第一篇：生物技術(shù)制藥考試題復(fù)習(xí)

一：選擇題

1、酶的主要來源是（C）

A、生物體中分離純化 B、化學(xué)合成 C、微生物生產(chǎn) D、動(dòng)/植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)

2、所謂“第三代生物技術(shù)”是指(A)A、海洋生物技術(shù) B、細(xì)胞融合技術(shù) C、單克隆技術(shù) D、干細(xì)胞技術(shù)

3、菌體生長(zhǎng)所需能量與菌體有氧代謝所能提供的能量在什么情況下，菌體往往會(huì)產(chǎn)生代謝副產(chǎn)物乙酸：(A)A、大于 B、等于 C、小于 D、無關(guān)

4、促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素（EPO）基因能在大腸桿菌中表達(dá)，但卻不能用大腸桿菌的基因工程菌生產(chǎn)人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素，這是因?yàn)椋海‥）

A、人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素對(duì)大腸桿菌有毒性作用

B、人促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素基因在大腸桿菌中極不穩(wěn)定

C、大腸桿菌內(nèi)毒素與人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素特異性結(jié)合并使其滅活 D、人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素對(duì)大腸桿菌蛋白水解酶極為敏感 E、大腸桿菌不能使人的促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素糖基化

5、目前基因治療最常用的載體是：(B)A、腺病毒 B、反轉(zhuǎn)錄病毒 C、腺相關(guān)病毒 D、痘苗病毒 E、皰疹病毒

6、cDNA第一鏈合成所需的引物是：（D）

A、Poly A B、Poly C C、Poly G D、Poly T E、發(fā)夾結(jié)構(gòu)

7、為了減輕工程菌的代謝負(fù)荷，提高外源基因的表達(dá)水平，可以采取的措施有：(A)A將宿主細(xì)胞生長(zhǎng)和外源基因的表達(dá)分成兩個(gè)階段

B、在宿主細(xì)胞快速生長(zhǎng)的同時(shí)誘導(dǎo)基因表達(dá)

C、當(dāng)宿主細(xì)胞快速生長(zhǎng)時(shí)抑制重組質(zhì)粒的表達(dá)

D、當(dāng)宿主細(xì)胞快速生長(zhǎng)時(shí)誘導(dǎo)重組質(zhì)粒的復(fù)制

8、基因工程制藥在選擇基因表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，首先應(yīng)考慮的是：(A)A、表達(dá)產(chǎn)物的功能 B、表達(dá)產(chǎn)物的產(chǎn)量 C.表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性

D.表達(dá)產(chǎn)物分離純化的難易

9、疫苗出產(chǎn)前需進(jìn)行理化鑒定、效力鑒定和（安全性鑒定）。

10、基因工程藥物的化學(xué)本質(zhì)屬于：(C)A.糖類 B.脂類 C.蛋白質(zhì)和多肽類 D.氨基酸類

11、用聚二乙醇（PEG）誘導(dǎo)細(xì)胞融合時(shí)，下列錯(cuò)誤的是：(C)A、PEG的相對(duì)分子量大，促進(jìn)融合率高 B、PEG的濃度高，促進(jìn)融合率高

C、PEG的相對(duì)分子量小，促進(jìn)融合率高 D、PEG的最佳相對(duì)分子量為4000

12、以大腸桿菌為目的基因的表達(dá)體系，下列正確的是：(C)

A、表達(dá)產(chǎn)物為糖基化蛋白質(zhì) B、表達(dá)產(chǎn)物存在的部位是在菌體內(nèi)

C、容易培養(yǎng)，產(chǎn)物提純簡(jiǎn)單D、表達(dá)產(chǎn)物為天然產(chǎn)物

13、人類第一個(gè)基因工程藥物是：(A)

A、人胰島素 B、重組鏈激酶 C、促紅細(xì)胞生成素 D、乙型肝炎疫苗

14、下列不屬于加工改造后的抗體是：(C)A、人-鼠嵌合抗體 B、單鏈抗體C、鼠源性單克隆抗體 D、單域抗體

15、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件中，不正確的是：(D)A.最適pH為7.2-7.4 B.最適溫度為37±0.5C C.最理想的滲透壓為290-300mOsm/kg D.氧濃度為100%

16、第三代抗體是指：(D)A、B淋巴細(xì)胞合成和分泌的球蛋白 B、多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白

C、融合細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體D、利用基因工程技術(shù)制備的基因工程抗體

17、現(xiàn)代生物技術(shù)的標(biāo)志是：(C)A、DNA互補(bǔ)雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的提出 B、DNA測(cè)序技術(shù)的誕生 C、第一只克隆羊“多莉”的誕生 D、人類基因組草圖的完成18、獲得目的基因最常用的方法是：(B)A、化學(xué)合成法 B、PCR技術(shù) C、逆轉(zhuǎn)錄法 D、DNA探針技術(shù)

19、疫苗組成是由抗原和（佐劑）組成

20、鳥槍法克隆目的基因的戰(zhàn)略適用于（A）

A、原核細(xì)菌B、酵母菌C、絲狀真菌D、植物E、人類

21、cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是：（B）A.成功率高 B.不含內(nèi)含子 C.操作簡(jiǎn)便

D.表達(dá)產(chǎn)物可以分泌 E.能糾正密碼子的偏愛性

22、有機(jī)相酶反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)：

1．有利于疏水性底物的反應(yīng)；2．可提高酶的熱穩(wěn)定性；3．從低沸點(diǎn)的溶劑中易分離純化產(chǎn)物；4．熱力學(xué)平衡向產(chǎn)物方向移動(dòng)如脂合成和肽合成；5．減少由水引起的副反應(yīng)，如水解反應(yīng)；6．酶易于實(shí)現(xiàn)固定化；7．酶和產(chǎn)物易于回收；8．可避免微生物污染。

23、抗體發(fā)展階段：抗血清、單克隆抗體、基因工程抗體。24、25、凝膠過濾層析進(jìn)行分離的依據(jù)是：分子大小

26、質(zhì)粒載體必備三要素：復(fù)制子、選擇標(biāo)記、多克隆位點(diǎn)。

27、體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞三類型：貼壁依賴性細(xì)胞、非貼壁依賴性細(xì)胞、兼性貼壁細(xì)胞。

28、下列關(guān)于細(xì)胞凍存及復(fù)蘇過程的描述不正確的是（B）。A.凍存的細(xì)胞提前一天更換全部培養(yǎng)液 B.細(xì)胞凍存的原則為快速凍存

C.每只凍存管中以凍存（1～1.5）×106個(gè)細(xì)胞為宜 D.凍存液中含有8％二甲基亞砜

E.復(fù)蘇時(shí)將凍存細(xì)胞從液氮中取出迅速投入42℃溫水中速溶

29、能將IgG水解成兩個(gè)抗原片段和一個(gè)可結(jié)晶片段的是：（木瓜蛋白酶）。30、單克隆技術(shù)抗體是B細(xì)胞和（雜交瘤細(xì)胞）的結(jié)合。

31、所謂“第二代基因工程”是指(A)A、蛋白質(zhì)工程 B、細(xì)胞工程 C、酶工程 D、抗體工程

32、酶和細(xì)胞固定化最常用、最有效的方法是：(A)A、載體結(jié)合法 B、交聯(lián)法 C、包埋法 D、選擇性熱變性法

33、真核基因在大腸桿菌中以融合蛋白形式表達(dá)，下列錯(cuò)誤的是：(D)A、基因操作簡(jiǎn)便 B、只能作抗原用

C、容易實(shí)現(xiàn)高效表達(dá) D、易被細(xì)菌酶類水解

34、目前應(yīng)用最廣泛的產(chǎn)酶菌是：(A)A.大腸桿菌 B.枯草桿菌 C.青霉菌 D.鏈霉菌

35、大腸桿菌的基因表達(dá)系統(tǒng)為(A)A、pBV220/pET B、YEp/YRp C、pUC/λgt11 D、pBR322/λgt10

36、用于生產(chǎn)α-干擾素的動(dòng)物細(xì)胞是(A)A、Namalum Namalwa B、Vero C、WI-38 D、MIRC-5

37、外源基因在動(dòng)物細(xì)胞與大腸桿菌中表達(dá)產(chǎn)物的主要區(qū)別是(A)A.糖基化 B.產(chǎn)量高 C.性質(zhì)穩(wěn)定 D.療效可靠

38、基因表達(dá)最常用的宿主菌是(A)A.大腸桿菌 B.枯草芽孢桿菌 C.鏈霉菌 D.酵母

39、篩選雜交瘤細(xì)胞（脾-瘤融合細(xì)胞）選用的培養(yǎng)基是(B)A、HT B、HAT C、RMP1640 D、BME

40、采用凝膠過濾法分離單克隆抗體，最高峰屬于(A)A、IgG B、IgM C、IgA D、IgE

41、改造鼠源性單克隆抗體的首要目的是(C)

A、降低相對(duì)分子量 B、增加組織通透性 C、降低免疫源性 D、延長(zhǎng)半衰期

42、鼠源性單克隆抗體改造后得到小分子抗體，常用的是(B)A、單域抗體 B、單鏈抗體 C、Fab片段抗體 D、最小識(shí)別單位

43、最具有抗原活性的蛋白是：（丙種球蛋白）。

44、基因工程的單元操作順序是（A）

A．酶切，連接，轉(zhuǎn)化，篩選，驗(yàn)證 B.酶切，轉(zhuǎn)化，連接，篩選，驗(yàn)證 C．連接，轉(zhuǎn)化，篩選，驗(yàn)證，酶切 D.驗(yàn)證，酶切，連接，篩選，轉(zhuǎn)化 E.酶切，連接，篩選，轉(zhuǎn)化，驗(yàn)證

45、CHO-K1細(xì)胞來源于：答案：中國(guó)倉鼠卵巢。

46、下列五個(gè)DNA片段含有回文結(jié)構(gòu)的是（D）

A．GAAACTGCTTTGAC B.GAAACTGGAAACTG C.GAAACTGGTCAAAG D.GAAACTGCAGTTTC E.GAAACTGCAGAAAG47、48、T4-DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是（D）

A．2’-OH和5’-P B.2’-OH和3’-P C.3’-OH和2’-P D.3’-OH和5’-P E.5’-OH和3’-P

49、目前工業(yè)上生產(chǎn)酶的方法大多數(shù)是（微生物發(fā)酵）。

50、若某質(zhì)粒帶有l(wèi)acZ標(biāo)記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培養(yǎng)基中加入（D）

