第一篇：提交 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案匯總[精選]

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

Cell Biology Experiment

目 錄

1.顯微鏡的結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)觀察、大小測量和死活細(xì)胞鑒定 2.液泡系和線粒體的活體染色 3.葉綠體的分離與觀察

4.DNA的細(xì)胞化學(xué)——Feulgen反應(yīng) 5.多糖的顯示——PAS反應(yīng)

6.細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和總體蛋白的原位顯示 7.細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微觀察和永久制片技術(shù) 8.植物原生質(zhì)體的制備與融合 9.蠶豆根尖微核試驗(yàn) 10.膜的通透性

11.血細(xì)胞的分化和不同類型血細(xì)胞的觀察

實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求

1．注意頁面四邊留白，不要擠到頁邊！2．抬頭填寫完整。

3．注意事項(xiàng)自己總結(jié)，不要抄襲！4．組長檢查后上交存檔。

生物繪圖注意事項(xiàng)

1．2H 以上繪圖鉛筆削尖、繪圖橡皮、直尺

2．邊看顯微鏡邊按視野中實(shí)際情況繪圖，以精確為主，不能藝術(shù)加工。

3．應(yīng)找到最典型、最能說明繪圖目的的物像來繪圖。先輕勾出輪廓，檢查無誤后，再以準(zhǔn)確清晰的線作最后描繪。

①實(shí)線表示輪廓，虛線表示被遮蔽但需表現(xiàn)的輪廓，線粗細(xì)應(yīng)均勻有規(guī)律

②圓點(diǎn)的疏密表示明暗、凹凸（越暗的地方點(diǎn)越多）點(diǎn)點(diǎn)時(shí)筆尖直立，點(diǎn)大小、疏密要均勻、整齊、渾圓，不能像“，”。

4．用尺向右側(cè)引出水平指示線，線右端平齊字注在右側(cè)。圖下方寫上所畫圖的名稱及放大倍數(shù)。圖的右側(cè)和下方需寫文字說明，所以圖應(yīng)繪在繪圖紙上偏左上方的位置。

5．一幅圖只要詳細(xì)畫出部分結(jié)構(gòu)，其余勾畫出輪廓即可。

規(guī)范

不規(guī)范

實(shí)驗(yàn)一 普通顯微鏡的使用及細(xì)胞形態(tài)觀察、大小測量和死活細(xì)胞鑒定

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1．熟悉普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造和性能，掌握使用方法。2．了解細(xì)胞的一般形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)。

3．掌握顯微測微尺的使用，對細(xì)胞大小有一直觀認(rèn)識(shí)。4．了解鑒定死活細(xì)胞的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

1．顯微測微尺的使用

鏡臺(tái)測微尺：表示絕對長度，長1 mm，分成100小格，每小格為0.01mm。不被用來直接測量，而是用它來校正目鏡測微尺，故其質(zhì)量對所測微體影響極大。

目鏡測微尺：是一塊比目鏡筒內(nèi)徑稍小的有標(biāo)尺的圓形玻璃片，標(biāo)尺長10毫米、分為100格。需要鏡臺(tái)測微尺校正為絕對長度再測定細(xì)胞大小。

2．死活細(xì)胞鑒定:臺(tái)盼藍(lán)是一種低毒的活體染色劑，只能透過質(zhì)膜受損的細(xì)胞或死細(xì)胞。

三、實(shí)驗(yàn)用品 1．試驗(yàn)材料：

洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞

口腔上皮細(xì)胞、（人的口腔上皮細(xì)胞是扁平、多邊形的，形狀不很規(guī)）

2．試劑

0.2%臺(tái)盼藍(lán)溶液 3．儀器

測微尺（2套）、普通光學(xué)顯微鏡、刀片、鑷子、玻璃滴管、吸水紙、牙簽。

四、試驗(yàn)方法

一、細(xì)胞死活的鑒定

0.2%臺(tái)盼藍(lán)染色5-10分鐘后進(jìn)行觀察。

二、細(xì)胞大小測量

1）測量時(shí)，鏡臺(tái)微臺(tái)尺換成樣本，2)目鏡測微尺來測量細(xì)胞的大小

3)改變顯微鏡的放大倍率，則需對目鏡測微尺重新進(jìn)行標(biāo)定。

三、細(xì)胞形態(tài)的觀察

五、注意事項(xiàng)

取口腔黏膜上皮細(xì)胞注意的問題

1．口腔上皮細(xì)胞主要分布在口腔兩側(cè)頰部。用消毒牙簽的鈍端，在漱凈的口腔任意一側(cè)的頰部，輕輕刮幾下。

2．取材前，口腔一定要用清水漱凈，去除口腔內(nèi)的食物殘?jiān)?/p>

3．用方簽在口腔壁上輕輕刮動(dòng)，不要刮在牙縫里，因?yàn)檠例X上刮下來的是食物碎屑，不是口腔上皮細(xì)胞。

六、作業(yè)

1．繪制口腔黏膜上皮細(xì)胞及洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞圖（2-3個(gè)細(xì)胞）

2．列表寫出洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞長軸、短軸長度，并計(jì)算平均值。（取3個(gè)細(xì)胞）3．取口腔黏膜上皮細(xì)胞注意的問題 4．生物繪圖注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)二 線粒體和液泡系的超活染色與觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解細(xì)胞和細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。

2、觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡的形態(tài)、數(shù)量和分布,了解植物細(xì)胞液泡系的發(fā)育過程。

二、實(shí)驗(yàn)原理

活體染色是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡。活染技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。

根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識(shí)別的目的。

體外活染又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。

活體染色之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的電化學(xué)特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對細(xì)胞無毒性或毒性極小的染料，而且總要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)的特性，易于被細(xì)胞吸收，Janus green B和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和液泡系的染色各有專一性。

線粒體是細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，線粒體內(nèi)膜上分布有細(xì)胞色素氧化酶，該酶能使詹姆斯綠B保持在氧化狀態(tài)，呈現(xiàn)藍(lán)綠色從而使線粒體顯色，而細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原成無色。液泡 5

是細(xì)胞內(nèi)濃縮產(chǎn)物的主要場所，有十分重要的功能。中性紅是液泡的特殊染色劑，將液泡染成紅色。在活細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不著色。如果細(xì)胞死亡，染料會(huì)彌散開來，使核著色。

三、實(shí)驗(yàn)用品

（一）器材

顯微鏡、恒溫水浴鍋、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙等。

（二）試劑

1、Ringer 溶液 生理鹽水、緩沖液

氯化鈉0.85g（變溫動(dòng)物用0.65g）；氯化鉀 0.25g ；

氯化鈣 0.03g ；蒸餾水100ml 2、10%、1/3000中性紅溶液

稱取0.5中性紅溶于50ml Ringer溶液，稍加熱（30-40度）使之很快溶解，用濾紙過濾，裝入棕色瓶于暗處保存，否則易氧化沉淀，失去染色能力。

臨用前，取已配制的1%中性紅溶液1ml，加入29mlRinger溶液混勻，裝入棕色瓶備用。3．1%、1/5000詹姆斯綠B溶液

稱取50mg詹姆斯綠B溶于5ml Ringer溶液中，稍加 微熱（30-40度）使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液，裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料

人口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞、小麥幼根根尖。

四、實(shí)驗(yàn)方法

(一)線粒體的超活染色與觀察

1、人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察

載玻片→ 37℃水浴鍋的金屬板→滴兩滴詹納斯綠B染液

牙簽→從口腔粘膜刮取上皮細(xì)胞→放入載玻片染液→染色10-15分鐘（注意不可使染液干燥, 必要時(shí)可再加滴染液）→蓋上蓋玻片用吸水紙吸去四周溢出的染液→觀察 2.洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒體的超活染色

載玻片→撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮滴→一滴詹納斯綠B染液→染色10-15分鐘 吸去染液→加一滴Ringer液，注意使洋蔥內(nèi)表皮展平→蓋上蓋玻片→觀察

（二）液泡系的超活染色與觀察

刀片→小麥幼苗根尖→切一縱切面→中性紅染色5-10分鐘

吸去染液→加一滴Ringer液→蓋上蓋玻片→鑷子輕輕下壓蓋玻片→觀察 五．實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在小麥根尖細(xì)胞制片中，可見細(xì)胞質(zhì)中散在很多大小不等的染成玫瑰紅色的圓形小泡，這是初生的幼小液泡。然后，由生長點(diǎn)向延長區(qū)觀察，在一些已分化長大的細(xì)胞內(nèi)，液泡的染色較淺，體積增大，數(shù)目變少。在成熟區(qū)細(xì)胞中，一般只有一個(gè)淡紅色的巨大液泡，占據(jù)細(xì)胞的絕大部分空間，將細(xì)胞核擠到細(xì)胞一側(cè)貼近細(xì)胞壁處。六．注意事項(xiàng)

1、詹姆斯綠B溶液現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充 分氧化能力。

2、實(shí)驗(yàn)中速度要快，以免組織細(xì)胞死亡。

七、作業(yè) ．畫出你所觀察到的線粒體和液泡的圖像.2 ．總結(jié)實(shí)驗(yàn)成功或失敗的原因.實(shí)驗(yàn)三 葉綠體的分離與觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過植物細(xì)胞葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞器分離的過程包括兩個(gè)主要階段：破碎細(xì)胞和細(xì)胞組分的分離。葉綠體的分離采用在等滲溶液中進(jìn)行組織勻漿、分離。葉綠體的分離采用差速離心或密度梯度離心法進(jìn)行。差速離心主要是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細(xì)胞器。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。差速離心的分辨率不高，沉降系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開，常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1.材料： 菠菜葉片

2.試劑：蒸餾水，0.35mol/L氯化鈉溶液

3.儀器：普通離心機(jī)、天平、顯微鏡、鑷子、載玻片、蓋玻片、離心管、吸水紙等

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.菠菜葉片(去葉脈)3g → 0.35mol/L氯化鈉15ml→研磨(冰浴)→勻漿過濾(6層紗布)→濾液在1000rpm離心2min→棄沉淀，上清液3000rpm離心5min →去上清液→沉淀為葉綠體(混有部分細(xì)胞核)，用0.35mol/L氯化鈉溶液懸浮 →滴片觀察

2.取葉綠體懸液1滴置于載玻片上，加蓋玻片后用用普通光學(xué)顯微鏡觀察葉綠體的形態(tài)結(jié)構(gòu) 3.菠菜葉手切片觀察

新鮮菠菜葉，刀片切出一斜面置于載玻片上，滴加1-2滴NaCl溶液，蓋上蓋片，顯微鏡下觀察。用鑷子攝取或刀片刮取新鮮菠菜葉片葉肉，滴加1-2滴NaCl溶液，作臨時(shí)裝片。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖型，高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色顆粒，即基粒。

2.菠菜葉手切片在普通光鏡下可以看到三種細(xì)胞：表皮細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞、葉肉細(xì)胞。葉肉細(xì)胞呈長方形或類方形，內(nèi)含大量帶有綠色的葉綠體顆粒。另外，視野下還可見到大量散在的點(diǎn)狀或類圓狀葉綠體顆粒。

3.紅辣椒細(xì)胞中有許多紅色小顆粒，這就是雜色體。雜色體分散在細(xì)胞質(zhì)中。

六、注意事項(xiàng)

1.葉綠體的分離應(yīng)在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉)中進(jìn)行,以免滲透壓的改變使葉綠體受到損傷。

2.分離過程最好在0-5℃的條件下進(jìn)行；如果在室溫下，要迅速分離和觀察。3.離心機(jī)使用：離心管要平衡

七、作業(yè)

1.根據(jù)顯微觀察結(jié)果，繪制菠菜葉的結(jié)構(gòu)模式圖。

實(shí)驗(yàn)四 細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微觀察和永久制片技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握植物細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架的光學(xué)觀察方法，了解細(xì)胞骨架在細(xì)胞內(nèi)的分布特點(diǎn)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞骨架是指細(xì)胞質(zhì)中縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，按組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)的不同可分為微管、微絲和中間纖維。它們對細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩?/p>

光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀察多用1% Triton X-100處理細(xì)胞，可將細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)被保存，再用考馬斯亮藍(lán)R250染色，使得胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。

Triton X-100：是非離子型表面活性劑（去污劑）。適當(dāng)濃度的Triton X-100處理細(xì)胞時(shí)，可將細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提，但細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不受破壞而被保存。這樣，使細(xì)胞骨架圖像更清晰。

考馬斯亮藍(lán)R250是一種普通的蛋白質(zhì)染料，它可以使各種細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)著色，并非特異地顯示微絲，但是由于有些細(xì)胞骨架纖維在該實(shí)驗(yàn)條件下不夠穩(wěn)定，例如微管；還有些類型的纖維太細(xì)，在光學(xué)顯微鏡下無法分辨，因此我們看到的主要是微絲組成的應(yīng)力纖維（微絲束），直徑約40nm左右。

戊二醛能固定，較好的保存細(xì)胞骨架成分。

M－緩沖液： 穩(wěn)定F-肌動(dòng)蛋白使得細(xì)胞骨架纖維保持聚合狀態(tài)并且較為舒張，便于觀察。磷酸緩沖液（PBS）：含有生理鹽水，可使細(xì)胞不被破壞，能保持原有狀態(tài)下的結(jié)構(gòu)。

