第一篇：2010版與2005版藥典微生物限度檢查法對比

2010版與2005版藥典微生物限度檢查法對比

引子：新版藥典即將實施，在這里列出微生物限度檢查法的改動。2010版與2005版藥典微生物限度檢查法對比

內容2010 版2005 版

總論細菌 30~ 35 ℃、控制菌溫度 細菌與控制菌培養(yǎng)溫度合并為 35~ 37 ℃(2000 版藥典是與 30~ 35 ℃2010 版藥典一致的)

10g 或 10ml, 膜劑 10cm 2, 沙

門氏菌檢驗用量應增加至 20g 10g 或 10ml, 膜劑 10cm 2

或 20ml檢驗量

無貼劑供試品溶液的制備(2)

增加貼劑供試品溶液的制備 具3000 轉 / 分離心 20 分鐘

有抑菌活性的供試品 , 離心沉(供試品若有沉淀，先以 500 供試液的制備淀法 500 轉離心 3 分鐘，取上轉 / 分離心 5 分鐘)棄去上

清液混合清液，留底部集菌液紅 2ml，加稀釋液補至原量

菌液制備黑曲霉最后稀釋黑曲霉最后稀釋劑 : 0.9% 無菌劑 :0.05%(ml/ml)聚山梨酯 80 氯化鈉溶液的 0.9% 無菌氯化鈉溶液

細菌培養(yǎng)由 2 天改為 3 天 ,霉菌與酵母菌培養(yǎng) 5 天 , 必要細菌培養(yǎng)由 48 小時 , 霉菌與

時延長到 7 天 增加營養(yǎng)瓊脂培酵母菌培養(yǎng)由 72 小時 , 必要

養(yǎng)基及玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基以及時延長到 5-7 天 無菌落細菌 霉菌酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基報告規(guī)則細菌及酵母菌平均菌及酵母菌計數的適用性檢查 菌落報告規(guī)則細落數在 30~300, 霉菌平均菌落

菌及酵母菌選取平均菌落數小于 數在 30~100 之間稀釋級作為

300cfu, 霉菌小于 100cfu 的稀菌數報告的依據

釋級作為菌數報告的依據

增加適用性檢查 , 包括促生長控制菌檢查用能力 , 抑制能力以及指示能力無培養(yǎng)基的檢查

常用干擾物的中和劑或滅活增加

方法

控制菌檢查增加白色念珠菌檢查法無無

陰道 尿道給藥制劑增加白色

念珠菌檢查 眼部給藥刪除 , 按微生物限度標無眼部給藥限度 需檢查大劑型項目檢查無菌 直腸給藥制準腸埃希菌 菌落單位 : 個劑 : 刪除大腸埃希菌檢查 菌落

單位 :cfu

第二篇：微生物限度檢查法標準操作規(guī)程

微生物限度檢查法標準操作規(guī)程

一、目的：建立微生物限度檢查的基本操作規(guī)程，為微生物檢查人員提供正確的操作規(guī)程。

二、適用范圍：適用于品管化驗室的微生物限度檢查。

三、職責：品管微生物檢驗員對本標準的實施負責。

四、正文： 定義：微生物限度檢查法：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法，包括染菌量及控制菌的檢查。2 實驗用具：

電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水溫箱、試管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管架、注射器、針頭、注射器盒、研缽、75%酒精棉球、紫外燈（365nm 波長）。3 培養(yǎng)基：

3.1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、乳糖膽鹽培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基。

3.2 培養(yǎng)基的管理、配制應符合檢定菌、培養(yǎng)基管理規(guī)程、培養(yǎng)基配制規(guī)程。試液：甲基紅試液、a-奈酚乙醇試液、40%氫氧化鉀溶液、靛基質試液。稀釋劑：0.9%無菌氯化鈉溶液。供試品溶液的制備：取供試品（供試品如為固體，置研缽中研磨成細粉）放入試管中，加入適量的稀釋劑制成1：10 濃度的供試品溶液。對照用菌液：控制菌檢查均應作相應已知菌的對照試驗，對照菌株為大腸桿菌[CMCC（B）441022]。取相應菌株的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1 白金耳，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內，培養(yǎng)18-20 小時，稀釋至1：106，對照菌的加入量為50-100 個。8 檢查法：