A、半乳糖B、葡萄糖C、蔗糖

D、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）E、異丙基巰基-b-半乳糖苷（IPTG）

51、對(duì)酶活性有影響的物理化學(xué)方法是（溫度，pH值，酶的濃度，底物濃度，激活劑，抑制劑）

52、分子雜交的化學(xué)原理是形成（E）

A.共價(jià)鍵 B.離子鍵 C.疏水鍵 D.配位鍵 E.氫鍵

二、填空題

1、人工化學(xué)合成DNA新形成的核苷酸的合成方向是(3’→5'),合成的DNA5’末端是（-P），3’末端是（-OH）。

2、理想載體應(yīng)具備的條件：（至少有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，有多克隆位點(diǎn)，具備轉(zhuǎn)化的功能，遺傳標(biāo)記基因，具有較高的載裝能力）。

3、進(jìn)行PCR擴(kuò)增DNA時(shí)，反映體系應(yīng)加入（DNA模板，DNA聚合酶，引物，dNTP的緩沖液）。

4、細(xì)胞培養(yǎng)基三大類：（天然培養(yǎng)基，合成培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)基）。

5、質(zhì)粒DNA三種構(gòu)型：（共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA),開環(huán)DNA(ocDNA),線狀DNA(1DNA)）。

6、微生物轉(zhuǎn)化中常用的微生物有：（細(xì)菌，真菌，放線菌）。

7、生物技術(shù)的核心與關(guān)鍵是（基因工程），生物技術(shù)的基礎(chǔ)是(生化工程)，生物技術(shù)的條件是(細(xì)胞工程)，生物技術(shù)獲得最終產(chǎn)物的手段是(發(fā)酵工程)。

8、PCR全稱是（聚合酶鏈反應(yīng)），以（mRNA)為引物，基本反應(yīng)步驟是（變性，退火，延伸）。

9、在翻譯過程中mRNA與核糖體的結(jié)合位點(diǎn)：（SD序列，SD序列與起始密碼子AUG之間的距離）。

10、克隆真核基因常用的方法：（逆轉(zhuǎn)錄法，化學(xué)合成法）。

11、將抗體轉(zhuǎn)變?yōu)槊傅乃姆N途徑：（誘導(dǎo)，拷貝，引入，化學(xué)修飾）。

12、酶固定法中包埋法有（網(wǎng)格型和微囊型）兩種。

13、噬菌體表達(dá)載體有（穿梭，插入，置換）三種。

14、鼠源性單克隆抗體改造后的小分子抗體類型（人-鼠聯(lián)合抗體，改形抗體，F(xiàn)ab抗體，單鏈抗體，單域抗體，分子識(shí)別單位）。

15、抗體藥物的特點(diǎn)：（多樣性，定向性，特異性）。

16、質(zhì)粒載體結(jié)構(gòu)包括：（復(fù)制子，選擇標(biāo)記，多克隆位點(diǎn)）。

17、蛋白質(zhì)藥物按分子大小提取方法：（透析，層析，離心，超濾）。

18、核酸類藥物分為：（反義核酸，核酶，脫氫核酶，抗基因寡核苷酸，裸DNA疫苗，基因藥物）。

19、動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件：（培養(yǎng)溫度，pH值，通氧量，防止污染，基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滲透壓）。

20、根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)基質(zhì)的依賴性可分為：（貼壁依賴性細(xì)胞，非貼壁依賴性細(xì)胞，兼性貼壁細(xì)胞）。

21、答案：感受態(tài)細(xì)胞。

22、三、簡(jiǎn)答題

五、問答題

1、簡(jiǎn)述生物藥物與生物技術(shù)藥物的內(nèi)涵。

答：生物藥物是指運(yùn)用生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等的研究成果，綜合利用物理學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物技術(shù)和藥學(xué)等學(xué)科的原理和方法，利用生物體、生物組織、細(xì)胞、體液等制造的一類用于預(yù)防、治療和診斷的制品。生物藥物，包括生物技術(shù)藥物和原生物制藥。生物技術(shù)藥物：是指采用DNA重組技術(shù)或其他創(chuàng)新生物技術(shù)生產(chǎn)的治療藥物。細(xì)胞因子類藥物、激素類藥物、酶與輔酶類藥物、疫苗、單克隆抗體藥物、反義核酸藥物、RNA干擾(RNAi)藥物、基因治療藥物。

2、簡(jiǎn)述生物技術(shù)藥物和生物技術(shù)制藥的概念。

答：生物技術(shù)藥物是指采用DNA重組技術(shù)或其他生物技術(shù)生產(chǎn)的用于預(yù)防、治療和診斷疾病的藥物；生物技術(shù)制藥是指利用基因工程、細(xì)胞工程、發(fā)酵工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程等生物技術(shù)，來研究、開發(fā)和生產(chǎn)用于預(yù)防、治療和診斷疾病的藥物。

3、比較基因工程疫苗與傳統(tǒng)疫苗？ 答：傳統(tǒng)疫苗是用人工變異或從自然界篩選獲得的減毒或無毒的活的病原微生物制成的制劑或用理化方法將病原微生物殺死制備的生物制劑。傳統(tǒng)疫苗受制作工藝的限制，其保存、使用和接種副反應(yīng)等方面都容易出現(xiàn)一些問題。

基因工程疫苗指使用重組DNA技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因，利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物，或重組體本身制成的疫苗。

基因工程亞單位疫苗優(yōu)點(diǎn)： ①純度高；產(chǎn)量高。②易制備。③安全性好。④這種疫苗穩(wěn)定性好，免疫期長(zhǎng)，便于保存和運(yùn)輸。

4、如何控制基因工程藥物的質(zhì)量？

答：①原材料：主要檢查目的基因、表達(dá)載體及宿主細(xì)胞（如細(xì)菌、酵母、人和動(dòng)物的細(xì)胞），防止其產(chǎn)生我們不想要的遺傳變異。

②培養(yǎng)過程：無論是發(fā)酵還是細(xì)胞生產(chǎn)，關(guān)鍵是保證基因的穩(wěn)定性和不被污染。主要控制生產(chǎn)用的細(xì)胞庫、有限代次的生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)過程。

③純化工藝過程：要求能保證去除微量DNA、糖類、殘余宿主蛋白質(zhì)、純化過程帶入的有害化學(xué)物質(zhì)、致熱原，或者將這類雜質(zhì)減少至允許量。

④最終產(chǎn)品：主要表現(xiàn)在生物學(xué)效價(jià)測(cè)定、蛋白質(zhì)純度檢查、蛋白質(zhì)的比活性、蛋白質(zhì)的性質(zhì)鑒定幾個(gè)方面。

⑤雜質(zhì)檢測(cè)：蛋白類，由于降解、聚合或者錯(cuò)誤折疊而造成的目的蛋白變構(gòu)體在體內(nèi)往往會(huì)導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生；非蛋白類，主要有細(xì)菌、病毒、熱原質(zhì)和DNA幾種類型，往往在極低的水平就可產(chǎn)生嚴(yán)重的危害作用。

⑥安全性試驗(yàn)：其中的無菌試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、安全性和毒性試驗(yàn)按我國(guó)新頒布的《中國(guó)生物制品規(guī)程》進(jìn)行。

5、簡(jiǎn)述單克隆抗體的制備。

答：（1）．對(duì)動(dòng)物注射特定的抗原蛋白，使其產(chǎn)生免疫反應(yīng)；提取合成專一性抗體的單個(gè)B淋巴細(xì)胞，但這種B淋巴細(xì)胞不能在體外生長(zhǎng)。

（2）．應(yīng)用細(xì)胞雜交技術(shù)使骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，得到雜交瘤細(xì)胞。這種細(xì)胞既具有B淋巴細(xì)胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性。

（3）．對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，用特定的選擇培養(yǎng)基選出所需要的細(xì)胞群，體外或體內(nèi)培養(yǎng)，從培養(yǎng)液或動(dòng)物腹水中提取單克隆抗體。

6、簡(jiǎn)述基因工程操作流程。答：1目的基因的獲取

2構(gòu)建表達(dá)載體

3將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞 4重組DNA篩選與鑒定

4目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。

7、動(dòng)物大規(guī)模培養(yǎng)有哪些方式？

答：（1）懸浮培養(yǎng)法、（2）微載體培養(yǎng)法、（3）多孔載體培養(yǎng)法、（4）微囊化培養(yǎng)法、（5）中空纖維培養(yǎng)法。

8、生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的種類有哪些？各有什么特點(diǎn)？

答：（1）原代細(xì)胞,特點(diǎn)：不能直接獲得，需臨時(shí)制備，生長(zhǎng)不旺盛；（2）傳代細(xì)胞系，特點(diǎn)：接觸抑制和貼壁依賴性，增值能力有限，無致瘤性；

（3）轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，特點(diǎn)：無限增殖，倍增時(shí)間短，較低的營(yíng)養(yǎng)條件要求，適用于大規(guī)模生產(chǎn)；

（4）工程細(xì)胞系（包括融合細(xì)胞系和基因工程細(xì)胞系），特點(diǎn)：穩(wěn)定遺傳

9、獲得部分或全部人員化的質(zhì)量抗體采用何種方法？

10、何為治療性疫苗？比較治療性疫苗和預(yù)防性疫苗的主要區(qū)別。（p129）.答：治療性疫苗：指在已感染病原生物或患某些疾病的機(jī)體中，通過誘生機(jī)體的特異性或非特異性免疫應(yīng)答，以達(dá)到治療或防止疾病惡化的天然、人工修飾合成或用基因重組技術(shù)表達(dá)的產(chǎn)品或生物制品。

區(qū)別：a.使用對(duì)象不同：治療性疫苗的使用對(duì)象為已病者，而預(yù)防性疫苗的使用對(duì)象為未病者。

b.使用目的不同：治療性疫苗的目的是治療疾病，預(yù)防性疫苗的目的是預(yù)防疾病。

c.監(jiān)測(cè)手段不同：預(yù)防性疫苗接種后產(chǎn)生保護(hù)性抗體，可通過實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確，可靠。而治療性疫苗接種后疾病是否改善，則需要結(jié)合臨床癥狀、體征、疾病相關(guān)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行綜合測(cè)試，較為復(fù)雜，且其準(zhǔn)確性尚有爭(zhēng)議。

d.期望激發(fā)的免疫應(yīng)答類型不同：預(yù)防性疫苗接種后，期望產(chǎn)生的是保護(hù)性抗體，即激發(fā)體液免疫反應(yīng)；而治療性疫苗主要用于病毒感染和腫瘤疾病，病毒一旦進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)，抗體即失去作用，腫瘤細(xì)胞的殺滅也主要依賴細(xì)胞免疫效應(yīng)，因此，治療性疫苗應(yīng)以激發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)為主要目的，這是與預(yù)防性疫苗最大的區(qū)別。