三、實(shí)驗(yàn)用品 1.實(shí)驗(yàn)材料

新鮮洋蔥鱗莖的內(nèi)表皮。2.實(shí)驗(yàn)器材

普通光學(xué)顯微鏡、10mL小燒杯、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、載玻片、蓋玻片、、擦鏡紙、PH 計(jì)、水浴鍋。3.試劑：

M－緩沖液、磷酸緩沖液（PBS）、3%戊二醛、1%Triton-100、0.2%考馬斯亮藍(lán)R250

四、試驗(yàn)方法

21.用鑷子撕取洋蔥鱗葉內(nèi)側(cè)的表皮若干片（約0.5cm大小若干片），置于1.5ml離心管中，加入PBS（1.5mL左右），使其下沉（10min左右）。2.吸去緩沖液，用1%Trion X-100處理15-20min。3.吸去Trion X-100，用M緩沖液洗3次，每次5min。4.用3%戊二醛固定30min。

5.PBS（1.5ml左右）洗3次，每次3min，濾紙吸去殘液。6.0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色至少30min。

7.蒸餾水洗滌2次，然后將樣品置于載玻片上，加蓋玻片，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。8.選取觀察效果好的制作永久切片于脫水劑中每級5-10min，第一滴阿拉伯樹膠封片。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

觀察：鏡下可見洋蔥表皮細(xì)胞輪廓，微絲束呈深藍(lán)色。轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察，轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)，可見細(xì)胞骨架的立體結(jié)構(gòu)。

六、注意事項(xiàng)：

1.撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮不可帶莖肉，樣本要展開鋪平。

2.去垢時(shí)間不要超過30min。

3.染色時(shí)間需掌握好，必要時(shí)可分別設(shè)不同染色時(shí)間比較。

4.由微絲組成的應(yīng)力纖維（張力纖維）是一種動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞充分貼壁鋪展時(shí)纖維挺直、豐富；反之，細(xì)胞收縮變圓，應(yīng)力纖維彎曲，甚至部分解聚消失而顯稀少。

七、作業(yè)

繪出植物細(xì)胞骨架微絲的分布圖。（2-3個(gè)細(xì)胞）補(bǔ)充：

① 6mmol/L PBS(pH6.8)A液：NaH2PO4·2H2O 936mg/1000ml B液：Na2HPO4·12H2O 2148mg/1000ml

工作液：A液53.7ml + B液46.3ml（用NaHCO3調(diào)pH值至6.8）② M緩沖液（pH值7.2）咪唑 50mmol/L KCl 50mmol/L MgCl2 0.5mmol/L EGTA 1 mmol/L EDTA 0.1 mmol/L 巰基乙醇1 mmol/L 甘油4 mmol/L 加蒸餾水至1000ml，用1mol/L HCL調(diào)pH值為7.2。

③ 1%TritonX-100: TritonX-100 1ml M緩沖液99ml ④ 0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染液： 考馬斯亮藍(lán)R250 0.2g 甲醇 46.5ml 冰醋酸 7ml 蒸餾水 46.5ml 5.3%戊二醛

25%戊二醛12ml PBS（2液）88ml ⑤脫水劑 50%乙醇 70%乙醇 95%乙醇 100%乙醇 二甲苯

實(shí)驗(yàn)五 DNA的顯示—— Feulgen反應(yīng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解Feulgen染色反應(yīng)原理；

2、掌握Feulgen染色的方法，觀察染色結(jié)果。

二、實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)DNA經(jīng)鹽酸水解后，打開了嘌呤堿基和脫氧核糖連接的鍵，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈現(xiàn)為紫紅色。

Feulgen反應(yīng)是特異性顯示DNA的最經(jīng)典方法，即可進(jìn)行DNA定位顯示，又可用顯微分光光度計(jì)進(jìn)行定量分析。Feulgen反應(yīng)對組織中DNA的檢測具有高度專一性。組織中除DNA外還有多糖、RNA和其他自由醛基可以被鹽酸酸解掉。

三、實(shí)驗(yàn)用品

四、實(shí)驗(yàn)方法

①取小麥根尖和洋蔥內(nèi)表皮（綠豆大?。┙腩A(yù)熱至60℃的1N HCl中水解，時(shí)間10 min。10

②蒸餾水洗后，轉(zhuǎn)入Schiff液中避光染30 min，待根尖變?yōu)樯罴t色； ③在新配亞硫酸水中洗3次，每次 1 min；

④自來水洗 5 min，在載玻片上切下深紅色根尖備用； ⑤制片鏡下觀察，根尖鑷子搗碎壓片。

五、注意事項(xiàng)

六、作業(yè)

繪圖描述所觀察到的試驗(yàn)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)六 多糖的顯示——PAS反應(yīng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過PAS反應(yīng)，了解糖原顯示的基本原理、方法以及糖原在細(xì)胞中的分布。

二、實(shí)驗(yàn)原理

PAS反應(yīng)是顯示多糖的最經(jīng)典、也是最直接的細(xì)胞化學(xué)方法。用具有強(qiáng)氧化作用的過碘酸處理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化成兩個(gè)游離的醛基，醛基與Schiff試劑結(jié)合可形成紫紅色的化合物，顏色深淺與多糖含量成正比。單糖易被抽提掉，多糖包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纖維素。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1.材料：馬鈴薯塊莖

2.試劑：0.5%高碘酸、schiff試劑、亞硫酸水、70％酒精 3.器材：顯微鏡、刀片、鑷子、載玻片、蓋玻片、水浴鍋

四、實(shí)驗(yàn)方法

1、取馬鈴薯塊莖切成薄片，浸入過碘酸溶液10分鐘；

2、用70％的酒精沖洗1次；

3、將薄片放入Schiff試劑中20－25分鐘；

4、在新配亞硫酸水中洗3次，每次 1 min；

5、蒸餾水洗片刻；

6、將薄片放在載玻片上吸去水分，加上蓋玻片，鏡下觀察。

五、注意事項(xiàng)

按上述操作，細(xì)胞中水溶性糖類已喪失，被染色的是不溶性的碳水化合物。

六、作業(yè)

繪制實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并描述。

實(shí)驗(yàn)六 細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和總體蛋白的原位顯示

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握細(xì)胞內(nèi)酸、堿性蛋白的鑒別方法； 2.了解酸、堿性蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。

二、實(shí)驗(yàn)原理

蛋白質(zhì)是一種兩性電解質(zhì)，在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)帶負(fù)電，在酸性環(huán)境中，蛋白質(zhì)帶正電。所以，利用各種蛋白質(zhì)在不同ph下，因等電點(diǎn)不同而產(chǎn)生的與固綠染液（一種弱酸性染料它對堿性物質(zhì)的親和力強(qiáng)）結(jié)合能力的差異。對細(xì)胞中的蛋白質(zhì)染色，可使細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白（等電點(diǎn)偏向酸性）和堿性蛋白（等電點(diǎn)偏向堿性）分別顯示?？傮w蛋白pI4.7-6.75，組蛋白pI8.5。試驗(yàn)用酸性染料pH2.2，堿性染料pH8.0 核酸的存在會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用三氯醋酸處理可提出核酸。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1、試驗(yàn)材料

洋蔥鱗莖內(nèi)表皮或根尖

2、試劑

10%福爾馬林、5%三氯醋酸、0.1%酸性固綠染料（酸染）、0.1%堿性固綠染料（堿染）

3、器材

顯微鏡、水浴鍋、載玻片、蓋玻片、吸水紙

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.材料固定 洋蔥鱗莖內(nèi)表皮若干片，10%福爾馬林固定液中固定15min，蒸餾水洗2次。2.抽提核酸 5％三氯醋酸中90℃，15min，蒸餾水洗數(shù)次（3min以上）以沖去痕跡的三氯醋酸。3.染色

①一張片滴加0.1％堿性固綠(pH8.0)中染色5～10min。

②另一張片滴加0.1％酸性固綠(pH2.2)中染色5～10min(視染色深淺而定)。

蒸餾水沖洗（3min），蓋上蓋片鏡檢。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

用PH2.2酸性固綠染液染色結(jié)果，細(xì)胞中蛋白質(zhì)均被染成綠色，此即總體蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布?？傮w蛋白-堿性蛋白=酸性蛋白。

用pH8.0堿性固綠染液染色結(jié)果，只有細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)被染綠色（或淺藍(lán)色），此即堿性蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布。

六、注意事項(xiàng)

使用三氯醋酸處理的目的？

用5%TCA提取DNA是該實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵。DNA必須被提取，以使染色質(zhì)的負(fù)電荷下降，用熱TCA提取核酸后，固綠在堿性pH下，堿性蛋白可以選擇性地被染色，如未被提取，不能染色，或整個(gè)切片染成藍(lán)綠色，水洗或進(jìn)入酒精即褪色。

七、作業(yè)

1、繪制酸、堿性蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布圖。

2、總結(jié)本次實(shí)驗(yàn)的得失。

實(shí)驗(yàn)八 植物原生質(zhì)體的制備與融合

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.學(xué)習(xí)植物原生質(zhì)體的分離制備技術(shù)，觀察原生質(zhì)體形態(tài)。2.學(xué)習(xí)細(xì)胞融合技術(shù)，觀察融合細(xì)胞的形態(tài)及變化。

二、實(shí)驗(yàn)原理

除去植物細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞，稱為原生質(zhì)體，是開展基礎(chǔ)研究的理想材料。植物細(xì)胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠質(zhì)組成，常用酶解法分離原生質(zhì)體，其原理是使用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細(xì)胞壁成分，除去細(xì)胞壁。

細(xì)胞融合又稱細(xì)胞雜交指離體條件下用人工的方法把不同的細(xì)胞通過無性方式融合成一個(gè)雜合細(xì)胞的技術(shù)。許多化學(xué)、物理學(xué)和生物學(xué)方法可誘導(dǎo)原主質(zhì)體融合，現(xiàn)在被廣泛采用并證明行之有效的融合方法是聚乙二醇(PEG)法、高Ca高pH法和電融合法。PEG作為一種高分子化合物，20～50％的濃度能對原生質(zhì)體產(chǎn)生瞬間沖擊效應(yīng)，原生質(zhì)體很快發(fā)生收縮與粘連，隨后用高Ca高pH法進(jìn)行清洗，使原生質(zhì)體融合得以完成。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1.器具：顯微鏡、離心機(jī)、離心管、剪刀、鑷子、吸管、小培養(yǎng)皿、載片、蓋片、300目濾網(wǎng)。

2.試劑：酶混合液、洗滌液、20%蔗糖液、PEG溶液、高鈣高pH溶液

(1)酶混合液(9CPW):

(2)洗滌液（9CPW）1％纖維素酶

pH 5.6 0.5-0.7％果膠酶

27．2 mg／L KH2PO4 101.0 mg／L KNO3 1480．0 mg／L CaCl2·2H2O 246．0 mg／L MgSO4 0．16 mg／L KI 0．025 mg／L CuSO4 9％ W／V甘露醇

500mg／L MES pH 5.6(3)PEG融合液（pH 5.6）40% PEG(MW 1000-6000)0.3 mol/L葡萄糖 3.5mmol/L CaCl2·2H2O 0.7mm0l/L KH2PO4（4）高鈣高pH溶液（pH 10.5）0.1mol/L CaCl2·2H2O 0.1mol/L甘露醇 0.05mol/L Tris 3.材料：菠菜、韭菜葉片

四、實(shí)驗(yàn)方法

1、分離原生質(zhì)體

① 撕葉下表皮

② 酶解 將撕去下表皮的葉片剪成0.5mm寬小塊，放在盛有5mL酶液的小培養(yǎng)皿或帶蓋三 角瓶中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25-28℃下酶解60-90分鐘。可鏡檢有較 多原生質(zhì)體后停止。

2、收集純化

①用300目網(wǎng)過濾除去未完全消化的殘?jiān)?/p>

②酶解液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，配平，以800rpm離心5分鐘以上，使原生質(zhì)體沉降。移液管吸上清，剩下原生質(zhì)體及殘?jiān)诠艿住?/p>

③加入3ml CPW洗滌液，輕輕吹打均勻，相同條件下離心2-5分鐘，棄上清，以徹底去除酶液。

④加入少量CPW洗滌液，輕輕吹打均勻，用注射器向離心管底部緩緩注入20%蔗糖約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質(zhì)體懸浮液。

⑤以600rpm離心10分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體，注射器針頭輕輕插入離心管底部吸取碎片和蔗糖溶液，再吸去上清。

3、制備效果檢測（1）血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)（2）原生質(zhì)體活力測定

形態(tài)識(shí)別（完整、飽滿、顏色鮮艷）

中性紅染色（液泡變紅）

臺(tái)盼藍(lán)染色（不能顯色）

觀察10個(gè)視野計(jì)算：

存活率=（活性原生質(zhì)體/原生質(zhì)體總數(shù)）×100%

4、原生質(zhì)體融合

（1）取原生質(zhì)體液兩滴，間隔5mm滴于載玻片上，靜置8—10分鐘，使原生質(zhì)體沉降。

（2）在兩液滴之間滴加一滴40％的PEG溶液，使三液滴相連（可轉(zhuǎn)動(dòng)載玻片使其混勻）室溫下（15-20 ℃）靜置5-10分鐘，觀察原生質(zhì)體聚集（粘連）現(xiàn)象。

