第一篇：熒光愛自然

熒光愛自然

深夜中，星星布滿天幕，月亮與星星講述著自然的故事，一顆流星劃過天際，微乎的熒光照耀林云。。。

螢火蟲是大自然最特別的女兒，逍遙于叢林中，給大自然傳遞愛的信息。

螢火蟲總是位神秘的“夜行者”。它有薄薄的翅膀，黑夜遮住了它的面目，只有淺淺的黃光、綠光為它美襯。陽光使它睜不開眼睛，惟有夜晚的深邃讓它著迷，也唯有夜晚的冰涼來降降它腹中的“燈火”的獨特。螢火蟲在夜晚低唱，它想用它的絕唱來贊美它偉大的母親——大自然。它不喜歡青蛙、蟬的“噪音交響曲”，它喜歡與風(fēng)兒與星星的“幽靜交響樂”。它行于夜間，掛著斗篷，只為那一份僅屬于自然萬物的寧靜。

螢火蟲也是位低調(diào)的“美容師”。它與伙伴用身上的熒光照耀草叢邊上，像一顆顆冷綠的露珠點綴；飛過小溪，像一盞盞燈火溶于水，不見蹤影；飛在大樹上，像一個個發(fā)光的果實熟得可摘。

流螢成群地在夜空中飛舞，像星的河流，燈的長陣；流螢閃爍在林梢，忽出忽沒，像樹林里藏著晶晶瑩瑩的藍(lán)寶石，把夜色點綴得分外瑰麗神奇。

螢火蟲還是位無私的“短命者”。人家說：“曇花一現(xiàn)。”曇花在太陽初升于地平線，就閉了花瓣，落了青葉，但至少讓人們欣賞到了它獨特的美和誘人的芬芳。而螢火蟲直至它光輝的消逝而逝去了僅一夜的生命，那斑點的光兒并不持久，被夜給融化了?？晌灮鹣x死在夜里，又有誰尋覓到它在夜晚時給予的光的奉獻？但是它雖然短命，卻很欣然——因為螢火蟲為自然而生，為快樂而去。在夜晚與白天的交接，它滿足了，也釋然了。

螢火蟲的光芒悄悄地流于水中，不留半點痕跡，“銀燭秋光冷畫屏，輕羅小扇撲流螢，”萬般柔情溶于水中，只求星星粲然一笑——這是螢火蟲不變的信條。

初二:劉哲

第二篇：我愛自然

我愛自然

在一個八面環(huán)山的狹長平地上，座落著一座寧靜的小城鎮(zhèn)，鎮(zhèn)的南面有一個僻靜的村莊，村莊里有一戶和睦的人家，那人家中有一個愛自然的年輕人，那個年輕人就是我。

我愛自然，因為春天的生機盎然，因為夏天的綠意勃發(fā)，因為秋天的安寧沉靜，因為冬天的萬物萌生。

春天，我喜歡游逛于山林田埂，看著那樹上嫩生的芽兒，忍不住湊過去聞一聞--清新便油然而生。閉上眼，聆聽那遠(yuǎn)近的鳥語，那淙淙的溪流。坐下來，深呼吸，一陣清爽洋溢在心靈。站起來，狂奔一陣，用盡全力大喊幾聲，就像嫩芽突破表皮，花瓣脹破骨朵。這就是大自然的春天，也是我的春天，我已然成為春天的一根小草，跟著萬物享受春天。

夏天，我喜歡去水庫邊釣魚。赤著雙腳坐在樹陰下，樹外風(fēng)和日麗，樹下涼風(fēng)習(xí)習(xí)，草兒撫弄我的雙腳，癢癢的。放下魚餌，把魚竿插在一邊，四周映得我好不舒服，抬頭張望一番，滿眼都是綠色。水光山色，回清倒影，令我心曠神怡。水面上游弋著幾只野鴨，忽然天上飛過一只蒼鷹，全都鉆進水里去了，再一看時，已經(jīng)到了那頭。收鉤之前，我仍不忘跳入水中，暢游一番，與同伴在水中嬉戲，遠(yuǎn)處的野鴨也跟著打鬧起來。野鴨也和我一起歡樂，我于是感到自己融入了大自然。

