第一篇：如何正確認(rèn)識(shí)副豬嗜血桿菌

如何正確認(rèn)識(shí)副豬嗜血桿菌

賈誠(chéng)信

近兩個(gè)月來(lái)，邯鄲地區(qū)陸續(xù)發(fā)生了以呼吸道為主要癥狀的烈性傳染病，給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶帶來(lái)了不可估計(jì)的經(jīng)濟(jì)損失。為了進(jìn)一步控制疫情，公司技術(shù)團(tuán)隊(duì)親自下基層為廣大養(yǎng)殖戶開(kāi)展技術(shù)咨詢活動(dòng)，講解當(dāng)前容易發(fā)生的幾種疾病和控制方案，并提供大量的技術(shù)通訊資料，為養(yǎng)殖戶進(jìn)一步控制當(dāng)前疫情起到了積極的作用。

在基層防控疫情的過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)了此次疫情有個(gè)共同的臨床癥狀，據(jù)我們技術(shù)專家團(tuán)隊(duì)的一致認(rèn)為，這次疫情主要引起死亡的疾病是副豬嗜血桿菌，應(yīng)引起廣大養(yǎng)殖企業(yè)（戶）的廣泛關(guān)注。為此，我們把副豬嗜血桿菌的一些基本常識(shí)與大家交流一下。

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（HPS）引起的一種嚴(yán)重的接觸性傳染病和全身性疾病。臨床上以發(fā)燒、咳嗽、嚴(yán)重呼吸困難、發(fā)紺、疼痛、被毛粗亂、進(jìn)行性消瘦，部分豬出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、跛行和中樞神經(jīng)癥狀，以及極高的死亡率為特征。在豬場(chǎng)流行的“豬高熱綜合癥” 中，副豬嗜血桿菌病是引起豬大量死亡的主要原因之一，這一結(jié)論在某些核心雜志上已經(jīng)多次報(bào)告。

副豬嗜血桿菌為嗜血桿菌屬的副豬嗜血桿菌。在顯微鏡下多呈現(xiàn)不同的形態(tài)，有短小桿菌，也有球形、棒狀、絲狀的，無(wú)鞭毛、不形成芽孢、多數(shù)無(wú)莢膜，但新分離出來(lái)的強(qiáng)毒株帶有莢膜。該菌具有明顯的地方性特征，按血清分型方法，可將副豬嗜血桿菌分為15 種血清型，各血清型之間的致病力存在極大的差異，其中血清1、5、10、12、13、14 型毒力最強(qiáng)，患豬歸于死亡或處于瀕死狀態(tài)；血清2、4、8、15 型為中等毒力，患豬死亡率低，但出現(xiàn)敗血癥狀，生長(zhǎng)遲滯；血清3、6、7、9、11 型感染豬后沒(méi)有明顯臨床癥狀。目前，從豬場(chǎng)分離出來(lái)的多是血清4型和5型。

副豬嗜血桿菌病的主要傳播途徑是呼吸道，通過(guò)空氣、豬與豬之間的接觸或通過(guò)污染排泄物進(jìn)行傳播。在引進(jìn)種豬時(shí)，副豬嗜血桿菌感染是個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題。未免疫的豬場(chǎng)容易受到侵襲，首次感染該菌的豬，癥狀比較嚴(yán)重。在豬繁殖與呼吸綜合癥（俗稱藍(lán)耳病，PRRS）、圓環(huán)病毒病（PCV）等免疫抑制性疾病存在的豬場(chǎng)，本病更容易趁機(jī)暴發(fā)，發(fā)病快，死亡率大幅度上升，損失慘重。如果再與肺炎支原體（MHP）、胸膜肺炎放線桿菌（APP）、多殺性巴氏桿菌（Pm）、豬鏈球菌（SS）等混合感染，便會(huì)發(fā)生呼吸道病綜合癥（PRDC），給豬場(chǎng)造成毀滅性的打擊。研究表明，豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病毒等能降低豬肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬和殺菌能力，從而增加了HPS 的感染機(jī)率。

副豬嗜血桿菌病只感染豬，可以影響從2周齡到4月齡的青年豬，主要在斷奶前后和保育階段發(fā)病，通常見(jiàn)于5-8周齡的豬。近年來(lái)，該病的發(fā)病日齡越來(lái)越早，發(fā)病率一般在10％-15％，嚴(yán)重時(shí)死亡率可達(dá)50％?；钾i和帶菌豬是本病的主要傳染源，細(xì)菌寄生在鼻腔等上呼吸道內(nèi)，主要通過(guò)空氣、直接接觸來(lái)感染其他豬，通過(guò)其他的傳播途徑如消化道也可感染。副豬嗜血桿菌作為豬上呼吸道的常在菌，是一種條件性致病菌。試驗(yàn)證明，支氣管敗血波氏桿菌是造成副豬嗜血桿菌在上呼吸道定植的誘因，其機(jī)理與豬萎縮性鼻炎中多殺性巴氏桿菌的作用相似。副豬嗜血桿菌可引起化膿性鼻炎，病灶處纖毛丟失以及鼻粘膜和支氣管粘膜的細(xì)胞急性膨脹，粘膜損傷還會(huì)增加細(xì)菌和病毒入侵機(jī)會(huì)；也可損傷纖毛上皮，使呼吸道粘膜表面纖毛的活動(dòng)顯著降低。近年來(lái)該病的發(fā)病率不斷上升與很多因素有關(guān)：（1）豬群發(fā)生豬瘟、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒等感染后，豬群的抵抗力下降，副豬嗜血桿菌就會(huì)乘虛而入，引起發(fā)??；（2）在豬發(fā)生氣喘病、豬流感等一些呼吸道疾病時(shí)，副豬嗜血桿菌的存在可加劇它們的病情，使病情復(fù)雜化；（3）隨著規(guī)模化養(yǎng)殖的發(fā)展，飼養(yǎng)管理技術(shù)調(diào)整不當(dāng)，豬群密度大、過(guò)分擁擠、環(huán)境衛(wèi)生差、豬舍空氣混濁、氨氣過(guò)濃等，導(dǎo)致該病多發(fā)；（4）斷奶、轉(zhuǎn)群、長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激因素也可引起該病發(fā)生；（5）此外，飼料中霉菌毒素的存在，導(dǎo)致豬群出現(xiàn)免疫抑制，機(jī)體抵抗力弱，也容易引起發(fā)病。