第二篇：生物技術(shù)制藥復(fù)習(xí)要點(diǎn)與重點(diǎn)

復(fù)習(xí)要點(diǎn)

第一章 緒論

1．生物藥物的概念及21世紀(jì)生物藥物的分類

2．生物技術(shù)(Biotechnology)概念及現(xiàn)代生物技術(shù)的組成和特點(diǎn)

3．基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)、發(fā)酵工程技術(shù)定義

4．基因診斷、基因治療概念

5．生物技術(shù)在藥學(xué)應(yīng)用中的兩類方式

6．生物藥物的兩大來源及生物藥物的特點(diǎn)

7.生物制藥的特點(diǎn)、生物制藥基本過程及生物制藥基本方法

第五章 發(fā)酵工程制藥

1．發(fā)酵定義及發(fā)酵類型

2．菌種的選育方法

3．培養(yǎng)基概念和培養(yǎng)基的配制原則

4．發(fā)酵的基本過程

5．微生物發(fā)酵方式

6．發(fā)酵過程影響因素及控制

7．代謝工程定義

8．簡(jiǎn)述發(fā)酵工程下游加工過程的的特點(diǎn)和一般程序

第二章 基因工程制藥

1．基因的概念及基因的一般特性

2．基因工程藥物的概念

3．基因工程藥物制藥的主要流程

4．基因工程藥物建立分離純化工藝的根據(jù)

5．基因工程藥物分離純化的一般流程

6．基因工程產(chǎn)品的質(zhì)量控制內(nèi)容

7．基因工程藥物臨床前安全性評(píng)價(jià)的特殊性

8．蛋白質(zhì)工程的概念

第三章動(dòng)物細(xì)胞工程制藥

1．細(xì)胞定義、細(xì)胞的特征和細(xì)胞的化學(xué)組成2．細(xì)胞培養(yǎng)定義、細(xì)胞培養(yǎng)基本條件和基本過程

3．細(xì)胞融合技術(shù)定義和基本過程

4．細(xì)胞工程技術(shù)概念和動(dòng)物細(xì)胞工程制藥的基本概念

5．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)

6．細(xì)胞株、細(xì)胞系、原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念

7．動(dòng)物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法

8．轉(zhuǎn)基因動(dòng)物概念(transgenic animal)及轉(zhuǎn)基因的技術(shù)方法

9．轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在醫(yī)藥行業(yè)中的應(yīng)用

10．動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器（mammary gland bioreactor）概念

第四章植物細(xì)胞工程制藥

1．植物細(xì)胞工程制藥的兩大內(nèi)容

2．植物細(xì)胞的全能性定義和原理

3．植物細(xì)胞特點(diǎn)——外植體(explant)、脫分化（dedifferentiation）、再分化（redifferentiation）、愈傷組織（callus culture）概念

4．植物細(xì)胞的培養(yǎng)方法

5．轉(zhuǎn)基因植物概念及主要方法

6．植物細(xì)胞工程制藥應(yīng)用于哪些方面

第六章 酶工程制藥

1．酶工程概念和現(xiàn)代酶工程研究的主要內(nèi)容

2．酶固定化概念、方法和固定化酶的特點(diǎn)

3．細(xì)胞固定化概念和固定化細(xì)胞的特點(diǎn)

4．酶反應(yīng)器(Enzyme reactor)的概念

第七 章 新型生物制藥技術(shù)

抗體工程制藥

1．概念——抗體(antibody)、多克隆抗體(Polyclonal antibody,PcAb)、單克隆抗體(monoclonal

antibody)、雜交瘤細(xì)胞(hybridoma)技術(shù)、抗體工程

2．單抗制備的基本流程

3．HAT培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的原理

4．單克隆抗體的鑒定與檢測(cè)項(xiàng)目

5．基因工程抗體概念和基因工程抗體的類型———嵌合抗體(Chimeric Antibodies)，改形抗

體(reshaped Antibodies),單鏈抗體(single chain antigen binding protein,ScFv)等

6．噬菌體抗體工程和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá)抗體的優(yōu)點(diǎn)

7．反義核酸(ribozyme)、核酶（antisense nucleic acide）、RNA干擾（RNA interference，RNAi）

概念

8．核酸疫苗（nucleic acid vaccine)又稱基因疫苗（gene caccine)或DNA疫苗（DNA vaccine）

概念和核酸疫苗的優(yōu)點(diǎn)

9．基因治療概念、基因治療的必要條件和主要方式

10．干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell，ES細(xì)胞）的概念及應(yīng)用生物芯片基因芯片，蛋白芯片

12．。。。

復(fù)習(xí)重點(diǎn)

基本概念

1．Biotechnology 以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)學(xué)科的科

學(xué)原理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所

需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的2．Fermentation Engineering 微生物工程是利用微生物制造工業(yè)原料與工業(yè)產(chǎn)品并提供服

務(wù)的技術(shù).其特點(diǎn): 發(fā)酵工程是以某種特定的產(chǎn)物為工藝的目

標(biāo),這就要求微生物細(xì)胞既能正常生長(zhǎng)又能過量積累目的產(chǎn)物

3．Enzyme Engineering是酶學(xué)和工程學(xué)相互滲透結(jié)合發(fā)展而形成一門新的技術(shù)學(xué)科。它是

從應(yīng)用的目的出發(fā)研究酶、應(yīng)用酶的特異性催化功能，并通過工程

化將相應(yīng)原料轉(zhuǎn)化成有用物質(zhì)的技術(shù)。

4.Gene Engineering 是將重組對(duì)象的目的基因插入載體，拼接后轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，構(gòu)建

成工程菌(或細(xì)胞），實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程

菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)。

5．蛋白質(zhì)工程 以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基

因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)。

6.抗體工程利用單克隆抗體技術(shù)和基因工程技術(shù)進(jìn)行天然抗體的生產(chǎn)和抗體改造以及研

制新型抗體.7．Metabolic engineering 利用多基因重組技術(shù)有目的的對(duì)細(xì)胞代謝途徑進(jìn)行修飾、改造，改變細(xì)胞特性，并與細(xì)胞基因調(diào)控、代謝調(diào)控及生化工程相結(jié)合，為實(shí)現(xiàn)構(gòu)建新的代謝途徑，生產(chǎn)特定目的產(chǎn)物而發(fā)展起來的一個(gè)新的學(xué)科領(lǐng)域。

8．biopharmaceutics是指運(yùn)用生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等的研究成果，從生物體、生物組

織、細(xì)胞、體液等中，綜合利用物理學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物技術(shù)

和藥學(xué)等學(xué)科的原理和方法制造的一類用于預(yù)防、治療和診斷的制品

9．基因工程藥物 是指以DNA重組技術(shù)生產(chǎn)的蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、疫苗、單克隆抗

體和細(xì)胞生長(zhǎng)因子類藥物。

10．GeneDNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位。

11．Cell 細(xì)胞是一切生物體進(jìn)行生命活動(dòng)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位.細(xì)胞是有膜包圍的能獨(dú)立

進(jìn)行繁殖的原生質(zhì)。

12．Culture medium 是人工配制的適合于不同細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì).其主要成份碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、前體和水等幾大類.13．hybridoma技術(shù)：將含有特異免疫信息的淋巴細(xì)胞與具有無限增殖的腫瘤細(xì)胞在誘導(dǎo)

劑作用下使其融合,產(chǎn)生一個(gè)具有特異活性細(xì)胞及其產(chǎn)物技術(shù).14.monoclonal antibody由一個(gè)克隆產(chǎn)生只針對(duì)一種抗原決定簇的結(jié)構(gòu)與功能完全相同的抗體.15.Chimeric Antibodies將人抗體的恒定區(qū)(C區(qū))替代鼠源單抗的可變區(qū)(C區(qū))而得到的抗體

16．immobilized enzyme固定化酶是指限制或固定于特定空間位置的酶，具體來說，是指經(jīng)

物理或化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動(dòng)受到限制，而

又能發(fā)揮催化作用的酶制劑。

17．Biosensors由生物識(shí)別物質(zhì)(酶,微生物 動(dòng)植物組織 抗體等)與換能器組成的分析系統(tǒng),其基于酶(細(xì)胞)固定化技術(shù)

18．transgenic animal 采用基因工程技術(shù)把外源基因?qū)雱?dòng)物生殖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞和早

期胚胎,并在受體動(dòng)物染色體上穩(wěn)定整合,又經(jīng)過各種發(fā)育途徑能把外

源基因穩(wěn)定傳給子代的這種動(dòng)物

19.gene knockout 用基因打靶技術(shù)定點(diǎn)滅活一個(gè)內(nèi)源基因。

20．RNA interference（RNAi）是指對(duì)應(yīng)于某種Mrna的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈

RNA（ds RNA）分子使mRNA發(fā)生特異性降解，導(dǎo)致其不能表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象

21．酶聯(lián)免疫法（ELISA）以酶代替放射同位素對(duì)抗原或抗體進(jìn)行標(biāo)記，使酶與抗原抗體共

價(jià)連接，稱之為酶聯(lián)免疫吸附法。

22基因治療 是指將正常的外基因?qū)肷矬w的靶細(xì)胞內(nèi)，以彌補(bǔ)或糾正基因缺陷或異常表

達(dá)，從而達(dá)到治療目的。

23.原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

24傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)

25細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存

活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

26細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

27細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。

基本方法：

1.生物大分子的分離純化主要方法 超濾和凝膠過濾、離子交換法、電泳和等電聚焦法，等電點(diǎn)沉淀法和有機(jī)溶媒分級(jí)沉淀法、親和色譜法等

2.生物制藥基本方法有提取法 發(fā)酵法 化學(xué)合成法 組織培養(yǎng)法 現(xiàn)代生物技術(shù)方法

3.測(cè)定蛋白質(zhì)類藥物分子量方法超速離心、凝膠色譜法、SDS_PAGE 生物質(zhì)譜法等

4.酶和細(xì)胞固定化方法有載體偶聯(lián)法、交聯(lián)法、包埋法、新型固定法。

5.常用的菌種保藏方法① 斜面低溫保藏法 ②石蠟油封存法 ③砂土管保藏法 ④ 麩皮保

藏法 ⑤甘油懸液保藏法 ⑥冷凍真空干燥保藏法 ⑦液氮超低溫保藏法 ⑧宿主保藏法

等

6.基因工程操作中獲得目的基因的方法 逆轉(zhuǎn)錄法、化學(xué)合成法、PCR等

7.基因診斷主要技術(shù)包括基因探針技術(shù)、PCR技術(shù)、單抗試劑等。

8.發(fā)酵工程制藥中微生物發(fā)酵方式固體發(fā)酵、液體發(fā)酵

9.基因治療中外源基因?qū)氲姆绞?。?/p>

10.基本過程：

1．基因工程制藥的基本流程 獲得目的基因、組建重組質(zhì)粒、構(gòu)建工程菌（或細(xì)胞）、培養(yǎng)工程菌、產(chǎn)物分離純化、除菌過濾、半成品檢定、成品檢

