第一篇：質(zhì)粒大提--自制試劑配制和操作步驟總結(jié)大全

質(zhì)粒提取試劑配制和操作步驟

試劑配制(小量)

1.1M（M代表摩爾濃度即mol∕L）NaOH(400ml): 分子量為40，秤取16g NaOH, 溶于400ml DDW中。

2.2M Tris-HCl(500ml): 分子量為121.14, 秤取121.14g Tris,放入干凈的500ml燒杯中，加400 ml DDW，置于攪拌器上攪拌溶解，用HCl調(diào)節(jié)pH值為8.0（首先直接加12M的濃鹽酸約20ml，接近8.0時再用1M HCl 調(diào)節(jié)）, 定容至500ml，4℃保存。

3.10%SDS(200ml): 稱量20gSDS,放入干凈的燒杯中，加100 ml DDW，定容到200ml，室溫保存。（SDS具有較強的刺激性，稱量時一定帶好口罩，動作輕柔）。

4.Buffer P1(500ml): 用50ml離心管量取10ml 0.5M的EDTA，然后量取12.5ml 2M 的Tris-HCl，放入干凈的燒杯中，加入300ml DDW,置于攪拌器上攪拌溶解，用HCl調(diào)節(jié)pH值為8.0（大約加12M的濃鹽酸1ml），定容至500ml，4℃保存。

5.Buffer P2（100ml）: 20ml 1M NaOH和10ml 10%SDS放入200ml的玻璃瓶中，然后加入70ml DDW，混勻，室溫放置過夜，使其自溶，最后室溫保存。(注：不需要定容，嚴(yán)格按步驟操作)。

6.Buffer P3(500ml)： 秤取147.21g乙酸鉀，溶于300ml DDW中，置于攪拌器上攪拌溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為5.5，（約加80–100ml冰醋酸）, 定容至500ml，4℃保存。7.Buffer QBT（500ml）：分別稱取NaCl 21.915g, MoPS 5.23g, 放于干凈的500ml燒杯中，加入300ml DDW,置于攪拌器上攪拌溶解，用1M NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.0（約加10–15ml NaOH）,然后加入75ml 異丙醇，定容至500ml，4℃保存。

8.Buffer QC（500ml）：分別稱取NaCl 29.22g, MoPS 5.23g,放于干凈的500ml燒杯中，加入300ml DDW,置于攪拌器上攪拌溶解，用1M NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.0（約加9ml NaOH,然后加入75ml 異丙醇，定容至500ml，4℃保存。9.Buffer QF（500ml）：稱取NaCl 36.525g, 量取2M Tris-HCl 12.5ml,放于干凈的500ml燒杯中，加入300ml DDW，置于攪拌器上攪拌溶解，用1M NaOH調(diào)節(jié)pH值為8.5（約加0.1ml NaOH），然后加入75ml異丙醇，定容至500ml，4℃保存。10.配制RNase:

(1)將RNase粉末溶于10mM的乙酸鉀（即Buffer P3），配制成濃度為10mg/ml的溶液。

(2)將配好的RNase溶液100℃加熱10min, 隨后冷卻至室溫。

(3)用1M 的Tris-HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4，大約需要0.1體積的Tris-HCl。(4)分裝RNase溶液于1.5ml EP管中，-20℃保存。

試劑配制(大量)

1.1M NaOH(400ml): 分子量為40，秤取16g NaOH, 溶于400ml DDW中。2.2M Tris-HCl(500ml): 分子量為121.14, 秤取121.14g Tris,溶于400 ml DDW中，用HCl調(diào)節(jié)pH值為8.0, 定容至500ml。

3.Buffer P2（1000ml）: 稱取10g SDS, 放入1000ml的玻璃瓶中，然后加入750ml DDW，最后加入200 ml 1M的NaOH，混勻，室溫放置過夜，使其自溶。(注：不需要定容，嚴(yán)格按步驟操作。)4.Buffer P1(1000ml): 用50ml離心管量取20ml 0.5M的EDTA，然后量取25ml 2M 的Tris-HCl，加入700ml DDW, 用HCl調(diào)節(jié)pH值為8.0，定容至1000ml。

