第一篇：基因工程疫苗的概況

內蒙古師范大學學年論文

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基因工程疫苗的概況

生命科學與技術學院

指導教師

摘要 疫苗是人類目前可以徹底消除某一疾病的唯一武器，隨著分子生物學及重組DNA技術的發(fā)展，基因工程疫苗的研究不斷深入?；蚬こ桃呙缬泻艽蟮陌l(fā)展前景，它包含了植物基因工程疫苗，動物基因工程疫苗，主要在醫(yī)學方面有巨大的貢獻。關鍵詞 基因工程 疫苗

基因工程疫苗是用分子生物學技術,對病原微生物的基因組進行改造,以降低其致病性,提高其免疫原性,或者將病原微生物基因組中的一個或多個對防病治病有用的基因克隆到無毒的原核或真核表達載體上制成疫苗,接種動物產生免疫力和抵抗力,達到防制傳染病的目的。

疫苗也是當前制藥業(yè)最熱門的產品之一，全球疫苗市場一直處在一個快速增長期，過去的20年增長了十倍。近兩年的增長率約為10%+2007，全球疫苗市場約為130億美元。

20世紀80年代隨著現(xiàn)代生物學技術的興起，特別是DNA重組技術的出現(xiàn)，為研制新一代的疫苗提供了嶄新的方法?；蚬こ桃呙缡怯梅肿由飳W技術,對病原微生物的基因組進行改造,以降低其致病性,提高其免疫原性,或者將病原微生物基因組中的一個或多個對防病治病有用的基因克隆到無毒的原核或真核表達載體上,制成疫苗，接種動物,產生免疫力和抵抗力，達到防制傳染病的目的。

目前利用基因工程技術已經和正在研制開發(fā)的新型疫苗主要有亞單位疫苗、活載體疫，傳統(tǒng)疫苗在預防和控制傳染病過程中起到了重要的作用，但隨著現(xiàn)代生物學技術日新月異的發(fā)展，盡管目前基因工程疫苗研究還未獲得全面突破性進展，但由于傳統(tǒng)疫苗的缺陷和基因工程疫苗的潛在優(yōu)勢，基因工程疫苗逐漸

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成為疫苗研究的熱點。[1]

一 植物基因工程疫苗

近年來的許多研究已經顯示，動物和人體攝取表達抗原的轉基因植物能激發(fā)機體的血清和黏膜產生特異性抗體，植物口服疫苗的研究是當今疫苗研究 領域的熱點之一。下面綜述亞單位抗原在轉基因植物中的表達水平及方式、轉 并基于植物口服遞送疫苗的免疫原性及免疫保護、基因植物疫苗面臨的問題等，展望其研究趨勢和應用前景。

植物基因工程疫苗是利用植物系統(tǒng)表達病原菌抗原蛋白一個或幾個亞單位的疫苗，他沒有病原菌完整的侵染能力，卻可以使機體對特異的病毒或細菌產生免疫應答反應。由于轉基因植物產生的疫苗對動物實施免疫只是簡單地攝取含這種疫苗的植物組織或種子。所以這種疫苗不會被酶類所破壞，可通過機體腸道粘膜作用激發(fā)特異性免疫應答，食動物或的持久性疾病防御能力，且沒有或很少出現(xiàn)病原體的過敏反應。[2] 傳染病一直是威脅人、獸健康的重要疾?。严麥绲膫魅静《嫉靡嬗谝呙绲氖褂茫呙绲念愋陀?菌體疫苗發(fā)展到亞單位疫苗、DNA 疫苗等，但這些產品價格昂貴，不易推廣使用。與常規(guī)的注射疫苗 相比，植物基因工程疫苗生物量大，可大范圍種植與栽培；成本低廉，容易運輸與保存，可直接通過 食用(口服)接種，無需提取純化；由于植物細胞壁 的存在，使免疫時抗原的釋放具有緩釋作用，所以，植物轉基因疫苗的研究和應用前景廣闊，是近年來疫苗學研究的熱點。證明，在轉基因植物中表達的蛋白不僅可保持蛋白 的天然構象，還保留了激發(fā) B 細胞和 T 細胞免疫反 應的抗原決定簇．依此首次提出的可食疫苗的概 念，引起了學術界和企業(yè)界的廣泛關注．Kapusta 等利用表達 HBsAg 的轉基因生菜通過志愿者的口 服免疫，初步測試了疫苗的免疫效果．結果表明，轉基因植物口服疫苗能有效地誘導人體的特異性 免疫應答?，F(xiàn)已證明，植物轉基因疫苗口服免疫 后不但可以誘導機體產生體液免疫、細胞免疫，而 且可誘導機體產生免疫。

1990 年 Curtiss 等在煙草種子中成功表達變異 鏈球菌表面蛋白 A(SPaA)，該轉基因煙草所表達的 SPaA 具有免疫原性．1992 年 Mason 等將乙肝表面 抗原(HbsAg)轉基因煙草生產乙型肝炎疫苗的研究收稿日期：

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2007-08-27 基金項目：湖南農業(yè)大學人才科學基金(03WD07)作者簡介：黃復深(1964-)，男，湖南新邵人，博士，湖 南農業(yè)大學教授． 216 湖南農業(yè)大學學報(自然科學版)2008 年 4 月 病原微生物、毒素等)結合，從而產生免疫保護作 用．粘膜內參與體液免疫的 B 淋巴細胞被激活后，分泌血清型抗體到血液中，參與免疫保護．粘膜免 疫的 Th 細胞產生的細胞因子，也可激活細胞毒性T淋巴細胞，產生細胞免疫?？梢?，轉基因植物疫苗 口服免疫后，不但可誘導粘膜免疫，還可引起體液 免疫和細胞免疫．研究表明，粘膜免疫可對胃腸道和非胃腸道傳染病產生免疫保護作用。轉基因植物疫苗研究進展植物轉基因疫苗的免疫保護效果 到目前為止，植物中得到了表達的抗原已有幾十種。[3]

二動物基因工程疫苗

近10多年是世界生物技術迅速發(fā)展時期，無論在基礎研究方面還是應用開發(fā)方面，都取得了令人矚目的成就，生物技術在生命科學的所有領域得到了廣泛的應用，促進了相關學科的發(fā)展。尤其是近年來利用生物高新技術研制成功了許多動物基因工程疫苗，展示了其廣闊的應用前景，將在動物疫病的控制上具有巨大潛力。本文擬就動物基因工程疫苗的特點、研究現(xiàn)狀、存在問題及其對策作一簡要敘述。１動物基因工程疫苗的特點 目前用于防制人和動物傳染病的疫苗，無論是滅活苗、弱毒苗，還是亞單位苗，其研制都是以大量培養(yǎng)致病微生物為基礎的，這不僅給疫苗的制造帶來了局限性，同時在疫苗的安全性、免疫性能、產量及保存等諸多方面存在缺陷，如病原微生物滅活不徹底，導致強毒散播；致弱的疫苗返強等。近幾年發(fā)展起來的基因工程技術為研制新的更為有效的疫苗帶來了希望，已成為目前生物技術的熱點之一。

