車輛上是否有形成此傷口的部位。

4.現(xiàn)場痕跡、物證是否有反常表現(xiàn)

在現(xiàn)場勘查中，運用痕跡技術(shù)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)場的疑點，并通過進一步檢驗找到證實案件性質(zhì)的依據(jù)。如果現(xiàn)場痕跡與事故發(fā)生過程存在本質(zhì)上的差異，案件非交通事故的可能性就較大。

5.勘查外圍現(xiàn)場是否有可疑跡象

有些案件現(xiàn)場完全符合交通事故的特點，可通過調(diào)查走訪外圍現(xiàn)場，觀察外圍現(xiàn)場是否有可疑現(xiàn)象，結(jié)合多方面的調(diào)查作出客觀全面的原因分析。

近幾年運用痕跡檢驗技術(shù)查處交通事故和肇事逃逸案件越來越得到公安部門的認可，根據(jù)痕跡檢驗技術(shù)作出的鑒定結(jié)論在許多重要環(huán)節(jié)中起到直接的關(guān)鍵性的作用，痕跡檢驗技術(shù)在交通肇事案件中發(fā)揮著重要的作用。

（三）痕跡檢驗在交通肇事案件中的作用 1.痕跡檢驗在判斷交通事故類型的作用

準確的判明事故類型是處理交通事故案件的基礎(chǔ)，不僅可以提供排查方向，還可以避免不必要的糾紛。交通事故類型一般分為三種：即車車相撞、車人相撞和車輛單獨事故。在這幾種類型中，有是會因為事故現(xiàn)場混亂或沒有證人而發(fā)生混淆。比如有的車輛單獨事故現(xiàn)場和車車相撞很相似，如果沒有目擊證人或者證人陳述不清楚，往往會引發(fā)受害人家屬上訪等事件。這類案件可以通過對事故現(xiàn)場的勘察及人員損傷情況的檢驗和車輛痕跡的檢驗、確定痕跡尤其是車輛的痕跡(包括行駛痕跡、剎車痕跡、損壞痕跡和擦傷部位等)，準確的判明痕跡的形成過程，為妥善的解決這類案件提供客觀、準確、科學(xué)的依據(jù)。

如某地仇某某與女友騎一輛二輪摩托車外出，正遇派出所設(shè)卡檢查過往車輛。因仇某某所騎摩托車的車型、顏色等特征與幾天前被盜竊的車相似，民警便令其停車接收檢查。仇某某見狀駕車倉皇逃走，并與大樹相撞，二人當(dāng)場死亡。受害人家屬聽信一些“目擊者”讒言聚眾鬧事。為了妥善解決此事，派出所將案件上報上級公安局請示出具現(xiàn)場車輛檢驗報告。經(jīng)過檢驗發(fā)現(xiàn)，該車損毀嚴重，多處痕跡符合撞擊樹木摩擦地面形成的特征。從而排除了一些別有用心者的讒言。

2.在偵破交通肇事逃逸案件中的作用

交通案件發(fā)案率時有上升的趨勢，這類案件會因為現(xiàn)場情況和證人情況而偵破起來比較困難，通過痕跡檢驗技術(shù)檢驗卻常?？梢匀〉靡庀氩坏降淖饔?。具體體現(xiàn)在如下幾個方面:(1)檢驗鑒定輪胎花紋痕跡。車輛肇事時留在現(xiàn)場地面上的印記是車輛運動過程的真實記錄，是交通事故再現(xiàn)中不可缺少的物證。這些輪胎印在現(xiàn)場中除了留在地面上外，有時還留在被撞人或被軋過人的衣褲上。只要認真勘驗就可以發(fā)現(xiàn)和提取，為破案提供重要物證。

(2)檢驗鑒定整體分離痕跡。整體分離痕跡是交通肇事現(xiàn)場常出現(xiàn)而且又不易被破壞和改變的物證之一。由于機動車具有體積大、重量大、速度快的特點，所以在車輛與車輛之間的碰撞中，在地面常常會有脫落或在車體上遺留的一些涂料，這為認定肇事車輛提供了線索和依據(jù)。

(3)檢驗鑒定微量痕跡物證。在許多交通肇事案件中，微量痕跡物證常常能發(fā)揮很好的證據(jù)作用。碰撞的車輛、車人、車物之間互相附著的涂料、纖維、介質(zhì)物質(zhì)等都能反映出互相的關(guān)系、形態(tài)、高低、位置，從而印證兩者的作用關(guān)系，為破案提供很好的線索與證據(jù)。

痕跡檢驗與鑒定技術(shù)在重大交通肇事逃逸案件中的應(yīng)用十分廣泛。上述幾方面只是常見的痕跡檢驗技術(shù)在交通肇事逃逸案件中的應(yīng)用?？偟膩碚f，只要我們認真細致地進行現(xiàn)場勘驗，就能夠很好地發(fā)揮痕跡檢驗與鑒定技術(shù)在交通肇事逃逸案件中的作用。

二、痕跡檢驗在交通肇事案件中的具體應(yīng)用

（一）輪胎花紋痕跡檢驗鑒定的應(yīng)用 1.輪胎印壓痕跡

在交通事故中，人與車、車與車之間發(fā)生接觸，不可避免的會產(chǎn)生物質(zhì)與痕跡形態(tài)的相互交換，在雙方客體上會同時留下痕跡物證和微量物證。印壓痕跡的形成必須有三個要素，即造型客體、承受客體和作用力。造型客體、承受客體的作用方式不同時，所形成痕跡的種類、特點和形態(tài)是不相同的，造型客體的輪廓形態(tài)特征會直接反映在承受客體上。

案例：2002年6月2日，某路口，石某駕駛大貨車由南向東右轉(zhuǎn)彎時，大貨車右前角與李某駕駛的兩輪摩托車(后乘其子)相撞，造成二人當(dāng)場死亡。經(jīng)勘察，死者李某后腰部、后背肩部印壓花紋痕跡清晰，由兩種不同輪胎胎面花紋印壓形成，經(jīng)與大貨車輪胎胎面花紋樣本比對檢驗，死者腰部車印壓花紋圖案與大貨右前輪輪胎花紋樣本圖案相同(圖略)，后背肩部花紋圖案與大貨車右中輪輪胎胎面的樣本花紋圖案相同。

由此可見，肇事大貨車右前輪首先由死者腰部碾軋，隨即右中輪由后背肩部碾軋。當(dāng)碾壓在人體上后，人體軟組織在輪胎胎面人字形的間隙中形成擠壓造成淤血，使輪胎胎面花紋較完整地顯現(xiàn)在人體皮膚上而形成輪胎印壓痕跡。

2.輪胎滾印

滾印是指車輛輪胎在路面作純滾動運動時，在路面上遺留的印跡，這種印跡可以顯示出胎面花紋結(jié)構(gòu)。

路面上的輪胎滾印的寬度決定于輪胎的負荷、氣壓和規(guī)格。對同一種輪胎而言，車輛重載和輪胎氣壓低時，胎面與路面接觸面積增加，滾印較寬。車輛輕載和輪胎氣壓高時，胎面與路面接觸面積減小，滾印較窄。

3.輪胎壓印

車輛輪胎受制動力的作用，沿行駛方向在路面作滾動和滑移的復(fù)合運動時，在路面遺留的印跡。這種印跡的胎面花紋在車輛行駛方向有所延長。車輛制動時，隨著制動力的增加，輪胎與路面間的摩擦力由小變大，車輪由滾動過渡到抱死。由于車輪運動方式的改變，路面上出現(xiàn)由輕到重，向行駛方向延伸的輪胎紋痕跡和拖印。

4.輪胎拖印

拖印是指車輪被制動抱死后，輪胎滑行在路面上遺留的印跡，這種印跡呈帶狀，不顯示胎面花紋。拖印是指由于輪胎與路面接觸部位強力摩擦，使胎面物質(zhì)呈細小顆粒脫落，在路面上形成的平面夾層痕跡。

5.輪胎側(cè)滑印

由于車輛制動性能、速度、裝載、輪胎和路面等諸多因素的影響，使車輪偏離原行駛方向作斜向滑移運動，遺留在地面的印跡。側(cè)滑印跡寬度一般大于車輪胎面寬度，不顯示胎面花紋。

（二）爆胎痕跡檢驗鑒定的應(yīng)用

在交通事故中，車輛輪胎出現(xiàn)爆裂現(xiàn)象并不少見。車胎痕跡在交通事故痕跡中屬于車輛行駛痕跡，爆胎后還會產(chǎn)生其它痕跡。爆胎容易導(dǎo)致交通事故的發(fā)生，發(fā)生交通事故時也會造成爆胎。但對于駕駛員來講，這兩種爆胎現(xiàn)象在交通事故案件中有著本質(zhì)的區(qū)別。爆胎所引發(fā)的交通事故屬于意外事故，而交通事故中造成的爆胎，其前提是已經(jīng)發(fā)生了交通事故，往往是駕駛員違反交通法規(guī)等原因而釀成的交通事故，是要負法律責(zé)任的。

案例：今年二月份，我市境內(nèi)發(fā)生一起特大交通事故。一輛“獵豹”牌吉普車，由東向西行至S312線39km + 840m處超車時，與前方同向行駛的一輛“一汽佳寶”牌小型客車相擦刮，后吉普車駛向公路的左側(cè)，與對面沿路邊停放的“飛彩”牌農(nóng)用三輪車及路邊6個行人相撞，造成3車受損，4人死亡，8人受傷的特大交通事故。經(jīng)現(xiàn)場勘查和事故調(diào)查，事故處理部門下達了《交通事故責(zé)任認定書》：駕駛吉普車的駕駛員，在沒有與被超車保持充足的安全距離的情況下實施強行超車，是造成此事故發(fā)生的直接原因，根據(jù)《中華人民共和國道路交通安全法》等有關(guān)法律規(guī)定，吉普車駕駛員負事故的全部責(zé)任。吉普車駕駛員接到交通事故認定書后，立即提出了異議，并稱這是一起由于吉普車左前輪突然爆胎后，方向突然失控導(dǎo)致的意外事故。而最初調(diào)查時，吉普車駕駛員未曾提及爆胎之事，車上的4名傷者也均未聽到爆胎聲。為了查清該起交通事故的真實情況，事故處理部門對吉普車左前輪車胎進行檢驗以確定該車胎爆裂是在事故發(fā)生前還是在事故發(fā)生時。

經(jīng)檢驗，該輪胎為真空輪胎，輪胎與輪轂已脫離。輪胎面上有大量撕裂狀痕 跡，輪胎外側(cè)有一處3cm ×4cm缺失，其他無異常。根據(jù)痕跡特征反映，可判定輪胎面上的大量撕裂狀裂紋痕跡應(yīng)為輪胎在爆裂過程中所形成的爆胎痕跡；輪胎外側(cè)面的缺失，因形態(tài)規(guī)整，痕跡內(nèi)壁的細微痕跡方向性一致，判定為撞擊過程中所形成的切割痕跡。由于被檢輪胎同時存在爆胎痕跡和撞擊痕跡，要確定兩種痕跡所形成的先后順序，就必須根據(jù)痕跡形成的過程和機理加以綜合分析。在檢驗過程中我們首先假定該車是先爆胎后撞擊，則爆胎后輪轂將直接承受汽車的部分重量，沒有氣體的癟胎必然地面之間形成碾壓過程，且輪胎與輪轂由相對靜止變成相互摩擦，應(yīng)該在輪胎上形成輪轂的碾壓和摩擦痕跡。根據(jù)上述汽車在行使過程中爆胎所形成痕跡的機理，我們在被檢輪胎沒有發(fā)現(xiàn)輪轂與輪胎在碾壓過程中所應(yīng)反映出的痕跡。若撞擊后形成爆胎，則由于該輪胎與被撞三輪車某部件形成擠壓，造成該輪胎內(nèi)壓瞬間增加可以形成爆裂，并在高速運動的過程中同時可以形成切割痕跡。根據(jù)輪胎上痕跡的種類，以及痕跡形成的過程、機理綜合分析，可認定這起交通事故中爆胎的形成過程應(yīng)為：肇事車輛與前方同向行駛的“一汽佳寶”牌小型客車相擦刮后，吉普車變向駛向公路的左側(cè)，與對面沿路邊停放的“飛彩”牌農(nóng)用三輪車及路邊6個行人相撞。此鑒定結(jié)果進一步支持了事故處理部門下達了《交通事故責(zé)任認定書》所認定的結(jié)論。