5.Buffer P3(1000ml)： 秤取294.42g乙酸鉀，溶于800ml DDW中，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值為5.5，定容至1000ml。6.Buffer QBT（1000ml）：分別稱取NaCl 43.83g, MoPS 10.46g, 加入600ml DDW, 用NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.0，然后加入150ml 異丙醇，定容至1000ml。7.Buffer QC（1000ml）：分別稱取NaCl 58.44g, MoPS 10.46g, 加入600ml DDW, 用NaOH調(diào)節(jié)pH值為7.0，然后加入150ml 異丙醇，定容至1000ml。8.Buffer QF（1000ml）：稱取NaCl 73.05g, 量取2M Tris-HCl 25ml, 加入800ml DDW，用NaOH調(diào)節(jié)pH值為8.5，然后加入150ml 異丙醇，定容至1000ml。9.配制RNase:

(1)將RNase粉末溶于10mM的乙酸鉀（即Buffer P3），配制成濃度為10mg/ml的溶液。

(2)將配好的RNase溶液100℃加熱10min, 隨后冷卻至室溫。

(3)用1M 的Tris-HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4，大約需要0.1體積的Tris-HCl。(4)分裝RNase溶液于1.5ml EP管中，-20℃保存。

操作步驟 準(zhǔn)備工作：

? 大提質(zhì)粒的前兩天用50ml離心管搖菌，在5-7ml加有氨芐抗生素AMP的LB液體培養(yǎng)基中挑菌，37℃下?lián)u菌12-16h。

? 大提質(zhì)粒前一天將50ml離心管搖好的菌液500ml大三角瓶中加入含有氨芐抗生素AMP的LB液體培養(yǎng)基200ml，37℃下?lián)u菌12-16h。

1.沉淀菌液：向離心機配套的50 ml離心管中，加入30 ml菌液，6000 g離心10min, 大約沉淀菌液200 ml。(注意：配平離心管，離心時要在離心管壁和蓋上都做好標(biāo)記，且離心時寫字的管壁側(cè)朝向外，以便容易找到沉淀物)。離好一管，取回棄去上液保留沉淀物，再反復(fù)離心直到所有200ml菌液全部離完），打開蓋倒置吸水紙上控干。2.溶解沉淀: 量取10 ml Buffer P1, 加入100μl RNase A, 混勻后，加入到離心沉淀的菌中，用振蕩器充分溶解菌液沉淀（可用15ml離心管量取，Buffer P1 加入沉淀離心管是管口不要接觸，以防互相污染）。

3.加入10 ml Buffer P2，液體呈現(xiàn)藍色，輕輕混勻，使其充分反應(yīng)，冰上放置2-3min即可。（此步主要是堿裂解細菌，使其中的蛋白質(zhì)和DNA變性，反應(yīng)時間不能太長，否則容易使大腸桿菌的基因組DNA斷裂成小片段，污染質(zhì)粒DNA）

4.加入10 ml 預(yù)冷的Buffer P3，輕輕顛倒混勻，直到藍色全部消失，出現(xiàn)白色蛋白沉淀，冰上放置20min。（此步發(fā)生酸堿中和反應(yīng)，pH值降低，使變性的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)恢復(fù)，其中的SDS可以充分與蛋白質(zhì)結(jié)合，使其析出）

5.20 min后，6000 g 4℃離心25min。同時，向柱子中加入5ml Buffer QBT，使其全部流過柱子，平衡柱子。如果是重復(fù)使用的柱子，先使其中的HCl全部流盡，然后加滿DDW清洗2遍柱子，最后再加入Buffer QBT平衡柱子。

6.剪一小塊紗布，折疊4層，放于柱子上部。將離心后的液體緩慢倒入紗布中，最后擠壓紗布使其中的液體全部直接過濾到柱子中，使其充分流過柱子。（如果此步不只1個質(zhì)粒時，擠壓不同質(zhì)粒的紗布時，一定要換手套，避免污染質(zhì)粒）

