第一篇：生物技術(shù)制藥教學(xué)大綱

第一章 緒論（2學(xué)時）第一節(jié) 生物技術(shù)概述 1 生物技術(shù)的概念 2 生物技術(shù)發(fā)展史 第二節(jié) 生物技術(shù)制藥 1 生物技術(shù)制藥的概念 2 生物技術(shù)在制藥中的應(yīng)用 我國生物技術(shù)制藥現(xiàn)狀和發(fā)展前景 4 醫(yī)藥生物技術(shù)發(fā)展展望

第二章 生物藥物（10學(xué)時）

1．生物藥物的來源、特性、分類與制備。（2學(xué)時）

2．氨基酸類藥物：氨基酸類藥物研究概況；在醫(yī)藥中的應(yīng)用；氨基酸生產(chǎn)。（2學(xué)時）3．多肽、蛋白質(zhì)類藥物：多肽、蛋白質(zhì)類藥物的特點、分離純化方法、工業(yè)生產(chǎn)制備過程。（2學(xué)時）

4．核酸類藥物：概述（分類、應(yīng)用）；生產(chǎn)方法；核酸類藥物的制備。（2學(xué)時）5．糖類藥物：制備；純化。（2學(xué)時）

第三章 基因工程制藥（8學(xué)時）

通過本章學(xué)習(xí)，了解基因工程藥物研制的意義，掌握基因工程藥物的研制過程、研制方法。1概述。

2基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程。(2)3目的基因的獲得：直接分離法；從基因文庫中篩選；逆轉(zhuǎn)錄法；人工合成法。4目的基因與運載體的體外重組：常用載體；目的基因與運載體的體外重組。5重組分子導(dǎo)入受體細胞；導(dǎo)入方法；影響轉(zhuǎn)化的因素；陽性重組體的篩選。(2)6基因表達：大腸桿菌中的基因表達；真核基因在原核生物中的表達方式；真核基因在真核生物中的表達；真核基因在動物細胞中的表達。(2)7基因工程下游技術(shù)；下游技術(shù)的要求；基因工程菌的穩(wěn)定性；基因工程菌發(fā)酵。8基因工程藥物的分離、純化：分離純化的基本過程；分離純化的技術(shù)。

9基因工程藥物的質(zhì)量控制:材料的質(zhì)量控制;培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制;純化工藝工程的質(zhì)量控制。(2)第四章 動物細胞工程制藥（8學(xué)時）1 概述： 形態(tài)及生理特性。（2）生產(chǎn)用的動物細胞：生產(chǎn)用動物細胞的要求；生產(chǎn)用動物細胞的獲取。4 基因工程細胞的構(gòu)建和篩選；真核細胞基因表達載體的構(gòu)建；基因載體的導(dǎo)入和高效表達工程細胞株的篩選。（2）動物細胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基 6 動物細胞培養(yǎng)的基本方法（2）7 動物細胞大量培養(yǎng)的方法和操作方式 動物細胞生物反應(yīng)器及檢測控制系統(tǒng)：攪拌式生物反應(yīng)器；氣升式生物反應(yīng)器；流化床生物反應(yīng)器。（2）

第五章 抗體制藥（4學(xué)時）1概述

2單克隆抗體：制備；細胞融合；雜交瘤的培養(yǎng)、篩選及克隆化。（2）

3鼠源性單克隆抗體的改造：Ig分子的結(jié)構(gòu)模式圖；結(jié)構(gòu)改造；基因工程抗體。4抗體的應(yīng)用：臨床檢驗；層析介質(zhì)；導(dǎo)向藥物。（2）

第二篇：生物技術(shù)制藥總結(jié)

生物技術(shù)：人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原理，按照預(yù)先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達到某種目的的技術(shù)

1基因工程制藥：利用基因重組技術(shù)將外援基因?qū)胨拗骶蚣毎M行大規(guī)模培養(yǎng)，以獲得蛋白質(zhì)藥物的過程。

2.載體：是攜帶外源目的基因或DNA進入宿主細胞，實現(xiàn)外援基因或DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子。

細胞傳代passage：將細胞從一個培養(yǎng)器皿中消化、分散并接種至另一個培養(yǎng)器皿中的操作。細胞克隆培養(yǎng)（clonal culture）：即單細胞分離培養(yǎng)，是將動物組織分散后，將一個細胞從群體細胞中分離出來，由單個細胞培養(yǎng)成純系細胞集群。

動物細胞的復(fù)蘇：其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。

細胞融合（cell fusion）：是指在外力（誘導(dǎo)劑或促融劑）作用下，兩個或兩個以上的異源（種、屬間）細胞或原生質(zhì)體相互接觸，從而發(fā)生膜融合、胞質(zhì)融合和核融合并形成雜種細胞的現(xiàn)象，或稱細胞雜交。

轉(zhuǎn)基因動物（transgenic animal）：采用基因工程技術(shù)將外源目的基因?qū)雱游锷臣毎⑴咛ジ杉毎驮缙谂咛?，并在受體動物的染色體上穩(wěn)定整合，在經(jīng)過發(fā)育途徑將外源目的基因穩(wěn)定地傳給子代，通過這項技術(shù)所獲得的動物即為轉(zhuǎn)基因動物。

胚胎干細胞（embryo stem cell）：簡稱ES細胞，是從早期胚胎細胞團分離出來并能在體外培養(yǎng)的一種高度未分化的、具有形成所有成年細胞類型能力的全能干細胞。它是正常二倍體型，像早期胚胎細胞一樣具有發(fā)育上的全能性。

抗體工程制藥（antibody engineering pharmaceutics）：利用基因工程、細胞工程（包括動物細胞工程和植物細胞工程）和轉(zhuǎn)基因動物及轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)生產(chǎn)抗體藥物的過程。

單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）：簡稱單抗，將能大量擴增和永生的骨髓瘤細胞和能合成分泌特異性抗體的B細胞（僅識別一種抗原表位）進行融合得到雜交瘤細胞，經(jīng)篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成及分泌抗單一抗原表位的特異性抗體。

雜交瘤細胞克隆化（cloning）：是指將陽性孔中分泌抗體的單個細胞分離出來。融合后的雜交瘤細胞一般要經(jīng)過3次克隆化才能達到100%的陽性克隆。

雙特異性抗體（bispecific antibody，bsAb）：亦稱雙功能抗體，是含有兩個不同配體結(jié)合位點的抗體分子，它有兩個不同的抗原結(jié)合部位（兩個臂），可分別結(jié)合兩種不同的抗原表位。嵌合抗體（chimeric antibody）：是利用DNA重組技術(shù)，將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動物細胞表達的抗體，表達的抗體分子中輕、重鏈的V區(qū)是異源的，而C區(qū)是人源的，即整個抗體分子的60%~70%是人源的。

人源化抗體（humanized antibody，hAb）：通過CDR移植即把鼠抗體的CDR（互補決定區(qū)）序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)所得到的抗體，也稱CDR移植抗體或改型抗體。該抗體既具有鼠源性單抗的特異性又保持了人抗體的功能（C區(qū)的功能）。

免疫原性（immunogenicity）：抗原能刺激機體特異性免疫細胞，使其活化、增值、分化，最終產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)（抗體或致敏淋巴細胞）的特性。

免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）：抗原與相應(yīng)免疫效應(yīng)物質(zhì)在體內(nèi)或體外相遇時，可發(fā)生

特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)的特性。

減毒活疫苗（live attenuated vaccine）：是通過不同的方式手段使病原體的毒性即致病

性減弱或喪失后獲得的一種由完整的微生物組成的疫苗制品。

滅活疫苗（inactivated）：是將病原體經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活純化處理，使其完全喪失感染性，但保留了病原體的幾乎全部組分因此滅活疫苗具有較好的免疫原性和安全性。

亞單位疫苗（subunit vaccine）：利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原）制成、能誘發(fā)

機體產(chǎn)生抗體的疫苗。

分解代謝阻遏（catabolite repression）：在菌體的生長階段被菌體快速利用的碳源會產(chǎn)

生大量的分解產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物阻遏次級代謝酶系的合成，只有當這類碳源被消耗完后，阻遏作用被消除，菌體才由生長階段轉(zhuǎn)入次級代謝產(chǎn)物合成階段，這種發(fā)酵過程中的次級代

謝產(chǎn)物在碳源被消耗盡時才產(chǎn)生和積累的現(xiàn)象稱為分解代謝阻遏。

生物技術(shù)：人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原

理，按照預(yù)先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達到某種目的的技術(shù)。

種齡（inoculumage）：種子罐中培養(yǎng)的菌絲轉(zhuǎn)入下一級種子罐或發(fā)酵罐時得培養(yǎng)時間

生物技術(shù)藥物的特性？

（1）理化性質(zhì)特性（1）相對分子量大（2）結(jié)構(gòu)復(fù)雜：蛋白質(zhì)和核酸均為生物大分子，蛋

白質(zhì)含有四級結(jié)構(gòu)（3）穩(wěn)定性差（2）藥理學(xué)作用特性（1）活性與作用機制明確：活性物

質(zhì)對生理功能的調(diào)節(jié)機制比較清楚（2）作用針對性強：有特定的靶分子、靶細胞或靶器官

（3）毒性低：生物技術(shù)藥物本身是體內(nèi)天然存在的物質(zhì)或它們的衍生物（4）體內(nèi)半衰期短

（5）有種屬特異性（6）可產(chǎn)生免疫原抑制（3）生產(chǎn)制備特性（1）藥物分子在原料中的含量低（2）原料液中常存在降解目標產(chǎn)物的雜質(zhì)：應(yīng)采取快速分離純化的方法以除去影響