繁殖母豬一般不表現(xiàn)明顯癥狀，2-8 周齡仔豬感染發(fā)病可呈典型癥狀，同其他呼吸道疾病類似，主要表現(xiàn)為急性型和慢性型兩種癥狀，但一般豬場(chǎng)以慢性型為主。急性型病豬體溫高達(dá)40-41℃，精神沉郁，食欲減退，氣喘，咳嗽，反應(yīng)遲緩，呼吸困難，鼻孔有黏液性及漿液性分泌物，關(guān)節(jié)腫脹、跛行、步態(tài)僵硬，同時(shí)出現(xiàn)身體顫抖，共濟(jì)失調(diào)，可視黏膜發(fā)紺，3天左右死亡。急性感染病例存活后會(huì)留下后遺癥，即母豬流產(chǎn)、公豬跛行、仔豬和育肥豬遺留呼吸道癥狀和神經(jīng)癥狀。慢性型通常由急性型轉(zhuǎn)化而來(lái)，病豬 消瘦虛弱，被毛粗亂無(wú)光，皮膚發(fā)白，咳嗽，呈腹式呼吸，關(guān)節(jié)腫大，嚴(yán)重時(shí)皮膚發(fā)紅，不能站立，耳朵發(fā)紺，少數(shù)病例突然死亡。特征性病理變化為胸腔、腹腔漿膜及肺部發(fā)炎，胸腔內(nèi)有大量的淡紅色液體及纖維素性滲出物凝塊。肺表面覆蓋有大量的纖維素性滲出物并與胸壁粘連，多數(shù)為間質(zhì)性肺炎，部分有對(duì)稱性肉變。單個(gè)或多個(gè)漿膜面損傷，有漿液性和化膿性纖維蛋白滲出，包括心包膜、腹膜、胸膜、腦膜和關(guān)節(jié)膜(主要是腕關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié))等，通常以不同的組合存在，較少單獨(dú)發(fā)生。

剖檢可見(jiàn)體表淋巴結(jié)，如頜下淋巴結(jié)、肩前淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)等腫大，呈灰白色；內(nèi)臟淋巴結(jié)，如支氣管淋巴結(jié)、肝門(mén)淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)腫大，出血，呈暗紅色，切面呈大理石樣花紋。急性病豬胸腔內(nèi)積有大量淡黃色液體，含少量呈網(wǎng)狀的纖維蛋白；心包液增多，心包腔內(nèi)有少量纖維蛋白連于心包膜與心外膜上。慢性病豬的胸膜腔內(nèi)常蓄積有大量污黃色、腐尸味的液體，肋胸膜和肺胸膜附著有大量纖維蛋白滲出物，使肺臟與肋胸膜發(fā)生粘連，肺臟有大片紅色肝變區(qū)；心包腔內(nèi)蓄積有大量灰白色液體，心包膜的內(nèi)、外表面和心外膜表面附著有大量絨毛狀纖維蛋白滲出物，使心包膜與肺臟、心臟發(fā)生嚴(yán)重粘連。打開(kāi)心包膜，心臟表面呈絨毛狀外觀，病理學(xué)上將其稱為“絨毛心”。通常在肺的橫隔膜葉較易出現(xiàn)病灶，全身淋巴結(jié)腫大，暗紅色，切面呈大理石花紋。急性病豬的腹腔內(nèi)腹水顯著增多，腹水內(nèi)含有少量纖維蛋白滲出物，肝臟和脾臟輕度腫大，表面散在附著有纖維蛋白滲出物，胃、小腸和大腸無(wú)肉眼可見(jiàn)變化。慢性病豬腹腔內(nèi)有大量混濁的黃褐色滲出液，腹膜出血、腫脹；肝臟和脾臟腫大，質(zhì)地較硬，色澤較暗，表面附著有大量纖維蛋白滲出物；肝臟各葉之間，肝臟與腹膜之間發(fā)生粘連；小腸和大腸腸壁腫脹、變厚、出血，表面附著有大量纖維蛋白滲出物，相鄰腸管之間、腸管與腹膜之間粘連在一起。

防控方案：

實(shí)行”全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)制度，做到嚴(yán)格分群飼養(yǎng) 對(duì)規(guī)模化豬場(chǎng)來(lái)講，分娩舍一定要采用小單元的飼養(yǎng)模式，實(shí)行”全進(jìn)全出”的飼喂體系，嚴(yán)格禁止不同批次的豬只混養(yǎng)，舍內(nèi)保持合理的飼養(yǎng)密度，確保適宜的溫度和舍內(nèi)優(yōu)良的空氣質(zhì)量，對(duì)欄舍單元進(jìn)出豬只前后要徹底的沖洗、消毒，并空置凈化一周后再投入使用，以減少豬群的發(fā)病幾率。

消除減少各類應(yīng)激因素 由于HPS為條件性致病性疾病，故應(yīng)減少、消除各類應(yīng)激因素，千方百計(jì)地把斷奶、轉(zhuǎn)群換料、免疫注射等應(yīng)激因素減少到最小范圍，在保育階段盡量減少注射疫苗，特別是口蹄疫苗，如果母源抗體處于高免疫狀態(tài)下，可安排到60～70日齡免疫。

關(guān)注霉菌毒素污染的問(wèn)題 由于霉菌毒素對(duì)豬群的免疫系統(tǒng)造成損害，導(dǎo)致豬體的抵抗力下降，鑒于目前飼料普遍存在霉菌毒素的實(shí)際情況，建議飼料中添加優(yōu)質(zhì)的脫霉制劑，以減輕霉菌毒素的危害。

藥物控制 經(jīng)常發(fā)生仔豬多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎的豬場(chǎng)應(yīng)提前使用有效藥物進(jìn)行預(yù)防。豬副嗜血桿菌，可能是當(dāng)前豬場(chǎng)所有致病菌中耐藥性產(chǎn)生速度最快的一種細(xì)菌。所以一方面推薦使用藥物組合，使藥物產(chǎn)生協(xié)同作用而減少組合中各組分的用藥量而不影響療效，這樣可以阻止或延緩耐藥性的產(chǎn)生；另一方面推薦多種藥物組合輪換使用，同樣可以阻止或延緩耐藥性的產(chǎn)生。

（1）母豬

混飼：在母豬飼養(yǎng)的任何階段飼料中長(zhǎng)期添加“利霉凈（特殊工藝脫霉劑，高效吸毒但不吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、高效脫毒、高效解毒、高效排毒）”1-2 kg / 噸 + 妊娠84天以后飼料中添加“圍產(chǎn)動(dòng)力（純中藥產(chǎn)品，增強(qiáng)母豬分娩期動(dòng)力，防止母豬便秘和具有較好的保胎、安胎作用，連用7-10天）”4 kg / 噸。