8.1 除另有規(guī)定外，細菌的培養(yǎng)溫度為30-35℃，霉菌的培養(yǎng)溫度為25-28℃，控制菌的培養(yǎng)溫度為35±1℃。8.2 細菌、霉菌計數：

8.2.1平皿菌落計數法取均勻供試液，進一步稀釋成1：102、1：103 等適宜的稀釋級。分別取連續(xù)三級10 倍稀釋的供試液各1ml，置直徑約90mm 的平皿中，再注入約45℃的培養(yǎng)基約15ml，混勻，等凝固后，倒置培養(yǎng)，每個稀釋級應作2~3 個平皿。

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌計數。8.2.2 菌數測定陰性對照試驗取供試驗用的稀釋劑各1ml，置4 個無菌平皿中，分別按細菌、霉菌計數用的培養(yǎng)基制備平板，培養(yǎng)，檢查，不得長菌。

8.2.3 細菌培養(yǎng)時間為48 小時，分別在24 小時及48 小時點計菌落數，一般以48 小時菌落數為準，霉菌培養(yǎng)時間為72 小時，分別在48 小時及72 小時點計菌落數，一般以72 小時菌落數為準。菌落如蔓延生長成片，不宜計數。

8.2.4 點計后，計算各稀釋級的平均菌落數，按菌數報告規(guī)則報告菌數。

8.2.5 菌數報告規(guī)則：細菌宜選取平均菌落數在30-300 之間的稀釋級，霉菌宜選取平均菌落數在30-100 之間的稀釋級，作為報告菌數計算的依據。如只有1 個稀釋級菌落數在30-300（30-100）

之間時，將該稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告，如同時有兩個稀釋級在30-300（30-100）之間時，按下式計算兩級比值。比值=低稀釋級平均菌落數稀釋倍數

高稀釋級平均菌落數稀釋倍數

.當比值≤2 時，以兩稀釋級的均值報告，當比值＞2 時以低稀釋級平均菌落數乘以稀釋倍數報告，如同時有3 個稀釋級的平均菌落數均在30-300（30-100）之間時，以后兩個稀釋級計算級間比值，如各稀釋級的平均菌落數均不在30-300（30-100）之間，以最接近30 或300 的稀釋級平均菌數乘以稀釋倍數報告，如各稀釋級平均菌落數均在300（100）以上，按最高稀釋級菌落數乘以稀釋倍數報告，如各稀釋級平均菌落數均小于30 時，一般按最低稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告，如當1：10（1： 100）稀釋級平均菌落數等于或大于原液（或1：10）時，應以培養(yǎng)基稀釋法測定，按測定結果報告菌數。8.2.6 培養(yǎng)基稀釋法：取供試液（原液或1：10 供試液）3 份，每份各1ml，分別注入5 個平皿內（每皿各0.2ml）每個平皿中傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)，計數，每1ml 注入的5 個平板點計的菌落數之和即為每1ml 的菌落數，共得3 組數據，以3 份供試液菌落數的平均值乘以稀釋倍數報告。

如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數小于1 時，則報告菌數為小于10 個。

8.3 控制菌檢查除另有規(guī)定外，取供試液10ml（相當于供試品1g、1ml、cm2），直接或處理后接種，經增菌、分離培養(yǎng)后，進行革蘭氏染色、生化試驗等項檢查。8.3.1 大腸菌群：

8.3.1.1 檢樣稀釋及培養(yǎng)