（3）滴加高鈣高PH洗液，轉(zhuǎn)動(dòng)載玻片使其混勻，觀察原生質(zhì)體融合過程。

五、作業(yè)

1.按鏡下觀察繪制2-3個(gè)原生質(zhì)體。2.計(jì)算原生質(zhì)體濃度和存活率。

3.描述原生質(zhì)體融合過程。

實(shí)驗(yàn)九 蠶豆根尖微核檢測技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、了解細(xì)胞微核形成的機(jī)理及其形態(tài)特點(diǎn)，2、學(xué)習(xí)植物根尖細(xì)胞的微核檢測技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微核試驗(yàn)(The micronucleus test，MNT)是以動(dòng)植物為材料，采用細(xì)胞生物學(xué)手段，觀測其出現(xiàn)的微核率來表示材料受遺傳損傷程度的一種檢測遺傳毒物的方法。微核是指位于細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立于主核、直徑小于主核，完全與主核分開的圓形或橢圓形的微小核。是真核生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，它是由于細(xì)胞受到損傷后，由細(xì)胞分裂過程中喪失著絲粒的染色體斷片或落后染色體產(chǎn)生的。這些斷片或染色體在分裂過程中行動(dòng)滯后，在分裂末期不能進(jìn)入主核，便形成了主核之外的核塊。

蠶豆根尖細(xì)胞微核技術(shù)已發(fā)展的相當(dāng)成熟，具有較高的靈敏性，作為檢測化學(xué)品遺傳毒性的方法，得到了廣泛應(yīng)用。而且在測定監(jiān)測淡水污染物和檢測化學(xué)誘變劑的研究已列入國家生物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（水環(huán)境部分），并推廣應(yīng)用于大氣、廢水、土壤等的致突變活性檢測。

三、實(shí)驗(yàn)用品 1.材料：蠶豆 2.器材

顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、紗布、鑷子、載玻片及蓋玻片等。3.藥品

鹽酸（5mol/L）、70%乙醇、卡諾固定液（用乙醇和冰醋酸以3:1（v/v)混合配制）、石炭酸品紅、硫酸銅、待測液。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、浸種催芽

將實(shí)驗(yàn)用蠶豆按需要量放入盛水燒杯中，在25℃下浸泡24～48小時(shí)，此間至少換水兩次，所換水應(yīng)25℃預(yù)溫。

種子吸脹后，用紗布松散包裹置瓷盤中，保持溫度，在25℃溫箱中催芽12～24小時(shí)。

待初生根長出2～3mm時(shí)，再取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿濾紙的瓷盤中，25℃繼續(xù)催芽，經(jīng)約36-48小時(shí)，大部分初生根長至1～2cm左右，此時(shí)可用來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2、根尖染毒：

選取初生根生長良好，根長一致的6～8粒種子，放入盛有待測液的培養(yǎng)皿中，陽性檢測采用200mg/L硫酸銅,對照用蒸餾水處理，處理時(shí)間6-24h，處理液浸沒根尖。

3、恢復(fù)培養(yǎng)：處理后的根尖用自來水浸洗3次，每次2～3min，洗凈后在蒸餾水中恢復(fù)培養(yǎng)24h。

4、固定：切取1cm左右的根尖，用卡諾氏固定液固定24h后棄去固定液，固定后的根如不及時(shí)制，可換入70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

5、酸解：用蒸餾水浸洗固定好的幼根2～3次，每次5分鐘，吸凈蒸餾水，加入5mol/L鹽酸將幼根浸沒，室溫下酸解10min，幼根軟化即可，棄去鹽酸，漂洗根尖2～3次，每次1～2分鐘，徹底洗凈鹽酸。

6、染色：截下1-2mm長的根尖，滴加適量的石炭酸品紅染液，染色10min，加蓋玻片，壓片觀 15

察。

五、注意事項(xiàng)

1、培養(yǎng)蠶豆時(shí)需勤換水

2、處理蠶豆時(shí)要將根部浸沒于處理液中

3、固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

污染指數(shù)PI值評價(jià)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)表

污染指數(shù)PI值 水質(zhì)污染等級

基本無污染 0 ～ 1.5 輕污染 1.5 ～ 2.0 中污染 2.0 ～ 3.5 重污染 3.5以上

七、作業(yè)

繪圖、計(jì)算微核千分率和污染指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)十 細(xì)胞膜的滲透性

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解溶血現(xiàn)象及其發(fā)生機(jī)制。

2.了解細(xì)胞膜的滲透性及各種物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞膜是細(xì)胞與環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的選擇通透性屏障，是一種半透膜，可選擇性控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞。小的、親脂性的、非極性分子（如O2、CO2、N2、苯）容易溶解于脂雙層，可迅速透過脂雙層。小的、不帶電荷的極性分子（如水、脲、甘油等）如果足夠小時(shí)，也能很快透過脂雙層；大的、不帶電荷的極性分子（如葡萄糖，蔗糖等）以協(xié)助擴(kuò)散或主動(dòng)運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞；對于帶電荷的分子或離子，由于這些分子的電荷及高的水化度，因此不管多小，都很難透過脂雙層的疏水區(qū)，它們要通過載體介導(dǎo)的主動(dòng)運(yùn)輸方式跨膜運(yùn)輸。

將紅細(xì)胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細(xì)胞內(nèi)，可使細(xì)胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，由不透明的紅細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細(xì)胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細(xì)胞膜對各種溶質(zhì)的通透性不同，有的溶質(zhì)可進(jìn)入，有的溶質(zhì)不能進(jìn)入，進(jìn)入紅細(xì)胞的溶質(zhì)能提高紅細(xì)胞的滲透壓，使水進(jìn)入紅細(xì)胞，引起溶血。由于不同溶質(zhì)透入速度不同，溶血時(shí)間也不同，因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時(shí)間長短可作為測量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)選用紅細(xì)胞作為細(xì)胞膜透性的實(shí)驗(yàn)材料，將其放入不同的介質(zhì)溶液中，觀察紅細(xì)胞的變化。

三、實(shí)驗(yàn)用品

1．材料: 雞血溶于含有抗凝劑的等滲液中（肝素鈉0.2mg/mL,一般范圍在 0.01-0.2mg/mL；等滲液為0.85% NaCl）2．器材：

試管，試管架，滴管，載玻片，蓋玻片，光學(xué)顯微鏡。3．試劑：

低滲溶液：0.0085% NaCl和0.032mol/L葡萄糖；

等滲溶液：0.85% NaCl、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇。10% TritonX-100、2%TritonX-100。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、制備血液稀釋液

①抗凝劑的制備：首先稱取1克肝素鈉粉末，然后加入0.17 M NaCl溶液ml（1∶10的比例），混合均勻，制成肝素抗凝劑。

②血液稀釋液的制備：雞翼下靜脈取新鮮血液，按比例（肝素抗凝劑:血液=1∶10）混合均勻，配制成經(jīng)肝素抗凝的血液。

③按比例（經(jīng)肝素抗凝的血液∶0.17 M NaCl 溶液=1∶10）混合均勻，形成一種不透明的紅色液體。

2、低滲溶液溶血現(xiàn)象觀察：

取試管一支加蒸餾水3ml和稀釋的雞血1滴或2滴輕混一下，然后靜止注意觀察溶液的顏色變化。結(jié)果：由于紅細(xì)胞發(fā)生破裂，造成100%紅細(xì)胞溶 血，使光線比較容易透過溶液，溶液顏色由渾濁的紅色逐漸變透明，此即為溶血現(xiàn)象。記錄下這個(gè)過程所要的時(shí)間。

3、雞紅細(xì)胞的滲透性記時(shí)比較

1）分別取2只試管，各加入3ml的0.85% NaCl、0.0085% NaCl和0.032mol/L葡萄糖 加入2-3滴血紅細(xì)胞懸液；

2）分別取3只試管，各加入3ml的 0.32 mol／L葡萄糖，0.32 mol／L甘油，0.32 mol／L乙醇，加入2-3滴血紅細(xì)胞懸液；

3）分別取2只試管，各加入3ml的10% TritonX-100、2%TritonX-100；加入2-3滴血紅細(xì)胞懸液，觀察反應(yīng)現(xiàn)象。記下時(shí)間（自加入稀釋血液到溶液逐漸由紅色變?yōu)橥该鞒吻澹t血球全部溶血所需時(shí)間），填入表一的空格中。

4、溶血結(jié)果的判斷

不溶血：液體分2層，上層淺黃色透明，下層紅色不透明，鏡檢紅細(xì)胞完好。不完全溶血：溶液混濁，上層變紅色，鏡檢有部分紅細(xì)胞破裂。完全溶血：液體變紅而且透明，鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全成碎片。

5、顯微觀察

血液紅細(xì)胞的觀察滴一滴稀釋的血液于載玻片上，蓋上蓋玻片。用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的種類、形狀和顏色。

細(xì)胞破碎的觀察在上一步的載玻片的一端滴加清水，在另一端吸水，并在顯微鏡下觀察細(xì)胞的破裂。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將觀察到的現(xiàn)象記錄，并進(jìn)行分析。

編號(hào)

試

劑

是否溶血

時(shí)間

分析原因 2 3 4 5 6

0.85% NaCl 0.0085% NaCl 0.32 M葡萄糖 0.32 M 甘油 0.32 M 乙醇 10% TritonX-100

六、注意事項(xiàng)

1.試管中有紅細(xì)胞和測試溶液時(shí)，不應(yīng)強(qiáng)力搖晃，以免造成人為的紅細(xì)胞破裂。

2.取雞血?jiǎng)幼饕浅Ｑ杆?，否則雞血會(huì)凝固。或者先把抗凝劑加入到燒杯中，再加入新鮮的雞血，邊加邊震蕩即可。

3.長時(shí)間在等滲溶液中，由于活細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物積累，也會(huì)產(chǎn)生溶血，試驗(yàn)時(shí)間不宜超過1h。

4.裝不同試劑試管注意編號(hào)，吸管也要專用切勿混淆，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。補(bǔ)充：

一、細(xì)胞膜的功能

分隔形成細(xì)胞和細(xì)胞器，為細(xì)胞的生命活動(dòng)提供相對穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境，膜的面積大大增加，提高了發(fā)生在膜上的生物功能；

屏障作用，膜兩側(cè)的水溶性物質(zhì)不能自由通過； 選擇性物質(zhì)運(yùn)輸，伴隨著能量的傳遞；

生物功能：激素作用、酶促反應(yīng)、細(xì)胞識(shí)別、電子傳遞等；

物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)功能：細(xì)胞與周圍環(huán)境之間的物質(zhì)交換，是通過細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)功能實(shí)現(xiàn)的，其主要轉(zhuǎn)運(yùn)方式有四種，即單純擴(kuò)散、易化擴(kuò)散、主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)、入胞和出胞作用。

細(xì)胞膜的受體功能：受體是細(xì)胞識(shí)別和結(jié)合化學(xué)信息的特殊結(jié)構(gòu)，其本質(zhì)是蛋白質(zhì)。

二、常用抗凝血?jiǎng)┌ǎ?/p>

1.非腸道用藥抗凝血?jiǎng)喝绺嗡兀?/p>

2.香豆素抗凝血?jiǎng)╊悾撼Ｓ玫挠须p香豆素、華法令和新抗凝等，通過拮抗維生素K使肝臟合成凝血酶原及因子Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ減少而抗凝；

3.抗血小板凝集藥物：如阿司匹林，對血小板環(huán)氧化酶有抑制作用；

4.蛇毒溶栓劑：如去纖酶、抗栓酶和清栓酶，可溶解已形成的血栓使血管再通，從而起到抗凝血作用。

肝素的作用機(jī)理

肝素在體內(nèi)、體外均有強(qiáng)大抗凝作用。與其帶大量負(fù)電荷有關(guān)，可使多種凝血因子滅活。這一作用依賴于抗凝血酶III（antithrombin

III，AT

III）。At

III是凝血酶及因子Ⅻα、Ⅺα、Ⅸα、Ⅹα等含絲氨酸的蛋白酶的抑制劑。它與凝血酶通過精氨酸-絲氨酸肽鍵相結(jié)合，形成At

III凝血酶復(fù)合物而使酶滅活，肝素可加速這一反應(yīng)達(dá)千倍以上。

實(shí)驗(yàn)十一 血細(xì)胞的分化和不同類型血細(xì)胞的觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、學(xué)習(xí)掌握人血涂片和染色的方法。

2、了解各種血細(xì)胞的形態(tài)特征。

二、實(shí)驗(yàn)原理

瑞氏染色液主要染料由堿性美藍(lán)和酸性伊紅兩種成分組成, 它們與細(xì)胞內(nèi)的嗜酸性和嗜堿性的各種物質(zhì)既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用, 各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣，因此使細(xì)胞呈現(xiàn)出不同的色彩.伊紅和美藍(lán)只能溶解在有機(jī)溶劑中，而滴在水中很快形成沉淀，所以染色液必須配成甲醇等有機(jī)溶液，臨用時(shí)加到水或緩沖液中，才能在一定的環(huán)境下離解成有色的陰離子伊紅和陽離子美藍(lán)，而與細(xì)胞中的不同物質(zhì)相親和被染色。如滴加到水中很快發(fā)生沉淀，容易形成沉渣。

甲醇兼溶劑和起固定細(xì)胞兩種作用。甲醇具有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞對染料吸收作用，同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。緩沖液作用：

