第一篇：生物技術在制藥行業(yè)中的應用

生物技術在制藥行業(yè)中的應用

摘 要：改革開放以來，隨著人們生活水平的不斷提高，人們對藥物的療效及質量和安全問題也越發(fā)的重視，而很多傳統(tǒng)的藥物，在長期被人們使用的前提下，已經逐漸變得不能滿足現(xiàn)在人們的體質以及在生病后的療效，在這期間生物技術（biotechnology）的問世，有針對性的解決了相關的問題；大量的生物技術應用于藥品的生產上，開發(fā)新的藥品，以及對傳統(tǒng)藥物進行改良，生物技術在制藥行業(yè)的作用也越發(fā)明顯。也使得人們在生病后，能得到有效的藥物治療。

關鍵詞：生物技術；制藥行業(yè)；應用 生物技術（biotechnology）（生物工程）的理念

生物技術（biotechnology），也被人們稱作為生物工程，以現(xiàn)代生命科學為核心基礎，結合其他類別的基礎科學，并采用極為先進的科學技術手段，根據(jù)計劃，對生物體進行改造或者是加工生物原料，進而生產人們所需要的產品。

生物技術（biotechnology），利用動植物體以及微生物對物質原料進行加工，并生產處相關產品，為社會服務。其主要分成現(xiàn)代生物技術以及發(fā)酵技術兩大類別。

生物技術可以說是，現(xiàn)代生物學的發(fā)展以及和相關科學融合的產物，以DNA重組技術為根本，并包括了細胞工程、生化工程以及微生物工程和生物制品等。生物技術在制藥中的應用

2.1 細胞工程制藥

就目前我國的生物技術（biotechnology）來講，有關于細胞工程還沒有一個統(tǒng)一的定義以及范圍，通常認為，細胞工程就是根據(jù)分子生物學和細胞生物學的原理，并采用細胞的培養(yǎng)技術，對細胞進行水平的遺傳操作。細胞工程大致上可以分為細胞質工程以及染色體工程和細胞融合工程這三種。而歸根結底，細胞工程就是利用動物以及植物的細胞培養(yǎng)進而生產藥物的技術。例如，利用動物細胞培養(yǎng)可身纏人類生理活性因子以及疫苗和單克隆抗體等產品；再如利用植物細胞培養(yǎng)可以大量的生產經濟價值極高的植物有效成分，提取藥材精華，也可以生產人類活性因子以及疫苗等重新組合DNA產品。

值得注意的是植物細胞培養(yǎng)并不會受到客觀的地理以及環(huán)境的影響，次級代謝的產物在產量上比較高。例如，人身皂苷在該組織培養(yǎng)中含量占干重的27%，而全株只有可憐的1.5%?，F(xiàn)在不少藥用植物，如三七和人參等的培養(yǎng)已經有了系統(tǒng)化的研究，并且充分優(yōu)化了培養(yǎng)條件。值得慶賀的是人參細胞培養(yǎng)物的化學成分以及藥理活性，相比于種植人參并沒有明顯的差異。

關于細胞工程制藥技術，在國外一些相關的細胞工程制藥已經達到了商業(yè)化的生產水平，例如美國的Phyto公司的紫杉醇的生產商已經達到了75000L的生產規(guī)模，而日本植物細胞培養(yǎng)反應器的規(guī)模達到了4000L～20000L的驚人地步。

除卻大規(guī)模的細胞培養(yǎng)技術，不定根組織與毛狀根的培養(yǎng)也特別成功。例如培養(yǎng)的黃芪毛狀根的藥效與藥用黃芪不分上下，而在丹參毛狀根的培養(yǎng)上，其含有的丹參堿，能在分泌中得到培養(yǎng)。例如，希臘毛地黃細胞，在褐藻酸鹽的固定化培養(yǎng)中，可以將其中有毒物質的毛地黃苷轉化成為地高辛，在利用紫草細胞培養(yǎng)技術生產出紫草寧等。而根據(jù)野生新疆雪蓮的輻射以及抗炎等作用，賈景明等相關技術人員進行了天然新疆雪蓮鎮(zhèn)痛以及抗炎和抗輻射與細胞培養(yǎng)的藥理實驗，而實驗表明，新疆雪蓮細胞的培養(yǎng)物完全可以稱為野生新疆雪蓮的替代品，其藥效與野生新疆雪蓮幾乎相同，而該實驗也取得了深入開發(fā)應用的極高價值。而細胞培養(yǎng)技術甚至可以進行如犀角等極為昂貴的藥用動物器官的培養(yǎng)，在解決資源的短缺同時，有效的保護了稀有動物的生存。

2.2 發(fā)酵工程制藥

生物技術中的發(fā)酵工程，又稱為微生物工程，是指利用現(xiàn)代生物工程的技術，利用微生物的相關特定功能，生產出對人類有用的產品，或者直接把微生物應用于工業(yè)生產中。

發(fā)酵工程制藥是利用微生物的代謝過程，所生產藥物的生物技術。例如人們普遍認知的抗生素、氨基酸以及維生素等。而發(fā)酵工程的制藥在研究也主要在微生物菌種的篩選和改良上，還有極為重要的產品后處理也就是分離純化。

在現(xiàn)如今的社會中，DNA的重組技術在微生物菌種改良上起到了舉足輕重的作用。在上世紀七十年代，細胞融合以及基因重組技術的飛速發(fā)展的情況下，發(fā)酵工程進入了現(xiàn)代化的發(fā)酵工程階段。不僅僅是酒精類飲料以及醋酸和面包，并且豬腳生產了生長激素以及胰島素等多種醫(yī)療保健藥物。

周曉燕等相關研究人員用精良選育的豬芩PU-99菌做生產菌株，在1t灌中生產，菌絲體重達2.3%，含粗多糖31%；該實驗充分的利用了發(fā)酵工程，并在當時得到了廣大的認可。利用微生物成長代謝來炮制中藥，比一般的物理或化學炮制手段更為優(yōu)越，能較大幅度的改變中藥的藥性，并且提高療效的同時，大大減輕毒副作用，使得中藥活性成分結構提供了新的途徑。

2.3 酶工程制藥

酶工程是利用酶、細胞或者細胞器具有特殊催化功能，并使用生物反應相關裝置以及通過一定的技術手段生產出的人類所需要的產品。這是一種酶學理論與化工技術兩相結合而形成的新型技術，現(xiàn)如今依舊有數(shù)十個國家采用了固定化酶以及固定化細胞，進行藥品的生產。

酶工程可以說是現(xiàn)代生物技術組成的重要部分，酶工程制藥也是將酶用于藥品生產的技術。固定化酶可以全程合成藥物的分子，并且還能用于藥物的轉化。而我國就是充分的利用了微生物并使用兩步轉換法生產出了維生素C。