7.清洗柱子: 液體全部流過柱子后，向柱子中直接加滿Buffer QC，使其全部流過柱子，清洗2遍，棄去廢液。

8.洗脫質(zhì)粒: 向柱子中加15ml Buffer QF，靠重力作用使其全部通過柱子，收集洗脫液。(注：要收集到一個新的管中)9.沉淀質(zhì)粒：向收集的液體中，加入0.7倍體積（即10.5 ml）異丙醇，輕輕混勻，6000 g 4℃離心25 min。（異丙醇可以充分沉淀質(zhì)粒，但同時會沉淀很多鹽分）

10.清洗質(zhì)粒：離心后，注意質(zhì)粒貼壁的方向，應(yīng)從其側(cè)面倒掉廢液。然后加入10 ml 70%的乙醇，輕輕晃動（不能用槍吹散，否則會損失很多質(zhì)粒）。

11.沉淀質(zhì)粒：6000 g 4℃離心10min，輕輕吸棄廢液，將質(zhì)粒開蓋晾置，使乙醇充分會發(fā)。（質(zhì)粒中的乙醇會影響后續(xù)反應(yīng)中的酶活性）

12.溶解質(zhì)粒：用300ulDDW或TE溶解步驟11中的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)移到新的1.5mlEP管中，做好標(biāo)記，檢測濃度。13.柱子回收:

(1)先用自來水沖洗柱子內(nèi)外；

(2)再用蒸餾水和DDW沖洗柱子內(nèi)外，最后加滿DDW，使其全部通過柱子，清洗2次。(3)向柱子中加滿1 M HCl，柱子底部蓋上蓋子，頂部用封口膜封上，室溫放置過夜。（HCl可充分降解DNA）

第二篇：質(zhì)粒提取的原理、操作步驟、各溶液的作用

質(zhì)粒提取的原理、操作步驟、各溶液的作用

(2010-11-11 17:19:05)轉(zhuǎn)載標(biāo)簽： 質(zhì)粒

溶液

無水乙醇

大腸桿菌

雜談 ▼

分類： Biology

細菌質(zhì)粒是一類雙鏈、閉環(huán)的DNA，大小范圍從1kb至200kb以上不等。各種質(zhì)粒都是存在于細胞質(zhì)中、獨立于細胞染色體之外的自主復(fù)制的遺傳成份，通常情況下可持續(xù)穩(wěn)定地處于染色體外的游離狀態(tài)，但在一定條件下也會可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體的復(fù)制而復(fù)制，并通過細胞分裂傳遞到后代。

質(zhì)粒已成為目前最常用的基因克隆的載體分子，重要的條件是可獲得大量純化的質(zhì)粒DNA分子。目前已有許多方法可用于質(zhì)粒DNA的提取，下面主要介紹堿裂解法提取質(zhì)粒DNA的方法。

堿裂解法是一種應(yīng)用最為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法，其基本原理為：當(dāng)菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性，當(dāng)加入中和液后，質(zhì)粒DNA分子能夠迅速復(fù)性，呈溶解狀態(tài)，離心時留在上清中；蛋白質(zhì)與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。

純化質(zhì)粒DNA的方法通常是利用了質(zhì)粒DNA相對較小及共價閉環(huán)兩個性質(zhì)。例如，氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心、離子交換層析、凝膠過濾層析、聚乙二醇分級沉淀等方法，但這些方法相對昂貴或費時。對于小量制備的質(zhì)粒DNA，經(jīng)過苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀 等簡單步驟去除殘余蛋白質(zhì)和RNA，所得純化的質(zhì)粒DNA已可滿足細菌轉(zhuǎn)化、DNA片段的分離和酶切、常規(guī)亞克隆及探針標(biāo)記等要求，故在分子生物學(xué)實驗室中常用。

堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：

1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2ml LB培養(yǎng)基。

2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。

3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。

4、加0.lml溶液I（1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0）充分混合。

5、加入0.2ml溶液 II（0.2 mM/L NaOH，1％ SDS），輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5 min.6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III（5 mol/L KAc，pH4.8），輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5 min.7、以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管

8、加入等體積的異戊醇，混勻后靜置10min.9、再以10，000rpm離心20min，棄上清。

10、用70％乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體。

11、待沉淀干燥后，溶于0.05mlTE緩沖液中

試劑準(zhǔn)備

1.溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。

在10 lbf/in2高壓滅菌15min，貯存于4℃。任何生物化學(xué)反應(yīng)，首先要控制好溶液的pH，因此用適當(dāng)濃度的和適當(dāng)pH值的Tris-Cl溶液。50 mM葡萄糖最大的好處只是懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其實對質(zhì)粒的抽提本身而言，幾乎沒有任何影響。所以說溶液I中葡萄糖是可缺的。EDTA呢？大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，配在分子生物學(xué)試劑中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生長。在溶液I中加入高達10 mM的EDTA，無非就是要把大腸桿菌細胞中的所有二價金屬離子都螯合掉。如果不加EDTA，其實也沒什么大不了的，只要不磨洋工，只要是在不太長的時間里完成質(zhì)粒抽提，就不用怕DNA會迅速被降解，因為最終溶解質(zhì)粒的TE緩沖液中有EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提質(zhì)粒呢？實話告訴你，只要用等體積的水，或LB培養(yǎng)基來懸浮菌體就可以了。

2.溶液II：是用新鮮的0.4 N的NaOH和2％的SDS等體積混合后使用的。要新從濃NaOH稀釋制備0.4N的NaOH，無非是為了保證NaOH沒有吸收空氣中的CO2而減弱了堿性。很多人不知道其實破細胞的主要是堿，而不是SDS，所以才叫堿法抽提。事實上NaOH是最佳的溶解細胞的試劑，不管是大腸桿菌還是哺乳動物細胞，碰到了堿都會幾乎在瞬間就溶解，這是由于細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向 micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化所導(dǎo)致。用了不新鮮的0.4 N NaOH，即便是有SDS也無法有效溶解大腸桿菌（不妨可以自己試一下），自然就難高效率抽提得到質(zhì)粒。如果只用SDS當(dāng)然也能抽提得到少量質(zhì)粒，因為 SDS也是堿性的，只是弱了點而已。很多人對NaOH的作用誤以為是為了讓基因組DNA變性，以便沉淀，這是由于沒有正確理解一些書上的有關(guān)DNA變性復(fù)性的描述所導(dǎo)致。有人不禁要問，既然是NaOH溶解的細胞，那為什么要加SDS呢？那是為下一步操作做的鋪墊。這一步要記住兩點：第一，時間不能過長，千萬不要這時候去接電話，因為在這樣的堿性條件下基因組DNA片斷會慢慢斷裂；第二，必須溫柔混合（象對待女孩子一樣），不然基因組DNA也會斷裂?；蚪M DNA的斷裂會帶來麻煩。

3.溶液Ⅲ：醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 4.8。

5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

溶液III加入后就會有大量的沉淀，但大部分人卻不明白這沉淀的本質(zhì)。最容易產(chǎn)生的誤解是，當(dāng)SDS碰到酸性后發(fā)生的沉淀。如果你這樣懷疑，往1%的 SDS溶液中加入2M的醋酸溶液看看就知道不是這么回事了。大量沉淀的出現(xiàn)，顯然與SDS的加入有關(guān)系。如果在溶液II中不加SDS會怎樣呢，也會有少量 的沉淀，但量上要少得多，顯然是鹽析和酸變性沉淀出來的蛋白質(zhì)。既然SDS不是遇酸發(fā)生的沉淀，那會不會是遇鹽發(fā)生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加 入5 N的NaCl，你會發(fā)現(xiàn)SDS在高鹽濃度下是會產(chǎn)生沉淀的。因此高濃度的鹽導(dǎo)致了SDS的沉淀。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你會發(fā)現(xiàn)沉淀的量 要多的多。這其實是十二烷基硫酸鈉（sodium dodecylsulfate）遇到鉀離子后變成了十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是水不溶的，因此發(fā)生了沉淀。如此看來，溶液III加入后的沉淀實際上是鉀離子置換了SDS中的鈉離子形成了不溶性的PDS，而高濃度的鹽，使得沉淀更完全。大家知道SDS專門喜歡和蛋白質(zhì)結(jié)合，平均兩個氨基酸上結(jié)合一個SDS分子，鉀鈉離子置換所產(chǎn)生的大量沉淀自然就將絕大部分蛋白質(zhì)沉淀了，讓人高興的是大腸桿菌的基因組DNA也一起被共沉淀了。這個過程不難想象，因為基因組DNA太長了，長長的DNA自然容易被PDS給共沉淀了，盡管SDS并不與DNA分子結(jié)合。