J en n e r 用痘苗病毒免疫接種使機體產生抗傳染免疫，經過10多年的發(fā)展，疫苗已成為控制多種動物傳染病的有效方法，由于某些病原評的遣 傳結構容易改變導致現(xiàn)有的一些疫苗無效，某些病原體不能在體外培養(yǎng)中生 長或不能在體外傳代。至今尚無相應的疫苗此外用常規(guī)方法生產的毒力致弱 活疫苗容易引起病原體擴散且某些疫苗表現(xiàn)出殘余致病力引起不良副作，甚 至導致死亡。所以有必要尋找新的方法，生產更有效更安全性能更好的疫苗。

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傳統(tǒng)疫苗的研制和生產主要是通過改變培養(yǎng)條件，或在不同寄主動物上傳代使致病微生物毒性減弱，或通過物理、化學方法將其滅活來完成的。隨著人類知識的不斷進步，傳統(tǒng)疫苗的局限性也日益顯露出來：(1)動物和人類的病毒需要在動物細胞中培養(yǎng)，這使得疫苗生產的成本很高；(2)疫苗中的致病物質在疫苗生產過程中有可能沒有完全殺死或充分減毒，這會導致疫苗中含有強毒性致病物質，進而使得疾病在更大的范圍內傳播；(3)減毒菌株有可能會發(fā)生突變；(4)有些疾病(例如艾滋病)用傳統(tǒng)的疫苗防治收效甚微。與傳統(tǒng)疫苗相比，基因工程疫苗有以下優(yōu)點：(1)把保護性抗原基因插入載體的能力,修飾的載體能表達來自病原微生物的保護性抗原基因,細菌和病毒載體，都能產生兼有活疫苗和滅活苗優(yōu)點的疫苗,這種類型的疫苗具有亞單位苗的安全性又具有活疫苗的效力；(2)它們易于大規(guī)模使用(噴霧或氣霧)；(3)生產費用相對較低,目前世界上幾個研究組織正在生產特定的禽用疫苗載體。

基因工程提供了一個研制疫苗的更加合理的途徑,現(xiàn)在可以在相對可以預測的情況下生產無致病性的、穩(wěn)定的細菌和病毒,這與常規(guī)活疫苗研制的經典發(fā)展歷程相反,同時還能生產與自然型病原可區(qū)分的疫苗,這將大大有助于疫病的診斷和撲滅程?；蚬こ桃呙鐟摫饶壳皯玫某Ｒ?guī)疫苗具備更多優(yōu)點,為了被人們接受,它們必須具備安全性、生產工藝、免疫效力、免疫期、免疫途徑、生產成本等方面的優(yōu)點,并被有關管理部門和公眾接受。

參考文獻

[1] 崔寶安 動物基因工程疫苗研究進展 第7卷 第1期

1995 年 6 月

[2] 王偉青 植物基因工程疫苗研究進展 《獸藥市場指南》 2009年 第1期 5-6頁 [3] 袁 鑫 植物基因工程疫苗研究進展 第 34 卷第 2 期 2008 年 4 月

[4] 李 林，習佳飛.轉基因植物口服疫苗的免疫機制研究進展[J].國 外醫(yī)學免疫學分冊，2004 [5] 于源華，何秀霞，郭中滿，等．乙肝表面抗原小蛋白 S 基因導入 番茄的遺傳轉化體系的建立[J].東北師范大學學報： 自然科學版，2003，35(4)：72-75．

致 謝

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第二篇：基因工程疫苗

基因工程疫苗

發(fā)布時間： 2012-03-09 |

基因工程疫苗是用基因工程方法或分子克隆技術，分離出病原的保護性抗原基因，將其轉入原核或真核系統(tǒng)使表達出該病原的保護性抗原，制成疫苗，或者將病原的毒力相關基因刪除掉，使成為不帶毒力相關基因的基因缺失苗。

戊肝疫苗研制

基因工程疫苗是用基因工程方法或分子克隆技術，分離出病原的保護性抗原基因，將其轉入原核或真核系統(tǒng)使表達出該病原的保護性抗原，制成疫苗，或者將病原的毒力相關基因刪除掉，使成為不帶毒力相關基因的基因缺失苗。包括多肽或亞單位疫苗、顆粒載體疫苗、病毒活載體疫苗、細菌活載體疫苗、基因重配疫苗以及基因缺失疫苗如乙肝疫苗等。

2012年1月11日——一個原本并不特殊的日子，卻因一份捷報而注定要被載入史冊?？萍疾吭谶@一天宣布：由廈門大學和養(yǎng)生堂萬泰公司聯(lián)合研制的“重組戊型肝炎疫苗（大腸埃希菌）”已獲得國家一類新藥證書和生產文號，成為世界上第一個用于預防戊型肝炎的疫苗。

這是50年來，人類在經受了10余次萬人以上的戊肝重大疫情后等來的一份捷報。

14年“磨”出世界第一

戊肝疫苗的成功研發(fā)，標志著我國在生物制藥原始創(chuàng)新領域取得重大突破，它的面世讓中國在基因工程病毒疫苗的原始創(chuàng)新上實現(xiàn)了零的突破。11.3萬人、30余萬針次的研究顯示，該疫苗具有良好的安全性和保護性。

2月28日，疫苗研發(fā)團隊的核心成員——廈門大學國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心主任夏寧邵教授，在接受科技日報記者采訪時表示：“重組戊肝疫苗是迄今唯一使用大腸桿菌表達系統(tǒng)研制的病毒疫苗。它的成功研制扭轉了國際醫(yī)藥界中‘原核系統(tǒng)不能用于病毒疫苗研制’的傳統(tǒng)認識?！?/p>