（三）整體分離痕跡檢驗鑒定的應(yīng)用 1.同質(zhì)斷裂整體分離痕跡

斷裂形態(tài)由物體形狀所決定，斷裂面可能凹凸不平或帶有毛刺，或呈其他特征形態(tài)，斷離面相互對應(yīng)，界面上的痕跡、附著物及形態(tài)也是相互對應(yīng)的。通常在現(xiàn)場提取到的遺留物，僅僅反映了該殘片本身的特征，只能認為是與案件有關(guān)的物證，只有當(dāng)獲得了與遺留殘片相關(guān)的另一分離體客體，而且經(jīng)過對分離客體的檢驗，其斷裂特征與遺留殘片特征相對應(yīng)時，才能初步確定是否可作為同一認定的依據(jù)。因此，不僅要對形態(tài)特征進行檢驗，還要對其進行物理、化學(xué)的檢驗，進一步分析它們的材質(zhì)、種屬，綜合起來判斷是否原為一體，準確作出同一認定的結(jié)論。

案例：2000年7月22日，在某高速路，一輛旅行車由西向東行駛中因爆胎停車，乘車人閻某下車行至超車道內(nèi)時，被一輛同方向由后駛來的小客車撞出，造成閻某死亡，事故發(fā)生后肇事小客車逃逸。經(jīng)勘驗，對現(xiàn)場遺留殘損物與嫌疑 車右后視鏡基座支架殘損件進行了整體吻合復(fù)原，其嫌疑車右后視鏡基座支架殘損件的斷面呈凸起弧線，寬度為0.2cm，長度為1.7cm，工字型斷裂面寬度為0.2cm，對角線長度為0.8cm，凹陷面弧線寬度為0.3cm，長度為1.1cm；各形態(tài)特征均與現(xiàn)場遺留殘損物斷口形態(tài)的弧線寬度、長度相對應(yīng)，各斷面痕跡特征吻合良好，經(jīng)X射線能譜儀/掃描電子顯微鏡對其材質(zhì)進行分析均為同種金屬材質(zhì)，為同一物體斷裂分離所形成，可作為同一認定的依據(jù)。

2.異質(zhì)脫離整體分離痕跡

無論是同種材質(zhì)的組合體，還是不同材質(zhì)的組合體，各部件之間會有相應(yīng)的接觸面，相鄰兩部件的接觸面上會留下相應(yīng)的接觸印痕和附著物，脫離后，在脫離部位上的印痕形態(tài)也是相互對應(yīng)的。因此，通過異質(zhì)材質(zhì)印痕及附著物進行形態(tài)特征與分析檢驗，判斷是否原為異體、異質(zhì)分離同一認定的依據(jù)。

案例:2002年10月18日，在某環(huán)路發(fā)生一起重大交通肇事逃逸案，造成騎三輪車人死亡。經(jīng)查，車號為晉×××的斯太爾牌大貨車有肇事嫌疑。對現(xiàn)場提取的車體部件與大貨車左側(cè)腳踏板支架部件經(jīng)過初步重疊復(fù)位后兩部件吻合良好?，F(xiàn)場遺留物簡稱A件，車體上部件簡稱B件，對于這類組合部件在同類大貨車上通常屬于通用部件，但在這起案件中，它的反映特征在于：(1)擦劃痕的貫穿特征。當(dāng)A、B兩個部件拼接在一起時，A件與B件表面的擦劃痕由A件表面貫穿至B件表面，劃痕連續(xù)完整，而且數(shù)條劃痕均為一次形成。(2)形態(tài)特征的完整性。當(dāng)A、B兩個部件拼接在一起時，在其表面的中心部位，有一個由中心跨越兩部件邊緣而形成的一個孔洞，移開其中任何一個部件，其形狀會失去完整性。(3)固有的接觸痕跡。A件圓柱體(與B體接觸)的外表面與B件半圓形(與A件接觸)殼體的內(nèi)表面上，有形態(tài)相對應(yīng)的磨損痕跡。(4)物理化學(xué)特征。A件與B件表面的黑色油漆涂層，經(jīng)FTIR、SEM/EDS檢驗，均為同種油漆；兩部件對應(yīng)的磨損面上，均檢出對方的不同金屬成分。在這一案件中，采用了一物多證、同痕多檢、理化分析相結(jié)合的方法，依據(jù)上述特征，對涉案物證進行全面、細致的分析檢驗，作出了整體異質(zhì)分離的鑒定結(jié)論，在強有力的證據(jù)面前，肇事嫌疑人認罪伏法。

（四）微量物證檢驗鑒定的應(yīng)用

交通肇事逃逸案具有現(xiàn)場開放的特點，微量物證的分布復(fù)雜，交通事故中常見的微量物證有油漆物證、塑料和合成樹脂物證、纖維物證等。由于微量物證種 類、發(fā)生作用方式以及遺留部位的不同，交通肇事逃逸案件中微量物證具有不同的存在與分布形式。

1.油漆物證

當(dāng)車輛與車輛發(fā)生碰撞和刮擦，被碰撞和刮擦部位的漆層會發(fā)生脫落或相互間的油漆物質(zhì)轉(zhuǎn)移；機動車輛若與自行車或行人相碰撞和刮擦，有時會在自行車某部位，被害人的衣服、身體上留下肇事車輛的油漆?，F(xiàn)場油漆物證的形態(tài)與車輛涂層油漆的老化程度及事故本身作用力的大小、方向有關(guān)。有的是車輛表面油漆脫落，有的則是多層油漆甚至是底部的膩子層也同時脫落。一般來講，只有那些舊車因表層油漆嚴重老化，附著力差，會呈現(xiàn)較大的片狀散落，其他則多呈細小顆粒狀和小片。如果在事故現(xiàn)場收集到的漆層較厚且厚薄不均勻，可判斷此漆片為修補噴涂過油漆的車輛上掉下來的；反之如漆片厚度較均勻，則此漆片為從廠家噴涂油漆的原車上脫落。

(1)油漆物證的提取。現(xiàn)場油漆物證的提取在交通事故現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)較完整的油漆碎片，可利用竹質(zhì)鑷子輕輕地夾取，放入檢材收集瓶中。對于微小的油漆顆粒，則應(yīng)使用檢材收取勺或手術(shù)刀刮取后收入檢材收集瓶中。對于擦刮痕跡部位的油漆附著物，最好是做完痕跡鑒定和拍照之后，小心地將漆狀附著物連同載體一起妥善固定好，直接送檢，由檢驗技術(shù)人員進行微量漆狀物的提取。

(2)嫌疑肇事車輛上油漆物證的提取。當(dāng)通過偵查找到嫌疑車后，不要急于提取油漆檢材，而應(yīng)認真、全面地檢驗該車各部位，重點觀察該車涂層是否有劃痕、擦痕、脫落及重新噴涂等現(xiàn)象。然后對其形狀、離地距離進行測量、記錄，同時對照對方車輛或受害人身上接觸點的位置、距地高度是否吻合，如不吻合即可排除；如果雙方在擦劃方向上吻合，相應(yīng)距地面高度一致，應(yīng)必須注意兩者油漆的顏色是否一致，以便提取到準確的檢材。

2.塑料和合成樹脂物證

根據(jù)塑料零部件成分、性能及事故作用力方向和大小不同，脫落的塑料物質(zhì)形態(tài)不同?？伤苄圆?、質(zhì)地堅硬的塑料零部件，受到撞擊后容易破碎，呈塊狀脫落。如機動車轉(zhuǎn)向燈燈罩、非機動車尾燈標志等；可塑性較強、質(zhì)地柔軟而有一定韌性的塑料零部件經(jīng)強力撞擊或擦刮，局部產(chǎn)生高溫，被撕裂或拉伸，呈膠狀或薄膜狀，粘附在車輛或物體表面。如非機動車把套，常因被機動車擦刮而呈薄 膜狀粘附在車輛表面。

塑料和合成樹脂物證的提取。散落在事故現(xiàn)場地面上的塑料碎片，可以用不銹鋼鑷子夾取。若塑料碎片體積較大或數(shù)量較多時，用干凈的足夠大的紙袋盛放； 若塑料碎片很少，則應(yīng)用檢材收集瓶或硫酸紙制作的盛物袋來收集。對于粘附在痕跡部位的非本身形成的物質(zhì)，往往是因刮擦作用形成的附著物，提取和保存一定要小心。可借助放大鏡觀察，用具柄手術(shù)刀片輕輕刮取附著物。若附著物較多或具有一定硬度，可用不銹鋼鑷子提取，然后放入盛物容器中。如果提取連肉眼也難以觀察到的附著物，可以使用酒精棉球或用一小塊酒精紗布沾擦有附著物處(注意不能來回多次擦)，然后將棉球或紗布連同附著物質(zhì)一起放入專用玻璃收集瓶中保存。

3.纖維物證

纖維物證的出現(xiàn)率相對于其他微量物證出現(xiàn)率較低，它的形成是有一定條件的，并非車輛與人體接觸的事故現(xiàn)場必有纖維物證存在。而且交通事故現(xiàn)場的纖維物證一般都是微量的，有時有數(shù)根毛發(fā)，有時只有單根毛發(fā)或纖維，往往不易發(fā)現(xiàn)并且因其顏色特征不明顯，除個別差異較大者外，用肉眼難以區(qū)分，必須仔細觀察和尋找，有時需要使用科學(xué)儀器進行觀察和鑒別。纖維物證粘附于肇事車輛的事故接觸部位與被撞人體纖維的脫落部位具有方位的對應(yīng)關(guān)系。

纖維物證的提取。機動車輛與人、動物的毛發(fā)接觸，往往會將受害一方的部分毛發(fā)轉(zhuǎn)移并附著在肇事車輛上，或掉落在事故現(xiàn)場的地面上，機動車輛與人的織物接觸也會造成織物纖維的掉落與轉(zhuǎn)移。由于毛發(fā)、纖維掉落或附著的數(shù)量較少，而且毛發(fā)和纖維本身又很細，因此要用手柄放大鏡仔細勘查事故現(xiàn)場，必要時應(yīng)使用光源照射尋找纖維物證。在提取附著物之前，最好用照相機拍下纖維的原始依附狀態(tài)，作為重要物證形態(tài)資料。然后用干凈的不銹鋼鑷子進行提取，最后將提取到的纖維物證連同所提取的受害一方(人或動物)被刮擦痕跡處的毛發(fā)或織物纖維三至五根一同送檢。需要注意的是，應(yīng)在立體顯微鏡觀察到兩者的顏色和外觀形態(tài)近似或一致的基礎(chǔ)上才能提取比對檢材。若微量纖維的種類較多，在事故現(xiàn)場的散落面積較大，難以在肉眼觀察下用鑷子一根一根地提取，此時可使用交通事故物證提取箱中配備的靜電取跡器進行提取。

三、總結(jié) 通過以上交通事故的痕跡檢驗，我們深刻體會到在交通事故處理中痕跡檢驗工作的重要性和必要性。隨著法律、法規(guī)的健全和公民法律意識的增強，在交通事故的處理過程中，車輛痕跡的檢驗工作將逐步走向規(guī)范化、正規(guī)化。這就要求公安交通事故處理部門的民警要進一步增強在處理交通事故的過程中的證據(jù)意識。要加強對交通事故現(xiàn)場勘查知識的學(xué)習(xí)和交通事故中的痕跡檢驗知識的儲備。對特大、復(fù)雜的交通事故案件以及可能造成矛盾糾紛的案件要有保全證據(jù)的意識，以減少不必要的糾紛。

參考文獻

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第二篇：淺談交通肇事案件中的痕跡檢驗-修改稿

淺談交通肇事案件中的痕跡檢驗

（呼倫貝爾市公安局交通警察支隊李國峰特古斯）

摘要：在經(jīng)濟全速發(fā)展的背景下，交通事故出現(xiàn)的頻率也是越來越高，在形成資料分析的取證過程中，需要采用現(xiàn)代化的技術(shù)手段，尤其是對交通肇事案件中的痕跡檢驗技術(shù)，對于整個交通案件的處理以及證據(jù)的收集等方面有很大作用，因此，通過采用多種技術(shù)手段來增強交通肇事案件的痕跡檢查，有著很大的現(xiàn)實意義。本文主要從當(dāng)前交通肇事案件中痕跡檢查的重要性進行分析，在起到關(guān)鍵性的作用中，加強對整個痕跡檢驗技術(shù)的探討，從而更加有效的對交通肇事案件形成全速、有效的偵破。