產(chǎn)前、產(chǎn)后保?。骸邦^孢經(jīng)典（5%頭孢噻呋鈉、18%牛初乳免疫球蛋白）”— 母豬產(chǎn)前48小時(shí)一次量肌肉注射本品10-15ml，可阻斷母豬將病原體垂直傳播給仔豬、防止母豬產(chǎn)前不食和預(yù)防母豬產(chǎn)后感染；母豬產(chǎn)后4-6小時(shí)內(nèi)一次量肌肉注射本品15-20ml，可預(yù)防母豬產(chǎn)后三聯(lián)癥和防止母豬產(chǎn)后不食。

驅(qū)蟲(chóng)：“清凈100（具有安全、高效的作用，可用于孕畜；科學(xué)配方，療效神奇，中西醫(yī)結(jié)合；高效驅(qū)內(nèi)、外寄生蟲(chóng)，顯著提高飼料報(bào)酬）”一次量，0.3ml /kg。

（2）哺乳仔豬

三針保健

“頭孢經(jīng)典（5%頭孢噻呋鈉、18%牛初乳免疫球蛋白）”分別于1日齡0.5ml/頭、7日齡0.5ml/頭、21日齡1.0ml/頭，用于預(yù)防仔豬細(xì)菌性腹瀉和呼吸道疾病。

（3）保育仔豬

“保育安（20%強(qiáng)力霉素、20%氟苯尼考、5%阿奇霉素、20%金絲桃素、18%松果菊，中西醫(yī)配方，標(biāo)本兼治，療效可靠，是綜合防控保育仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的首選藥物，可有效防止病毒引起的各 種繼發(fā)性感染）”混飼，用本品500g拌料1000kg，連用7-10天，用于預(yù)防；治療按上述劑量加倍。

“嗜血?jiǎng)榆?chē)（45%阿莫西林、20%頭孢噻呋、15%頭孢拉啶、8%抗菌增效劑，是預(yù)防/治療當(dāng)前副豬嗜血桿菌病的首選藥物，效果明顯，深受廣大養(yǎng)殖戶的青睞）”混飼，用本品500g拌料1000kg，連用7-10天，用于預(yù)防；治療按上述劑量加倍。本品也可以用于混飲。

（4）具體處理措施如下：

飲水：嗜血?jiǎng)榆?chē) + VC粉 + 葡萄糖

拌料：保育安：按1000g拌料1000kg治療，連用7-10天，效果顯著。也可用嗜血?jiǎng)榆?chē)拌料，效果同樣良好。

對(duì)于嚴(yán)重病例，如不食，可肌肉注射“通用”+ 復(fù)合維生素B/VB1，效果顯著。

如不食，病豬跛行，可肌肉注射“通用”+“頭孢經(jīng)典”，效果明顯。

如不食，有呼吸道癥狀，可注射“通用”+“頭孢經(jīng)典”或“通用”+“多普達(dá)”，分點(diǎn)肌注。

如不食，有呼吸道癥狀，并伴有身體發(fā)紅，可注射“通用”+“維生素C注射液”+“頭

孢經(jīng)典”/“多普達(dá)”，分點(diǎn)肌注，可起到良好的治療效果。

四、對(duì)于恢復(fù)期的病豬，可在飼料中添加“全效”，能顯著提高采食量，幫助病豬盡快恢復(fù)體質(zhì)。

專家提醒：

1、由于本病菌極易產(chǎn)生耐藥性，在治療本病時(shí)，應(yīng)該輪換使用藥物，可用“保育安”或“嗜血?jiǎng)榆?chē)”輪換應(yīng)用，且“嗜血?jiǎng)榆?chē)”也可以用于飲水。

2、對(duì)于不采食的病豬可進(jìn)行肌肉注射或飲水用藥，以免耽誤病豬最佳治療時(shí)機(jī)。

3、本病的治療以綜合防控為主，管理為佳，提高管理水平，對(duì)該病的治療可以起到積極的效果。

第二篇：豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌病高發(fā)原因是什么

豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌病高發(fā)原因是什么？

副豬嗜血桿菌病在豬場(chǎng)的發(fā)生越來(lái)越普遍，該病之所以高發(fā)的原因是什么？廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所 王貴平研究員

1.副豬嗜血桿菌是豬上呼吸道（鼻腔、扁桃體和氣管前段等）的常在菌，此病過(guò)去一直被認(rèn)為是仔豬的一種散發(fā)性，應(yīng)激性疾病。

各種應(yīng)激因素可誘發(fā)和促進(jìn)本病的發(fā)生與流行，如氣溫突變、空氣污染嚴(yán)重、通風(fēng)不良、寒冷潮濕，不同日齡的豬只混群飼養(yǎng)，密度過(guò)大，管理不當(dāng)，飼料質(zhì)量差，長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)?，可?dǎo)致本病的發(fā)生。

2.就本人對(duì)副豬嗜血桿菌的分離來(lái)看，該病更多的被看作繼發(fā)性病原菌。有研究結(jié)果表明，豬群中存在藍(lán)耳病毒感染或一些免疫抑制性病毒病存在，本病更容易繼發(fā)。

3.血清型和毒力，以及毒力因子這一方面到現(xiàn)在都不是很清楚，血清分布又有地域性，疫苗免疫在不同的血清型之間所引起的交叉保護(hù)率很低等等，由于沒(méi)有很好的預(yù)防應(yīng)對(duì)措施，所以該病爆發(fā)越來(lái)越嚴(yán)重。

廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司 羅滿林

多種免疫抑制病的存在，尤其是圓環(huán)病毒，豬繁殖和呼吸道綜合征等存在，豬群集約化飼養(yǎng)，養(yǎng)殖環(huán)境惡化。

山東菏澤宏興遠(yuǎn)種豬繁育有限公司 牛月波

因?yàn)樵摬【且环N條件性致病菌，主要寄生在豬上呼吸道黏膜，臨床上常以繼發(fā)感染形式出現(xiàn)，由于近年來(lái)很多豬場(chǎng)流行免疫抑制性疾?。ㄈ缢{(lán)耳病、圓環(huán)病毒Ⅱ型、豬瘟等），再加上肺炎支原體、流感病毒、呼吸道冠狀病毒感染嚴(yán)重，副豬嗜血桿菌乘虛而入，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大損失，如去年南方多個(gè)省份發(fā)生高熱病，副豬嗜血桿菌就起了推波助瀾的作用。