就我國的酶工程制藥來講，其主要研究方向在，各種酶（細胞）的固定化以及產藥酶的來源和酶反應器還有相關的操作條件等。可以說酶工程應用具有極其廣闊的發(fā)展前景，該技術將使得整個發(fā)酵工業(yè)和化學合成工業(yè)發(fā)生巨大的變革。

2.4 基因工程制藥

基因工程是在基因的水平上，按照人類的需求，有針對性的涉及，并且按照設計的方案，生產出具有某種新的形狀的生物產品，并且使得其可以穩(wěn)定的遺傳給后代?；蚬こ痰脑O計與與工程設計有些類似，既顯示出理學的特性，也具有工程學的特點。

工程制藥也是通過將DNA重組技術應用到疾病的治療中，例如蛋白質、酶以及肽類激素和其他藥物的基因轉移到宿主體內，使得細胞繁殖，最終獲得相關的藥物。如苯丙氨酸以及絲氨酸和次生代謝的產物所制成的抗生素，通常是一些人體內的活性因子，例如白細胞介素-2和胰島素以及干擾素等。

而目前我國基因工程的研究方向，主要在基因的鑒定以及克隆和基因載體構建的產物的表達以及分離純化等。人類掌握基因工程技術在時間上雖說不是很長，但已經獲得了很多具有實際應用價值極高的成果，而基因工程為現(xiàn)代生物技術組成的重要部分，在未來相當長的一段時間里，都會在制藥中發(fā)揮出極大的作用。結束語

生物技術在制藥的應用中，其地位是無法替代的，并且其影響力也不斷的擴大。而生物技術也將在中西藥物的研制以及融合還有生產中的大部分環(huán)節(jié)得到廣泛的應用；并且可以有效的保護相關的瀕危滅絕的草藥以及珍稀動物，在批量生產高品質的藥材的同時，還能提高其活性成分。而有效的利用現(xiàn)代生物技術可以使得制藥行業(yè)在藥品的質量以及安全性上得到提高，最終使得制藥行業(yè)得到更為廣闊的發(fā)展。

參考文獻

[1]張雅閣.高新技術在中藥制藥領域應用的分析和探討[J].山東工業(yè)技術，2014（18）.[2]王蘭，朱磊，徐剛領，等.單克隆抗體類生物治療藥物研究進展[J].中國藥學，2014（23）.[3]王一嶺.內蒙古自治區(qū)發(fā)酵制藥類項目發(fā)展現(xiàn)狀及污染防治問題探討[J].內蒙古師范大學學報（自然科學漢文版），2014（3）.作者簡介：張巖（1982，4-），女，山東，漢族，哈爾濱學院畢業(yè)，初級職稱，研究方向：生物工程。

第二篇：制藥工程中的生物技術應用分析

制藥工程中的生物技術應用分析

[摘 要]生物技術是促進我國制藥工程發(fā)展的重要內容，它對我國制藥工程質量和的安全都具有重要意義，需要行業(yè)內加強相關技術研究，從而保證人們的生命健康。本文以制藥工程中生物技術的應用為主要內容，通過對生物制藥技術進行檢驗闡述，給出具體的應用分析，以供參考。

[關鍵詞]制藥工程；生物技術；具體應用

中圖分類號：S726 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2018）26-0218-01

前言：隨著我國經濟發(fā)展建設的逐漸加強和提高，我國各項生產技術得以推進應用，逐漸被擴大到生物制藥工程中，它為制藥工程的發(fā)展提供了基礎理論，并取得了一定的發(fā)展成果。但是從行業(yè)的實際發(fā)展情況來看，它還存在一定的問題，還需要在原有的生物體系上將其進行完善，并根據(jù)人們的生命健康情況促進生物科學領域的不斷發(fā)展，促進我國現(xiàn)代化制藥事業(yè)的蓬勃發(fā)展。生物制藥技術

1.1 發(fā)展情況

我國生物制藥技術，是近些年隨著國家建設逐漸發(fā)展起來的，它在發(fā)展初期，主要是將生物學作為制藥的基礎理論，將其與其它多個學科進行緊密結合，促進制藥技術得以發(fā)展的過程，它主要是在經過長期發(fā)展實踐的基礎上，將化學工藝進行引進，促進機械制造和計算機信息技術等現(xiàn)代技術的發(fā)展，并在不斷的應用過程中，總結出科學實踐應用的可能性。就生物制藥工程來說，它與其他領域的工程項目不同，它具有一定的特點，能夠在未來的發(fā)展過程中得以廣泛的應用。從其當前的發(fā)展情況來看，生物技術主要是由基因、細胞、生物反應器和酶、發(fā)酵等形成，不同的生物組成結構具有不同的應用效果和特點，能夠為我國各行各業(yè)的廣泛應用奠定堅實的基礎。受到時代發(fā)展變化等因素的影響，我國生物制藥技術需要在未來的發(fā)展過程中得以不斷的創(chuàng)新發(fā)展，加強在生物技術方面的研究，并進一步推動和改造制藥工程體系創(chuàng)新，對生產產品的經濟性和實用性進行保障，從而保證其能夠為人們的生命健康做出積極貢獻。

1.2 技術應用基礎

就生物技術來說，將它應用在制藥工程中，能夠為制藥工程的推進奠定堅實的基礎。但是它的應用，需要先進的科學技術和工程設備作為保障，對微生物進行分析和處理應用，并從微觀的角度進行分析，通過不斷實驗研究，將對人類身體健康有利的醫(yī)學結論進行總結，將生物體中對人們身體健康有益的物質進行提取，從而實現(xiàn)制藥過程[2]。這樣的制藥過程是一個長期過程，例如：在促進基因工程技術推進的過程中，可以將生物體內的多個生物單位展開單獨的研究，將他們作為不同的介質，同時將計算機技術和定位技術等進行應用，保證對生物體進行較為準確的定位，從而實現(xiàn)基因工程的整個過程，都需要不斷的研究實驗，從而選擇最適宜人類健康的方案。就生物制藥工程的操作原理來說，它主要是基于生物技術的應用，從而在微觀和宏觀等不同的角度進行研究。具體應用

就生物制藥工程的應用效果較好，得到了各領域的深入認可，能夠在未來的發(fā)展過程中得以廣泛的應用。從其當前的發(fā)展情況來看，生物技術主要有基因、細胞、酶和發(fā)酵等幾種應用，我們將對其展開詳細分析。

