第一篇：豬圓環(huán)病毒病相關(guān)知識(shí)問(wèn)答

1.什么是豬圓環(huán)病毒?。?/p>

豬圓環(huán)病毒病是指以2-型圓環(huán)病毒為主要病原、單獨(dú)或繼發(fā)/混合感染其它致病微生物的一系列疾病的總稱。

2．豬圓環(huán)病毒病具體有哪些發(fā)病類型？

主要有豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、皮炎腎病綜合征（PDNS）、豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）、繁殖障礙、先天性震顫、腸炎等。

3．請(qǐng)介紹一下豬圓環(huán)病毒病的流行情況。

本病最早發(fā)生于加拿大（1991），此后很快在世界各地（大洋洲除外）流行，亞洲及我國(guó)各地有關(guān)的報(bào)道也越來(lái)越多。朗洪武（2000，2001），曹勝波（2001）先后通過(guò)血清學(xué)方法和PCR技術(shù)在河北、北京、天津、山東、吉林、江蘇、上海、河南、湖北和廣東、廣西檢測(cè)到了PCV-2。中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)楊漢春教授等對(duì)北京、天津、廣東、山西等12個(gè)規(guī)模大豬場(chǎng)病原檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)11個(gè)豬場(chǎng)存在PMWS的感染，一個(gè)豬場(chǎng)存在PDNS的問(wèn)題，可見PCV-2在我國(guó)的普遍性。

4．豬圓環(huán)病毒病的病原體是什么？

是2-型圓環(huán)病毒，圓環(huán)病毒有兩個(gè)血清型，1-型沒(méi)有致病性。

5．發(fā)病越來(lái)越多的原因是什么？

（1）集約化養(yǎng)豬的出現(xiàn)，導(dǎo)致管理及操作體系的巨大變動(dòng)；2）宿主遺傳性狀的改變與世界范圍內(nèi)的流動(dòng)；3）藍(lán)耳病病毒和細(xì)小病毒等病原體的混合感染。

6．豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的臨床癥狀、解剖病理變化有哪些？

豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征確診往往需要有一群豬的一組特征性的臨床癥狀和顯微病變，其臨床癥狀有：僵豬比例明顯增多、生長(zhǎng)不良或停滯、消瘦、呼吸困難、淋巴結(jié)腫大、腹瀉、蒼白、部分豬出現(xiàn)黃疸。但在同一頭豬中，不表現(xiàn)出以上全部癥狀。同時(shí)亦有部分豬出現(xiàn)咳嗽、肺炎、發(fā)熱、胃潰瘍、中樞神經(jīng)癥狀及突然死亡。其中有些癥狀與繼發(fā)感染有關(guān)。其特征性顯微病理變化表現(xiàn)為淋巴器官的肉芽腫炎癥和不同程度的淋巴細(xì)胞缺失。病理解剖可見肺斑點(diǎn)狀出血，全身淋巴結(jié)腫脹，尤其是腹股溝淺淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)明顯腫大，切面浸潤(rùn)，呈土黃色，有的淋巴結(jié)皮質(zhì)出血，使整個(gè)淋巴結(jié)呈紫紅色外觀。心臟變形、質(zhì)地柔軟、心冠脂肪萎縮，腎腫脹，皮質(zhì)變薄，有時(shí)有出血點(diǎn)或灰白色病灶。不同豬場(chǎng)所表現(xiàn)的臨床癥狀和病理變化的嚴(yán)重程度不同，這與混合/繼發(fā)感染的類型以及豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理有關(guān)。

7、什么階段的豬最易感斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征？

不同豬場(chǎng)由于飼養(yǎng)管理、母源抗體水平及繼發(fā)/混合感染的差別，發(fā)病年齡和嚴(yán)重程度不同。主要易感階段有斷奶前后（即3-6周）、12-16周齡。如遇轉(zhuǎn)群運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激也可出現(xiàn)發(fā)病高峰。

8、豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）/豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）是同一個(gè)病嗎?不是，豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的病原是２－型圓環(huán)病毒，有或沒(méi)有其它致病菌都可發(fā)生ＰＭＷＳ。當(dāng)ＰＭＷＳ病豬繼發(fā)一些呼吸道病的病原時(shí)，可以出現(xiàn)呼吸困難等癥狀。豬呼吸道疾病綜合征是指多病原引起的呼吸道疾病征候群，其病原不一定包含圓環(huán)病毒。