保定冀中藥業(yè)有限公司技術(shù)部總監(jiān) 蔡少閣

主要是豬群免疫力低下所造成的。

導(dǎo)致豬群免疫力低下的原因有：免疫抑制病的存在，如藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病等；飼料中霉菌毒素的普遍存在；某些促生長(zhǎng)添加劑的濫用，如高銅、高胂和高鋅等；某些抗生素的長(zhǎng)期添加，如氨基苷類抗生素和氯霉素族抗生素等；長(zhǎng)期的應(yīng)激等。四川恒通動(dòng)物制藥有限公司技術(shù)部 張瑞杰

1.在實(shí)際中，副豬嗜血桿菌已經(jīng)成為豬體內(nèi)一種常宿菌，只要豬體抵抗力降低了就有可能爆發(fā)副豬嗜血桿菌，只要豬感染某種疾病就有可能繼發(fā)副豬嗜血桿菌病。

2.另外副豬嗜血桿菌血清型（現(xiàn)有15個(gè)血清型）較多，還是有大量的分離株不能被分型，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)存在很多困難，另外不同的血清型對(duì)藥物的敏感度不同，并且耐藥性極強(qiáng)，更為實(shí)驗(yàn)室診斷及其藥敏試驗(yàn)添加了新的挑戰(zhàn)。

3.發(fā)病豬場(chǎng)常年帶菌，治愈或耐過(guò)豬常年帶菌，帶菌豬和慢性感染豬為本病的傳染源。

福建威耳動(dòng)科藥業(yè)有限公司 曾佑全

高發(fā)的原因：

（1）副豬嗜血桿菌是豬上呼吸道中的一種共棲菌，常可在鼻腔、扁桃體和氣管前段分離到，而不見(jiàn)任何臨床癥狀。

（2）當(dāng)環(huán)境發(fā)生變化時(shí)或引起免疫抑制的因素（如轉(zhuǎn)群、斷奶、混群、飼料的突然改變或通風(fēng)不良、免疫抑制性疾?。┐嬖跁r(shí)，會(huì)導(dǎo)致該病發(fā)生。

（3）最近幾年整個(gè)豬養(yǎng)殖業(yè)中呼吸道疾病的復(fù)雜化，病毒性疾病的不斷復(fù)發(fā)是導(dǎo)致副豬嗜血桿菌病不斷高法的原因之一。

第三篇：副豬嗜血桿菌的現(xiàn)狀與研究進(jìn)展

副豬嗜血桿菌的現(xiàn)狀與研究進(jìn)展

副豬嗜血桿菌(haemphilus parasuis, HPS)HPS為革蘭氏陰性、具多種不同形態(tài)的細(xì)菌,從單個(gè)球桿狀到長(zhǎng)的、細(xì)長(zhǎng)的以至絲狀菌體,?？梢?jiàn)莢膜。該菌生長(zhǎng)依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD或V因子),不需要X因子(血紅素和其它卟啉類物質(zhì))(Mollen等,1990)。其在巧克力培養(yǎng)基上培養(yǎng)24~48 h生長(zhǎng)較差,為光滑型、灰白色透明、直徑大約0.5 mm菌落。如與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)時(shí),HPS在葡萄球菌條狀菌苔附近呈衛(wèi)星生長(zhǎng),生長(zhǎng)良好,菌落直徑可達(dá)1~2 mm。HPS在血液瓊脂上呈小而透明的不溶血菌落,在加NAD、馬血清的M96支原體培養(yǎng)基或加NAD、馬血清和酵母浸出物的PPLO培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。生化反應(yīng):尿酶試驗(yàn)陰性、氧化酶陰性、接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性,可發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、D-核糖和麥芽糖等。

一、現(xiàn)狀

HPS引起病稱也稱豬革拉澤氏病,近年來(lái)，隨著養(yǎng)豬業(yè)的不斷發(fā)展，豬場(chǎng)規(guī)?；?、集約化程度的不斷提高，豬群高密度飼養(yǎng)越來(lái)越多，呼吸道疾病逐漸成為繼繁殖障礙性傳染病、胃腸道傳染病之后危害養(yǎng)豬業(yè)的三大癥候群之一。特別是近些年來(lái)，豬“高熱性”呼吸道疾病的全面蔓延和遷延不愈，尤其是以副豬嗜血桿菌引起的以豬多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、呼吸困難、高熱及高死亡率為特征的傳染性疾病給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

在我國(guó)，2001年5月開(kāi)始在華東地區(qū)大面積流行，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，個(gè)別豬場(chǎng)由于本病的發(fā)生不能及時(shí)控制，出現(xiàn)嚴(yán)重虧損，甚至倒閉。在這次流行過(guò)程中，新發(fā)病豬群的發(fā)病率幾乎達(dá)到100%，哺乳仔豬死亡率高達(dá)100%，保育豬死亡率高達(dá)80%以上，育肥豬死亡率不高，但豬群整體健康水平較差。發(fā)病較久的豬群，哺乳期間發(fā)病率較低，40日齡之前發(fā)病率較低，45日齡后的保育豬幾乎100%發(fā)病，而且死亡率高達(dá)85%以上。當(dāng)時(shí)在廣東省，據(jù)我們對(duì)省內(nèi)部分地區(qū)豬場(chǎng)的調(diào)查，革拉瑟氏病的危害也比較嚴(yán)重，占斷乳豬死亡率的30%以上，嚴(yán)重豬群高達(dá)80%～100%。近幾年，對(duì)廣東省的四會(huì)市、順德、開(kāi)平、新會(huì)、江門(mén)、佛山、云浮、韶關(guān)、樂(lè)昌、龍川、廣州蘿崗、汕尾，江西省的南昌市、東鄉(xiāng)、樟樹(shù)、定南、潘陽(yáng)地區(qū)，湖南省的衡陽(yáng)，福建南平，上海等地豬場(chǎng)，進(jìn)行病原菌的分離鑒定與疾病調(diào)查。被調(diào)查豬場(chǎng)普遍存在副豬嗜血桿菌感染，而且相當(dāng)嚴(yán)重，剖檢保育階段的病死豬，90%以上都有典型的副豬嗜血桿菌感染所引起的病變。本病是斷乳后保育豬死亡的主要原因。在近幾年出現(xiàn)的所謂“高熱病”發(fā)生豬群，均存在著副豬嗜血桿菌的混合感染。