目標產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)（3）制備工藝條件溫和：目的產(chǎn)物不穩(wěn)定（4）分離純化困難：需要

多種不同原理的層析單元操作才能達到要用的純度（5）產(chǎn)品易受有害物質(zhì)（4）質(zhì)量控制特

性

質(zhì)粒的特點：（1）是指獨立于原核生物染色體之外具有自主復(fù)制能力的遺傳物質(zhì)。（2）質(zhì)粒

具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力（3）質(zhì)粒具有不相容性：兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒不

能在同一宿主細胞中穩(wěn)定共存。4..共價閉合環(huán)狀DNA(ccDNA)，開環(huán)DNA(ocDNA)，線狀

DNA(lDNA)在瓊脂糖凝膠電泳中

5.復(fù)制子松弛型復(fù)制子的復(fù)制和宿主蛋白的合成功能

無關(guān)，宿主染色體DNA復(fù)制受阻時，質(zhì)粒仍可復(fù)制；嚴謹型復(fù)制子的復(fù)制與宿主蛋白質(zhì)的合成相關(guān)，因此在每個宿主細胞中為低拷貝數(shù)，僅1~3個。

6.克隆表達的質(zhì)粒載體涉及三個要素：

（1）復(fù)制子（2）選擇標記：由質(zhì)粒攜帶的賦予宿主細胞新的表型的基因，用于鑒定和篩選

轉(zhuǎn)化有質(zhì)粒的宿主細胞。常見的標記：氨芐西林（Amp），卡那霉素（Kan）（3）多克隆位點

（MCS）：質(zhì)粒載體中由多個限制性內(nèi)切酶識別序列密集排列形成的序列。

7.目的基因常用制備方法

(1)化學(xué)合成法（2）PCR法：在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通

過下列步驟擴增DNA：a）變性：雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；b）退火：降

低溫度，引物與單鏈模板結(jié)合；c）延伸：溫度調(diào)整至DNA聚合酶最適宜溫度，最終與單鏈

模板形成雙鏈，并開始下一個變性、退火、延伸循環(huán)。（3）基因文庫法（4）cDNA文庫法

8.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

9.（1）DNA片段之間的連接方式：粘性末端的連接效率高于平頭末端。（2）目的基因與載

體的濃度和比例：增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因與載體DNA的摩爾數(shù)比應(yīng)大

于1.（3）連接溫度、時間、連接酶的活性及緩沖液。

9.重組DNA導(dǎo)入大腸桿菌，常用的感受態(tài)細胞制備方法：氯化鈣法

10.重組子的篩選與鑒定：

（1）載體遺傳標記法：a)抗生素抗性篩選法

b)互補篩選法：重組子轉(zhuǎn)化成宿主細胞，載體的表達產(chǎn)物與宿主細胞中營養(yǎng)缺陷性突變發(fā)生

互補作用，從而實現(xiàn)重組子的篩選。藍白斑篩選：lacZα基因可編碼β—半乳糖苷酶α氨基

端的α互補肽段，與宿主細胞編碼的缺陷型β—半乳糖苷酶α實現(xiàn)互補，可分解底物5-溴-4-

氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，形成藍色菌落。由于lacAα基因的插入失活而成白色，空載體的宿主細胞呈藍色。c)營養(yǎng)缺陷篩選法d噬菌斑篩選法(2)核酸分子雜交法

(3)限制性內(nèi)切酶圖譜法(4)DNA序列測定法：雙脫氧終止法(5)目的基因表達產(chǎn)物測定法

12.外源基因在大腸桿菌中的表達形式：

(1)胞內(nèi)表達：(a)非融合蛋白的胞內(nèi)表達：形成包涵體（B）融合蛋白的胞內(nèi)表達：在大腸桿

菌內(nèi)較穩(wěn)定（2）分泌表達：（a)分泌至周質(zhì)（b）分泌至胞外

11.外源基因在原核生物中表達的重要調(diào)控元件

(1)啟動子：是DNA鏈上能與RNA聚合酶結(jié)合并起始mRNA合成的一段序列，是決定外源基

因在原核生物中表達效率的關(guān)鍵因素。(2)核糖體結(jié)合位點：SD序列(3)終止子

13.大腸桿菌中外源蛋白表達效率的影響因素：(1)外源基因密碼子：偏好密碼子（蛋白質(zhì)合成迅速，錯配率低）和稀有密碼子(2)mRNA結(jié)構(gòu)：減少G、C含量，增加A、T含量(3)表達

載體：高拷貝數(shù)、適用范圍廣、穩(wěn)定性高、表達產(chǎn)物容易純化(4)外源蛋白穩(wěn)定性

14.分離純化技術(shù)應(yīng)滿足下列要求：(1)技術(shù)條件要溫和，能保持目的產(chǎn)物的生物活性；(2)選

擇性要好(3)回收率要高(4)兩個技術(shù)之間要能直接銜接(5)整個分離純化過程要快

15.基因重組蛋白的主要分離技術(shù)

(1)離心(2)沉淀(3)膜分離(4)雙水相萃取

16基因重組蛋白的主要純化技術(shù):

(1)離子交換層析(2)親和層析(3)凝膠過濾層析(4)反相層析和疏水層析

17.選擇分離純化方法的依據(jù)：

（元，層析分離次序的選擇也同樣重要。(3)根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇(a)具有良好的穩(wěn)

定性、重復(fù)性和較高的安全性(b)盡可能減少組成工藝的步驟(c)分離純化工藝所用的時間要

盡可能的短(d)工藝和技術(shù)必須高效

18．基因工程藥物的質(zhì)量控制要點

(1)蛋白質(zhì)含量的測定(2)蛋白質(zhì)純度檢測(3)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量測定(4)蛋白質(zhì)等電點測定(5)蛋

白質(zhì)序列分析(6)內(nèi)毒素分析、宿主蛋白與核酸殘留分析

19.蛋白質(zhì)含量的測定

(1)紫外吸收法(2)BCA法(3)Lowry法(4)考馬斯亮藍法(5)SDS-PAGE掃描分析法

20.蛋白質(zhì)純度的檢測：電泳法、層析法、質(zhì)譜法、末端氨基酸殘基分析法

21.蛋白質(zhì)Mr測定有SDS-PAGE法、凝膠層析法、質(zhì)譜法

22.蛋白質(zhì)等電點測定的常用方法：等電聚焦法。

23.蛋白質(zhì)序列的分析:N-端氨基酸序列分析，C-端氨基酸序列分析

根據(jù)體外培養(yǎng)時動物細胞對生長基質(zhì)的依賴性，可將動物細胞分為

(1)貼壁依賴性細胞(2)非貼壁依賴性細胞(3)兼性貼壁細胞

1.動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境條件

(1)培養(yǎng)溫度（哺乳類37℃，昆蟲25~28℃）(2)pH值（大多數(shù)7.2~7.4）(3)通氧量（一定量的CO2）(4)防止污染(5)基本營養(yǎng)物質(zhì)(6)滲透壓

3.動物細胞的培養(yǎng)特性

(1)比微生物細胞大得多，無細胞壁，抗機械強度低，對剪切力敏感，適應(yīng)環(huán)境能力差；(2)

倍增時間長，生長緩慢，正常二倍體細胞的生長壽命是有限的；(3)對培養(yǎng)基要求高，易受

微生物污染，培養(yǎng)時需要添加抗生素；(4)生長大多需貼附于基質(zhì)，相互粘連以集群形式存

在，并有接觸抑制現(xiàn)象；(5)多半將產(chǎn)物分泌在細胞外，便于收集和純化；(6)對蛋白質(zhì)的合成條件和修飾功能與細菌不同，動物細胞可對蛋白質(zhì)進行完善的翻譯后修飾，特別是糖基化，與天然產(chǎn)品更一致，更適合于臨床應(yīng)用。

4.原代培養(yǎng)的主要步驟

(1)從健康動物體內(nèi)無菌條件下取出適量組織，剪切成小薄片；(2)加入適宜濃度的胰蛋白酶

或膠原酶和EDTA等進行消化作用使細胞分散；(3)將分散的細胞進行洗滌并純化后，以2×

10^6~7×10^6 /ml的濃度加到培養(yǎng)基中，37℃下進行原代培養(yǎng)，并適時進行傳代培養(yǎng)。分為

組織塊培養(yǎng)和單層細胞培養(yǎng)兩種方法。

5.動物細胞深低溫保存的基本原理

在-70℃以下時，細胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于完全停滯狀態(tài)，故可以長期保存。

在不加任何條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)

生機械損傷、電解質(zhì)濃度升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白質(zhì)變性等，能引起細胞