定、包裝。

2．發(fā)酵的基本過程 菌種、種子制備、發(fā)酵、發(fā)酵液處理、提取精制。

3．單抗制備的基本流程抗原的制備、動(dòng)物的免疫、抗體產(chǎn)生細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜

交瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)、篩選能產(chǎn)生某一特異抗體的陽性克隆和克隆化、體外培養(yǎng)(動(dòng)物腹腔接種培養(yǎng))、大量制備單克隆抗體。

4．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程：取動(dòng)物器官、和組織、剪碎組織、胰蛋白酶處理、單個(gè)細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)。

5．生物制藥的基本過程1.原料的選擇、預(yù)處理和保存 2.原料的粉碎3.提取4.分離純化5.濃縮6.結(jié)晶7.干燥

6． PCR三個(gè)基本步驟 變性--退火--延伸

基本原理、組成、分類和特點(diǎn)

1.單抗制備的基本原理 制備單克隆抗體通過B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)把能產(chǎn)生單一抗體的淋

巴細(xì)胞與有增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合形成雜交瘤細(xì)胞，通過

有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)

生的只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇、結(jié)構(gòu)和特異性完全相同的高純度抗體

2．植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的理論基礎(chǔ) 植物細(xì)胞的全能性。

3現(xiàn)代生物藥物類型基因藥物 , 重組藥物，天然藥物，合成、半合成藥物。

4．現(xiàn)代生物技術(shù)主要組成基因工程、細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程。

5．現(xiàn)代生物技術(shù)特點(diǎn): 高效益、高智力、高投入、高競(jìng)爭(zhēng)、高風(fēng)險(xiǎn)、高勢(shì)能。

6．生物藥物來源主要有兩大類 ①以天然生物材料為主,②有目的的人工制備生物原料。7 基因工程抗體的類型有嵌合抗體、改型抗體、小分子抗體、多功能化抗體。

8.生物藥物特點(diǎn)化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成比較復(fù)雜；相對(duì)分子量較大，一般不易化學(xué)合成；藥理作

用針對(duì)性強(qiáng)，不良反應(yīng)?。化熜Т_切，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高；有的生物原料和生物

藥物不能代替.9.固定化酶的特點(diǎn)具有生物催化劑的功能，又有固相催化劑的功能。①可多次使用 ②反

應(yīng)后，酶底物產(chǎn)物易分開，產(chǎn)物中無殘留酶，易純化，產(chǎn)品質(zhì)量高。③

反應(yīng)條件易控制。④酶的利用效率高。⑤比水溶性酶更適合于多酶反應(yīng)

10固定化細(xì)胞的特點(diǎn)有細(xì)胞特性，生物催化劑功能，固相催化劑特點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)： ①無須進(jìn)行

酶的分離純化 ②保持酶的原始狀態(tài)，酶回收率高③比固定化酶穩(wěn)定性

高④細(xì)胞內(nèi)酶附助因子可再生⑤細(xì)胞本身含多酶體系⑥抗污染能力強(qiáng)

11.影響大腸桿菌中外源蛋白表達(dá)的主要因素①外源基因密碼子的使用,②mRNA結(jié)構(gòu),③表

達(dá)載體的構(gòu)建,④培養(yǎng)條件

如何實(shí)現(xiàn)高表達(dá)…

12發(fā)酵工程制藥特點(diǎn) 是以某種特定的產(chǎn)物為工藝的目標(biāo),這就要求微生物細(xì)胞既能正常生

長(zhǎng)又能過量積累目的產(chǎn)物。

13．生物制藥的特點(diǎn)（特殊性）1.生物原料組成成分非常復(fù)雜2.有效成分含量低3.易變性

及被破壞4.分離制備過程影響因素多相對(duì)“均一性”

13．發(fā)酵過程影響因素：溫度、pH、溶解氧、菌體濃度、泡沫、營(yíng)養(yǎng)濃度。如何控制…

14．微生物發(fā)酵生產(chǎn)藥物主要種類抗生素類;氨基酸類;核苷酸類維生素類;甾體類激素;治

療酶及酶抑制劑等。

15．細(xì)胞的特征：在結(jié)構(gòu)上具有自我裝配的能力, 在生理活動(dòng)中具有自我調(diào)節(jié)的能力, 在增

殖上自我復(fù)制的能力。

16．生物技術(shù)在藥學(xué)研究中兩種基本作用方式 1作為生產(chǎn)工具----生物技術(shù)藥物

2.作為研究手段----合理藥物設(shè)計(jì)

17．單抗優(yōu)點(diǎn)和局限性優(yōu)點(diǎn)單克隆抗體的特性高度特異性高度的均一性和可重復(fù)性 高

度專一性：大量產(chǎn)生及穩(wěn)定性：

局限性：固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍反應(yīng)

強(qiáng)度不如多克隆抗體、制備技術(shù)復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)工、價(jià)格較高

18生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞類型貼壁依賴性細(xì)胞、非貼壁依賴性細(xì)胞、兼性貼壁細(xì)胞

19．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn) 無細(xì)胞壁,抗機(jī)械強(qiáng)度低,對(duì)剪切力敏感,適應(yīng)環(huán)境差；倍增時(shí)間長(zhǎng),生

長(zhǎng)緩慢,易污染,培養(yǎng)時(shí)必須加抗生素；培養(yǎng)過程需氧量少,有的需要

一定CO2；培養(yǎng)過程中細(xì)胞相互粘連以集群形式存在20．基因工程藥物制備全程質(zhì)量控制理念包括

一、原材料的質(zhì)量控制(1.目的基因2.表達(dá)載體3.宿主細(xì)胞),二、培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制(1.生產(chǎn)用細(xì)胞庫2.培養(yǎng)過程)

三、純化工藝中的質(zhì)量控制;四.目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制

21.選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料的原理（目的）這些組織或

器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)

22．基因治療的必要條件1發(fā)病機(jī)制在DNA水平上已經(jīng)清楚2要轉(zhuǎn)移的基因已經(jīng)克隆分離，其表達(dá)產(chǎn)物有詳盡的了解 3該基因正常表達(dá)的組織可在體外進(jìn)行

遺傳操作

23．PCR原理 是體外酶促合成特異DNA片段的方法 反應(yīng)特點(diǎn)1.特異性強(qiáng)2.靈敏度高 3.簡(jiǎn)便、快速。確保PCR獲得目的基因序列正確應(yīng)注意:1.使用高保真的DNA

聚合酶,和相對(duì)保守的PCR擴(kuò)增條件.2.凡經(jīng)PCR擴(kuò)真制備的目的基因片段,克隆后必須要測(cè)序.24基因工程產(chǎn)品的質(zhì)量控制內(nèi)容：產(chǎn)品的鑒別、純度、活性、安全性、穩(wěn)定性、一致性。利用多學(xué)科的技術(shù)生物化學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)。

25.基因工程藥物包含上游下游過程

上游技術(shù)主要是分離目的基因、構(gòu)建工程菌(細(xì)胞)。主要技術(shù)涉及

1、基因克隆載體:質(zhì)粒載體，2、重組DNA技術(shù)的有關(guān)工具酶及其應(yīng)用

3、核酸制備技術(shù)； 下游階段：從工程菌的大量培養(yǎng)一直到產(chǎn)品的分離純化和質(zhì)量控制。主要包括工程菌大規(guī)模發(fā)酵最佳參數(shù)的確立，新型生物反應(yīng)器的研制，高效分離介質(zhì)及裝置的開發(fā)，分離純化的優(yōu)化控制，高純度產(chǎn)品的制備技術(shù)，生物傳感器等一系列儀器儀表的設(shè)計(jì)和制造，電子計(jì)算機(jī)的優(yōu)化控制等.26.基因工程中影響外源蛋白表達(dá)的主要因素

①外源基因密碼子的使用,②mRNA結(jié)構(gòu),③表達(dá)載體的構(gòu)建,④培養(yǎng)條件

如何實(shí)現(xiàn)高表達(dá)…

第三篇：生物技術(shù)制藥總結(jié)

生物技術(shù)：人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的的技術(shù)

1基因工程制藥：利用基因重組技術(shù)將外援基因?qū)胨拗骶蚣?xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，以獲得蛋白質(zhì)藥物的過程。

2.載體：是攜帶外源目的基因或DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)外援基因或DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。

細(xì)胞傳代passage：將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)器皿中消化、分散并接種至另一個(gè)培養(yǎng)器皿中的操作。細(xì)胞克隆培養(yǎng)（clonal culture）：即單細(xì)胞分離培養(yǎng)，是將動(dòng)物組織分散后，將一個(gè)細(xì)胞從群體細(xì)胞中分離出來，由單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成純系細(xì)胞集群。

動(dòng)物細(xì)胞的復(fù)蘇：其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。

細(xì)胞融合（cell fusion）：是指在外力（誘導(dǎo)劑或促融劑）作用下，兩個(gè)或兩個(gè)以上的異源（種、屬間）細(xì)胞或原生質(zhì)體相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合并形成雜種細(xì)胞的現(xiàn)象，或稱細(xì)胞雜交。

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（transgenic animal）：采用基因工程技術(shù)將外源目的基因?qū)雱?dòng)物生殖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞和早期胚胎，并在受體動(dòng)物的染色體上穩(wěn)定整合，在經(jīng)過發(fā)育途徑將外源目的基因穩(wěn)定地傳給子代，通過這項(xiàng)技術(shù)所獲得的動(dòng)物即為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。

胚胎干細(xì)胞（embryo stem cell）：簡(jiǎn)稱ES細(xì)胞，是從早期胚胎細(xì)胞團(tuán)分離出來并能在體外培養(yǎng)的一種高度未分化的、具有形成所有成年細(xì)胞類型能力的全能干細(xì)胞。它是正常二倍體型，像早期胚胎細(xì)胞一樣具有發(fā)育上的全能性。

抗體工程制藥（antibody engineering pharmaceutics）：利用基因工程、細(xì)胞工程（包括動(dòng)物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程）和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)生產(chǎn)抗體藥物的過程。