本病的臨床癥狀出現(xiàn)的往往很突然，先在一頭豬或幾頭豬發(fā)病，幾天后，才大批出現(xiàn)癥狀。病程分為過(guò)急性型或急性型，常常是體重最重的仔豬受感染。臨床癥狀取決于病變發(fā)生的部位。發(fā)病初期體溫增高至40.5℃～42℃，沉郁，食欲不振，最終食欲廢絕。外周循環(huán)障礙，皮膚發(fā)紺。有時(shí)見(jiàn)到眼瞼和耳部皮下水腫，結(jié)膜潮紅。呼吸也可能正常，也可能出現(xiàn)呼吸困難。有的病豬表現(xiàn)出痛苦的叫聲，由于跛行而行走緩慢或呈犬坐式。一個(gè)或幾個(gè)關(guān)節(jié)腫大，腕關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié)多發(fā)。有很多病例表現(xiàn)出腦膜腦炎癥狀，肌肉振顫，行動(dòng)遲緩，后肢供濟(jì)失調(diào)。有的病豬向一側(cè)傾斜，勉強(qiáng)能站立。國(guó)外有報(bào)道認(rèn)為，1～2周齡仔豬感染，易出現(xiàn)敗血癥。

二、研究進(jìn)展

2．1流行病學(xué)

副豬嗜血桿菌感染呈地方性流行。主要通過(guò)直接接觸傳播。多是因從感染性豬群引進(jìn)帶菌豬而帶進(jìn)致病性菌株。各年齡豬均易感染，都可爆發(fā)本病。同樣，一旦抗原性不同的新的強(qiáng)毒菌株侵入豬群，也可以引起疫病爆發(fā)（Oliveira和Pijoan，2002）。在感染性豬群中，母豬是病菌的儲(chǔ)主，無(wú)論是致病性還是非致病性菌株，仔豬都是在哺乳期被感染的。但是事實(shí)上，母豬的帶菌率并不高，因此被感染的仔豬也只是一小部分。被感染的小豬可因感染而產(chǎn)生免疫力，但以后也可能成為亞臨床帶菌豬。未被致病性菌株感染的仔豬，可從母源抗體獲得保護(hù)。到5~6周齡斷奶時(shí)，母源抗體水平下降，可因斷奶因素的影響而致使亞臨床帶菌

豬數(shù)量增加，那些在哺乳期沒(méi)有接觸過(guò)致病性菌株的豬只開(kāi)始發(fā)病。因此，本病的臨床癥狀通常在5~6周齡時(shí)即斷奶之后出現(xiàn)。

2．2副豬嗜血桿菌的血清型研究進(jìn)展

副豬嗜血桿菌的血清型復(fù)雜多樣，按瓊脂擴(kuò)散血清分型方法Kieletein-Rapp-Gabiedson(KRG)，可將副豬嗜血桿菌分為15 個(gè)血清型（國(guó)際公認(rèn)的血清分型標(biāo)準(zhǔn)菌株）。在全世界范圍內(nèi)，各國(guó)流行的血清型不盡相同，我國(guó)分離株主要是血清4、5、12、13型，在日本和澳大利亞廣泛流行的血清型為5型，而危害美國(guó)豬場(chǎng)的HPS血清型為4型。在鑒定的15個(gè)血清型中毒力存在明顯的差別，血清型1、5、10、12、13、14型毒力最強(qiáng)，患豬在4內(nèi)歸于死亡或處于瀕死狀態(tài)；血清2、4、15型為中等毒力，患豬通常不死亡但出現(xiàn)多發(fā)性漿膜炎；血清3、6、7、8、9、11型感染豬后沒(méi)有明顯的臨床癥狀，這些菌株歸類為無(wú)毒力菌株。另有20%以上的分離株血清型不可定。這可能是由于一些分離株不能表達(dá)足夠多的特異性，或者可能還存在另外的一些血清型。

2．3分子生物學(xué)研究

以特異性的PCR方法為基礎(chǔ)，建立了限制性內(nèi)切酶多態(tài)性(RFLP)分型方法，先克隆了長(zhǎng)為1.9kb的tbpA基因，用TaqI、AvaI和RsaI進(jìn)行酶切分析，對(duì)已知5種血清型的副豬嗜血桿菌菌株進(jìn)行分析，結(jié)果表明RFLP敏感性及分型能力均比瓊脂擴(kuò)散方法強(qiáng)，RFLP方法為100%，而瓊脂擴(kuò)散方法僅為65%。此外，學(xué)者們還克隆了副豬嗜血桿菌16srRNA基因、外膜蛋白及脂多糖基因，但具體功能尚不清楚。

2．4發(fā)病機(jī)理

HPS在呼吸道內(nèi)早期定居部位現(xiàn)在仍有爭(zhēng)議，豬鼻內(nèi)接種病原菌，病原菌通常在鼻腔和氣管分離到，極少?gòu)姆魏脱褐蟹蛛x到，從未在扁桃體中分離出來(lái)。副豬嗜血桿菌在感染期間侵入全身所涉及的因素在很大程度上尚不清楚。Vahle(1997)等研究表明，從鼻腔中部分離到的病原菌與急性關(guān)節(jié)炎有關(guān)，也與鼻－氣管黏膜的纖毛缺失及細(xì)胞急性腫脹有關(guān)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，他們假設(shè)這些薄膜特性的改變使得HPS侵入血，黏膜損傷可能會(huì)增加細(xì)菌入侵的機(jī)會(huì)，但通過(guò)免疫組化及電鏡檢查等手段都不能在纖毛缺失及細(xì)胞降解處檢測(cè)到HPS，所以認(rèn)為所觀察到的細(xì)胞損傷可能由HPS的可溶性毒素所致。其他一些呼吸道性疾病如支原體肺炎、豬流感、豬偽狂犬病和圓環(huán)病毒Ⅱ型感染及感染豬呼吸道冠狀病毒能降低豬肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬和殺菌能力,HPS的存在可加劇病情的臨床表現(xiàn)。以明尼蘇達(dá)大學(xué)CarlosPijoan博士為首的學(xué)者們認(rèn)為,當(dāng)前副豬嗜血桿菌病的發(fā)生在一定程度上是因?yàn)镠PS在幼豬體內(nèi)的定居模式所致。他們認(rèn)為：只有部分仔豬被母豬排出的細(xì)菌所定居,但隨著斷奶日齡增大，仔豬感染細(xì)菌的比率就增加，而提早斷奶則可以降低感染的機(jī)會(huì)。當(dāng)仔豬體內(nèi)抗副豬嗜血桿菌的母源抗體水平降低時(shí)，不再受母源抗體保護(hù)的敏感豬易與致病菌攜帶豬相接觸而發(fā)生疾病。臨床實(shí)踐表明，保育舍內(nèi)暴發(fā)豬繁殖和呼吸綜合征時(shí)，HPS的存在可加劇病情的臨床表現(xiàn)，副豬嗜血桿菌會(huì)導(dǎo)致死亡率的升高，但其作用機(jī)制尚未完全弄清。HPS的感染導(dǎo)致肺泡巨噬細(xì)胞損傷，也可引起鼻腔黏膜炎癥，導(dǎo)致非特異性呼吸道防衛(wèi)機(jī)制缺陷，使豬發(fā)生繼發(fā)性感染。