死亡。目前為了保存細胞，都采用液氮低溫（-196℃）凍存的方法。

6.動物細胞的復(fù)蘇

其原則是快速融化，必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍

存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。

7.動物細胞營養(yǎng)要求特點

(1)碳源不能為無機物，大多為葡萄糖；(2)氮源不能為無機物，主要為各種氨基酸；(3)在很

多情況下尚需添加5%~20%的小牛血清或適量的動物胚胎浸出液。

8.動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)方法

(1)懸浮培養(yǎng)法(2)微載體培養(yǎng)法(3)多孔載體培養(yǎng)法(4)微囊化培養(yǎng)法(5)中空纖維培養(yǎng)法

9.誘導(dǎo)動物細胞融合的方法主要有:(1)病毒法(2)PEG法(3)電擊法(4)激光法

10.轉(zhuǎn)基因動物生物反應(yīng)器（整體掌握？）

(1)轉(zhuǎn)基因動物乳腺生物反應(yīng)器（藥用蛋白，如抗凝血Ⅲ、抗胰蛋白酶、葡萄糖苷酶、C蛋白）

(2)轉(zhuǎn)基因動物血液生物反應(yīng)器（人血紅蛋白、抗體或非活性狀態(tài)的融合蛋白）(3)轉(zhuǎn)基因動

物尿液生物反應(yīng)器（促性腺激素）(4)轉(zhuǎn)基因雞（蛋）生物反應(yīng)器（人干擾素）

1.單克隆抗體技術(shù)的基本原理

基于動物細胞融合技術(shù)得以實現(xiàn)的，即骨髓瘤細胞和B細胞的融合。骨髓瘤細胞在體外

培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；抗原免疫的B細胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細胞和骨髓瘤細胞融合后形成的雜交瘤細胞，繼承了兩個親代

細胞的特性，既具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗

體的能力。通常使用HAT（H為次黃嘌呤、A為氨基蝶呤、T為胸腺嘧啶核苷）選擇培養(yǎng)基

對雜交瘤細胞進行篩選。未融合的脾細胞因不能在體外長期存活而死亡，未融合的骨髓瘤細

胞合成DNA的從頭合成途徑被培養(yǎng)基中的A阻斷，又因缺乏HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸

核糖轉(zhuǎn)移酶）和TK（胸腺嘧啶核苷激酶），不能利用培養(yǎng)基中的H和T完成DNA的合成過

程而死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了HGPRT和TK，因此能在HAT培養(yǎng)基

中長期存活與繁殖并分泌抗體。

2.單克隆抗體的大量制備主要方法:（1）體內(nèi)培養(yǎng)法（2）體外培養(yǎng)法

6.重組ScFv的應(yīng)用:(1)用于構(gòu)建和生產(chǎn)免疫毒素(2)用于腫瘤的影像分析和治療

7.噬菌體抗體庫技術(shù)的基本原理:用PCR技術(shù)從人免疫細胞中擴增出整套的VH和VL基因，克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。這樣一來噬菌體DNA中有抗

體基因的存在，同時在其表面又有抗體分子的表達，可以方便地利用抗原-抗體特異性結(jié)合而篩選出所需要的抗體，并進行克隆擴增。

7.噬菌體抗體庫構(gòu)建過程

(1)從外周血或脾、淋巴結(jié)等組織中分離B細胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；

(2)應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴增不同的抗體基因片段；

(3)構(gòu)建噬菌體載體；(4)用表達載體轉(zhuǎn)化細菌，構(gòu)建全套抗體庫。

通過多輪的抗原親和吸附（結(jié)合）-洗脫-擴增，最終篩選出抗原特異的抗體克隆。其中，噬

菌體抗體庫的篩選是關(guān)鍵環(huán)節(jié)和步驟。

減毒活疫苗的優(yōu)缺點：

優(yōu)點：

（1）通過自然感染途徑接種，可以誘導(dǎo)包括體液免疫、細胞免疫和粘膜免疫在內(nèi)的更全面的免疫應(yīng)答，使機體獲得更廣泛的免疫保護；（2）由于使用的是活的微生物他們可以在體內(nèi)

長時間起作用而誘導(dǎo)較強的免疫反應(yīng)，且由于活的微生物有增殖的特性，理論上只需要接

種一次，即可達到滿意的免疫效果；（3）可能引起水平傳播擴大免疫效果，增強群體免疫屏

障；(4)一般不需要再疫苗中添加佐劑，生產(chǎn)工藝一般不需要濃縮純化，價格低廉。

缺點：

(1)一般減毒活疫苗均保留一定殘余毒力，對一些個體如免疫缺陷者可能誘發(fā)嚴重疾病，并

且由于種種原因如基因修飾等，減毒活疫苗可能出現(xiàn)毒力回復(fù)即“返祖”現(xiàn)象；(2)減毒活

疫苗是活的微生物制劑，可能造成環(huán)境污染而引發(fā)交叉感染等，并可能滯留在環(huán)境中形成傳

染源；(3)缺損顆粒可能干擾免疫效果，因此產(chǎn)品分析評估較為困難；(4)保存運輸?shù)葪l件要

求較高，如需冷藏等。

1.滅活疫苗的特點：(1)滅活疫苗常需多次接種；(2)接種滅活疫苗產(chǎn)生的抗體滴度隨著時

間而下降；(3)滅活疫苗需要量大。

第七章 發(fā)酵工程制藥

1.發(fā)酵類型：(1)微生物菌體發(fā)酵(2)微生物的酶(3)微生物的代謝產(chǎn)物發(fā)酵(4)微生物轉(zhuǎn)化發(fā)

酵(5)生物工程菌發(fā)酵

2.微生物發(fā)酵生產(chǎn)藥物的分類：(1)抗生素類(2)氨基酸類(3)核苷酸類(4)維生素類(5)甾體類

激素(6)多糖類(6)治療酶及酶抑制劑

3.菌種保藏方法：(1)斜面低溫保藏法(2)石蠟油封存法(3)沙土管保藏法(4)麩皮保藏法(5)甘

油懸液保藏法(6)冷東真空干燥保藏法(7)液氮超低溫保藏法(8)宿主保藏法

4.種子液具備的條件：(1)菌種的生長活力強，轉(zhuǎn)種至發(fā)酵罐后能迅速生長，延遲期短；(2)

生理狀態(tài)穩(wěn)定；(3)菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求；(4)無雜菌污染，保證純種培養(yǎng)；()保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力

5.微生物的發(fā)酵方式：（1）分批發(fā)酵（2）補料—分批發(fā)酵（3）半連續(xù)發(fā)酵（4）連續(xù)發(fā)酵

5.發(fā)酵過程的中間分析項目：（1）產(chǎn)物產(chǎn)量（2）PH值（3）糖（4）氨基氮（5）菌絲形

態(tài)

6.發(fā)酵過程的影響因素及控制：（1）菌體濃度的影響及控制（2）營養(yǎng)物質(zhì)對發(fā)酵的影響

及控制（3）溫度的影響及控制（4）PH的影響及控制（5）溶氧的影響及控制（6）二氧化碳的影響及控制（7）泡沫的影響及控制（8）染菌對發(fā)酵的影響

第三篇：生物技術(shù)制藥重點總結(jié)

1.生物藥物：又稱為生物工程，是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進的工程技術(shù)手段和其它基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原

理，按照預(yù)先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達到某種目的技術(shù)。

2.生物技術(shù)藥物： 采用DNA重組技術(shù)或其它生物技術(shù)生產(chǎn)的用于預(yù)防、治療和診斷疾病的藥物，主要是重組蛋白和

核酸類藥物，如細胞因子、纖溶酶原激活劑、血漿因子等。

3.質(zhì)粒載體：質(zhì)粒是指獨立于原核生物染色體之外具有自主復(fù)制能力的遺傳物質(zhì)。分三種構(gòu)型：共價閉合環(huán)狀

DNA(cccDNA)、開環(huán)DNA(ocDNA)、線狀DNA(IDDNA)。在瓊脂糖凝膠電泳中遷移率：cccDNA > IDDNA > ocDNA

4.目的基因的常用制備方法主要包括化學(xué)合成法、PCR法、基因文庫法和cDNA文庫法等。

5.PCR法是指聚合酶鏈反應(yīng)，是根據(jù)生物體內(nèi)DNA復(fù)制原理在DNA聚合酶催化和dNTP參與下，引物依賴DNA模

板特異性的擴增DNA。在含有DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP的緩沖溶液中通過三個循環(huán)步驟擴增DNA：：①變性—雙鏈DNA模板加熱變性，解離成單鏈模板；②退火—溫度下降，引物與單鏈模板結(jié)合（溫度下降，PCR特性下降，效率升高）；③延伸—溫度調(diào)整至DNA聚合酶最適宜溫度，DNA聚合酶催化dNTP加至引物3′-OH，引物以5′→3′方向延伸，最終與單鏈模板形成雙聯(lián)DNA, 并開始下一個循環(huán)。

6.cDNA文庫法：cDNA是指與mRNA互補的DNA。cDNA文庫法是指提取生物體總mRNA，并以mRNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成cDNA的一條鏈，再在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈cDNA，將全部cDNA都克隆到宿主細胞而構(gòu)建成cDNA文庫。

7.影響目的基因與載體之間連接效率的主要因素：

①DNA片段之間的連接方式；粘性末端的連接效率高于平頭末端。

②目的基因與載體的濃度和比例；增加DNA濃度可以提高連接效率，目的基因于載體DNA的摩爾數(shù)比應(yīng)大于1。③連接溫度，時間，連接酶的活性及緩沖體系。

8.重組DNA導(dǎo)入宿主細胞的方法：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、顯微注射和電穿孔。

9.互補篩選法（最常見藍白班篩選法）需添加X–gal（X–Gal是β–半乳糖苷酶（β–galactosidase）的底物，水解后呈藍

色）和IPTG（是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)）篩選物質(zhì)進行篩選。

10.菌落原位雜交：又稱探針原位雜交法，制備與目的的基因某一區(qū)域同源的探針序列，根據(jù)核酸雜交原理，探針序列

特異性地雜交目的基因，并通過放射性同位素或熒光基團進行定位監(jiān)測。

11.凝膠過濾層析：凝膠過濾層析(gel filtration chromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法?；驹硎牵焊鶕?jù)生物