單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）：簡(jiǎn)稱單抗，將能大量擴(kuò)增和永生的骨髓瘤細(xì)胞和能合成分泌特異性抗體的B細(xì)胞（僅識(shí)別一種抗原表位）進(jìn)行融合得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細(xì)胞僅能合成及分泌抗單一抗原表位的特異性抗體。

雜交瘤細(xì)胞克隆化（cloning）：是指將陽性孔中分泌抗體的單個(gè)細(xì)胞分離出來。融合后的雜交瘤細(xì)胞一般要經(jīng)過3次克隆化才能達(dá)到100%的陽性克隆。

雙特異性抗體（bispecific antibody，bsAb）：亦稱雙功能抗體，是含有兩個(gè)不同配體結(jié)合位點(diǎn)的抗體分子，它有兩個(gè)不同的抗原結(jié)合部位（兩個(gè)臂），可分別結(jié)合兩種不同的抗原表位。嵌合抗體（chimeric antibody）：是利用DNA重組技術(shù)，將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的抗體，表達(dá)的抗體分子中輕、重鏈的V區(qū)是異源的，而C區(qū)是人源的，即整個(gè)抗體分子的60%~70%是人源的。

人源化抗體（humanized antibody，hAb）：通過CDR移植即把鼠抗體的CDR（互補(bǔ)決定區(qū)）序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)所得到的抗體，也稱CDR移植抗體或改型抗體。該抗體既具有鼠源性單抗的特異性又保持了人抗體的功能（C區(qū)的功能）。

免疫原性（immunogenicity）：抗原能刺激機(jī)體特異性免疫細(xì)胞，使其活化、增值、分化，最終產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)（抗體或致敏淋巴細(xì)胞）的特性。

免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）：抗原與相應(yīng)免疫效應(yīng)物質(zhì)在體內(nèi)或體外相遇時(shí)，可發(fā)生

特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)的特性。

減毒活疫苗（live attenuated vaccine）：是通過不同的方式手段使病原體的毒性即致病

性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。

滅活疫苗（inactivated）：是將病原體經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活純化處理，使其完全喪失感染性，但保留了病原體的幾乎全部組分因此滅活疫苗具有較好的免疫原性和安全性。

亞單位疫苗（subunit vaccine）：利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原）制成、能誘發(fā)

機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗。

分解代謝阻遏（catabolite repression）：在菌體的生長(zhǎng)階段被菌體快速利用的碳源會(huì)產(chǎn)

生大量的分解產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物阻遏次級(jí)代謝酶系的合成，只有當(dāng)這類碳源被消耗完后，阻遏作用被消除，菌體才由生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)入次級(jí)代謝產(chǎn)物合成階段，這種發(fā)酵過程中的次級(jí)代

謝產(chǎn)物在碳源被消耗盡時(shí)才產(chǎn)生和積累的現(xiàn)象稱為分解代謝阻遏。

生物技術(shù)：人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原

理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的的技術(shù)。

種齡（inoculumage）：種子罐中培養(yǎng)的菌絲轉(zhuǎn)入下一級(jí)種子罐或發(fā)酵罐時(shí)得培養(yǎng)時(shí)間

生物技術(shù)藥物的特性？

（1）理化性質(zhì)特性（1）相對(duì)分子量大（2）結(jié)構(gòu)復(fù)雜：蛋白質(zhì)和核酸均為生物大分子，蛋

白質(zhì)含有四級(jí)結(jié)構(gòu)（3）穩(wěn)定性差（2）藥理學(xué)作用特性（1）活性與作用機(jī)制明確：活性物

質(zhì)對(duì)生理功能的調(diào)節(jié)機(jī)制比較清楚（2）作用針對(duì)性強(qiáng)：有特定的靶分子、靶細(xì)胞或靶器官

（3）毒性低：生物技術(shù)藥物本身是體內(nèi)天然存在的物質(zhì)或它們的衍生物（4）體內(nèi)半衰期短

（5）有種屬特異性（6）可產(chǎn)生免疫原抑制（3）生產(chǎn)制備特性（1）藥物分子在原料中的含量低（2）原料液中常存在降解目標(biāo)產(chǎn)物的雜質(zhì)：應(yīng)采取快速分離純化的方法以除去影響

目標(biāo)產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)（3）制備工藝條件溫和：目的產(chǎn)物不穩(wěn)定（4）分離純化困難：需要

多種不同原理的層析單元操作才能達(dá)到要用的純度（5）產(chǎn)品易受有害物質(zhì)（4）質(zhì)量控制特

性

質(zhì)粒的特點(diǎn)：（1）是指獨(dú)立于原核生物染色體之外具有自主復(fù)制能力的遺傳物質(zhì)。（2）質(zhì)粒

具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力（3）質(zhì)粒具有不相容性：兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒不

能在同一宿主細(xì)胞中穩(wěn)定共存。4..共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(ccDNA)，開環(huán)DNA(ocDNA)，線狀

DNA(lDNA)在瓊脂糖凝膠電泳中

5.復(fù)制子松弛型復(fù)制子的復(fù)制和宿主蛋白的合成功能

無關(guān)，宿主染色體DNA復(fù)制受阻時(shí)，質(zhì)粒仍可復(fù)制；嚴(yán)謹(jǐn)型復(fù)制子的復(fù)制與宿主蛋白質(zhì)的合成相關(guān)，因此在每個(gè)宿主細(xì)胞中為低拷貝數(shù)，僅1~3個(gè)。

6.克隆表達(dá)的質(zhì)粒載體涉及三個(gè)要素：

（1）復(fù)制子（2）選擇標(biāo)記：由質(zhì)粒攜帶的賦予宿主細(xì)胞新的表型的基因，用于鑒定和篩選

轉(zhuǎn)化有質(zhì)粒的宿主細(xì)胞。常見的標(biāo)記：氨芐西林（Amp），卡那霉素（Kan）（3）多克隆位點(diǎn)

（MCS）：質(zhì)粒載體中由多個(gè)限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列密集排列形成的序列。

7.目的基因常用制備方法

(1)化學(xué)合成法（2）PCR法：在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通

過下列步驟擴(kuò)增DNA：a）變性：雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；b）退火：降

低溫度，引物與單鏈模板結(jié)合；c）延伸：溫度調(diào)整至DNA聚合酶最適宜溫度，最終與單鏈

模板形成雙鏈，并開始下一個(gè)變性、退火、延伸循環(huán)。（3）基因文庫法（4）cDNA文庫法

8.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

9.（1）DNA片段之間的連接方式：粘性末端的連接效率高于平頭末端。（2）目的基因與載

體的濃度和比例：增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因與載體DNA的摩爾數(shù)比應(yīng)大

于1.（3）連接溫度、時(shí)間、連接酶的活性及緩沖液。

9.重組DNA導(dǎo)入大腸桿菌，常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法：氯化鈣法

10.重組子的篩選與鑒定：

（1）載體遺傳標(biāo)記法：a)抗生素抗性篩選法

b)互補(bǔ)篩選法：重組子轉(zhuǎn)化成宿主細(xì)胞，載體的表達(dá)產(chǎn)物與宿主細(xì)胞中營(yíng)養(yǎng)缺陷性突變發(fā)生

互補(bǔ)作用，從而實(shí)現(xiàn)重組子的篩選。藍(lán)白斑篩選：lacZα基因可編碼β—半乳糖苷酶α氨基

端的α互補(bǔ)肽段，與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β—半乳糖苷酶α實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)，可分解底物5-溴-4-

氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，形成藍(lán)色菌落。由于lacAα基因的插入失活而成白色，空載體的宿主細(xì)胞呈藍(lán)色。c)營(yíng)養(yǎng)缺陷篩選法d噬菌斑篩選法(2)核酸分子雜交法

(3)限制性內(nèi)切酶圖譜法(4)DNA序列測(cè)定法：雙脫氧終止法(5)目的基因表達(dá)產(chǎn)物測(cè)定法

12.外源基因在大腸桿菌中的表達(dá)形式：

(1)胞內(nèi)表達(dá)：(a)非融合蛋白的胞內(nèi)表達(dá)：形成包涵體（B）融合蛋白的胞內(nèi)表達(dá)：在大腸桿

菌內(nèi)較穩(wěn)定（2）分泌表達(dá)：（a)分泌至周質(zhì)（b）分泌至胞外

11.外源基因在原核生物中表達(dá)的重要調(diào)控元件

(1)啟動(dòng)子：是DNA鏈上能與RNA聚合酶結(jié)合并起始mRNA合成的一段序列，是決定外源基

因在原核生物中表達(dá)效率的關(guān)鍵因素。(2)核糖體結(jié)合位點(diǎn)：SD序列(3)終止子

13.大腸桿菌中外源蛋白表達(dá)效率的影響因素：(1)外源基因密碼子：偏好密碼子（蛋白質(zhì)合成迅速，錯(cuò)配率低）和稀有密碼子(2)mRNA結(jié)構(gòu)：減少G、C含量，增加A、T含量(3)表達(dá)

載體：高拷貝數(shù)、適用范圍廣、穩(wěn)定性高、表達(dá)產(chǎn)物容易純化(4)外源蛋白穩(wěn)定性

14.分離純化技術(shù)應(yīng)滿足下列要求：(1)技術(shù)條件要溫和，能保持目的產(chǎn)物的生物活性；(2)選

擇性要好(3)回收率要高(4)兩個(gè)技術(shù)之間要能直接銜接(5)整個(gè)分離純化過程要快

15.基因重組蛋白的主要分離技術(shù)

(1)離心(2)沉淀(3)膜分離(4)雙水相萃取

16基因重組蛋白的主要純化技術(shù):

(1)離子交換層析(2)親和層析(3)凝膠過濾層析(4)反相層析和疏水層析

17.選擇分離純化方法的依據(jù)：

（元，層析分離次序的選擇也同樣重要。(3)根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇(a)具有良好的穩(wěn)

定性、重復(fù)性和較高的安全性(b)盡可能減少組成工藝的步驟(c)分離純化工藝所用的時(shí)間要

盡可能的短(d)工藝和技術(shù)必須高效

18．基因工程藥物的質(zhì)量控制要點(diǎn)

(1)蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(2)蛋白質(zhì)純度檢測(cè)(3)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量測(cè)定(4)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定(5)蛋