染色對氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察pH值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。緩沖液須保持一定的pH使染色穩(wěn)定，PBS的pH 一般在6.8，偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使pH恒定。緩沖液配制（pH6.4-6.8，弱酸性）。

A：紅細(xì)胞，B：嗜酸性粒細(xì)胞，C：單核細(xì)胞，D：中性粒細(xì)胞，E：嗜堿性粒細(xì)胞，F(xiàn)：淋巴細(xì)胞

三、實(shí)驗(yàn)用品

顯微鏡、載玻片、采血針、75%酒精、消毒棉球、瑞氏染液、PBS、吸耳球。

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.消毒 先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒取血部位（如無名指指尖、耳垂）。2.取血 待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，或擠壓出血。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中4～5毫米處，注意手指持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚。必須兩人密切配合，抓緊時(shí)間，一人取血，另一人迅速推片。

3.推片 這步最重要，但又不易推均勻。以左手拿該片的兩端，迅速用右手取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動(dòng)到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處，成一直線。然后使推片與載片呈30°～40°角，輕輕移動(dòng)，然后由前向后推為一均勻的薄片。涂片推好后，迅速在空氣中搖，使之自然干燥。

4.染色 將瑞氏染液(伊紅-亞甲基藍(lán))滴在血膜上，至染液淹沒全部血膜，染半分鐘。加等量蒸餾水(或緩沖液)與染液，加好后，立即用嘴將兩液吹勻?；旌显偃?分鐘。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。5.觀察

五、注意事項(xiàng)

1.染色時(shí)間與染液濃度,室溫高低,細(xì)胞多少有關(guān)。染液越淡,室溫越低, 細(xì)胞越多,所需染色時(shí)間越長或應(yīng)適當(dāng)增加染液量,因此染色時(shí)間應(yīng)視具體情況而定。特別是更換新染料時(shí)必須經(jīng)試染,摸索最佳染色條件。

2.染液不可過少,以防蒸發(fā)干燥染料沉著于血片上難沖洗干凈。沖洗時(shí)應(yīng)用流水將染液沖去,不能先倒掉染液,以免染料沉著于血片上。

3.判斷染液是否起到了染色的作用，可在沖洗染色液前觀察染液有無一層黃色的金屬光澤，如果沒有，則表示染色失敗。

4.如染色太淺，可按照原來步驟重染。

六、作業(yè)

1.繪制自制血涂片中的各種血細(xì)胞（至少一種白細(xì)胞）。2.用簡練的語言概括血液的主要成分和作用。

第二篇：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)

細(xì)胞自主實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)

自主實(shí)驗(yàn)是在老師的指導(dǎo)和幫助下學(xué)生自己設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)且自己準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的一切準(zhǔn)備工作來完成的實(shí)驗(yàn)。平時(shí)做實(shí)驗(yàn)老師占重要地位但自主實(shí)驗(yàn)中學(xué)生占重要地位。自主實(shí)驗(yàn)中學(xué)生自己思考設(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)所需試劑，實(shí)驗(yàn)方法和步驟然后按該方案來做實(shí)驗(yàn)。

老師讓學(xué)生做自主實(shí)驗(yàn)的原因是老師想培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力，合作能力，想讓學(xué)生獨(dú)立思考，想讓學(xué)生親自動(dòng)手做實(shí)驗(yàn)，最重要的一點(diǎn)是把理論知識(shí)結(jié)合實(shí)踐。

細(xì)胞培養(yǎng)是在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機(jī)體中取出的細(xì)胞，并使之生存和生長的技術(shù)為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

本實(shí)驗(yàn)采用了微量全血培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)人體外周血小淋巴細(xì)胞,使原處于 G0期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞, 進(jìn)而進(jìn)行有絲分裂，增殖成功率高、技術(shù)方法完善。把體外增殖的小淋巴細(xì)胞裂解,對細(xì)胞核染色體進(jìn)行染色和 固定,制得人染色體標(biāo)本,用于進(jìn)行染色體組型分析，取得了令人滿意的效果。

人和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的一項(xiàng)基本技術(shù)。目前,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)主要用于通過大量的細(xì)胞培養(yǎng)獲得有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的生物產(chǎn)品和細(xì)胞本身。1966 年以前基本上用 Mo o r he a d 等，1960年建立的人外周血白細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),該方法比較完善,成功率高。但缺點(diǎn)是取血量多,手續(xù)較麻煩。近30 多年來國內(nèi)外絕大多數(shù)均采用微量全血培養(yǎng)技術(shù),不但取血量少,而且可略去一些繁瑣操作過程,如離心、分離血漿等,做起來既方便,也節(jié)省人力和物力, 比較適于推廣和使用。

本實(shí)驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)操作要求比較高。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(tái)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%酒精擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%酒精擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。操作做成中也要保證不污染。

第三篇：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)思考題

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)思考題

1、為什么暗視場照明的視場暗黑，而樣品像明亮？相差顯微鏡鏡檢時(shí)，為什么要用綠色濾色鏡觀察活體樣本？

暗視場顯微鏡照明光線不直接進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的；

為獲得好的效果，要用波長范圍窄的單色光，選用綠色濾光鏡，不但可滿足這個(gè)要求，而且綠色可吸收紅外光，減少發(fā)熱。

2、為什么活細(xì)胞不易染色，從細(xì)胞生物學(xué)角度解釋原因。

染色劑一般有劇毒，而細(xì)胞膜具有選擇透過性，會(huì)將一部分對細(xì)胞有害的物質(zhì)阻擋在細(xì)胞外，所以活細(xì)胞難以染色。而當(dāng)細(xì)胞死亡后，細(xì)胞膜失去選擇透過性，染色劑得以進(jìn)入，細(xì)胞就被染色。

3、簡述中性紅染液、詹納斯綠B染液用于細(xì)胞超活染色的原理。

Janus green B活體細(xì)胞染色的機(jī)理：Janus green B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)），呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基（即無色狀態(tài)）。

Neutral red 堿性染料活體染色的機(jī)理：neutral red為弱堿性染料，對液泡系（即高爾基體）的染色有專一性，只將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)完全不著色，這可能與液泡中某些蛋白質(zhì)有關(guān)。

4、什么是細(xì)胞骨架？它有何主要功能？

生物學(xué)中細(xì)胞骨架指真核細(xì)胞中與保持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)的纖維網(wǎng)絡(luò)。包括微管、微絲和中間絲。

細(xì)胞骨架不僅在維持細(xì)胞形態(tài)，承受外力、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的有序性方面起重要作用，而且還參與許多重要的生命活動(dòng)，如：在細(xì)胞分裂中細(xì)胞骨架牽引染色體分離，在細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸中，各類小泡和細(xì)胞器可沿著細(xì)胞骨架定向轉(zhuǎn)運(yùn)；在肌肉細(xì)胞中，細(xì)胞骨架和它的結(jié)合蛋白組成動(dòng)力系統(tǒng)；在白細(xì)胞(白血球)的遷移、精子的游動(dòng)、神經(jīng)細(xì)胞軸突和樹突的伸展等方面都與細(xì)胞骨架有關(guān)。另外，在植物細(xì)胞中細(xì)胞骨架指導(dǎo)細(xì)胞壁的合成。

5、列舉你所知道的動(dòng)、植物細(xì)胞中由微絲組成的結(jié)構(gòu)。

肌原纖維、微絨毛、應(yīng)力纖維

6、顯示細(xì)胞骨架的原理是什么？說明實(shí)驗(yàn)中使用的TritonX-100、戊二醛、考馬斯亮藍(lán)R-250的作用。

原理：用考馬斯亮藍(lán)對細(xì)胞骨架進(jìn)行染色，染色觀察前，應(yīng)首先用去垢劑抽提掉胞質(zhì)中的除骨架以外的其他蛋白。

TritonX-100：非離子型去垢劑，可使細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)被溶解抽提。

戊二醛：固定細(xì)胞

考馬斯亮藍(lán)R-250：蛋白質(zhì)染料，對細(xì)胞骨架染色。

7、顯示脂類時(shí)，制片及染色有何特殊之處？

制片時(shí)需要用10%甲醛鈣固定液進(jìn)行固定，要求用蘇丹Ⅲ飽和溶液染色，但是對不同部位的脂類進(jìn)行處理時(shí)有區(qū)別。

8、簡述Fenulgen反應(yīng)的原理和實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。

原理：DNA經(jīng)弱酸水解后，嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵打開，并且使脫氧核糖與磷酸間的磷脂鍵打開，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基，醛基在原位與Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色復(fù)合物，使細(xì)胞內(nèi)含有DNA的部位呈紫紅色的陰性反應(yīng)。關(guān)鍵步驟：①Schiff試劑遮光染色30min，一定要遮光；

②壓片時(shí)，一定要壓均勻，否則細(xì)胞會(huì)重疊，影響觀察； ③洗玻片上的試劑，要注意樣品不被洗掉。

9、試述差速離心法分離細(xì)胞器的原理。

在一定的離心場中（選用離心機(jī)的一定轉(zhuǎn)速），球心顆粒的沉降速度取決于它的密度、半徑和懸浮介質(zhì)的黏度。在一均勻的懸浮介質(zhì)中離心一定時(shí)間，組織勻漿中的各種細(xì)胞器及其它內(nèi)含物由于沉降速度不同將停留在高低不同的位置。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能夠使這些顆粒按其大小、輕重分批沉降在離心管底部，從而分批收集。

10、試述密度梯度離心法分離細(xì)胞器的原理。

用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。

11、為什么要事先向小鼠腹腔注射淀粉肉湯懸浮液？吞噬細(xì)胞的變形運(yùn)動(dòng)及吞噬作用的生物學(xué)機(jī)理是什么？

①誘導(dǎo)小鼠腹腔大量產(chǎn)生巨噬細(xì)胞，使其聚集； ②細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。

第四篇：細(xì)胞生物學(xué)教案

第八章 細(xì)胞核與染色體 第一節(jié) 細(xì)胞核(nucleus)概述

細(xì)胞核是儲(chǔ)存遺傳物質(zhì)的場所，除成熟的植物篩管和哺乳類紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核外，所有真核細(xì)胞都有細(xì)胞核。

細(xì)胞核的主要包括：核被膜；②核仁；③核基質(zhì)；④染色質(zhì)；⑤核纖層: 第二節(jié) 核被膜與核孔復(fù)合體

包在核外的雙層膜結(jié)構(gòu)。將DNA與胞質(zhì)隔開，形成核內(nèi)特殊微環(huán)境，保護(hù)DNA分子免受損傷；使 DNA復(fù)制和RNA翻譯表達(dá)在時(shí)空上分隔開來；

此外染色質(zhì)定位于核膜上，有利于解旋、復(fù)制、凝縮、平均分配到子核；核被膜還是核質(zhì)物質(zhì)交換的通道。

一、核被膜

1、外核膜：面向胞質(zhì)，附有核糖體，并與RER相連，是RER特化部分。

細(xì)胞骨架成分常與外核膜相連，起固定作用及維持細(xì)胞核形態(tài)

2、內(nèi)核膜面向核基質(zhì)，與外核膜平行，表面光滑，無核糖體。內(nèi)表面網(wǎng)絡(luò)狀纖維蛋白質(zhì):核纖層，支持核膜。

3、核周間隙(perinuclear space)：又稱核周腔，是兩層核膜間的空隙，寬20~40nm，腔內(nèi)電子密度低，不含固定結(jié)構(gòu)。核周隙與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔相通 兩層核膜相互平行但不連續(xù)，常在某些部位融合形成環(huán)狀開口，即核孔

二、核孔復(fù)合體(NPC)核孔是核內(nèi)外膜融合形成的開口，在核孔上鑲嵌著一種復(fù)雜的結(jié)構(gòu)：核孔復(fù)合體。所有的真核細(xì)胞其間期核上都存在NPC.活動(dòng)旺盛的細(xì)胞中核孔數(shù)目多，反之少

1、核孔復(fù)合體的結(jié)構(gòu):呈八角形，外徑120nm，結(jié)構(gòu)如fish-trap（捕魚簍），包括 ①胞質(zhì)環(huán)或外環(huán):位于胞質(zhì)側(cè)，環(huán)上有8條纖維對稱分布伸向胞質(zhì)；

②核質(zhì)環(huán)或內(nèi)環(huán):位于核質(zhì)側(cè)，對稱連有8條纖維，向核內(nèi)伸入50-70nm，末端形成1個(gè)小環(huán)，小環(huán)也由8個(gè)顆粒構(gòu)成，籠子狀結(jié)構(gòu)；

③栓(plug)或轉(zhuǎn)運(yùn)器:核孔中央的一個(gè)栓狀顆粒； ④輻(Spoke):核孔邊緣伸向核孔中央的突出物。

2、核孔復(fù)合體與物質(zhì)運(yùn)輸

核孔是細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)間物質(zhì)交換的通道

雙功能：被動(dòng)運(yùn)輸(小分子物質(zhì)自由擴(kuò)散通過核孔進(jìn)入核)和主動(dòng)運(yùn)輸(信號(hào)識(shí)別與載體介導(dǎo)的過程,需ATP,并有飽和動(dòng)力學(xué)特征.)雙向：出核(核中合成的RNA、核糖體亞基通運(yùn)到胞質(zhì))和入核(核蛋白在胞質(zhì)合成，通過核孔定向輸入核)轉(zhuǎn)運(yùn)

