第一篇：微生物檢驗(yàn)樣品采集應(yīng)注意的問(wèn)題

微生物檢驗(yàn)樣品采集應(yīng)注意的問(wèn)題

樣品的采集是微生物檢驗(yàn)的重要組成部分，用于檢驗(yàn)的樣品數(shù)量和狀況具有重要意義。這對(duì)取樣人員和制樣人員提出了很高的專(zhuān)業(yè)要求，既要保證樣品的代表性和一致性，又要保證整個(gè)微生物檢驗(yàn)過(guò)程在無(wú)菌操作的條件下進(jìn)行。微生物檢驗(yàn)樣品的采集大致分為取樣、包裝密封、標(biāo)志、樣品的運(yùn)輸、接收、保存幾個(gè)環(huán)節(jié)。1 取樣

取樣是指在一定質(zhì)量或數(shù)量的產(chǎn)品中，取一個(gè)或多個(gè)代表性樣品，用于感官、微生物和理化檢驗(yàn)的全過(guò)程。首先在取樣之前應(yīng)確認(rèn)貨、證是否相符。其次取樣工具要達(dá)到無(wú)菌的要求，對(duì)取樣 具和一些試劑材料應(yīng)提前準(zhǔn)備、滅菌。如果使用不合適的采集工具，可能會(huì)破壞樣品的完整性，甚至使樣品采集毫無(wú)意義。應(yīng)根據(jù)不同的樣品特征和取樣環(huán)境，對(duì)取樣物品和試劑進(jìn)行事先準(zhǔn)備和滅菌等T作。另外要保證樣品能夠代表整批產(chǎn)品，其檢測(cè)結(jié)果應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)有效性，樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室時(shí)的狀況應(yīng)能反映出取樣時(shí)產(chǎn)品的真實(shí)情況。取樣時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的產(chǎn)品類(lèi)型、產(chǎn)品狀態(tài)等選擇不同的取樣方法和標(biāo)準(zhǔn)。

① 包裝食品 對(duì)于直接食用的小包裝食品，盡可能取原包裝，直到檢驗(yàn)前不要開(kāi)封，以防污染。對(duì)于桶裝或大容器包裝的液體食品，取樣前應(yīng)搖動(dòng)或用滅菌棒攪拌液體，盡量使其達(dá)到均質(zhì)；取樣時(shí)應(yīng)先將取樣用具浸入液體內(nèi)略加漂洗，然后再取所需量的樣品，裝入滅菌容器的量不應(yīng)超過(guò)其容量的3/4，以便于檢驗(yàn)前將樣品搖勻；取完樣品后，應(yīng)用消毒的溫度計(jì)插入液體內(nèi)測(cè)量食品的溫度，并作記錄。盡可能不用水銀溫度計(jì)測(cè)量，以防溫度計(jì)破碎后水銀污染食品；如為非冷藏易腐食品，應(yīng)迅速將所取樣品冷卻至0～4℃。對(duì)于大塊的桶裝或大容器包裝的冷凍食品，應(yīng)從幾個(gè)不同部位用滅菌工具取樣，使樣品具有充分的代表性；在將樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。

② 生產(chǎn)過(guò)程中的取樣 劃分檢驗(yàn)批次，應(yīng)注意同批產(chǎn)品質(zhì)量的均一性；如用固定在貯液桶或流水作業(yè)線上的取樣龍頭取樣時(shí)，應(yīng)事先將龍頭消毒；當(dāng)用自動(dòng)取樣器取不需要冷卻的粉狀或同定食品時(shí)，必須履行相應(yīng)的管理辦法，保證產(chǎn)品的代表性不被人為地破壞。

③ 液體產(chǎn)品 通常情況下，液態(tài)產(chǎn)品較容易獲得代表性樣品。液態(tài)產(chǎn)品一般盛放在大罐中，取樣時(shí)，可連續(xù)或間歇攪拌，對(duì)于較小的容器，可在取樣前將液體上下顛倒，使其完全混勻。較大的樣品(100～500m1)要放在已滅菌的容器中送往實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室在取樣檢測(cè)之前應(yīng)將液體再?gòu)氐谆靹蛞淮巍?/p>

④ 固體樣品 固態(tài)樣品常用的取樣工具有滅菌的解剖刀、勺子、軟木鉆、鋸子和鉗子等。面粉或奶粉等易于混勻的食品，其成品質(zhì)量均勻、穩(wěn)定，可以抽取小樣品檢測(cè)(如100 g)。但散裝樣品就必須從多個(gè)點(diǎn)取樣，且每個(gè)樣品都要單獨(dú)處理，在檢測(cè)前徹底混勻，并從中取一份樣品進(jìn)行檢測(cè)。肉類(lèi)、魚(yú)類(lèi)的食品既要在表皮取樣叉要在深層取樣。深層取樣時(shí)要小心不要被表面污染。有些食品，如鮮肉或熟肉可用滅菌的解剖刀或鉗子取樣；冷凍食品可在未解凍的狀態(tài)下可用鋸子、木鉆或電鉆(一般斜角鉆人)等獲取深層取樣樣品；全蛋粉等粉末狀樣品取樣時(shí)，可用滅菌的取樣器斜角插入箱底，樣品填滿(mǎn)取樣器后提出箱外，再用滅菌小勺從上、中、下部位取樣。

⑤ 表面取樣 通過(guò)惰性載體可以將表面樣品上的微生物轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)基中進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，這種惰性載體既不能引起微生物死亡，也不應(yīng)使其增殖。這樣的載體包括清水、拭子、膠帶等。取樣后，要使微生物長(zhǎng)期保存在載體上，既不死亡又不增殖十分困難，所以應(yīng)盡早地將微生物轉(zhuǎn)接到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中。轉(zhuǎn)移前耽誤的時(shí)間越長(zhǎng)，品質(zhì)評(píng)價(jià)的可靠性就越差。表面取樣技術(shù)只能直接轉(zhuǎn)移菌體，不能做系列稀釋?zhuān)挥性诰w數(shù)量較多時(shí)才適用。其最大優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)不破壞樣品。

⑥ 空氣樣品的采取 空氣的取樣方法有直接沉降法和過(guò)濾法。在檢驗(yàn)空氣中細(xì)菌含量的各種沉降法中，平皿法是最早的方法之一，到目前為止，這種方法在判斷空氣中浮游微生物分次自沉現(xiàn)象方面仍具有一定的意義。過(guò)濾法是使定量的空氣通過(guò)吸收劑，然后將吸收劑培養(yǎng)，計(jì)算出菌落數(shù)。2 包裝密封

為保證樣品的完整性，裝有樣品的包裝物應(yīng)進(jìn)行封口，以證實(shí)其可靠性，即從取樣地點(diǎn)至實(shí)驗(yàn)室這段時(shí)間不發(fā)生任何變化?？刹捎米哉衬z、特制的紙黏著劑或者石蠟等封口，封口處應(yīng)留填寫(xiě)日期、檢驗(yàn)人員和貨主簽字的地方，然后蓋上專(zhuān)用的印章。3 樣品的標(biāo)志

取樣過(guò)程中應(yīng)對(duì)所取樣品進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的標(biāo)記。取樣結(jié)束后，應(yīng)由取樣人寫(xiě)出完整的取樣報(bào)告。樣品應(yīng)盡可能在原有狀態(tài)下迅速運(yùn)送或發(fā)送到實(shí)驗(yàn)室。保存的樣品應(yīng)進(jìn)行必要的清晰的標(biāo)記，內(nèi)容包括：樣品名稱(chēng)，樣品描述，樣品批號(hào)，企業(yè)名稱(chēng)，地址，取樣人，取樣時(shí)間，取樣地點(diǎn)，取樣溫度(必要時(shí))，測(cè)試目的等。標(biāo)記應(yīng)牢固并具防水性，確保字跡不會(huì)被擦掉或脫色。所有盛樣容器必須有和樣品一致的標(biāo)記。在標(biāo)記上應(yīng)記明產(chǎn)品標(biāo)志與號(hào)碼和樣品順序號(hào)以及其他需要說(shuō)明的情況。標(biāo)記應(yīng)牢固并具防水性，確保字跡不會(huì)被擦掉或脫色。當(dāng)樣品需要托運(yùn)或由非專(zhuān)職取樣人員運(yùn)送時(shí)，必須封死樣品容器。4 樣品的運(yùn)輸

取樣結(jié)束后應(yīng)盡快將樣品送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。如不能及時(shí)運(yùn)送，冷凍樣品應(yīng)存放在-15℃以下的冰箱或冷庫(kù)內(nèi)；冷藏和易腐食品存放在0～4℃ 冰箱或冷藏庫(kù)內(nèi)；其他食品可放在常溫暗處。微生物檢驗(yàn)樣品應(yīng)在取樣后6 h以?xún)?nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。樣品的運(yùn)輸過(guò)程必須有適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)措施(如密封、冷藏等)，以保證樣品的微生物指標(biāo)不發(fā)生變化。運(yùn)送冷凍和易腐樣品應(yīng)在包裝容器內(nèi)加適量的冷卻劑或冷凍劑，但樣品不可與冷卻劑或冷凍劑直接接觸，保證途中樣品不升溫或不融化，必要時(shí)可于途中補(bǔ)加冷卻劑或冷凍劑。運(yùn)送水樣時(shí)應(yīng)避免玻璃瓶搖動(dòng)，水樣溢出后又回流瓶?jī)?nèi)，從而增加污染。如不能由專(zhuān)人攜帶送樣時(shí)，也可托運(yùn)。托運(yùn)前必須將樣品包裝好，應(yīng)能防破損，防凍結(jié)或防易腐和冷凍樣品升溫或融化。在包裝上應(yīng)注明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字樣。同時(shí)做好樣品運(yùn)送記錄，寫(xiě)明運(yùn)送條件、日期、到達(dá)地點(diǎn)及其他需要說(shuō)明的情況，并由運(yùn)送人簽字。5 樣品的接收 在接收樣品時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與送樣人共同相互確認(rèn)樣品與委托單上的內(nèi)容是否一致。確認(rèn)內(nèi)容一般包括：品名；檢驗(yàn)?zāi)康?；檢驗(yàn)項(xiàng)目；形狀和包裝狀況(同體、粉狀、冷凍、冷藏、零售、批發(fā)、無(wú)菌包裝等都不同)；抽樣數(shù)量(個(gè)數(shù)和質(zhì)量)；抽樣日期及送達(dá)日期；抽樣地點(diǎn)；隨貨樣附帶的許可申請(qǐng)單編號(hào)；生產(chǎn)國(guó)或者生產(chǎn)廠家名稱(chēng)(進(jìn)口商品)；抽樣者的單位、姓名及有無(wú)封印；其他搬運(yùn)、儲(chǔ)存、檢驗(yàn)時(shí)的注意事項(xiàng)。6 樣品的保存

實(shí)驗(yàn)室接到樣品后應(yīng)在36 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)(貝類(lèi)樣品通常要在6 h內(nèi)檢測(cè))，對(duì)不能立即進(jìn)行檢測(cè)的樣品，要采取適當(dāng)?shù)姆绞奖４妫箻悠吩跈z測(cè)之前維持取樣時(shí)的狀態(tài)，即樣品的檢測(cè)結(jié)果能夠代表整個(gè)產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有足夠和適當(dāng)?shù)臉悠繁４嬖O(shè)施(如冰箱或冰柜等)。保存的樣品應(yīng)進(jìn)行必要和清晰的標(biāo)記，內(nèi)容包括：樣品名稱(chēng)，樣品描述，樣品批號(hào)，企業(yè)名稱(chēng)、地址，取樣人，取樣時(shí)間，取樣地點(diǎn)，取樣溫度(必要時(shí))，測(cè)試目的等；樣品在保存過(guò)程中應(yīng)保持密封性，防止引起樣品pH值的變化。不同類(lèi)型的樣品，保存方法不同：

① 易腐樣品：要用保溫箱或采取必要的措施使樣品處于低溫狀態(tài)(0～4℃)，應(yīng)在取樣后盡快送至實(shí)驗(yàn)室，并保證樣品送至實(shí)驗(yàn)室時(shí)不變質(zhì)。易腐的非冷凍食品檢測(cè)前不應(yīng)冷凍保存(除非不能及時(shí)檢測(cè))。如需要短時(shí)間保存，應(yīng)在0～～4℃ 冷藏保存，但應(yīng)盡快檢驗(yàn)(一般不應(yīng)超過(guò)36h)，因?yàn)楸４鏁r(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)造成樣品中嗜冷細(xì)菌的生長(zhǎng)和嗜中溫細(xì)菌的死亡。

② 冷凍樣品：要用保溫箱或采取必要的措施使樣品處于冷凍狀態(tài)，送至實(shí)驗(yàn)室前樣品不能融解、變質(zhì)。冰凍樣品要密閉后置于冷凍冰箱(通常為-l8℃)，檢測(cè)前要始終保持冷凍狀態(tài)，防止樣品暴露在二氧化碳?xì)怏w中。