關(guān)鍵詞：交通肇事；案件處理；痕跡檢驗；技術(shù)運用

在機動車輛增加的情況下，交通事故發(fā)生的頻率也是越來越高，在交通肇事案件處理中，更加注重證據(jù)的使用，因此，要在綜合管理的基礎(chǔ)上，交通公安部門要形成對交通肇事案件的偵破，其中，對于痕跡的檢驗是一個重要的因素，通過采用痕跡檢驗的方式，可以明確的形成具體部位的肇事情況，對于整個案件的偵破，能提供最直接、最客觀、最基礎(chǔ)的證據(jù)，是偵破案件的突破口。因此，要積極探索在交通肇事案件中痕跡檢驗的技術(shù)運用，為案件偵破做出更大的貢獻。

一、簡述痕跡檢驗在交通肇事案件中的關(guān)鍵性作用

1、物證分析的關(guān)鍵因素

通過采用痕跡檢驗的方式，對于交通肇事案件形成全面的分析，尤其是能提供詳實的線索。在整個交通肇事中，再高明的犯罪手段也會留下一定的痕跡，這就說明，通過細致的痕跡檢驗，能從中發(fā)現(xiàn)一些線索，可以還原整個交通事故的原型。在肇事案件的處理中，融合痕跡檢驗的分析，就能形成相關(guān)的案件技術(shù)模式，對于一些基本的要素，如車輪、刮痕處等一些線索，能為整個偵破案件提供有力的證據(jù)。在這些因素的形成中，一個不起眼的痕跡，可能成為偵破交通肇事案件的關(guān)鍵點，對于一些主體的因素，能提供對比分析等，這樣，更加有利于形 1

成整體分析，所以，在痕跡檢驗中，對于提升整個物證的有效性，有著很大幫助。

2、偵破案件的主要突破口

在交通肇事案件的痕跡檢驗中，通過詳實而且具體的痕跡分析，對于每一個細節(jié)都不放過，能為交通肇事案件提供最為關(guān)鍵的突破口。這樣，能形成對整個證據(jù)鏈的全面分析，尤其是在綜合證據(jù)的分析中，對于痕跡檢驗的結(jié)果，可以成為案件偵破的關(guān)鍵要素。譬如，在一起高速公路交通肇事案件中，一輛車子由西向東行駛過程中，由于車輪爆胎停車，駕駛員在停車進行檢查的過程中，被一輛同方向的小客車撞出，這位駕駛員當(dāng)場死亡。在針對痕跡進行檢驗的過程，由于小客車肇事逃逸，要形成相應(yīng)的證據(jù)，才能更好為偵破案件提供依據(jù)。于是，對殘余的殘損物進行痕跡檢驗，其中有一個關(guān)鍵的因素，在現(xiàn)場遺留中，嫌疑車輛右后視鏡支架殘損物呈現(xiàn)出一定的碎片，通過缺口形態(tài)的弧線跨度分析，對于整個橫斷面的材質(zhì)與現(xiàn)場遺留的材質(zhì)完全相吻合，這一個線索，成為了破案的關(guān)鍵因素，也為整個肇事案件的偵破立下了一定的功勞。

二、探討交通肇事案件中痕跡檢驗的物證利用

1、車輪痕跡檢驗的物證利用

在交通肇事案件的痕跡檢驗中，對于車輪的利用是一個不容忽視的因素，因為，從車輪的痕跡樂意反映出更多的因素，其中包括車輪的花紋種類以及輪距與車輛在行駛中的狀態(tài)等。對于車子在運行中的一些狀態(tài)，尤其是在起步、剎車、轉(zhuǎn)彎等一些綜合情況，通過對車輪痕跡的檢驗，從而可以有效的判斷出車輛行駛的方向、速度等，在這些綜合因素的形成中，包括對車輪更加細致的檢查，其中，包括車輪的磨損、裂縫、嵌物等現(xiàn)象，在這樣的檢驗中可以形成同一認定。因此，通過這些具體的車輪檢驗，能更加科學(xué)細致的形成對肇事案件的證據(jù)服務(wù)，形成偵破的有效性。譬如，在2006年發(fā)生在307國道上的一起交通事故，其中，一位騎著摩托車的人被火車碾傷造成腿部骨折的事件，在摩托車倒地之后，火車車輪碾壓摩托車上的人，但是，貨車司機不承認對摩托車主的碾壓，于是，在獲取證據(jù)的過程中，對貨車的車輪進行了痕跡檢驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，貨車司機的褲腳上有輪胎痕跡，與貨車的輪胎相對比，正好是完全吻合，并且傷者的褲腳上的輪胎痕跡與貨車的輪胎是一樣的，在證據(jù)確鑿的基礎(chǔ)上，貨車司機只能承認碾壓事實。因此，通過對車輪痕跡的檢驗，能為整個案件的偵破提供鮮明的依據(jù)，并且為下

一步的偵破提供詳實的數(shù)據(jù)與車輪形狀、數(shù)據(jù)的對比，有很大的實際作用。

2、現(xiàn)場遺留整體分離物的痕跡檢驗

在現(xiàn)場的控制過程中，對于現(xiàn)場收集與提取遺留物或者整體分離物，有著很大的現(xiàn)實意義。通過對現(xiàn)場遺留的整體分離物如輪胎花紋、擋風(fēng)玻璃、車燈以及其余的分離物，在整個交通肇事案件處理中也有著很大的作用。通過對這些東西的檢驗，可以成為對交通肇事車輛的界定。譬如，在2009年307國道上發(fā)生的一起交通肇事案件，在發(fā)生事故之后，肇事者逃逸。在趕赴現(xiàn)場的過程中，對現(xiàn)場進行細致的勘察，在整個事件中，殘留有肇事車輛的玻璃燈罩碎片，除此之外沒有其余的任何線索。在針對現(xiàn)場殘留的玻璃燈罩進行檢驗的基礎(chǔ)上，在進行交通及時堵截的同時，通過大量的走訪調(diào)查，發(fā)現(xiàn)有一輛車輛的后轉(zhuǎn)向燈燈罩破損，有重大肇事嫌疑，通過這一條線索的偵破，將這一輛車輛的玻璃燈罩與現(xiàn)場殘留的玻璃燈罩進行對比，正好是吻合的，在型號、痕跡對比上完全吻合，因此，可以認定為這一輛車輛是逃逸車輛。通過這種痕跡檢驗的方式，正好可以與整個殘留物進行有機的對比，這樣，完全符合對交通肇事案件的證據(jù)獲取，從而為偵破交通肇事案件提供強有力的幫助。

3、車輛刮痕檢驗的技術(shù)運用

在交通肇事案件中，對于車輛刮痕的資料運用是一個重要的環(huán)節(jié)。因為在整個交通肇事過程中，要形成車輛的碰撞才能出現(xiàn)事故，因此就會有刮痕、磨損等現(xiàn)象，在對一些接觸部位形成全方位檢驗的基礎(chǔ)上，形成數(shù)據(jù)與痕跡對比，觀察證明肇事過程的事件真相。在整個檢驗過程中，從刮痕的高度、寬度、深度以及附著物的痕跡起止線等，從而能確認出車輛的行駛方向，對于交通肇事案件的責(zé)任劃分有很大幫助。譬如，在2010年在廣州某地區(qū)發(fā)生一起交通事件中，原因是一輛農(nóng)用三輪車與農(nóng)用四輪車發(fā)生側(cè)翻并由于刮一下引起側(cè)翻。在對側(cè)翻車輛痕跡檢驗的過程中，針對一些刮痕進行全面的分析，其中發(fā)現(xiàn)，三輪車的左馬槽與四輪車的左馬槽形成同一高度的刮痕，這就可以得出結(jié)論，這兩輛車經(jīng)過一定的碰刮，并在另一輛車上發(fā)現(xiàn)有油漆被刮的附著物，通過對整個刮痕留下的證據(jù)分析，對其中四輪車對三輪車的刮倒承擔(dān)一定的責(zé)任，由此可以得出，這種刮痕檢驗的過程能為交通肇事案件的偵破提供有力的證據(jù)，正好是形成了細致的綜合管理模式，為整個交通事故肇事案件的偵破率提供了有力的證據(jù)支持。

三、案件實例分析

1、案件1：布紋印壓痕跡

這個事故主要是采用對印跡的檢驗，由于在整個運動的過程中，車輛之間形成一定力量的碰觸，會產(chǎn)生更大的摩擦力，速度較快的情況下，交通事故中的痕跡就會殘留的更多。在整個物理遷移的過程中，會產(chǎn)生更多的印跡，通過對這些印跡的整體分析，能形成痕跡檢驗的整體效果。在2012年2月發(fā)生的一起交通事故中，在一個車站前，一輛小面包車由西向東行駛，在發(fā)生車輛側(cè)滑的過程中，擠壓在路旁的行人身上，造成路人的死亡。在整個勘察的過程中，可以看出這一輛小型面包車的左側(cè)后門處有一個軟物體，在撞擊之后形成了15cm左右的凹陷痕跡，并有布紋印壓的痕跡，通過對這一痕跡的減壓，可以形成準確的結(jié)論。從這一個案件的分析來看，在發(fā)生事故的過程中，行人身體處于標志桿與車身之間，在擠壓過程中行人衣服布紋清晰的顯示在車輛車輪的油漆表面，只要通過對布紋印壓的痕跡提取，就能獲取更加準確的數(shù)據(jù)痕跡，在進行對比檢驗的基礎(chǔ)上，可以確認整個肇事案件的真相。從而形成鮮明的導(dǎo)向過程，這些證據(jù)的獲取，能為整個案件的偵破提供更加有力的幫助，能起到很好的效果。

2、案件2：物證檢驗技術(shù)運用

物證檢驗技術(shù)就是對痕跡的檢驗，也是一個證據(jù)收集的過程，通過對證據(jù)的獲取，形成仔細的分析，將有很大的作用，尤其是能為交通肇事案件中責(zé)任劃分、追求刑事責(zé)任等提供有力的證據(jù)。發(fā)生交通事故時，人、車都會產(chǎn)生相應(yīng)的摩擦，有摩擦就會有線索，比如毛發(fā)、玻璃、血跡等這些不易被人作為線索的物證，對于案件的偵破卻有著重大作用。無論是什么案件，只要是認真尋找、仔細勘察，都會找到其有價值的地方，最終有助于破案。如2012年6月25日牡丹江農(nóng)墾區(qū)八五四農(nóng)場場部至建虎高速公路“春迎加油站”西南側(cè)200米處的樹林中發(fā)現(xiàn)一具無名尸。通過現(xiàn)場勘查、尸體檢驗、科學(xué)推斷及匯總所有外圍調(diào)查情況后，最終牡丹江農(nóng)墾公安局刑事技術(shù)大隊確定案件性質(zhì)為自殺。用科學(xué)的論證、有力的證據(jù)勇敢地面對現(xiàn)實，推翻了初步檢驗時所給出的他殺結(jié)論。細致的現(xiàn)場勘查所得出死亡結(jié)論與外圍調(diào)查結(jié)果互相印證。為刑事偵察部門的偵察工作指明正確的偵察方向，這就是痕跡的意義所在。

四、結(jié)語

在對交通肇事案件的綜合處理中，要充分發(fā)揮出痕跡檢驗的利用與作用，對于整個物證的獲取以及為事故的偵破提供有力的幫助，能為整個案件偵破提供更加快速的材料取證。尤其是在近年來車輛增加、馬路殺手增多的情況下，對于痕跡檢驗技術(shù)與分析措施的要求更高，因此，要在交通肇事案件中全面形成痕跡檢驗的綜合模式，形成與整個交通管理相聯(lián)系，服務(wù)于交通管理，充分運用痕跡檢驗技術(shù)對痕跡進行科學(xué)的鑒定，并形成科學(xué)對比分析等，為整個案件的偵破提供全面的證據(jù)支撐。從目前的痕跡檢驗來看，關(guān)鍵是對車輪、殘留物、異質(zhì)脫離整體分離痕跡等進行綜合檢驗，能為整個偵破水平的提升與辦案質(zhì)量的提高做出更大的貢獻，并為構(gòu)建和諧社會提供更大、更多、更詳實、更加有力的幫助。參考文獻：

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第三篇：“xxxx”在偵破道路交通肇事逃逸案中的應(yīng)用

“xxxx”在偵破道路交通肇事逃逸案中的應(yīng)用

近年來，人肉搜索無疑是公眾矚目的焦點話題，其強大搜索引擎所迸發(fā)出的威力是任何網(wǎng)站與信息平臺望塵莫及的，便捷、快速、海量、精準的信息流，在經(jīng)過整合，分析，碰撞，研判后，往往使得被搜索對象無處遁形。如將此收集信息的高效手段合法、合理、科學(xué)地應(yīng)用到偵破交通肇事逃逸案件工作中，對大大提升偵破效能不無裨益。