三、核纖層:位于內(nèi)核膜下方的一種纖維網(wǎng)絡(luò).由核纖蛋白單體組裝起來的多聚體纖維 核纖層的作用

1.保持核的形態(tài):是核被膜支架,用高鹽、非離子去污劑和核酸酶去除大部分核物質(zhì),核纖層仍能維持核輪廓.核纖層與核骨架及穿過核被膜中間纖維相連,使胞質(zhì)骨架和核骨架成一連續(xù)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)

2.參與染色質(zhì)和核的組裝：核纖層在細(xì)胞分裂時(shí)呈周期性變化，在間期核中，核纖層提供了染色質(zhì)在核周邊錨定位點(diǎn)。在前期結(jié)束時(shí)，核纖層被磷酸化，核膜解體。B型核纖肽與核膜殘余小泡結(jié)合，A型溶于胞質(zhì)中。在末期，核纖肽去磷酸化重新組裝，介導(dǎo)了核膜的重建 第三節(jié) 染色質(zhì)

一、染色質(zhì)與染色體的概念

染色質(zhì)是指間期細(xì)胞核內(nèi)由DNA、組蛋白、非組蛋白及少量RNA組成的線性復(fù)合結(jié)構(gòu)，是間期細(xì)胞遺傳物質(zhì)的存在形式。

染色體是指細(xì)胞在有絲分裂或減數(shù)分裂過程中，由染色質(zhì)聚縮而成的棒狀結(jié)構(gòu) 兩者的主要區(qū)別：不在于組成，而在于包裝程度的不同

二、染色質(zhì)的化學(xué)組成

染色質(zhì)由DNA、組蛋白、非組蛋白及少量RNA組成，DNA與組蛋白的含量比較恒定，非組蛋白含量隨生理狀態(tài)變化較大，RNA含量最少。

（一）染色質(zhì)DNA

DNA是遺傳信息的攜帶者

生物的遺傳信息儲(chǔ)存在DNA的核苷酸序列中，即DNA的一級結(jié)構(gòu)。

DNA的序列可分3種類型：單一序列、中度重復(fù)序列(101-5)和高度重復(fù)序列(>105)。DNA還存在豐富的二級結(jié)構(gòu)，主要有3種類型：B-DNA、Z-DNA、A-DNA。生物基因組中的基因大體可分為兩大類：

1）非重復(fù)的編碼DNA序列；2）中度重復(fù)序列：儲(chǔ)存著選擇性表達(dá)信息3)高度重復(fù)序列:(二)染色質(zhì)蛋白質(zhì)

染色質(zhì)蛋白負(fù)責(zé)DNA分子遺傳信息的組織、復(fù)制和閱讀.DNA結(jié)合蛋白主要包括兩大類：

1.組蛋白(與DNA非特異性地結(jié)合):組蛋白屬堿性蛋白，富含帶正電荷Arg，Lys等堿性aa，能夠與帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)作用,等電點(diǎn)一般都在Ph10.0以上，其含量恒定，真核細(xì)胞中有5種組蛋白，分為兩類：一類是高度保守的核心組蛋白或核小體組蛋白,另一類是可變的連接組蛋白

2.非組蛋白(與DNA特異性結(jié)合):與特異DNA序列結(jié)合的蛋白，又稱序列特異性DNA結(jié)合蛋白。特性：①屬酸性蛋白，帶負(fù)電荷。是一類不均一蛋白,具組織特異性和發(fā)育階段特異性②整個(gè)細(xì)胞周期都合成，而組蛋白只在S期合成;③能識(shí)別特異的DNA序列，識(shí)別信息在DNA本身，位點(diǎn)在大溝，識(shí)別與結(jié)合靠氫鍵和離子鍵。

非組蛋白的功能是：①幫助DNA分子折疊，以形成不同的結(jié)構(gòu)域，從而有利于DNA的復(fù)制和基因的轉(zhuǎn)錄；②協(xié)助啟動(dòng)DNA復(fù)制；③控制基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)基因表達(dá)。

(三)染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)-核小體:核小體是一種串珠狀結(jié)構(gòu)，由核心顆粒和連結(jié)線DNA兩部分組成，三、染色質(zhì)的包裝：從DNA—染色體

染色質(zhì)是以核小體作為基本單位進(jìn)行包裝壓縮的，共經(jīng)四級包裝:DNA--核小體--螺線管--超螺線管--染色體

三、異染色質(zhì)和常染色質(zhì)

間期核染色質(zhì)可分異染色質(zhì)和常染色質(zhì)。

常染色質(zhì)是進(jìn)行活躍轉(zhuǎn)錄的部位，呈疏松的環(huán)狀，電鏡下表現(xiàn)為淺染；易被核酸酶在一些敏感的位點(diǎn)降解。異染色質(zhì)的特點(diǎn)：間期處于凝縮狀態(tài)，無轉(zhuǎn)錄活性，也稱非活動(dòng)染色質(zhì)；是遺傳惰性區(qū)；細(xì)胞周期中表現(xiàn)為晚復(fù)制、早凝縮，即異固縮

結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)：在所有細(xì)胞內(nèi)都呈異固縮的染色質(zhì)，多定位于著絲粒區(qū)，端粒，次縊痕及染色體臂的某些節(jié)段，在間期聚集成多個(gè)染色中心，由相對簡單的高度重復(fù)序列構(gòu)成。兼性異染色質(zhì)：指不同細(xì)胞類型或不同發(fā)育時(shí)期出現(xiàn)的異染色質(zhì)區(qū)

四、中期染色體結(jié)構(gòu): 染色體是細(xì)胞在有絲分裂中期遺傳物質(zhì)特定的存在形式,是間期染色質(zhì)緊密包裝的結(jié)果。中期染色體形態(tài)穩(wěn)定是染色體形態(tài)和計(jì)數(shù)最佳時(shí)期

1、著絲粒和動(dòng)粒

著絲粒是染色體中連接兩個(gè)染色單體、并將染色單體分為短臂和長臂的結(jié)構(gòu)。該區(qū)域染色淺且內(nèi)縊，也叫主縊痕.著絲粒的基本功能:(1)將兩條染色單體結(jié)合在一起；(2)為動(dòng)粒的裝配提供結(jié)合位點(diǎn)。動(dòng)粒由著絲粒結(jié)合蛋白在有絲分裂期間裝配起來、附著于主縊痕外側(cè)的圓盤狀結(jié)構(gòu) 每1個(gè)中期染色體含有兩個(gè)動(dòng)粒，位于著絲粒兩側(cè)

2、次縊痕與核仁組織區(qū)

除主縊痕，染色體上其它的縊縮部位稱次縊痕，也是染色體重要標(biāo)志 核仁組織區(qū):是特定染色體的次級縊痕處

3、隨體(satellite)和端粒(telomere): 隨體：位于染色體末端的圓形片段，通過次縊痕與染色體主體相連，染色體主要特征之一。末端的隨體稱端隨體，兩個(gè)次縊痕間稱中間隨體。端粒是染色體兩個(gè)端部特化結(jié)構(gòu)。作用是維持染色體的穩(wěn)定性。打斷染色體，沒端粒的染色體末端有粘性，會(huì)與其它片段相連或兩端相連成環(huán)狀 染色體DNA的3種功能元件

DNA的準(zhǔn)確復(fù)制和分離,有賴于3個(gè)功能單位①自主復(fù)制序列(ARS)②著絲粒序列(CEN)③端粒序列(TEL)

四、巨大染色體

(一)多線染色體:特點(diǎn)：①體積巨大:②多線性:每條染色體由500-4000條解旋的染色體合并在一起形成。③同源染色體緊密配對，合并成1個(gè)染色體④橫帶紋:染色后呈現(xiàn)出明暗相間的帶紋。⑤膨突和環(huán):幼蟲發(fā)育某個(gè)階段，多線染色體某些帶區(qū)疏松膨大，形成膨突(puff)。膨突是基因活躍轉(zhuǎn)錄部位

（二）燈刷染色體 :是卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂時(shí)，停留在雙線期的染色體。二價(jià)體，含4條單體，由軸和側(cè)絲組成

第四節(jié) 核仁(nucleolus)圓球形，1-2個(gè)，或3-5個(gè)。核位置不固定:中央或近核膜，數(shù)量和大小因細(xì)胞種類和功能而異。蛋白質(zhì)合成旺盛和分裂增殖快的細(xì)胞有較大和數(shù)目較多的核仁，反之核仁很小或缺。在有絲分裂期呈現(xiàn)周期性消失與重建:在前期消失，末期又重現(xiàn)。主要功能是轉(zhuǎn)錄rRNA和組裝核糖體亞單位。

一、核仁的結(jié)構(gòu)

無界膜包圍，電鏡下可辨認(rèn)的區(qū)域有3個(gè): ①纖維中心（FC）：②致密纖維組分（DFC）：③顆粒組分（GC）：

二、核仁的功能

核仁是合成核糖體的工廠，涉及rRNA的轉(zhuǎn)錄加工和核糖體大小亞基的裝配。

每個(gè)rRNA基因轉(zhuǎn)錄單位由RNA聚合酶Ⅰ轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生相同的初始轉(zhuǎn)錄物：前rRNA。負(fù)責(zé)前rRNA加工的酶是RNase。

核糖體的裝配和rRNA合成同時(shí)進(jìn)行，前體rRNA的加工是以核蛋白方式進(jìn)行的。

45S前rRNA首先與蛋白結(jié)合形成80S的RNP，然后再剪切形成大小不同的核糖體亞單位前體

編碼5S rRNA的基因不在NORs，是由RNA聚合酶Ⅲ所轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄后經(jīng)適當(dāng)加工即參與核糖體大亞單位的裝配

實(shí)驗(yàn)證明，在30min內(nèi)，小亞基(含18S rRNA)即裝配出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中，而大亞基(含28S、5.8S和5S)裝配約需1小時(shí)才能完成

核糖體的成熟主要發(fā)生在被轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)后。

三、核仁周期

核仁是一種動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)，隨細(xì)胞周期變化而變化，即形成-消失-形成，這種變化稱為核仁周期 在細(xì)胞有絲分裂期，核仁變小，并逐漸消失；在分裂末期，rRNA的合成重新開始，核仁形成。分子機(jī)制尚不清楚

第四節(jié) 核基質(zhì)(nuclear matrix)

核基質(zhì)或稱核骨架(nucleoskeleton)為真核細(xì)胞核內(nèi)由蛋白質(zhì)組成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。具體是指除核被膜、染色質(zhì)、核纖層及核仁以外的核內(nèi)網(wǎng)架體系。它與DNA復(fù)制，RNA轉(zhuǎn)錄和加工，染色體組裝及等生命活動(dòng)密切相關(guān)。核骨架的功能

1.為DNA復(fù)制提供支架，DNA是以復(fù)制環(huán)形式錨定在核骨架上，骨架上有DNA復(fù)制所需酶，DNA自主復(fù)制序列(ARS)也結(jié)合在骨架上。

2.是基因轉(zhuǎn)錄加工場所，RNA的轉(zhuǎn)錄也需DNA錨定在核骨架上，骨架上有RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，RNA合成是在骨架上進(jìn)行。新合成RNA也結(jié)合在骨架上，并在此加工和修飾。

3.參與染色體構(gòu)建，核骨架與染色體骨架為同一類物質(zhì)，30nm纖維結(jié)合在核骨架上，形成放射環(huán)狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步包裝成光鏡可見的染色體。第十章 細(xì)胞骨架

細(xì)胞骨架:真核細(xì)胞中的蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。

細(xì)胞骨架除維持細(xì)胞形態(tài)，還能承受外力、保證細(xì)胞結(jié)構(gòu)有序，還參與許多生命活動(dòng): 牽引染色體分離；

物質(zhì)運(yùn)輸小泡和細(xì)胞器沿細(xì)胞骨架定向轉(zhuǎn)運(yùn)；

肌細(xì)胞中，細(xì)胞骨架和結(jié)合蛋白組成動(dòng)力系統(tǒng)；白細(xì)胞遷移、精子游動(dòng)、神經(jīng)細(xì)胞軸突和樹突的伸展與骨架有關(guān)；

植物細(xì)胞中骨架指導(dǎo)細(xì)胞壁的合成。

細(xì)胞骨架主要由3類蛋白纖絲構(gòu)成：微管、微絲、中間纖維。微管主要分布于在細(xì)胞核周圍，并呈現(xiàn)放射狀向細(xì)胞質(zhì)四周擴(kuò)散； 微絲主要分布在細(xì)胞質(zhì)膜的內(nèi)側(cè)； 中間纖維分布在整個(gè)細(xì)胞。

第一節(jié) 微絲:是由肌動(dòng)蛋白組成的直徑7nm纖維，又稱肌動(dòng)蛋白纖維。

微絲和它的結(jié)合蛋白以及肌球蛋白三者構(gòu)成化學(xué)機(jī)械系統(tǒng)，利用化學(xué)能產(chǎn)生機(jī)械運(yùn)動(dòng)。肌動(dòng)蛋白是微絲的結(jié)構(gòu)單位.所有真核細(xì)胞有肌動(dòng)蛋白,進(jìn)化高度保守。微絲的功能

形成應(yīng)力纖維

2、微絨毛

3、細(xì)胞的變形運(yùn)動(dòng)

4、細(xì)胞的爬行

5、胞質(zhì)分裂

6、頂體反應(yīng)