“傳統(tǒng)的疫苗研制方法主要有兩種途徑。一種是將病毒放在細胞內進行大量培養(yǎng)、滅活，再輔以佐劑，用這種方法制成的疫苗叫滅活疫苗；第二種是將病原體在體外反復傳代，去除其致病性，但保留其免疫原性，用這種方法制成的疫苗叫減毒活疫苗。而我們這次是采用的基因工程技術。” 夏寧邵告訴記者，“與傳統(tǒng)滅活疫苗和減毒活疫苗比較，基因工程疫苗的研發(fā)不依賴于病原體的培養(yǎng)，因此對于大量尚未建立成熟體外培養(yǎng)技術的病原體也能進行疫苗的研制。在生產過程中，基因工程疫苗完全不涉及病原體，消除了由于病原體滅活不徹底或減毒不完全導致的安全性問題。不僅如此，基因工程疫苗的研發(fā)還可通過精心設計的純化過程實現(xiàn)對生產過程中伴隨的各類雜質的高效清除和殘余成分的高度可控，降低了由于雜質導致的各類接種副反應的風險，提高了疫苗的安全性和耐受性，同時還能提高不同疫苗生產批次間的均一性?！?/p>

從1998年開始，時任國家試劑與疫苗中心主任、廈門大學公共衛(wèi)生學院院長的夏寧邵便帶領著他的團隊，著手進行戊肝疫苗的研發(fā)。與所有的新藥研發(fā)一樣，重組戊肝疫苗的研發(fā)并非一路坦途。

歷經14年艱苦研發(fā)，由廈門大學國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心和企業(yè)的200余名科研人員組成的課題組，在基礎研究領域、應用基礎研究領域和應用研究領域，取得了保護性抗原識別及結構表征、病毒顆粒組裝機制等多項發(fā)現(xiàn)成果，并突破了原核表達類病毒顆粒、高效純化及體外自組裝等一系列關鍵技術障礙，創(chuàng)建出具有多項全球自主知識產權的核心技術體系。

夏寧邵告訴記者，該體系的關鍵技術已在14個主要國家申請了12項發(fā)明專利，對我國發(fā)展具有自主知識產權的創(chuàng)新疫苗并高起點地參與國際競爭具有深遠意義?；谠擉w系關鍵技術，團隊研制的另一個疫苗“人乳頭瘤病毒16/18型二價疫苗”（宮頸癌疫苗）已經打破了美英技術封鎖成為全球第3個、國內第1個獲準進行臨床試驗的宮頸癌疫苗，目前已基本完成Ⅱ期臨床試驗，初步結果顯示該疫苗安全并能刺激人體產生高滴度抗體。

夏寧邵說：“戊肝疫苗是國家工程的成果，也是產學研協(xié)同創(chuàng)新的成果?！边@份30微克的戊肝疫苗，不僅見證著研發(fā)人員的辛勞，同時也記錄著我國重大科技專項自主創(chuàng)新的步伐：自2005年起，國家863計劃開始對戊肝疫苗項目進行支持，有效地帶動了地方、企業(yè)投入研發(fā)資金近5億元，其臨床研究也被列入“十一五”863計劃重大項目中，這為課題組在國內外率先研制成功戊型肝炎疫苗提供了重要支撐。

談及疫苗研發(fā)的前景，夏寧邵顯得信心滿懷。他的信心來自于國家對這個產業(yè)的大力支持：2007年，國家將生物醫(yī)藥確定為“十二五”期間重點發(fā)展的戰(zhàn)略性新興產業(yè)，尤其是用于應對突發(fā)生物事件的疫苗及免疫佐劑等還被列入了公共安全領域生物安全保障方面的優(yōu)先發(fā)展主題。

現(xiàn)階段疫苗研發(fā)應以集成創(chuàng)新為主

作為全國政協(xié)委員，中國食品藥品檢定研究院菌種室主任王國治一直關注著疫苗領域的發(fā)展。對夏寧邵團隊所取得的成功，他難掩心中的喜悅和激動：“我國能在世界上第一個研發(fā)出戊肝疫苗確實非常令人振奮！”

但就國內疫苗研發(fā)的整體水平，王國治直言不諱：“我國在疫苗研發(fā)領域的基礎研究力量還比較薄弱，十個研發(fā)有九個都出不了結果。而國家又太過于強調疫苗研發(fā)的完全自主知識產權，這與我國目前的疫苗研發(fā)水平不相符合?！?/p>

“中國的疫苗研發(fā)，前期工作幾乎都是由大專院校的研究生在做，其可信度和創(chuàng)新性都不夠，后期工作也往往跟不上。多數(shù)人的研究都以仿制為主，盡管拿了專利，出了蛋白，但真正要作出成果卻很難，常常是實驗完了，出來一大堆報廢產品?！蓖鯂握J為，針對我國在疫苗領域現(xiàn)有的研發(fā)水平，“在引進國外成熟技術的基礎上進行整合創(chuàng)新、集成創(chuàng)新才是這個階段的重點?！?/p>

王國治在考察了發(fā)達國家的疫苗生產企業(yè)后發(fā)現(xiàn)：在疫苗研發(fā)上，中國缺的不是硬件，也不是錢，缺的是技術和管理規(guī)范。中國對疫苗生產企業(yè)的硬件要求比國外更嚴格，可在軟件方面比如管理規(guī)范上卻放得比較寬。而事實上，疫苗生產過程中，后期主要是規(guī)范性管理的問題。

在王國治看來，目前整個疫苗產業(yè)還缺少一種系統(tǒng)的協(xié)作。他認為，“這與國家在疫苗研發(fā)領域和產業(yè)規(guī)劃上缺乏一種整體的頂層設計有關?！?/p>

王國治告訴記者，受多種因素制約，國家免疫規(guī)劃疫苗政府定價總體水平偏低，利潤空間較小，以一支重組蛋白類的乙肝疫苗為例，國家定價只有3塊多錢每人次，這在一定程度上影響了企業(yè)提高產品質量和進行產品升級換代的積極性。而第二類疫苗為市場調節(jié)價格產品，流通環(huán)節(jié)較多，市場價格偏高。

“疫苗產業(yè)是關系國計民生的朝陽產業(yè)?！睂Υ耍鯂谓ㄗh，國家在制定產業(yè)發(fā)展策略時，應當充分考慮產業(yè)自身的特點和不同的發(fā)展背景。在投入上，對與老百姓生命利益息息相關的和研發(fā)成本高、失敗風險大的一類疫苗，以及人獸共患病的疫苗，國家應當加大扶持力度，而對具有良好發(fā)展前景和自主知識產權的二類疫苗，則應當以引導企業(yè)生產為主。

加大投入優(yōu)先發(fā)展疫苗產業(yè)