2.1 基因工程

在生物制藥工程中，應用最為廣泛的為基因工程，它是生物技術體系發(fā)展中較為重要的組成的部分。它的應用原理，主要是能夠實現(xiàn)對基因的改造。隨著國家當前科學技術發(fā)展研究的不斷推進，基因工程中的制藥工程得到了重視，其相關研究也得到了不斷的深入。在具體的研究應用過程中，可以從生物形狀的角度進行出發(fā)，進而展開對生物極影的處理。這需要從而制藥需求的根本情況進行出發(fā)，將DNA遺傳因子在生物體外進行構建，并將較為先進的移植技術進行應用，將遺傳因子植入到生物?胞中，從而將生物體內原有的遺傳特性改變，實現(xiàn)生物體表現(xiàn)形狀與我們所需要的相同，從而實現(xiàn)生物制藥工程。這樣的生物技術，對技術的要求相對較高，并且具有較強的功能，能夠被廣泛的應用在生物制藥工程中，為人們生命健康提供基礎保障。

2.2 酶工程

就酶工程來說，它在進行制藥的工程中，主要的應用原理為將各種生物活性酶進行應用，促進其催化作用的產生，從而將細胞和微生物等的生長作用加強，提高對生物原料的處理速度，實現(xiàn)其向著我們所需要的生物物質進行轉化的過程。這一技術的應用，對生物的生產周期和生產質量進行了保證，能夠實現(xiàn)對酶固定化和改變、修飾等過程。可以被大規(guī)模的投入生產，將制藥工程的生產壓力進行減少。

2.3 細胞工程

細胞工程，是一細胞生物學為基礎的生物制藥方法，它能夠將生物學和細胞學進行有效結合，從而促進生物組織培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)等過程的操作。在具體的操作過程中，需要將先進的生物處理技術和相關儀器設備進行應用。從制藥工程目前的發(fā)展情況來看，它得到了廣泛的應用，例如：疫苗和抗生素等，都屬于細胞工程范疇內的生物制藥，它的應用效果較為明顯，能夠直接從生物體內進行原材料提取，能夠提高工程的生產效率[3]。需要在未來的發(fā)展過程中，將其生產體系進行進一步的完善，促進創(chuàng)新發(fā)展。

2.4 發(fā)酵工程

發(fā)酵工程，其研究的核心工作為微生物特性，它主要是根據(jù)微生物的不同的，從而選擇合適的品種進行選擇性產品培育[1]。在它被人們進行應用的過程中，需要經過培養(yǎng)、發(fā)酵和滅菌等過程，需要具有針對性的將生物產品的價值進行提高。這一工程的應用，同時需要技術信息技術的支持，需要對生產系統(tǒng)進行監(jiān)控，對發(fā)酵過程進行有效的掌握，從而保證其生符合我國可持續(xù)發(fā)展國情的基本要求，在制藥工程中得以廣泛應用。

結語：將生物技術應用到制藥工程中，能夠促進制藥工程的進一步發(fā)展，實現(xiàn)快速制藥，并降低行業(yè)生產壓力。其在具體的應用過程中，主要包括基因、細胞、酶和發(fā)酵等幾種應用，需要根據(jù)具體的制藥需求進行選擇，并在未來的發(fā)展過程中促進技術的不斷完善，創(chuàng)新更多的新型技術，從而為人們的身體健康發(fā)展奠定堅實基礎。

參考文獻

[1] 曹紫威.淺談生物技術在西藥制藥工程中的應用[J].民營科技，2017（10）：83.[2] 宋溈萱.制藥工程中的生物技術應用分析[J].科技風，2017（19）：140.[3] 李永強，吳方麗，安鳳秋，祝傳書.制藥工程專業(yè)生物技術教學探索與實踐[J].高校實驗室工作研究，2012（04）：104-105+119.

第三篇：生物技術在制藥領域應用現(xiàn)狀及發(fā)展

生物技術在制藥領域應用現(xiàn)狀及發(fā)展

摘要：生物技術制藥是以基因工程為基礎的現(xiàn)代生物工程，即利用基因工程技術、細胞工程技術、微生物工程技術、酶工程技術、蛋白質工程技術、分子生物學技術等來研究和開發(fā)生產出傳統(tǒng)制藥技術難以獲得的生物藥品。生物制藥業(yè)是目前生物技術發(fā)展最活躍，進展最快的產業(yè)之一，21世紀是生物制藥行業(yè)飛速發(fā)展的時代。

關鍵字：生物技術制藥；研究進展；現(xiàn)代生物技術；新技術 1 生物技術制藥現(xiàn)狀

現(xiàn)代生物技術是以基因為源頭，基因工程和基因組工程為主導技術，與其他高技術相互交叉、滲透的高新技術。生物技術制藥可以分為二類：一類是生化藥物，主要是運用生物化學方法從生物體中分離．純化得到的一些生物活性物質，如維生素、酶、核酸、激素等；另一類是生物醫(yī)藥，主要是以微生物、生物組織、人或動物的血液等原料采用物理方法和生物化學工藝制得的生物活性制劑、血液制品、抗血清、抗毒素等。1.1 非基因工程生化物

此類藥物有腦蛋白水解物注射液、玻璃酸鈉、分子肝素鈣、分子肝素鈉、促肝細胞生長素、蚓激酶、甘糖酯等共97種。1.2 先導化合物

以天然產物為先導化合物，通過組合化學技術合成大量結構相關的物質，建立有序變化的化合物庫，供藥物篩選和藥效關系研究用。1.3 生化制藥中先進分離分析技術的運用

多種層析（如親和層析、高效液相層析）、超速離心等技術的運用，可成功地制得高純度的生化藥物。如尿激酶、胰島素、重組人胰島素、激肽釋放酶、輔酶A、肝素鈉等都是通過這種技術使藥效得到較大的提高。1.4 應用生物技術、化學合成、結構后修飾研究開發(fā)新藥

應用上述技術系統(tǒng)綜合研制開發(fā)的新藥，主要有以下各類藥物：1）多糖類，如玻璃酸鈉、香菇多糖、低分子肝素等；2）酶及酶抑制劑類，如門冬酚胺酶、葡激酶、人胰蛋白酶抑制劑、膠原酶、降纖酶等；3）多肽類，如人降鈣素、鮭魚降鈣素等；4）細胞因子類，如白介素-

6、腫瘤壞死因子、神經生長因子、血小板生成素等；5）結構后修飾類，如修飾門冬酚胺酶、修飾超氧化物歧化酶等。1.5 應用生物技術改造傳統(tǒng)制藥工藝

微生物發(fā)酵是制藥工業(yè)生產微生物藥品的重要手段。微生物轉化是利用微生物產生的特異酶完成特定的生化反應，使有機物轉變成工業(yè)產品。由于生物藥品具有療效好、副作用小、且可大規(guī)模生產、利潤極高、無環(huán)境污染等優(yōu)點，受到各國政府重視，行業(yè)前景十分廣闊。