7、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸

8、細(xì)質(zhì)環(huán)流 第二節(jié) 微管

微管是細(xì)胞質(zhì)骨架的主要成分，是由微管蛋白構(gòu)成的中空管狀結(jié)構(gòu)，外徑平均24nm，內(nèi)徑15nm.長度變化不定.細(xì)胞內(nèi)微管呈網(wǎng)狀和束狀分布，能與其它蛋白共同組裝成紡錘體、基體、中心粒、纖毛、鞭毛、軸突、神經(jīng)管等結(jié)構(gòu)

一、微管的基本構(gòu)件：微管蛋白:微管是由ɑ微管蛋白和β微管蛋白組成。

二、微管的類型:微管有單體、雙聯(lián)體和三聯(lián)體3種

4、微管的極性：①裝配的方向性②裝配速度不同

6、影響微管穩(wěn)定性的藥物:秋水仙素,紫杉醇

四、微管結(jié)合蛋白（MAP）： Ⅰ型和Ⅱ型

MAP的功能：①使微管相互交聯(lián)成束，也可使微管同質(zhì)膜、微絲和中間纖維交聯(lián)。②通過與微管成核點(diǎn)作用促進(jìn)微管的聚合。③在細(xì)胞內(nèi)沿微管轉(zhuǎn)運(yùn)囊泡和顆粒④提高微管的穩(wěn)定性

六、微管的功能

1、支架作用

2、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的運(yùn)輸

3、纖毛與鞭毛的運(yùn)動(dòng)

4、參與細(xì)胞的有絲分裂與減數(shù)分裂

第三節(jié) 中間纖維

直徑為10nm，直徑介于微管和微絲之間得名。

IF是一種堅(jiān)韌、耐久的蛋白質(zhì)纖維，較穩(wěn)定，既不受細(xì)胞松弛素的影響也不受秋水仙素影響 IF具組織特異性，不同類型細(xì)胞含不同IF蛋白。多數(shù)細(xì)胞含有1種中間纖維，少數(shù)含2種以上。

一、類型

IF是一類形態(tài)相似，組成有明顯差異的蛋白質(zhì)，成分比微絲和微管復(fù)雜，依組織來源及免疫原性分5類：

1、角蛋白

2、結(jié)蛋白

3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白

4、波形纖維蛋白

5、神經(jīng)絲蛋白

二、結(jié)構(gòu)

中間纖維蛋白分子含一個(gè)310個(gè)氨基酸殘基組成的α螺旋桿狀區(qū)，及兩端非螺旋化的球形頭部(N端)和尾部(C端)。

桿狀區(qū)高度保守，由螺旋1和螺旋2構(gòu)成，每個(gè)螺旋區(qū)還分為A、B2個(gè)亞區(qū)，由3個(gè)非螺旋式的連結(jié)區(qū)連結(jié)在一起。頭部和尾部的氨基序列在不同類型中間纖維中差異大，可進(jìn)一步分為①H亞區(qū)：同源區(qū)；②V亞區(qū)：可變區(qū)；③E亞區(qū)：末端區(qū)。

四、IF的結(jié)合蛋白

IF的結(jié)合蛋白(IFAP)的功能是介導(dǎo)中間纖維交聯(lián)成束、成網(wǎng)，或交聯(lián)到質(zhì)膜或其它骨架成分上，已知的IFAPs約15種，主要有：絲聚蛋白,網(wǎng)蛋白,錨蛋白,BPAG1,橋粒斑蛋白Ⅰ和Ⅱ

IFAPs的共同特點(diǎn)：①具有中間纖維特異性。②表達(dá)有細(xì)胞專一性。③不同的IFAP可存在于同一細(xì)胞中與不同的中間纖維組織狀態(tài)相聯(lián)系。④在細(xì)胞中某些IFAP的表達(dá)與細(xì)胞的功能和發(fā)育狀態(tài)有關(guān)。

五、中間纖維的功能：了解較少，尚沒找到與IF特異結(jié)合的藥物，主要有三個(gè)方面：①為細(xì)胞提供機(jī)械強(qiáng)度支持②參與細(xì)胞連接③維持細(xì)胞核穩(wěn)定

細(xì)胞周期：細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程。

M期細(xì)胞總能誘導(dǎo)非有絲分裂細(xì)胞中的染色體凝聚：染色體超前凝聚（PCC）

M期細(xì)胞可以誘導(dǎo)PCC，提示在M期細(xì)胞中存在一種誘導(dǎo)染色體凝集的因子，稱促成熟因子MPF 不同細(xì)胞周期蛋白分別在細(xì)胞周期的不同時(shí)期表達(dá)，并與不同CDK（細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶）結(jié)合，調(diào)節(jié)CDK的激酶活性（周期蛋白是一些調(diào)節(jié)復(fù)合物中的調(diào)節(jié)亞基部分，而CDK就是催化亞基部分。）周期蛋白不僅僅起激活CDK的作用，還決定了CDK何時(shí)、何處、將何種底物磷酸化，從而推動(dòng)細(xì)胞周期的前進(jìn)。各類周期蛋白均含有一段約100個(gè)氨基酸的保守序列，稱為周期蛋白框，介導(dǎo)周期蛋白與CDK結(jié)合。泛素(ubiquitin)由76個(gè)氨基酸組成，高度保守，普遍存在于真核細(xì)胞，故名泛素。

共價(jià)結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶體識(shí)別和降解，這是細(xì)胞內(nèi)短壽命蛋白和一些異常蛋白降解的普遍途徑，泛素相當(dāng)于蛋白質(zhì)被摧毀的標(biāo)簽。26S蛋白酶體是一個(gè)大型的蛋白酶，可將泛素化的蛋白質(zhì)分解成短肽。細(xì)胞生長因子是一大類與細(xì)胞增殖有關(guān)的信號(hào)物，已發(fā)現(xiàn)幾十種，具促進(jìn)細(xì)胞增殖功能，又稱有絲分裂原 細(xì)胞分化是胚胎細(xì)胞分裂后，未定形的細(xì)胞在形態(tài)和生化組成上向?qū)Ｒ恍曰蛱禺愋苑较虬l(fā)展的過程 細(xì)胞分化的結(jié)果是演變成特定表型的細(xì)胞類群，這些細(xì)胞在形態(tài)上特化，在功能上專一化

影響細(xì)胞分化的因素

1、細(xì)胞質(zhì)對細(xì)胞分化的誘導(dǎo)

2、細(xì)胞間的相互作用對細(xì)胞分化的誘導(dǎo)

3、形態(tài)發(fā)生過程中的位置效

4、激素對細(xì)胞分化的影響

5、分化的抑制

細(xì)胞分化是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，但基因表達(dá)與分化之間具體關(guān)系仍不清.第二節(jié) 干細(xì)胞（stem cell）

干細(xì)胞（stem cell，SC）是一類具有自我更新能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下能分化成多種功能的細(xì)胞

1、根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分：胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞

2、根據(jù)干細(xì)胞發(fā)育的潛能分：全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞

受精卵能夠分化出各種細(xì)胞、組織，形成一個(gè)完整的個(gè)體，其分化潛能稱為全能性(totipotent)。

1、轉(zhuǎn)分化：一種類型的分化細(xì)胞轉(zhuǎn)變成另一種類型分化細(xì)胞的現(xiàn)象

2、脫分化：分化細(xì)胞失去其特有的結(jié)構(gòu)與功能變成具有未分化細(xì)胞特征的過程：植物愈傷組織

再生：狹義：指生物的器官損傷后，長出與原來形態(tài)、功能相同的結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象：廣義：從分子、細(xì)胞到組織器官都有再生

(四)干細(xì)胞的特征

1、終生保持未分化或低分化特征

2、能無限分裂

3、在機(jī)體的中的數(shù)目、位置相對恒定

4、具有自我更新能力

5、具多向分化潛能，能分化成不同類型的組織細(xì)胞

6、分裂的慢周期性，大多數(shù)干細(xì)胞處于G0期

7、兩種分裂方式： ①對稱分裂：形成兩個(gè)相同的干細(xì)胞②不對稱分裂：形成一個(gè)干細(xì)胞和一個(gè)祖細(xì)胞。

胚胎干細(xì)胞是指從胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或原始生殖細(xì)胞篩選分離出的具有多能性或全能性的細(xì)胞。

1、主要特性①在不同條件下具不同的功能狀態(tài)：有抑制因子時(shí)呈未分化狀態(tài)生長；無抑制因子時(shí)分化成各種細(xì)胞；懸浮培養(yǎng)時(shí)可形成胚狀體②具有發(fā)育分化成各種類型細(xì)胞的多潛能

2、胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用①作為生產(chǎn)克隆動(dòng)物的高效材料：作核供體；ES與胚胎嵌合克服遠(yuǎn)緣雜交困難②生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的高效載體：以ES作載體進(jìn)行外源基因的合理整合，進(jìn)行細(xì)胞水平研究③發(fā)育生物學(xué)研究的體外模式：比較ES細(xì)胞體外分化不同階段基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，研究胚胎發(fā)育及細(xì)胞分化的機(jī)制④新型藥物的篩選：代替實(shí)驗(yàn)動(dòng)物⑤加快組織工程的發(fā)展：人工誘導(dǎo)定向分化，培育出特定的組織和器官，用于醫(yī)學(xué)治療的目的

成體組織器官中，很多細(xì)胞仍具自我更新及分化產(chǎn)生不同組織細(xì)胞的能力，即成體干細(xì)胞。第三節(jié) 癌細(xì)胞

癌細(xì)胞是一種突變的體細(xì)胞，脫離了細(xì)胞社會(huì)的控制，能無限增殖產(chǎn)生腫瘤，并對有機(jī)體的組織和器官形成破壞。

腫瘤可分為良性和惡性腫瘤兩大類。

良性腫瘤：生長緩慢，與周圍組織界限清楚，不發(fā)生轉(zhuǎn)移，對人體健康危害不大。

惡性腫瘤：生長迅速，可轉(zhuǎn)移到身體其它部位，還會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，破壞正常器官結(jié)構(gòu)，使機(jī)體功能失調(diào)，威脅生命。

腫瘤組織由實(shí)質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，實(shí)質(zhì)是腫瘤細(xì)胞，是腫瘤的主要成分，具有組織來源特異性。

間質(zhì)起支持和營養(yǎng)腫瘤實(shí)質(zhì)的作用，不具特異性，一般由結(jié)締組織和血管組成，有時(shí)還有淋巴管。

癌細(xì)胞主要是指惡性腫瘤細(xì)胞，具特征：

1、失去生長與分裂的接觸抑制：正常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)器皿表面形成單層后即停止分裂，也即是細(xì)胞達(dá)到相互接觸后停止分裂，稱接觸抑制；而惡性細(xì)胞失去了這種接觸抑制作用，形成多層堆積的聚集體。

2、細(xì)胞周期失控，能持續(xù)的分裂與增殖。

3、具有遷移性，細(xì)胞粘著和連接相關(guān)的成分發(fā)生變異或缺失，相關(guān)信號(hào)通路受阻，細(xì)胞失去與細(xì)胞間和細(xì)胞外基質(zhì)間的聯(lián)結(jié)，易從腫瘤上脫落。許多癌細(xì)胞具有變形運(yùn)動(dòng)能力，并且能產(chǎn)生酶類，使血管基底層和結(jié)締組織穿孔，使它向其它組織遷移

4、定著依賴性喪失：正常真核細(xì)胞，除成熟血細(xì)胞外，須粘附于特定的細(xì)胞外基質(zhì)上才能抑制凋亡而存活，稱定著依賴性(anchorage dependence)。腫瘤細(xì)胞失去定著依賴性，可在瓊脂、甲基纖維素等支撐物上生長。

5、去分化現(xiàn)象：腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的胎兒同功酶達(dá)20余種。胎兒甲種球蛋白(甲胎蛋白)為胎兒所特有，但在肝癌細(xì)胞中表達(dá)，可做肝癌早期檢定的標(biāo)志特征。

6、體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞對生長因子（血清）的需求量顯著降低：癌細(xì)胞能通過自分泌刺激其細(xì)胞增殖。某些瘤細(xì)胞還能釋放血管生成因子，促進(jìn)血管向腫瘤生長。獲取營養(yǎng)物質(zhì)。

7、代謝旺盛：腫瘤組織的DNA和RNA聚合酶活性均高于正常組織，核酸分解過程明顯降低，DNA和RNA的含量均明顯增高。

8、蛋白質(zhì)合成及分解代謝都增強(qiáng)，但合成代謝超過分解代謝，并可奪取正常組織的蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物，使機(jī)體處于嚴(yán)重消耗的惡病質(zhì)狀態(tài)。

9、線粒體功能障礙：即使在氧供應(yīng)充分時(shí)也主要以糖酵解途徑獲能。

10、可移植性：正常細(xì)胞移植時(shí)，因免疫排斥，不易存活。但腫瘤細(xì)胞具可移植性，人腫瘤細(xì)胞可移植到鼠類，形成移植瘤。

11、死亡特性改變：正常細(xì)胞在生長因子不足或受到傷害時(shí)就會(huì)啟動(dòng)PCD；癌細(xì)胞喪失了PCD機(jī)制。

12、染色體異常：常出現(xiàn)非整倍性染色體組，有喪失或增加。

13、細(xì)胞骨架變化：細(xì)胞骨架少而雜亂無章，導(dǎo)致形態(tài)變化很大。

二、腫瘤形成包括始發(fā)突變、潛伏、促癌和演進(jìn)等過程

（一）腫瘤形成的內(nèi)因

惡性腫瘤的形成往往涉及多個(gè)基因的突變，與原癌基因、抑癌基因突變的逐漸積累有關(guān)。

1、原癌基因是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因，是維持機(jī)體正常生命活動(dòng)所必需，進(jìn)化上高等保守。原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異，基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時(shí)，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。