③ 其他樣品：應(yīng)用塑料袋或類(lèi)似的材料密封保存，注意不能使其吸潮或水分散失，并要保證從取樣到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)的過(guò)程中其品質(zhì)不變。必要時(shí)可使用冷藏設(shè)備

第二篇：食品微生物檢驗(yàn)教案第三章食品檢驗(yàn)樣品的采集和處理

第三章 食品檢驗(yàn)樣品的采集和處理

一、樣品的采集與處理

食品檢驗(yàn)樣品采集的原則：

1、所采樣品應(yīng)具有代表性

每批食品應(yīng)隨機(jī)抽取一定數(shù)量的樣品，再生產(chǎn)過(guò)程中，再不同時(shí)間內(nèi)各取少量樣品予以混合。固體或半固體的食品應(yīng)從表層、中層和底層、中間和四周等不同部位取樣。

2、采樣必須符合無(wú)菌操作的要求，防止一切外來(lái)污染 一件用具只能用于一個(gè)樣品，防止交叉污染。

3、再保存和運(yùn)送過(guò)程中應(yīng)保證樣品中微生物的狀態(tài)不發(fā)生變化

采集的非冷凍食品一般在0—5度冷藏，不能冷藏的食品立即檢驗(yàn)。一般在36h內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。

4、采樣標(biāo)簽應(yīng)完整、清楚

每件樣品的標(biāo)簽須標(biāo)記清楚，盡可能提供詳盡的資料。

在食品的檢驗(yàn)中，所采集的樣品必須具有代表性，即所取樣品能夠代表食物的所有部分。如果采集的樣品沒(méi)有代表性，即使一系列檢驗(yàn)工作非常精密、準(zhǔn)確，其結(jié)果也毫無(wú)價(jià)值，甚至?xí)霈F(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)論。食品因加工的批號(hào)、原料情況（來(lái)源、種類(lèi)、地區(qū)、季節(jié)等）加工方法、保藏條件、運(yùn)輸、銷(xiāo)售中的各環(huán)節(jié)及銷(xiāo)售人員的責(zé)任心和衛(wèi)生認(rèn)識(shí)水平等無(wú)不影響著食品的衛(wèi)生質(zhì)量，因此要根據(jù)一小份樣品的檢驗(yàn)結(jié)果去說(shuō)明一大批食品的質(zhì)量或一起食物中毒的性質(zhì)，就必須周密考慮，設(shè)計(jì)出一種科學(xué)的取樣和樣品制備方法。而采用什么樣的取樣方案主要取決于檢驗(yàn)的目的，目的不同，取樣的方案也不同。檢驗(yàn)的目的可以是判定一批食品合格與否，也可以是查找食物中毒病原微生物，還可以是鑒定畜禽產(chǎn)品是否有人畜共患的病原體。目前國(guó)內(nèi)外使用的取樣方案多種多樣，如一批產(chǎn)品按百分比抽樣，才若干個(gè)樣后混合在一起檢驗(yàn)；按食品的危害程度不同抽樣等。不管采取何種方案，對(duì)抽樣代表性的要求是一致的。最好對(duì)整批產(chǎn)品的單位包裝進(jìn)行編號(hào)，實(shí)行隨機(jī)抽樣。

（一）樣品的種類(lèi)

樣品可分為大樣、中樣、小樣三種。大樣指一整批；中樣是從樣品各部分取的混合樣，一般為200g；小樣又稱(chēng)為檢樣，一般以25g為準(zhǔn)，用于檢驗(yàn)分析。

（二）樣品的采集

采樣必須在無(wú)菌操作下進(jìn)行。

采樣的工具，如探子、鏟子、匙、采樣器、試管、廣口瓶、剪子和開(kāi)罐器等，必須是無(wú)

菌的。

根據(jù)樣品種類(lèi)，如袋、瓶和罐裝者，應(yīng)取完整的未開(kāi)封的；如果樣品很大，則需用無(wú)菌采樣器取樣；檢樣是冷凍食品，應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)（可放在冰內(nèi)、冰箱的冰盒內(nèi)或低溫冰箱內(nèi)保存），非冷凍食品需在0~5℃中保存。

1、液體食品的采樣

將樣品充分混勻，用無(wú)菌操作開(kāi)啟包裝，用100mL無(wú)菌注射器抽取，注入無(wú)菌盛樣容器。

2、半固體食品的采樣

用無(wú)菌操作拆開(kāi)樣品包裝，用無(wú)菌勺子從幾個(gè)部位挖取樣品，注入無(wú)菌盛樣容器。

3、固體樣品的采樣

大塊整體食品應(yīng)用無(wú)菌刀具和鑷子從不同部位割取，割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深度，注意樣品的代表性；小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，注入無(wú)菌盛樣容器。樣品是固體粉末，應(yīng)邊取邊混合。

4、冷凍食品的采樣

大包裝小塊冷凍食品的采樣按小塊個(gè)體采??；大塊冷凍食品可以用無(wú)菌刀從不同部位削取樣品或用無(wú)菌小手鋸從冰塊上鋸取樣品，也可以用無(wú)菌鉆頭鉆取碎樣品，注入無(wú)菌盛樣容器。

固體樣品和冷凍食品取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康模粜铏z驗(yàn)食品污染情況，可取表層樣品；若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況，應(yīng)再取深部樣品。

5、生產(chǎn)工序檢測(cè)采樣 ① 車(chē)間用水

自來(lái)水樣從車(chē)間各水龍頭上采取冷卻水，湯料從車(chē)間容器不同部位用100mL無(wú)菌注射器抽取。

② 車(chē)間臺(tái)面、用具及加工人員手的衛(wèi)生檢測(cè)

用板孔5cm的無(wú)菌采樣板及5支無(wú)菌棉簽擦拭25cm面積。若所采表面干燥，則用無(wú)菌稀釋液濕潤(rùn)棉簽后擦拭，若表面有水，則用干棉簽擦拭，擦拭立即將棉簽頭用無(wú)菌剪刀剪入盛樣容器。2

2③ 車(chē)間空氣采樣（直接沉降法）

將5個(gè)直徑90mm的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板分別置于車(chē)間的四角和中部，打開(kāi)平皿蓋5min，然后蓋上平皿蓋送檢。

６、食物中毒微生物檢驗(yàn)的取樣

當(dāng)懷疑發(fā)生食物中毒時(shí)，應(yīng)及時(shí)收集可以中毒源食品或餐具等，同時(shí)收集病人的嘔吐物、糞便或血液等。

７、人畜共患病原微生物檢驗(yàn)的取樣

當(dāng)懷疑某一動(dòng)物產(chǎn)品可能帶來(lái)人畜共患病病原體時(shí)，應(yīng)結(jié)合畜禽傳染病學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)，采取病原體最集中、最易檢出的組織或體液送檢驗(yàn)室檢驗(yàn)。

（三）采樣的標(biāo)簽

采樣前后應(yīng)立即貼上標(biāo)簽，每件樣品必須標(biāo)記清楚（如編號(hào)、樣品名稱(chēng)、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期、產(chǎn)品批號(hào)、產(chǎn)品數(shù)量、存放條件、采樣時(shí)間、采樣人姓名、現(xiàn)場(chǎng)情況）。

（四）樣品的送檢要求

1、要快速運(yùn)送，不要超過(guò)3小時(shí)。

2、若路途遙遠(yuǎn)，不需冷凍的樣品可1~5℃低溫下運(yùn)送；如需保持冷凍狀態(tài)在泡沫塑料隔熱箱內(nèi)。

3、要注意防污染、防散漏、防變質(zhì)。

（五）樣品的處理方法

1、液體樣品的處理

液體樣品，指粘度不超過(guò)牛乳的非粘性食品，可直接由滅菌吸管準(zhǔn)確吸取25mL蒸餾水或生理鹽水及有關(guān)檢驗(yàn)的增菌液中，制成1︰10稀釋液。吸取前要將樣品充分混合，在開(kāi)瓶、開(kāi)蓋等打開(kāi)樣品容器時(shí)，一定要注意表面消毒，無(wú)菌操作。用點(diǎn)燃的酒精棉球灼燒瓶口滅菌，用石炭酸或來(lái)蘇爾消毒后的紗布蓋好，再用滅菌開(kāi)瓶器將蓋啟開(kāi)。含有二氧化碳的樣品可倒入滅菌的小瓶?jī)?nèi)，覆蓋滅菌紗布，輕輕搖蕩，待氣體全部逸出后，再取樣檢驗(yàn)。

2、固體或粘性液體樣品的處理

此類(lèi)樣品無(wú)法用吸管吸取，可用滅菌容器稱(chēng)取檢樣25g，加至預(yù)溫45℃的滅菌生理鹽水或蒸餾水225mL中，搖蕩融化或使用振蕩器振蕩融化，盡快檢驗(yàn)。從樣品稀釋到接種培養(yǎng)，一般不超過(guò)15min。

（１）固體食品的處理

固體食品的處理相對(duì)復(fù)雜，處理方法主要有以下幾種： ①搗碎均質(zhì)法：

將樣品(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g放入帶225mL無(wú)菌稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以8000~10000r/min均質(zhì)1~2min即可。

②剪碎振搖法：

將樣品(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g檢樣進(jìn)一步剪碎，放入帶225mL無(wú)菌稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅不小于40cm。

③研磨法：

將樣品(≥100g)剪碎或攪拌混勻，從中取25g檢樣放入無(wú)菌乳缽中充分研磨后，再放入帶有225mL無(wú)菌稀釋液的稀釋瓶中，蓋緊蓋后，充分搖勻。

④整粒振搖法：

有完整自然保護(hù)膜的顆粒狀樣品（如蒜瓣、青豆等）可以直接稱(chēng)取25g整粒樣品置于帶有225mL無(wú)菌稀釋液和適量玻璃珠的無(wú)菌稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅要大于40cm以上。

（２）冷凍樣品

冷凍樣品在檢驗(yàn)前要進(jìn)行解凍。一般在0~4 ℃下解凍，時(shí)間不能超過(guò)18h；也可在45 ℃下解凍，時(shí)間不能超過(guò)15min。樣品解凍后，無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣25g，置于225mL無(wú)菌稀釋液中，制備稱(chēng)均勻1︰10稀釋液。

（３）粉狀或顆粒狀樣品的處理

用滅菌勺或其他適用工具將樣品攪拌均勻后，無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣25g，置于225mL滅菌生理鹽水中，充分振搖混勻或使用振搖器混勻，制成1︰10稀釋液。

二、各類(lèi)食品微生物檢樣樣品的采集與制備實(shí)例

（一）肉與肉制品樣品的采集與制備

1、樣品的采取（1）生肉及臟器檢樣

如是屠宰場(chǎng)后的畜肉,可于開(kāi)腔后,用無(wú)菌刀采取兩腿內(nèi)側(cè)肌肉各50g(或劈半后采取兩側(cè)背最長(zhǎng)肌肉各50g);如是冷藏或銷(xiāo)售的生肉,可用無(wú)菌刀取腿肉或其他部位的肌肉100g.檢樣采取后放入無(wú)菌容器內(nèi),立即送檢;如條件不許可時(shí),最好不超過(guò)3h.送檢時(shí)應(yīng)注意冷藏,不得加入任何防腐劑.檢樣送往化驗(yàn)室應(yīng)立即檢驗(yàn)或放置冰箱暫存.（2）禽類(lèi)(包括家禽和野禽)鮮、凍家禽采取整只,放無(wú)菌容器內(nèi);帶毛野禽可放清潔容器內(nèi),立即送檢,以下處理要求同上述生肉.（3）各類(lèi)熟肉制品

包括醬鹵肉,肴肉,方圓腿,熟灌腸,熏烤肉,肉松,肉脯,肉干等,一般采取200g,熟禽采取整只,均放無(wú)菌容器內(nèi),立即送檢,以下處理要求同上述生肉.(4)臘腸,香肚等生灌腸

采取整根,整只,小型的可采數(shù)根,數(shù)只,其總量不少于250g.2、檢樣的處理

（1）生肉及臟器檢樣的處理

先將檢樣進(jìn)行表面消毒(在沸水內(nèi)燙3s~5s,或灼燒消毒),再用無(wú)菌剪子剪取檢樣深層肌肉25g,放入無(wú)菌乳缽內(nèi)用滅菌剪子剪碎后,加滅菌海砂或玻璃砂或玻璃砂研磨,磨碎后加入滅菌水225mL,混勻后即為1:10稀釋液.（2）鮮,凍家禽檢樣的處理

先將檢樣進(jìn)行表面消毒,用滅菌剪子或刀去皮后,剪取肌肉25g(一般可從胸部或腿部剪取),以下處理同生肉.帶毛野禽去毛后,同家禽檢樣處理.（3）各類(lèi)熟肉制品檢樣的處理 直接切取或稱(chēng)取25g,以下處理同生肉.（4）臘腸、香腸等生灌腸檢樣處理