1.6目前生物制藥主要集中方向：

1.6.1腫瘤 在全世界腫瘤死亡率居首位，腫瘤是多機制的復雜疾病，目前仍用早期診斷、放療、化療等綜合手段治療。如應用基因工程抗體抑制腫瘤，應用導向IL-2受體的融合毒素治療CTCL腫瘤，應用基因治療法治療腫瘤(如應用γ-干擾素基因治療骨髓瘤)。

1.6.2神經退化性疾病

老年癡呆癥、帕金森氏病、腦中風及脊椎外傷的生物技術藥物治療，胰島素生長因子rhIGF-1已進入Ⅲ期臨床。神經生長因子(NGF)和BDNF(腦源神經營養(yǎng)因子)用于治療末稍神經炎，肌萎縮硬化癥，均已進入Ⅲ期臨床。

1.6.3 自身免疫性疾病

許多炎癥由自身免疫缺陷引起，如哮喘、風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、紅斑狼瘡等。一些制藥公司正在積極攻克這類疾病。如 Genentech公司研究一種人源化單克隆抗體免疫球蛋白E用于治療哮喘，已進入Ⅱ期臨床。

1.6.4 冠心病

美國有100萬人死于冠心病，今后10年，防治冠心病的藥物將是制藥工業(yè)的重要增長點。Centocor′s Reopro公司應用單克隆抗體治療冠心病的心絞痛和恢復心臟功能取得成功，這標志著一種新型冠心病治療藥物的延生。

2生物制藥研究新進展

2.1 計算機輔助藥物設計技術發(fā)展

計算機輔助藥物設計利用了計算機快速、全方位的邏輯推理功能、圖形顯示控制功能，并將量子化學、分子力學、藥物化學、生物化學和信息科學結合起來，研究受體生物分子與藥物結合部位的結構與性質、藥物與受體復合物的構型和立體化學特征、藥物與受體結合的模式和選擇性、特異性、、藥物分子的活性基團和藥效構象關系等，從藥物機理出發(fā)，改進現(xiàn)有生物活性物質的結構，快速發(fā)現(xiàn)并優(yōu)化先導化合物，使其盡早進入臨床前研究，減少傳統(tǒng)的新藥研究的盲目性，縮短。

2.2 組合化學與高通量篩選技術發(fā)展

組合化學是近20年發(fā)展起來的一種合成大量化合物的新方法，它是建立在高效平行的合成之上，在同一個反應器內使用相同條件同時制備出多種化合物，建立各類化合物庫的策略。組合化學通常采用操作、分離簡便的固相化學合成。液相化學合成技術也在快速發(fā)展和完善中。2.3 藥物手性合成技術發(fā)展

手性是自然界的本質屬性。在生物體手性環(huán)境，如酶、受體、離子通道、蛋白質、載體中，分子之間手性匹配是分子識別的基礎，受體與配體的專一作用，酶與底物的高度、區(qū)域、位點和立體催化專一性，抗原與抗體的免疫識別都與手性有關，同時藥物的生物應答常受到手性影響，包括藥物在體內的吸收、轉運、分配、位點活性的作用以及代謝和消除。2.4 藥物生物技術發(fā)展

生物技術藥物是指利用DNA重組技術或單克隆抗體技術或其它生物技術研制的蛋白質、抗體或核酸類藥物，它是目前生物技術研究最為活躍的領域，給生命科學的研究和生物制藥工業(yè)帶來了革命性變化。未來生物技術的展望

研究和發(fā)展方向：我國生物制藥產業(yè)的研發(fā)方向要結合傳統(tǒng)醫(yī)藥的優(yōu)勢，發(fā)展重點應針對神經系統(tǒng)、腫瘤、心血管系統(tǒng)、艾滋病及免疫缺陷等重大疾病的多肽、蛋白質和核酸。乙肝基因疫苗與單克隆抗體的研究開發(fā)、血液替代品的研究與開發(fā)、生物技術在醫(yī)藥領域的應用，如基因治療、生物人基因芯片、干細胞等。目前，我國已經制定了明確的生物制藥產業(yè)發(fā)展規(guī)劃和產業(yè)技術政策，政府從上到下對生物技術研究開發(fā)的支持和政策扶持；國內各大企業(yè)（包括民營企業(yè)）對生物技術的關注和資金投入；我國金融界積極參與生物技術產業(yè)的發(fā)展，尤其是許多有實力的公司都參與了生物技術的開發(fā)；而我國生物技術產業(yè)領域目前已經匯集了一批自己培養(yǎng)和從國外歸來的具有高學歷、高素質的科學家和企業(yè)家，這四方面的因素對于我國生物技術產業(yè)的快速發(fā)展起到了很重要的作用。由于生物醫(yī)藥產業(yè)投資回報周期為5 年至8 年，而我國進人生物工程領域的時間尚短，回報的周期尚未到來。預計到二十一世紀的前幾年將是我國生物制藥產業(yè)的收獲季節(jié)。參考文獻: [1] 沈鐵軍.提高中草藥市場競爭幾點思考[J].時珍國醫(yī)國藥, 1999, 10(11):9-10.[2] 劉詒.治療抑郁及相關病癥的植物提取物制劑[J].國外醫(yī)藥:植物藥分冊, 2007, 22(5):223-225.[3] 姜倩倩, 劉京貞, 蘇瑞強.單克隆抗體藥物進展[J].藥物生物技術, 2005, 12(4):270-274.[4] 胡顯文, 陳惠鵬, 湯仲明, 等.生物制藥的現(xiàn)狀和未來[J].中國生物工程雜志, 2005, 25(1):86-89.[5] 徐明波, 何瑋, 馬清鈞.生物技術藥品產業(yè)化的現(xiàn)狀及前景[M].北京:化學工業(yè)出版社, 2003:35-43.[6[ 王立新.徐薇.關東慶C3d-P28增強乙肝病毒基因免疫誘導的特異性細胞免疫應答[期刊論文]-細胞與分子免疫學雜志 2003(03)[7] 米力.陳志南動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)生產蛋白的工藝選擇[期刊論文]-中國生物工程雜志 2003(07)[8] 張學文.章懷云干擾素γ誘導細胞抗病毒的分子機制[期刊論文]-湖南農業(yè)大學學報(自然科學版)2001

第四篇：生物技術在園藝中的應用

生物技術在園藝設計植物中的應用

摘要：用植物組培來培育無毒育苗木、優(yōu)良品種苗快速繁殖、園藝樹木新品種的培育等等。生物技術使園藝植物在設計中得到更好，更廣泛的應用，不僅局限在造型、體態(tài)上面，從內在基因、細胞、組織上改變植物；使植物資源多樣化，給設計帶來了新鮮感。