對疫苗產業(yè)的明天充滿同樣期待的，還有全球第一支甲流疫苗的生產企業(yè)——北京科興生物制品有限公司的總經理尹衛(wèi)東。

在甲流肆虐的2009年，尹衛(wèi)東帶領著自己的員工在短短的87天中成功生產出全世界第一支甲流疫苗。在他看來，接種疫苗不但是保護自己的一種措施，同時也是保護他人的一種手段。

“然而目前，人們對接種疫苗的社會認知度卻還遠遠不夠?！币l(wèi)東舉例說，為了減少老年人群因流感并發(fā)癥帶來的死亡，北京市政府每年都為60歲以上的老人免費接種流感疫苗，然而卻只有約50%的老年人進行了自愿接種。

“如果能讓老年人接種流感疫苗的百分比從現(xiàn)在的50%提高到80%，老年人因老年病和流感造成的死亡率就會有所降低，這樣，實現(xiàn)‘十二五’期間將我國人均壽命提高1歲的目標就會立竿見影?！币l(wèi)東說，“但如果沒有疫苗產業(yè)的發(fā)展就提供不了這樣的服務。疫苗產業(yè)不僅具有技術高附加值的特性，而且還能節(jié)省資源和能源，對整個經濟社會的發(fā)展具有保駕護航的作用，應該得到優(yōu)先發(fā)展。”

作為一個企業(yè)家，尹衛(wèi)東對疫苗產業(yè)的前景非?？春茫瑫r，他也有著不為人知的擔憂和顧慮：疫苗研發(fā)實現(xiàn)產業(yè)化之后，國家如何使用這種疫苗決定了疫苗使用的范圍和方向。而在現(xiàn)行的政府采購“雙信封”機制中，卻常常出現(xiàn)重價格信封、輕質量信封的現(xiàn)象。

對此，尹衛(wèi)東有些無奈：疫苗研發(fā)本身具有不確定性，企業(yè)自身控制風險的能力就較小，而實現(xiàn)產業(yè)化需要有除技術以外的生產要素的巨大投入，包括產業(yè)化基地的建設等都是必不可少的投資，如果國家在生產要素的政策上不加以扶持，這個戰(zhàn)略性新興產業(yè)就很難得到進一步發(fā)展，最終只會讓外國的企業(yè)和資本乘虛而入。

第三篇：“十三五”重點項目-基因工程疫苗項目可行性研究報告

“十三五”重點項目-基因工程疫苗項目可行性研究報告

編制單位：北京智博睿投資咨詢有限公司

0 本報告是針對行業(yè)投資可行性研究咨詢服務的專項研究報告，此報告為個性化定制服務報告，我們將根據不同類型及不同行業(yè)的項目提出的具體要求，修訂報告目錄，并在此目錄的基礎上重新完善行業(yè)數(shù)據及分析內容，為企業(yè)項目立項、申請資金、融資提供全程指引服務。

可行性研究報告 是在招商引資、投資合作、政府立項、銀行貸款等領域常用的專業(yè)文檔，主要對項目實施的可能性、有效性、如何實施、相關技術方案及財務效果進行具體、深入、細致的技術論證和經濟評價，以求確定一個在技術上合理、經濟上合算的最優(yōu)方案和最佳時機而寫的書面報告。

可行性研究是確定建設項目前具有決定性意義的工作，是在投資決策之前，對擬建項目進行全面技術經濟分析論證的科學方法，在投 資管理中，可行性研究是指對擬建項目有關的自然、社會、經濟、技術等進行調研、分析比較以及預測建成后的社會經濟效益。在此基礎上，綜合論證項目建設的必要性，財務的盈利性，經濟上的合理性，技術上的先進性和適應性以及建設條件的可能性和可行性，從而為投資決策提供科學依據。

投資可行性報告咨詢服務分為政府審批核準用可行性研究報告和融資用可行性研究報告。審批核準用的可行性研究報告?zhèn)戎仃P注項目的社會經濟效益和影響；融資用報告?zhèn)戎仃P注項目在經濟上是否可行。具體概括為：政府立項審批，產業(yè)扶持，銀行貸款，融資投資、投資建設、境外投資、上市融資、中外合作，股份合作、組建公司、征用土地、申請高新技術企業(yè)等各類可行性報告。

報告通過對項目的市場需求、資源供應、建設規(guī)模、工藝路線、設備選型、環(huán)境影響、資金籌措、盈利能力等方面的研究調查，在行業(yè)專家研究經驗的基礎上對項目經濟效益及社會效益進行科學預測，從而為客戶提供全面的、客觀的、可靠的項目投資價值評估及項目建設進程等咨詢意見。

報告用途：發(fā)改委立項、政府申請資金、申請土地、銀行貸款、境內外融資等

關聯(lián)報告：

基因工程疫苗項目建議書 基因工程疫苗項目申請報告 基因工程疫苗資金申請報告 基因工程疫苗節(jié)能評估報告 基因工程疫苗市場研究報告 基因工程疫苗商業(yè)計劃書 基因工程疫苗投資價值分析報告 基因工程疫苗投資風險分析報告 基因工程疫苗行業(yè)發(fā)展預測分析報告