先對(duì)生灌腸表面進(jìn)行消毒,用滅菌剪子取內(nèi)容物25g,以下處理同生肉.注:以上樣品的采集和送檢及檢樣的處理均以檢驗(yàn)肉禽及其制品內(nèi)的細(xì)菌含量從而判斷其質(zhì)量鮮度為目的.如須檢驗(yàn)肉禽及其制品受外界環(huán)境污染的程度或檢索其是否帶有某種致病菌,應(yīng)用棉拭采樣法.3、棉拭采樣法和檢樣處理

檢驗(yàn)肉禽及其制品受污染的程度,一般可用板孔5cm2的金屬制規(guī)板,壓在受檢物上,將來(lái)菌棉拭稍沾濕,在板孔5cm2的范圍內(nèi)揩抹多次,然后將板孔規(guī)板移壓另一點(diǎn),用另一棉拭揩抹,如此共移壓揩抹10次,總面積50cm2,共用10只棉拭.每支棉拭在揩抹去完畢后應(yīng)立即剪斷或燒斷后投入盛有50mL滅菌水的三角燒瓶或大試管中,立即送檢.檢驗(yàn)時(shí)先充分振搖吸取瓶,管中的液體,作為原液,再按要求作10倍遞增稀釋.檢驗(yàn)致病菌,不必用規(guī)板,在可疑部位用棉拭揩抹即可.（二）乳與乳制品樣品的采集與制備

1、樣品的采取和送檢（1）散裝或大型包裝的乳品

用滅菌刀,勺取樣,在移采另一件樣品前,刀,勺先清洗滅菌.采樣時(shí)應(yīng)注意部位等代表性.每件樣品數(shù)量不少于200g,放入滅菌容器內(nèi)及時(shí)送檢.鮮乳一般不應(yīng)超過(guò)3h,在氣溫較高或路途較遠(yuǎn)的情況下應(yīng)進(jìn)行冷藏,不得使用任何防腐劑.（2）小型包裝的乳品

應(yīng)采取整件包裝,采樣時(shí)應(yīng)注意包裝的完整.各種小型包裝和乳與乳制品,每件樣品量為:生奶1瓶或1包;消毒奶1瓶或1包;奶粉1瓶或1包(大包裝者200g);奶油1塊(113g);酸奶1瓶或1罐;煉乳1瓶或1罐;奶酪(干酪)1個(gè).（3）成批產(chǎn)品

對(duì)成批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量鑒定時(shí),其采樣數(shù)理每批以千分之一計(jì)算,不足千件者抽取1件.2、檢樣的處理

（1）鮮奶,酸奶

以無(wú)菌操作去掉瓶口的紙罩紙蓋,瓶口經(jīng)火焰消毒后以無(wú)菌操作吸取25mL檢樣,放入裝有225mL滅菌生理鹽水的三角燒瓶?jī)?nèi),振搖均勻(酸乳如有水分析出于表層,應(yīng)先去除).（2）煉乳

將瓶或罐先用溫水洗凈表面,再用點(diǎn)燃酒精棉球消毒瓶或罐的上表面,然后用滅菌的開(kāi)罐器打開(kāi)罐(瓶),以無(wú)菌操作稱(chēng)取25g(mL)檢樣,放入裝有225mL滅菌生理鹽水的三角燒瓶?jī)?nèi),振搖均勻.（3）奶油

以無(wú)菌操作打開(kāi)包裝,取適量檢樣置于滅菌三角燒瓶?jī)?nèi),在450C水浴或溫箱中加溫,溶解后立即將燒瓶取出,用滅菌吸管吸取25mL奶油放入另一含225mL滅菌生理鹽水或滅菌奶油稀釋液的燒瓶?jī)?nèi)(瓶裝稀釋液應(yīng)預(yù)置于450C水浴中保溫,作10倍遞增稀釋時(shí)所用的稀釋液亦同),振搖均勻,從檢樣融化到接種完畢的時(shí)間不應(yīng)超過(guò)30min.注:奶油稀釋液:格林氏液(配法:氯化鈉9g,氯化鉀0.12g,氯化鈣0.24g,碳酸氫鈉0.2g,蒸餾水1000mL)250mL,蒸餾水750mL,瓊脂1g,加熱溶解,分裝每瓶225mL,1210C滅菌15min.（4）奶粉

罐裝奶粉的開(kāi)罐取樣法同煉乳處理,袋裝奶粉應(yīng)用蘸有75%酒精的棉球涂擦消毒袋口,以無(wú)菌操作開(kāi)封取樣,稱(chēng)取檢樣25g,放入裝有適量玻璃珠的滅菌三角燒瓶?jī)?nèi),將225mL溫?zé)岬臏缇睇}水徐徐加入(先用少量生理鹽水將奶粉調(diào)成糊狀,再全部加入,以免奶粉結(jié)塊),振搖使充分溶解和混勻.（5）奶酪

先用滅菌刀削去部分表面封蠟,用點(diǎn)燃的酒精棉球消毒表面,然后用滅菌刀切開(kāi)奶酪,以無(wú)菌操作切取表層和深層檢樣各少許,置于滅菌乳缽內(nèi)切碎,加入少量生理鹽水研成糊狀.(三)蛋與蛋制品樣品的采集與制備

1、樣品的采集(1)鮮蛋

用流水沖洗鮮蛋外殼，再用75%酒精棉球涂擦消毒后放入 滅菌袋內(nèi)，加封做好標(biāo)記后送檢。

(2)全蛋粉，巴氏消毒全蛋粉，蛋黃粉，蛋白片

將包裝鐵箱上開(kāi)口處用75%酒精棉球消毒，然后將蓋開(kāi)啟，用滅菌的金屬制雙層旋轉(zhuǎn)式套管采樣器斜角插入箱底，使套管旋 轉(zhuǎn)收取檢樣，再將采樣器提出箱外，用滅菌小匙自上、中、下部 收取檢樣，裝入滅菌廣口瓶中，每個(gè)檢樣質(zhì)量不少于100g，標(biāo) 記后送檢。

(3)冰全蛋、巴氏消毒;;全蛋、冰蛋黃、冰蛋白

先將包裝鐵聽(tīng)開(kāi)口處用75%酒精棉球消毒，然后將蓋開(kāi)啟，用滅菌電鉆由頂?shù)降仔苯倾@入，徐徐鉆取檢樣。然后抽出電鉆，從中取出檢樣200g裝入滅菌廣口瓶中，標(biāo)明后送檢。(4)對(duì)成批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量鑒定時(shí)的采樣數(shù)量

蛋粉、巴氏消毒全蛋粉、蛋黃粉、蛋白片等產(chǎn)品以一日或一 班生產(chǎn)量為一批，檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌時(shí)，按每批總量5%抽樣，但每 批最少不得少于3個(gè)檢樣。測(cè)定菌落總數(shù)和大腸菌群時(shí)，每批按 裝罐過(guò)程前、中、后取樣3次，每次取樣50 g，每批合為一個(gè)檢 樣。

冰全蛋、巴氏消毒冰全蛋、冰蛋黃、冰蛋白等產(chǎn)品按每500 kg取樣一件。菌落總數(shù)測(cè)定和大腸菌群測(cè)定時(shí)，在每批裝罐過(guò) 程前、中、后取樣3次，每次取樣50 g合為一個(gè)檢樣。

2.檢樣的處理(1)鮮蛋外殼

用滅菌生理鹽水浸濕的棉拭充分擦拭蛋殼，然后棉拭直接放 呻培養(yǎng)基內(nèi)增菌培養(yǎng)，也可將整只鮮蛋放入滅菌小燒杯或平皿 中，按檢樣要求加入定量滅菌生理鹽水或液體培養(yǎng)基，用滅菌橋i 拭將蛋殼表面充分擦洗后，以擦洗液作為檢樣檢驗(yàn)。

(2)鮮蛋蛋液

將鮮蛋在流水下洗凈，待干后再用酒精棉球消毒蛋殼，然/口 根據(jù)檢驗(yàn)要求，打開(kāi)蛋殼取出蛋白、蛋黃或全蛋液，放人帶有玻 璃珠的滅菌瓶?jī)?nèi)，充分搖勻待檢。

(3)全蛋粉、巴氏消毒全蛋粉、蛋白片、蛋黃粉

將檢樣放入帶有玻璃珠的滅菌瓶?jī)?nèi)，按比率加入滅菌生理鹽 水充分搖勻待檢。(4)冰全蛋、巴氏消毒冰全蛋、冰蛋白、;;蛋黃

將裝有冰蛋檢樣的瓶子浸泡于流動(dòng)冷水中，待檢樣融化后取 出，放入帶有玻璃珠的滅菌瓶中充分搖勻待檢。

(5)各種蛋制品沙門(mén)氏菌增菌培養(yǎng)

以無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣，接種于亞曬酸鹽煌綠或煌綠肉湯等增 菌培養(yǎng)基中(此培養(yǎng)基預(yù)先置于有適量玻璃珠的滅菌瓶?jī)?nèi))，蓋緊瓶蓋，充分搖勻，然后放入(36士1)℃恒溫箱中培養(yǎng)(20±2)h。

(6)接種以上各種蛋與蛋制品的數(shù)量及培養(yǎng)基的數(shù)量和成分

凡用亞礎(chǔ)酸鹽煌綠增菌培養(yǎng)時(shí)，各種蛋與蛋制品的檢樣接種數(shù)量都為30 g，培養(yǎng)基數(shù)量都為150 ml。

（四）水產(chǎn)食品樣品的采集與制備

1、樣品的采集

赴現(xiàn)場(chǎng)采取水產(chǎn)食品樣品時(shí)，應(yīng)按檢驗(yàn)?zāi)康暮退a(chǎn)品的種類(lèi) 確定采樣量。除個(gè)別大型魚(yú)類(lèi)和海獸只能割取其局部作為樣品 外，一般都采取完整的個(gè)體，待檢驗(yàn)時(shí)再按要求在一定部位采取 檢樣。在以判斷質(zhì)量鮮度為目的時(shí)，魚(yú)類(lèi)和體形較大的貝甲類(lèi)雖 然應(yīng)以個(gè)體為一件樣品，單獨(dú)采取，但當(dāng)對(duì)一批水產(chǎn)品做質(zhì)量判 斷時(shí)，仍須采取多個(gè)個(gè)體做多件檢驗(yàn)以反映全面質(zhì)量。一般小型 魚(yú)類(lèi)和對(duì)蝦、小蟹，因個(gè)體過(guò)小在檢驗(yàn)時(shí)只能混合采取檢樣，在采樣時(shí)須采數(shù)量更多的個(gè)體，一般可采500-10 00g;魚(yú)糜制品(如灌腸、魚(yú)丸等)和熟制品采取250 g，放滅菌容器內(nèi)。

水產(chǎn)食品含水較多，體內(nèi)酶的活力也較旺盛，易于變質(zhì)。因 此在采好樣品后應(yīng)在8 h內(nèi)送檢，在送檢過(guò)程中一般都應(yīng)加冰保藏。

2、檢樣的處理(1)魚(yú)類(lèi)

魚(yú)類(lèi)采取檢樣的部位為背肌。先用流水將魚(yú)體體表沖凈，去 鱗，再用75%酒精的棉球擦凈魚(yú)背，待干后用滅菌刀在魚(yú)背部 沿脊椎切開(kāi)5 g，再沿直于脊椎的方向切開(kāi)兩端，兩塊背肌分 別向兩側(cè)翻開(kāi)，然后用無(wú)菌剪子剪取25 g魚(yú)肉，放入滅菌乳缽 內(nèi)，用滅菌剪子剪碎，加滅菌海砂或玻璃砂研磨(有條件情況下 可用均質(zhì)器)，檢樣磨碎后加入225 ml滅菌生理鹽水，混勻成稀釋液。

在剪取肉樣時(shí)要仔細(xì)操作，勿觸破及粘上魚(yú)皮。如果是魚(yú)康糜制品和熟制品則放乳缽內(nèi)進(jìn)一步搗碎后，再加生理鹽水，混勻成稀釋液。

(2)蝦類(lèi)

蝦類(lèi)采取檢樣的部位為腹節(jié)內(nèi)的肌肉。將蝦體在流水下沖 凈，摘去頭胸節(jié)，用滅菌剪子剪除腹節(jié)與頭胸節(jié)連接處的肌肉，然后擠出腹節(jié)內(nèi)的肌肉，取25 g放入滅菌乳缽內(nèi)。以

后操作同魚(yú)類(lèi)檢樣處理。

(3)蟹類(lèi)

蟹類(lèi)采取檢樣的部位為胸部肌肉。將蟹體在流水下沖洗，剝?nèi)どw和腹臍，去除鰓條。再置流水下沖凈。用75%酒精棉球擦拭前后外壁。置滅菌搪瓷盤(pán)上待干。然后用滅菌剪子剪開(kāi)，成左右兩片，用雙手將一片蟹體的胸部肌肉擠出（用手指從足跟一端剪開(kāi)的一端擠壓），稱(chēng)取25g，置滅菌乳缽內(nèi)。以后操作同魚(yú)類(lèi)檢樣處理處理