① 以無菌操作，將檢樣25g（ml）放于含有225ml 滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內（瓶內預置適當數量的玻璃珠），經充分振搖或研磨做成1：10 的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好在均質器中以8000—10000r/min 的速度處理1min，作成1：10 的均勻稀釋液。

② 用1ml 滅菌吸管吸取1：10 稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 滅菌生理鹽水的試管內（注意吸管尖不要接觸管內稀釋液），混合均勻，做成1：100 的稀釋液。

③ 另取1ml 滅菌吸管，按上述操作順序，做10 倍遞增稀釋液。如此每次遞增稀釋一次，即換用一支1ml 滅菌吸管。

④ 根據食品衛(wèi)生標準要求或標本污染情況的估計，選擇3 個合適的稀釋度，每個稀釋度接種三管。8.3.1.2 乳糖發(fā)酵試驗

將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內，接種量在1ml 以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ml 及1ml 以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36±1℃溫箱內，培養(yǎng)24±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。8.3.1.3 分離培養(yǎng)

將產氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養(yǎng)18~24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實試驗。

8.3.1.4 證實試驗

在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1~2 個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36±1℃溫箱內，培養(yǎng)24±2h，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。

8.3.1.5 報告：根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN 檢索表，報告每100ml（g）大腸菌群的MPN 值。9 結果判斷：

9.1 細菌菌落數、霉菌菌落數、控制菌三項均符合該品種微生物限度項下的規(guī)定，應判為供試品符合規(guī)定；其中任何一項不符合該品種項下規(guī)定，應判供試品不符合規(guī)定。

9.2 細菌菌落數、霉菌菌落數第一次測定超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，應從同一批號樣品中隨機抽樣，復試兩次，以三次結果平均值報告。

9.3 如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上生長霉菌菌落數或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上生長細菌菌落數超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，經復試2 次，如3 次結果平均值仍超過規(guī)定，應判為供試品不符合規(guī)定。9.4 各類制劑檢出控制菌或其他致病菌時，按第一次檢出結果為準，不再抽樣復試，即應判該供試品不符合規(guī)定。

第三篇：康腹止瀉片微生物限度檢查法

康腹止瀉片微生物限度檢查法

【摘要】目的 建立康腹止瀉片微生物限度檢查法。

方法 采用培養(yǎng)基稀釋法。

結果 該法能有效消除康腹止瀉片在檢驗條件下對細菌、真菌及酵母菌的抑制作用;控制菌可用常規(guī)法檢查。結論 該法簡單、快捷，可用于康腹止瀉片的微生物限度檢查，有效控制其質量。

【關鍵詞】康腹止瀉片;微生物限度檢查;培養(yǎng)基稀釋法

康腹止瀉片是由木餾油、老鸛草粉、黃柏干浸膏等藥材經加工而成的中成藥片劑。本品味特異，具有化滯止瀉功效。用于飲食不節(jié)或水土不服導致的食欲不振、惡心嘔吐、腹脹腹瀉、消化不良等癥。處方中的老鸛草、黃柏具有一定的抑菌作用

[1，2]，若用常規(guī)法對其進行微生物限度檢查，結果將不能真實反映樣品的污染情況[3]。為此，根據《中國藥典》2010年版的有關規(guī)定[4]，對康腹止瀉片微生物限度檢查方法進行驗證，以確定其是否適用于本品的微生物限度檢查，從而準確有效地檢出樣品中污染的微生物[5]。驗證表明，采用培養(yǎng)基稀釋法對本品進行檢查，可使污染的微生物能被順利檢出，常規(guī)法則可用于控制菌的檢查。該方法簡便、快捷、準確、可行，能有效控制康腹止瀉片的質量，并可為同類藥品的微生物限度檢查法提供科學的實驗依據。儀器與試藥

1.1 菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)10123]，均購自中國藥品生物制品檢定所;黑曲霉(ATCC16404)購自廣東省微生物研究所。