9、抗生素對(duì)圓環(huán)病毒病有治療效果嗎？

無(wú)論是多系統(tǒng)衰竭綜合征、呼吸道疾病綜合征還是其它的復(fù)合感染，其病原均有病毒、細(xì)菌等多種致病微生物引起?？股貙?duì)大多數(shù)細(xì)菌、支原體、原蟲有療效，只要能查清繼發(fā)感染的病原種類、選用敏感藥物，能有效降低發(fā)病嚴(yán)重程度，減少死亡率。但由于病毒往往是原發(fā)性致病因素，抗生素對(duì)病毒無(wú)效。所以抗生素的療效并不理想，一旦停藥，往往復(fù)發(fā)。

10、Ｐ－特產(chǎn)品特點(diǎn)是什么？療效如何？

Ｐ－特是中藥復(fù)方制劑，為中藥提取后精制而成，易吸收、療效穩(wěn)定、用量省、適口性特好，治愈后不會(huì)復(fù)發(fā)。中藥的抗病毒作用是早有定論的，正因?yàn)椋校蒯槍?duì)原發(fā)性病毒直

接起作用，其療效是目前同類產(chǎn)品屈指可數(shù)的．而且Ｐ－特內(nèi)含免疫增強(qiáng)因子，能迅速恢復(fù)病豬被抑制的免疫機(jī)能，有效防止復(fù)發(fā)，使用得當(dāng)，療效非常明顯。

11、Ｐ－特應(yīng)如何使用？

因?yàn)橐坏┌l(fā)病，損失是不可避免的，所以最好是預(yù)防用藥，可以按每１０００kg飼料添加１kgＰ－特，連用１周的方法使用。早期斷奶仔豬由于采食量很低，可以適當(dāng)增加用量。豬呼吸道疾病的傳染性很強(qiáng)，所以在治療時(shí)應(yīng)對(duì)尚未發(fā)病的豬進(jìn)行預(yù)防，以防病情蔓延。病豬應(yīng)及時(shí)隔離，治療可采用飲水給藥，為了保證病豬都能有足夠的藥量可采取喂服。鑒于豬呼吸道疾病的復(fù)雜性，一旦形成內(nèi)臟病變，則需要漫長(zhǎng)的恢復(fù)期，所以防治重點(diǎn)是預(yù)防和早期用藥。

12、Ｐ－特能否與抗生素合用？

Ｐ－特是中藥制劑，與化藥有協(xié)同作用，可以降低抗生素的用量，提高抗生素的療效。如果和抗生素混合在一起使用，則應(yīng)根據(jù)藥物的性質(zhì)決定，Ｐ特是酸性藥，應(yīng)避免與堿性藥物和喹諾酮類混合使用。

13、Ｐ－特使用過(guò)程中還應(yīng)注意哪些問(wèn)題？

由于豬病的復(fù)雜性，在使用前應(yīng)注意對(duì)繼發(fā)／混合感染的診斷，專家建議，下列病豬可按如下治療方案：混合感染、弓形體、附紅細(xì)胞體時(shí)，則應(yīng)同時(shí)使用對(duì)弓形體、附紅細(xì)胞體有效的藥物，如長(zhǎng)效土霉素、914A、磺胺六甲氧嘧啶；如果氣喘病很嚴(yán)重，則應(yīng)同時(shí)用強(qiáng)力霉素控制支原體；胸膜肺炎放線桿菌、副嗜血桿菌、巴氏桿菌等可選用氟苯尼考。一般來(lái)說(shuō)，呼吸困難、咳嗽越明顯、鼻涕呈黃色、體溫越高、病程越短、死亡率越高表明繼發(fā)／混合感染越嚴(yán)重，為提高療效，宜配合抗生素同時(shí)使用。而以消瘦、生長(zhǎng)不良等為主要癥狀的，無(wú)需使用抗生素。臨床應(yīng)用表明，對(duì)呼吸道疾病綜合征，與氟苯尼考、替米考星、阿奇霉素等配合使用，療效十分顯著。

14、為什么有的豬場(chǎng)使用Ｐ－特效果不是很好？

原因有：１）有豬瘟等高致死性的疫病存在；２）存在弓形體、附紅細(xì)胞體等混合/繼發(fā)感染；３）發(fā)病晚期，機(jī)體已形成無(wú)法逆轉(zhuǎn)的病變，如壞死、粘連等。

15、Ｐ－特是否應(yīng)與退熱藥同時(shí)使用？

不需要，Ｐ－特本身含清熱解毒成份，退熱藥不能抗菌、抗病毒，盲目退熱只會(huì)使機(jī)體抗病力下降，病情復(fù)雜化。使用Ｐ－特一個(gè)療程后，病豬體溫自然下降，表明病豬已經(jīng)康復(fù)。