秋天，攜著家人，漫步于山間小徑。時而一排大雁掠過頭頂，時而幾只野雛在林中跳躍，拖著又長又漂亮的尾羽，有點飛天鳳凰的味道。水流變得細(xì)了，樹葉黃了，田野空空的，只有幾個小孩子在玩泥巴，挖泥鰍，歡快的笑聲，把我的思緒帶回到了童年。山上的一片松樹卻是綠意不減，頑強拼搏，抗拒枯黃。一切都是那么寂靜，喜歡寂靜的我已經(jīng)沉寂在寂靜之中。

冬天，雪花飄飛，令人想起唐人詩句忽如一夜春風(fēng)來，千樹萬樹梨花開。雪后的村莊更顯寧靜。遠(yuǎn)遠(yuǎn)看見一片梅林，生機盎然，再不是驛外斷橋邊，寂寞開無主的寒梅，而是飛雪迎春到，風(fēng)雨送春歸的早梅，她綻放于懸崖，俏麗在隆冬，與松柏爭雄，和嚴(yán)寒斗智。慢慢的，冰消雪化，萬物復(fù)蘇，山也朗嫩，水也清秀。冬天的自然讓我感到希望，使我獲得力量。

自然孕育了愛自然的我，我也會更加喜愛，珍愛，熱愛自然。

第三篇：熒光夜跑策劃書

東北大學(xué)2016年“青春在行動 三走贏未來”

之“熒月奔跑 閃耀東大”

策

劃

書

東北大學(xué)校團委能力拓展中心

2016.3.17

一、活動背景：

當(dāng)今社會，國民素質(zhì)日趨下滑，尤其是大學(xué)生，身體素質(zhì)不容樂觀，為深入貫徹落實黨的十八屆三中全會關(guān)于“強化體育課和課外鍛煉，促進青少年身心健康，體魄強健”的精神，積極響應(yīng)共青團中央、教育部、國家體育總局、全國學(xué)聯(lián)聯(lián)合下發(fā)的《關(guān)于深入開展大學(xué)生“走下網(wǎng)絡(luò)，走出宿舍，走向操場”主題群眾性課外體育鍛煉活動的指導(dǎo)意見》的文件精神，做好“走下網(wǎng)絡(luò)，走出宿舍，走向操場”主題群眾性課外體育鍛煉活動，充分享受陽光與體育的樂趣，以展現(xiàn)大學(xué)生的激情與活力,幫助同學(xué)們形成健康體魄，培育團隊意識和拼搏精神。在東北大學(xué)的校園，在充滿魅力的夜晚，讓我們迎著月光，奔走在校園的各個角落！特此發(fā)起了這次“熒光夜跑”的體育奔跑活動。

二、活動目的及意義

以健康第一為指導(dǎo)思想，響應(yīng)“走下網(wǎng)絡(luò)，走出宿舍，走向操場”三走活動的號召，幫助東大學(xué)生重新把體育鍛煉重視起來，把身體素質(zhì)提上去。希望通過本次熒光夜跑，讓大學(xué)生意識到體育鍛煉的重要性，真正做到“走下網(wǎng)絡(luò)，走出宿舍，走向操場”，讓學(xué)生除了手機電腦有更多的娛樂活動，提高同學(xué)們的身體素質(zhì)，加強同學(xué)們的凝聚力，讓同學(xué)們更加團結(jié)并釋放壓力，邁向健康的學(xué)習(xí)生活。也希望通過本次活動，能有更多的人對能力拓展中心有更深入的了解。為以后社團組織之間的友好聯(lián)系以及新人招新打下基礎(chǔ)。

三、主辦單位：

東北大學(xué)校團委

四、承辦單位

東北大學(xué)能力拓展中心

五、活動內(nèi)容

（一）宣傳與報名

1.在能力拓展中心微信號推送關(guān)于保護環(huán)境倡議書和熒光夜跑的通知。

2.報名采取線上報名和現(xiàn)場報名兩種方式，關(guān)注能力拓展中心微信號，回復(fù)熒光夜跑即可填寫報名信息?；?活動當(dāng)天以個人形式現(xiàn)場報名。

3.本次活動，鼓勵以寢室為四人或者兩對情侶組隊參加，每個隊伍四人，設(shè)隊長一名。4.利用條幅,海報進行宣傳,并在大活門口進行宣傳和發(fā)放紙質(zhì)報名表。