1.2 培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基。

1.3 供試品

康腹止瀉片(批號41EA1)，大幸藥品株式會社。方法與結果

2.1 菌液的制備[4]

2.1.1 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌

取新鮮培養(yǎng)物接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24 h;培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含菌數為50～100 cfu的菌懸液。用于控制菌驗證時制成每1 mL含菌數為<100 cfu的菌懸液。

2.1.2 白色念珠菌 取新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24～48 h;培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含菌數為50～l00 cfu的菌懸液。

2.1.3 黑曲霉 取新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，加入0.9%無菌氯化鈉溶液3～5 mL，將孢子洗脫。然后，用適宜的方法吸出胞子懸液至無菌試管內，用0.05%(體積分數)聚山梨醇的0.9%(體積分數)無菌氯化鈉溶液制成每l mL含孢子數50～100 cfu的孢子懸液。

2.1.4金黃葡萄球菌檢測

金黃色葡萄球菌—為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽孢，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。

該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。

3、血瓊脂培養(yǎng)基：

成分：營養(yǎng)瓊脂100ml

脫纖維羊血（或兔血）10ml

制法：將營養(yǎng)瓊脂加熱融化，待冷至50℃左右無菌操作加入脫纖維羊血（或兔血）搖勻，制成平板，置冰箱內備用。

4、菌落特征：

血瓊脂平板：菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。

Baird-Parker平板：菌落呈圓形，光滑，凸起，濕潤，直徑為2—3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍一混濁帶，在其外層有一透明帶。

5、鏡檢：為革蘭氏陽性菌，排列呈葡萄狀，無芽孢，無莢膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為0.5um—1um。

2.2 供試液的制備

取樣品10 g，加入pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，用勻漿儀打碎，搖勻，制成1∶10的供試液。

2.3 驗證試驗

驗證實驗所用培養(yǎng)基均按《中國藥典》2010年版附錄“微生物限度檢查法”要求，進行培養(yǎng)基適用性檢查，且均符合規(guī)定。

2.3.1 細菌、真菌及酵母菌計數(平皿法培養(yǎng)基稀釋法)在確定適合的檢查方法后，驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

試驗組:各取1∶10供試液1、0.5、0.2 mL和試驗菌液1 mL，分別注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。

菌液組:取試驗菌液1 mL注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，測定所加的試驗菌數。

供試品對照組:各取1∶10供試液1、0.5、0.2 mL，按試驗組操作，不加菌液，測定樣品本底菌。

計算各試驗菌株的回收率，結果見表1。表1 計數驗證菌各菌株回收率結果由表1可見:黑曲霉的回收試驗，當供試液為1 mL·皿-1時，3次試驗的回收率均即可達到70%以上;白色念珠菌當稀釋至0.5 mL·皿-1時，3次試驗的回收率達到70%以上;而大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌3個菌株的回收率試驗，要稀釋至0.2 mL·皿-1，3次驗證的回收率才能均達到70%以上。因此本品的細菌計數、真菌及酵母菌計數均可用培養(yǎng)基稀釋法檢查:細菌計數用0.2 mL·皿-1，真菌及酵母菌計數用0.5 mL·皿-1。

2.3.2 控制菌檢查法的驗證 本品為含有藥材粉末投料的口服制劑,控制菌應檢查大腸埃希菌和大腸菌群，驗證大腸菌群檢查法時，采用大腸埃希菌作為試驗菌。

2.3.2.1 大腸埃希菌檢查法的驗證 取1∶10供試液10 mL及大腸埃希菌菌液1 mL加入100、200 mL的BL增菌培養(yǎng)基中，按大腸埃希菌的檢查法進行檢驗。

2.3.2.2 大腸菌群檢查法的驗證 取1∶10供試液1 mL及大腸埃希菌菌液1 mL加入不少于15、30 mL的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，按大腸菌群的檢查法進行檢驗。