2、癌基因（oncogene）：依其來源可分為兩類：①細(xì)胞癌基因：多由原癌基因突變而來。編碼的蛋白使細(xì)胞生長不受控制，促進(jìn)細(xì)胞癌變。②病毒癌基因

原癌基因的激活:基因本身或其調(diào)控區(qū)發(fā)生了變異，導(dǎo)致基因的過表達(dá)，或產(chǎn)物蛋白活性增強(qiáng)，使細(xì)胞過度增殖，形成腫瘤。

3、抑癌基因的產(chǎn)物是抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞分化，并抑制細(xì)胞遷移，起負(fù)調(diào)控作用，抑癌基因的突變是隱性突變或功能喪失突變。

正常二倍體細(xì)胞中，每一抑癌基因有兩個(gè)拷貝，只有當(dāng)兩個(gè)拷貝都失活時(shí)才使細(xì)胞增殖失控

二、腫瘤形成的外因：人類腫瘤80％是由于與外界致癌物接觸引起，依性質(zhì)可分為化學(xué)、生物和物理致癌物3大類。依在致癌過程的作用分為:啟動(dòng)劑、促進(jìn)劑、完全致癌物。第十三章 細(xì)胞衰老與凋亡

①生理性衰老：隨年齡增長所表現(xiàn)出的生理退化，一切生物皆存在②病理性衰老：由于內(nèi)在或外在原因使人體發(fā)生病理性變化，使衰老提前發(fā)生，稱早衰③心理性衰老：由于心態(tài)的提前老化而影響整體功能 第一節(jié) 細(xì)胞衰老

一、衰老的概念

衰老(aging，senescence)：隨年齡增加，生物內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性下降，結(jié)構(gòu)與生理機(jī)能退行性變化，趨向死亡不可逆的過程。

衰老發(fā)生在整體水平、種群水平、個(gè)體水平、細(xì)胞水平以及分子水平等層次。機(jī)體的衰老并不等于所有細(xì)胞的衰老，但細(xì)胞的衰老與機(jī)體衰老密切相關(guān)

二、細(xì)胞的壽限:Hayflick界限(Hayflick limitation)：細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下，即使條件適宜，細(xì)胞也不能無限制地進(jìn)行分裂，而是有一定界限

2、細(xì)胞的壽限

各類細(xì)胞的壽命各不相同，一般來說，能夠保持持續(xù)分裂能力的細(xì)胞相對不容易衰老，分化程度高又不分裂的細(xì)胞壽命大多有限 人體細(xì)胞的動(dòng)態(tài)分類

人體細(xì)胞壽命依增殖，分化，生存時(shí)間，分4類

①更新組織：執(zhí)行某種功能的特化細(xì)胞，一定時(shí)間后衰老死亡，由新細(xì)胞分化補(bǔ)充，如上皮細(xì)胞、血細(xì)胞。②穩(wěn)定組織細(xì)胞：分化程度較高，功能專一，一般沒明顯衰老，不分裂，但終生保持分裂能力，受破壞時(shí)，其余細(xì)胞也能分裂，補(bǔ)充失去的細(xì)胞，如肝、腎細(xì)胞。

③恒久組織細(xì)胞：高度分化細(xì)胞，一生沒細(xì)胞更替，破壞后不能得補(bǔ)充。如神經(jīng)細(xì)胞，骨骼細(xì)胞和心肌細(xì)胞。

④可耗盡組織細(xì)胞：卵巢實(shí)質(zhì)細(xì)胞，一生中逐漸消耗，不能得到補(bǔ)充，最后消耗殆盡。

三、細(xì)胞衰老的形態(tài)學(xué)特征

細(xì)胞衰老主要是細(xì)胞生理生化的變化，也反映在細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上：

1、細(xì)胞內(nèi)水分的減少：蛋白質(zhì)水合能力下降,衰老細(xì)胞水分減少，細(xì)胞皺縮，體積縮小。

2、核變化:核膜內(nèi)折，染色體固縮化，端粒縮短

3、線粒體的變化：隨年齡增大，數(shù)量減少，體積增大，內(nèi)容物呈網(wǎng)狀化并形成多囊體，mtDNA缺失突變

4、質(zhì)膜的變化：流動(dòng)性下降，磷脂減少，不飽和脂肪酸下降；膜脂過氧化，對刺激反應(yīng)性下降

5、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的變化：RER趨向減少和無序化

6、蛋白質(zhì)合成：核糖體合成效率及準(zhǔn)確性降低

7、色素生成及致密體形成：色素生成隨衰老而增加，并在溶酶體或線粒體中沉積

四、分子水平的變化

衰老細(xì)胞DNA、蛋白質(zhì)和脂類等成分損傷，代謝能力降低，主要表現(xiàn)：

DNA：復(fù)制與轉(zhuǎn)錄受抑制，個(gè)別基因異常激活，端粒DNA丟失，線粒體DNA特異缺失，DNA氧化、斷裂、缺失和交聯(lián)，甲基化程度降低。RNA：mRNA和tRNA含量降低。

蛋白質(zhì)：含成下降，蛋白質(zhì)糖基化、氨甲?；⒚摪被刃揎?，使蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、抗原性、可消化性下降，自由基使肽斷裂、交聯(lián)而變性。aa由左旋變右旋

酶分子：活性中心被氧化，Ca2+、Zn2+、Mg2+、Fe2+等丟失，酶分子二級結(jié)構(gòu)、溶解度、等電點(diǎn)改變，酶失活

脂類：不飽和脂肪酸被氧化，引起膜脂間或與脂蛋白間交聯(lián)，膜流動(dòng)性下降。

四、細(xì)胞衰老的分子機(jī)制

對衰老機(jī)理具有不同學(xué)說，主要有: 差錯(cuò)學(xué)說(Error theories):強(qiáng)調(diào)衰老是由于細(xì)胞中的各種錯(cuò)誤積累引起.遺傳學(xué)說(Genetic/Programmed theories):強(qiáng)調(diào)衰老是遺傳決定的自然演進(jìn)過程。第二節(jié) 細(xì)胞壞死與凋亡

死亡是生命的普遍現(xiàn)象，但細(xì)胞死亡并非與機(jī)體死亡同步。正常組織中，常發(fā)生“正?！钡募?xì)胞死亡，它是維持組織機(jī)能和形態(tài)所必需。

細(xì)胞死亡的方式通常有2種①細(xì)胞壞死(necrosis)。②細(xì)胞凋亡(apoptosis)。

一、細(xì)胞壞死

細(xì)胞受到化學(xué)因素(如酸、堿、毒物)、物理因素(如熱、輻射)和生物因素(如病原體)等環(huán)境因素傷害，引起細(xì)胞死亡的現(xiàn)象。是一種被動(dòng)死亡

細(xì)胞壞死初期，細(xì)胞質(zhì)膜通透性增加，線粒體和ER腫脹、崩解，結(jié)構(gòu)脂滴游離、空泡化，蛋白質(zhì)顆粒增多，核發(fā)生固縮。胞質(zhì)蛋白變性、凝固或碎裂，嗜堿性核蛋白降解，細(xì)胞質(zhì)呈強(qiáng)嗜酸性，壞死細(xì)胞蘇木精/伊紅染色，胞質(zhì)呈紅色，原有微細(xì)結(jié)構(gòu)消失

壞死后期，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞內(nèi)容物流出，引起周圍組織炎癥反應(yīng)。

二、細(xì)胞凋亡(cell apoptosis)

又稱程序性細(xì)胞死亡(PCD)：是細(xì)胞接受基因指令后的主動(dòng)死亡。

凋亡的細(xì)胞散落在正常組織中，無炎癥反應(yīng)，不遺留疤痕。死亡細(xì)胞的碎片很快被巨噬細(xì)胞或相鄰細(xì)胞所清除，不影響其它細(xì)胞的功能

程序性細(xì)胞死亡表現(xiàn)出明顯的形態(tài)學(xué)特征：

①核酸內(nèi)切酶活化，使染色質(zhì)DNA在核小體連接部位斷裂，形成約200bp整數(shù)倍的核酸片段，凝膠電泳圖譜呈梯狀；

②染色質(zhì)在核膜下聚集成染色質(zhì)塊，細(xì)胞不斷脫水，胞質(zhì)凝縮，核膜在核孔處斷裂，細(xì)胞以出芽方式形成凋亡小體（apoptotic body）；

③凋亡小體內(nèi)有結(jié)構(gòu)完整的細(xì)胞器、凝縮的染色質(zhì)，可被鄰近細(xì)胞吞噬消化，始終有膜封閉，沒內(nèi)溶物釋放，不引起炎癥。

第三節(jié) 細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理

細(xì)胞凋亡和增殖是生命的基本現(xiàn)象，是維持體內(nèi)細(xì)胞數(shù)量動(dòng)態(tài)平衡的基本措施。在胚胎發(fā)育階段以細(xì)胞凋亡清除多余的和已完成使命的細(xì)胞，保證了胚胎的正常發(fā)育； 在成年階段通過細(xì)胞凋亡清除衰老和病變細(xì)胞，保證了機(jī)體健康。細(xì)胞凋亡是受基因調(diào)控的精確過程 apoptosis的途徑主要有:

1、胞外信號(hào)激活細(xì)胞內(nèi)凋亡酶caspase；

2、線粒體釋放凋亡酶激活因子激活caspase 活化的caspase可將胞內(nèi)重要蛋白降解，引起細(xì)胞凋亡。葉綠體與線粒體結(jié)構(gòu)和功能的比較

葉綠體和線粒體都是真核細(xì)胞中與能量代謝相關(guān)的細(xì)胞器，有著相同的起源和增殖方式，且都是半自主性細(xì)胞器。但兩者在結(jié)構(gòu)與功能上也有很大的不同: 結(jié)構(gòu)上，線粒體是雙膜結(jié)構(gòu)，有兩個(gè)區(qū)室，而葉綠體是三膜結(jié)構(gòu)，有三個(gè)區(qū)室。

線粒體內(nèi)膜向內(nèi)折皺成嵴，ATP合酶位于嵴上，主要功能是傳遞電子和合成ATP。而葉綠體內(nèi)膜少有內(nèi)折。?功能上，線粒體是有機(jī)物氧化的場所，通過氧化磷酸化將釋放的自由能轉(zhuǎn)變成可利用的化學(xué)能儲(chǔ)存在ATP。葉綠體是光能的捕獲者和有機(jī)物的制造者，光能的捕獲和轉(zhuǎn)化是通過光合作用來完成的。但兩者都是通過電子傳遞和建立H+梯度來實(shí)現(xiàn)能量的轉(zhuǎn)換。

?在質(zhì)子梯度建立上二者有許多相似,也有區(qū)別，葉綠體中H+梯度是在類囊體膜兩側(cè)建立,在線粒體中，H+梯度是在內(nèi)膜兩側(cè)建立的.微絲的功能

1.形成應(yīng)力纖維：在粘著斑的細(xì)胞質(zhì)膜的下方有肌動(dòng)蛋白成束排列,這種結(jié)構(gòu)即稱應(yīng)力纖維 非肌細(xì)胞中的應(yīng)力纖維與肌原纖維類似：含原肌球蛋白、myosin II、細(xì)絲蛋白和α輔肌動(dòng)蛋白 培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中具有豐富的應(yīng)力纖維，并通過粘著斑固定在基質(zhì)上。應(yīng)力纖維在細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、分化和組織形成起重要作用

2、微絨毛：腸上皮細(xì)胞微絨毛有軸心微絲，微絲呈同向平行排列，（+）端指向微絨毛的尖端。不含肌球蛋白等，無收縮功能，起維持微絨毛形狀的作用

3、細(xì)胞的變形運(yùn)動(dòng)：變形蟲、巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞等沒運(yùn)動(dòng)器官，能依靠細(xì)胞形態(tài)的變化進(jìn)行移動(dòng)，稱變形運(yùn)動(dòng)?？堪|(zhì)環(huán)流形成偽足，細(xì)胞沿偽足方向前進(jìn)。

細(xì)胞內(nèi)流動(dòng)的細(xì)胞質(zhì)稱內(nèi)質(zhì)，從尾部流向偽足，并在細(xì)胞兩側(cè)形成較硬的外質(zhì)。細(xì)胞后部外質(zhì)破壞向前提供新的內(nèi)質(zhì)，產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)和外質(zhì)的循環(huán)轉(zhuǎn)化，引起細(xì)胞前移。

外質(zhì)與內(nèi)質(zhì)間的轉(zhuǎn)變稱凝膠-溶膠轉(zhuǎn)變，實(shí)質(zhì)是肌動(dòng)蛋白聚合體與單體間的轉(zhuǎn)變

4、細(xì)胞的爬行

高等動(dòng)物中的細(xì)胞移動(dòng)是很多活動(dòng)所必需，如傷口的愈合、防止感染、血塊凝集等，但難以觀察，只能用培養(yǎng)的細(xì)胞觀察 分為四步：