(4)貝殼類(lèi)

貝殼類(lèi)采樣部位為貝殼內(nèi)容物。先用流水刷洗貝殼，刷凈后 放在鋪有滅菌毛巾的清潔的搪瓷盤(pán)或工作臺(tái)上，采樣者將雙手洗 凈并用75%酒精棉球擦拭消毒后，用滅菌小飩刀從貝殼的張口 處縫隙中徐徐切人，撬開(kāi)殼蓋，再用滅菌鑲子取出整個(gè)內(nèi)容物，稱(chēng)取25 g置滅菌乳缽內(nèi)，以下操作同魚(yú)類(lèi)檢驗(yàn)處理。

上述檢驗(yàn)處理的方法和檢驗(yàn)部位均以檢驗(yàn)水產(chǎn)品肌肉內(nèi)細(xì)菌 含量從而判斷其新鮮度為目的。如須檢驗(yàn)水產(chǎn)食品是否污染某種 致病菌時(shí)，其檢驗(yàn)部位應(yīng)為胃腸消化道和鯨等呼吸器官:魚(yú)類(lèi)檢 取腸管和鯨;蝦類(lèi)檢取頭胸節(jié)內(nèi)的內(nèi)臟和腹節(jié)外沿處的腸管;蟹 類(lèi)檢取胃和鯨條;貝類(lèi)中的螺類(lèi)檢取腹足肌肉以下的部分，貝類(lèi)中的雙殼類(lèi)檢取覆蓋在斧足肌肉外層的內(nèi)臟和瓣鰓。

（五）軟飲料、冷凍飲品樣品的采集與制備

1、樣品采集

(1)碳酸飲料、瓶(桶)裝飲用水、果汁(漿)及果汁飲 料、含乳飲料、果味水、果子露、酸梅湯、固體飲料等采取樣品時(shí)應(yīng)采取原瓶(罐)、袋和盆裝樣品，散裝者應(yīng)用無(wú)菌操作采取 500ml，放入滅菌磨口瓶中。

(2)冰淇淋、冰棍采取樣品時(shí)應(yīng)采取原包裝樣品，散裝者用無(wú)菌操作取樣，放入滅菌磨口瓶中，再放入冷藏或隔熱容器中。

(3)食用冰塊取樣應(yīng)取冷凍冰塊放入滅菌容器中。以上所有的樣品采取后，應(yīng)立即送檢，最多不超過(guò)3 h

2、樣品的采取數(shù)量

（1）碳酸飲料、果汁：采樣時(shí)以四杯為一件，大包裝者，一瓶或一桶為一件。（2）散裝飲料：采取500ml。

（3）固體飲料：瓶裝采取一瓶為一件，散裝取500g。

（4）冰棍：如班產(chǎn)量為2萬(wàn)支以下者，一班為一批；班產(chǎn)量2萬(wàn)支以上者，以工作臺(tái)

為一批。一批取3件，一件取3支。

（5）冰淇淋：以杯為1件，散裝取200 g。（6）食用冰塊：以500g為1件。

3、樣品的處理(1)瓶(罐)裝飲料

用點(diǎn)燃的酒精棉球灼燒瓶口滅菌，用石炭酸紗布蓋好。塑料 瓶口可用75%酒精棉球擦拭滅菌，用滅菌開(kāi)瓶器將蓋啟開(kāi)，含有二氧化碳的飲料可倒入另一滅菌容器內(nèi)，口勿蓋緊，覆蓋一滅菌紗布，輕輕搖蕩。待氣體全部逸出后，進(jìn)行檢驗(yàn)。

(2)冰棍

用滅菌銀子除去包裝紙，將冰棍部分放入滅菌磨口瓶?jī)?nèi)，木棒留在瓶外，蓋上瓶蓋，用力抽出木棒，或用滅菌剪子剪掉木棒，置45℃水浴30 min，溶化后立即進(jìn)行檢驗(yàn)。

(3)冰淇淋

放在滅菌容器內(nèi)，待其溶化立即進(jìn)行檢驗(yàn)。

（六）調(diào)味品樣品的采集與制備

調(diào)味品包括醬油、醬類(lèi)和醋等，是以豆類(lèi)、谷類(lèi)為原料發(fā)酵 而成的食品，往往由于原料污染及加工制作、運(yùn)輸中不注意衛(wèi)生 而污染上腸道細(xì)菌、球菌及需氧和厭氧芽子包桿菌。

1、樣品的采取 1醬油和食醋

裝瓶者采取原包裝，散裝樣品可用滅菌吸管采取 2.醬類(lèi)

用滅菌勺子采取，放入滅菌磨口瓶?jī)?nèi)送檢。

2、檢樣的處理（1）瓶裝樣品

用點(diǎn)燃的酒精棉球燒灼瓶口滅菌，用石炭酸紗布蓋好，再用 滅菌開(kāi)瓶器啟開(kāi)后進(jìn)行檢驗(yàn)。

（2）醬類(lèi)

用無(wú)菌操作稱(chēng)取25 g，放入滅菌容器內(nèi)，加入滅菌蒸餾水 225 ml，制成混懸液。（3）食醋

用200~300g/L滅菌碳酸納溶液調(diào)pH到中性。

（七）冷食菜、豆制品樣品的采集與制備

冷食菜多為蔬菜和熟肉制品不經(jīng)加熱而直接食用的涼拌菜。該類(lèi)食品由于原料、半成品、炊事員及炊事用具等消毒滅菌不徹 底，造成細(xì)菌的污染。豆制品是以大豆為原料制成的含有大量蛋白質(zhì)的食品，該類(lèi)食品大多由于加工后，通過(guò)盛器、運(yùn)輸及銷(xiāo)售 等環(huán)節(jié)不注意衛(wèi)生，沾染了存在于空氣、土壤中的細(xì)菌。這兩類(lèi) 食品如不加強(qiáng)衛(wèi)生管理，極易造成食物中毒及腸道疾病的傳播。

1、樣品的采?。?）冷食菜

采取時(shí)將樣品混勻，采取后放入滅菌容器內(nèi)。（2）豆制品

采取接觸盛器邊緣、底部及上面不同部位樣品，放入滅菌容器內(nèi)。

2、樣品采取數(shù)量

冷食菜及豆制品均采樣200g。

3、檢樣的處理

以無(wú)菌操作稱(chēng)取25 g檢樣，放入225 ml滅菌蒸餾水，制成混懸液。

（八）糖果、糕點(diǎn)果脯樣品的采集與制備

糖果、糕點(diǎn)果脯等此類(lèi)食品大多是由糖、牛奶、雞蛋、水果等為原料而制成的甜食。部分食品有包裝紙，污染機(jī)會(huì)較少，但由于包裝紙、盒不清潔，或沒(méi)有包裝的食品放于不潔的容器內(nèi)也可造成污染。帶餡的糕點(diǎn)往往因加熱不徹底，存放時(shí)間長(zhǎng)頭溫度高，可使細(xì)菌大量繁殖造成食品變質(zhì)。因此對(duì)這類(lèi)食品進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)還是很有必要的。

1、樣品的采取

糕點(diǎn)、果脯可用滅菌鑷子夾取不同部位樣品，放入滅菌容器內(nèi);糖果采取原包裝樣品，采取后立即送檢。

2、樣品的處理（1）糕點(diǎn)

如為原包裝，用滅菌銀子夾下包裝紙，采取外部及中心部位;如為帶餡糕點(diǎn)，取外皮及內(nèi)餡25 g;奶花糕點(diǎn)，采取奶花及 糕點(diǎn)部分各一半共25 g，加入225 ml滅菌生理鹽水中，制成混懸液。

（2）果脯

果脯檢樣，采取不同部位稱(chēng)取25 g檢樣，加入滅菌生理鹽 水225 ml，制成混懸液。（3）糖果

糖果檢樣，用滅菌銀子夾取包裝紙，稱(chēng)取數(shù)塊共25 g，加入 預(yù)溫至45 度滅菌生理鹽水225 ml，待溶化后檢驗(yàn)。

（九）酒類(lèi)樣品的采集與制備

酒類(lèi)一般不進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)，進(jìn)行檢驗(yàn)的主要是酒精度低的發(fā)酵酒。因酒精度低，不能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。污染主要來(lái)自原料或加工過(guò)程中不注意衛(wèi)生操作而沾染水、土壤及空氣中的細(xì)菌，尤其散裝生啤酒，因不加熱往往生存大量細(xì)菌。

1、樣品的采集

酒類(lèi)樣品，若是瓶裝酒類(lèi)應(yīng)采取原包裝樣品2瓶，若是散裝酒類(lèi)應(yīng)用滅菌容器采取500ml，放入滅菌磨口瓶中送檢。

2、樣品的處理（1）瓶裝酒類(lèi)

瓶裝酒類(lèi)用點(diǎn)燃的酒精棉球燒灼瓶口滅菌，用石炭酸紗布蓋好，再用滅菌開(kāi)瓶器將蓋啟開(kāi)，含有二氧化碳的酒類(lèi)可倒入另一滅菌容器內(nèi)，口勿蓋緊，覆蓋一滅菌紗布，輕輕搖蕩，待氣體全部逸出后，進(jìn)行檢驗(yàn)。

2.散裝酒類(lèi)

散裝酒類(lèi)可直接吸取，進(jìn)行檢驗(yàn)。

（十）方便面(速食米粉)樣品的采集與制備

隨著生活水平的提高，生活節(jié)奏的加快，方便食品頗受人門(mén) 的歡迎，銷(xiāo)售量越來(lái)越大。方便面(米粉)是最有代表性的方便 食品，方便面(米粉)是以小麥粉、莽麥粉、綠豆粉、米粉等為 主要原料，添加食鹽或面質(zhì)改良劑，加適量水調(diào)制、壓延、成型、汽蒸后，經(jīng)油炸或干燥處理，達(dá)到一定熟度的糧食制品。同 類(lèi)食品還有即食粥、速煮米飯等。這類(lèi)食品大部分均有包裝，污染機(jī)會(huì)少，但往往由于包裝紙、盒不清潔或沒(méi)有包裝的食品放于不清潔的容器內(nèi)，造成污染。此外，也常在加工、存放、銷(xiāo)售各 環(huán)節(jié)中污染了大量細(xì)菌和霉菌，而造成食品變質(zhì)。這類(lèi)食品不僅 會(huì)被非致病菌污染，有時(shí)還會(huì)感染到沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、金黃 色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和霉菌及其毒素。

1、樣品的采集

袋裝及碗裝方便面(米粉)、即食粥、速煮米飯3袋(碗)為1件，簡(jiǎn)易包裝的采取200g。2.樣品的處理

(1)未配有調(diào)味料的方便面(米粉)、即食粥、速煮米飯用無(wú)菌操作開(kāi)封取樣，稱(chēng)取樣品25 g，加入225 m滅菌生理鹽水制成1:10勻質(zhì)液。

(2)配有調(diào)味料的方便面(米粉)、即食粥、速煮米飯 用無(wú)菌操作開(kāi)封取樣，將面(粉)塊、干飯粒和全部調(diào)料及 配料一起稱(chēng)重，按1: 1(kg/L)加入滅菌生理鹽水，制成檢樣勻質(zhì)液。然后再稱(chēng)取50 m勻質(zhì)液力日至200m滅菌生理鹽水中，成為1:10的稀釋液

二、檢驗(yàn)與報(bào)告

（一）檢驗(yàn)

制備稀釋好的檢樣，按不同的檢驗(yàn)項(xiàng)目及時(shí)進(jìn)行檢驗(yàn)。食品微生物檢驗(yàn)按國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)方法規(guī)定。

主要檢驗(yàn)項(xiàng)目： ①菌落總數(shù)的檢驗(yàn) ②大腸桿菌的檢驗(yàn)

③致病菌的檢驗(yàn)（包括腸道致病菌檢驗(yàn)和致病性球菌檢驗(yàn)等）

（二）報(bào)告

按檢樣項(xiàng)目完成各類(lèi)檢驗(yàn)后，檢驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)填寫(xiě)檢驗(yàn)報(bào)告單，簽名后送主管人員簽字，加蓋單位印章，以示生效，立即交食品衛(wèi)生監(jiān)督人員處理。

發(fā)出報(bào)告后樣品的處理：

①陰性樣品：在發(fā)出報(bào)告可及時(shí)處理；

②陽(yáng)性樣品：在發(fā)出報(bào)告以后3天才能處理樣品； ③進(jìn)口食品的陽(yáng)性樣品：要保存6個(gè)月才能處理。

小結(jié)：本章主要介紹了樣品采集的原則、樣品采集及處理的方法及檢驗(yàn)程序。思考題：

1、食品檢驗(yàn)樣品采集的原則有哪些？

2、固體食品處理的處理方法有哪些？

第三篇：臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的采集

臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的采集及微生物檢驗(yàn)報(bào)告的解讀 一 臨床微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的采集