由表2可知，試驗組均檢出大腸埃希菌，因此本制劑的大腸埃希菌和大腸菌群均可用常規(guī)法檢查。討論

本品含有木餾油、阿仙粉、黃柏粉等成分，有一定的抑菌作用，驗證試驗結果證明，本品對革蘭陽性菌有較強的抑制作用。藥典收載的除去供試品抑菌作用的方法有培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法、離心沉淀法等，或幾法聯用。由于本品是中成藥，推斷其抑菌作用不會太強，因此嘗試采用培養(yǎng)基稀釋法，通過擴大培養(yǎng)基的使用量，使供試品在培養(yǎng)基中稀釋，結果各規(guī)定菌株的回收率均達到藥典要求;控制菌則用常規(guī)法即能順利檢出試驗菌。培養(yǎng)基稀釋法操作簡單，不需要特殊儀器設備，只需增加培養(yǎng)基量，即可很好地消除本制劑在試驗條件下的抑菌作用問題，因此本方法簡便快捷、準確有效，能很好地控制康腹止瀉片的質量。表2 控制菌驗證結果

作者：朱文娟，林鐵豪，鐘燕飛，林麗英

【參考文獻】

[1] 金晴昊，崔京浩，郭健鵬.老鸛草的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2005，16(9)：840-841.[2] 金建玲，欒永娜，華國強.含小檗堿中藥的抑菌活性與小檗堿含量的關系[J].中醫(yī)藥學報，2005，33(5):19-21.[3] 許華玉，杜鵑，湯楊.藥品中微生物污染檢測方法驗證的必要性[J].中國藥品標準，2005,6(4):262,46-47.[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄79.[5] 林麗英,湛文青,饒春意.野牡丹止痢片微生物限度檢查法的建立[J].中藥材,2006,29(3):299-302.小組成員：制藥101班：陳妙珊、曾潔茹、郭慧芳

第四篇：微生物限度檢驗人員考試試題

2012年微生物限度檢查基礎知識考試試題 姓名： 分數：

一、填空題（1×35=35分）

1．微生物限度檢查和無菌檢查應在環(huán)境潔凈度 級的局部潔凈度 級的單向流空氣區(qū)域內進行。

2.除另有規(guī)定外，微生物限度檢查法中，細菌培養(yǎng)溫度為，培養(yǎng)時間為 ；霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為，培養(yǎng)時間為 ；控制菌培養(yǎng)溫度為，培養(yǎng)時間為。

3.除另有規(guī)定外，一般供試品檢驗量為 或 ；膜劑為 ；、的檢驗量可以酌減。其中沙門菌的檢驗量為 或。

4.檢驗時應從 個以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑不得少于 片；一般應 抽取不少于檢驗用量 倍量的供試品。

5.試驗用菌株的傳代次數不得超過 代。從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為 代。菌液制備后若在室溫下放置，應在 小時內使用，若保存在，可在24小時內使用。

6.消除供試品抑菌活性的方法有、、、。

7.薄膜過濾法所用濾膜孔徑應不大于 um，直徑一般為50mm。若需要沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為?？倹_洗量不得超過。8.培養(yǎng)基配制的分裝量不得超過容器的，以免滅菌時溢出；配制后應在 內滅菌，避免細菌繁殖。