大分子的蛋白質(zhì)的質(zhì)量的大小來實現(xiàn)目的蛋白的分離純化。在凝膠過濾層析中所用的凝膠是一種惰性的不帶電荷具有三維空間結(jié)構(gòu)的多孔網(wǎng)狀物質(zhì)，凝膠的每個顆粒的微粒結(jié)構(gòu)就如一個篩子，當樣品隨流動相經(jīng)過凝膠柱時，較大的分子內(nèi)不能進入凝膠網(wǎng)孔內(nèi)而收到排阻，將與流動相一起首先被洗脫下來，而較小的分子進入部分凝膠網(wǎng)孔內(nèi)，所以流出的速度相對較慢。

12.反相層析（RPC）和疏水層析（HIC）的比較：是根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性差異來實現(xiàn)分離純化。先比反相層析而言，疏

水層析回收率較高，蛋白質(zhì)變性的可能性較小。反相層析和疏水層析的差異在于前者在有機相中進行，蛋白質(zhì)經(jīng)過反向流動相與固定相作用有時會發(fā)生部分變性，而后者通常在水溶液中進行，蛋白質(zhì)在分離過程中一般仍保持其天然構(gòu)象。

13.蛋白質(zhì)含量測定方法：紫外吸收法、BCA法、福林—酚試劑法（lowry）、考馬斯亮藍法、ELISA法等。

14.蛋白質(zhì)純度檢查的常見方法：SDS-PAGE法（最常用）、非變性PAGE法、層析法等。

15.蛋白質(zhì)序列的分析方法：N-端氨基酸序列分析法（基本原理Edman法）、C-端氨基酸序列分析法。

16.體外培養(yǎng)動物細胞的類型：貼壁依賴性細胞，非貼壁依賴性細胞和兼性貼壁細胞。

17.動物細胞與微生物細胞，植物細胞相比較具有的特點：

①比微生物細胞大得多，無細胞壁，抗機械強度低，對剪切力敏感，適應(yīng)環(huán)境能力差

②倍增時間長生長緩慢，正常二倍體細胞的生長壽命是有限的③對培養(yǎng)基的要求高，易受微生物污染，培養(yǎng)時常常需要添加抗生素

④生長大多需貼附于基質(zhì)，相互黏連以集群形式存在，并有接觸抑制現(xiàn)象

⑤多半將產(chǎn)物分泌在細胞外，便于收集和純化。

18.動物細胞的營養(yǎng)要求是：1.碳源不能為無機物，大多為葡萄糖

2.氮源也不能為無機物，主要為各種氨基酸

3.在很多情況下尚需添加5%-20%的小牛血清或適量的動物胚胎浸出液

19.動物培養(yǎng)基可分為：天然培養(yǎng)基，合成培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基三大類.20.原代細胞：直接將動物組織或器官經(jīng)過粉碎，消化而制的的懸浮細胞稱為原代細胞.21.懸浮培養(yǎng)法：是細胞在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長繁殖的培養(yǎng)方法，它適用于一切種類的非貼壁細胞，兼性貼壁細胞，可連續(xù)測定細胞濃度，連續(xù)收集部分細胞進行繼代培養(yǎng)，也無需消化分散，細胞收率高

22.木瓜蛋白酶水解IgG分子可產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合片段（Fab）和一個可結(jié)晶片段（Fc）

23.胃蛋白酶水解IgG分子可產(chǎn)生一個F(ab’)2和若干裂解小分子片段（pFc’）

24..單克隆抗體技術(shù)的基本原理：基于動物細胞融合技術(shù)得以實現(xiàn)的，即骨髓瘤細胞與B細胞的融合。骨髓瘤細胞在體外培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體，而抗原免疫的B細胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B細胞與骨髓瘤細胞融合后形成的雜交瘤細胞，繼承了連個親代細胞的特性，既具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗體的能力。

25.骨髓瘤細胞發(fā)生回復(fù)突變每3-6個月應(yīng)用8-氮雜鳥嘌呤（8-AG）篩選一次，以便殺死突變細胞

26.細胞融合的方法：常用的有轉(zhuǎn)動法和離心法.27.雜交瘤細胞的克隆化的方法有：有限稀釋法和軟瓊脂平板法，顯微操作法

28.雙特異性抗體：是含有兩個不同配體結(jié)合位點的抗體分子，它有兩個不同的抗原結(jié)合部位（兩個臂），可分別結(jié)合兩種不同的抗原表位。其中一個可與靶細胞表面抗原結(jié)合，另一個則可與效應(yīng)物（如藥物，效應(yīng)細胞等）結(jié)合，從而將效應(yīng)物直接導(dǎo)向靶組織細胞。

29.細胞內(nèi)抗體：亦稱內(nèi)抗體，主要是指細胞內(nèi)合成并作用于細胞內(nèi)組分的抗體。

30.如何構(gòu)建噬菌體抗體庫？構(gòu)建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個過程：1.從外周血或脾，淋巴結(jié)等組織中分離B細胞，提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA2，應(yīng)用抗體輕鏈和重鏈引物，根據(jù)建庫的需要通過PCR技術(shù)擴增不同的抗體基因片段3，構(gòu)建噬菌體載體4，用表達載體轉(zhuǎn)化細菌，構(gòu)建全套抗體庫。通過多倫的抗原親和吸附-洗脫-擴增，最終篩選出抗原特異性地抗體克隆。篩選為關(guān)鍵環(huán)節(jié)和步驟。

31.疫苗的組成：具有免疫保護性的抗原（Ag）如蛋白質(zhì)，多肽，多糖或核酸等與免疫佐劑混合制備而成。

32.佐劑是指能非特異性的增強免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)，可先于抗原或與抗原一起注入機體。

33.目前用于人體的佐劑只有兩種：1，鋁佐劑（氫氧化鋁或磷酸鋁）2，MF59

34.滅活疫苗和活疫苗的特點比較：（P122,表5-4）

35.聯(lián)合疫苗包括多聯(lián)疫苗和多價疫苗，多聯(lián)疫苗可用于預(yù)防由不同病原微生物引起的傳染病，而多價疫苗僅預(yù)防同一

種病原微生物的不同亞型引起的傳染病。

36.核酸疫苗是20世紀90年代發(fā)展起來的一種新型疫苗。核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗，由能引起機體保護性

免疫反應(yīng)的抗原的編碼基因和載體組成。核酸疫苗又稱為基因疫苗，基因免疫或核酸免疫

37.酶的分離純化過程必須遵循以下原則：

1、全部操作一般在低溫（0-4攝氏度）進行。

2、在分離提純過程中，不能

劇烈攪拌。

3、在提純?nèi)軇┲屑右恍┍Ｗo劑，如少量EDTA,少量 –巰基乙醇等

4、在分離提純過程中要不斷測定酶的的活力和蛋白質(zhì)濃度，以對純化過程進行檢測。一般用兩個指標來衡量分離純化方法的好壞：總活力的回收率和比活力提高倍數(shù)。

38.傳統(tǒng)的酶固定化方法大致可分為載體聯(lián)合法，交聯(lián)法和包埋法

39.固定化對酶穩(wěn)定性的影響：

1、熱穩(wěn)定性提高

2、對有機試劑及酶抑制劑的穩(wěn)定性提高

3、對PH，蛋白酶，儲存

盒操作條件的穩(wěn)定性提高

40.目前常用的菌種保藏方法有：

1、斜面低溫保藏法，一般可保存1-6個月左右

2、石蠟油封存法，一般可保存1-2年左右

3、砂土管保藏法，保藏期約1-10年

4、麩皮保藏法，保藏期在一年以上

5、甘油懸液保藏法，-20度保藏期約為0.5-1年，-70度下保藏期可達10年

6、冷凍真空干燥保藏法，5-15年

7、液氮超低溫度保藏法，15年以上

8、宿主保藏法

41、產(chǎn)物產(chǎn)量的測定方法有：生物測定法和化學(xué)測定法，一般采用化學(xué)測定法，以求迅速躋身反應(yīng)生產(chǎn)情況。中國微生物菌種保藏委員會CCCCM中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC

美國典型菌種保藏中心 ATCC美國的北部地區(qū)研究實驗室NRRL

英國的國家典型菌種保藏所NCTC日本的大阪發(fā)酵研究所IFO

德國菌種保藏中心DSM42、中間反應(yīng)產(chǎn)量測定：產(chǎn)物產(chǎn)量、ph值、糖、氨基酸、菌絲形態(tài)。

43、PH對發(fā)酵的影響有哪些？

1.PH影響酶的活性，當PH值抑制菌體的某些酶的活性時使菌的新陳代謝受阻

2.PH影響微生物細胞膜所帶電荷的改變，從而改變細胞膜的通透性，影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝物的排泄，因此影響新陳代謝的進行

3.PH影響培養(yǎng)基某些成分和中間代謝物的解離，從而影響微生物對這些物質(zhì)的利用

4.PH影響代謝方向，PH不同，往往引起菌體代謝過程不同，是代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。

44、基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)的特點？采用基因重組技術(shù)構(gòu)建的基因工程菌與細胞，由于帶有外來基因，對其進行培養(yǎng)和