一、人肉搜索的概念：

“人肉搜索”是社會信息化與網(wǎng)絡(luò)化相結(jié)合的產(chǎn)物，現(xiàn)代信息網(wǎng)絡(luò)的運用是其得以高效運行的重要保證。它是依托一個縱向貫通、橫向集成、互聯(lián)互通、高度共享的信息網(wǎng)絡(luò)平臺，整合和盤活信息資源并形成有效情報，變傳統(tǒng)的單一查詢過程為一人提問、多人響應(yīng)的人性化搜索方式，發(fā)起人與參與者之間互通有無，高度共享，最終實現(xiàn)某種意愿的達成。

在交通肇事逃逸案件偵破中“人肉搜索”的主要目的是用來確定人員身份、擴大線索來源及確定物品來源目。運作的基本形式是在論壇發(fā)帖，以被查找人或物品的靜態(tài)圖片或動態(tài)影像為素材，加貼告知搜索意愿，一旦有認識或者掌握相關(guān)信息的網(wǎng)民瀏覽該帖，出于正義的力量，他就可利用在網(wǎng)上跟帖的形式，將搜索目標的基本情況或活動信息公布于網(wǎng)上。網(wǎng)民的數(shù)量巨大，跨越省界乃至國界，通過人肉搜索，通常能收獲大量信息。

二、當(dāng)今交通肇事逃逸偵查中出現(xiàn)的問題：

眾所周知專群結(jié)合、信息導(dǎo)偵、深入研判、定向制導(dǎo)是偵破交通肇事逃逸案件工作取得成效的基礎(chǔ)。但是由于信息來源渠道閉塞，導(dǎo)致信息流不準、不暢、不及時，使得偵破工作陷入進退兩難的境地。

交通肇事逃逸偵破難的客觀因素：

一是當(dāng)今社會正處于轉(zhuǎn)型時期，各類矛盾多發(fā)的情況下，解決專群結(jié)合緊密程度問題具有長期性、復(fù)雜性和艱巨性，并不是一朝一夕所能解決的，對偵查中群眾基礎(chǔ)工作提出了嚴峻的考驗。而構(gòu)建整個偵查工作情報信息主體的缺乏，沒有強大的信息作為支撐，導(dǎo)致偵查工作“上層建筑”中的信息導(dǎo)偵、深入研判、定向制導(dǎo)都無從談起。

二是交通肇事逃逸案件往往發(fā)生在路邊無燈、路無監(jiān)控、現(xiàn)場無人的三無地點，造成偵破逃逸案件信息匱乏，使得偵破工作陷入尷尬局面。傳統(tǒng)的警務(wù)處理方式是利用現(xiàn)場僅存的碰撞殘片，大致確定肇事車輛車型，根據(jù)行車軌跡，明確逃逸方向，劃定可能藏匿范圍，運用“人海戰(zhàn)術(shù)”，進行地毯式排查，此方案不僅耗時耗力，收獲的效果有時也不盡如人意，加上如果肇事車輛是異地號牌，穿越省際、市際邊界時，必定繞過收費站，逃避監(jiān)控錄像的捕捉，使得在本市的排查圍堵行動形同虛設(shè)，偵破方向毫無頭緒，工作進展處于停滯狀態(tài)，以致案件久拖不決，引起當(dāng)事人不滿，引發(fā)不安定因素，甚至造成群眾上訪，影響社會穩(wěn)定。

交通肇事逃逸偵破難的主觀因素：

一是目前，由于受到社會各種不良風(fēng)氣的影響，有些群眾抱著多一事不如少一事的心態(tài)，不愿意為我們公安機關(guān)提供有價值的線索；有些群眾對我們公安機關(guān)，還缺少必要的信任，也不愿意說。即便有群眾向我們反映，大都是零亂或散碎的。以上這些情況將會給我們偵破工作帶來很大的難度。

二是個別事故偵查人員專業(yè)素質(zhì)不高，勘查事故現(xiàn)場缺乏科學(xué)性、系統(tǒng)性、關(guān)聯(lián)性，態(tài)度不認真、不仔細、不謹慎。一些事故現(xiàn)場所遺留的物證有時是很少的，也許是幾個殘缺的漆片，或玻璃、塑料碎片；也許就一二道制動痕跡。面對這樣的肇事現(xiàn)場，就要求我們要認真地對待現(xiàn)場所遺留的每一個物證，力爭從有限的物證中，結(jié)合現(xiàn)場周圍的環(huán)境，準確地分析出肇事車輛的車型、顏色、行駛方向、接觸部位、損壞部位等重要的破案信息，這樣就為快速破獲逃逸案，奠定了扎實的基礎(chǔ)。

三是少數(shù)偵查民警信息碰撞、研判分析能力不強。即使在肇事現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)、整合出一定的線索，但是這些線索如同汪洋大海中的信息孤島，彼此之間缺乏架設(shè)聯(lián)系的橋梁，形成信息壁壘，造成線索雜亂無章，穿引主線拎不起，無用支線放不下，偵破方向說不清，偵破手段講不明，偵查主導(dǎo)思想一筆糊涂賬，分析研判一篇流水賬，無關(guān)痛癢旁敲側(cè)擊，廢話、牢騷、挖空心思強調(diào)客觀因素啰嗦一大堆，而對于偵查方向、突破口等中心工作，只字未提，分析報告毫無建樹。

三、當(dāng)前人肉搜索存在的爭議：

對于“人肉搜索”這一個挺形象說法，當(dāng)前社會上對此非常關(guān)注，這個問題很復(fù)雜，涉及到方方面面?！叭巳馑阉鳌钡母拍钌婕暗剿慕缦奕绾未_定，這些都還是研究和討論過程中的問題。

（一）在承擔(dān)刑事責(zé)任上觀點不一。

1.應(yīng)承擔(dān)刑事責(zé)任?！叭巳馑阉鳌眲傞_始時確實找到了一些應(yīng)該找到的人，可是隨著人們的濫用，越來越多無辜的人受盡了折磨，“網(wǎng)上通緝已經(jīng)超出了道德譴責(zé)的范疇，嚴重侵害了公民的基本權(quán)益?！?全國人大常委會委員朱志剛提出，“網(wǎng)上通緝”、“人肉搜索”泄露公民姓名、家庭住址、個人電話等基本信息，同樣是嚴重侵犯公民基本權(quán)益的行為，其造成的危害甚至比出售公民個人信息更為嚴重，因此建議將“人肉搜索”行為在刑法中予以規(guī)范。

2.不應(yīng)承擔(dān)刑事責(zé)任。人肉搜索行為只是發(fā)動網(wǎng)友搜集某一個人的個人信息而已，這種行為并沒有觸犯法律。人大代表、華南師范大學(xué)法學(xué)院副院長陳雪明確表示，“如果我想了解一個人的信息資料，我通過我的朋友親戚去打聽，了解到了，這種行為難道也犯法了嗎？這和人肉搜索的性質(zhì)是一樣的，只是大家的手段途徑不一樣而已。”

（二）可能構(gòu)成其他的侵權(quán)行為。

針對“人肉搜索”涉及的種種法律問題，中國人民大學(xué)民法碩士、廣東民生康田律師所王智柱律師指出，涉及公眾人物的信息披露，一般不構(gòu)成侵權(quán)。但由于“人肉搜索”多數(shù)針對普通百姓，即使沒有明確法律規(guī)定，也很可能構(gòu)成侵犯公民名譽權(quán)等民事侵權(quán)。

（三）用于協(xié)助公安機關(guān)辦案不涉及侵權(quán)。

2008年11月9日，一名網(wǎng)民在天涯論壇發(fā)布了一則題為“兩個無恥的小偷，我決不放過你們”的帖子，貼出的火鍋店的監(jiān)控錄像清晰地看到兩名男子：一名男子用衣服做掩護進行盜竊后兩人立刻離開。號召網(wǎng)友人肉搜索找到小偷，“讓他們在痛苦中東躲西藏，惶惶不可終日”。對于這個行為是否侵權(quán)，陜西王炳森律師事務(wù)所律師蔣虎軍認為，公民有將犯罪分子扭送到公安部門的權(quán)利，也有配合警方調(diào)查的義務(wù)。“人肉搜索小偷”的行為不觸及法律底線，這種做法等于協(xié)助公安部門工作。

四、關(guān)于交通肇事逃逸偵破工作應(yīng)用“人肉搜索”的思考

一是合法化。

（一）謹防“善良網(wǎng)民”演變成“網(wǎng)絡(luò)暴民”。網(wǎng)民是“人肉搜索”的基礎(chǔ)，情報信息的來源，其善意的跟帖是“人肉搜索”得以高效運轉(zhuǎn)的前提。但是個別網(wǎng)民在獲知犯罪嫌疑人及其家人的信息后，“義憤填膺”過了頭，往往會“親臨”當(dāng)事人住所，做出過激行為，嚴重影響了當(dāng)事人及其家屬的正常生活，原本善意的舉動演變成違法行徑，“善良網(wǎng)民”悄然過渡為“網(wǎng)絡(luò)暴民”。如2007年的“鐵軍打人事件”，在人肉搜索幾個小時后，當(dāng)事人及其妻子的電話號碼、身份證號碼、家庭住址、工作單位、孩子上學(xué)的學(xué)校全部曝光，個別“憤怒”的網(wǎng)民來到其住所噴油漆、寫大字報，對其家屬進行恐嚇騷擾，導(dǎo)致與此案毫無牽連人正常的工作、學(xué)習(xí)秩序被打破。筆者以為，解決此類事件發(fā)生方法其實很簡單，只需在論壇中添加瀏覽權(quán)限這一技術(shù)手段，讓網(wǎng)民只能看見搜索意愿，能夠跟帖，但是看不見其他人的發(fā)帖內(nèi)容，待到案件偵破后，再以版主的身份發(fā)帖將處理情況給與公示，以表示廣大網(wǎng)民的善意的辛苦沒有白費。這樣一來，網(wǎng)民之間彼此相對獨立，信息流橫向不能貫通，只能在縱向公安機關(guān)與網(wǎng)民的樹狀結(jié)構(gòu)中互聯(lián)互動，演變“網(wǎng)絡(luò)暴民”的信息基礎(chǔ)就不攻自破了。

（二）嚴審發(fā)起“人肉搜索”的必要性。“人肉搜索”是有限的資源，同時也是把“雙刃劍”，只應(yīng)在確有必要發(fā)起的時候采用，發(fā)起前必須慎重考慮案件的敏感程度是否會引起負面炒作和被一些別有用心的人拿來造謠滋事，所以在“人肉搜索”前履行嚴格的審批手續(xù)是必需的。

二是科學(xué)化

（一）發(fā)起“人肉搜索”的準備工作。在需要發(fā)起人肉搜索前，事故處理科應(yīng)主動向市局網(wǎng)監(jiān)處通報案情，根據(jù)實際需要，了解適合的網(wǎng)站和穩(wěn)妥的發(fā)帖形式，尋求技術(shù)操作等方面專業(yè)支持。

（二）發(fā)起人的角色扮演。人肉搜索中的發(fā)起人角色很關(guān)鍵。應(yīng)選擇與網(wǎng)民身份平等，并與案件有聯(lián)系的角色，如受害人、目擊者等。避免直接以征詢破案線索的公安機關(guān)身份出現(xiàn)。在現(xiàn)今，網(wǎng)絡(luò)中的網(wǎng)民的素質(zhì)參差不齊，對協(xié)助公安機關(guān)開展工作持有抵觸情緒的不乏其人，以國家公權(quán)力代表的身份出現(xiàn)在人肉搜索中，往往不如一個無關(guān)人員喚起正義感或共鳴的效果更佳。

（三）群策群力，提高人氣。網(wǎng)絡(luò)里人氣相當(dāng)重要，“人肉搜索”成功案例都是建立在高人氣的基礎(chǔ)上。一個帖子，一個搜索，冷冷清清的數(shù)百人的瀏覽量或十幾條的回復(fù)量，是不足以吸引大量網(wǎng)友參與其中的。所以，在發(fā)起“人肉搜索”時，可考慮動員或安排部分警力對發(fā)起人肉搜索的帖子進行瀏覽和回復(fù)，相信很短時間內(nèi)便可為發(fā)起的搜索積累大量人氣。

盡管“人肉搜索”無論在社會上還是網(wǎng)絡(luò)上爭議頗多，但是不容忽視的是，網(wǎng)民巨大的人力資源確實值得公安機關(guān)重視和挖掘，在互聯(lián)網(wǎng)上“走網(wǎng)民路線”爭取網(wǎng)民的支持，擴大線索來源，拓寬破案途徑，不就是公安工作走群眾路線的延伸嗎？ 總之，調(diào)動一切積極因素，使偵破交通肇事逃逸工作變被動為主動，變辦法少為多途徑，變單打獨斗為整體聯(lián)動，切實提高公安交通管理部門駕馭交通肇事逃逸案件的能力。