2．5副豬嗜血桿菌病滅活疫苗的研究

副豬嗜血桿菌病滅活疫苗基礎(chǔ)菌種的研究 按照《中國(guó)獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》要求建立用于副豬嗜血桿菌病滅活疫苗制備與檢驗(yàn)用菌株的基礎(chǔ)種子，對(duì)基礎(chǔ)菌種的形態(tài)、培養(yǎng)特性、生化特征、血清型、毒力、免疫原性、毒力穩(wěn)定性和免疫原性穩(wěn)定性等進(jìn)行研究。結(jié)果表明基礎(chǔ)菌種在方面均符合副豬嗜血桿菌的特征，MD0322株為血清4型，SH0165株為血清5型，基礎(chǔ)菌種純粹檢驗(yàn)無(wú)雜菌生長(zhǎng)，兩株菌種連代25代以后的毒力和免疫原性均保持穩(wěn)定不變，在各方面完全符合基礎(chǔ)菌種的要求。

副豬嗜血桿菌病滅活疫苗安全性試驗(yàn) 在實(shí)驗(yàn)室試制五批副豬嗜血桿菌病滅活疫苗，批

號(hào)依次為0301、0302、0303、0304、0305。通過(guò)對(duì)最小使用日齡靶動(dòng)物接種、對(duì)靶動(dòng)物各種接種途徑一次單劑量接種，對(duì)靶動(dòng)物單劑量重復(fù)接種，對(duì)靶動(dòng)物一次超劑量接種以及對(duì)懷孕動(dòng)物(妊娠母豬)接種后觀察其精神狀態(tài)，體溫和食欲等指標(biāo)對(duì)疫苗的安全性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，結(jié)果表明該疫苗用于豬的免疫是安全的，無(wú)副作用。

四種副豬嗜血桿菌病滅活疫苗對(duì)仔豬免疫效力的比較 用副豬嗜血桿菌MD0322株和0165株兩株菌種分別制備副豬嗜血桿菌病單價(jià)滅活疫苗。將兩種單價(jià)滅活疫苗與本室試制的副豬嗜血桿菌病滅活疫苗(雙價(jià))，以及國(guó)外生產(chǎn)的兩種副豬嗜血桿菌病滅活疫苗相比較，每種滅活疫苗分別免疫28～35日齡仔豬10頭，21日后二免，同時(shí)設(shè)立10頭未免疫對(duì)照。二免后14日，分別用血清4型和5型標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)腹腔內(nèi)攻毒，結(jié)果兩種單價(jià)疫苗的保護(hù)率均為4／5，本室試制的副豬嗜血桿菌病滅活疫苗總的保護(hù)率為9／10，兩種進(jìn)口疫苗的總保護(hù)率分別為8／10(疫苗含血清4型和5型菌)和5／10(疫苗含血清2型和6型菌)。

副豬嗜血桿菌病滅活疫苗效力試驗(yàn) 通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)試制的五批副豬嗜血桿菌病滅活疫苗進(jìn)行效力檢驗(yàn)。每批選擇28～35日齡斷奶仔豬20頭，每批疫苗免疫10頭豬，另外10頭作為對(duì)照。在二免后14日分別用MD0322株和SH0165株通過(guò)腹腔內(nèi)攻毒，結(jié)果免疫豬保護(hù)率均在4/5以上，對(duì)照組發(fā)病率均在3/5以上，表明試制的副豬嗜血桿菌病滅活疫苗具有良好的免疫效果。

2.6綜合防治的新進(jìn)展

飼養(yǎng)管理：加強(qiáng)和改善飼養(yǎng)管理可降低副豬嗜血桿菌的發(fā)病率。徹底清理豬舍衛(wèi)生，用消毒藥噴霧消毒，每天1次，連續(xù)噴霧消毒5 d；用具用2％氫氧化鈉溶液洗刷，然后再用清水沖洗。對(duì)全群豬用多維飲水6 d，以增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，減少應(yīng)激反應(yīng)。同時(shí)給予病豬青菜、蘿卜、野菜等青綠多汁飼料，為避免相互傳染，將病豬和未表現(xiàn)癥狀的豬全部分開(kāi)，隔離飼養(yǎng)。7日齡的仔豬中能檢測(cè)到副豬嗜血桿菌,早期斷奶不能完全控制副豬嗜血桿菌的感染,最關(guān)鍵的措施是減少豬群轉(zhuǎn)運(yùn)和應(yīng)激反應(yīng),如合理的飼養(yǎng)密度,防止產(chǎn)房和保育室的賊風(fēng),加強(qiáng)保溫和通風(fēng),防止飼料霉菌毒素的感染;隔離引進(jìn)種豬,種豬入群和小豬合群前用疫苗免疫或用藥物凈浙江畜牧獸醫(yī)。2005年第5期化體內(nèi)細(xì)菌性病原體;及時(shí)隔離出現(xiàn)臨床癥狀的病豬,進(jìn)行抗菌素治療等。

免疫接種：商品苗和自家苗可以防制副豬嗜血桿菌傳染病。然而,多種血清型和一定量非分型菌株的存在,影響了有效交叉保護(hù)疫苗的發(fā)展。Miniats等(1991)用免疫印跡技術(shù)分析免疫豬的體液反應(yīng)與抗原、保護(hù)作用之間的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有針對(duì)外膜蛋白(OMP)的抗體與攻毒試驗(yàn)的保護(hù)作用有關(guān),完全獲得免疫保護(hù)的動(dòng)物無(wú)針對(duì)脂多糖(LPS)和莢膜多聚糖的抗體。

藥物防治：藥敏試驗(yàn)顯示大多數(shù)副豬嗜血桿菌對(duì)氟苯尼考、氨芐青霉素、氟喹諾酮類、頭孢菌素、氟甲砜霉素及增效磺胺類藥物敏感,對(duì)四環(huán)素、紅霉素、氨基糖甙類和林可霉素有抵抗力

三、結(jié)束語(yǔ)

目前，副豬嗜血桿菌病在我國(guó)豬群普遍存在，已經(jīng)是引起豬場(chǎng)保育豬死亡的主要細(xì)菌性疾病，控制本病的方法是用疫苗免疫接種和藥物保健預(yù)防，隨著副豬嗜血桿菌的診斷，流行病學(xué)等方面已取得了重大成就，研究者可以快速，準(zhǔn)確的掌握特定豬場(chǎng)中病原的流行病學(xué)等相關(guān)信息，今后，在確定毒力因子、闡述其致病機(jī)理以及獲得保護(hù)性免疫的機(jī)制、以及研制廣譜的疫苗等方面都還需要研究工作者進(jìn)行深入研究。