發(fā)酵的工藝技術(shù)通常與單純的微生物細胞的工藝技術(shù)有不同之處?；蚬こ叹l(fā)酵的目的主要是實現(xiàn)外源基因的高效表達，以獲取大量的外源基因產(chǎn)物。而外源基因的高技術(shù)表達不僅涉及宿主、載體與外源基因三者之間的相互關(guān)系，與所處環(huán)境條件密切相關(guān)?；蚬こ叹l(fā)酵一般分兩個階段：前期是菌體生長階段，后期是菌體生長階段。

45、基因工程菌不穩(wěn)定性的原因？主要表現(xiàn)在質(zhì)粒的不穩(wěn)定性以及表達產(chǎn)物的不穩(wěn)定性。而質(zhì)粒的不穩(wěn)定性又分結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性以及分離不穩(wěn)定。結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性是由于轉(zhuǎn)位作用和重組作用所引起的質(zhì)粒DNA的重排與損失。分離的不穩(wěn)定性是細胞分裂過程中發(fā)生的不平均分配，從而造成質(zhì)粒的缺陷型分配，以致造成質(zhì)粒丟失。引起質(zhì)粒載體不穩(wěn)定性的原因只要是宿主新陳代謝負荷的加重，大量外源蛋白的形成對宿主細胞的損害，通常是致死的，失去制造外源蛋白的能力的細胞一般生長的快得多，從而能替代有生產(chǎn)能力的菌株，這就導(dǎo)致了基因工程菌的不穩(wěn)定性。

46、突變生物合成：采用一些誘變劑，如紫外線，激光，高速電子流或一些化學(xué)藥物如亞硝基胍，溴化乙啶等對藥物的產(chǎn)生菌進行誘變，是他們喪失合成某種中間體的能力，因而不能合成原來結(jié)構(gòu)的化合物，陳武阻斷突變株。在發(fā)酵培養(yǎng)這些阻斷突變株時添加某些天然或化學(xué)合成的化合物作為中間體，這些突變株能利用這些中間體合成一些新結(jié)構(gòu)的最終化合物，這個過程稱為突變生物合成。

47、微生物轉(zhuǎn)化系酶促化學(xué)反應(yīng)，具有與通常有機化學(xué)反應(yīng)不一樣的特點：

1.以具有活性中心和特殊空間結(jié)構(gòu)的酶作為催化劑

2、對作用的基質(zhì)有嚴格的選擇性和專一性

3、酶催化反應(yīng)的速度極高，非一般催化劑可比

4、一般在常溫常壓下進行，反應(yīng)條件溫和

48、微生物對甾體轉(zhuǎn)化反應(yīng)的特點：在微生物轉(zhuǎn)化過程中，專一，有效的菌體量的多少，以及甾體底物在水相的溶解

性等問題成為影響轉(zhuǎn)化率的重要因素，目前采用的兩階段發(fā)酵及兩相發(fā)酵方法很好的解決了這些甾體微生物轉(zhuǎn)化中的問題。

49、蛋白質(zhì)藥物對化學(xué)修飾的意義：

50、最常用的修飾劑有：主要是水溶性高分子聚合物，如葡聚糖、右旋糖苷、肝素以及低分子肝素、多聚唾液酸、聚

乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、PEG、白蛋白等。目前以PEG最常用的。其毒性小、無抗原性、溶解性良好。

51、修飾策略有隨機修飾與定點修飾兩類。氨基修飾主要用隨機修飾，在利用特定的修飾劑可以實現(xiàn)定點修飾。巰基

修飾多為定點修飾。羧基修飾為定點修飾。

52、選擇PEG修飾劑應(yīng)該考慮的因素：PEG的Mr，修飾位點，水解穩(wěn)定性和反應(yīng)活性。

53、核酶：核酶不是普通的蛋白質(zhì)酶，而是一類具有催化活性的核酸分子。目前已知的具有核酶催化功能的RNA結(jié)

構(gòu)至少可以分成5類：發(fā)夾狀核酶，錘頭狀核酶，I型內(nèi)含子核酶，RNaseP核酶，丁型肝炎病毒核酶等

54、反義核酸：是指具有抑制基因表達作用。包括反義RNA、反義DNA分子，由部分RNA和部分DNA形成RNA-DNA

嵌合分子，以及經(jīng)高度化學(xué)修飾的寡聚核酸類似物，這些分子統(tǒng)稱反義核酸類藥物。

55、褔米韋生經(jīng)美國FDA批準上市成為第一個反義核酸類藥物。

56、RNAi:即RNA干擾現(xiàn)象，是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種由雙鏈RNA誘導(dǎo)的基因表達調(diào)控和基因沉默過程。主要階段：

啟動階段和執(zhí)行階段

57、小干擾RNA(siRNA)：在啟動階段，當細胞由于病毒感染等原因出現(xiàn)雙鏈RNA分子或帶有較長雙鏈的發(fā)卡結(jié)構(gòu)

RNA時，細胞中的Dicer的核酸酶會識別其雙鏈RNA，將其降解成21~23bp長的小干擾RNA。主要參與RNA干擾（RNAi）現(xiàn)象，以帶有專一性的方式調(diào)節(jié)基因的表達。

第四篇：生物技術(shù)制藥現(xiàn)狀及發(fā)展前景

新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)

題目:

姓名:

學(xué)院:

專業(yè):

班級:

學(xué)號:

指導(dǎo)教師: 文獻綜述生物技術(shù)制藥現(xiàn)狀及發(fā)展前景劉元元農(nóng)學(xué)院生物技術(shù)082班083135210張華 職稱 教授

2011 年 11 月 21日

生物技術(shù)制藥現(xiàn)狀及發(fā)展前景

作者：劉元元指導(dǎo)老師：張華

摘要：生物技術(shù)制藥是以基因工程為基礎(chǔ)的現(xiàn)代生物工程，即利用基因工程技術(shù)、細胞工程技術(shù)、微生物工程技術(shù)、酶工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)等來研究和開發(fā)生產(chǎn)出傳統(tǒng)制藥技術(shù)難以獲得的生物藥品。生物制藥業(yè)是目前生物技術(shù)發(fā)展最活躍，進展最快的產(chǎn)業(yè)之一，21世紀是生物制藥行業(yè)飛速發(fā)展的時代。關(guān)鍵字：生物技術(shù)制藥；研究進展；現(xiàn)代生物技術(shù)；新技術(shù)

Biotechnology pharmaceutical situation and development prospect

Abstract: Biotechnology-based pharmaceuticals is based on modern genetic engineering, biological engineering, namely the use of genetic engineering, cell engineering, microbial engineering, enzyme engineering, protein engineering, molecular biology technology to research and development and production of the traditional system Difficult to obtain bio-medicine technology medicine.Biopharmaceutical industry is currently the most active in the development of biotechnology, one of the industries most advanced, 21st century is the rapid development of bio-pharmaceutical industry of the time.Keywords: Biotechnology Pharmaceutical;Research;Modern biotechnology;New Technology生物技術(shù)制藥現(xiàn)狀

現(xiàn)代生物技術(shù)是以基因為源頭，基因工程和基因組工程為主導(dǎo)技術(shù)，與其他高技術(shù)相互交叉、滲透的高新技術(shù)。比爾·蓋茨預(yù)言：下一個首富可能是從事生物技術(shù)的投資者。生物技術(shù)制藥可以分為二類：一類是生化藥物，主要是運用生物化學(xué)方法從生物體中分離．純化得到的一些生物活性物質(zhì)，如維生素、酶、核酸、激素等；另一類是生物醫(yī)藥，主要是以微生物、生物組織、人或動物的血液等原料采用物理方法和生物化學(xué)工藝制得的生物活性制劑、血液制品、抗血清、抗毒素等。

1.1 非基因工程生化物

此類藥物有腦蛋白水解物注射液、玻璃酸鈉、分子肝素鈣、分子肝素鈉、促肝細胞生長素、蚓激酶、甘糖酯等共97種。

1.2 先導(dǎo)化合物

以天然產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物，通過組合化學(xué)技術(shù)合成大量結(jié)構(gòu)相關(guān)的物質(zhì)，建立有序變化的化合物庫，供藥物篩選和藥效關(guān)系研究用。

1.3 生化制藥中先進分離分析技術(shù)的運用

多種層析（如親和層析、高效液相層析）、超速離心等技術(shù)的運用，可成功地制得高純度的生化藥物。如尿激酶、胰島素、重組人胰島素、激肽釋放酶、輔酶A、肝素鈉等都是通過這種技術(shù)使藥效得到較大的提高。

1.4 應(yīng)用生物技術(shù)、化學(xué)合成、結(jié)構(gòu)后修飾研究開發(fā)新藥

應(yīng)用上述技術(shù)系統(tǒng)綜合研制開發(fā)的新藥，主要有以下各類藥物：1）多糖類，如玻璃酸鈉、香菇多糖、低分子肝素等；2）酶及酶抑制劑類，如門冬酚胺酶、葡激酶、人胰蛋白酶抑制劑、膠原酶、降纖酶等；3）多肽類，如人降鈣素、鮭魚降鈣素等；4）細胞因子類，如白介素-

6、腫瘤壞死因子、神經(jīng)生長因子、血小板生成素等；5）結(jié)構(gòu)后修飾類，如修飾門冬酚胺酶、修飾超氧化物歧化酶等。

1.5 應(yīng)用生物技術(shù)改造傳統(tǒng)制藥工藝

微生物發(fā)酵是制藥工業(yè)生產(chǎn)微生物藥品的重要手段。微生物轉(zhuǎn)化是利用微生物產(chǎn)生的特異酶完成特定的生化反應(yīng)，使有機物轉(zhuǎn)變成工業(yè)產(chǎn)品。由于生物藥品具有療效好、副作用小、且可大規(guī)模生產(chǎn)、利潤極高、無環(huán)境污染等優(yōu)點，受到各國政府重視，行業(yè)前景十分廣闊。