由“清網(wǎng)行動”談異地車輛“惹禍”多的原因及對策探討 作者：羅莊大隊 來源： 訪問量：13 時間：2011-7-28 15:45:47 從“清網(wǎng)行動”中發(fā)現(xiàn)的一些問題來看，異地車輛造成的交通事故特別是逃逸事故占有較大的比例，造成不可估量的損失。因此，狠有必要探究其原因，根據(jù)異地車輛異地行車存在的問題和產(chǎn)生事故的各方面原因，采取有效對策措施，預(yù)防和減少異地車輛造成的道路交通事故。

一、異地車輛“惹禍”多的原因

一是駕駛?cè)藢Ξ惖芈窙r不熟悉。駕駛?cè)水惖匦熊?，對異地的線路走向、坡道、橋梁、彎道、公路邊的河流、水庫等情況均不熟悉。對公路交通流量情況，規(guī)律及氣候等自然地理環(huán)境又不太適應(yīng)，因而對不同的道路狀況，在控制車速、轉(zhuǎn)向、會車和應(yīng)急等處理方面，往往不容易做得很恰當(dāng)，而埋下安全隱患。

二是疲勞駕駛。一般而言，異地車輛大多是長途車，因而，也往往造成駕駛?cè)说钠谛熊?。駕駛?cè)水惖匦熊嚕瑢Ξ?dāng)?shù)氐牡缆泛徒煌ōh(huán)境狀況不熟悉，加上長途駕駛，因而要付出比別的駕駛?cè)烁嗟淖⒁饬?，形成更緊張狀態(tài)，加之遠離親友，長距離，長時間或夜間行車，很容易造成駕駛?cè)松怼⑿睦砩系牟贿m和心力疲憊，往往出現(xiàn)精神不集中和疲勞開車等情況。因此駕駛?cè)藦念^到腳，從感知思維到情緒變化，都處于一定的緊張狀態(tài)，長時間駕車更要消耗很大的精力與體力，這就難免踏入疲勞駕駛的雷區(qū)。由于疲勞駕駛不容易被人引起重視的特點，往往會使駕駛?cè)藢Υ水a(chǎn)生麻痹心理，而一旦發(fā)生危害后果就不堪設(shè)想。

三是氣候因素。中國地大物博，廣袤無垠，不同地方的道路、交通、天氣等狀況千差萬別，一些駕駛?cè)嗽诋惖匦熊嚂r，對公路上突然出現(xiàn)的飛沙走石、大雨、大霧、大雪、路面變化等情況，沒有太多應(yīng)變經(jīng)驗，往往措手不及或應(yīng)對措施不當(dāng)，從而引發(fā)事故。

二、預(yù)防和減少異地車輛“惹禍”的對策 一是提高道路安全運行條件，完善交通標志、標線等道路安全設(shè)施，確保行車安全。公路、公安交通管理部門要積極而努力地完善轄區(qū)公路和城市街道各種標志、標線、標牌等交通安全設(shè)施。這是安全行車的基本保障。強化危險道路和事故多發(fā)點段的排查、整治工作，切實提高道路安全行車條件。做到交通標志標線設(shè)臵明顯齊全，科學(xué)合理，醒目得體，使異地駕駛?cè)搜鴺酥尽司€安全經(jīng)過各地轄區(qū)順利到達目的地。

二是加強路面巡邏監(jiān)控，增強科學(xué)的可防性能力。要加大路面巡邏監(jiān)控力度，切實做好轄區(qū)主干道，重要公路以及危險路段、事故多發(fā)路段的排查、整治。切實讓警力下沉保暢通，有效管控和糾正路面動態(tài)交通違法行為，確保行車安全。此外，還要加大對道路交通安全設(shè)施的投入，增強科學(xué)預(yù)防客運交通事故的能力。

三是加大宣傳力度，營造良好輿論氛圍。要在國道、省道主干線沿途加強交通安全豐富多彩的社會化宣傳，開展形式多樣的專題宣傳活動，調(diào)動社會各方面力量，讓交通參與者在參與各類專題活動中進行社會宣傳教育和自我教育。要加強對交通設(shè)施作用與意義的宣傳。在實際行車中，有少數(shù)交通標志、標線仍不為所有駕駛?cè)怂匾?、接受，如對警告標志注意不夠，禁令標志中禁止或限制的部分?nèi)容遵守不夠，輔助標志的內(nèi)容不注意觀察，還沒有完全明白交通標線的含義等。

四是增加指示誘導(dǎo)行人和非機動車通行的設(shè)施，進一步強化非機動車和行人的管理。當(dāng)前，行人違反交通安全法律、法規(guī)的問題較為突出，因行人違法而造成的交通事故明顯上升。費縣大隊針對這種現(xiàn)象，在完善行人交通設(shè)施的同時，強化勤務(wù)管理模式，采取點、線、面相結(jié)合的模式做到高峰定點，低峰巡線。嚴格按照責(zé)任段分段分片，包干到人，明確管理目標，對影響城區(qū)道路交通秩序的突出交通違法行為加大整治力度，從嚴查糾行人亂穿馬路、過街闖信號、不走人行橫道或天橋、翻越隔離護欄等違法現(xiàn)象，并在城區(qū)主要路段輪流進行整治，規(guī)范了城區(qū)主要干道的交通秩序，有效凈化了城區(qū)道路交通環(huán)境。

第四篇：PCR技術(shù)在臨床檢驗中的應(yīng)用

PCR技術(shù)在臨床檢驗中的應(yīng)用

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醫(yī)學(xué)檢驗大致可分為形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、血清免疫學(xué)和分子生物學(xué)幾大類，其分別代表幾代實驗診斷技術(shù)。60年代DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)及半保留復(fù)制模式的出現(xiàn)，70年代基因重組及體外基因克隆技術(shù)、分子雜交技術(shù)的應(yīng)用使分子生物學(xué)在疾病診斷中得到了長足的發(fā)展。特別是1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)，使醫(yī)學(xué)界真正興起了基因診斷技術(shù)熱，成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的又一里程碑。用于臨床檢驗的PCR技術(shù)與經(jīng)典的PCR反應(yīng)在操作上稍有區(qū)別，有其自己的特色。一般在樣品處理上，多采用非離子去污劑一次加熱處理，這種方法對DNA純化有限，但適應(yīng)臨床微量、快速的特點。另外PCR反應(yīng)體系中各組成成份往往都預(yù)分裝到反應(yīng)管中，既減少操作者的工作強度而且也減少了污染的機會，具有極高的使用價值。本公司率先研制并推出單管單人份的PCR診斷試劑，具有開創(chuàng)性意義。這些改進都不影響PCR效果，同樣表現(xiàn)出高特異性、高敏感性、簡便快捷等PCR最優(yōu)秀的特征，在常見傳染病、性病、腫瘤、遺傳病、寄生蟲病、優(yōu)生優(yōu)育、法醫(yī)學(xué)等廣泛領(lǐng)域中有相當(dāng)高的實際應(yīng)用價值。

常見的傳染性疾病有細菌、病毒、衣原體、支原體等，可引起消化、呼吸、循環(huán)、泌尿生殖等不同系統(tǒng)相應(yīng)的病變。消化系統(tǒng)感染性疾病在我國具有代表性意義的有肝炎、胃炎及腸道感染性疾病。引起肝炎的病原體主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它還有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。這幾種肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均為RNA病毒。我國是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病人為世界乙肝病人總數(shù)的50％。乙肝病毒經(jīng)血液傳播，病毒主要在肝細胞中增殖，也可以長期存留在骨髓細胞或外周血白細胞中。通常用PCR法檢測血清中的乙肝病毒。有報道用PCR法可以在淚液、乳汁、精液及血白細胞中檢出乙肝病毒，這些發(fā)現(xiàn)提示其它傳染途經(jīng)存在的可能。PCR法檢測乙肝的優(yōu)勢表現(xiàn)在：①早期診斷，因為PCR擴增極其敏感，理論上可檢出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潛伏期即可被PCR法檢出。②對低持續(xù)感染乙肝病人的診斷，有些乙肝病人體內(nèi)的病毒長期低復(fù)制感染，血清病毒濃度極低，一般酶標試劑無法檢出，可以用PCR法檢出。③療效跟蹤及病程判斷，因為PCR能半定量檢測乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其數(shù)量多少的最直接指標。在治療過程中通過監(jiān)測血清或白細胞中病毒基因存在與否及其動態(tài)變化即能準確地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的濃度很低，丙肝病毒的分離尚未成功。目前用于丙肝病毒檢驗的方法主要是ELISA法測定血清中的HCV抗體。由于HCV尚無法分離純化，所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，這些人工抗原與天然病毒抗原有一定的區(qū)別，理論上是存在假陽性或假陰性。同時血清中抗體的出現(xiàn)及動態(tài)變化與病人病情無線性相關(guān)關(guān)系。RT－PCR技術(shù)使這些困難得到解決。HCV是RNA病毒，需先將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA（RT）后再進行PCR擴增，這種技術(shù)稱之為逆轉(zhuǎn)錄－PCR（RT－PCR）。PCR敏感性高可以檢測出血清中低濃度的病毒，了解病毒在體內(nèi)復(fù)制的動態(tài)狀況。RNA純化要求嚴格，是RT－PCR的技術(shù)關(guān)鍵，本公司目前使用的高效基因釋放劑，聯(lián)合特異性固相基因吸附乳膠顆粒，對樣本中的RNA進行分離純化，使這一問題得到解決。通常用于RNA→cDNA逆轉(zhuǎn)錄的酶大致可以分為二大類，即低溫逆轉(zhuǎn)錄酶，如AMV/MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，高溫逆轉(zhuǎn)錄酶，如Tth酶。Tth酶在錳離子作用下，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，Tth酶活性溫度高，可以使核酸充分線性化，提高逆轉(zhuǎn)錄效率及特異性。Tth酶在鎂離子的作用下，又具有DNA聚合酶活性，從而真正實現(xiàn)單管單酶單人份的擴增要求，這樣就在不降低擴增敏感性的條件下，一步完成擴增，不僅簡化操作，而且又減少污染，提高檢測的準確性。國內(nèi)本公司已采用這種技術(shù)推出單管單酶單人份的RT－PCR診斷試劑。丁型肝炎病毒是缺陷病毒，與乙型肝炎病毒協(xié)同感染。甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒主要存在于急性病人糞便樣本中，戊型肝炎病毒也長期存在于血清中。在PCR檢測時，需注意取材的合理性。在消化道傳染性疾病中，另一類最重要的感染性疾病是幽門螺旋桿菌（HP）所引起的胃炎、胃潰瘍等。HP可以經(jīng)口－口途經(jīng)傳播并定位于胃粘膜上皮細胞，早期表現(xiàn)為淺表性胃炎，可發(fā)展成為胃潰瘍。我國胃炎發(fā)病率之高估計比乙型肝炎更嚴重，對HP的檢測應(yīng)受到廣大醫(yī)務(wù)工作者的重視。對HP的檢測可以用生化法測試尿素酶或用免疫法測試血清中對HP特異性抗體，也可對胃液、胃粘膜樣本進行細菌培養(yǎng)及菌種鑒定。PCR法檢測HP非常敏感且特異性高，有研究發(fā)現(xiàn)可以從病人的唾液或口腔含漱液中檢出HP。PCR法避免了取胃液及胃粘膜，減少病人痛苦，是目前最理想的方法。