1.臨床微生物檢驗(yàn)的思路和原則

確保標(biāo)本可靠（（分析前質(zhì)量）保證檢驗(yàn)質(zhì)量

全面了解機(jī)體的正常菌群 快速準(zhǔn)確提供信息

微生物學(xué)的定性、定量和定位分析 結(jié)合病情，與臨床聯(lián)系

2.微生物結(jié)果的影響因素

2.1針對(duì)性的檢驗(yàn)申請(qǐng)、病人準(zhǔn)備、標(biāo)本的采集、標(biāo)本的運(yùn)輸 標(biāo)本的保存和處理（46~68.2%）； 標(biāo)本檢驗(yàn)（4-15%）； 結(jié)果審核和批準(zhǔn)、危急值報(bào)告（18.5-47%）2.2正確采集、轉(zhuǎn)運(yùn)與保存微生物標(biāo)本直接關(guān)系到致病微生物培養(yǎng)的正確性與陽(yáng)性率，是從臨床微生物檢驗(yàn)獲得正確結(jié)果的最關(guān)鍵一步。

2.3Garbage-In-Garbage-Out 不合格的標(biāo)本-不正確的檢驗(yàn)結(jié)果-錯(cuò)誤的診斷-錯(cuò)誤的治療-衛(wèi)生資源的浪費(fèi)、病人費(fèi)用增加、耐藥菌株增加

2.4成功治療感染癥的重要前提: 正確的微生物學(xué)檢驗(yàn)始自標(biāo)本采取。否則工作人員水平再高也不可能得到正確的結(jié)果，臨床醫(yī)師、護(hù)士及檢驗(yàn)人員都必須通曉其要領(lǐng)

3.標(biāo)本采集前臨床醫(yī)師及護(hù)士要考慮的問(wèn)題

3.1是否感染？細(xì)菌感染？真菌感染還是病毒、寄生蟲(chóng)感染？ 3.2何時(shí)采集樣本？

3.3采集什么樣的標(biāo)本？怎樣采集？樣本是否足量？ 3.4采用哪種無(wú)菌容器或運(yùn)送培養(yǎng)基采集標(biāo)本？

3.5如何完善的填寫(xiě)標(biāo)本申請(qǐng)單？針對(duì)某些特殊致病菌的排查要求應(yīng)怎樣寫(xiě)？（申請(qǐng)單信息越詳盡，越有助于實(shí)驗(yàn)室出具符合臨床情況的結(jié)果報(bào)告，如疑似診斷、準(zhǔn)確的取材部位、甚至取樣時(shí)用抗菌藥物。）3.6關(guān)鍵需要特別重視的問(wèn)題：標(biāo)本采集是否規(guī)范 ；標(biāo)本保存、運(yùn)送是否規(guī)范 ？；無(wú)菌體液培養(yǎng)重視與否？

4.微生物檢查的樣本收集原則：

4.1收集樣本時(shí)應(yīng)使用嚴(yán)格的無(wú)菌技術(shù)，將污染情形降至最低。

4.2收集真正感染的病灶處之樣本，且不受到鄰近區(qū)域微生物的污染。

4.3采用無(wú)菌衛(wèi)材收集樣本，并置于已貼有病患標(biāo)簽之堅(jiān)固且密和性佳的容器中，將容器置于適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存環(huán)境待送。

4.4在病患感染的急性期、使用抗生素或傷口局部治療前收集標(biāo)本，成人應(yīng)需氧瓶、厭氧瓶同時(shí)培養(yǎng)，以提高陽(yáng)性檢出率和避免漏檢。

4.5樣本不可添加防腐劑，以免干擾病原菌分離。

4.6于送檢申請(qǐng)單上提供足夠的有關(guān)臨床資料(如姓名、性別、年齡、病例號(hào)、臨床診斷、標(biāo)本來(lái)源、采集時(shí)間、檢查項(xiàng)目、抗生素應(yīng)用情況等)，以便實(shí)驗(yàn)室能夠合理選擇培養(yǎng)環(huán)境和培養(yǎng)基。4.7即刻將樣本送檢，不可拖延，標(biāo)本采集后在室溫下超過(guò)2h未送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，可視為不合格標(biāo)本。不能使用冷藏的樣本檢驗(yàn)。

4.8實(shí)驗(yàn)室只能接受和處理合格標(biāo)本；對(duì)不合格標(biāo)本退回必須說(shuō)明原因，并應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系。4.9厭氧菌樣本采取必須隔絕空氣，混入空氣的樣本影響檢驗(yàn)結(jié)果，不能使用。

5.血液培養(yǎng)標(biāo)本采集和處理：

5.１采血指征：

對(duì)入院危重感染患者應(yīng)在未進(jìn)行抗菌藥物治療之前，及時(shí)做血培養(yǎng)。一般患者出現(xiàn)以下一種體征時(shí)可作為行血培養(yǎng)的重要指征：

①發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≥36℃）；②寒戰(zhàn)；③白細(xì)胞增多（計(jì)數(shù)＞10.0×109/L，特別有“核左移”時(shí)）；④皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血壓降低；⑤C反應(yīng)蛋白升高及呼吸加快；⑥血液病患者出現(xiàn)粒細(xì)胞減少，血小板減少等，或同時(shí)具備上述幾種體征時(shí)而臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血液培養(yǎng)。

新生兒可疑菌血癥，應(yīng)同時(shí)做尿液和腦脊液培養(yǎng)。5．2皮膚消毒程序：嚴(yán)格執(zhí)行以下三步法。5.2.1 70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上。

5.2.2 1%~2%碘酊作用30s或10%碘伏60s，從穿刺點(diǎn)向外劃拳消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上。5.2.3 70%酒精脫碘：對(duì)碘過(guò)敏的患者，用70%酒精消毒60s，待酒精揮發(fā)干燥后采血。5.3培養(yǎng)瓶消毒程序：①70%酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60s；②用無(wú)菌紗布或無(wú)菌棉簽清除橡皮塞子表面殘余酒精。5.4靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序：

5.4.1在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動(dòng)，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點(diǎn)； 5.4.2用注射器無(wú)菌穿刺取血后，勿換針頭（如果行第二次穿刺，應(yīng)換針頭）直接注入血培養(yǎng)瓶，輕輕顛倒混勻防止血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。

5.5采血量：

成人采血量是8~10ml，兒童1~5ml。血液和肉湯之比為1:5~1:10。5.6血培養(yǎng)次數(shù)和采血時(shí)間：

◆根據(jù)研究，僅抽血培養(yǎng)1次分離率約占80%，培養(yǎng)2次的分離率約占90%，而培養(yǎng)3次的分離率約占99%。僅抽血培養(yǎng)1次，除了分離率低（其原因是菌血癥常會(huì)暫時(shí)消失）外，且將很難評(píng)估病原菌是污染還是與感染有關(guān)。如果抽血培養(yǎng)2次或3次，則能夠得到肯定。

◆采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行，24h內(nèi)應(yīng)采集2~3次做血培養(yǎng)（一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)）。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)3d，每天采集2份。對(duì)間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前0.5~1h采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)熱后1h進(jìn)行。

5.7特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議：

◆可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎，應(yīng)在不同部位采集2~3份血標(biāo)本。

◆不明原因發(fā)熱，如隱性膿腫，傷寒熱和波浪熱，先采集2~3份標(biāo)本，24~36h后估計(jì)體溫升高之前（通常在下午）再采集2份以上。

◆可疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，在1~2h內(nèi)采集3份血標(biāo)本，如果24h后陰性，再采集3份以上的血標(biāo)本。5.8標(biāo)本運(yùn)送：

采血后應(yīng)該立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置35℃~37℃孵箱中，切勿冷藏。

6尿液標(biāo)本采集和處理：

6．1采樣原則：標(biāo)本需在應(yīng)用抗菌藥物之前或停用抗菌藥物5天之后留取尿液標(biāo)本；尿液在膀胱內(nèi)應(yīng)停留6～8 小時(shí)以上，使細(xì)菌有足夠的時(shí)間繁殖。一般以清晨第一次的中段尿?yàn)橐恕?.2采集方法：

6.2.1中段尿采集法：：成年男性和女性分別用肥皂水或1：1000 高錳酸鉀水溶液清洗尿道口和外陰部，再用無(wú)菌生理鹽水沖洗尿道口，然后排尿棄去前段尿液，收集中段尿5～10ml 盛于帶蓋的無(wú)菌容器內(nèi)送檢。

6.2.2導(dǎo)尿法：用導(dǎo)尿管導(dǎo)取10～15ml尿液，置滅菌容器中送檢；長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管者應(yīng)更換新導(dǎo)尿管留尿；留置導(dǎo)尿時(shí)，用無(wú)菌消毒法消毒導(dǎo)尿管外部及導(dǎo)尿管口，用無(wú)菌注射器通過(guò)導(dǎo)尿管抽取尿液送檢(不可采集尿液收集袋中的尿液送檢)；

6.3送檢：尿液收集后，蓋上容器蓋子立即送檢，若無(wú)法及時(shí)送檢，置于4℃冰箱中保存不可超過(guò)2小時(shí)。6.4注意事項(xiàng)：

◆收集尿液過(guò)程中，請(qǐng)勿將手伸入容器內(nèi)，且尿液勿滿(mǎn)出容器外，以免污染。而以無(wú)菌導(dǎo)管技術(shù)

收集尿液（特別是女性患者）的方法，已被認(rèn)為不適合，因易引發(fā)尿道感染?！羧绻輼?biāo)本中檢出3種以上不同種微生物，可能由于采樣本時(shí)受到污染所致。

7.痰及下呼吸道標(biāo)本采集和處理：

7.1采集要點(diǎn)：所采集的痰標(biāo)本，必須真正能代表肺部之分泌物者，通常清晨時(shí)痰液最多，且可能含較多病原菌。7.2采集步驟如下：

7.2.1以清水或牙刷清潔口腔及牙齒，不可用牙膏。

7.2.2指導(dǎo)病患從呼吸道深部咳出痰（不可含有唾液），裝于無(wú)菌容器內(nèi)。咳痰較困難者可用霧化蒸氣吸入以利痰液咳出。幼兒可用手指輕扣胸骨柄上方以誘發(fā)咳痰。7.2.3氣管下采集法：通常用于在給患者行纖維支氣管鏡時(shí)順便抽取。7.2.4氣管穿刺法：僅用于昏迷患者，由臨床醫(yī)師進(jìn)行。

7.2.5痰標(biāo)本應(yīng)以膿樣、干酪樣或膿性粘液樣性質(zhì)的痰液為合格標(biāo)本，痰量應(yīng)為3~5ml。7.2.6無(wú)法及時(shí)送檢的痰標(biāo)本應(yīng)置于4℃冰箱中保存待送。

7.2.7呼吸道標(biāo)本采集方法：鼻咽拭子法，先用清水漱口，對(duì)光坐，頭向上仰，口張大，用壓舌板輕壓舌根，用棉拭子在病人咽后壁，懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次．立即放入無(wú)菌試管中。

7.3痰TB菌涂片采集：痰涂片檢查T(mén)B菌的初診病人應(yīng)送3份痰標(biāo)本（夜間痰、清晨痰和即時(shí)痰）；如無(wú)夜間痰在留清晨痰后2~3小時(shí)再留一份痰標(biāo)本，或送兩份即時(shí)痰；治療中或復(fù)診隨訪病人按期每次送檢兩份痰（清晨痰和夜間痰）。

7.4痰標(biāo)本采集說(shuō)明：即時(shí)痰為病人就診時(shí)咳出的痰液；清晨痰為清晨深咳出的痰液；夜間痰為就診前一天晚睡前咳出的痰液。痰標(biāo)本應(yīng)以膿樣、干酪樣或膿性粘液樣性質(zhì)的痰液為合格標(biāo)本，痰量為3~5毫升。

8.泌尿生殖道樣本：

8.1陰道、子宮及前列腺等分泌物：由醫(yī)生采集，收集于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。淋病奈瑟菌檢查時(shí)，不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深取樣送檢，要避免陰道分泌物污染拭子。

8.2未成年人：若懷疑年幼女童有淋病性陰道炎時(shí)，則標(biāo)本由陰道外圍部位取得。

8.3男性：男性懷疑有急性淋病時(shí)，則由尿道取分泌物樣本作抹片及培養(yǎng)，若懷疑有慢性淋病，樣本可由醫(yī)生采自前列腺或精囊。

8.4注意：從冰箱取出之?dāng)y送培養(yǎng)基，須先放至室溫約半小時(shí)，使其恢復(fù)室溫，因淋病雙球菌對(duì)溫度相當(dāng)敏感。

9.腦脊液樣本：

9.1采集時(shí)間：懷疑腦膜炎時(shí)應(yīng)立即采集腦脊液，最好是在應(yīng)用抗生素之前采集腦脊液。9.2采集方法：腰穿法收取腦脊液3~5ml，盛于無(wú)菌試管中，應(yīng)立即送檢，同時(shí)注意保溫，不可置于冰箱保存。