1.為什么用無水乙醇沉淀DNA？

用無水乙醇沉淀DNA，這是實驗中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對DNA很安全，因此是理想的沉淀劑。

DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中，是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合，其乙醇的最終含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇來替代無水乙醇（因為無水乙醇的價格遠遠比95％乙醇昂貴）。但是加95％的乙醇使總體積增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA損失也增大，尤其用多次乙醇沉淀時，就會影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時可用95％乙醇代替無水乙酵，最后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15－30分鐘即可。

2.在用乙醇沉淀DNA時，為什么一定要加NaAc或NaCl至最終濃度達0.1～0.25mol/L？

在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的負電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時，只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應(yīng)，必須要進行洗滌或重沉淀。

第三篇：小鼠基因組DNA抽提原理、儀器試劑和操作步驟

小鼠基因組DNA抽提原理、儀器試劑和操作步驟

一、原理與意義

先用細胞裂解液對已制備好的組織勻漿充分裂解，然后用蛋白酶去除其中的蛋白，再用氯仿一次抽提（無需用酚抽提）、預(yù)備液沉淀、RNase去除 RNA、乙醇再沉淀即可得到完整DNA。該方法適用于從人或動物的各種組織、血液、培養(yǎng)細胞、G+/G-細菌中快速抽提基因組DNA。抽提出來的DNA能用于幾乎所有的分子生物學(xué)實驗，如DNA梯度分析、PCR、限制性內(nèi)切酶反應(yīng)、克隆、Southern Blot分析等。

二、試劑及其配制

抽提試劑盒購于上海生工公司，內(nèi)含以下試劑：

1、TE緩沖液：PH8.0，由10 mM Tris HCl和1 mM EDTA配成。

2、RNase A（3 mg）：使用前加入300 ul無菌雙蒸水，煮沸10 min后使其自然冷卻后使用，-20 ℃凍存。

3、Proteinase K（12 mg）：使用前加入600 ul無菌水，分裝成小份，-20 ℃凍存。

4、Cell Lysis Solution與Precipitation Solution：溶液出現(xiàn)絮狀沉淀50 ℃加熱溶解后使用。5、1.2 mol/L NaCl。冰冷乙醇和氯仿自備。

三、實驗器材

水浴鍋、普通冰箱、1.5/2 ml離心管、移液器及槍頭、紫外分光計、離心管架、剪刀、鑷子、濾紙等。

四、操作步驟

1、組織勻漿制備：取30 mg左右新鮮組織，加600 ul TE緩沖液，手工勻漿數(shù)次。

2、細胞裂解：吸取300 ul勻漿加600 ul Cell Lysis Solution，混勻。

3、消化蛋白：再加入9 ul Proteinase K（可適當(dāng)增加）混勻，置于55 ℃水浴30 min以上（可達2.5 h），其間上下混勻幾次。

4、氯仿抽提：加入600 ul氯仿（用戶自備），輕柔上下混勻，不能太劇烈，以保證DNA的完整性。

5、沉淀：在臺式離心機上，10000轉(zhuǎn)/分，室溫離心2 min。此時應(yīng)分成三層，基因組DNA在上層中，如未能分層，表明樣品與氯仿未混勻（可通過延長離心時間或增加離心速度獲得上清）。取500 ul上清液，置于無菌1.5 ml離心管中，加入500 ul Precipitation Solution，混勻多次至出現(xiàn)絮狀物，室溫靜置2 min。10000轉(zhuǎn)/分，離心2 min。