9.供試液制備若需水浴加溫時，溫度不應超過 ℃，供試液自制備至加入培養(yǎng)基不得超過 小時。

10.潔凈區(qū)測定沉降菌時，注入培養(yǎng)基的平皿應放置 分鐘。

二、單項選擇題（2×10=20分）

1.熱力滅菌法分干熱和濕熱滅菌兩類，并在同一溫度下濕熱滅菌效力較干熱滅菌效力要強這是因為（）

A、可迅速提高溫度 B、濕熱有一定潛熱、穿透力大，促進菌體蛋白凝固

C、迅速破壞細菌的酶系統(tǒng) D、使細菌迅速失活 2.生物安全柜主要原理（）

A、干燥 B、空氣經濾膜除菌后定向流動 C、空氣定向流動 D、通風

3.培養(yǎng)基加入有供試品的平皿時的溫度不宜超過（）A、45℃ B、50℃ C、48℃ D、60℃

4.藥品微生物實驗室所檢測微生物的生物危害等級大部分為生物安全（）A、一級 B、二級 C、三級 D、四級

5.潔凈實驗室內的溫度應控制在（），相對濕度最好控制在（）A、20～25℃，40～60% B、10～30℃，50～70% C、15～25℃，50～70% D、18～26℃，40～60% 6.操作間或凈化工作臺的潔凈空氣對環(huán)境的相對正壓為（），操作間與緩沖間的相對正壓為（）

A、不低于10帕，不高于5帕 B、不高于10帕，不低于5帕 C、不低于10帕，不低于5帕 D、不低于5帕，不低于10帕

7．檢查結果如各稀釋級的平板均無菌落生長或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數小于1時，應報告（）A、0個 B、＜1 cfu C、0cfu D、＜1乘以最低稀釋倍數的值

8.微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項目包括（）檢查

A、細菌數和霉菌數 B、細菌數、霉菌數及酵母菌數 C、細菌數、霉菌數、酵母菌數及控制菌 D、細菌數、霉菌數、控制菌數 9.微生物限度檢查驗證試驗至少應進行（）次獨立的平行試驗，各試驗菌每次試驗的回收率應不低于（）

A、3，70% B、2，80% C、3，80% D、2，70% 10.細菌、霉菌及酵母菌計數方法驗證時試驗菌加入量規(guī)定為（）cfu，控制

菌計數方法驗證時試驗菌加入量規(guī)定為（）cfu。A、50～100,50～100 B、10～100,10～100 C、10～100,50～100 D、50～100,10～100

三、多項選擇題（3×5=15分）

1.常用的清毒劑的種類有：（）A.75%乙醇 B.甲醛 C.碘酊 D.0.1%新潔爾滅 E.乳酸

2.下列（）不是無菌操作法的特點

A.無菌操作法是一個殺菌的過程 B無菌操作法是一個抑菌的過程 C.無菌操作法是一個消毒的過程 D.無菌操作法只能保持原有的無菌度 E.無菌操作的目的僅是為了防止待檢品被環(huán)境中的微生物污染

3.2010版藥典附錄微生物限度檢查法中，可選用的稀釋液有（）A.pH7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液 B.pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液 C.pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液 D.0.9%無菌氯化鈉溶液 E.pH7.0無菌磷酸鹽緩沖液 4.供試液的制備方法有（）A、勻漿法 B、研缽法 C、保溫振搖法 D、振搖法

5.以下哪些是影響集菌培養(yǎng)效果的因素（）

A.溫度和培養(yǎng)基 B.氧氣和光 C.抗生素 D.滲透壓 E、PH值和氧化還原電位

二、判斷題（2×10=20分）

1．融化培養(yǎng)基可以選擇用水浴或電爐直接加熱，一次未用完的封存好可以再次使用。（）

2．培養(yǎng)時每垛最多堆放6個平板，以保證各個平板的受熱均勻。（）3.配制培養(yǎng)基時若出現沉淀屬正?，F象，無需過濾，可以直接使用。（）

4.濕熱滅菌條件就是指121℃15分鐘。（）

5.從事藥品微生物試驗工作的人員只要具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景就可以直接上崗。（）

6.若同一稀釋級的兩個平板的菌落數小于15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。（）

7.若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌、酵母菌，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應分別點計菌落數，合并計算后報告菌數。（）

8.對供試品進行微生物限度檢查時，如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑，應證明其有效性及對微生物生長的存活無影響。（）9.平皿法操作時應先注入培養(yǎng)基，再加入1ml供試液。（）10.MUG陽性，靛基質陰性，判斷未檢出大腸埃希菌。（）