10.糞便與直腸拭子樣本采集和處理：

10．1采集時(shí)間：

10.1.1腹瀉患者于急性期，盡量在用藥前采集糞便； 10．1.2傷寒患者于發(fā)病2w以后采集糞便； 10．1.3懷疑霍亂時(shí)立即采集糞便送檢。10．2采集方法：

10．2.1自然排便法：取新鮮糞便的黏液、膿血、或絮狀物等有意義成分，2～3g或1～2 m1，盛無(wú)菌容器內(nèi)或置于保存液或增茵液內(nèi)送檢；若疑似霍亂者應(yīng)置于堿性蛋白胨水中(pH8.6)。10．2.2直腸拭子法：難以獲得糞便或排便困難患者及幼兒可采用此法，將拭子前端用無(wú)菌甘油或生理鹽水濕潤(rùn),然后插入肛門(mén)約4～5cm(幼兒2～3cm)，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)。擦取直腸表面粘液后取出，盛于無(wú)菌試管中或保存液中送檢。

11眼、耳、鼻、咽拭子培養(yǎng)標(biāo)本：

11.1采集眼分泌物：先用無(wú)菌生理鹽水沖洗眼部,然后用棉拭于拭干，再用無(wú)菌棉拭于采集分泌物。

11．2采集咽分泌物：先用清水撤口．用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次，切勿接觸口腔和舌粘膜。

11．3采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位,切勿接觸周?chē)衬せ蚱つw。11．4送檢：標(biāo)本采集過(guò)程中應(yīng)注意避免粘膜上的正常菌群污染,標(biāo)本采集后標(biāo)明左、右眼（耳）或鼻咽部，連同拭子一起置無(wú)菌管內(nèi)送檢。

12.穿刺液樣本：

12．1穿刺液培養(yǎng)標(biāo)本：包括胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。

12．2采集時(shí)間：一般在用抗生素等抗菌藥物治療之前，或在停止使用抗菌藥物之后2～3d采集標(biāo)本。

12．3采集方法：

12.3１無(wú)菌操作穿刺抽取標(biāo)本或外科手術(shù)采集標(biāo)本；

12．3.2標(biāo)本采集量應(yīng)>1ml(結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)時(shí)應(yīng)為l～5m1)； 12.3.3標(biāo)本采集后注入無(wú)菌小瓶或無(wú)菌試管中立即送檢；

12.3.4可在盛器中先加入滅菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固(0.5ml 肝素可抗凝5ml標(biāo)本)。穿刺液包括胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液。

13.膿汁及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本的采集：

13．1采集要點(diǎn)：對(duì)采集標(biāo)本部位應(yīng)首先清除污垢，再以碘酒或酒精消毒，防止皮膚表面污染菌混入影響檢驗(yàn)結(jié)果，盛放標(biāo)本器皿應(yīng)無(wú)菌。

13．2封閉性膿腫患者病灶局部的皮膚或粘膜表面：先用碘酒消毒，再用75%酒精脫碘，以無(wú)菌干燥注射器穿刺抽取，將采集的膿汁注入無(wú)菌試管中。

13．3開(kāi)放性膿腫和膿汁分泌物：在患部附近的皮膚或粘膜用無(wú)菌紗布或棉布擦拭，供培養(yǎng)用的標(biāo)本盡可能從深部流出，如為瘺管可在無(wú)菌操作下取組織碎片。

13．4大面積燒傷的創(chuàng)面分泌物：由于創(chuàng)面的部位不同，細(xì)菌種類(lèi)也不同，故應(yīng)用無(wú)菌棉拭子采取多創(chuàng)面的膿汁或分泌物，置于無(wú)菌試管送檢。注意事項(xiàng)：燒傷12 小時(shí)內(nèi)的創(chuàng)面及分泌物中細(xì)菌檢出率較低。

14真菌感染培養(yǎng)標(biāo)本采集：

14．1淺部真菌感染標(biāo)本采集：

14.1.1皮膚：常規(guī)消毒皮膚，從皮膚癬菌皮損邊緣刮取鱗屑，置無(wú)菌平皿內(nèi)送檢，皮膚潰瘍則采集病損邊緣膿汁或組織；

14.1.2指(趾)甲：消毒指(趾)指甲并去掉其表面部分，取可疑病變部分，用刀片修成小薄片5～6 片置無(wú)菌容器內(nèi)送檢；

14.1.3毛發(fā)：采集根部斷折處，至少5～6 根送檢。14.2深部真菌感染標(biāo)本采集：

14.2.1血液：無(wú)菌采血8～10 m1，注入未用過(guò)抗生素的或可中和抗生素的血培養(yǎng)瓶中，立刻送檢，如不能立刻送檢時(shí)血培養(yǎng)瓶應(yīng)放室溫，但不可超過(guò)8~9h；

14.2.2腦脊液：采樣量不少于3～5m1,分別注入兩支無(wú)菌試管中送檢(一管做真菌培養(yǎng)和墨汁染色一管測(cè)隱球菌抗原和其他培養(yǎng))；

14．2.4呼吸道及泌尿生殖道：其深部真菌感染標(biāo)本采集同一般菌培養(yǎng)標(biāo)本。

15厭氧菌感染培養(yǎng)標(biāo)本的采集：

15.1標(biāo)本采集：

15.1.1標(biāo)本不能被正常菌群污染,采集時(shí)盡量避免接觸空氣,立即送檢,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作;15.1.2血液及其他體液(胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、膽汁、腦脊液等)注入?yún)捬跹囵B(yǎng),立即送檢;15.1.3深部膿腫,在病灶部位開(kāi)放前取材,可用針管抽取,針頭用無(wú)菌膠塞密封,也可用血?dú)獠杉槼槿?立即送檢;

15.1.4抽出液體標(biāo)本后,要盡快排除注射器內(nèi)的空氣。15.2標(biāo)本運(yùn)送：

152.1注意事項(xiàng)：標(biāo)本采集后不得冰箱儲(chǔ)存,必須盡快(半小時(shí)內(nèi))送實(shí)驗(yàn)室;15.2.2運(yùn)送方法:a 注射器運(yùn)送(標(biāo)本抽取后盡快排除空氣)或接種道專(zhuān)門(mén)的運(yùn)送培養(yǎng)基中直接運(yùn)送;b 含運(yùn)送培養(yǎng)基的無(wú)氧小瓶運(yùn)送;c 厭氧罐運(yùn)送(組織塊);d 大量液體標(biāo)本運(yùn)送時(shí)要裝滿(mǎn)標(biāo)本瓶兵立即驅(qū)氧,加蓋運(yùn)送;e 一般不采用棉拭子法

二 微生物檢驗(yàn)報(bào)告的解讀

1細(xì)菌室藥敏試驗(yàn)中常選用的抗生素種類(lèi)

氨基糖甙類(lèi)：阿米卡星、慶大霉素 1代頭孢：頭孢唑啉 2代頭孢：頭孢呋辛鈉

3代頭孢：頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟（馬斯平）單環(huán) β-內(nèi)酰胺類(lèi)：氨曲南

廣譜青霉素類(lèi)：氨芐西林、青霉素G、苯唑西林 抗假單胞菌廣譜青霉素：哌拉西林

復(fù)方β-內(nèi)酰胺類(lèi)：阿莫西林-克拉維酸（奧格門(mén)?。┌逼S西林-舒巴坦（優(yōu)力新）哌拉西林-他唑巴坦（特治星）頭孢哌酮-舒巴坦（舒普深）碳青霉烯類(lèi)：亞胺培南、美羅培南 多肽類(lèi)：多粘菌素E、替考拉寧 萬(wàn)古霉素 磺胺類(lèi)：復(fù)方新諾明（甲氧芐唑-磺胺甲唑）林可霉素類(lèi)：克林霉素 大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)：紅霉素 氯霉素：氯霉素

三代喹諾酮：環(huán)丙沙星、氧氟沙星 左旋氧氟沙星、莫西沙星 四環(huán)素類(lèi)：四環(huán)素 利福平

2.耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），CLS I規(guī)定，葡萄球菌如對(duì)苯唑西林（或甲氧西林）耐藥：對(duì)青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)、碳青霉烯類(lèi)和含酶抑制劑的復(fù)方制劑均應(yīng)報(bào)告耐藥，而不考慮體外藥敏結(jié)果。

3.耐高濃度慶大霉素腸球菌

CLS I規(guī)定，腸球菌引起的全身性嚴(yán)重感染 常聯(lián)合應(yīng)用 β-內(nèi)酰胺類(lèi)和氨基糖肽類(lèi)抗生素，如果腸球菌對(duì)高濃度慶大霉素耐藥，則聯(lián)合用藥無(wú)效

三 與臨床溝通中常見(jiàn)的問(wèn)題

? 為什么微生物的報(bào)告時(shí)間這么慢？ ? 為什么培養(yǎng)回報(bào)有細(xì)菌而病人情況良 ？ ? 為什么送檢的是膿痰卻沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果 ？ ? 培養(yǎng)陽(yáng)性的細(xì)菌都需要用抗菌藥物治療嗎？ ? 選擇藥敏報(bào)告敏感的藥物，為什么臨床治病無(wú)效？

1.為什么微生物的報(bào)告時(shí)間這么慢

微生物的工作流程

細(xì)菌培養(yǎng)：接種標(biāo)本，培養(yǎng)24~48小時(shí)

分離標(biāo)本： 24~48 小時(shí)（需要時(shí)）

藥敏： 18~24 小時(shí) 發(fā)結(jié)果： 陰性48小時(shí)

陽(yáng)性？

真菌培養(yǎng):因?yàn)樯L(zhǎng)緩慢，時(shí)間更長(zhǎng)

2.涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？

涂片鏡檢是報(bào)告所有檢見(jiàn)的細(xì)菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。一些苛氧菌需在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)。

3.尿培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告“三種以上細(xì)菌混合生長(zhǎng)”代表什么？

泌尿系統(tǒng)感染一般為一種細(xì)菌，有時(shí)可能有二種，但培養(yǎng)出三種或以上細(xì)菌說(shuō)明標(biāo)本污染，需要重新留取標(biāo)本再做培養(yǎng)。

4.為什么培養(yǎng)回報(bào)有細(xì)菌而病人情況良好？

抗菌藥物使用 或定植菌或污染菌

5.為什么送檢的是膿痰卻沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果？

5.1 是否送檢前使用抗生素

5.2送檢是否及時(shí)，痰涂片可能幫助判斷 5.3 并不是感染性疾病，比如慢怚肺、老慢支 等 5.4實(shí)驗(yàn)室操作不規(guī)范

6.為什么化膿性感染病灶中取膿汁培養(yǎng)陽(yáng)性低

膿液是由壞死的組織和吞噬了細(xì)菌而死亡的白細(xì)胞組成，都是無(wú)任何營(yíng)養(yǎng)的物質(zhì)，而細(xì)菌一般都需要在高營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境中才能生長(zhǎng)，另白細(xì)胞釋放的溶菌酶對(duì)細(xì)菌有殺滅作用，因此，在膿液活細(xì)菌較少。將膿液擠干凈后在肉芽生長(zhǎng)處取標(biāo)本送檢，如果化膿性病灶尚未破潰，要用注射器穿刺到一定深度（肉芽附近處）取標(biāo)本送檢。

7.明顯稀便，培養(yǎng)結(jié)果為何正常 ？

大便普通培養(yǎng)，通常只能鑒定志賀菌、沙門(mén)菌感染，致病性大腸桿菌。懷疑霍亂時(shí)，需開(kāi)霍亂弧菌培養(yǎng)?？赡懿《靖腥?輪狀病毒 輪狀病毒)8培養(yǎng)陽(yáng)性的細(xì)菌都需要用抗菌藥物治療嗎？

8.1.培養(yǎng)陽(yáng)性感染：可能為污染菌（血培養(yǎng)），可能為定植菌（痰），），任何結(jié)果必須結(jié)合臨床情況進(jìn)行評(píng)價(jià)－很重要

8.2.感染部位的清創(chuàng)，引流，換藥比使用抗菌藥物更重要

8.3.改善患者全身情況，器官功能支持，糾正酸堿電解質(zhì)紊亂，低蛋白血癥，高血糖等

9選擇藥敏報(bào)告敏感的藥物為什么治療無(wú)效？

9.1體外藥敏試驗(yàn)只能預(yù)測(cè)體內(nèi)治療效果，并不完全等同 9.2.可能不是真正的致病菌（污染或定植）9.3.細(xì)菌本身因素（如誘導(dǎo)耐藥，生物被膜）

CLSI中提示：部分細(xì)菌3天內(nèi)即可發(fā)展為耐藥，臨床治病3-4天后，應(yīng)重新分離細(xì)菌做藥敏試驗(yàn)

9.5感染部位與藥代動(dòng)力學(xué)因素 給藥劑量與用藥方式 ：時(shí)間依賴(lài)性、濃度依賴(lài)性、抗生素后效應(yīng)、特殊人群等因素。

9.6.感染原發(fā)灶 藥敏試驗(yàn)僅報(bào)告細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性，但不同部位的感染，因根據(jù)藥物濃度分布選擇抗菌藥物，藥物劑型和生物利用度（純品，商品）