6、去除RNA：棄除上清，注意不要倒掉沉淀，立即加入100 ul 1.2 mol/L NaCl，輕輕振蕩直至DNA樣品完全溶解，加入3 ul RNase A，置于37 ℃ 10 min，以去除RNA。

7、沉淀DNA：加入300 ul冰冷乙醇（終濃度為75%，沉淀效果最佳），-20 ℃放置10 min。10，000轉(zhuǎn)/分，離心2 min。倒掉乙醇，倒置室溫干燥10~15 min。若DNA量多，可再重復(fù)沉淀一次。DNA用TE緩沖液或100 ul三蒸水溶解。

五、注意事項

1、應(yīng)避免多次凍融樣品，因為每次凍融都大大降低完整DNA的產(chǎn)率。

2、加氯仿充分混勻，若離心后上清不到500 ul，可適當(dāng)延長離心時間或增加離心速度。

3、吸取DNA上清時，可用剪刀稍剪槍頭尖部，以防止虹吸現(xiàn)象。

4、操作步驟中許多數(shù)值可進行成比例改變，如上清與預(yù)備液按1：1，氯化鈉與無水乙醇按1：3等。

5、轉(zhuǎn)錄活性很高的組織或細菌中通常含有大量的RNA，他們可能與DNA一起被分離出來。RNA的存在并不影響PCR反應(yīng)。如果需要制備RNA-free的基因組DNA?？稍诘?步加入200 ul的RNase A，37 ℃保溫10 min即可。

6、用分光光度計測量DNA含量按1 OD260=50 mg基因組DNA；進行0.7%瓊脂糖凝膠電泳判定DNA的完整性，也可以判定樣品中是否有RNA。本試劑盒可抽提長抵達50kb以上的DNA。一般在 DNA樣品，OD260/OD280比值大于1.8，可能存在RNA；OD260/OD280比值小于1.6，可能存在蛋白質(zhì)或酚。但RNA樣品中 OD260/OD280比值小于2可能存在蛋白質(zhì)或酚，均需要進一步純化。

7、通常50ul體系PCR反應(yīng)中用1~5 ul DNA。

第四篇：自制凈水器操作實踐總結(jié)

八（1）班“環(huán)保實踐，自制凈水器”實踐

活動總結(jié)

大家都知道自然界中絕大多數(shù)的水是不能直接飲用的。為了得到可以直接飲用的水，同學(xué)們經(jīng)常采取沉降、吸附、過濾、殺菌和蒸餾等方法來凈化水，比如經(jīng)過凈化處理的自來水經(jīng)過煮沸就可以飲用，再比如桶裝或瓶裝的礦泉水和純凈水等。但是，在一些特殊的場合，比如野外生存自帶水源消耗完畢，或者地震之后自來水供應(yīng)中斷、交通斷絕等情況下，如何提高飲用水的質(zhì)量是直接關(guān)系到生命安全的問題。這時，同學(xué)們可以通過自己制作簡易凈水器來得到比較干凈、衛(wèi)生的水源。

一、簡易凈水器的工作原理：

利用紗布與卵石過濾較大顆粒的不溶性物質(zhì)、石英砂過濾顆粒較小的不溶性物質(zhì)、活性炭吸附有色有味的物質(zhì)、蓬松棉吸附顆粒很小的不溶性物質(zhì)的性質(zhì)來凈化水源。