三、簡答題（2×5=10分）

1.簡述藥品染菌的可能原因。

2.列舉不少于五種的滅菌消毒方式。

一

1.1000、100

2.30～35℃，3天∕72h；23～28℃，5天∕120h；30～35℃，2天∕48h 3．10g，10ml，100cm；貴重藥品、微量包裝藥品；20g、20ml 4.2，4；隨機，3 5.5；0；2；2～8℃

6.培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法 7.0.45；100ml；1000ml 8.2／3，2h 9.45℃；1 10．30min

2二

BBABD

CDCAD 三

3.ABCDE;2.ABCE;3.ABCD;4.ABCD;5.ABCDE 四

×√×××

××√×× 五

1.一、二、三、四、2.水系統(tǒng)的內外部污染；

無菌室密封性差；環(huán)境衛(wèi)生、個人衛(wèi)生達不到要求； 設備和配件消毒不符合要求、物料物品消毒不徹底 生產中操作不當

1.濕熱滅菌 2.干熱滅菌 3.輻射滅菌 4.氣體滅菌 5.消毒劑滅菌 6.紫外照射滅菌

7.過濾滅菌

第五篇：課程大綱-微生物限度檢查

《微生物限度檢查》課程教學大綱

學分：8學分

學時：144學時

適用專業(yè)：應用生物技術、生物化工等

一、課程性質和任務

1、課程性質：本課程是應用生物技術專業(yè)的必修課程。

2、課程任務：通過本課程的學習，使學員具備藥品生物制品、食品和化妝品等相關企業(yè)產品日常衛(wèi)生微生物限度檢查的基本知識和技能，為產品常規(guī)衛(wèi)生微生物檢驗把好質量關。

二、課程基本要求

1、了解生物制品、藥品、食品和化妝品等各種產品衛(wèi)生標準；

2、熟悉各種檢品微生物限度檢查項目；

3、能獨立完成各種檢品處理和梯度稀釋，并按標準規(guī)定項目進行常規(guī)微生物限度檢查；

4、能按菌數報告規(guī)則、控制菌形態(tài)特征等判定限度檢查結果，并及時正確填寫檢驗記錄和報告。

5、能以積極心態(tài)養(yǎng)成安全、文明、無菌潔凈操作習慣，樹立強烈的責任心和質量無差錯意識,保證檢驗結果真實可信。

三、教學條件

1、師資：具有藥品、生物制品、食品和化妝品等衛(wèi)生微生物檢驗工作經驗的教師2人；

2、場地：項目一體化教學所需基本的實訓室和設備如下：

六、教學說明

微生物限度檢查屬于微生物檢定工中級工段的課程，適用于相關專業(yè)全體制和培訓教學，教學采取一體化項目教學，教學過程學生2人一組互相配合；10個教學項目有三個層次，項目1-6注重不同的檢測內容的能力培養(yǎng)，項目7-9注重產品衛(wèi)生微生物檢驗多種內容的同步操作，項目10注重檢驗全過程系統(tǒng)化，同時將相關微生物的知識、不同檢品的取樣和樣品處理、常見設備的使用分解到各個項目之中，與項目有機結合，實現了知識目標和能力目標的系統(tǒng)化。

考核方式：職業(yè)素質占20%，課程結束由學生、實訓室管理人員和教師分別評分匯總；專業(yè)能力和創(chuàng)新能力占80%，分項目考核，項目1-9主要由教師對過程、結果和記錄完成情況進行考核，前面注重過程，后邊注重結果；項目10小組自選，完成結果全班交流，學生現場互評和教師評分結合。

七、教材和參考書

自編講義《微生物限度檢查》

參考書：《中華人民共和國藥典》2010年版（現行版本）

《中國藥品檢驗標準規(guī)范》2010年版（現行版本）