10.是否能將所有的藥都做藥敏試驗(yàn)

10.1沒(méi)有必要：通過(guò)耐藥機(jī)制和標(biāo)志性藥物可以預(yù)測(cè)其他抗菌藥物的敏感性，抗生素的等效性：是指用一種相關(guān)抗生素的試驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè)同類(lèi)抗生素體內(nèi)抗菌活性。此特性允許檢測(cè)少數(shù)幾種抗生素而不影響臨床對(duì)其他抗生素的廣泛選擇，試驗(yàn)的藥物代表一類(lèi) 藥，而不是一種藥。

如對(duì)腸桿菌頭孢噻吩與其他一代頭孢具有等效性，可用頭孢噻吩結(jié)果預(yù)測(cè)其他一代頭孢。10.2.沒(méi)有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗(yàn)（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標(biāo) 準(zhǔn)和解釋標(biāo)準(zhǔn)）有些細(xì)菌對(duì)某類(lèi)抗生素天然耐藥，則不需要做藥敏試驗(yàn) 比如：嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)天然耐藥，治療首選復(fù)方新諾明。

11.鑒定結(jié)果明明寫(xiě)著四聯(lián)球菌、革蘭氏陽(yáng)性桿菌，為何沒(méi)有藥敏結(jié)果？

四聯(lián)球菌為微球菌，一般不引起人體致病，為非致病菌，故考慮污染可能。藥敏結(jié)果參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)，目前革蘭氏陽(yáng)性菌沒(méi)有參照標(biāo)準(zhǔn)，故暫不能做藥敏試驗(yàn)，若需治療可參照陽(yáng)性球菌用藥。

12.藥敏試驗(yàn)報(bào)告中MIC越小的抗菌藥物效果越好？

感染菌對(duì)同一種藥物的MIC越小，效果越好，不同種抗菌藥物之間 MIC無(wú)可比性，目前很多儀器報(bào)告的是檢測(cè)折點(diǎn)，而不是真正的MIC 四 對(duì)臨床的要求

臨床醫(yī)生應(yīng)為實(shí)驗(yàn)室提供有用的臨床信息，以便實(shí)驗(yàn)室有針對(duì)性地對(duì)可能的病原體進(jìn)行鑒定。臨床醫(yī)生對(duì)藥敏測(cè)定方法和微生物學(xué)知識(shí)有一定的了解，以更好地理解藥敏試驗(yàn)報(bào)告中驗(yàn)報(bào)告中 S、I、R臨床意義，以及體內(nèi)、體外藥敏不一致的現(xiàn)象。增強(qiáng)特殊標(biāo)本的微生物送檢的意識(shí)，提高診斷的陽(yáng)性率。

五 呼 吁

1.請(qǐng)盡量在早上送檢標(biāo)本 2.請(qǐng)正確留取痰標(biāo)本

3.請(qǐng)正確填寫(xiě)標(biāo)本部位及名稱(chēng)

4.血培養(yǎng)－感染性疾病的病原學(xué)診斷有效手段 5.個(gè)別特殊病歷多溝通，6.反饋抗生素療效（藥敏結(jié)果與臨床療效不符時(shí)）7.科研合作

第四篇：食品理化檢驗(yàn)樣品的采集、收樣與檢驗(yàn)

食品理化檢驗(yàn)樣品的采集、收樣與檢驗(yàn)

食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)樣品的采集和處理......................................................................................................1 生活飲用水水樣的采集、收樣與檢驗(yàn)..........................................................................................................3 食品理化檢驗(yàn)樣品的采集、收樣與檢驗(yàn)......................................................................................................6

食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)樣品的采集和處理

一、范圍

適用于各類(lèi)食品樣品的采樣。

二、采樣用品

滅菌探子、鏟子、匙、采樣器、試管、吸管、廣口瓶、剪子、開(kāi)罐器等。

三、樣品的采集

在食品檢驗(yàn)中，所采集的樣品必須有代表性。食品中因其加工批號(hào)、原料情況（來(lái)源、種類(lèi)、地區(qū)、季節(jié)等）、加工方法、運(yùn)輸、保藏條件、銷(xiāo)售中的各個(gè)環(huán)節(jié)（例如有無(wú)防蠅、防污染、防蟑螂及防鼠等設(shè)備）及銷(xiāo)售人員的責(zé)任心和衛(wèi)生認(rèn)識(shí)水平等均可影響食品衛(wèi)生質(zhì)量，因此必須考慮周密。

1、采樣數(shù)量

每批樣品要在容器的不同部位采取，一般定型包裝食品采取一袋/瓶（不少于250g）及散裝食品采取250g.2、采樣方法

(1)采樣必須在無(wú)菌操作下進(jìn)行。(2)根據(jù)樣品種類(lèi)，袋裝、瓶裝和罐裝食品，應(yīng)采完整的未開(kāi)封的樣品。如果樣品很大，則需要無(wú)菌采樣器 取樣；固體粉末樣品，應(yīng)邊取邊混合；液體樣品通過(guò)振搖混勻；冷凍食品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)（可放在冰內(nèi)、冰箱的冷盒內(nèi)或低溫冰箱內(nèi)保存），非冷凍食品需在1℃～5℃中保存。

3、采樣標(biāo)簽

采樣前或后應(yīng)貼上標(biāo)簽，每件樣品必須標(biāo)記清楚(如品名、來(lái)源、數(shù)量、采樣地點(diǎn)、采樣人及采樣時(shí)間等)。

四、送檢

樣品送到微生物檢驗(yàn)室應(yīng)越快越好。如果路途遙遠(yuǎn)，可將不需冷凍樣品保持在1℃～5℃環(huán)境中(如冰壺)。如需保持冷凍狀態(tài)，則需保存在泡沫塑料隔熱箱內(nèi)（箱內(nèi)有干冰可維持在0℃以下）。送檢時(shí)，必須認(rèn)真填寫(xiě)申請(qǐng)單，以供檢驗(yàn)人員參考。

五、檢驗(yàn)

微生物檢驗(yàn)室接到送檢申請(qǐng)單，應(yīng)立即登記，填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求，立即將樣品放在冰箱或冰盒中，積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。

各食品微生物檢驗(yàn)室必須備有專(zhuān)用冰箱存放樣品。一般陽(yáng)性樣品，發(fā)出報(bào)告后3d(特殊情況 適當(dāng)延長(zhǎng))，方能處理樣品。進(jìn)口食品的陽(yáng)性樣品，需保存6個(gè)月，方能處理。陰性樣品可及時(shí)處理。

檢驗(yàn)完后，檢驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)填寫(xiě)原始記錄，簽名后，送質(zhì)控辦 出具檢驗(yàn)報(bào)告。

生活飲用水水樣的采集、收樣與檢驗(yàn)

一、范圍

本規(guī)范規(guī)定了生活飲用水及水源水的采集、收樣與方法。本規(guī)范適用于生活飲用水及水源水的采集、收樣與檢驗(yàn)。

二、生活飲用水水樣的采集

1、采樣點(diǎn)的選擇

采樣點(diǎn)的設(shè)置應(yīng)有代表性，應(yīng)分別設(shè)在水源取水口、集中式供水單位出水口和居民經(jīng)常用水點(diǎn)處。管網(wǎng)水的采樣點(diǎn)數(shù)，一般按供水人口每?jī)扇f(wàn)人設(shè)一個(gè)點(diǎn)計(jì)算，供水人口在20萬(wàn)以上、100萬(wàn)以下時(shí)，可酌量増減。在全部采樣點(diǎn)中，應(yīng)有一定的點(diǎn)數(shù)選在易受污染的地點(diǎn)和管網(wǎng)系統(tǒng)陳舊部位。

具體采樣點(diǎn)的選擇，應(yīng)由供水單位和當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門(mén)根據(jù)本地區(qū)具體情況確定。

2、水樣量的體積

水樣的體積，取決于所分析項(xiàng)目的多少以及選用的測(cè)定方法。分析常規(guī)水質(zhì)項(xiàng)目，只需要3-5升水樣，取樣量應(yīng)能滿(mǎn)足欲測(cè)項(xiàng)目的需要。對(duì)于細(xì)菌與化學(xué)檢驗(yàn)，由于采集、處理、容器等的不同，不能應(yīng)用同一瓶水樣。

3、水樣容器

樣品瓶可用硼硅玻璃瓶或聚乙烯塑料瓶，必須能夠用塞或蓋緊緊密封。

(1)選擇容器的原則: a、容器不能是新的污染源。

b、容器壁不應(yīng)吸收或吸附某些待測(cè)組分。

c、容器不應(yīng)與待測(cè)組分發(fā)生反應(yīng)。(2)容器的清洗原則

按水樣待測(cè)組分的要求來(lái)確定清洗容器的原則。(3)用于微生物檢驗(yàn)樣品的容器

容器及瓶塞、瓶蓋應(yīng)能經(jīng)受滅菌的溫度，并且在這個(gè)溫度下不釋放或產(chǎn)生任何能抑制生物活動(dòng)或?qū)е滤劳龌虼龠M(jìn)生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì)。為了除去余氯，在滅菌前向容器里加入硫代硫酸鈉以還原余氯[每次125ml水樣加0.1ml硫代硫酸鈉溶液（100g/L）]。

熱力滅菌分干熱和高壓蒸氣滅菌兩類(lèi)。高壓蒸氣滅菌法要求121℃，15min,即可殺死芽孢。干熱滅菌法殺死芽孢需160-180℃、維持2h。

4、樣品保存

水樣從采集到分析這段時(shí)間里，由于物理的、化學(xué)的、生物的作用會(huì)發(fā)生不同程度的變化，原則上應(yīng)盡快測(cè)定。

（1）影響水質(zhì)變化的因素

生物作用、化學(xué)作用、物理作用。（2）水樣保存措施

通常將水樣充滿(mǎn)容器并密封，但對(duì)冷凍保存的水樣不應(yīng)充滿(mǎn)容器。

水樣保存，應(yīng)達(dá)到：減慢生物或微生物作用，減慢化合物或絡(luò)合物水解，避免分解，減少揮發(fā)與容器的吸附損失。保存方法，可采用控制pH值、加入化學(xué)劑、冷藏或冷凍。應(yīng)根據(jù)具體組分選定適宜的保存方法。

5、現(xiàn)場(chǎng)采樣和記錄（1）現(xiàn)場(chǎng)采樣

采集井水時(shí),須先用泵充分抽水，以保證樣品真正代表地下水源的實(shí)況。

采集自來(lái)水時(shí)，應(yīng)開(kāi)啟龍頭，適當(dāng)放水?dāng)?shù)分鐘后再取樣，微生物樣品應(yīng)放水?dāng)?shù)分鐘后關(guān)閉龍頭，用酒精棉球擦試龍頭口并點(diǎn)燃酒精棉球酌燒龍頭口后迅速采樣封口。

（2）采樣記錄

在采樣現(xiàn)場(chǎng)把采樣記錄用膠紙粘貼或懸掛標(biāo)簽于水樣瓶上,注明水樣編號(hào)、采樣者、日期、時(shí)間及地點(diǎn)等。

三、水樣的接收

檢驗(yàn)人員接到樣品后，應(yīng)與《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》所注明的內(nèi)容進(jìn)行認(rèn)真核對(duì)，核實(shí)無(wú)誤，檢驗(yàn)人員在《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知 單》上簽名，接收樣品并做好收樣等記；核實(shí)有誤，則將樣品與《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》退回質(zhì)控辦核查。

四、水樣的檢驗(yàn)

接收樣品后，依據(jù)《生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范》中《生活飲用水檢驗(yàn)規(guī)范》，針對(duì)《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》所標(biāo)明的檢驗(yàn)項(xiàng)目，選取適合本實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)方法，在規(guī)定時(shí)限內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)和校核.食品理化檢驗(yàn)樣品的采集、收樣與檢驗(yàn)

一、范圍

本規(guī)范規(guī)定了食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分樣品的采集、收樣與檢驗(yàn)的基本原則和要求。

本規(guī)范適用于食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法理化部分。

二、采樣原則

食品采樣是指從較大批量食品中抽取能較好地代表其總體樣品的方法。因此，應(yīng)遵循下列采樣原則：

1、代表性

在大多數(shù)情況下,待鑒定食品不可能全部進(jìn)行檢測(cè),而只能抽取其中的一部分作為樣品,因此,所采的樣品應(yīng)能夠較好地代表待鑒定食品各方面的特性。

2、真實(shí)性

采樣人員應(yīng)親臨現(xiàn)場(chǎng)采樣,以防止在采樣過(guò)程中的作假或偽 造食品。所有采樣用具都應(yīng)清潔、干燥、無(wú)異味、無(wú)污染食品的可能。應(yīng)盡可能避免使用對(duì)樣品可能造成污染或影響檢驗(yàn)結(jié)果的采樣工具和采樣容器。