呼吸系統(tǒng)感染性疾病主要的有肺結(jié)核、非典型性肺炎等。結(jié)核桿菌感染曾給人類健康帶來很大威脅，一度是較嚴重的致死性疾病之一。解放以后由于對結(jié)核病的預(yù)防的重視，特別是特效抗癆藥物的出現(xiàn)，使結(jié)核病流行基本被控制。近來結(jié)核病有抬頭的趨勢，基原因可能有兩方面，其一是耐藥株的不斷出現(xiàn)，其二是對結(jié)核預(yù)防重視不足。結(jié)核菌痰涂片鏡檢陽性率太低，酶標法又因抗原交叉反應(yīng)易出現(xiàn)假陽性，結(jié)核檢測的金標準是結(jié)核菌培養(yǎng)法。但培養(yǎng)法費時昂貴并且受到用藥的影響，在實際應(yīng)用中受到限制。PCR在結(jié)核菌檢測方面有簡便、敏感、特異的優(yōu)點。一般認為樣本中內(nèi)要有100個左右的結(jié)核菌即可被檢出。目前用于結(jié)核菌PCR診斷的試劑，其引物主要來源于以下基因片段36KD/65KD抗原蛋白基因；染色體重復(fù)插入序列IS986、IS960、IS6110、染色體質(zhì)粒DNA PH7311、PMTB4、P36基因等。其中最常用的是染色體重復(fù)插入序列IS986或IS6110，1990年Hermans首先介紹并使用了IS986基因設(shè)計的引物擴增產(chǎn)物為245BP，研究表明這一基因?qū)θ诵徒Y(jié)核菌有特異性。而后Thierry又介紹了插入序列IS6110基因，并認為這一基因?qū)θ诵徒Y(jié)核菌具有比IS986更高的特異性及敏感性，最適合M.TB的檢測。結(jié)核菌痰標本的PCR檢測應(yīng)注意以下幾種常見的問題。其一，多條帶。即擴增產(chǎn)物電泳后有三條或三條以上的螢光除最前面的引物以外有兩條產(chǎn)物帶，這與插入序列本身各片段長度有差異、結(jié)核菌在治療過程中染色體畸變、斷裂、缺欠及不等位交換有關(guān)。這種擴增結(jié)果的判斷應(yīng)特別注意，凡在陽性對照相應(yīng)位置有明顯條帶的判陽性，否則應(yīng)為陰性，或建議病人過一些時間后再復(fù)檢一次；其二，結(jié)核痰樣本PCR檢測時，要使樣本充分液化，否則痰液中的粘液成份將影響擴增效果，甚至?xí)?dǎo)致嚴重非特異性擴增，電泳結(jié)果呈霧狀；基三，結(jié)核痰樣本PCR檢測結(jié)果可能表現(xiàn)為陽性、陰性交替出現(xiàn)，這與結(jié)核病灶的不規(guī)律排菌有關(guān)。

循環(huán)系統(tǒng)以腸道小RNA病毒感染最具代表意義，如柯薩奇病毒等。這些病毒經(jīng)腸道粘膜、淋巴結(jié)進入血液，最終可定位于心肌細胞中導(dǎo)致心肌炎。目前對這些病毒的血液樣本檢測往往比較困難。PCR用于柯薩奇病毒檢測時因其是RNA病毒所以應(yīng)注意樣本的保存。外在環(huán)境中存在大量RNA酶，病毒脫殼后RNA將被迅速降解。一般用于RNA檢測的血清常溫下不應(yīng)超過24小時，4℃下可保存2天，-20℃下可以保存2月以下。

PCR檢測在性傳播性疾病(STD)的診斷中有較廣泛的應(yīng)用。經(jīng)典的性傳播疾病有梅毒、淋病、腹股溝淋巴肉芽腫、軟銳濕癘、硬下疳等。而在現(xiàn)代STD中、解尿支原體及沙眼衣原體引起的非淋菌性尿道炎（NGU）可能更具有代表性意義。梅毒是由梅毒螺旋體感染布致，首先在局部形成硬軟下疳，布后經(jīng)血行播散到全身，最嚴重的是波及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。感染早期，梅毒螺旋體大量存在于硬下疳中，可以用生理鹽水濕棉簽擦去皮疹表面污物再用鈍刀片輕輕刮去上皮及結(jié)痂，用潔凈棉簽取滲出液樣本作PCR檢測，其敏感性及特異性極高。二期梅毒皮疹中也存在梅毒螺體其取樣方法同埂下疳，三期梅毒皮疹中一般無螺旋體存在，因此III病人及部分無皮疹的I、II期梅毒病人可以取EDTA抗凝全血檢測。淋病是目前發(fā)病率最高的性傳播性疾病之一，由淋病雙球菌引起。淋病雙球菌一般為胞內(nèi)寄生，常見的感染部位為外生殖器、尿道粘膜最常見。在尿道及外生殖器分泌物中有許多非致病的雙菌存在，對分泌物拭子進行涂片鏡檢時，常導(dǎo)致誤診。另外目前非淋球菌性尿道炎的發(fā)病率不斷增加，鑒別診斷特要，培養(yǎng)法準確但費時且費用高，受用藥的影響。PCR法簡便、快捷、準確非常理想。常用的引物多采用外膜蛋白抗原基因、隱性質(zhì)粒DNA或16s RNA基因。16s RNA基因設(shè)計的引物特異性高但其敏感性低；隱性質(zhì)粒設(shè)計的引物敏感性高但偶爾出現(xiàn)多條帶的擴增產(chǎn)物，判斷結(jié)果時應(yīng)以陽性對照為標準，凡在陽性對照相應(yīng)部位有明顯條帶的為陽性，其余均為陰性。以往對沙眼衣原體及解脲支原體的檢測主要靠培養(yǎng)法，費時且昂貴，簡便快速的PCR檢測對其有極高的使用價值。沙眼衣原體、解脲支原體樣本來源主要是尿道及宮頸分泌物拭子，由于分泌物中有許多污物含有PCR擴增的抑制劑，因此每次采樣時盡量避免采集過多膿性分泌物，如果宮頸分泌物太多可以先用濕棉簽將表面的分泌物擦去，再用潔凈的濕棉簽輕壓旋轉(zhuǎn)采集宮頸脫落細胞送檢，其準確性更高。PCR也可以用檢測單純皰疹病毒、EB病毒、乳頭瘤病毒等。引物尖銳濕疣的病毒是人類乳頭瘤（HPV）,可致生殖系統(tǒng)感染的乳頭瘤病毒主要是6、11、16、18、33型。新近研究結(jié)果表明，在乳頭瘤病毒引起的良、惡性生殖器病變中，與血清型的關(guān)系并不密切，經(jīng)常有交叉或多型民時感染。為簡化操作，對其基因?qū)Ρ确治鰧ふ夜餐蛄性O(shè)計的簡并引物可以同時檢出這幾種型別的病毒既簡化操作又減少費用是一種極理想的方法。

我國惡性腫瘤為人口死亡的第一位原因，其中以肺癌、胃癌及食管癌的發(fā)病率最高，占惡性腫瘤死亡總數(shù)的60％以上。引起腫瘤的原因非常復(fù)雜包括外界環(huán)境因素及遺傳背景。外界因此可分為三大類即化學(xué)、物理及生物因素。腫瘤與遺傳有關(guān)的證據(jù)越來越多，除已知的單基因遺傳腫瘤如視網(wǎng)膜細胞瘤、腎母細胞瘤等以外，還在幾乎所有的腫瘤細胞中觀察到原癌基因的重排，這些基因的變化常導(dǎo)致細胞增殖調(diào)控失調(diào)終形成腫瘤。癌基因是指在自然或?qū)嶒灄l件下具有潛在誘導(dǎo)細胞惡性轉(zhuǎn)化的基因，它們是在研究逆轉(zhuǎn)錄病毒時發(fā)現(xiàn)的。目前已知的腫瘤基因有60多種，1969年Hubner根據(jù)Rous(1911)的實驗，在小雞肉瘤濾液中發(fā)現(xiàn)一種能誘導(dǎo)宿主細胞轉(zhuǎn)化的RNA病毒性癌基因（Viral Oncogene）。后來又在其它哺乳動物基因中發(fā)現(xiàn)與病毒癌基因同源序列，這種正常的細胞基因表達產(chǎn)物與細胞生長、增殖、分化有關(guān)。但若被某種因素激活就會轉(zhuǎn)化為有活力的癌基因，通常稱之為原癌基因（Proto Oncogene）。為了與病毒癌基因區(qū)分，分別用V-Onc及C-Onc基因來代表。目前了解較多的癌基因（C-one）有scr基因族、ras基因族、mgc及myb基因族。原癌基因存在于正常細胞中，并表達生物功能，只有在原癌基因被激活后才能誘導(dǎo)細胞轉(zhuǎn)化，可能的原癌基因活化機理有：①點突變，受到射線、化學(xué)因素、生物因素的誘導(dǎo)，這樣微小的變化，就會活化癌基因，活化的基因產(chǎn)物僅有極微的結(jié)構(gòu)差異，但在功能在卻有很大的區(qū)別。②獲得啟動子，原癌基因從病毒基因中獲得啟動子而活化。③基因易位，內(nèi)外界因素能導(dǎo)致染色體的某些基因易位、重排使原來無活性的原癌基因移至某些強的啟動因子或增強子附近而被活化。④原癌基因的過量擴增，原癌基因產(chǎn)物一般與生長因子、生長因子受體、跨膜信息蛋白有關(guān)或功能相近，過度表達時，會因調(diào)控失常而引起細胞癌變。另一類與腫瘤相關(guān)的基因是抑癌基因如P53。抑癌基因較復(fù)雜，作用機理不太清楚。癌基因檢測中常用的分子生物學(xué)技術(shù)有：雜交、DNA分子克隆、PCR擴增及序列分析。PCR擴增簡便、快捷有較強的實用性，甚至可從病人體液樣本中檢測活化的癌基因而不需取活組織，對癌癥的早期診斷有極重要的意義。Ras基因是1964年首次從大鼠肉瘤的急性逆轉(zhuǎn)錄病毒（Harver Murine Sarcoma and Kister Murine Sarcoma Virus）中分離出來取大鼠肉瘤（Rat Sarcoma）的字首命名。1982年首次在人膀胱細胞細胞癌中檢出有轉(zhuǎn)化能力的ras基因與Harver大鼠肉瘤病毒癌基因有同源性稱C-H-ras基因，后從肺細胞癌中發(fā)現(xiàn)了與Kister大鼠肉瘤癌基因同源的C-K-ras基因，從神經(jīng)母細胞中又發(fā)現(xiàn)了N-ras基因。Ras基因激活的最常見方式是點突變。人類原發(fā)腫瘤時點突變主要發(fā)生在密碼子12、13、59、61位。激活后的ras基因不牟自行滅活，根據(jù)其點突變的情況可以基因診斷、療效觀察。用PCR擴增樣本ras原癌基因，再使用雜交法、限制性內(nèi)切酶消化或產(chǎn)物測序法檢測基因的突變情況即可用診斷。P53是抑制癌基因的代表，位于17號染色體短臂上，其產(chǎn)物為53KD分子量的蛋白從此而得名，可分為突變型和野生型，前者為癌基因，后者為抗癌基因。1979年Cane發(fā)現(xiàn)了P53蛋白Eliyahu發(fā)現(xiàn)了p53基因有抑癌作用。P53突變后其產(chǎn)物突變蛋白穩(wěn)定性增加，半衰期較野生型基因產(chǎn)物長，在細胞內(nèi)堆積，可以用免疫組化法測出。PCR-RELP、PCR-SSCP則因方法簡單、快速、特異性高，更具有實用價值。在SSCP分析中，單鏈DNA因堿基序列的變異，導(dǎo)致構(gòu)型改變，在進行凝膠電泳時，其泳動速率發(fā)生改變，從布將變異的DNA與正常DNA區(qū)分開，統(tǒng)計表明100-300bp分子大小的ssDNA突變檢出率可達97％，300-450bp標出率可達69％，因此大于400bp的片段多態(tài)性應(yīng)采用其它方法檢測。

遺傳病是由于遺傳基礎(chǔ)異常而引起的疾病，人類遺傳病約有3000多種，患者占總?cè)丝跀?shù)的10％。遺傳病大概可分為單基因、多基因及染色體遺傳病。常用診斷方法有家系譜分析、染色體檢查（特別是顯帶法）、生物化分析等。隨分子生物學(xué)發(fā)展，基因診斷愈來愈表現(xiàn)出其優(yōu)越性，PCR技術(shù)是基因診斷的主要技術(shù)之一，為快速、準確地檢測人類遺傳病開辟了一個新的途徑，預(yù)計與遺傳相關(guān)的疾病的檢測有80％將在3-5年內(nèi)被PCR法所取代。PCR在遺傳病診斷應(yīng)用中，可以利用引物直接擴增變化的基因產(chǎn)物，也可以結(jié)合應(yīng)用限制內(nèi)切酶，分子雜交及電泳圖譜分析進行診斷。應(yīng)用較為廣泛的有PCR法檢測中海貧血、苯丙酮尿癥、血友病、脆性X綜合癥及性別鑒定等。地中海貧血（Thalassmia）是世界上最常見的單基因遺傳病，不有同類型，以a地中海貧血及在中海貧血最常見。a珠蛋白基因位于11號染色體短臂上，a珠蛋白基因突變致血紅蛋白的全成減少或缺失，表現(xiàn)溶血性貧血，肝脾腫大，在我國發(fā)病率為0.66％，貴州、四川等地高發(fā)可達2.2％。應(yīng)用PCR技術(shù)可以直接檢測突變的基因診斷此病。苯丙酮尿癥（Phenylketouria,PKU）是一種常染色體隱性遺傳病。病人肝臟苯丙氨酸羥化酶嚴重缺乏使苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)化為酷氨酸血癥，出現(xiàn)腦組織損傷，智力障礙。此病患者出生時正常，出生后一經(jīng)確診立即停止母乳喂養(yǎng)，采用低苯丙氨酸飲食治療8-10年不致影響患者智力，但低苯丙氨酸飲食代價之昂貴是一般家庭所不能承受的，關(guān)鍵在于避免患兒出生。因此本病的早期診斷有極其重要的意義。PCR結(jié)合斑點雜交能有效診斷PKU。遺傳性疾病的基因變化很復(fù)雜，單基因固定位點變異布致病的情況很少，因此基因診斷過程中往往需要PCR技術(shù)與限制性內(nèi)切酶、斑點雜交、聚丙烯酰胺膠電泳圖譜分析及擴增產(chǎn)物序列分析結(jié)合，作綜合判斷。