白質(zhì)序列分析(6)內(nèi)毒素分析、宿主蛋白與核酸殘留分析

19.蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

(1)紫外吸收法(2)BCA法(3)Lowry法(4)考馬斯亮藍(lán)法(5)SDS-PAGE掃描分析法

20.蛋白質(zhì)純度的檢測(cè)：電泳法、層析法、質(zhì)譜法、末端氨基酸殘基分析法

21.蛋白質(zhì)Mr測(cè)定有SDS-PAGE法、凝膠層析法、質(zhì)譜法

22.蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定的常用方法：等電聚焦法。

23.蛋白質(zhì)序列的分析:N-端氨基酸序列分析，C-端氨基酸序列分析

根據(jù)體外培養(yǎng)時(shí)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)基質(zhì)的依賴性，可將動(dòng)物細(xì)胞分為

(1)貼壁依賴性細(xì)胞(2)非貼壁依賴性細(xì)胞(3)兼性貼壁細(xì)胞

1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境條件

(1)培養(yǎng)溫度（哺乳類37℃，昆蟲25~28℃）(2)pH值（大多數(shù)7.2~7.4）(3)通氧量（一定量的CO2）(4)防止污染(5)基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(6)滲透壓

3.動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)特性

(1)比微生物細(xì)胞大得多，無細(xì)胞壁，抗機(jī)械強(qiáng)度低，對(duì)剪切力敏感，適應(yīng)環(huán)境能力差；(2)

倍增時(shí)間長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，正常二倍體細(xì)胞的生長(zhǎng)壽命是有限的；(3)對(duì)培養(yǎng)基要求高，易受

微生物污染，培養(yǎng)時(shí)需要添加抗生素；(4)生長(zhǎng)大多需貼附于基質(zhì)，相互粘連以集群形式存

在，并有接觸抑制現(xiàn)象；(5)多半將產(chǎn)物分泌在細(xì)胞外，便于收集和純化；(6)對(duì)蛋白質(zhì)的合成條件和修飾功能與細(xì)菌不同，動(dòng)物細(xì)胞可對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行完善的翻譯后修飾，特別是糖基化，與天然產(chǎn)品更一致，更適合于臨床應(yīng)用。

4.原代培養(yǎng)的主要步驟

(1)從健康動(dòng)物體內(nèi)無菌條件下取出適量組織，剪切成小薄片；(2)加入適宜濃度的胰蛋白酶

或膠原酶和EDTA等進(jìn)行消化作用使細(xì)胞分散；(3)將分散的細(xì)胞進(jìn)行洗滌并純化后，以2×

10^6~7×10^6 /ml的濃度加到培養(yǎng)基中，37℃下進(jìn)行原代培養(yǎng)，并適時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。分為

組織塊培養(yǎng)和單層細(xì)胞培養(yǎng)兩種方法。

5.動(dòng)物細(xì)胞深低溫保存的基本原理

在-70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于完全停滯狀態(tài)，故可以長(zhǎng)期保存。

在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)

生機(jī)械損傷、電解質(zhì)濃度升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白質(zhì)變性等，能引起細(xì)胞

死亡。目前為了保存細(xì)胞，都采用液氮低溫（-196℃）凍存的方法。

6.動(dòng)物細(xì)胞的復(fù)蘇

其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍

存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。

7.動(dòng)物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)要求特點(diǎn)

(1)碳源不能為無機(jī)物，大多為葡萄糖；(2)氮源不能為無機(jī)物，主要為各種氨基酸；(3)在很

多情況下尚需添加5%~20%的小牛血清或適量的動(dòng)物胚胎浸出液。

8.動(dòng)物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法

(1)懸浮培養(yǎng)法(2)微載體培養(yǎng)法(3)多孔載體培養(yǎng)法(4)微囊化培養(yǎng)法(5)中空纖維培養(yǎng)法

9.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法主要有:(1)病毒法(2)PEG法(3)電擊法(4)激光法

10.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物反應(yīng)器（整體掌握？）

(1)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器（藥用蛋白，如抗凝血Ⅲ、抗胰蛋白酶、葡萄糖苷酶、C蛋白）

(2)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物血液生物反應(yīng)器（人血紅蛋白、抗體或非活性狀態(tài)的融合蛋白）(3)轉(zhuǎn)基因動(dòng)

物尿液生物反應(yīng)器（促性腺激素）(4)轉(zhuǎn)基因雞（蛋）生物反應(yīng)器（人干擾素）

1.單克隆抗體技術(shù)的基本原理

基于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)的，即骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞的融合。骨髓瘤細(xì)胞在體外

培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；抗原免疫的B細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后形成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了兩個(gè)親代

細(xì)胞的特性，既具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特異性抗

體的能力。通常使用HAT（H為次黃嘌呤、A為氨基蝶呤、T為胸腺嘧啶核苷）選擇培養(yǎng)基

對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選。未融合的脾細(xì)胞因不能在體外長(zhǎng)期存活而死亡，未融合的骨髓瘤細(xì)

胞合成DNA的從頭合成途徑被培養(yǎng)基中的A阻斷，又因缺乏HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸

核糖轉(zhuǎn)移酶）和TK（胸腺嘧啶核苷激酶），不能利用培養(yǎng)基中的H和T完成DNA的合成過

程而死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養(yǎng)基

中長(zhǎng)期存活與繁殖并分泌抗體。

2.單克隆抗體的大量制備主要方法:（1）體內(nèi)培養(yǎng)法（2）體外培養(yǎng)法

6.重組ScFv的應(yīng)用:(1)用于構(gòu)建和生產(chǎn)免疫毒素(2)用于腫瘤的影像分析和治療

7.噬菌體抗體庫技術(shù)的基本原理:用PCR技術(shù)從人免疫細(xì)胞中擴(kuò)增出整套的VH和VL基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達(dá)在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗

體基因的存在，同時(shí)在其表面又有抗體分子的表達(dá)，可以方便地利用抗原-抗體特異性結(jié)合而篩選出所需要的抗體，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。

7.噬菌體抗體庫構(gòu)建過程

(1)從外周血或脾、淋巴結(jié)等組織中分離B細(xì)胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；

(2)應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增不同的抗體基因片段；

(3)構(gòu)建噬菌體載體；(4)用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化細(xì)菌，構(gòu)建全套抗體庫。

通過多輪的抗原親和吸附（結(jié)合）-洗脫-擴(kuò)增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。其中，噬

菌體抗體庫的篩選是關(guān)鍵環(huán)節(jié)和步驟。

減毒活疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：

（1）通過自然感染途徑接種，可以誘導(dǎo)包括體液免疫、細(xì)胞免疫和粘膜免疫在內(nèi)的更全面的免疫應(yīng)答，使機(jī)體獲得更廣泛的免疫保護(hù)；（2）由于使用的是活的微生物他們可以在體內(nèi)

長(zhǎng)時(shí)間起作用而誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，且由于活的微生物有增殖的特性，理論上只需要接

種一次，即可達(dá)到滿意的免疫效果；（3）可能引起水平傳播擴(kuò)大免疫效果，增強(qiáng)群體免疫屏

障；(4)一般不需要再疫苗中添加佐劑，生產(chǎn)工藝一般不需要濃縮純化，價(jià)格低廉。

缺點(diǎn)：

(1)一般減毒活疫苗均保留一定殘余毒力，對(duì)一些個(gè)體如免疫缺陷者可能誘發(fā)嚴(yán)重疾病，并

且由于種種原因如基因修飾等，減毒活疫苗可能出現(xiàn)毒力回復(fù)即“返祖”現(xiàn)象；(2)減毒活

疫苗是活的微生物制劑，可能造成環(huán)境污染而引發(fā)交叉感染等，并可能滯留在環(huán)境中形成傳

染源；(3)缺損顆?？赡芨蓴_免疫效果，因此產(chǎn)品分析評(píng)估較為困難；(4)保存運(yùn)輸?shù)葪l件要

求較高，如需冷藏等。

1.滅活疫苗的特點(diǎn)：(1)滅活疫苗常需多次接種；(2)接種滅活疫苗產(chǎn)生的抗體滴度隨著時(shí)

間而下降；(3)滅活疫苗需要量大。

第七章 發(fā)酵工程制藥

1.發(fā)酵類型：(1)微生物菌體發(fā)酵(2)微生物的酶(3)微生物的代謝產(chǎn)物發(fā)酵(4)微生物轉(zhuǎn)化發(fā)

酵(5)生物工程菌發(fā)酵

2.微生物發(fā)酵生產(chǎn)藥物的分類：(1)抗生素類(2)氨基酸類(3)核苷酸類(4)維生素類(5)甾體類

激素(6)多糖類(6)治療酶及酶抑制劑

3.菌種保藏方法：(1)斜面低溫保藏法(2)石蠟油封存法(3)沙土管保藏法(4)麩皮保藏法(5)甘

油懸液保藏法(6)冷東真空干燥保藏法(7)液氮超低溫保藏法(8)宿主保藏法

4.種子液具備的條件：(1)菌種的生長(zhǎng)活力強(qiáng)，轉(zhuǎn)種至發(fā)酵罐后能迅速生長(zhǎng)，延遲期短；(2)

生理狀態(tài)穩(wěn)定；(3)菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求；(4)無雜菌污染，保證純種培養(yǎng)；()保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力

5.微生物的發(fā)酵方式：（1）分批發(fā)酵（2）補(bǔ)料—分批發(fā)酵（3）半連續(xù)發(fā)酵（4）連續(xù)發(fā)酵

5.發(fā)酵過程的中間分析項(xiàng)目：（1）產(chǎn)物產(chǎn)量（2）PH值（3）糖（4）氨基氮（5）菌絲形

態(tài)

6.發(fā)酵過程的影響因素及控制：（1）菌體濃度的影響及控制（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)發(fā)酵的影響

及控制（3）溫度的影響及控制（4）PH的影響及控制（5）溶氧的影響及控制（6）二氧化碳的影響及控制（7）泡沫的影響及控制（8）染菌對(duì)發(fā)酵的影響

第四篇：生物技術(shù)制藥教學(xué)大綱

第一章 緒論（2學(xué)時(shí)）第一節(jié) 生物技術(shù)概述 1 生物技術(shù)的概念 2 生物技術(shù)發(fā)展史 第二節(jié) 生物技術(shù)制藥 1 生物技術(shù)制藥的概念 2 生物技術(shù)在制藥中的應(yīng)用 我國(guó)生物技術(shù)制藥現(xiàn)狀和發(fā)展前景 4 醫(yī)藥生物技術(shù)發(fā)展展望

第二章 生物藥物（10學(xué)時(shí)）

1．生物藥物的來源、特性、分類與制備。（2學(xué)時(shí)）

2．氨基酸類藥物：氨基酸類藥物研究概況；在醫(yī)藥中的應(yīng)用；氨基酸生產(chǎn)。（2學(xué)時(shí)）3．多肽、蛋白質(zhì)類藥物：多肽、蛋白質(zhì)類藥物的特點(diǎn)、分離純化方法、工業(yè)生產(chǎn)制備過程。（2學(xué)時(shí)）