2生物制藥研究新進展

2.1 計算機輔助藥物設(shè)計技術(shù)發(fā)展

計算機技術(shù)的發(fā)展和向藥物化學(xué)學(xué)科的滲透，促進了藥物設(shè)計的發(fā)展。20 世紀90年代計算機輔助藥物設(shè)計取得突破性進展，現(xiàn)已成為藥物研究和開發(fā)的重要方法和工具。

計算機輔助藥物設(shè)計利用了計算機快速、全方位的邏輯推理功能、圖形顯示控制功能，并將量子化學(xué)、分子力學(xué)、藥物化學(xué)、生物化學(xué)和信息科學(xué)結(jié)合起來，研究受體生物分子與藥物結(jié)合部位的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、藥物與受體復(fù)合物的構(gòu)型和立體化學(xué)特征、藥物與受體結(jié)合的模式和選擇性、特異性、、藥物分子的活性基團和藥效構(gòu)象關(guān)系等，從藥物機理出發(fā)，改進現(xiàn)有生物活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，快速發(fā)現(xiàn)并優(yōu)化先導(dǎo)化合物，使其盡早進入臨床前研究，減少傳統(tǒng)的新藥研究的盲目性，縮短新藥研制的時間。

計算機輔助藥物設(shè)計有兩類方法，一類是基于機理的藥物設(shè)計（MBDD），另一類是基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計（SBDD），基于機理的藥物設(shè)計要針對藥物作用機理，從靶點出發(fā)，考慮藥物與受體的作用過程，并要模擬藥物在體內(nèi)的吸收、轉(zhuǎn)運、代謝等動態(tài)過程，比基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計更合理，但該法還不成熟。目前的計算機輔助藥物設(shè)計主要還是基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計，今后的計算機輔助藥物設(shè)計的目標是向基于機理的藥物設(shè)計方向發(fā)展。相信隨著生命科學(xué)和計算機科學(xué)的發(fā)展，考慮藥物不同作用機理和全部作用過程的計算機輔助藥物設(shè)計技術(shù)將逐步建立并不斷完善。

2.2 組合化學(xué)與高通量篩選技術(shù)發(fā)展

組合化學(xué)是近20年發(fā)展起來的一種合成大量化合物的新方法，它是建立在高效平行的合成之上，在同一個反應(yīng)器內(nèi)使用相同條件同時制備出多種化合物，建立各類化合物庫的策略。組合化學(xué)通常采用操作、分離簡便的固相化學(xué)合成。液相化學(xué)合成技術(shù)也在快速發(fā)展和完善中。

在藥物研究過程中，通過化合物活性篩選而獲得具有藥物活性的先導(dǎo)化合物是新藥研究的基礎(chǔ)。隨著分子水平的藥物篩選模型的建立，篩選方法和技術(shù)都發(fā)生了根本性的變化，出現(xiàn)了高通量篩選的新技術(shù)，大大加快了先導(dǎo)化合物的尋找和發(fā)現(xiàn)，并促進了高通量有機合成。近年來，組合化學(xué)與高通量篩選結(jié)合，使組合化學(xué)的化合物庫種類、數(shù)量不斷擴大，篩選的先導(dǎo)化合物數(shù)量和種類也在不斷地增多，使新藥的種類和數(shù)量也在不斷地增加。組合化學(xué)實現(xiàn)的自動化合成僅20世紀90年代后得到的各類化合物總和已超過了人類有史以來所發(fā)現(xiàn)化合物的總和，故有人把組合化學(xué)與高通量篩選結(jié)合技術(shù)稱為“新藥發(fā)現(xiàn)的高速公路”，據(jù)文獻記載，1992年～1998年的幾年，經(jīng)過組合化學(xué)化合物庫與高通量篩選，確定的候選藥物已有46個，并已進入人體測試階段。顯然，組合化學(xué)與高質(zhì)量篩選的結(jié)合技術(shù)，大大地加快了新藥研制的步伐。雖然如此，組合化學(xué)建立的大型化合物庫，為篩選也帶來了困難，因此，利用組合化學(xué)設(shè)計，構(gòu)建具有結(jié)構(gòu)多樣性的小型而便于篩選的組合化合物庫，結(jié)合化學(xué)信息學(xué)和高通量篩選，將是組合化學(xué)與高通量篩選結(jié)合的一項重要課題。

2.3 藥物手性合成技術(shù)發(fā)展

化學(xué)合成技術(shù)在新藥發(fā)現(xiàn)過程中發(fā)揮著十分重要的作用。近年來由于有機化學(xué)學(xué)科新理論、新反應(yīng)、新技術(shù)不斷發(fā)現(xiàn)，使得合成反應(yīng)具有化學(xué)選擇性成為現(xiàn)實，并促進了藥物合成技術(shù)的快速發(fā)展，其中手性合成技術(shù)使新藥研制的領(lǐng)域不斷擴大。

手性是自然界的本質(zhì)屬性。在生物體手性環(huán)境，如酶、受體、離子通道、蛋白質(zhì)、載體中，分子之間手性匹配是分子識別的基礎(chǔ)，受體與配體的專一作用，酶與底物的高度、區(qū)域、位點和立體催化專一性，抗原與抗體的免疫識別都與手性有關(guān)，同時藥物的生物應(yīng)答常受到手性影響，包括藥物在體內(nèi)的吸收、轉(zhuǎn)運、分配、位點活性的作用以及代謝和消除。所以，手性藥物的開發(fā)是當前醫(yī)藥界重點研究的熱點之一，并取得了令人注目的成就。目前已上市的藥物中手性藥物約占1/3，如2000年全球手性藥物銷售額達1233億美元。

手性藥物的制備技術(shù)主要有拆分法、化學(xué)合成法和生物合成等三大類，發(fā)展較快的是后二類。化學(xué)合成法是在不對稱催化劑存在下，利用化學(xué)反應(yīng)的動力學(xué)和熱力學(xué)不對稱性，進行單一對映體合成。在已上市的手性藥物中，其手性中間體均可通過現(xiàn)有的重（雙）鍵不對稱還原技術(shù)，特別是不對稱氫化和不對稱轉(zhuǎn)移氫化來合成。至今為止在不對稱催化合成中，昂貴的手性配體和貴金屬的使用，以及手性催化劑的催化效率仍是制約其在手性技術(shù)上應(yīng)用的關(guān)鍵。因而，手性催化劑的設(shè)計和合成，以及催化劑的回收循環(huán)使用是當今不對稱催化合成研究的方向。

生物合成法則利用催化劑, 酶-催化反應(yīng)的高度、底物、區(qū)域、位點和立體選擇性來合成手性藥物。生物合成法具有選擇性高、產(chǎn)率高、反應(yīng)條件溫和等特點，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，生物合成法將成為手性制備的高效手段。

2.4 藥物生物技術(shù)發(fā)展

生物技術(shù)藥物是指利用DNA重組技術(shù)或單克隆抗體技術(shù)或其它生物技術(shù)研制的蛋白質(zhì)、抗體或核酸類藥物，它是目前生物技術(shù)研究最為活躍的領(lǐng)域，給生命科學(xué)的研究和生物制藥工業(yè)帶來了革命性變化。未來生物技術(shù)的展望

研究和發(fā)展方向：我國生物制藥產(chǎn)業(yè)的研發(fā)方向要結(jié)合傳統(tǒng)醫(yī)藥的優(yōu)勢，發(fā)展重點應(yīng)針對神經(jīng)系統(tǒng)、腫瘤、心血管系統(tǒng)、艾滋病及免疫缺陷等重大疾病的多肽、蛋白質(zhì)和核酸。乙肝基因疫苗與單克隆抗體的研究開發(fā)、血液替代品的研究與開發(fā)、生物技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用，如基因治療、生物人基因芯片、干細胞等。目前，我國已經(jīng)制定了明確的生物制藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃和產(chǎn)業(yè)技術(shù)政策，政府從上到下對生物技術(shù)研究開發(fā)的支持和政策扶持；國內(nèi)各大企業(yè)（包括民營企業(yè)）對生物技術(shù)的關(guān)注和資金投入；我國金融界積極參與生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，尤其是許多有實力的公司都參與了生物技術(shù)的開發(fā)；而我國生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域目前已經(jīng)匯集了一批自己培養(yǎng)和從國外歸來的具有高學(xué)歷、高素質(zhì)的科學(xué)家和企業(yè)家，這四方面的因素對于我國生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展起到了很重要的作用。由于生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)投資回報周期為5 年至8 年，而我國進人生物工程領(lǐng)域的時間尚短，回報的周期尚未到來。預(yù)計到二十一世紀的前幾年將是我國生物制藥產(chǎn)業(yè)的收獲季節(jié)。

參考文獻:

[1] 沈鐵軍.提高中草藥市場競爭幾點思考[J].時珍國醫(yī)國藥, 1999, 10(11):9-10.[2] 劉詒.治療抑郁及相關(guān)病癥的植物提取物制劑[J].國外醫(yī)藥:植物藥分冊, 2007, 22(5):223-225.[3] 姜倩倩, 劉京貞, 蘇瑞強.單克隆抗體藥物進展[J].藥物生物技術(shù), 2005, 12(4):270-274.[4] 胡顯文, 陳惠鵬, 湯仲明, 等.生物制藥的現(xiàn)狀和未來[J].中國生物工程雜志, 2005, 25(1):86-89.[5] 徐明波, 何瑋, 馬清鈞.生物技術(shù)藥品產(chǎn)業(yè)化的現(xiàn)狀及前景[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2003:35-43.[6[ 王立新.徐薇.關(guān)東慶C3d-P28增強乙肝病毒基因免疫誘導(dǎo)的特異性細胞免疫應(yīng)答[期刊論文]-細胞與分子免疫學(xué)雜志 2003(03)