可行性研究報告大綱（具體可根據客戶要求進行調整）第一章 基因工程疫苗項目總論

第一節(jié) 基因工程疫苗項目概況

1.1.1基因工程疫苗項目名稱

1.1.2基因工程疫苗項目建設單位 1.1.3基因工程疫苗項目擬建設地點

1.1.4基因工程疫苗項目建設內容與規(guī)模 1.1.5基因工程疫苗項目性質

1.1.6基因工程疫苗項目總投資及資金籌措

1.1.7基因工程疫苗項目建設期

第二節(jié) 基因工程疫苗項目編制依據和原則

1.2.1基因工程疫苗項目編輯依據 1.2.2基因工程疫苗項目編制原則 1.3基因工程疫苗項目主要技術經濟指標 1.4基因工程疫苗項目可行性研究結論

第二章 基因工程疫苗項目背景及必要性分析

第一節(jié) 基因工程疫苗項目背景

2.1.1基因工程疫苗項目產品背景 2.1.2基因工程疫苗項目提出理由 第二節(jié) 基因工程疫苗項目必要性

2.2.1基因工程疫苗項目是國家戰(zhàn)略意義的需要

2.2.2基因工程疫苗項目是企業(yè)獲得可持續(xù)發(fā)展、增強市場競爭力的需要

2.2.3基因工程疫苗項目是當?shù)厝嗣衩撠氈赂缓驮黾泳蜆I(yè)的需要 第三章 基因工程疫苗項目市場分析與預測

第一節(jié) 產品市場現(xiàn)狀

第二節(jié) 市場形勢分析預測

第三節(jié) 行業(yè)未來發(fā)展前景分析

第四章 基因工程疫苗項目建設規(guī)模與產品方案 第一節(jié) 基因工程疫苗項目建設規(guī)模

第二節(jié) 基因工程疫苗項目產品方案

第三節(jié) 基因工程疫苗項目設計產能及產值預測 第五章 基因工程疫苗項目選址及建設條件

第一節(jié) 基因工程疫苗項目選址

5.1.1基因工程疫苗項目建設地點 5.1.2基因工程疫苗項目用地性質及權屬 5.1.3土地現(xiàn)狀

5.1.4基因工程疫苗項目選址意見 第二節(jié) 基因工程疫苗項目建設條件分析 5.2.1交通、能源供應條件 5.2.2政策及用工條件

5.2.3施工條件

5.2.4公用設施條件

第三節(jié) 原材料及燃動力供應

5.3.1原材料 5.3.2燃動力供應

第六章 技術方案、設備方案與工程方案 第一節(jié) 項目技術方案

6.1.1項目工藝設計原則

6.1.2生產工藝

第二節(jié) 設備方案

6.2.1主要設備選型的原則 6.2.2主要生產設備 6.2.3設備配置方案 6.2.4設備采購方式 第三節(jié) 工程方案

6.3.1工程設計原則

6.3.2基因工程疫苗項目主要建、構筑物工程方案

6.3.3建筑功能布局

6.3.4建筑結構

第七章 總圖運輸與公用輔助工程 第一節(jié) 總圖布置

7.1.1總平面布置原則

7.1.2總平面布置

7.1.3豎向布置

7.1.4規(guī)劃用地規(guī)模與建設指標

第二節(jié) 給排水系統(tǒng) 7.2.1給水情況

7.2.2排水情況

第三節(jié) 供電系統(tǒng)

第四節(jié) 空調采暖

第五節(jié) 通風采光系統(tǒng)

第六節(jié) 總圖運輸

第八章 資源利用與節(jié)能措施

第一節(jié) 資源利用分析

8.1.1土地資源利用分析

8.1.2水資源利用分析

8.1.3電能源利用分析

第二節(jié) 能耗指標及分析

第三節(jié) 節(jié)能措施分析

8.3.1土地資源節(jié)約措施

8.3.2水資源節(jié)約措施

8.3.3電能源節(jié)約措施

第九章 生態(tài)與環(huán)境影響分析

第一節(jié) 項目自然環(huán)境

9.1.1基本概況

9.1.2氣候特點

9.1.3礦產資源

第二節(jié) 社會環(huán)境現(xiàn)狀

9.2.1行政劃區(qū)及人口構成 9.2.2經濟建設

第三節(jié) 項目主要污染物及污染源分析

9.3.1施工期 9.3.2使用期

第四節(jié) 擬采取的環(huán)境保護標準

9.4.1國家環(huán)保法律法規(guī)

9.4.2地方環(huán)保法律法規(guī)

9.4.3技術規(guī)范

第五節(jié) 環(huán)境保護措施

9.5.1施工期污染減緩措施 9.5.2使用期污染減緩措施

9.5.3其它污染控制和環(huán)境管理措施

第六節(jié) 環(huán)境影響結論 第十章 基因工程疫苗項目勞動安全衛(wèi)生及消防 第一節(jié) 勞動保護與安全衛(wèi)生

10.1.1安全防護 10.1.2勞動保護 10.1.3安全衛(wèi)生 第二節(jié) 消防

10.2.1建筑防火設計依據

10.2.2總面積布置與建筑消防設計

10.2.3消防給水及滅火設備

10.2.4消防電氣

第三節(jié) 地震安全

第十一章 組織機構與人力資源配置

第一節(jié) 組織機構

11.1.1組織機構設置因素分析 11.1.2項目組織管理模式

11.1.3組織機構圖

第二節(jié) 人員配置

11.2.1人力資源配置因素分析 11.2.2生產班制 11.2.3勞動定員

表11-1勞動定員一覽表

11.2.4職工工資及福利成本分析 表11-2工資及福利估算表 第三節(jié) 人員來源與培訓

第十二章 基因工程疫苗項目招投標方式及內容 第十三章 基因工程疫苗項目實施進度方案

第一節(jié) 基因工程疫苗項目工程總進度

第二節(jié) 基因工程疫苗項目實施進度表

第十四章 投資估算與資金籌措

第一節(jié) 投資估算依據

第二節(jié) 基因工程疫苗項目總投資估算

表14-1基因工程疫苗項目總投資估算表單位：萬元

第三節(jié) 建設投資估算

表14-2建設投資估算表單位：萬元

第四節(jié) 基礎建設投資估算

表14-3基建總投資估算表單位：萬元

第五節(jié) 設備投資估算

表14-4設備總投資估算單位：萬元

第六節(jié) 流動資金估算

表14-5計算期內流動資金估算表單位：萬元

第七節(jié) 資金籌措

第八節(jié) 資產形成第十五章 財務分析

第一節(jié) 基礎數(shù)據與參數(shù)選取 第二節(jié) 營業(yè)收入、經營稅金及附加估算

表15-1營業(yè)收入、營業(yè)稅金及附加估算表單位：萬元 第三節(jié) 總成本費用估算

表15-2總成本費用估算表單位：萬元

第四節(jié) 利潤、利潤分配及納稅總額預測

表15-3利潤、利潤分配及納稅總額估算表單位：萬元 第五節(jié) 現(xiàn)金流量預測

表15-4現(xiàn)金流量表單位:萬元 第六節(jié) 贏利能力分析

15.6.1動態(tài)盈利能力分析

16.6.2靜態(tài)盈利能力分析

第七節(jié) 盈虧平衡分析

第八節(jié) 財務評價

表15-5財務指標匯總表

第十六章 基因工程疫苗項目風險分析

第一節(jié) 風險影響因素

16.1.1可能面臨的風險因素

16.1.2主要風險因素識別

第二節(jié) 風險影響程度及規(guī)避措施 16.2.1風險影響程度評價

16.2.2風險規(guī)避措施

第十七章 結論與建議

第一節(jié) 基因工程疫苗項目結論

第二節(jié) 基因工程疫苗項目建議

第四篇：基因工程

寧波大學科學技術學院考核答題紙

（2011--2012學年第 學期）

課號：:EK5G04A00

課程名稱：現(xiàn)代生物技術概論

閱卷教師：

班級：10級生物工程

學號：104177306

姓名：郭兆峰

成績：

基因工程

摘要：基因工程是20世紀70年代在分子遺傳學、細胞生物學基礎上發(fā)展起來的，是一種可以按照人們的意愿設計、改造和組建生物品種的新技術。包括它通過基因操作，將目的基因活DNA片段與合適的載體連接轉入目標生物細胞，通過復制、轉錄、翻譯外源目的基因以及蛋白質的活性表達，使轉基因生物獲得新的遺傳性狀。