優(yōu)生學(xué)包括基礎(chǔ)優(yōu)生學(xué)、社會優(yōu)生學(xué)、臨床優(yōu)生學(xué)及環(huán)境優(yōu)生學(xué)。孕期檢查及產(chǎn)前診斷是臨床優(yōu)生學(xué)的最重要內(nèi)容之一。孕期檢查除一般項目外還能及時了解孕婦是患有某些對胎兒發(fā)育有嚴重影響的疾病如風(fēng)疹病毒感染、沙眼衣原體、解脲支原體、單純皰疹病毒、巨細胞病毒、弓體感染等，及時發(fā)現(xiàn)及時治療并采取有效措施預(yù)防發(fā)展成為宮內(nèi)感染。PCR技術(shù)對這些病原體的檢測簡便而確實，另外利用PCR技術(shù)可以對地中海貧血、血友病、苯丙酮尿癥、脆性X綜合癥等遺傳性疾病進行宮內(nèi)診斷。可見PCR在優(yōu)生優(yōu)育方面有很高的應(yīng)用價值。

PCR技術(shù)的出現(xiàn)對法醫(yī)學(xué)的發(fā)展也有不可低估的作用。在法醫(yī)物證如血斑、毛發(fā)、組織碎片等的確證，DAN多態(tài)性分析遠比血清學(xué)或等方法確實可靠。早期DNA多態(tài)性分析主要使用Southern印跡雜交的方法。1985年Jeffreys首先采用肌紅基因第一個內(nèi)含子中的串聯(lián)重復(fù)序列作探針，從人的基因庫中篩選出小衛(wèi)量DNA，使用阿交法產(chǎn)生雜交圖譜即DNA指紋。這一技術(shù)成功地應(yīng)用于個人識別及親子鑒定。這種方法仍受到樣本量的限制，當(dāng)樣本DNA數(shù)量不足時或DAN嚴重降解則不能正常檢出。且雜交技術(shù)常使用同位素杯記探針要求較鎬的防護措施。PCR技術(shù)的出現(xiàn)，可以對極少量物證如一根毛發(fā)、一滴血液、極小精斑都可以進行分析。在人類基因組中有許多由10-15bp核心順序構(gòu)成的串聯(lián)重復(fù)DNA序列，具有單位點特征的稱為VNTR結(jié)構(gòu)，多位點串聯(lián)成為衛(wèi)星DNA。由于VNTR在等位基因中的多態(tài)性便構(gòu)成了遺傳標記。使用PCR技術(shù)對其進行擴增結(jié)合對擴增產(chǎn)物凝膠電泳圖譜分析即可進行個人識別及親子鑒定。由2-6核苷組成的重復(fù)串聯(lián)序列稱為微衛(wèi)星。在人類基因組中，微衛(wèi)星更加豐富。微衛(wèi)星的重復(fù)序列比VNTR短，擴增分型簡便，易于自動化，在VNTR或微衛(wèi)星不僅重復(fù)片段的數(shù)量不同而且重復(fù)片段的核苷酸也具有多態(tài)性。在VNTR或微衛(wèi)星多態(tài)性分析時，如再結(jié)合堿基配對分析可以藜得更大量的信息，這一種更有希望的標志即MVR（Microsatllite Variant Repeats）。理論上其對嫌疑人的排除率為99.999％。PCR技術(shù)可以完成替代早期的Southern印跡法進行多態(tài)性分析而且操作簡便，敏感性及準確性都有大幅度的提高。當(dāng)然PCR技術(shù)在法醫(yī)中的應(yīng)用仍在起步階段有許多技術(shù)問題等待解決，如樣本中的抑制劑、檢村中DNA的損報告?zhèn)CR擴增污染等。想念隨著PCR技術(shù)的不斷完善它將在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中有更加廣泛的應(yīng)用。

第五篇：分子生物學(xué)在微生物檢驗中的應(yīng)用(精)

分子生物學(xué)在微生物檢驗中的應(yīng)用

南京軍區(qū)福州總醫(yī)院全軍臨床檢驗研究所

蘭小鵬 世紀是以分子生物學(xué)為代表的生命科學(xué)的時代，近年來,隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的快速發(fā)展,人類基因組計劃的完成,尤其是生物化學(xué)、免疫學(xué)、生物儀器及計算機理論與技術(shù)的進步，分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等各個領(lǐng)域廣泛應(yīng)用, 新的診斷技術(shù)和方法不斷涌現(xiàn)并被廣泛應(yīng)用于微生物檢測，為傳染病的流行病學(xué)調(diào)查、基因的多樣性、微生物的生物學(xué)特性、微生物的致病性和藥物的耐受性、微生物的生物降解能力等各個方面提供了重要的信息。一．核酸雜交法

最初應(yīng)用于微生物檢測的分子生物學(xué)技術(shù)是基因探針方法,它是用帶有同位素標記或非同位素標記的DNA 或RNA 片段來檢測樣本中某一特定微生物核苷酸的方法。核酸雜交有原位雜交、打點雜交、斑點雜交、Sorthern雜交、Northern雜交等,核酸分子探針又可根據(jù)它們的來源和性質(zhì)分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針及人工合成的寡聚核苷酸探針等。其原理是通過標記根據(jù)病原體核酸片段制備的探針與病原體核酸片段雜交,觀察是否產(chǎn)生特異的雜交信號。核酸探針技術(shù)具有特異性好、敏感性高、診斷速度快、操作較為簡便等特點。目前,已建立了多種病原體的核酸雜交檢測方法,尤其是近年來發(fā)展起來的熒光原位雜交技術(shù)(FISH)更為常用。二．質(zhì)粒DNA圖譜分型技術(shù)

細菌質(zhì)粒分析是較早被使用的對病原微生物流行病學(xué)進行調(diào)查的分子分型技術(shù)。這種技術(shù)包括萃取質(zhì)粒DNA ,通過瓊脂糖凝膠電泳分離DNA。由于不同菌株質(zhì)粒DNA序列和大小不同,通過瓊脂糖凝膠電泳分離得到的DNA質(zhì)粒圖譜也將不同,因此,與流行病相關(guān)的分離株能夠被分類分型。質(zhì)粒圖譜分析的再現(xiàn)性和分辨力可通過限制性內(nèi)切酶消化質(zhì)粒而提高。雖然2個不相關(guān)質(zhì)粒有相同的分子量, 但性內(nèi)切酶位點的位置和頻率是不同的。但質(zhì)粒是可移動的非染色體遺傳物質(zhì),細菌能自發(fā)的失去或很容易的獲得,結(jié)果流行病相關(guān)的菌株可以展示不同質(zhì)粒指紋圖譜。許多質(zhì)粒帶有抗性決定因子的基因,存在于轉(zhuǎn)位子上,而轉(zhuǎn)位子很容易丟失或獲得,這同樣可以迅速改變質(zhì)粒DNA組成。產(chǎn)生圖譜的再現(xiàn)性也會由于質(zhì)?？臻g存在的不一致性(超螺旋的、斷口的和線形的)而被影響,而凝膠電泳時具有不同遷移速度。大多數(shù)病原微生物有質(zhì)粒,但沒有質(zhì)粒的就不能用此技術(shù)分型。此外,由于有些分離株中含有1個或2個質(zhì)粒,會使菌株間的分辨力降低。三染色體DNA 限制性內(nèi)切酶分析技術(shù)

染色體DNA經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶消化,消化后的片段再通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離。用限制性內(nèi)切核酸酶BglⅡ和EcoRI等消化病原微生物基因組DNA可以產(chǎn)生大量短的片段。電泳后,將獲得一系列被分離的DNA圖譜。通過比較圖譜,就可以進行菌相似性研究。幾乎所有的病原微生物分離株都可以通過這種方法分型,但由于基因組DNA巨大,酶切后產(chǎn)生的片段眾多,且含有大量的重疊片段,這將導(dǎo)致菌株間圖譜一致性分析產(chǎn)生困難。但若細菌只含一個或少量核糖體操縱子, 則只產(chǎn)生1～ 2條帶, 這限制區(qū)分密切相關(guān)菌株的能力。RFLP分析分辨力低于脈沖場凝膠電泳分型技術(shù)（PFGE）, 且比較復(fù)雜圖譜(數(shù)百條帶)的難度較大。四．DNA 的脈沖場凝膠電泳分型技術(shù)

脈沖場凝膠電泳分型技術(shù)（PFGE）是使用對染色體有很少酶切位點的限制性核酸內(nèi)切酶消化細菌DNA ,產(chǎn)生大的DNA片段(10～800 kb),這些大片段不能通過常規(guī)電泳方法進行有效分離。在電場方向周期改變(脈沖)的凝膠電泳條件下,DNA片段根據(jù)大小有效分離。PFGE產(chǎn)生的染色體DNA圖譜比用那些高頻率切割的限制性內(nèi)切酶產(chǎn)生的圖譜更為簡單清晰。理論上,所有的細菌都能使用PFGE 進行分型分類,結(jié)果具有極高的再現(xiàn)性和分辨率, 常作為分子生物學(xué)分型方法的“金標準”使用。PFGE 也有一些局限,例如所需時間長,使用的試劑非常昂貴,要求專門的儀器等。另外,很小的電泳條件的不同就可以改變每條光譜帶間距離,使用不同凝膠進行電泳得到的結(jié)果也比較復(fù)雜,這為不同實驗室間的結(jié)果比較帶來一定麻煩。五．聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)自1985年發(fā)明以來,因其高度靈敏性和良好的特異性受到了人們的高度重視,各種各樣以PCR 為基礎(chǔ)的DNA序列的擴增和檢測方法得到了迅猛發(fā)展,幾乎已應(yīng)用于基礎(chǔ)研究的各個領(lǐng)域。各種衍生技術(shù)如反轉(zhuǎn)錄PCR(RTR)、多重PCR、巢式PCR、PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCRSSCP)、限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）、隨機擴增的多態(tài)性DNA 技術(shù)(RAPD)和重復(fù)序列PCR技術(shù)(Rep-PCR)、熒光定量PCR等。其中定量PCR 既可以用于臨床感染性疾病的診斷,又可用于監(jiān)測其療效，PCR及其衍生的技術(shù)近年來在病原微生物分型研究上得到了廣泛應(yīng)用。

1.隨機擴增的多態(tài)性DNA 技術(shù)

隨機擴增的多態(tài)性DNA 技術(shù)（RAPD）是一種典型PCR衍生技術(shù), 在低復(fù)性溫度下用短任意序列引物(10～15m ers)擴增有密切同源性的基因組DNA序列, 模板上任意引物雜交點的數(shù)目和位置因種的不同株而異, 理論上特定株形成特定圖譜。基因組在這些雜交區(qū)段如發(fā)生了DNA片段缺失、插入或堿基突變,就可能導(dǎo)致這些特定結(jié)合位點分布發(fā)生相應(yīng)的變化。通過電泳對擴增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性進行檢測、分析就可以反應(yīng)出不同菌株基因組的DNA特點,從而對他們進行分型，RAPD是目前最簡單的DNA分型方法, 分辨力高于RFLP, 但低于Rep－PCR，RAPD技術(shù)的使用范圍也非常廣,分辨結(jié)果也有較好的實驗室再現(xiàn)性。雖然RAPD技術(shù)簡單、快速, 但由于其對引物和DNA濃度、DNA模板質(zhì)量、凝膠電泳和DNA聚合酶類型的變化高度敏感, 故RAPD的重復(fù)性不夠理想。雖然RAPD的分型結(jié)果在不同實驗室間變化較大,分辨力不如PFGE技術(shù),但在疾病暴發(fā)流行時,PAPD仍是一種分析相關(guān)菌株和排除不相關(guān)菌株的良好技術(shù)。2.重復(fù)序列PCR技術(shù)