[7] 米力.陳志南動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)蛋白的工藝選擇[期刊論文]-中國生物工程雜志 2003(07)

[8] 張學(xué)文.章懷云干擾素γ誘導(dǎo)細胞抗病毒的分子機制[期刊論文]-湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)2001

第五篇：生物技術(shù)制藥見習(xí)報告

生物技術(shù)制藥見習(xí)報告

一藥廠見習(xí)

(一)藥廠簡介

合肥神鹿雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司是北京醫(yī)藥集團有限責(zé)任公司的全資子公司，公司是一家擁有四十余年歷史，以生產(chǎn)中成藥為主導(dǎo)產(chǎn)品的專業(yè)化中成藥企業(yè)，公司注冊資本為9650萬元。公司先后被確定為全國醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)量效益型企業(yè)、全國中成藥工業(yè)國有重點企業(yè)（五十強）之

一、安徽省醫(yī)藥行業(yè)的骨干企業(yè)、安徽省210戶國有及國有控股重點企業(yè)、合肥市科技先導(dǎo)型企業(yè)、安徽省高新技術(shù)企業(yè)、合肥市科技創(chuàng)新型企業(yè)等榮譽稱號，公司的技術(shù)中心為安徽省省級技術(shù)中心。

四十年來公司秉承“讓生活有質(zhì)量，讓生命更健康”的使命，致力于提供安全、可靠、放心的產(chǎn)品和服務(wù)，追求提升人類生命價值和生活品質(zhì)，公司曾連續(xù)榮獲安徽省質(zhì)量管理獎。公司占地面積145畝。職工460人，其中大專以上學(xué)歷占45%，高中級專業(yè)技術(shù)人員67人，執(zhí)業(yè)藥師18名。經(jīng)過多年的積累與發(fā)展，企業(yè)已形成較完整的營銷、研發(fā)、生產(chǎn)技術(shù)、質(zhì)量保證體系。擁有顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑等具有國內(nèi)領(lǐng)先水平的生產(chǎn)線。生產(chǎn)工藝采用低溫回流、一步造粒等先進工藝，2002年整廠一次性順利通過了國家GMP認證。擁有高效液相、雙波長薄層掃描、十萬分之一電子天平、BGB－150B高效包衣機、小顆粒自動包裝生產(chǎn)線等一批國內(nèi)外先進的檢測儀器和生產(chǎn)設(shè)備。目前已成為安徽省產(chǎn)能規(guī)模最大的中成藥生產(chǎn)企業(yè)，具有年產(chǎn)片劑：3億片；顆粒劑：600噸；膠囊劑：1億粒的綜合生產(chǎn)能力。

公司擁有溫、養(yǎng)胃舒、益膽片、兒瀉停顆粒、銀菊清咽顆粒、化濁輕身顆粒以及正柴胡飲膠囊等獨家產(chǎn)品和國家中藥保護品種。

公司的主導(dǎo)產(chǎn)品溫胃舒、養(yǎng)胃舒是目前國內(nèi)胃藥市場上唯一辨證分型、一病兩藥的藥物,溫胃舒、養(yǎng)胃舒曾榮獲國家中醫(yī)藥管理局重大科技成果乙級獎、中國中藥名牌、安徽省著名商標、安徽省名牌產(chǎn)品和高新技術(shù)產(chǎn)品等稱號，并被列為國家基本藥物目錄，國家基本醫(yī)療保險藥品、國家中藥保護品種和國家社保目錄乙類。

獨家產(chǎn)品益膽片具有行氣散堅，清熱通淋的作用，消炎效果顯著，起效迅速。適用于急慢性膽囊炎、膽石癥、腎結(jié)石、膀胱結(jié)石等癥，被譽為膽石患者的“良藥”。

國家級新藥兒瀉停顆粒為純中藥制劑，具有療效高、見效快、劑量小、口感好，安全無毒付作用等特點，為目前治療兒童輪狀病毒性腸炎的理想藥物。

（二）制藥技術(shù)介紹

1膠囊劑

膠囊劑（capsules）將藥物直接分裝于硬質(zhì)空膠囊或具有彈性的軟質(zhì)膠囊中制成的固體制劑。： 根據(jù)囊材的不同分為硬、軟、腸溶膠囊。

（1）硬膠囊劑：將一定量的藥材提取物與藥粉或輔料制成均勻的粉末或顆粒充填于空心膠囊中，或?qū)⑺幉姆勰┲苯臃盅b于空心膠囊中制成的劑型。

（2）軟膠囊劑：將一定量的藥物、藥材提取物加適宜的輔料密封于球形、橢圓形或其他形狀的軟質(zhì)囊材中制成的劑型。

（3）腸溶膠囊：硬膠囊或軟膠囊經(jīng)藥用高分子處理或用其他適宜方法加工而成。囊殼不溶于胃液，能在腸液中崩解、溶化、釋放膠囊中藥物。

膠囊劑的特點：

可掩蓋藥物的不良氣味；藥物的生物利用度高（與片劑、丸劑相比）；可提高藥物的穩(wěn)定性（光、熱敏感藥物）；可定時定位（直腸、陰道給藥）釋放藥物；彌補其他劑型的不足；（1）

含油量高或液態(tài)藥物制成固體制劑時。（2）服用劑量小、難溶于水、胃腸道不吸收的藥物，可溶于適當?shù)挠椭?。自動化程度高、整潔、美觀、貯存、運輸、攜帶、服用方便。膠囊劑的質(zhì)量要求：

應(yīng)整潔，不得有粘連、變形或破裂現(xiàn)象，無異臭。小劑量藥物，應(yīng)先用適宜的稀釋劑稀釋，混和均勻。硬膠囊劑的內(nèi)容物應(yīng)干燥、疏松、混合均勻。裝量差異、水分、崩解時間應(yīng)符合《中國藥典》規(guī)定。

藥物的填充

1、藥物的處理：混合均勻的細粉或顆粒。

2、空膠囊的選擇：

選擇原因：藥物的密度、晶態(tài)、顆粒大小的不同，占容積不同。

選擇原則：按藥物劑量所占容積選用最小的空膠囊。

選擇方法：經(jīng)驗、試裝；或測其密度查圖可得。

3、藥物填充方法：

手工填充、硬膠囊分裝器填充、全自動膠囊填充機。

填充時需注意的問題：

定量藥粉填充時會發(fā)生少量的損失，多準備填充物。麻醉、毒性藥物除外。填充小劑量的藥粉，麻醉、毒性藥物易引濕或混合后發(fā)生共熔的藥物，加入適量稀釋劑，混合后填充。疏松性藥物小量填充時，加適量乙醇或液狀石蠟混勻后填充。中藥浸膏粉，應(yīng)保持干燥，添加適當輔料混勻后填充。揮發(fā)油先用吸收劑（碳酸鈣、輕質(zhì)氧化鎂、磷酸氫鈣等）吸收后填充。還可用復(fù)方中有些粉性較強藥材，且為打粉入藥吸收。

2制粒技術(shù)

近年來．一些新的制粒技術(shù)在制劑工藝改進方面起到了一定的推動作用，包括超細粉碎技術(shù)、超臨界流體重結(jié)晶過程、微丸制備技術(shù)、微膠囊技術(shù)等。超細粉碎技木把機械粉碎與氣流粉碎兩者原理結(jié)合起來，可以達到亞微米級的細度，是當今最先進的超細粉碎方法之一。超臨界流體重結(jié)晶是利用壓力使溶液由不飽和變?yōu)檫^飽和，此而使物質(zhì)重結(jié)晶析出，可在近常溫下進行，適用于熱不穩(wěn)定、易氧化物質(zhì)的重結(jié)晶提純或制備微細顆粒。微丸制備技術(shù)生產(chǎn)能力大，可以制造0.3-30mm的球粒，顆粒直徑大小相同、分散度小含量均勻。微膠囊包覆技術(shù)在我國工業(yè)的應(yīng)用剛剛起步，但隨著研究的深入，必將成為中成藥制劑中的關(guān)鍵性高新技術(shù)之一。中藥顆粒劑是在湯劑和糖漿劑的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的中藥劑型，既保持了湯劑吸收快、顯效迅速等優(yōu)點，又克服了湯劑服用前臨時煎煮、費時耗能、久置易霉變變質(zhì)等不足。近年來，由于中藥流化床制粒技術(shù)具有干燥時間短、產(chǎn)品質(zhì)量好、干燥過程簡單等特點，而被廣泛應(yīng)用于中藥制藥行業(yè)，其制粒技術(shù)亦日益趨向成熟。

2.1 中藥制粒技術(shù)發(fā)展概況

中藥大多數(shù)是以浸膏作原料，其中含有生物堿、昔類、多糖等有效成分，同時也含有纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、樹脂、樹膠等無效成分，并給制粒帶來很大困難。若要提高制劑質(zhì)量，就必須改善顆粒外觀、色澤，努力達到防潮、掩蓋不良口味、防止藥物揮發(fā)、提高溶解度、控或緩釋等工藝要求。中藥顆粒的制備工藝為: 選料斗去雜升工業(yè)提取升濃縮斗干燥葉制粒，其中主要的工藝環(huán)節(jié)是原料的處理與制粒。為了提高顆粒成品的質(zhì)量，確保臨床使用的療效，藥學(xué)工作者進行了廣泛的實驗研究。