Abstract: Plant tissue culture , cell engineering , gene engineering and other modern biotechnology to develop non-toxic sterile seedling, seedling rapid propagation of superior varieties, gardening trees breeding and so on.Biological technology make it better in the design of horticultural plants, more widely used, not only in shape, body, and change the plant from the internal genes, cells, tissue;be diversify.關鍵詞：園藝植物、生物技術、組織培養(yǎng)、應用、景觀環(huán)境、設計 生物技術在園藝植物的研究和培育上有著重大的意義。生物技術在園藝科學上的研究主要內容包括園藝植物組織培養(yǎng)，園藝植物細胞工程，園藝植物染色體工程，園藝植物基因工程和園藝植物分子標記。本文主要是對植物組培技術的研究。

園藝植物組織培養(yǎng)是指在無菌和人工控制的環(huán)境條件下，利用人工培養(yǎng)基，對園藝植物組織的胚胎、器官、組織、細胞、原生質體等進行立體培養(yǎng)，使其再

[1] 生發(fā)育成完整植株的過程。組織培養(yǎng)技術給園藝植物帶來了很大的變革。從以前的單一色彩，單一種類，變化到多種色彩，多種形態(tài)。給設計提供了很多的便捷資源。組織培養(yǎng)技術提高了園藝植物的質量，也提高了生產的效率。給設計師們帶來了新的構思?；ɑ?、樹木的種類繁多，色彩艷麗，培養(yǎng)方式的多樣化，在園林景觀中起著非常重要的作用。組織培養(yǎng)技術使花卉、樹木的應用形式越來越多樣化。園藝植物不僅給人們帶來優(yōu)美舒適的生活環(huán)境，更重要的是創(chuàng)造了是與人類生存的生態(tài)環(huán)境。園藝植物在現(xiàn)代社會中的應用越來越多，在綠化景觀環(huán)境中體現(xiàn)的愈發(fā)明顯。

通過以下幾個方面來講述組織培養(yǎng)在園藝植物中的應用： 一．種質資源的保存

植物的種質資源的多樣性，使得設計有多樣性，對于一些沒法預料的災害等，我們可以通過這種方式來保存物種多樣性，使一些珍貴的植物能夠保存下來。現(xiàn)在已經有很多的種植物滅絕，通過組織培養(yǎng)的技術就可延續(xù)和保存這些植物種類，使這些植物得到較為永久性的保存，增加種質資源的多樣化。植物種質的保

[2]存與監(jiān)測研究對生物多樣化包補和生物技術都有著十分重要的意義。

園藝樹種種質資源的長期保存主要采用超低溫的方法。一般以液氮（-196℃）為冷源，是溫度維持在-196℃以下。在這溫度下，新陳代謝活動基本停止，也不可能發(fā)生遺傳變異，因而對種質進行了長期的保存。

二．快繁技術

自然條件很難達到快速、高效的目的繁殖植物，通過組織培養(yǎng)我們可以有效的快速繁殖植物。植物組織培養(yǎng)快繁技術是利用植物組織培養(yǎng)技術對外植體進行

[2]離體培養(yǎng)，使其在短期內獲得遺傳性一致的大量再生植物的方法。使用這種方法，繁殖效率高，不受季節(jié)、氣候條件的影響，而且培養(yǎng)條件可控制便于對各種環(huán)境進行調控。占用的面積小，管理方便?？梢宰詣踊刂粕a。

已有數(shù)百種植物由愈傷組織分化出小植物，也可由愈傷組織再分化，最后產生不定芽或胚狀體，形成植株。但是從它產生的植物常常會發(fā)生多倍體、非整倍體和各種基因水平上的變異，不能全部保存原種特性，因而妨礙了它在快速繁殖上的廣泛的應用。另一個不利的因素是愈傷組織在經過多次繼代培養(yǎng)后，常會喪[3]失再生植株的能力。但是，這的確加快了植物的繁殖速度，我國的園林設計正處于起步階段，所以快繁技術對植物的需求量和豐富度都有著重要的作用，快繁技術可以促進植物的生長滿足園藝設計的需求。三．植物脫毒

植物在生長發(fā)育的過程中會感染各種的病毒病害。導致植物的生長受到抑

[4]制，形態(tài)變異，產量下降等，會造成極大的經濟損失。由于基因的變異等原因，造成很多的植物感染病毒。園藝植物在景觀設計中的作用非常大。，病毒導致園藝植物的生命短暫，或者形態(tài)不美觀，影響設計的美感。所以培養(yǎng)無病毒植株，能夠提高植物的質量，對園藝設計景觀有種重要的作用，培育無病毒植株是解決植物病毒問題的首選，通過植物組培技術培養(yǎng)脫毒的植株來阻止病毒的傳播，來提高植物的質量和產量。四．遺產轉化

園林遺傳轉化是指通過某種途徑將外源基因導入受體園林植物基因組中，并

[5]使之在受體園林植物內實現(xiàn)功能表達。通過基因轉移技術可以把不同來源的基因導入植物細胞，并整合到植物基因組中，獲得轉基因植物。通過遺傳轉化轉化可以改良園林植物品種。提高育種效率，育成不同種類的新品種。

轉基因可以改變植物的顏色、形態(tài)、種類等各種特性。這些都給園藝植物增

[6]加了很多的特色，如藍色的月季，黃色的仙客來，紅色的鳶尾等，在設計中，能夠應用這些不同的形態(tài)特點來創(chuàng)造出不同的主題，表達不同的思想，給人以不同的需求，滿足人們不同的審美需求。

綜述：現(xiàn)在，隨著人們生活水平的提高，許多地方，以觀光、旅游、采摘等為主體閑園藝、生態(tài)景觀等迅速發(fā)展。城市景觀的設計越來越受到注重，綠色的園藝植物也被廣泛的應用起來。所以生物技術在園藝植物中起了很大的作用，通過組培技術我們能夠大量的生產園藝植物，并得到優(yōu)良質量的植物，滿足園藝設計對植物的大量需求，促進我國園林設計快速的發(fā)展起來。

參考文獻：

[1]園藝植物生物技術/鞏振輝主編。北京：科學出版社，2009 [2]園林植物組織培養(yǎng)技術/王金剛，張興主編。北京：中國農業(yè)科學技術出版社。2008.8 [3] 朱至清.植物生物技術簡介(一)——經濟植物快速繁殖[J].生命世界，1984 [4] 趙爽、陳國菊，蔬菜作物抗病毒基因工程研究進展[J].中國蔬菜,2006 [5]李向輝等，植物遺傳操作技術，科學出版社，1988 [6] 園林花卉應用設計·配置篇/耿欣、程偉、馬娛、主編。武漢：華中科技大學出版社，2009.7