（二）活動形式

一、活動名稱：一指禪

在健康運動日益盛行的當(dāng)下，讓自己運動起來成為人類的共識，所有人都在為之搖旗吶喊著。而在泱泱之華夏，也有無數(shù)青年志士在為健康運動的普及貢獻著力量。一指禪，是南少林的護寺神功，而應(yīng)運而生的，卻有神功——健康運動一指禪，正醞釀著神力，造化著眾生。此刻的你，正得到了一指禪神功傳承的機會，是麻木不仁坐以待斃，還是滿腔熱情奮戰(zhàn)到底，The following is yours!活動用具：三人四足綁帶*3套，桌子*3+logo，紙箱*3，七巧板*3，秒表*3，擴音器*1 活動規(guī)則：每隊選出兩個人，用繃帶組成兩人三足，經(jīng)過一段距離（根據(jù)場地及現(xiàn)場情況定）。到達(dá)目的地后，其中一個人與另兩個人用各一根手指從箱子里夾出來七巧板并放在桌子上，拼好指定形狀（由工作人員指定）中的一種，在規(guī)定時間內(nèi)（七巧板階段為5分鐘）完成即為通過。活動時間：5分鐘左右

工作人員：裁判三人，講解員三人，蓋章一人。地點：一舍籃球場

二，活動名稱：假如沒有愛迪生

愛迪生發(fā)明了電燈，讓人們在黑夜之中擁抱光明。使人們即使在黑夜中也能奔跑，鍛煉著自己的身體，保持著健康。假如沒有了燈光，人們是否還能那樣自在的運動？假如沒有愛迪生，我們要怎么的在黑夜中完成任務(wù)？在黑暗中踢球似乎別樣的刺激，還在等什么。趕緊戴上眼罩，感受沒有光的世界并且將球一舉踢進框！

道具:(四張桌子，一個球框，一個球，四個眼罩)×4+兩張桌子+活動海報、熒光棒等

規(guī)則:隊員按照順序排好，第一個人帶上眼罩第二個人指揮。首先第一個人在起點轉(zhuǎn)5圈，然后由第二個人指揮第一個人穿過障礙將球踢進球框。如果失敗則由第二個人接替。直到踢進四個球。

工作人員:裁判四人，講解員一人，任務(wù)卡物品發(fā)放一人，蓋章一人。

注:球框尺寸70×100，每個活動場地間隔2米，每個場地約10米×4米，在每一個場地兩側(cè)拉起防護欄。

地點:劉長春體育館 三，活動名稱：乾坤大挪移

隨著社會的發(fā)展，知識的爆發(fā)式增長，很難有一個人能夠掌握在現(xiàn)代社會的全部能力了，因此個人的單打獨斗已經(jīng)無法跟隨社會的潮流。而協(xié)同運動作為一種新型運動潮流，無疑是一種健康的運動方式。乾坤大挪移是武俠小說中的蓋世武功，我們把它運用到生活中，就是把每個人的力量轉(zhuǎn)移到一起，想著同一個目標(biāo)進發(fā)。此刻的你，面對眼前的這一個小小的挑戰(zhàn)，你的乾坤大挪移心法是否在你在你心中忍不住要爆發(fā)了呢？來吧，盡情爆發(fā)吧！

道具：長桌3張，氣球200，黃色膠帶一卷。

規(guī)則：由四人組成參賽隊站成一列用胸部和背部夾起三個一定大小氣球越過兩道黃線之間的距離（五米）。中途氣球有掉落，破損，用胳膊手掌等其他部位或非參賽隊員有觸碰的，視為失敗需從頭開始。開始時氣球須由工作人員放置好氣球。

工作人員：裁判三人，任務(wù)卡，物品發(fā)放一人，蓋章一人，講解員一人。

地點：大活門口

注意事項：若兩次嘗試未成功，需選兩人用面對面將球夾破（一個）。防止隊員跌倒磕傷。

四，活動名稱：我愛記歌詞

一步兩步一步兩步 一步一步似爪牙 似魔鬼的步伐 摩擦 摩擦

在這光滑的地上摩擦

我給自己打著節(jié)拍，大家來記歌詞呀。摩擦 摩擦

在這個光亮的夜晚，歌聲伴著運動是最好的方法 與音樂為伴，與運動為舞，難忘今霄。

活動用具：音響話筒×2，寫有歌曲名歌詞詞紙條,桌子兩張，筆記本×1布條圍欄3條。

工作人員:8人。兩人操控電腦，兩人負(fù)責(zé)發(fā)放任務(wù)卡，獎品，蓋章，證書等等，熒光棒，一人蓋章。一名主持人（包括講解規(guī)則），2人協(xié)調(diào)秩序，一人裁判。