16、圓環(huán)病毒病有疫苗嗎？

到目前為止，尚無(wú)商品疫苗供應(yīng)，現(xiàn)有圓環(huán)病毒－藍(lán)耳病病毒二聯(lián)苗中試產(chǎn)品，效果和安全性有待評(píng)價(jià)。有些豬場(chǎng)應(yīng)用自家苗，其效果的往往因抗原濃度不足而欠佳。

17、為什么有的病豬治療后體溫和精神都正常，而食欲不佳，應(yīng)如何處理？

這部分豬主要是重病豬，病程較長(zhǎng)，造成機(jī)體腸道菌群失調(diào)，脾胃虛弱及病原體內(nèi)毒素引起的。飼養(yǎng)管理方面可以補(bǔ)充電解質(zhì)或電解多維，以及給予優(yōu)質(zhì)易消化飼料和青飼料調(diào)理。

18．除治療外，還應(yīng)注意些什么？

在積極治療的同時(shí)，應(yīng)注意：１）全進(jìn)全出的飼養(yǎng)方式；２）限制寄養(yǎng)和合群；３）盡可能減少應(yīng)激因素；４）合理按排免疫程序；５）降低飼養(yǎng)密度和增加空氣流通；６）及時(shí)隔離和淘汰。配圖文字：

1、皮炎腎病綜合癥：病豬后軀密布圓形成不規(guī)則丘疹，可見中間呈黑色外周紫紅色的病灶。

2、皮炎腎病綜合癥腎臟腫大，呈土黃色，表面散布大小不一的灰白色壞死點(diǎn)。

3、圓環(huán)病毒感染，圖為同窩健康豬及病豬體重差異懸殊。

4、典型的多系統(tǒng)衰竭綜合癥：病豬消瘦、拱背、蒼白、生長(zhǎng)不良。

5、PCV-2感染心臟變形，心肌松軟，冠狀溝脂肪萎縮黃染。

6、腹股溝線淋巴結(jié)顯著腫大、蒼白、切面多汁。

7、繼發(fā)副嗜血桿菌引起的胸膜炎、心包炎、肝周炎。

8、混合感染的肺出現(xiàn)肉樣變。

9、圓環(huán)病毒引起的相關(guān)性腸炎。

10、購(gòu)入豬出現(xiàn)圓環(huán)病毒混合多種病原感染出現(xiàn)的綜合癥：消瘦、肺炎、腸炎、生長(zhǎng)不良。

11、圓環(huán)病毒與細(xì)菌混合感染：淋巴結(jié)腫大，皮質(zhì)出血。

12、混合感染豬瘟：腎臟腫大、瘀血，散在針尖狀出血，表面于溝回狀。更多請(qǐng)?jiān)L問(wèn)http:///

第二篇：豬圓環(huán)病毒病 概述

豬圓環(huán)病毒病 概述： 本病由豬圓環(huán)病毒(PCV)引起。病原-----PCV

1、分類：1995 年列為圓環(huán)病毒科（Circoviridae)。在本科里還有其 他的病毒，如雞傳染性貧 血病毒（CAV）、鸚鵡喙羽病病毒（BFDV）。PCV、BFDV 列為圓環(huán)病毒屬，CAV 列為環(huán)形 病毒屬。2.核酸類型：DNA。其單鏈環(huán)狀 DNA 染 色質(zhì)有 1759 個(gè)堿基組成。且已克 隆測(cè)定了序列。11 個(gè)開放閱讀框架，有 編碼 11 種蛋白質(zhì)。引起 PMWS 的 PCV 和引起 PK-15 污染的 PCV，同屬于圓環(huán)病毒屬，且高度的同源，但抗原性及 DNA 序列方面有一定的差異。為了區(qū)別，日前將 PCV－PK15 稱為 PCV-1，而將 PMWS 稱為 PCV-2。

3、形態(tài)大?。?為無(wú)囊膜二十面體，大小約 4～26.5nm。

4、PCV 可在豬源細(xì)胞上復(fù)制，但 CPE 不明 顯。

5、存在：淋巴結(jié)，骨髓，血液。流行病學(xué)

1、PCV 易引起豬發(fā)病，一 般不與 CAV 和 BFDV 發(fā)生交叉感染，但用 ELISA 證實(shí)人血清有 30%、小鼠血清 12%~69%、牛血清 35%抗體陽(yáng)性。