第五篇：生物技術制藥總結

生物技術：人們以現(xiàn)代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎科學的科學原理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的的技術

1基因工程制藥：利用基因重組技術將外援基因導入宿主菌或細胞進行大規(guī)模培養(yǎng)，以獲得蛋白質藥物的過程。

2.載體：是攜帶外源目的基因或DNA進入宿主細胞，實現(xiàn)外援基因或DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些DNA分子。

細胞傳代passage：將細胞從一個培養(yǎng)器皿中消化、分散并接種至另一個培養(yǎng)器皿中的操作。細胞克隆培養(yǎng)（clonal culture）：即單細胞分離培養(yǎng)，是將動物組織分散后，將一個細胞從群體細胞中分離出來，由單個細胞培養(yǎng)成純系細胞集群。

動物細胞的復蘇：其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

細胞融合（cell fusion）：是指在外力（誘導劑或促融劑）作用下，兩個或兩個以上的異源（種、屬間）細胞或原生質體相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質融合和核融合并形成雜種細胞的現(xiàn)象，或稱細胞雜交。

轉基因動物（transgenic animal）：采用基因工程技術將外源目的基因導入動物生殖細胞、胚胎干細胞和早期胚胎，并在受體動物的染色體上穩(wěn)定整合，在經過發(fā)育途徑將外源目的基因穩(wěn)定地傳給子代，通過這項技術所獲得的動物即為轉基因動物。

胚胎干細胞（embryo stem cell）：簡稱ES細胞，是從早期胚胎細胞團分離出來并能在體外培養(yǎng)的一種高度未分化的、具有形成所有成年細胞類型能力的全能干細胞。它是正常二倍體型，像早期胚胎細胞一樣具有發(fā)育上的全能性。

抗體工程制藥（antibody engineering pharmaceutics）：利用基因工程、細胞工程（包括動物細胞工程和植物細胞工程）和轉基因動物及轉基因植物技術生產抗體藥物的過程。

單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）：簡稱單抗，將能大量擴增和永生的骨髓瘤細胞和能合成分泌特異性抗體的B細胞（僅識別一種抗原表位）進行融合得到雜交瘤細胞，經篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成及分泌抗單一抗原表位的特異性抗體。

雜交瘤細胞克隆化（cloning）：是指將陽性孔中分泌抗體的單個細胞分離出來。融合后的雜交瘤細胞一般要經過3次克隆化才能達到100%的陽性克隆。

雙特異性抗體（bispecific antibody，bsAb）：亦稱雙功能抗體，是含有兩個不同配體結合位點的抗體分子，它有兩個不同的抗原結合部位（兩個臂），可分別結合兩種不同的抗原表位。嵌合抗體（chimeric antibody）：是利用DNA重組技術，將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達載體中，轉化哺乳動物細胞表達的抗體，表達的抗體分子中輕、重鏈的V區(qū)是異源的，而C區(qū)是人源的，即整個抗體分子的60%~70%是人源的。

人源化抗體（humanized antibody，hAb）：通過CDR移植即把鼠抗體的CDR（互補決定區(qū)）序列移植到人抗體的可變區(qū)內所得到的抗體，也稱CDR移植抗體或改型抗體。該抗體既具有鼠源性單抗的特異性又保持了人抗體的功能（C區(qū)的功能）。

免疫原性（immunogenicity）：抗原能刺激機體特異性免疫細胞，使其活化、增值、分化，最終產生免疫效應物質（抗體或致敏淋巴細胞）的特性。

免疫反應性（immunoreactivity）：抗原與相應免疫效應物質在體內或體外相遇時，可發(fā)生

特異性結合而產生免疫反應的特性。

減毒活疫苗（live attenuated vaccine）：是通過不同的方式手段使病原體的毒性即致病

性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。

滅活疫苗（inactivated）：是將病原體經培養(yǎng)增殖、滅活純化處理，使其完全喪失感染性，但保留了病原體的幾乎全部組分因此滅活疫苗具有較好的免疫原性和安全性。

亞單位疫苗（subunit vaccine）：利用微生物的某種表面結構成分（抗原）制成、能誘發(fā)

機體產生抗體的疫苗。

分解代謝阻遏（catabolite repression）：在菌體的生長階段被菌體快速利用的碳源會產

生大量的分解產物，這些代謝產物阻遏次級代謝酶系的合成，只有當這類碳源被消耗完后，阻遏作用被消除，菌體才由生長階段轉入次級代謝產物合成階段，這種發(fā)酵過程中的次級代

謝產物在碳源被消耗盡時才產生和積累的現(xiàn)象稱為分解代謝阻遏。

生物技術：人們以現(xiàn)代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎科學的科學原

理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的的技術。

種齡（inoculumage）：種子罐中培養(yǎng)的菌絲轉入下一級種子罐或發(fā)酵罐時得培養(yǎng)時間

生物技術藥物的特性？

（1）理化性質特性（1）相對分子量大（2）結構復雜：蛋白質和核酸均為生物大分子，蛋

白質含有四級結構（3）穩(wěn)定性差（2）藥理學作用特性（1）活性與作用機制明確：活性物

質對生理功能的調節(jié)機制比較清楚（2）作用針對性強：有特定的靶分子、靶細胞或靶器官

（3）毒性低：生物技術藥物本身是體內天然存在的物質或它們的衍生物（4）體內半衰期短

（5）有種屬特異性（6）可產生免疫原抑制（3）生產制備特性（1）藥物分子在原料中的含量低（2）原料液中常存在降解目標產物的雜質：應采取快速分離純化的方法以除去影響

目標產物穩(wěn)定性的物質（3）制備工藝條件溫和：目的產物不穩(wěn)定（4）分離純化困難：需要

多種不同原理的層析單元操作才能達到要用的純度（5）產品易受有害物質（4）質量控制特

性

質粒的特點：（1）是指獨立于原核生物染色體之外具有自主復制能力的遺傳物質。（2）質粒

具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力（3）質粒具有不相容性：兩種親緣關系密切的不同質粒不