活動規(guī)則與流程：主持人宣布規(guī)則，協(xié)調(diào)各隊站好。各隊占于各自場地，距線3米。先放歌曲前奏，主持人叫停，主持人發(fā)出開始指令，各隊中先跑到規(guī)定位置者（有爭議的由裁判判定）獲得接歌權(quán)利。每個隊成功答對三道題即可獲得蓋章。

（三）自拍集贊活動

參賽隊伍從19:30開始，可以參加自拍集贊活動，在規(guī)定時間點，集贊數(shù)達(dá)到規(guī)定的贊數(shù)即可獲得校團委提供的大獎。

開獎時間: 19:50 20:20 20:50。集贊數(shù)要求：30贊 70贊 100贊

獎品數(shù)量：三等獎16個，二等獎8個，一等獎四個?；顒幼⒁馐马?1.集贊的時候四個地點保持同步，同時開獎。2.集贊數(shù)必須與要求相同，多或者少都不可以。

（四）活動認(rèn)證證書

在規(guī)定時間內(nèi)，在每個體驗地點挑戰(zhàn)成功的隊伍或個人，均可在人物卡上 獲得一枚印章，在體驗四個地點之后，在任意地點均可獲得由校團委認(rèn)證的 熒光夜跑參與證書。

六、活動預(yù)算

獎狀

0.6元/張 *500=30元 條幅（80cm*10米）=80元

熒光牛角

1.38元/個*100+稅（138*0.06）=146.28元 熒光棒

500個/71.99元*4+稅（288*0.06）=305.28元

急救箱（一個30元，創(chuàng)可貼一盒5元，云南白藥噴霧沖劑38元，消毒液5元，繃 帶包5元，棉簽一包3元，總計86元）水

10元/箱*10=100元 氣球

40元

背包

19.9元/個*16=320元 手環(huán)

69元/個*8=552元 小米稱

99元/個*4=396元 共計：2055.56元

七、注意事項

1.活動進行中，若發(fā)現(xiàn)有突發(fā)事件，受傷等嚴(yán)重情況，應(yīng)立即停止，附近的工作人員或旁邊的同學(xué)幫助協(xié)助，送往醫(yī)務(wù)人員等處及時處理，防止意外的再一次的發(fā)生。

2.會場秩序?qū)⒂刹邉澆扛墒戮S持，若活動期間有人發(fā)生爭執(zhí)，破壞氣氛，由工作人員出面協(xié)調(diào)。

3.如熒光粉不慎掉入眼，口，鼻，耳中請立即用清水沖洗，進行稀釋。如眼睛紅腫，疼痛可先用氯霉素鹽酸消，并及時送醫(yī)。

第四篇：熒光PCR檢測原理

實時熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光基團，利用熒光信號來實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板濃度進行定量分析。其特點有：

(1)用產(chǎn)生熒光信號的指示劑顯示擴增產(chǎn)物的量，進行實時動態(tài)連續(xù)的熒光監(jiān)測，避免終點定量的不準(zhǔn)確性，并且消除了標(biāo)本和產(chǎn)物的污染，且無復(fù)雜的產(chǎn)物后續(xù)處理過程。

(2)熒光信號通過熒光染料嵌入雙鏈DNA，或熒光探針特異結(jié)合木得檢測物等方法獲得，打打提高了檢測的靈敏度、特異性和精確性。Real-time O-PCR可以應(yīng)用于mRNA表達(dá)的研究、DNA拷貝數(shù)的檢測、單核苷酸多態(tài)性的測定、細(xì)胞因子的表達(dá)分析、腫瘤耐藥基因表達(dá)的研究以及病毒感染的定量監(jiān)測。實時熒光定量PCR技術(shù)的基本原理

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光基團，這些熒光物質(zhì)有其特定的波長。儀器可以自動檢出，利用熒光信號積累，實時監(jiān)測整個PCR進程，在PCR循環(huán)中，測量的信號將作為熒光閾值的坐標(biāo)。并且引入一個——Ct值（Threshold cycle）概念，Ct值是指產(chǎn)生可被檢測到得熒光信號所需的最小循環(huán)數(shù)，是在PCR循環(huán)過程中熒光信號由本底開始進入指數(shù)增長階段的拐點所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。熒光閾值相當(dāng)于基線熒光信號的平均信號標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。一般認(rèn)為在熒光閾值以上所測出的熒光信號是一個可信的信號，可以用于定義一個樣本的Ct值。通常用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的Ct值來產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后計算相對方程式。