4．核酸類藥物：概述（分類、應(yīng)用）；生產(chǎn)方法；核酸類藥物的制備。（2學(xué)時(shí)）5．糖類藥物：制備；純化。（2學(xué)時(shí)）

第三章 基因工程制藥（8學(xué)時(shí)）

通過本章學(xué)習(xí)，了解基因工程藥物研制的意義，掌握基因工程藥物的研制過程、研制方法。1概述。

2基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程。(2)3目的基因的獲得：直接分離法；從基因文庫中篩選；逆轉(zhuǎn)錄法；人工合成法。4目的基因與運(yùn)載體的體外重組：常用載體；目的基因與運(yùn)載體的體外重組。5重組分子導(dǎo)入受體細(xì)胞；導(dǎo)入方法；影響轉(zhuǎn)化的因素；陽性重組體的篩選。(2)6基因表達(dá)：大腸桿菌中的基因表達(dá)；真核基因在原核生物中的表達(dá)方式；真核基因在真核生物中的表達(dá)；真核基因在動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。(2)7基因工程下游技術(shù)；下游技術(shù)的要求；基因工程菌的穩(wěn)定性；基因工程菌發(fā)酵。8基因工程藥物的分離、純化：分離純化的基本過程；分離純化的技術(shù)。

9基因工程藥物的質(zhì)量控制:材料的質(zhì)量控制;培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制;純化工藝工程的質(zhì)量控制。(2)第四章 動(dòng)物細(xì)胞工程制藥（8學(xué)時(shí)）1 概述： 形態(tài)及生理特性。（2）生產(chǎn)用的動(dòng)物細(xì)胞：生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的要求；生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞的獲取。4 基因工程細(xì)胞的構(gòu)建和篩選；真核細(xì)胞基因表達(dá)載體的構(gòu)建；基因載體的導(dǎo)入和高效表達(dá)工程細(xì)胞株的篩選。（2）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基 6 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法（2）7 動(dòng)物細(xì)胞大量培養(yǎng)的方法和操作方式 動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器及檢測(cè)控制系統(tǒng)：攪拌式生物反應(yīng)器；氣升式生物反應(yīng)器；流化床生物反應(yīng)器。（2）

第五章 抗體制藥（4學(xué)時(shí)）1概述

2單克隆抗體：制備；細(xì)胞融合；雜交瘤的培養(yǎng)、篩選及克隆化。（2）

3鼠源性單克隆抗體的改造：Ig分子的結(jié)構(gòu)模式圖；結(jié)構(gòu)改造；基因工程抗體。4抗體的應(yīng)用：臨床檢驗(yàn)；層析介質(zhì)；導(dǎo)向藥物。（2）

第五篇：生物技術(shù)制藥重點(diǎn)總結(jié)

1.生物藥物：又稱為生物工程，是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其它基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原

理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的技術(shù)。

2.生物技術(shù)藥物： 采用DNA重組技術(shù)或其它生物技術(shù)生產(chǎn)的用于預(yù)防、治療和診斷疾病的藥物，主要是重組蛋白和

核酸類藥物，如細(xì)胞因子、纖溶酶原激活劑、血漿因子等。

3.質(zhì)粒載體：質(zhì)粒是指獨(dú)立于原核生物染色體之外具有自主復(fù)制能力的遺傳物質(zhì)。分三種構(gòu)型：共價(jià)閉合環(huán)狀

DNA(cccDNA)、開環(huán)DNA(ocDNA)、線狀DNA(IDDNA)。在瓊脂糖凝膠電泳中遷移率：cccDNA > IDDNA > ocDNA

4.目的基因的常用制備方法主要包括化學(xué)合成法、PCR法、基因文庫法和cDNA文庫法等。

5.PCR法是指聚合酶鏈反應(yīng)，是根據(jù)生物體內(nèi)DNA復(fù)制原理在DNA聚合酶催化和dNTP參與下，引物依賴DNA模

板特異性的擴(kuò)增DNA。在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通過三個(gè)循環(huán)步驟擴(kuò)增DNA：：①變性—雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；②退火—溫度下降，引物與單鏈模板結(jié)合（溫度下降，PCR特性下降，效率升高）；③延伸—溫度調(diào)整至DNA聚合酶最適宜溫度，DNA聚合酶催化dNTP加至引物3′-OH，引物以5′→3′方向延伸，最終與單鏈模板形成雙聯(lián)DNA, 并開始下一個(gè)循環(huán)。

6.cDNA文庫法：cDNA是指與mRNA互補(bǔ)的DNA。cDNA文庫法是指提取生物體總mRNA，并以mRNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成cDNA的一條鏈，再在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈cDNA，將全部cDNA都克隆到宿主細(xì)胞而構(gòu)建成cDNA文庫。

7.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

①DNA片段之間的連接方式；粘性末端的連接效率高于平頭末端。

②目的基因與載體的濃度和比例；增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因于載體DNA的摩爾數(shù)比應(yīng)大于1。③連接溫度，時(shí)間，連接酶的活性及緩沖體系。

8.重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞的方法：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、顯微注射和電穿孔。

9.互補(bǔ)篩選法（最常見藍(lán)白班篩選法）需添加X–gal（X–Gal是β–半乳糖苷酶（β–galactosidase）的底物，水解后呈藍(lán)

色）和IPTG（是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)）篩選物質(zhì)進(jìn)行篩選。

10.菌落原位雜交：又稱探針原位雜交法，制備與目的的基因某一區(qū)域同源的探針序列，根據(jù)核酸雜交原理，探針序列

特異性地雜交目的基因，并通過放射性同位素或熒光基團(tuán)進(jìn)行定位監(jiān)測(cè)。

11.凝膠過濾層析：凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法?；驹硎牵焊鶕?jù)生物

大分子的蛋白質(zhì)的質(zhì)量的大小來實(shí)現(xiàn)目的蛋白的分離純化。在凝膠過濾層析中所用的凝膠是一種惰性的不帶電荷具有三維空間結(jié)構(gòu)的多孔網(wǎng)狀物質(zhì)，凝膠的每個(gè)顆粒的微粒結(jié)構(gòu)就如一個(gè)篩子，當(dāng)樣品隨流動(dòng)相經(jīng)過凝膠柱時(shí)，較大的分子內(nèi)不能進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔內(nèi)而收到排阻，將與流動(dòng)相一起首先被洗脫下來，而較小的分子進(jìn)入部分凝膠網(wǎng)孔內(nèi)，所以流出的速度相對(duì)較慢。

12.反相層析（RPC）和疏水層析（HIC）的比較：是根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性差異來實(shí)現(xiàn)分離純化。先比反相層析而言，疏

水層析回收率較高，蛋白質(zhì)變性的可能性較小。反相層析和疏水層析的差異在于前者在有機(jī)相中進(jìn)行，蛋白質(zhì)經(jīng)過反向流動(dòng)相與固定相作用有時(shí)會(huì)發(fā)生部分變性，而后者通常在水溶液中進(jìn)行，蛋白質(zhì)在分離過程中一般仍保持其天然構(gòu)象。

13.蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法：紫外吸收法、BCA法、福林—酚試劑法（lowry）、考馬斯亮藍(lán)法、ELISA法等。

14.蛋白質(zhì)純度檢查的常見方法：SDS-PAGE法（最常用）、非變性PAGE法、層析法等。

15.蛋白質(zhì)序列的分析方法：N-端氨基酸序列分析法（基本原理Edman法）、C-端氨基酸序列分析法。

16.體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的類型：貼壁依賴性細(xì)胞，非貼壁依賴性細(xì)胞和兼性貼壁細(xì)胞。

17.動(dòng)物細(xì)胞與微生物細(xì)胞，植物細(xì)胞相比較具有的特點(diǎn)：

①比微生物細(xì)胞大得多，無細(xì)胞壁，抗機(jī)械強(qiáng)度低，對(duì)剪切力敏感，適應(yīng)環(huán)境能力差

②倍增時(shí)間長(zhǎng)生長(zhǎng)緩慢，正常二倍體細(xì)胞的生長(zhǎng)壽命是有限的③對(duì)培養(yǎng)基的要求高，易受微生物污染，培養(yǎng)時(shí)常常需要添加抗生素

④生長(zhǎng)大多需貼附于基質(zhì)，相互黏連以集群形式存在，并有接觸抑制現(xiàn)象

⑤多半將產(chǎn)物分泌在細(xì)胞外，便于收集和純化。

18.動(dòng)物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)要求是：1.碳源不能為無機(jī)物，大多為葡萄糖

2.氮源也不能為無機(jī)物，主要為各種氨基酸

3.在很多情況下尚需添加5%-20%的小牛血清或適量的動(dòng)物胚胎浸出液

19.動(dòng)物培養(yǎng)基可分為：天然培養(yǎng)基，合成培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基三大類.20.原代細(xì)胞：直接將動(dòng)物組織或器官經(jīng)過粉碎，消化而制的的懸浮細(xì)胞稱為原代細(xì)胞.21.懸浮培養(yǎng)法：是細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)方法，它適用于一切種類的非貼壁細(xì)胞，兼性貼壁細(xì)胞，可連續(xù)測(cè)定細(xì)胞濃度，連續(xù)收集部分細(xì)胞進(jìn)行繼代培養(yǎng)，也無需消化分散，細(xì)胞收率高

22.木瓜蛋白酶水解IgG分子可產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合片段（Fab）和一個(gè)可結(jié)晶片段（Fc）

23.胃蛋白酶水解IgG分子可產(chǎn)生一個(gè)F(ab’)2和若干裂解小分子片段（pFc’）

24..單克隆抗體技術(shù)的基本原理：基于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)的，即骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞的融合。骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體，而抗原免疫的B細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后形成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了連個(gè)親代細(xì)胞的特性，既具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特異性抗體的能力。

25.骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生回復(fù)突變每3-6個(gè)月應(yīng)用8-氮雜鳥嘌呤（8-AG）篩選一次，以便殺死突變細(xì)胞

26.細(xì)胞融合的方法：常用的有轉(zhuǎn)動(dòng)法和離心法.27.雜交瘤細(xì)胞的克隆化的方法有：有限稀釋法和軟瓊脂平板法，顯微操作法

28.雙特異性抗體：是含有兩個(gè)不同配體結(jié)合位點(diǎn)的抗體分子，它有兩個(gè)不同的抗原結(jié)合部位（兩個(gè)臂），可分別結(jié)合兩種不同的抗原表位。其中一個(gè)可與靶細(xì)胞表面抗原結(jié)合，另一個(gè)則可與效應(yīng)物（如藥物，效應(yīng)細(xì)胞等）結(jié)合，從而將效應(yīng)物直接導(dǎo)向靶組織細(xì)胞。