第四篇：生物制品學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告----三價(jià)副豬嗜血桿菌油乳劑滅活疫苗的制備及檢驗(yàn)（小編推薦）

三價(jià)副豬嗜血桿菌油乳劑滅活疫苗的制備及檢驗(yàn)

副豬嗜血桿菌是豬格拉澤氏病(Glasser’s disease)的病原菌，屬于巴斯德菌科嗜血桿菌屬，是一種多形態(tài)、非溶血性、不運(yùn)動(dòng)、NAD 依賴型、革蘭氏陰性細(xì)小桿菌。對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求比較苛刻，培養(yǎng)時(shí)必須供給含有V 因子（NAD）或（NADP)的新鮮血液才能生長(zhǎng)。此菌有多種血清型，其中強(qiáng)毒力的有1、5、10、12、13、14型，常可致死動(dòng)物；中等毒力的有2、4、8、15型，多表現(xiàn)為多發(fā)性漿膜炎，不致死；低毒力的有3、6、7、9、11型，常無(wú)臨床表現(xiàn)和病變。在中國(guó)，4型和5型是主要分離株，而澳大利亞和丹麥的主要血清型為5型和13型。在研究2、4、5、12、13和14型間的交叉保護(hù)性時(shí)發(fā)現(xiàn)，除了血清12型制備的單菌和血清2、12型制備的二價(jià)苗外，其他型都能對(duì)同源菌株產(chǎn)生保護(hù)；用血清4型制備的菌苗，可以保護(hù)血清5型的攻擊；用血清4、5型制備的二價(jià)菌苗，可以抵抗血清13、14型的攻擊（仔豬病變的嚴(yán)重性和病死率明顯降低）。三價(jià)滅活疫苗主要用于預(yù)防豬副嗜血桿菌病。該苗針對(duì)性強(qiáng)，安全可靠，能有效降低發(fā)病率和死亡率。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解副豬嗜血桿菌油乳劑滅活苗制作的流程。2 掌握副豬嗜血桿菌油乳劑滅活苗制作的操作技術(shù)。

二、乳化的原理

乳化劑能降低分散物的表面張力，在微滴（粒）表面形成薄膜或雙片層，以阻止微滴（粒）的相互凝結(jié)。

三、材料，試劑，培養(yǎng)基

（1）器材：不銹鋼鍋（或瓷鍋）、電爐、乳化器、量筒、玻璃棒、離心機(jī)、吸管等。

（2）試劑：、甲醛（滅活劑）、白油（抗原油相）、Span-80（油相乳化劑）、Tween-80（抗原水相乳化劑）、硬脂酸鋁（穩(wěn)定劑）、4、5、13型分離菌株（抗原）。（3）培養(yǎng)基的制備：

1、配制0.2%的V因子

準(zhǔn)確稱0.2g的NAD（輔酶I）加入100mlddH2O，用0.22um的細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾除菌，4°C保存?zhèn)溆谩?/p>

2、制備TSA培養(yǎng)基

稱16gTSA加入348ml雙蒸水，121°C高壓滅菌20min，當(dāng)溫度到50°C左右時(shí)（放入50°C水浴鍋）加入0.2%的V因子，使V因子濃度達(dá)100ug/ml，然后加入32ml的滅活新生牛血清

100ml----4g TSA-----5ml V因子-------8ml血清

3、TSB培養(yǎng)基

稱3gTSB于87 ml雙蒸水中溶解。121°C高壓滅菌15min，冷卻至50°C左右，加入已配制的0.2%的V因子5ml，再加入滅活的新生小牛血清8ml，使血清濃度達(dá)0.8% 100ml-------3g TSB----5ml V因子----8ml血清

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（1）菌株菌液制備及培養(yǎng)繁殖 將副豬嗜血桿菌三株菌種按分別劃線接種于TSA固體培養(yǎng)基平板上，37°C恒溫培養(yǎng)18-24h，挑取單個(gè)菌落接種于TSB液體培養(yǎng)基中，37°C振蕩培養(yǎng)12-16 h后，再將此菌液按l%的比例加入新配制的TSB液體培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)12-16h后，按平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。培養(yǎng)24h后，收集菌液，用分光光度計(jì)法測(cè)定細(xì)菌總菌含量。經(jīng)檢驗(yàn)合格者作為制苗抗原。（2）制苗抗原的濃縮和細(xì)菌的滅活

將純檢合格的制苗抗原培養(yǎng)物以超濾器濃縮，作為制苗用濃縮抗原。然后按TSB液體培養(yǎng)基總體積加入終濃度為0.2%的甲醛（先10倍稀釋），充分搖勻后，37°C溫箱中滅活14h或分別在4、8、12、16、20h和24h取滅活菌液于TSA固體培養(yǎng)基劃線培養(yǎng)，置普通恒溫箱中37℃培養(yǎng)48h，觀察細(xì)菌滅活效果。37°C滅活14h可達(dá)到較好的效果。（3）制苗用水相的制備

根據(jù)培養(yǎng)24h后的分光光度計(jì)法或麥?zhǔn)媳葷峁軠y(cè)定的總菌數(shù)結(jié)果，參照培養(yǎng)12-16h的平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)結(jié)果。取滅活的三種血清型按照一定的比例（等量）混合抗原液96份，然后過(guò)濾, 除去沉渣及雜物, 加入4份即終濃度為4%滅菌的Tween-80(96∶4)充分混勻, 邊加邊攪拌，使其充分融化（可加熱助溶，溫度低于37℃）, 作為制苗用水相，水相要搖勻，讓吐溫-80充分溶解。（4）制苗用油相的制備

取10號(hào)白油93份（先加一部分，后補(bǔ)足）置于不銹鋼鍋中緩慢加熱后，加入硬脂酸鋁1份，邊加邊攪拌，直到透明為止，再緩慢加入6份Span-80(司本-80)，充分混勻，121℃高壓蒸汽滅菌3Omin，冷卻至室溫備用?；蛘甙幢壤龑⒐I(yè)白油94份置于不銹鋼鍋（或瓷鍋）中加熱后，緩慢加入6份 Span-80，混合后按總量加入2%硬脂酸鋁，溶化后，繼續(xù)升溫至160℃，維持10min，待冷卻后即可制苗。切勿用少量的白油與硬脂酸鋁混合后邊煮邊攪拌，那樣很容易燒焦冒煙。（5）疫苗的制備（乳化工藝）