方程式的斜度可以用來檢查PCR的效率，所有標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸分析需要存在一個高相關(guān)系數(shù)（R2＞0.99），這樣才能認(rèn)為實驗的過程和數(shù)據(jù)是可信的，使用這個方程式計算出未知樣本的初始模板量。實時熒光定量PCR儀都有軟件，可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中自動地計算出未知樣本的初始模板量。實時熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用 1.基因工程研究領(lǐng)域

① 基因表達(dá)研究：對β地中海貧血癥患者β與γ珠蛋白mRNA水平進行檢測，其結(jié)果特異性強、定量準(zhǔn)確，為了解β地中海貧血的分子病理機制及其臨床診斷提供了可靠的檢測數(shù)據(jù)。

② 轉(zhuǎn)基因研究：利用兩種發(fā)光探針及適當(dāng)?shù)难h(huán)閾值，擴增一個轉(zhuǎn)移后的基因和一個對照基因，以分析轉(zhuǎn)基因老鼠接合性。該方法為45個轉(zhuǎn)基因動物的同型結(jié)合及異質(zhì)結(jié)合提供了明確的鑒定結(jié)果。通過實時定量PCR檢測，同型結(jié)合的異質(zhì)接合動物交配后其子代中轉(zhuǎn)基因的傳遞情況符合孟德爾遺傳規(guī)律。這項技術(shù)在轉(zhuǎn)基因動物繁育及基因劑量功能效應(yīng)實驗中將有很大的用途。③ 單核苷酸多態(tài)性（SNP）及突變分析：實時熒光定量PCR一個誘人的應(yīng)用前景是用于檢測基于兩條探針和基因組的不穩(wěn)定性。基因突變基于兩條探針，一條探針橫跨突變點，另一條為錨定探針，與無突變位點的靶序列雜交。兩條探針用兩種不同的發(fā)光基團標(biāo)記。如靶序列中無突變，探針雜交便完全配對，如有突變，則探針與靶序列不完全配對，會降低雜交體得穩(wěn)定性，從而降低其熔解溫度（Tm）。這樣便可對突變和多態(tài)性進行分析。2.醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域

① 病原體檢測：由于實時熒光定量PCR方法可靠性和重復(fù)性好，并且操作簡便、快速、結(jié)果判斷客觀，目前，人們用此方法對人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、結(jié)核桿菌、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、流感病毒A、流感病毒B等病原體的檢測。熒光定量PCR問世后的幾年中，積累了大量有關(guān)病原體核酸量與感染性疾病發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后之間關(guān)系的資料，這些研究資料不斷豐富，將形成感染性疾病的臨床分子診斷標(biāo)準(zhǔn)。

② 藥物療效考核：利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測臨床樣品中與抗藥性相關(guān)的基因的表達(dá)。結(jié)果證明，實時熒光定量PCR系統(tǒng)是定量檢測抗藥基因表達(dá)的可靠方法，應(yīng)用這種技術(shù)可以預(yù)測化療將引起的反應(yīng)。

③ 腫瘤基因檢測：腫瘤的本質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)基因發(fā)生了變化，是一種多基因異常的疾病，這些異常變化用實時熒光定量PCR方法都可以檢測出來。

目前用此方法進行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病bcr/abl融合基因、腫瘤MDRI基因、白血病WTI基因、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測。隨著與腫瘤相關(guān)的新基因的不斷發(fā)現(xiàn)。熒光定量PCR技術(shù)將會在腫瘤的研究中發(fā)揮更大的作用。3.其他領(lǐng)域

用實時熒光定量PCR方法對免疫組分進行分析是其應(yīng)用的重要方面。

所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。檢測方法

1.SYBRGreenⅠ法： 在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

PCR產(chǎn)物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴增產(chǎn)物的單一性）2.TaqMan探針法：

探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。服務(wù)流程

1.客戶認(rèn)真寫好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息； 2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款（30-50%)；

3.設(shè)計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）； 4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄；

5.PCR預(yù)實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率； 6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測； 7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報告。收費標(biāo)準(zhǔn)