能在同一宿主細胞中穩(wěn)定共存。4..共價閉合環(huán)狀DNA(ccDNA)，開環(huán)DNA(ocDNA)，線狀

DNA(lDNA)在瓊脂糖凝膠電泳中

5.復制子松弛型復制子的復制和宿主蛋白的合成功能

無關，宿主染色體DNA復制受阻時，質粒仍可復制；嚴謹型復制子的復制與宿主蛋白質的合成相關，因此在每個宿主細胞中為低拷貝數(shù)，僅1~3個。

6.克隆表達的質粒載體涉及三個要素：

（1）復制子（2）選擇標記：由質粒攜帶的賦予宿主細胞新的表型的基因，用于鑒定和篩選

轉化有質粒的宿主細胞。常見的標記：氨芐西林（Amp），卡那霉素（Kan）（3）多克隆位點

（MCS）：質粒載體中由多個限制性內切酶識別序列密集排列形成的序列。

7.目的基因常用制備方法

(1)化學合成法（2）PCR法：在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通

過下列步驟擴增DNA：a）變性：雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；b）退火：降

低溫度，引物與單鏈模板結合；c）延伸：溫度調整至DNA聚合酶最適宜溫度，最終與單鏈

模板形成雙鏈，并開始下一個變性、退火、延伸循環(huán)。（3）基因文庫法（4）cDNA文庫法

8.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

9.（1）DNA片段之間的連接方式：粘性末端的連接效率高于平頭末端。（2）目的基因與載

體的濃度和比例：增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因與載體DNA的摩爾數(shù)比應大

于1.（3）連接溫度、時間、連接酶的活性及緩沖液。

9.重組DNA導入大腸桿菌，常用的感受態(tài)細胞制備方法：氯化鈣法

10.重組子的篩選與鑒定：

（1）載體遺傳標記法：a)抗生素抗性篩選法

b)互補篩選法：重組子轉化成宿主細胞，載體的表達產物與宿主細胞中營養(yǎng)缺陷性突變發(fā)生

互補作用，從而實現(xiàn)重組子的篩選。藍白斑篩選：lacZα基因可編碼β—半乳糖苷酶α氨基

端的α互補肽段，與宿主細胞編碼的缺陷型β—半乳糖苷酶α實現(xiàn)互補，可分解底物5-溴-4-

氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，形成藍色菌落。由于lacAα基因的插入失活而成白色，空載體的宿主細胞呈藍色。c)營養(yǎng)缺陷篩選法d噬菌斑篩選法(2)核酸分子雜交法

(3)限制性內切酶圖譜法(4)DNA序列測定法：雙脫氧終止法(5)目的基因表達產物測定法

12.外源基因在大腸桿菌中的表達形式：

(1)胞內表達：(a)非融合蛋白的胞內表達：形成包涵體（B）融合蛋白的胞內表達：在大腸桿

菌內較穩(wěn)定（2）分泌表達：（a)分泌至周質（b）分泌至胞外

11.外源基因在原核生物中表達的重要調控元件

(1)啟動子：是DNA鏈上能與RNA聚合酶結合并起始mRNA合成的一段序列，是決定外源基

因在原核生物中表達效率的關鍵因素。(2)核糖體結合位點：SD序列(3)終止子

13.大腸桿菌中外源蛋白表達效率的影響因素：(1)外源基因密碼子：偏好密碼子（蛋白質合成迅速，錯配率低）和稀有密碼子(2)mRNA結構：減少G、C含量，增加A、T含量(3)表達

載體：高拷貝數(shù)、適用范圍廣、穩(wěn)定性高、表達產物容易純化(4)外源蛋白穩(wěn)定性

14.分離純化技術應滿足下列要求：(1)技術條件要溫和，能保持目的產物的生物活性；(2)選

擇性要好(3)回收率要高(4)兩個技術之間要能直接銜接(5)整個分離純化過程要快

15.基因重組蛋白的主要分離技術

(1)離心(2)沉淀(3)膜分離(4)雙水相萃取

16基因重組蛋白的主要純化技術:

(1)離子交換層析(2)親和層析(3)凝膠過濾層析(4)反相層析和疏水層析

17.選擇分離純化方法的依據(jù)：

（元，層析分離次序的選擇也同樣重要。(3)根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇(a)具有良好的穩(wěn)

定性、重復性和較高的安全性(b)盡可能減少組成工藝的步驟(c)分離純化工藝所用的時間要

盡可能的短(d)工藝和技術必須高效

18．基因工程藥物的質量控制要點

(1)蛋白質含量的測定(2)蛋白質純度檢測(3)蛋白質分子質量測定(4)蛋白質等電點測定(5)蛋

白質序列分析(6)內毒素分析、宿主蛋白與核酸殘留分析

19.蛋白質含量的測定

(1)紫外吸收法(2)BCA法(3)Lowry法(4)考馬斯亮藍法(5)SDS-PAGE掃描分析法

20.蛋白質純度的檢測：電泳法、層析法、質譜法、末端氨基酸殘基分析法

21.蛋白質Mr測定有SDS-PAGE法、凝膠層析法、質譜法

22.蛋白質等電點測定的常用方法：等電聚焦法。

23.蛋白質序列的分析:N-端氨基酸序列分析，C-端氨基酸序列分析

根據(jù)體外培養(yǎng)時動物細胞對生長基質的依賴性，可將動物細胞分為

(1)貼壁依賴性細胞(2)非貼壁依賴性細胞(3)兼性貼壁細胞

1.動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境條件

(1)培養(yǎng)溫度（哺乳類37℃，昆蟲25~28℃）(2)pH值（大多數(shù)7.2~7.4）(3)通氧量（一定量的CO2）(4)防止污染(5)基本營養(yǎng)物質(6)滲透壓

3.動物細胞的培養(yǎng)特性

(1)比微生物細胞大得多，無細胞壁，抗機械強度低，對剪切力敏感，適應環(huán)境能力差；(2)

倍增時間長，生長緩慢，正常二倍體細胞的生長壽命是有限的；(3)對培養(yǎng)基要求高，易受

微生物污染，培養(yǎng)時需要添加抗生素；(4)生長大多需貼附于基質，相互粘連以集群形式存

在，并有接觸抑制現(xiàn)象；(5)多半將產物分泌在細胞外，便于收集和純化；(6)對蛋白質的合成條件和修飾功能與細菌不同，動物細胞可對蛋白質進行完善的翻譯后修飾，特別是糖基化，與天然產品更一致，更適合于臨床應用。

4.原代培養(yǎng)的主要步驟

(1)從健康動物體內無菌條件下取出適量組織，剪切成小薄片；(2)加入適宜濃度的胰蛋白酶

或膠原酶和EDTA等進行消化作用使細胞分散；(3)將分散的細胞進行洗滌并純化后，以2×

10^6~7×10^6 /ml的濃度加到培養(yǎng)基中，37℃下進行原代培養(yǎng)，并適時進行傳代培養(yǎng)。分為

組織塊培養(yǎng)和單層細胞培養(yǎng)兩種方法。

5.動物細胞深低溫保存的基本原理

在-70℃以下時，細胞內的酶活性均已停止，即代謝處于完全停滯狀態(tài)，故可以長期保存。

在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發(fā)