二、簡易凈水器的制作過程

1、材料：飲料瓶、塑料管、清洗過的沙子、紗布、蓬松棉包、活性炭、清洗過的小卵石20枚左右、剪刀、鉆子。

2、步驟和方法：

①拿一個飲料瓶，用剪刀剪去瓶底，將瓶身剪至約二分之一處；

②在瓶蓋處用剪刀和鉆子刺一個小孔，插入吸管，以便讓液體可以流出；

③分別用紗布將小卵石、石英砂、活性炭包裹起來；④把瓶口處倒過來放，依次放入膨松棉、包有紗布的活性炭、包有紗布的石英砂及包有紗布的小卵石；⑤將瓶底與瓶壁粘起來，作為一個可自由開合的蓋子。

三、簡易凈水器凈化效果的檢驗；

為了檢驗自制簡易凈水器的凈化效果，進行如下實驗。

1、實驗材料：燒杯，鐵架臺（帶鐵夾），玻璃棒，一杯混有藍墨水、泥沙、雜草和異味的污水、紅墨水。

2、步驟和方法：

①將簡易凈水器固定在鐵架臺上，下端與燒杯相連； ②將污水沿玻璃棒注入簡易凈水器中，用燒杯盛接流出的水，觀察現(xiàn)象。

④持續(xù)將紅墨水注入簡易凈水器，觀察流出的水的顏色變化； ⑤將簡易凈水器內(nèi)的填充物從瓶底開始依次取出，把活性炭曬干。按照簡易凈水器的制作步驟重新將各種材料填充到飲料瓶中，除了重復(fù)使用曬干的活性炭外，其余材料均換成上次使用的同類材料的新材料；將紅墨水注入簡易凈水器，觀察現(xiàn)象。

3、現(xiàn)象與分析 ①現(xiàn)象：

污水注入簡易凈水器后，過濾出來的水是澄清的；持續(xù)將紅墨水注入簡易凈水器，剛開始，過濾出的水是澄清的，一段時間之后，過濾出來的水逐漸變紅，最后與過濾之前的水的顏色一樣；活性炭曬干后重復(fù)使用，過濾之后的水的顏色基本不變。②分析：

自制簡易凈化器的凈化效果較好。但是活性炭使用一段時間后就會失去作用，即便重新曬干也不能恢復(fù)，長時間使用應(yīng)注意更換。

四、反思；

第一次制凈水器時，我們只是用紗布將各種材料隔開，但將水注入后，發(fā)現(xiàn)部分活性炭進入到蓬松棉里，石英砂隨水漂起，于是，我們改用紗布將小卵石、石英砂、活性炭分別包好，解決了這一問題。此外，我們想到，如果給簡易凈水器加一個蓋子會不會更好，因此，我們在做的時候適當(dāng)?shù)馗倪M了原來的方案，將這個想法也予以實施。

五、結(jié)論與建議

本次活動告訴同學(xué)們，在一些特殊的場合完全可以通過帶一個自制的簡易凈水器或者現(xiàn)場自制簡易凈水器的方法來得到比較潔凈的水源。然后加上消毒藥片或者把水煮沸，就可以飲用?，F(xiàn)場制作簡易凈水器時，活性炭可以用燒制的木炭代替，紗布、蓬松棉包可以用毛巾、手帕等棉紡制品代替。

第五篇：堿液配制工作安排及操作步驟

堿液配制工作安排及操作步驟

一、堿液配制工作：

1、蒸餾崗位早班操作人員負責(zé)將上、下兩個堿液桶配制好規(guī)定的濃度，保證三個班的正常使用。

2、經(jīng)常檢查儲存桶內(nèi)堿液存量情況，及時把化堿桶的堿液放入儲存桶。

3、隨時觀察儲存桶的堿液是否被消化，防止計量泵出故障，影響成品質(zhì)量。

二、堿液配制步驟：

1、用自來水先將化堿桶裝至規(guī)定位置，（把氫氧化鈉添加管淹完）。

2、開啟攪拌器，到樓上把氫氧化鈉倒入下堿管，一次加75kg（三袋）。

3、攪拌5分鐘后，停止攪拌，靜置待用。

4、在加水和倒氫氧化鈉時，要特別小心，防止堿對人體造成傷害。

二0一一年六月二日 生產(chǎn)部