重復(fù)序列PCR技術(shù)（Rep－PCR是利用細菌基因組中廣泛分布的短重復(fù)序列為引物靶序列,進行PCR擴增,通過對PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果的比較,分析菌株間基因組存在的差異。這些重復(fù)序列在原核生物界廣泛存在,在一些細菌屬和種中是保守的。在這種方式獲得的圖譜中,光譜帶的大小和數(shù)量的不同代表著不同菌株重復(fù)序列間的距離和重復(fù)序列的數(shù)量。已成功地用于分型的細菌重復(fù)DNA序列有腸道菌重復(fù)基因間共有(ERIC)序列、重復(fù)基因外回紋序列(REP)和BOX序列的分析，與其他分類技術(shù)相比,這種技術(shù)有更高的分辨力。研究表明,雖然有時Rep-PCR分辨力稍低,但與PFGE獲得的結(jié)果卻有很好的相關(guān)性。3.免疫PCR 免疫PCR(immuno polymerase chain reaction ,IM PCR)是1992 年Sano 等建立的一種檢測微量抗原的高靈敏度技術(shù)。該技術(shù)把抗原抗體反應(yīng)的高特異性和聚合酶鏈反應(yīng)的高敏感性有機結(jié)合在一起,它的基本原理是用一段已知DNA分子標記抗體作為探針,用此探針與待測抗原反應(yīng), 用PCR擴增粘附在抗原抗體復(fù)合物上的這段DNA分子,電泳定性,根據(jù)特異性PCR產(chǎn)物的有無,來判斷待測抗原是否存在。目前,國內(nèi)外報道的免疫PCR的敏感性一般比現(xiàn)行的ELISA 法高102 ～105 倍。由于PCR產(chǎn)物在抗原量未達到飽和前與抗原抗體復(fù)合物的量成正比,因此免疫PCR 還可用于抗原的半定量試驗。

PCR－ELISA是PCR與ELISA技術(shù)結(jié)合的檢測方法，其綜合了PCR、分子雜交和ELISA三種技術(shù)的優(yōu)點，主要用于檢測樣品中的特定基因。它引入地高辛(或生物素)標記的dNTP或引物進行PCR擴增,利用酶標抗地高辛抗體(或酶標記親和素)進行ELISA檢測,代替了用于常規(guī)PCR產(chǎn)物檢測的電泳方法,方便快捷,易于處理大量樣品,且其靈敏度比使用瓊脂糖凝膠電泳檢測方法高100倍,當(dāng)有適當(dāng)?shù)臉藴势窌r,還可進行定量測定。六．DNA 序列測定

與檢測全染色體的PFGE、Rep－PCR和RAPD分析相比,DNA測序只檢測細菌或真菌株間潛在變化序列的很小一部分。用于辨別菌株的被測序DNA區(qū)域必須滿足以下條件:DNA區(qū)的結(jié)構(gòu)必須是可變序列，兩側(cè)為高度保守區(qū);DNA序列的可變性必須能足以區(qū)分特定種的不同株;DNA序列不能水平轉(zhuǎn)移到其它株。對細菌和真菌, 極少序列滿足這些條件。相反,DNA測序被認為是病毒分型的 “金標準”。DNA測序費用高、需要很高的技術(shù)條件, 而且自動化DNA 測序儀十分昂貴。

七．基于16SrRNA的檢測技術(shù)

自Woese 等于1987年首次運用rRNA分析以來,rRNA數(shù)據(jù)庫快速擴大起來,成為研究細菌多樣性、進化、系統(tǒng)發(fā)育中被廣泛采用的序列。16SrRNA存在于所有原核生物細胞中,它們相對穩(wěn)定且有較高的拷貝數(shù)(每個細胞幾千個拷貝),其序列中含可變區(qū)及高度保守區(qū),因此可設(shè)計群、屬、種特異性的探針。現(xiàn)階段各種常見細菌的16SrRNA基因幾乎全部測序完成,16S rRNA編碼基因的這些特點使之成為較理想的細菌基因分類的靶序列,逐漸成為細菌鑒定、分類的“金標準”。目前, 16SrRNA 檢測技術(shù)已在醫(yī)學(xué)界得到廣泛應(yīng)用,可以用現(xiàn)有病原菌標準菌株制作DGGE(變性梯度凝膠電泳)標準marker , 然后對疑似“病原菌”擴增16SrRNA進行DGGE分析,這樣可以做到快速檢測。八．生物芯片

生物芯片技術(shù)是將生物大分子,如寡核苷酸、cDNA、基因組DNA、肽、抗原以及抗體等固定在諸如硅片、玻璃片、塑料片、凝膠和尼龍膜等固相介質(zhì)上形成生物分子點陣,當(dāng)待測樣品中的生物分子與生物芯片的探針分子發(fā)生雜交或相互作用后,利用激光共聚焦顯微掃描儀對雜交信號進行檢測和分析。微生物檢測基因芯片是指用來檢測樣品中是否含有微生物目的核酸片段的芯片。基于高通量、微型化和平行分析的特點,微生物檢測基因芯片在微生物病原體檢測、種類鑒定、功能基因檢測、基因分型、突變檢測、基因組監(jiān)測等研究領(lǐng)域中發(fā)揮著越來越重要的作用。目前,許多細菌、病毒等病原體的基因組測序已經(jīng)完成,將許多代表各種微生物的特殊基因制成1張芯片,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄就可檢測樣本中有無病原體基因的表達及表達水平,由此判斷病人感染病原、感染進程以及宿主反應(yīng)等。這樣就大大提高了檢測效率。基因芯片診斷病原菌的原理基于細菌的16SrRNA基因的高度保守性,由于RNA易于降解,因此多采用檢測16SrRNA 所對應(yīng)染色體上的16SrDNA序列。對16SrDNA而言,如果出現(xiàn)3 個堿基以上的差異就可以斷定細菌不屬于同一種屬,因此可用于細菌的分類和鑒別。對病毒和耐藥性病原菌的檢測是通過將待測的特定基因(病毒特異性基因和耐藥基因)經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄、PCR、逆轉(zhuǎn)錄、末端標記等處理成標記有熒光分子的核酸分子,然后與芯片上的探針進行雜交,用計算機對雜交信號進行處理,依信號和強度即可得出核酸含量。

液態(tài)芯片（Suspension Array Technology，SAT），又稱微球蛋白芯片（Protein Bead arrays，PBA），是近年來出現(xiàn)的一種新的芯片技術(shù)，也是唯一被美國食品和藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準的用于臨床診斷的生物芯片。其原理是用兩種熒光染料按照不同比例將直徑為5.6um的微球（beads/microfluorospheres）染成100種染色，每種顏色的微球共價結(jié)合一種生物探針，可以是抗原、抗體、配體，也可以是核酸或酶，分別針對一種待檢物?；旌陷d有100種不同顏色的微球，就可以在一個反應(yīng)孔里同時完成100種不同的生物反應(yīng)。隨后微球成單列通過兩束激光照射的管道，計算機采集并處理每種顏色微球的熒光強度變化就可以分別對每個待測物進行定性或定量的檢測，該系統(tǒng)可用于多種微生物抗原、抗體和特定基因的聯(lián)合檢測，與固態(tài)芯片相比，液態(tài)芯片在反應(yīng)動力學(xué)、反應(yīng)速度、檢測敏感性、穩(wěn)定性以及自動化程度方面都有較大的優(yōu)越性，因此不少學(xué)者看好液態(tài)芯片的應(yīng)用前景。九．生物傳感器

生物傳感器是將新興的傳感器技術(shù)和分子診斷技術(shù)相結(jié)合而成的一種新技術(shù),是現(xiàn)代臨床檢驗診斷發(fā)展的一個新方向。由于生物傳感器檢測準確、操作簡便等特點,近年來已經(jīng)在許多領(lǐng)域取得了很大的進展,在生物分子相互作用、藥物篩選、臨床診斷、食物檢測等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用，其中臨床中用于病原體檢測的以DNA生物傳感器最為常見。盡管生物傳感器作為一種新的傳感元件近年來得到了很大的發(fā)展,許多光化學(xué)、電化學(xué)以及壓電晶體都相繼在生物傳感器中得到應(yīng)用。與常規(guī)的核酸和蛋白質(zhì)檢測相比,具有檢測準確、操作簡單等特點,但由于它存在靈敏度不夠、容易受雜質(zhì)干擾等缺點,隨著研究的進一步深化和技術(shù)方法的改進,這些問題將會得到解決。

十.蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù) 蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)是隨著蛋白質(zhì)組學(xué)興起的一種新技術(shù)，其中表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜蛋白芯片技術(shù)(SELDI-TOF-MS，下稱SELDI-TOF-MS)是由T.William Hutchens 和 Tai-Tung Yip等科學(xué)家在上世紀90年代早期所創(chuàng)立的一種蛋白指紋圖譜分析技術(shù)，并獲得了2002年諾貝爾化學(xué)獎，為研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、屬性、功能提供了高效而可靠的技術(shù)平臺。其原理是利用各種方法（共價鍵、電荷等）將蛋白“富集”到芯片表面，在激光的轟擊下，蛋白解吸附并電離成帶電粒子，并在電場作用下飛行，其飛行單位距離的時間取決于其所帶電荷數(shù)量和其分子量之比（質(zhì)荷比），從而達到分離和分析蛋白質(zhì)的目的。該技術(shù)是目前最有前途的比較蛋白質(zhì)組分析方法，為蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了一個利器，具有獨特的優(yōu)勢和能力：可直接用粗生物樣品（血清、尿、體液）進行分析、可同時快速發(fā)現(xiàn)多個生物標記物、具有高通量的驗證能力、能發(fā)現(xiàn)低豐度蛋白質(zhì)（靈敏度高達fmol/ml），與“雙相電泳加飛行質(zhì)譜”相比，除了有相似功能外，并可增加測定疏水蛋白質(zhì)，可在同一系統(tǒng)中集發(fā)現(xiàn)和檢測為一體，SELDI在微生物檢驗方面將發(fā)揮重要的作用。十一.適體技術(shù)

1990年,Tuerk和Gold[1]分別獨立研制了一種新型的體外篩選技術(shù),即指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)(Systematic evolution of ligand by exponential enrichment, SELEX),用于研究小分子核酸與靶物質(zhì)相結(jié)合的部位、序列及空間構(gòu)像。適體（aptamer），又稱適配分子或適配子，實質(zhì)是運用SELEX技術(shù)從人工體外合成的隨機寡核苷酸序列庫中反復(fù)篩選得到的能以極高的親和力和特異性與靶分子結(jié)合的一段寡核苷酸序列。

由于適體分子可用酶、放射性核素、熒光物質(zhì)及生物素等標記以作為檢測分子，它協(xié)同傳統(tǒng)的單克隆抗體在流式細胞技術(shù)、生物傳感器、熒光偏振、分子燈塔和毛細管電泳等檢測技術(shù)上得到了廣泛的運用。

適體與抗體相比，具有針對靶分子的范圍廣、親和力和特異性高、性能穩(wěn)定、便于修飾等諸多優(yōu)點。利用針對微生物的特定蛋白和基因的適體對微生物進行鑒定和分型以及耐藥基因的檢測方面，適體將具有良好的前景，有的學(xué)者認為，未來適體有可能取代抗體。

十二.結(jié)語

長期以來,人們試圖找到一種既簡便又快速、又有足夠分辨力的技術(shù)來鑒別和區(qū)分各種病原微生物，各種新方法和新技術(shù)不斷涌現(xiàn)，但每一種方法都有其局限性，為了彌補各自的不足，使用一種以上的技術(shù)即采用多種方法聯(lián)合使用的策略,一種技術(shù)的缺點會被其他技術(shù)的優(yōu)點所代替。選擇檢測方法應(yīng)考慮到自身所擁有的條件,檢測所要求達到的靈敏度,而提高靈敏度和去除假陽性是檢測方法發(fā)展的趨勢。近年來,隨著計算機技術(shù)的不斷發(fā)展,臨床病原菌檢測將向著簡便、快速、高通量、自動化的方向發(fā)展。分子生物學(xué)技術(shù)通過自動化儀器的使用,將在病原菌診斷、鑒定和耐藥基因檢測方面越來越廣泛地應(yīng)用于臨床。