優(yōu)惠包干價：120元/樣/基因（SYBRgreenI法，相對定量）

（含RNA提取，反轉(zhuǎn)錄，引物合成費用，上機測試費用（3個重復(fù)）；一個內(nèi)參免費（內(nèi)參3個重復(fù)）Ct值（Cycle threshold，循環(huán)閾值）的含義為：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

（如圖1所示）。

1.熒光閾值（threshold）的設(shè)定

PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，熒光閾值的缺省（默認(rèn)）設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍，即：threshold = 10*SDcycle 3-15 2.Ct值與起始模板的關(guān)系

每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系，公式如下。Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)n為擴增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)，X0為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達(dá)到閾值強度時擴增產(chǎn)物的量。

起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標(biāo)代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下： 1.TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術(shù)平臺。

2.SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。3.分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光。1．傳統(tǒng)定量PCR方法簡介

1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。2）競爭法：選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

3）PCR－ELISA法：利用地高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗地高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。2．內(nèi)標(biāo)在傳統(tǒng)定量中的作用

由于傳統(tǒng)定量方法都是終點檢測，即PCR到達(dá)平臺期后進行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達(dá)平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗，所得結(jié)果有很大差異，因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。3．內(nèi)標(biāo)對定量PCR的影響

若在待測樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標(biāo)，則PCR反應(yīng)變?yōu)殡p重PCR，雙重PCR反應(yīng)中存在兩種模板之間的干擾和競爭，尤其當(dāng)兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時，這種競爭會表現(xiàn)得更為顯著。但由于待測樣品的起始拷貝數(shù)是未知的，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內(nèi)標(biāo)。也正是這個原因，傳統(tǒng)定量方法雖然加入內(nèi)標(biāo)，但仍然只是一種半定量的方法。實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的： 1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。各級各類醫(yī)療機構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。

由于qPCR是實時定量檢測致病病原體基因核酸，因此它比化學(xué)發(fā)光、時間分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨到優(yōu)勢。

第五篇：自然的愛-班主任工作藝術(shù)

自然的愛

文/黃濤

高爾基說：“愛孩子，這是連母雞都能做到的事情。”而人與雞不同的是講究了愛的方法，掌握了彼此溝通交流的技巧。面對學(xué)生我們付于真愛，那么草木也會被我們動情！我們以什么樣的愛才是真愛呢？那就是自然的、無痕的愛。在教學(xué)中我身邊有的老師是這樣施予學(xué)生愛！

一、愛在無言中！

有一天這位老師登上講臺，猛然看見講臺上放著一個禮品盒，上面寫著“贈給×老師”的字樣。老師很高興，當(dāng)眾打開禮品盒。突然，從盒里跳出一只青蛙，一動不動地蹲在講桌上--原來是場惡作劇。這時，一雙雙眼睛盯著老師，看她如何處理這一突發(fā)事件。這時，她沉著冷靜，沒有露出責(zé)怪學(xué)生的任何表情，而是借題發(fā)揮，講起了青蛙的外表、生活習(xí)性及作用功能，并端著青蛙讓學(xué)生--觀察，還結(jié)合說明文的教學(xué)，安排了介紹青蛙的課外練筆，最后還感謝為這一節(jié)課提供禮物的同學(xué)。以后，老師注意到：教室里少了幾個搗蛋的學(xué)生，多了幾雙認(rèn)真聽講的眼睛。后來，幾個學(xué)生深深地向這位老師鞠躬致謝，感謝老師不僅教給了他們知識，還使他們學(xué)會了怎樣做人，怎樣尊重人。

在教學(xué)中會發(fā)生許多事情是我們難以預(yù)料的，這時就需要教師的機智。教師的隨機應(yīng)變是在冷靜沉著的心理狀態(tài)下產(chǎn)生的。無論發(fā)生什么事，教師都要善于控制自己的情緒，心平氣和，這樣才有助于果斷地作出反應(yīng)，讓學(xué)生在簡單明確、堅定自信的話語中明白道理；在安靜和善、關(guān)懷說服的態(tài)度下受到感染，從而更好地接受教師的要求。這樣的教學(xué)也讓學(xué)生在實事中體會到教師博大的愛。愛在無言中！