關鍵詞：生物技術；基因工程

一、基因工程的誕生：

從20世紀40年代開始，受分子生物學、分子遺傳學發(fā)展的影響，基因分子生物學取得巨大進步，為基因工程的誕生奠定了基礎?，F(xiàn)在人們公認的誕生日期是1973年，其中現(xiàn)代分子生物學領域上的三大發(fā)現(xiàn)及技術上的三大發(fā)明起了決定性作用。

理論上的三大發(fā)現(xiàn)包括：第一，20世紀40年代，Avery 在美國的一次學術會上報道了肺炎球菌的轉化，證明了遺傳信息的攜帶者是DNA而不是蛋白質；第二，1953年，Watson 和 Crick 提出的DNA分子的雙螺旋結構以及半保留復制機理，解決了基因的自我復制和傳遞問題；第三，20世紀50年代末的“中心法則”，60年代由Monod 和 Jacob 提出的操縱分子學說，并成功的由一批科學家破譯了遺傳密碼從而闡明了遺傳信息的流向和表達問題。

以上問題的解決使得人們自主改造生物遺傳性狀從理論上成為現(xiàn)實。

技術上的三大發(fā)明：第一，1967年發(fā)現(xiàn)的DNA連接酶，以及1979年發(fā)現(xiàn)的具有更高活性的T4 DNA連接酶。在1970年Smith和 Wilcox從流感嗜血桿菌中分離并純化的限制性核酸內切酶HindⅡ和1972年發(fā)現(xiàn)的EcoRⅠ核酸內切酶。后來發(fā)現(xiàn)的大量的限制性核酸內切酶。第二，一些病毒、質粒和噬菌體等載體技術的發(fā)現(xiàn)使把目的基因的導入更加容易。第三，DNA分子序列分析及瓊脂糖凝膠電泳、Southern雜交技術的發(fā)展使得基因工程的誕生越來越近。1973年，斯坦福大學將抗四環(huán)素質粒和抗新霉素的質粒用限制性內切酶切割并連接成重組質粒導入到大腸桿菌中是基因工程誕生的標志。

二、基因工程有幾個重要特征：（1）、打破了物種的界限，實現(xiàn)跨物種的基因轉移；（2）、通過已知功能基因的遺傳轉化，進行物種的定向改良；（3）、創(chuàng)造出自然界中本來不存在的物種。

三、基因工程技術流程包括：（1）、目的基因克隆，即從特定生物基因組和cDNA中分離提純和擴大繁殖目的基因；（2）、選擇合適的載體，并對載體DNA進行克?。唬?）、將目的基因與載體寧波大學科學技術學院考核答題紙

（2011--2012學年第 學期）

課號：:EK5G04A00

課程名稱：現(xiàn)代生物技術概論

閱卷教師：

班級：10級生物工程

學號：104177306

姓名：郭兆峰

成績：

連接；（4）、將重組DNA導入到大腸桿菌或酵母菌體內培養(yǎng)；（5）、利用載體上的標記基因進行篩選，獲得轉目的基因的細胞或植株。

四、基因工程的應用：

（1）基因工程應用于農業(yè)生產方面：農業(yè)領域是目前轉基因技術應用最為廣泛的領域之一。農作物生物技術的目的是提高作物產量，改善品質，增強作物抗逆性、抗病蟲害的能力?；蚬こ淘谶@些領域已取得了令人矚目的成就。

（2）基因工程應用于醫(yī)藥方面：目前，以基因工程藥物為主導的基因工程應用產業(yè)已成為全球發(fā)展最快的產業(yè)之一，發(fā)展前景廣闊?；蚬こ趟幬镏饕毎蜃印⒖贵w、疫苗、激素和核苷酸藥物等。它們對預防人類的腫瘤、心血管疾病、遺傳病、糖尿病、包括艾滋病在內的各種傳染病、類風濕疾病等有重要作用。在很多領域特別是疑難病癥上，基因工程工程藥物起到了傳統(tǒng)化學藥物難以達到的作用。我們最為熟悉的干擾素(IFN)就是一類利用基因工程技術研制成的多功能細胞因子，在臨床上已用于治療白血病、乙肝、丙肝、多發(fā)性硬化癥和類風濕關節(jié)炎等多種疾病。

（3）基因工程應用于環(huán)保方面：基因工程技術可提高微生物凈化環(huán)境的能力。美國利用DNA重組技術把降解芳烴、萜烴、多環(huán)芳烴、脂肪烴的4種菌體基因鏈接，轉移到某一菌體中構建出可同時降解4種有機物的“超級細菌”，用之清除石油污染，在數(shù)小時內可將水上浮油中的2/3烴類降解完，而天然菌株需要1年之久。也有人把Bt蛋白基因、球形芽孢桿菌、且表達成功。它能釘死蚊蟲與害蟲，而對人畜無害，不污染環(huán)境。現(xiàn)已開發(fā)出的基因工程菌有凈化農藥的DDT的細菌、降解水中的染料、環(huán)境中有機氯苯類和氯酚類、多氯聯(lián)苯的工程菌、降解土壤中的TNT炸藥的工程菌及用于吸附無機有毒化合物(鉛、汞、鎘等)的基因工程菌及植物等。90年代后期問世的DNA改組技術可以創(chuàng)新基因，并賦予表達產物以新的功能，創(chuàng)造出全新的微生物，如可將降解某一污染物的不同細菌的基因通過PCR技術全部克隆出來，再利用基因重組技術在體外加工重組，最后導入合適的載體，就有可能產生一種或幾種具有非凡降解能力的超級菌株，從而大大地提高降解效率。

五、基因工程的安全性問題：

自基因工程誕生以來，基因工程的安全性問題就受到人們極大的關注，關于重組DNA潛在的危險性問題的爭論，在基因工程還處于醞釀階段的時候就已經開始。爭論的焦點是擔心基因工程寧波大學科學技術學院考核答題紙