3、準(zhǔn)確性

性質(zhì)不同的樣品必須分開(kāi)包裝，并應(yīng)視為來(lái)自不同的總體；采樣方法應(yīng)符合要求，采樣的數(shù)量應(yīng)滿(mǎn)足檢驗(yàn)及留樣的需要；可根據(jù)感官性狀進(jìn)行分類(lèi)或分檔采樣；采樣記錄務(wù)必清楚地填寫(xiě)在采樣單上，并緊附于樣品。

4、及時(shí)性

采樣應(yīng)及時(shí),采樣后也應(yīng)及時(shí)送檢。尤其是檢測(cè)樣品中水分、微生物等易受環(huán)境因素影響的指標(biāo)，或樣品中含有揮發(fā)性物質(zhì)或易分解破壞的物質(zhì)時(shí)，應(yīng)及時(shí)赴現(xiàn)場(chǎng)采樣并盡可能縮短從采樣到送檢的時(shí)間。

三、樣品采集

1、采樣應(yīng)注意樣品的生產(chǎn)日期、批號(hào)、代表性和均勻性(摻偽食品和食物中毒樣品除外)。采集的數(shù)量應(yīng)能反映該食品的衛(wèi)生質(zhì)量和滿(mǎn)足檢驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)樣品量的需要，一式三份，供檢驗(yàn)、復(fù)驗(yàn)、備查或仲裁，一般散裝樣品每份不少于0.5Kg。

2、采樣容器根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目,選用硬質(zhì)玻璃瓶或聚乙烯制品。

3、液體、半流體飲食品如植物油、鮮乳、酒或其他飲料，如用大桶或大罐盛裝著，應(yīng)先充分混勻后再采樣。樣品應(yīng)分別盛放 在三個(gè)干凈的容器中。

4、糧食及固體食品應(yīng)自每批食品上、中、下三層的不同部位分別采取部分樣品,混合后按四分法對(duì)角取樣,最后取有代表性樣品。

5、肉類(lèi)、水產(chǎn)等食品應(yīng)按分析項(xiàng)目要求分別采取不同部位的樣品或混合后采樣。

6、罐頭、瓶裝食品或其他小包裝食品，應(yīng)根據(jù)批號(hào)隨機(jī)取樣，同一批號(hào)取樣件數(shù)，250g以上的包裝不得少于6個(gè)，250g以下的包裝不得少于10個(gè)。

7、摻偽食品和食物中毒的樣品采集，要具有典型性。

四、樣品的接收

檢驗(yàn)人員接到樣品后，應(yīng)與《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》所注明的內(nèi)容進(jìn)行認(rèn)真核對(duì)，核實(shí)無(wú)誤，檢驗(yàn)人員在《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》上簽名，接收樣品并做好收樣等記；核實(shí)有誤，則將樣品與《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》退回質(zhì)控辦核查。

五、樣品的檢驗(yàn)

接收樣品后，依據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009-2003《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法

理化部分》，針對(duì)《樣品檢測(cè)流轉(zhuǎn)通知單》所標(biāo)明的檢驗(yàn)項(xiàng)目，選取適合本實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)方法，在規(guī)定時(shí)限內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)和校核。

第五篇：臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制及應(yīng)注意問(wèn)題

臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制及應(yīng)注意問(wèn)題

免疫檢測(cè)目前涉及的范圍極廣泛，各種病原微生物抗體檢測(cè)（特別是各型肝炎及艾滋病是各種醫(yī)院必查項(xiàng)）。腫瘤標(biāo)志物、一般免疫標(biāo)志（如：免疫球蛋白、補(bǔ)體等）、激素等檢測(cè)一般均歸于免疫檢測(cè)范圍內(nèi)。對(duì)一般全自動(dòng)化免疫儀器，一般注意定期校準(zhǔn)和做好室內(nèi)和室間質(zhì)控較容易，但涉及到酶標(biāo)儀的工作的質(zhì)控是較難進(jìn)行的。以下討論質(zhì)控的一般概念及應(yīng)注意事項(xiàng)。

一、質(zhì)控目的

同其他專(zhuān)業(yè)一樣，保證免疫檢驗(yàn)質(zhì)量，使其具有較高的重復(fù)性、準(zhǔn)確性和各試驗(yàn)之間的結(jié)果可比性。原則及方法與其它專(zhuān)業(yè)質(zhì)控類(lèi)似。

二、免疫檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化

免疫檢驗(yàn)結(jié)果可比性很差，原因一是實(shí)驗(yàn)方法不統(tǒng)一，二是缺少用于參考比較的標(biāo)準(zhǔn)試劑，標(biāo)準(zhǔn)化迫在眉睫。1、方法標(biāo)準(zhǔn)化（１）實(shí)驗(yàn)方法分類(lèi) ①?zèng)Q定性方法

準(zhǔn)確度高，系統(tǒng)誤差小，測(cè)值接近真值。

用途：標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)；參考方法評(píng)價(jià)(一般不用于常規(guī)工作)②參考方法

被決定性方法證實(shí)干擾因素少，測(cè)量結(jié)果可靠。

用途：鑒定常規(guī)方法；質(zhì)控品定值(有條件實(shí)驗(yàn)室可用于常規(guī)工作)③常規(guī)方法

有足夠的精密度、準(zhǔn)確性、特異性和適當(dāng)分析范圍。

用途：經(jīng)方法評(píng)估和學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后推薦為常規(guī)方法。

例如： HBsAg 定量

決定性方法——紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白

參考方法——高標(biāo)記率固相放免

常規(guī)方法——酶標(biāo)（２）實(shí)驗(yàn)方法選擇原則

①實(shí)用性：速度快、標(biāo)本用量少、操作簡(jiǎn)便、安全可行。②可信性：精密度、準(zhǔn)確度、敏感性、特異性均達(dá)到要求。（３）方法的評(píng)估

參數(shù)設(shè)定 真陽(yáng)性 TP，真陰性 TN，假陽(yáng)性 FP，假陰性 FN。①敏感性

患者中陽(yáng)性百分率(理想 100 ％)

公式：②特異性 × 100 ％

非患者中陰性百分率(理想 100 ％)

公式：③診斷指數(shù) × 100 ％

①十②，理想為 200 ％，不宜采用范圍(100 — 170 ％)④診斷效率

某試驗(yàn)性準(zhǔn)確區(qū)分患者及非患者能力

公式：⑤陽(yáng)性預(yù)測(cè)值

X100 ％

在所有陽(yáng)性結(jié)果中真正患者百分率。(理想 100 ％)

公式：⑥陰性預(yù)測(cè)值 × 100 ％

在所有陰性結(jié)果中非患者百分率。(理想 100 ％)

公式 ： 2、試劑標(biāo)準(zhǔn)化（１）分級(jí) ① WHO 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品 ② WHO 國(guó)際參考品 ③國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品 × 100 ％

按國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)制的標(biāo)準(zhǔn)品，效力單位與①?lài)?yán)格一致。④研究室或廠家標(biāo)準(zhǔn)品

暫時(shí)用于工作的標(biāo)準(zhǔn)品，自行效價(jià)，但有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品后，必須標(biāo)化。⑤免疫學(xué)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品和參考品

一般用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品或國(guó)際參考品標(biāo)化的用于質(zhì)控的物質(zhì)。（２）免疫常用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品和參考品

免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)控常用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品和參考品

三、常用免疫質(zhì)控 1、質(zhì)控一般要求（１）標(biāo)本收集及處理

每種標(biāo)本有一定收集要求，應(yīng)與臨床醫(yī)生、負(fù)責(zé)取血者及運(yùn)送標(biāo)本者交代清楚以便配合。有些標(biāo)本要求特殊，應(yīng)特別注意，例如測(cè)補(bǔ)體標(biāo)本不能存于室溫或 4 ℃ 活化影響檢測(cè)。HBeAg 不能反復(fù)凍融，破壞蛋白。

（２）儀器的校準(zhǔn)與標(biāo)定(以酶標(biāo)儀為例)

在免疫檢測(cè)中酶標(biāo)儀是最常使用的儀器，儀器的校準(zhǔn)一定要定時(shí)進(jìn)行（一般使用頻繁不超過(guò)半年，一般使用不超過(guò)一年）。校準(zhǔn)應(yīng)在儀器購(gòu)買(mǎi)時(shí)請(qǐng)廠家對(duì)性能光路等校準(zhǔn)并給出參數(shù)。此時(shí)，應(yīng)做功能校準(zhǔn)，選取定值校準(zhǔn)品（含不同滴度及陰、陽(yáng)標(biāo)本）4-5 天檢測(cè)。其中對(duì)實(shí)驗(yàn)影響較大的加樣器及水浴用溫度計(jì)均應(yīng)進(jìn)行計(jì)量校準(zhǔn)后使用，前者可采用稱(chēng)重法校準(zhǔn)，后者可到國(guó)家計(jì)量單位進(jìn)行。（３）對(duì)照及質(zhì)控品

對(duì)照（一般指陰、陽(yáng)對(duì)照）最好使用與被測(cè)樣品同類(lèi)物質(zhì)。質(zhì)控品一般可來(lái)自質(zhì)控控制單位（如：各級(jí)臨檢中心），必要時(shí)可自制，但最好應(yīng)與有溯源性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比對(duì)。定量者可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。自身抗體等可使用國(guó)際通用陽(yáng)性對(duì)照血清。質(zhì)控品一般應(yīng)包括高、中、低三種滴度。2、酶標(biāo)方法實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控（１）實(shí)驗(yàn)前

特別要注意標(biāo)本要求不溶血、無(wú)乳糜，并注意貯存溫度。儀器應(yīng)做好校準(zhǔn)和標(biāo)定。其中酶標(biāo)儀在購(gòu)買(mǎi)時(shí)應(yīng)注意到廠家提供的光路校準(zhǔn)及技術(shù)要求，（注意最好無(wú)漂移）。安裝后要進(jìn)行功能校準(zhǔn)。定性校準(zhǔn)選陰性，高、中、低值陽(yáng)性血清各 2 份連續(xù)進(jìn)行 5天檢測(cè)。定量校準(zhǔn)在 96 孔板上選 20 處，隨機(jī)測(cè)定，結(jié)果與標(biāo)定值比較應(yīng)在 ± 2SD 內(nèi)。加樣器應(yīng)定期校準(zhǔn)。水浴箱除對(duì)溫度計(jì)校準(zhǔn)外，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)溫度計(jì)均應(yīng)復(fù)測(cè)。（２）實(shí)驗(yàn)中

① 按校準(zhǔn)程序操作，不得隨意減省操作步驟。②質(zhì)控分為室內(nèi)和室間質(zhì)控。

一般室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)據(jù)工作量多寡決定間隔時(shí)間。質(zhì)控物質(zhì)可購(gòu)買(mǎi)或自己標(biāo)定，但要注意應(yīng)有高、中、低值陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品。一定要設(shè)立低值者。除定期開(kāi)展質(zhì)控外，在實(shí)驗(yàn)不穩(wěn)定時(shí)要及時(shí)做。特別注意要每月做圖總結(jié)。對(duì)失控應(yīng)有記錄并分析原因提出處理意見(jiàn)。在判斷失控上可使用 Westgard 規(guī)則，特別要注意以下幾種情況。

Ａ： l 2S ：一質(zhì)控點(diǎn)在 ± 2S 之外應(yīng)警惕。

Ｂ： R 4S ：連續(xù) 2 個(gè)質(zhì)控點(diǎn)相差 >4S。

Ｃ： 4 1S ：連續(xù) 4 個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落同側(cè)± 1S 之外。

Ｄ：７ X ：連續(xù) 7 個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落均值一側(cè)。

Ｅ： 7 ↑／↓：連續(xù) 7 個(gè)質(zhì)控點(diǎn)均↑或↓同一周期變化。（３）實(shí)驗(yàn)后

質(zhì)控時(shí)還應(yīng)注意收集臨床資料，隨時(shí)調(diào)整。（４）開(kāi)展質(zhì)控特別應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題 ①試劑盒內(nèi)陰、陽(yáng)對(duì)照與質(zhì)控不完全相等

臨界值質(zhì)控品是保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的關(guān)鍵。

作用：

Ａ：控制靈敏度，可測(cè)試劑盒靈敏度是否達(dá)標(biāo)。

Ｂ：控制精密度，連測(cè) 20 次，可獲得均值 ②室內(nèi)質(zhì)控不合格的失控處理

Ａ：停止發(fā)放報(bào)告。

Ｂ：查找原因：質(zhì)控品是否有效，試劑、儀器及操作等，必要時(shí)重校準(zhǔn)儀器，做試劑比對(duì)。重新合格后報(bào)告負(fù)責(zé)人方能發(fā)出報(bào)告。③關(guān)于室間質(zhì)控

Ａ：如部、市均未開(kāi)展室間質(zhì)評(píng)的試驗(yàn)應(yīng)定時(shí)比對(duì)(例：抗 HP)

Ｂ： 80 ％以下得分應(yīng)找原因及時(shí)糾偏。

和標(biāo)準(zhǔn)差 SD。做質(zhì)控圖，控制室內(nèi)精密度。