二、愛在細(xì)微處！

那天上課的時候，一位同學(xué)的手機響了?！澳悴挥庙戔彛€不到下課的時間呢！”老師通常都不會直接批評學(xué)生，他們都是大學(xué)生了，知道該怎么做。遺憾的是他的手機又響了，這一次我的臉上有不悅的神色了：“請關(guān)機！”更遺憾的是，他的手機再次響起。于是，我有一大堆惡毒的話出口：“告訴你，別以為本老師對你沒有辦法。我會在你的期末試卷上寫道：因為你的手機，所以你得0分。別找我討公道，你連續(xù)3次不公道了。我會讓你牽著你的兒子來領(lǐng)畢業(yè)證，以便于你能很好地教育你的兒子可以做什么，不可以做什么?！敝?，我虎著臉道：“是誰呀？站出來領(lǐng)賞吧?！弊钸z憾的是，這位同學(xué)居然站出來了，因為他很誠實。我繼續(xù)上我的課。鈴聲一響，我會大聲喊：“下課！”同學(xué)們會說：“老師再見?！钡墙裉?，我喊：“不下課！”同學(xué)們茫然。我還有話說。“今天這位同學(xué)很誠實，所以我不打算見他的兒子。但是，我要告訴大家……”我故意停下來，我知道他們想知道我接下來要說什么?！敖窈笥龅酱祟愂虑榘l(fā)生，請同學(xué)們千萬不要站出來。不然，我就必須兌現(xiàn)自己的諾言，否則我就是言而無信，那你就只好帶著你的兒子來領(lǐng)畢業(yè)證了。這不是什么道德原則問題，這是合理規(guī)避風(fēng)險。但是，課后你要勇敢地站出來，這是秉承誠實原則。明白嗎？”“明白了！”非常熱烈的回應(yīng)。下課了，那個同學(xué)沒有走，他要秉承“誠實的原則”。“謝謝你，老師。我們私下里都很愛戴你?！币痪浒l(fā)自內(nèi)心的話讓我為之欣慰。

“隨風(fēng)潛入夜，潤物細(xì)無聲?！弊鳛榻處?，我們的一言一行、一舉一動都對學(xué)生起著或大或小的影響。遇到棘手的事，不能簡單草率地處理，而是冷靜地采取迂回戰(zhàn)術(shù)，給學(xué)生以寬容、理解、尊重，不僅解決了學(xué)生之間的矛盾，還潛移默化地對學(xué)生進行了深刻的教育，讓學(xué)生真正從思想上認(rèn)識了自己的錯誤，同時保護了學(xué)生的自尊，對他們健康人格的培養(yǎng)起到了促進作用。

三、愛在舍得！

我們每一位老師是社會的一分子，承擔(dān)了社會的角色。這位老師也是一位幼兒的媽媽。這天像往常一樣找了幾個學(xué)生個別交談后，直往幼兒園趕，當(dāng)她步入園區(qū)時，園里很安靜，她正準(zhǔn)備向人詢問時，看到孩子抓著窗子無助地看著外面。教室里只有她的娃娃和那帶班的老師。媽媽撲到孩子身邊正要擁抱，孩子說：“你不愛我為什么要生下我！不如不要生孩子！”眼淚順著臉頰往下掉……（這位媽媽是一位軍嫂，丈夫在北方軍營。）媽媽向幼兒園的老師道謙，牽著孩子回家了。這位媽媽不是一種舍小愛給學(xué)生大愛的行為嗎？

關(guān)于舍得，于丹認(rèn)為，舍與得是同步的。并不是先舍了什么再得到什么，人在舍的同時，也一定在得。一個沒有信心的人是不敢舍的，一個心不靜的人是不敢舍的。

有師曰：“位不在高，愛崗則名；資不在深，敬業(yè)就行；斯是教師，惟勤耕耘?！边@是教師愛崗敬業(yè)精神的自然流露。愛崗敬業(yè)是教師職業(yè)道德的基礎(chǔ)，在教育教學(xué)的實踐中，表現(xiàn)為對學(xué)生、對事業(yè)的責(zé)任心。責(zé)任心促使教師熱忱地、自覺地投入工作。具有責(zé)任心的教師不需強制，不需責(zé)難，甚至不需監(jiān)督。他們將教書育人內(nèi)化為自身需要，把職業(yè)的責(zé)任升華為博大的愛心，于細(xì)微中發(fā)現(xiàn)豐富，于瑣碎中尋找歡樂，于平凡中創(chuàng)造奇跡。教師的責(zé)任心不是在轟轟烈烈中展示，而是在平凡、普通、細(xì)微甚至瑣碎中體現(xiàn)。是在不知不覺中自然流露！自然才是真愛！