（2011--2012學年第 學期）

課號：:EK5G04A00

課程名稱：現(xiàn)代生物技術概論

閱卷教師：

班級：10級生物工程

學號：104177306

姓名：郭兆峰

成績：的雜種生物會從實驗室溢出，在自然界造成難以抑制的災難，有害的雜種菌或病毒與化學物質不同，它們會在自然界不斷繁殖，造成的危害更大。

在1975年2月，美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）在加利福尼亞州的Asilomar 會議中心內，160名來自美國和16個國家的專家學者對重組DNA的危害辯論，雖然與會代表分歧挺大，但最后也達成了一些重要的共識，在1976年6月23日美國NIH制定并公布了《重組DNA研究準則》。為了避免可能造成的危害，除了規(guī)定禁止若干類型的重組DNA實驗外，還制定了許多具體的規(guī)定條文。

六、基因工程的前景展望：基因工程技術是繼工業(yè)革命、信息革命之后 對人類社會產生深遠影響的一場革命。它在基因制藥、基因診斷、基因治療、基因芯片和基因克隆等技術方面取得的革命性成果，將極大地改變人類生命和生活面貌。

參考文獻：

1、基因工程/樓士林，楊盛昌，龍敏南等主編.—北京：科學出版社，2002

2、基因工程技術/鐘衛(wèi)鴻主編.—北京：化學工業(yè)出版社，2007.6

3、基因工程/何水林主編.—北京：科學出版社，2008

4、基因工程原理與技術/劉志國主編.—2版.—北京：化學工業(yè)出版社，2010,12

5、基因工程：原理、方法與應用/徐煜泉等編著.—北京：北京大學出版社，2008.12

第五篇：基因工程

《基因工程論文》

嗜熱解烴基因工程菌SL-21的構建

學

院：生命科學學院 班

級：生物技術12-2 學

號：7011208209 姓

名：陳 昆 任課教師：張銳

嗜熱解烴基因工程菌SL-21的構建

摘要﹕從以C15—C36直鏈烷烴為惟一碳源生長的解烴菌———地芽孢桿菌MD-2細胞中獲得了1個新的烴降解基因———烷烴單加氧酶基因sladA。將基因sladA克隆到質粒pSTE33上,構建了重組質粒pSTalk。通過電轉化將pSTalk轉化入嗜熱脫氮土壤芽孢桿菌ZJ-3內,構建了基因工程菌SL-21。SL-21兼具嗜熱和解烴的功能,在70℃條件下,14d后對原油的降解率達75.08%。研究結果表明,可以通過體外重組的方式向嗜熱菌中引入烴降解基因,從而構建嗜熱解烴基因工程菌。關鍵詞:微生物采油;烴類降解菌;嗜熱解烴基因;質粒;基因工程菌

微生物降解原油是微生物提高原油采收率的主要機理之一。研究結果表明,在解烴菌作用下原油的族組分發(fā)生變化,輕質組分增加,粘度下降,改善了原油的流動性;同時,解烴菌還可以將烴類分子轉化成有機溶劑、表面活性劑、酸和氣體等驅油物質。迄今為止,從自然界篩選的高效解烴菌絕大多數(shù)為嗜溫微生物,最適合生長溫度一般為20-45℃,很難適應油藏的高溫環(huán)境。筆者從1株解烴菌細胞中分離出1個新的烴降解基因———烷烴單加氧酶基因sladA,并采用基因工程手段將此基因轉化到另外1株最適合生長溫度為70℃的嗜熱菌體內,構建了嗜熱解烴基因工程菌SL-21。該基因工程菌既具有高效的解烴功能,又能適應油藏高溫環(huán)境,在微生物采油中具有良好的應用前景。1.1 實驗材料

實驗材料包括限制性內切酶EcoRⅠ和XhoⅠ;UNIQ-10柱式DNA膠回收試劑盒、PCR片斷回收試劑盒;大腸桿菌感受態(tài)細胞E.coliDH5α;pGEM-T easy載體;質粒pSTE33 kanr,Ampr,EcoRⅠ/XhoⅠ;異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、氨芐青霉素(Amp)、卡那霉素(Kan)。LB培養(yǎng)基按文獻配制。無機鹽培養(yǎng)基組成:Na2HPO40.06g;KH2PO40.02g;NaNO30.2g;CaCl20.001g;FeSO40.001g;MgSO4 0.03g;蒸餾水100mL;pH值為7.2。嗜熱脫氮土壤芽孢桿菌ZJ-3,分離自勝利油區(qū)孤島油田中一區(qū)館3區(qū)塊采出液,最適合生長溫度為70℃;地芽孢桿菌MD-2,以C15—C36直鏈烷烴為惟一碳源生長,分離自勝利油區(qū)原油污染土壤。1.2 實驗方法

DNA的操作 基因組DNA小量提取,利用聚合酶鏈式反應(PCR)對DNA擴增、PCR產物的回收、酶切與連接,質粒DNA提取和基因序列測定等均按文獻[13-14]方法進行。菌株培養(yǎng) 所涉及到的菌株培養(yǎng)均在溫度為70℃,轉速為180r/min的條件下進行振蕩培養(yǎng)。基因工程菌的構建和篩選方法 ZJ-3感受態(tài)細胞的制備按文獻[13-14]方法進行。用構建的重組質粒pSTalk在最佳條件下電轉化ZJ-3感受態(tài)細 胞構建基因工程菌。在含有50μg/mL Kan的LB瓊脂平板上挑選10個陽性克隆接種到5mL LB培養(yǎng)基中,培養(yǎng)過夜,獲得種子液。將該種子液接種到200mL以液蠟為惟一碳源的無機鹽培養(yǎng)基中,培養(yǎng)5d后用CCl4抽提剩余的液蠟,用紅外測油儀測定烴的剩余量,根據菌株降解液蠟的速率篩選出目的基因工程菌。基因工程菌的誘導表達及SDS-PAGE檢測挑取陽性克隆接種于含100μg/mL Amp的10mL的LB液體培養(yǎng)基中,180r/min下振蕩培養(yǎng)至光密度值達到0.6(檢測光波波長為600nm),加誘導物IPTG至終濃度為1mmol/L,振蕩培養(yǎng)8h,收集表達菌體,加SDS上樣緩沖液,于100℃水浴10min后上樣,用12%的SDS-PAGE電泳檢測?；蚬こ叹涤湍芰y試 將基因工程菌接入20mL LB培養(yǎng)基中,培養(yǎng)12h,以5 000r/min的速度離心5min收集菌體,用無菌生理鹽水洗滌菌體1次,加20mL無菌生理鹽水懸浮,作為菌株利用烷