微絲纖維生長，細(xì)胞表面突出，形成片足； 在片足與基質(zhì)接觸的位置形成粘著斑； myosin作用下微絲纖維滑動(dòng)，細(xì)胞主體前移； 解除細(xì)胞后方粘著點(diǎn)。如此循環(huán)，細(xì)胞前移動(dòng)

5、胞質(zhì)分裂：有絲分裂末期，2個(gè)將分離的子細(xì)胞之間產(chǎn)生收縮環(huán)，收縮環(huán)由平行排列的微絲和myosin II組成。隨著收縮環(huán)的收縮，兩個(gè)子細(xì)胞的胞質(zhì)分離。在細(xì)胞松馳素存在的情況下，不能形成胞質(zhì)分裂環(huán)。

6、頂體反應(yīng)：精卵結(jié)合時(shí)，微絲使頂體突出穿入卵子的膠質(zhì)里，融合后受精卵細(xì)胞表面積增大，形成微絨毛，微絲參與形成微絨毛，有利于吸收營養(yǎng)。

7、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸：微絲可作為馬達(dá)蛋白進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸?shù)能壍?，如小泡的運(yùn)輸，可通過肌球蛋白Ⅰ同微絲蛋白結(jié)合，將小泡沿微絲的（-）端向（+）端運(yùn)輸

8、細(xì)質(zhì)環(huán)流：由肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白相互作用引起。在胞質(zhì)環(huán)流中，肌動(dòng)蛋白的排列方向相同，（+）端朝向細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的方向，肌球蛋白可沿著肌動(dòng)蛋白纖維（-）端向（+）端移動(dòng)。微管的功能

1、支架作用

微管具一定機(jī)械強(qiáng)度，能抗壓和抗彎曲，給細(xì)胞提供了機(jī)械支持力，使細(xì)胞維持一定的形態(tài)。在培養(yǎng)的細(xì)胞中，微管呈放射狀排列在核外，(+)端指向質(zhì)膜，形成平貼在培養(yǎng)皿上的形狀。微管能幫助細(xì)胞產(chǎn)生極性,在神經(jīng)軸突中，微管束沿長軸排列，確定軸突的方向.微管對細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及細(xì)胞表面突起的維持具有重要作用

2、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的運(yùn)輸

微管是胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸路軌，破壞微管會(huì)抑制運(yùn)輸

與微管結(jié)合起運(yùn)輸作用的馬達(dá)蛋白有兩類：驅(qū)動(dòng)蛋白kinesin，動(dòng)力蛋白dynein，均需ATP供能。①Kinesin由1條輕鏈和2條重鏈構(gòu)成，具2個(gè)球形的頭,是動(dòng)力產(chǎn)生部位,1個(gè)扇形尾,是貨物結(jié)合部位。通過結(jié)合和水解ATP，使頸部構(gòu)象改變，兩個(gè)頭部交替與微管結(jié)合，沿 “行走”，將“尾部”結(jié)合的“貨物”從微管(-)端轉(zhuǎn)運(yùn)到(+)端。

②動(dòng)力蛋白Dynein分子量巨大，由兩條相同的重鏈和一些輕鏈及結(jié)合蛋白構(gòu)成(鞭毛二聯(lián)微管外臂的動(dòng)力蛋白具有三個(gè)重鏈)。作用主要有：

A.在有絲分裂中推動(dòng)染色體的分離;B.驅(qū)動(dòng)鞭毛的運(yùn)動(dòng);C.向著微管（-）極運(yùn)輸小泡，與驅(qū)動(dòng)蛋白運(yùn)輸方向相反

3、纖毛與鞭毛的運(yùn)動(dòng)

纖毛與鞭毛是細(xì)胞特化結(jié)構(gòu)，兩者沒絕對界限,短而多者稱纖毛，長者而少稱鞭毛，直徑相似。

兩者結(jié)構(gòu)相似：由基體和鞭桿2部分構(gòu)成，鞭桿軸心含9+2排列的微管：9個(gè)二聯(lián)微管和1對中央微管構(gòu)成。二聯(lián)微管由AB兩個(gè)管組成，A管對著相鄰的B管伸出兩條動(dòng)力蛋白臂，并向鞭毛中央發(fā)出一條輻?；w的微管為9+0，且為三聯(lián)微管，類似中心粒 軸心的主要蛋白結(jié)構(gòu)有: ①微管蛋白二聚體,無秋水仙素結(jié)合位點(diǎn);②動(dòng)力蛋白臂:由二聯(lián)體的A亞基伸出,與相鄰二聯(lián)體B亞基相互作用使纖毛彎曲.動(dòng)力蛋白也是ATP酶,能被Ca2+、Mg2+所激活；

③微管連接蛋白：將相鄰二聯(lián)體連接在一起； ④放射幅條：9條，二聯(lián)體A亞基伸向中央微管； ⑤內(nèi)鞘：包裹中央微管

纖毛和鞭毛運(yùn)動(dòng)的微管滑動(dòng)模型: ① A管上的動(dòng)力蛋白與相鄰二聯(lián)管B管接觸,使動(dòng)力蛋白結(jié)合的ATP水解,并釋放出ADP+Pi;②ATP水解改變了動(dòng)力蛋白頭部的構(gòu)象和角度,使頭部向相鄰二聯(lián)管的正端滑動(dòng),使相鄰二連管間產(chǎn)生彎曲力;③新結(jié)合的ATP,促使動(dòng)力蛋白頭部與B管脫離;④ATP水解使動(dòng)力蛋白頭部角度復(fù)原,與相鄰二聯(lián)管的B管上的另一位點(diǎn)結(jié)合,開始下一循環(huán)

4、參與細(xì)胞的有絲分裂與減數(shù)分裂

細(xì)胞分裂過程中染色體的分離是靠紡錘體的形成、運(yùn)動(dòng)和解聚開完成的

紡錘體又稱有絲分裂器，它是在有絲分裂期間，從中心粒形成的各種微管：動(dòng)粒微管、極微管、星微管等 綠色絲狀就是微管結(jié)構(gòu)

有絲分裂器的形成有賴于中心體的復(fù)制，并分別移到兩極。中心體在細(xì)胞周期中具有復(fù)制-分離-復(fù)制的周期，稱中心體循環(huán)

中心體循環(huán)始于G1期，兩個(gè)子代中心粒達(dá)到了足夠長度，但仍處于同一中心體，有絲分裂早期，中心體裂開，每對中心粒移向細(xì)胞相反的兩端，然后裝配成有絲分裂器

在有絲分裂過程中，染色體的分離依靠兩種力的作用：①動(dòng)粒微管去裝配產(chǎn)生的拉力；②極微管聚合產(chǎn)生的推力

根據(jù)所使用的力，有絲分裂可分為兩個(gè)階段：后期A和后期B 后期A，染色體運(yùn)動(dòng)的力主要是由動(dòng)粒微管去裝配產(chǎn)生的拉力，此時(shí)的運(yùn)動(dòng)稱向極運(yùn)動(dòng) 后期B，染色體運(yùn)動(dòng)的力主要是極微管聚合產(chǎn)生的推力，此時(shí)的運(yùn)動(dòng)稱染色體極分離運(yùn)動(dòng) 微管去聚合作用假說：主要解釋后期A向極運(yùn)動(dòng)的一種模型：

微管的正端插入動(dòng)粒的外層，微管蛋白和動(dòng)粒蛋白分子有親合性，微管蛋白在此端可以去組裝。在動(dòng)粒中，ATP分子水解可提供能量，驅(qū)動(dòng)微管上的動(dòng)力蛋白向兩極移動(dòng)，將染色體拉向兩極 紡錘體微管滑動(dòng)假說：是關(guān)于后期B染色體分離機(jī)制的一種假說： 首先，極微管在正端添加二聚合體延長，使兩極的極微管重疊； 然后，在重疊的極微管之間產(chǎn)生滑動(dòng)，形成將兩極分開的力 中間纖維的功能：

了解較少，尚沒找到與IF特異結(jié)合的藥物，主要有三個(gè)方面：

①為細(xì)胞提供機(jī)械強(qiáng)度支持：IF在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)形成了一個(gè)完整的支撐網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，并通過整聯(lián)蛋白與質(zhì)膜和細(xì)胞外基質(zhì)相連；在內(nèi)部可直接與MT和MF及其它細(xì)胞器相連，賦予了細(xì)胞一定強(qiáng)度和支撐力。②參與細(xì)胞連接：參與了橋粒和半橋粒連接 ③維持細(xì)胞核穩(wěn)定：核纖層蛋白是IF的一種

第五篇：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)社會(huì)實(shí)踐報(bào)告

建立一個(gè)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)室與植物細(xì)胞培養(yǎng)室所需的條件與社會(huì)價(jià)值

無菌環(huán)境是細(xì)胞離體培養(yǎng)的最基本條件，所以構(gòu)建一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)室需要保證工作環(huán)境不受微生物和其他有害物質(zhì)污染，并且干燥無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室。

一、基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室配置

⑴消毒間：消毒間主要為了處理實(shí)驗(yàn)器材以及實(shí)驗(yàn)材料，營造一個(gè)無菌的試驗(yàn)環(huán)境，一般消毒間會(huì)配備超凈實(shí)驗(yàn)臺(tái)、高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、細(xì)菌過濾設(shè)備、干熱消毒柜、電爐、酸缸等。

⑵無菌操作間：一般由緩沖間和操作間兩部分組成。緩沖間在外側(cè)，多用于實(shí)驗(yàn)之前的準(zhǔn)備，例如：更衣，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料，處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等，可放置電冰箱,冷藏器及消毒好的無菌物品等。操作間放置凈化工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱,離心機(jī),倒置顯微鏡等。工作人員進(jìn)入操作間一定要消毒并更衣。

（3）培養(yǎng)基配制間：主要用于配置細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基。主要包括冰箱、天平、微波爐、pH計(jì)、培養(yǎng)基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲(chǔ)藏瓶等。

（4）培養(yǎng)室：用于培養(yǎng)細(xì)胞，放置以接種的培養(yǎng)基等。為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時(shí)間及其強(qiáng)度，培養(yǎng)室的房間不要窗戶，但應(yīng)當(dāng)留一個(gè)通氣窗，并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制，光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè)，一般要分兩間，一為光照培養(yǎng)室，一為暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。培養(yǎng)室應(yīng)配有培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動(dòng)控時(shí)器等。

（5）洗滌間：主要用于清洗實(shí)驗(yàn)之后的用具。除配置水槽外，還需配置洗液皿、落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等，有需求的還可以配置洗瓶機(jī)。

以上基礎(chǔ)設(shè)施若實(shí)驗(yàn)室條件不夠，可將消毒間，培養(yǎng)基配制間，洗滌間合并一起，但注意實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生以及儀器擺放，房間要保持清潔，明亮。

二、輔助實(shí)驗(yàn)室

細(xì)胞學(xué)鑒定室：其功能是對培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究。要求清潔、明亮、干燥，使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。應(yīng)配置各種顯微鏡、照相系統(tǒng)等。

生化分析室：在以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室中，應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，以便于對培養(yǎng)物的有效成分隨時(shí)進(jìn)行取樣檢查。離心機(jī)、酶聯(lián)免疫檢測儀、天平、PCR儀等。

溫室：用于試管苗的鍛煉和移植，為試管苗提供滿足生長的適宜環(huán)境條件。常用設(shè)備有：溫室、彌霧裝置、蔭棚、移栽床、缽、盆、基質(zhì)等（用于植物細(xì)胞培養(yǎng)室）。

實(shí)驗(yàn)器材匯總： CO2培養(yǎng)箱：37度+/-0.5度；能調(diào)節(jié)溫度和CO2濃度

冰箱：4度或-20度家用冰箱，保存一般制劑；-70度保存蛋白制劑 水質(zhì)純化裝置：凈化水質(zhì)用于清洗或配制培養(yǎng)液

培養(yǎng)器皿分玻璃和塑料兩種，玻璃器皿適用于大部分細(xì)胞生長，可重復(fù)使用，塑料器皿方便，即開即做，無需清洗。

多孔培養(yǎng)板：為塑料制品?？晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑，可同時(shí)測試大量樣本，易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

Oa貯液瓶：主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

Ob吸管：主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉(zhuǎn)移液體，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管，除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外，彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。

手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），用于解剖動(dòng)物、分離及切剪組織，制備原代培養(yǎng)的材料；眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），用于將組織材料剪成小塊；血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直），用于持取無菌物品（如小蓋玻片）夾持組織等；口腔科探針或代用品，用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。社會(huì)價(jià)值： 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的社會(huì)價(jià)值在于，為實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)，促進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)的好處如下：

1.直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)。用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)和腫瘤學(xué) 等多種學(xué)科研究.2.直接觀察細(xì)胞的變化可便于攝影。3.研究細(xì)胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。4.便于使用各種技術(shù)：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標(biāo)記等方法觀察和研究細(xì)胞狀況。5.是分子生物學(xué)和基因工程學(xué)的研究對象，也是其主要的組成部分。6.易于施用物理、化學(xué)生物的實(shí)驗(yàn)研究。7.易于提供大量生物性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象,耗資少比較經(jīng)濟(jì)。8.成為生物制品單克隆抗體生產(chǎn)和基因工程等的材料來源。