29.細(xì)胞內(nèi)抗體：亦稱內(nèi)抗體，主要是指細(xì)胞內(nèi)合成并作用于細(xì)胞內(nèi)組分的抗體。

30.如何構(gòu)建噬菌體抗體庫？構(gòu)建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個(gè)過程：1.從外周血或脾，淋巴結(jié)等組織中分離B細(xì)胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA2，應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增不同的抗體基因片段3，構(gòu)建噬菌體載體4，用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化細(xì)菌，構(gòu)建全套抗體庫。通過多倫的抗原親和吸附-洗脫-擴(kuò)增，最終篩選出抗原特異性地抗體克隆。篩選為關(guān)鍵環(huán)節(jié)和步驟。

31.疫苗的組成：具有免疫保護(hù)性的抗原（Ag）如蛋白質(zhì)，多肽，多糖或核酸等與免疫佐劑混合制備而成。

32.佐劑是指能非特異性的增強(qiáng)免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)，可先于抗原或與抗原一起注入機(jī)體。

33.目前用于人體的佐劑只有兩種：1，鋁佐劑（氫氧化鋁或磷酸鋁）2，MF59

34.滅活疫苗和活疫苗的特點(diǎn)比較：（P122,表5-4）

35.聯(lián)合疫苗包括多聯(lián)疫苗和多價(jià)疫苗，多聯(lián)疫苗可用于預(yù)防由不同病原微生物引起的傳染病，而多價(jià)疫苗僅預(yù)防同一

種病原微生物的不同亞型引起的傳染病。

36.核酸疫苗是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種新型疫苗。核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗，由能引起機(jī)體保護(hù)性

免疫反應(yīng)的抗原的編碼基因和載體組成。核酸疫苗又稱為基因疫苗，基因免疫或核酸免疫

37.酶的分離純化過程必須遵循以下原則：

1、全部操作一般在低溫（0-4攝氏度）進(jìn)行。

2、在分離提純過程中，不能

劇烈攪拌。

3、在提純?nèi)軇┲屑右恍┍Ｗo(hù)劑，如少量EDTA,少量 –巰基乙醇等

4、在分離提純過程中要不斷測(cè)定酶的的活力和蛋白質(zhì)濃度，以對(duì)純化過程進(jìn)行檢測(cè)。一般用兩個(gè)指標(biāo)來衡量分離純化方法的好壞：總活力的回收率和比活力提高倍數(shù)。

38.傳統(tǒng)的酶固定化方法大致可分為載體聯(lián)合法，交聯(lián)法和包埋法

39.固定化對(duì)酶穩(wěn)定性的影響：

1、熱穩(wěn)定性提高

2、對(duì)有機(jī)試劑及酶抑制劑的穩(wěn)定性提高

3、對(duì)PH，蛋白酶，儲(chǔ)存

盒操作條件的穩(wěn)定性提高

40.目前常用的菌種保藏方法有：

1、斜面低溫保藏法，一般可保存1-6個(gè)月左右

2、石蠟油封存法，一般可保存1-2年左右

3、砂土管保藏法，保藏期約1-10年

4、麩皮保藏法，保藏期在一年以上

5、甘油懸液保藏法，-20度保藏期約為0.5-1年，-70度下保藏期可達(dá)10年

6、冷凍真空干燥保藏法，5-15年

7、液氮超低溫度保藏法，15年以上

8、宿主保藏法

41、產(chǎn)物產(chǎn)量的測(cè)定方法有：生物測(cè)定法和化學(xué)測(cè)定法，一般采用化學(xué)測(cè)定法，以求迅速躋身反應(yīng)生產(chǎn)情況。中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)CCCCM中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC

美國(guó)典型菌種保藏中心 ATCC美國(guó)的北部地區(qū)研究實(shí)驗(yàn)室NRRL

英國(guó)的國(guó)家典型菌種保藏所NCTC日本的大阪發(fā)酵研究所IFO

德國(guó)菌種保藏中心DSM42、中間反應(yīng)產(chǎn)量測(cè)定：產(chǎn)物產(chǎn)量、ph值、糖、氨基酸、菌絲形態(tài)。

43、PH對(duì)發(fā)酵的影響有哪些？

1.PH影響酶的活性，當(dāng)PH值抑制菌體的某些酶的活性時(shí)使菌的新陳代謝受阻

2.PH影響微生物細(xì)胞膜所帶電荷的改變，從而改變細(xì)胞膜的通透性，影響微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝物的排泄，因此影響新陳代謝的進(jìn)行

3.PH影響培養(yǎng)基某些成分和中間代謝物的解離，從而影響微生物對(duì)這些物質(zhì)的利用

4.PH影響代謝方向，PH不同，往往引起菌體代謝過程不同，是代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。

44、基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)的特點(diǎn)？采用基因重組技術(shù)構(gòu)建的基因工程菌與細(xì)胞，由于帶有外來基因，對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)和

發(fā)酵的工藝技術(shù)通常與單純的微生物細(xì)胞的工藝技術(shù)有不同之處?；蚬こ叹l(fā)酵的目的主要是實(shí)現(xiàn)外源基因的高效表達(dá)，以獲取大量的外源基因產(chǎn)物。而外源基因的高技術(shù)表達(dá)不僅涉及宿主、載體與外源基因三者之間的相互關(guān)系，與所處環(huán)境條件密切相關(guān)?；蚬こ叹l(fā)酵一般分兩個(gè)階段：前期是菌體生長(zhǎng)階段，后期是菌體生長(zhǎng)階段。

45、基因工程菌不穩(wěn)定性的原因？主要表現(xiàn)在質(zhì)粒的不穩(wěn)定性以及表達(dá)產(chǎn)物的不穩(wěn)定性。而質(zhì)粒的不穩(wěn)定性又分結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性以及分離不穩(wěn)定。結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性是由于轉(zhuǎn)位作用和重組作用所引起的質(zhì)粒DNA的重排與損失。分離的不穩(wěn)定性是細(xì)胞分裂過程中發(fā)生的不平均分配，從而造成質(zhì)粒的缺陷型分配，以致造成質(zhì)粒丟失。引起質(zhì)粒載體不穩(wěn)定性的原因只要是宿主新陳代謝負(fù)荷的加重，大量外源蛋白的形成對(duì)宿主細(xì)胞的損害，通常是致死的，失去制造外源蛋白的能力的細(xì)胞一般生長(zhǎng)的快得多，從而能替代有生產(chǎn)能力的菌株，這就導(dǎo)致了基因工程菌的不穩(wěn)定性。

46、突變生物合成：采用一些誘變劑，如紫外線，激光，高速電子流或一些化學(xué)藥物如亞硝基胍，溴化乙啶等對(duì)藥物的產(chǎn)生菌進(jìn)行誘變，是他們喪失合成某種中間體的能力，因而不能合成原來結(jié)構(gòu)的化合物，陳武阻斷突變株。在發(fā)酵培養(yǎng)這些阻斷突變株時(shí)添加某些天然或化學(xué)合成的化合物作為中間體，這些突變株能利用這些中間體合成一些新結(jié)構(gòu)的最終化合物，這個(gè)過程稱為突變生物合成。

47、微生物轉(zhuǎn)化系酶促化學(xué)反應(yīng)，具有與通常有機(jī)化學(xué)反應(yīng)不一樣的特點(diǎn)：

1.以具有活性中心和特殊空間結(jié)構(gòu)的酶作為催化劑

2、對(duì)作用的基質(zhì)有嚴(yán)格的選擇性和專一性

3、酶催化反應(yīng)的速度極高，非一般催化劑可比

4、一般在常溫常壓下進(jìn)行，反應(yīng)條件溫和

48、微生物對(duì)甾體轉(zhuǎn)化反應(yīng)的特點(diǎn)：在微生物轉(zhuǎn)化過程中，專一，有效的菌體量的多少，以及甾體底物在水相的溶解

性等問題成為影響轉(zhuǎn)化率的重要因素，目前采用的兩階段發(fā)酵及兩相發(fā)酵方法很好的解決了這些甾體微生物轉(zhuǎn)化中的問題。

49、蛋白質(zhì)藥物對(duì)化學(xué)修飾的意義：

50、最常用的修飾劑有：主要是水溶性高分子聚合物，如葡聚糖、右旋糖苷、肝素以及低分子肝素、多聚唾液酸、聚

乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、PEG、白蛋白等。目前以PEG最常用的。其毒性小、無抗原性、溶解性良好。

51、修飾策略有隨機(jī)修飾與定點(diǎn)修飾兩類。氨基修飾主要用隨機(jī)修飾，在利用特定的修飾劑可以實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)修飾。巰基

修飾多為定點(diǎn)修飾。羧基修飾為定點(diǎn)修飾。

52、選擇PEG修飾劑應(yīng)該考慮的因素：PEG的Mr，修飾位點(diǎn)，水解穩(wěn)定性和反應(yīng)活性。

53、核酶：核酶不是普通的蛋白質(zhì)酶，而是一類具有催化活性的核酸分子。目前已知的具有核酶催化功能的RNA結(jié)

構(gòu)至少可以分成5類：發(fā)夾狀核酶，錘頭狀核酶，I型內(nèi)含子核酶，RNaseP核酶，丁型肝炎病毒核酶等

54、反義核酸：是指具有抑制基因表達(dá)作用。包括反義RNA、反義DNA分子，由部分RNA和部分DNA形成RNA-DNA

嵌合分子，以及經(jīng)高度化學(xué)修飾的寡聚核酸類似物，這些分子統(tǒng)稱反義核酸類藥物。

55、褔米韋生經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市成為第一個(gè)反義核酸類藥物。

56、RNAi:即RNA干擾現(xiàn)象，是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種由雙鏈RNA誘導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控和基因沉默過程。主要階段：

啟動(dòng)階段和執(zhí)行階段

57、小干擾RNA(siRNA)：在啟動(dòng)階段，當(dāng)細(xì)胞由于病毒感染等原因出現(xiàn)雙鏈RNA分子或帶有較長(zhǎng)雙鏈的發(fā)卡結(jié)構(gòu)

RNA時(shí)，細(xì)胞中的Dicer的核酸酶會(huì)識(shí)別其雙鏈RNA，將其降解成21~23bp長(zhǎng)的小干擾RNA。主要參與RNA干擾（RNAi）現(xiàn)象，以帶有專一性的方式調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。