2.2 原料的處理

根據(jù)處方中所含藥物的成分，來確定處理的方法，出現(xiàn)了動態(tài)溫浸技術(shù)、高速離心技術(shù)、絮凝澄清技術(shù)、大孔樹脂吸附技術(shù)、超濾技術(shù)、揮發(fā)性成分包含技術(shù)，從而提高原藥材的提取分離效果。

2.3 制粒工藝

通過輔料的選擇和工藝條件的改進，來提高顆粒的質(zhì)量，改善其性狀:輔料上除了糖粉、糊精、可溶性淀粉外，還選用麥芽糊精、乳糖、微晶纖維素、微粉硅膠、經(jīng)丙基淀粉等;制粒工藝上改變了傳統(tǒng)工藝干燥時間長，藥材中對熱不穩(wěn)定成分損失較多之不足，采用了動態(tài)提取、真空低溫干燥或瞬間噴霧干燥、干法制粒、高速攪拌制粒等高新技術(shù)。實踐表明，上述制粒技術(shù)的應(yīng)用，大大地提高了中藥顆粒的制備效率和成品質(zhì)量，也為中藥制藥技術(shù)的進步與發(fā)展產(chǎn)生了積極的推動作用。

1.4.流化床制粒技術(shù)工藝原理

流化噴霧制粒，又稱沸騰制粒、“一步制?！?。該法將制粒用的輔料置于流化噴霧制粒設(shè)備的流化室內(nèi)，通人濾凈的加熱空氣，使粉末預(yù)熱干燥并處于沸騰狀態(tài)，再將經(jīng)預(yù)處理的藥液以霧狀間歇噴入，使輔料粉末被潤濕而凝結(jié)成多孔狀顆粒，繼續(xù)流化干燥至顆粒中含水量適宜即得。

1.4.1流化床制粒技術(shù)特點

流化床制粒技術(shù)為混合、制粒、干燥操作一步完成的新型制粒技術(shù)。適于對濕、熱敏感的藥物制粒。該技術(shù)的使用，可大大減少輔料量，浸膏在顆粒中的含量可達到50%-70%，顆粒在沸騰狀態(tài)下形成，大小均勻、外形圓整、流動性好、可壓性好、生產(chǎn)效率高，便于自動控制。同時由于制粒過程在密閉的制粒機內(nèi)完成，生產(chǎn)過程不易被污染，成品質(zhì)量能得到更好的保障。目前多用于無糖型、低糖型顆粒劑的制備。

1.5 流化床制粒技術(shù)應(yīng)用的注意事項

流化床制粒是中藥制藥工業(yè)中較為常用的先進技術(shù)之一，應(yīng)用越來越廣泛，但也存在著一些需要解決的問題。

1.5.1 防止噴霧干燥制粒機‘.塌床”現(xiàn)象的發(fā)生

1.5.2 產(chǎn)生“塌床”現(xiàn)象的原因

中藥干浸膏粉多數(shù)粘滯性太大，引濕性較強，流動J性較差;操作中風(fēng)溫及風(fēng)速過低，物料干燥速率太慢，粘合劑霧化液滴過大，或噴霧頻率過高等;工藝設(shè)計不合理}，習(xí)。

1.5.3 防止“塌床”的方法

對于不同的處方、不同的中藥成分，在操作中可以根實際情況，采取措施來預(yù)防和解決“塌床”現(xiàn)象。

1.5.4 防止顆粒大小不均

針對不同處方藥物條件及制劑要求，適當?shù)卣{(diào)整噴霧干燥制粒機的操作參數(shù)，并且在噴霧過程中，應(yīng)隨時根據(jù)取樣情況，觀測顆粒成型的好壞，并依此來調(diào)節(jié)霧化空氣壓力、流浸膏相對密度、進出塔風(fēng)溫度、微調(diào)風(fēng)門的開啟度、液體的噴霧速度等制粒參數(shù)，即可得到滿意大小的顆粒

1.5.5 噴霧干燥產(chǎn)品的吸潮問題

近年來，人們在顆粒生產(chǎn)中采取了新工藝和新輔料、改善生產(chǎn)環(huán)境、采用阻濕性能強的包裝材料等措施，旨在增強中藥顆粒的抗引濕性能，解決噴霧干燥產(chǎn)品的吸潮問題。測定臨界相對濕度(CRH)以決定加輔料量及包裝材料的選擇:CRH越大，水溶性藥物越不易吸濕，反之，則越易吸濕。中藥噴霧干燥產(chǎn)品，由于比表面積大，容易吸潮，含糖成分高的噴霧干燥產(chǎn)品更易吸潮，其CRH可低于50%，通常加人適量的白糊精、淀粉等作賦形劑，降低其吸潮性通常是賦形劑的用量越大，其吸潮性就越低。粘性低的中藥提取液，其噴霧干燥產(chǎn)品與賦形劑用量比為9;1 時，用95%乙醇制粒，顆粒硬而粗但CRH值低，不利于長期保存，需要好的包裝材料11610對于無糖型顆粒的包裝材料需特別強調(diào)，一般的塑料復(fù)合膜不適用，真空鍍鋁的復(fù)合膜也不太理想，最好采用BOPP,扒UPE。的復(fù)合材料，以免成品吸潮、結(jié)塊變質(zhì)而失去藥用價值，致使前功盡棄n70利用中藥顆粒劑包衣的工藝，如將胃溶丙烯酸樹脂薄膜包衣技術(shù)應(yīng)用于板藍根沖劑，即板藍根浸膏粉與微晶纖維素、硫酸鈣等混勻，濕法粒，顆粒

置糖衣鍋內(nèi)滾動吹干，并用W號樹脂PEG乙醇溶液進行包衣，可很好解決顆粒的吸濕問題

二 超臨界流體萃取

3.1超臨界萃取原理

超臨界流體萃取分離過程的原理是超臨界流體對脂肪酸、植物堿、醚類、酮類、甘油酯等具有特殊溶解作用，利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關(guān)系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的。在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來。當然，對應(yīng)各壓力范圍所得到的萃取物不可能是單一的，但可以控制條件得到最佳比例的混合成分，然后借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質(zhì)則完全或基本析出，從而達到分離提純的目的，所以超臨界流體萃取過程是由萃取和分離組合而成的。

3.2萃取裝置

超臨界萃取裝置可以分為兩種類型，一是研究分析型，主要應(yīng)用于小量物質(zhì)的分析，或為生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)。二是制備生產(chǎn)型，主要是應(yīng)用于批量或大量生產(chǎn)。超臨界萃取裝置從功能上大體可分為八部分：萃取劑供應(yīng)系統(tǒng)，低溫系統(tǒng)、高壓系統(tǒng)、萃取系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、改性劑供應(yīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)和計算機控制系統(tǒng)。具體包括二氧化碳注入泵、萃取器、分離器、壓縮機、二氧化碳儲存罐、冷水機等設(shè)備。由于萃取過程在高壓下進行，所以對設(shè)備以及整個管路系統(tǒng)的耐壓性能要求較高，生產(chǎn)過程實現(xiàn)微機自動監(jiān)控，可以大大提高系統(tǒng)的安全可靠性，并降低運行成本。

3.3超臨界流體萃取的特點

1）超臨界流體CO2萃取與化學(xué)法萃取相比有以下突出的優(yōu)點：

(1)可以在接近室溫(35-40℃)及CO2氣體籠罩下進行提取，有效地防止了熱敏性物質(zhì)的氧化和逸散。因此，在萃取物中保持著藥用植物的全部成分，而且能把高沸點，低揮發(fā)度、易熱解的物質(zhì)在其沸點溫度以下萃取出來；

(2)使用SFE是最干凈的提取方法,由于全過程不用有機溶劑,因此萃取物絕無殘留溶媒,同時也防止了提取過程對人體的毒害和對環(huán)境的污染,是100%的純天然；

(3)萃取和分離合二為一，當飽含溶解物的CO2-SCF流經(jīng)分離器時，由于壓力下降使得CO2與萃取物迅速成為兩相（氣液分離）而立即分開，不僅萃取效率高而且能耗較少，節(jié)約成本；

(4)CO2是一種不活潑的氣體,萃取過程不發(fā)生化學(xué)反應(yīng),且屬于不燃性氣體,無味、無臭、無毒，故安全性好；

(5)CO2價格便宜，純度高，容易取得，且在生產(chǎn)過程中循環(huán)使用，從而降低成本；

(6)壓力和溫度都可以成為調(diào)節(jié)萃取過程的參數(shù)。通過改變溫度或壓力達到萃取目的。壓力固定，改變溫度可將物質(zhì)分離；反之溫度固定，降低壓力使萃取物分離，因此工藝簡單易掌握，而且萃取速度快。

2）從超臨界流體性質(zhì)看，其具有的特點：

(1)萃取速度高與液體萃取，特別適合于固態(tài)物質(zhì)的分離提??；

(2)在接近常溫的條件下操作，能耗低于一般精餾發(fā)，適合于熱敏性物質(zhì)和易氧化物質(zhì)的分離；

(3)傳熱速率快，溫度易于控制；

(4)適合于揮發(fā)性物質(zhì)的分離

三小結(jié)