按油相與水相2：1（v/v）混合乳化。即1份水相配2份油相在高速攪拌器中攪拌。先將處理好的油相2份置于高速攪拌器中，低速攪動(dòng)油相，同時(shí)緩慢加入水相l(xiāng)份(油∶水= 2∶1)，乳化時(shí)膠體磨轉(zhuǎn)速由慢變快，最后以8，000一10，OO0r/mln高速乳化2一5min，使水油充分乳化。乳劑混勻，分裝于滅菌疫苗瓶中。在乳化過(guò)程中亦可根據(jù)乳劑黏稠度適當(dāng)調(diào)整油、水相比。制成乳白色的W/O型油乳佐劑疫苗。

（6）油乳劑檢驗(yàn)：油乳劑檢驗(yàn)項(xiàng)目包括乳劑類型檢查、黏度測(cè)定、穩(wěn)定性測(cè)定、粒度大小及分布檢測(cè)等，生產(chǎn)實(shí)際中以黏度測(cè)定與穩(wěn)定性測(cè)定為主。在每批苗分裝過(guò)程的前、中、后各抽樣2瓶供物理性狀檢驗(yàn)及安全檢驗(yàn)。無(wú)菌檢驗(yàn)： 將制備好的滅活油乳苗分別接種于普通肉湯培養(yǎng)基和血瓊脂培養(yǎng)基中 , 于37 ℃溫箱中培養(yǎng)10 d, 觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。均應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)方合格。物理性狀檢驗(yàn) : 觀察疫苗顏色：眼觀應(yīng)為均勻一致的乳白色黏稠乳劑。穩(wěn)定性檢測(cè) ：1）離心加速法，將疫苗置于 10m l 離心管內(nèi), 3 000 r/min離心15min水油不分層，可保存1年以上不破乳。2）加速老化法，疫苗于37℃儲(chǔ)存10-30d不破乳，說(shuō)明其穩(wěn)定性良好。黏度檢驗(yàn)：最簡(jiǎn)易的方法是在室溫條件下用吸管吸取1ml乳劑, 然后垂直放出, 記錄放出0.4ml所需時(shí)間。垂直放出0.4ml所需要的時(shí)間作為黏度單位，以0.4ml 2-6s為合格，說(shuō)明黏度適中, 適合于注射應(yīng)用，不得多余10-15s。

5劑型檢測(cè)：將疫苗數(shù)滴滴于冷水表面, 觀察油滴擴(kuò)散情況，即觀察疫苗滴于水中是否呈油滴狀且不分散。滴于水中油滴呈規(guī)則的圓形, 未見(jiàn)擴(kuò)散現(xiàn)象, 說(shuō)明疫苗為油包水劑型。

6安全檢驗(yàn)：對(duì)最小使用日齡靶動(dòng)物一次單劑量接種的安全性滅活疫苗接種途徑只有一種，就是肌肉注射。每批三價(jià)滅活苗隨機(jī)取樣3瓶,等量混合后接種兔2只,每只肌肉注射2mL；接種14日齡哺乳仔豬，每組5頭，每頭豬接種2ml，另設(shè)5頭豬作為陰性對(duì)照，于耳后肌肉注射5-10 mL, 觀察仔豬的臨床表現(xiàn)，并每日測(cè)定體溫，持續(xù)2周。

五、小結(jié)

（1）副豬嗜血桿菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求比較苛刻，培養(yǎng)時(shí)必須供給含有V 因子（NAD）或（NADP)的新鮮血液才能生長(zhǎng)。且具有非常多的血清型，純化非常困難。故對(duì)菌的純化及滅活和疫苗的安全性試驗(yàn)是生產(chǎn)滅活苗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由于副豬嗜血桿菌，在菌液制備的過(guò)程中容易生長(zhǎng)雜菌，我們純化了很多次菌，液體仍然很渾濁，使得實(shí)驗(yàn)進(jìn)展延后。（2）注意事項(xiàng)： 細(xì)菌滅活過(guò)程中，甲醛濃度越高，堿性溶液中的抗原性損失就越大。故甲醛要注意適量 2 制備油相時(shí)，要使Span-80和硬脂酸鋁充分溶解。3 制備水相時(shí)，抗原與Tween-80充分混勻。乳化時(shí)，油相必須冷卻后方可與水相混和乳化，以防油溫過(guò)高使抗原性降低。5 注意先加入油相后再加入水相，充分?jǐn)嚢琛? 疫苗在4℃、暗處保存，切勿冰凍。7 一定要做好安全檢驗(yàn)

第五篇：嗜血人日記范本

那時(shí)候丁香還未開(kāi)花，我就摘下了花蕾，斷枝上流出綠色的汁液，像是死亡最后的征兆。

我笑了笑，接著折下第二支、第三支。綠色黏糊的東西粘在我的手指上，這綠色的東西就像我胃里翻滾的食物，用直勾勾的眼神盯著我，我好奇了，只在這一刻。

手指放在口中，吸允，那一刻，我始終記得，那甘甜雖不及蜜水的味道卻是我饑渴時(shí)最好的食物。

汁液從口中而入，經(jīng)過(guò)喉嚨來(lái)到食道，慢慢的吸收進(jìn)胃。

胃緩緩而樂(lè)，擺出一個(gè)悠揚(yáng)的架勢(shì)。

它叫囂著，向著我叫囂著。

帶著誠(chéng)實(shí)，帶著懇求，這是多么貼切的一面。

我笑了笑，折下一支枝，“孩子，此生不離”。

它笑了，像個(gè)瘋?cè)怂频每裥Α?/p>

我得瑟著，似乎一切都將改變?？墒顷?yáng)光暖暖的，而我卻露出了牙齒，修長(zhǎng)了指甲，猙獰了面目。

多少不甘在胸中膨脹，就如同火山的前奏，蠢蠢欲動(dòng)，即將爆發(fā)。

是啊，我已經(jīng)站在罪惡的前沿，魔鬼的軀殼也駐扎在我的心間?？墒俏也桓?，不甘在惱人的氣味中偷度。

“放棄邪惡，你還是一個(gè)好孩子”。

“放棄邪惡，你還是一個(gè)好孩子”。

這是真的么？我一直問(wèn)自己。

上帝從不曾對(duì)我失去信心，即使是在暗無(wú)天日的沼洼，它也會(huì)伸出寬厚的手，帶著我走過(guò)惹人的荊棘。

“伸出手，路就在前方”。

“伸出手，路就在前方”。