烴生長的種子液。取菌懸液按1%接種量接入200mL無機鹽培養(yǎng)基中,加入2%孤島油田中一區(qū)館3區(qū)塊原油或2%的液體石蠟作為惟一碳源培養(yǎng),取樣稀釋涂布計數(shù)。原油降解實驗 在無機鹽培養(yǎng)基中添加2%的原油,按1%接種量接入基因工程菌,培養(yǎng)14d。用正己烷萃取降解后的原油,用氣相色譜儀測定原油飽和烴組分的降解情況。原油降解率為菌株降解前、后原油量的差值與菌株降解前原油量的比值。2 實驗結果與分析

2.1 MD-2基因組DNA的檢測

對MD-2基因組進行提取和純化。提取后的染色體DNA經0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測,相對分子質量不小于23kb,說明提取的DNA完好。在檢測光波波長為260280nm條件下分別測出DNA的光密度,其比值為1.95,換算出DNA的質量濃度為1 400g/mL,表明DNA純度較好,無蛋白、RNA、酚和多糖物質的干擾。2.2 烷烴單加氧酶基因的克隆與序列分析依據美國國立衛(wèi)生研究院基因序列數(shù)據庫(Genbank)中的烷烴單加氧酶基因開放閱讀框兩端保守序列,設計了一對兼并引物以MD-2基因組DNA為模板進行PCR擴增,將約1.3kb的PCR產物回收后連接到pGEM-T easy載體上,轉入E.coliDH5α,挑取陽性克隆質粒進行測序。測序結果經Genbank檢索,表明該DNA序列是個新的烷烴單加氧酶基因,命名為sladA。2.3 基因工程菌的構建及篩選

通過PCR擴增sladA后,將PCR產物用EcoRⅠ或XhoⅠ消化,分離純化出1 329bp的片斷,與經EcoRⅠ或XhoⅠ消化的pSTE33質粒連接,構建成含sladA的重組質pSTalk。經電泳鑒定表明(圖1),重組質粒構建成功。

2.4 基因sladA在基因工程菌SL-21中的誘導表達

由基因工程菌SL-21全蛋白的SDS-PAGE圖譜可見(圖2),在烷烴單加氧酶基因sladA對應蛋白大小的地方掃描到高信號強度,表明sladA基因在SL-21中得以表達。2.5 基因工程菌SL-21碳源生長

基因工程菌SL-21在以原油和液體石蠟為惟一碳源的無機鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng),在70℃和180r/min條件下,經過3d的延滯期后進入對數(shù)期,菌體數(shù)增加。17d后,菌體數(shù)為接菌初期的5倍,表明SL-21能夠利用原油或液體石蠟作為惟一碳源生長。2.6 對原油的降解作用

由原油飽和烴組分的降解情況可看出(圖3),基因工程菌對原油有很明顯的降解效果,幾乎將飽和烴降解完全。經對氣相色譜各峰面積對比,計算出各峰面積的含

量和飽和烴組分降解率(表2)?；蚬こ叹鶶L-21對原油的降解率為75.08%。

實驗結果表明,烴類降解菌地芽孢桿菌MD-2細胞提取的烷烴單加氧酶基因sladA可以在嗜熱脫氮土壤芽孢桿菌ZJ-3中表達。但不同的基因工程菌株中烷烴單加氧酶基因sladA表達的效率不同,需要通過菌株對原油的降解評價進一步篩選。獲得的對原油降解速率最高的基因工程菌SL-21能在70℃高溫條件下生長,并且對原油降解效果明顯。因此以體外重組方式向嗜熱菌中引入烴類降解基因構建嗜熱解烴基因工程菌在技術上是可行的。3 結論

以地芽孢桿菌MD-2為目標菌株,克隆和表達了降解長鏈烷烴的單加氧酶基因sladA,并在嗜熱脫氮土壤芽孢桿菌ZJ-3中正確表達了基因sladA,構建了基因工程菌SL-21?；蚬こ叹鶶L-21在70℃條件下,能以原油或液體石蠟為惟一碳源生長。14d對原油的降解率為75.08%,對原油飽和烴組分均有明顯的降解效果。該基因工程菌既可以用于微生物驅油技術,又可以用于高溫油田污水的生物處理。利用基因工程的方法可以獲得既能耐受極端環(huán)境,又具有良好功能的基因工程菌株,是石油微生物菌種選育的重要方向。參考文獻: [1] 周金葵,王大威,廖明清,等.一株石油烴降解菌的篩選及性能研究[J].大慶石油地質與開發(fā),2007,26(6):119-123.[2] 汪衛(wèi)東,汪竹,耿雪麗,等.美國微生物采油技術現(xiàn)場應用效果分析[J].油氣地質與采收率,2002,9(6):75-76.[3] 袁長忠,宋永亭,段傳慧.微生物采油用營養(yǎng)物質在石英砂上的靜態(tài)和動態(tài)吸附規(guī)律[J].油氣地質與采收率,2009,16(4):74-76.[4] 修建龍,董漢平,俞理,等.微生物提高采收率數(shù)值模擬研究現(xiàn)狀[J].油氣地質與采收率,2009,16(4):86-89.[5] 路璐,向廷生,黑花麗.本源微生物降解原油的飽和烴色譜分析[J].油氣地

質與采收率,2008,15(1):77-79.[6] 宋智勇,張君,馬繼業(yè),等.微生物菌液的界面特性[J].油氣地質與采收率,2008,15(3):73-75.[7] 蔣焱,曹功澤,趙鳳敏,等.聚合物驅后微生物提高采收率的可行性分析[J].油氣地質與采收率,2008,15(5):63-65,68.[8] 陳愛華,方新湘,呂秀榮,等.克拉瑪依油田內源微生物驅油機理探索[J].油氣地質與采收率,2008,15(5):75-77.[9] 宋紹富,劉菊榮,張忠智.微生物采油替代營養(yǎng)源的研究[J].油氣地質與采收率,2007,14(2):96-98.[10]李希明.微生物驅替盲端類剩余油的微觀實驗[J].油氣地質與采收率,2008,15(3):91-92.[11]沈萍.微生物學[M].北京:高等教育出版社,2000:143.[12]唐赟,馮露,劉沐之,等.嗜熱解烴菌NG80-2的鑒定及其特[J].南開大學學報,2006,39(2):46-50,70.[13] Sambrook J,Fritsch E F,Maniatis T.分子克隆實驗指南[M].金冬雁,譯.北京:科學出版社,1992.[14]盧圣棟.現(xiàn)代分子生物學實驗技術[M].2版.北京:高等教育出版社,1993.4