生機械損傷、電解質濃度升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白質變性等，能引起細胞

死亡。目前為了保存細胞，都采用液氮低溫（-196℃）凍存的方法。

6.動物細胞的復蘇

其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍

存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

7.動物細胞營養(yǎng)要求特點

(1)碳源不能為無機物，大多為葡萄糖；(2)氮源不能為無機物，主要為各種氨基酸；(3)在很

多情況下尚需添加5%~20%的小牛血清或適量的動物胚胎浸出液。

8.動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法

(1)懸浮培養(yǎng)法(2)微載體培養(yǎng)法(3)多孔載體培養(yǎng)法(4)微囊化培養(yǎng)法(5)中空纖維培養(yǎng)法

9.誘導動物細胞融合的方法主要有:(1)病毒法(2)PEG法(3)電擊法(4)激光法

10.轉基因動物生物反應器（整體掌握？）

(1)轉基因動物乳腺生物反應器（藥用蛋白，如抗凝血Ⅲ、抗胰蛋白酶、葡萄糖苷酶、C蛋白）

(2)轉基因動物血液生物反應器（人血紅蛋白、抗體或非活性狀態(tài)的融合蛋白）(3)轉基因動

物尿液生物反應器（促性腺激素）(4)轉基因雞（蛋）生物反應器（人干擾素）

1.單克隆抗體技術的基本原理

基于動物細胞融合技術得以實現(xiàn)的，即骨髓瘤細胞和B細胞的融合。骨髓瘤細胞在體外

培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；抗原免疫的B細胞能產生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后形成的雜交瘤細胞，繼承了兩個親代

細胞的特性，既具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗

體的能力。通常使用HAT（H為次黃嘌呤、A為氨基蝶呤、T為胸腺嘧啶核苷）選擇培養(yǎng)基

對雜交瘤細胞進行篩選。未融合的脾細胞因不能在體外長期存活而死亡，未融合的骨髓瘤細

胞合成DNA的從頭合成途徑被培養(yǎng)基中的A阻斷，又因缺乏HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸

核糖轉移酶）和TK（胸腺嘧啶核苷激酶），不能利用培養(yǎng)基中的H和T完成DNA的合成過

程而死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養(yǎng)基

中長期存活與繁殖并分泌抗體。

2.單克隆抗體的大量制備主要方法:（1）體內培養(yǎng)法（2）體外培養(yǎng)法

6.重組ScFv的應用:(1)用于構建和生產免疫毒素(2)用于腫瘤的影像分析和治療

7.噬菌體抗體庫技術的基本原理:用PCR技術從人免疫細胞中擴增出整套的VH和VL基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗

體基因的存在，同時在其表面又有抗體分子的表達，可以方便地利用抗原-抗體特異性結合而篩選出所需要的抗體，并進行克隆擴增。

7.噬菌體抗體庫構建過程

(1)從外周血或脾、淋巴結等組織中分離B細胞，提取mRNA并反轉錄為cDNA；

(2)應用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術擴增不同的抗體基因片段；

(3)構建噬菌體載體；(4)用表達載體轉化細菌，構建全套抗體庫。

通過多輪的抗原親和吸附（結合）-洗脫-擴增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。其中，噬

菌體抗體庫的篩選是關鍵環(huán)節(jié)和步驟。

減毒活疫苗的優(yōu)缺點：

優(yōu)點：

（1）通過自然感染途徑接種，可以誘導包括體液免疫、細胞免疫和粘膜免疫在內的更全面的免疫應答，使機體獲得更廣泛的免疫保護；（2）由于使用的是活的微生物他們可以在體內

長時間起作用而誘導較強的免疫反應，且由于活的微生物有增殖的特性，理論上只需要接

種一次，即可達到滿意的免疫效果；（3）可能引起水平傳播擴大免疫效果，增強群體免疫屏

障；(4)一般不需要再疫苗中添加佐劑，生產工藝一般不需要濃縮純化，價格低廉。

缺點：

(1)一般減毒活疫苗均保留一定殘余毒力，對一些個體如免疫缺陷者可能誘發(fā)嚴重疾病，并

且由于種種原因如基因修飾等，減毒活疫苗可能出現(xiàn)毒力回復即“返祖”現(xiàn)象；(2)減毒活

疫苗是活的微生物制劑，可能造成環(huán)境污染而引發(fā)交叉感染等，并可能滯留在環(huán)境中形成傳

染源；(3)缺損顆粒可能干擾免疫效果，因此產品分析評估較為困難；(4)保存運輸?shù)葪l件要

求較高，如需冷藏等。

1.滅活疫苗的特點：(1)滅活疫苗常需多次接種；(2)接種滅活疫苗產生的抗體滴度隨著時

間而下降；(3)滅活疫苗需要量大。

第七章 發(fā)酵工程制藥

1.發(fā)酵類型：(1)微生物菌體發(fā)酵(2)微生物的酶(3)微生物的代謝產物發(fā)酵(4)微生物轉化發(fā)

酵(5)生物工程菌發(fā)酵

2.微生物發(fā)酵生產藥物的分類：(1)抗生素類(2)氨基酸類(3)核苷酸類(4)維生素類(5)甾體類

激素(6)多糖類(6)治療酶及酶抑制劑

3.菌種保藏方法：(1)斜面低溫保藏法(2)石蠟油封存法(3)沙土管保藏法(4)麩皮保藏法(5)甘

油懸液保藏法(6)冷東真空干燥保藏法(7)液氮超低溫保藏法(8)宿主保藏法

4.種子液具備的條件：(1)菌種的生長活力強，轉種至發(fā)酵罐后能迅速生長，延遲期短；(2)

生理狀態(tài)穩(wěn)定；(3)菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求；(4)無雜菌污染，保證純種培養(yǎng)；()保持穩(wěn)定的生產能力

5.微生物的發(fā)酵方式：（1）分批發(fā)酵（2）補料—分批發(fā)酵（3）半連續(xù)發(fā)酵（4）連續(xù)發(fā)酵

5.發(fā)酵過程的中間分析項目：（1）產物產量（2）PH值（3）糖（4）氨基氮（5）菌絲形

態(tài)

6.發(fā)酵過程的影響因素及控制：（1）菌體濃度的影響及控制（2）營養(yǎng)物質對發(fā)酵的影響

及控制（3）溫度的影響及控制（4）PH的影響及控制（5）溶氧的影響及控制（6）二氧化碳的影響及控制（7）泡沫的影響及控制（8）染菌對發(fā)酵的影響