2、血清學(xué)調(diào)查表明：豬的陽(yáng)性為 20%~80%，且分布極其廣，幾乎世界各處都有。

3、周齡的豬多發(fā)，PRRS 陽(yáng)性豬群中更易繼發(fā)本病。6~8 在

4、發(fā)病率高，病死率有高有低，但即使不死，亦誘發(fā)其它疾病的發(fā)生。癥狀 ①仔豬 斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合癥； ②豬皮炎腎病綜合癥； ③相關(guān)性繁殖障礙綜合癥； ④相關(guān)性肺炎； ⑤相關(guān)性腸炎； ⑥相關(guān)性神經(jīng)系統(tǒng)病。體重減輕，漸進(jìn)性消瘦，虛弱。呼吸困難，過(guò)速，偶有咳嗽。皮膚蒼白，結(jié)膜黃染。下痢、腹瀉。中樞神經(jīng)紊亂。病 變： 全身淋巴結(jié)腫大，尤以腹股溝淋巴結(jié)為最，腫大達(dá) 3~4 倍，切面充血、出血。肺 彌漫性病變，比重增加，堅(jiān)實(shí)成橡皮樣，表面呈花斑狀。肝花斑狀，萎縮。脾腫 大，切面呈肉狀。腎被膜有白色病灶，腫大?；啬c有花斑狀。診斷：

一、臨診 腹股溝淋巴結(jié)腫大，脾、腎腫大，肝萎縮，漸進(jìn)性消瘦，有診斷價(jià)值。

二、實(shí)驗(yàn)

1、原代腎細(xì)胞或 PK-15 可用作培養(yǎng) PCV-2，但在細(xì)胞培養(yǎng)物上還不能判是否有 病毒存在。需要特異抗體用免疫熒光或直接免疫過(guò)氧化物酶染色確認(rèn)。

2、用 PCR 擴(kuò) 增病毒。

3、待檢材料做組織切片，觀察有否包涵體。

4、ELISA 測(cè)定抗體。防 治

1、預(yù)防：圓環(huán)病毒-繁殖障礙與呼吸綜合癥二聯(lián)苗。首免：10-15 日齡。二免： 30-35 日齡。

2、發(fā)病后的處理： 1）在飼料中添加呋喃妥咽或病毒靈或病毒唑，多維。2）注射圓環(huán)·藍(lán)毒康或圓環(huán)抗毒殺。3）注射豬用干擾素

第三篇：豬圓環(huán)病毒疫苗應(yīng)用現(xiàn)狀

豬圓環(huán)病毒疫苗應(yīng)用現(xiàn)狀

摘要

目前在國(guó)外只有梅里亞動(dòng)物保健公司生產(chǎn)全病毒滅活疫苗，使用于母豬免疫。

已經(jīng)注冊(cè)的國(guó)產(chǎn)圓環(huán)病毒疫苗均為全病毒滅活疫苗。分別由哈爾濱獸醫(yī)研究所用LG、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)用SH株研制而成。①哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司；②上海海利生物藥品有限公司；③洛陽(yáng)普萊柯生物工程有限公司；④江蘇南農(nóng)高科技股份有限公司4家公司生產(chǎn)。國(guó)產(chǎn)疫苗亟待提高純化工藝。水性佐劑要比礦物油佐劑疫苗對(duì)機(jī)體的刺激性小，副反應(yīng)小。疫苗免疫保護(hù)期為3—4月，貯存有效期為12—18月。

FLEX系列茵格發(fā)豬圓環(huán)病毒疫苗，是具有純化蛋白抗原的水性佐劑的亞單位滅活疫苗。形成形態(tài)、大小與活病毒相同的、具有高度免疫原性的純化抗原。該產(chǎn)品是目前所有豬圓環(huán)病毒疫苗中唯一的單針疫苗，具有抗原緩解效果，應(yīng)用時(shí)不必加強(qiáng)免疫。

在應(yīng)用圓環(huán)病毒疫苗后滿意度調(diào)查中，進(jìn)口圓環(huán)病毒疫苗滿意度最高。如何選擇疫苗、制定適合豬場(chǎng)實(shí)際的免疫程序、確定免疫時(shí)機(jī)適時(shí)免疫顯得尤為重要。

疫苗免疫哪些豬群？何時(shí)免疫？應(yīng)對(duì)豬場(chǎng)流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢變化、生產(chǎn)成績(jī)、病原和抗體的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)進(jìn)行評(píng)估后作出決定。豬場(chǎng)是否應(yīng)用疫苗，應(yīng)充分考慮本場(chǎng)發(fā)病情況、飼養(yǎng)管理狀況、生物安全、主要相關(guān)疫病免疫與控制狀況、藥物預(yù)防效果等因素基礎(chǔ)上綜合判斷。母豬是否需要免疫？倘若母豬群因PCV2感染而流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔的比例超出正常，或仔豬因PCV2感染在斷奶后1—2周發(fā)病，選擇母豬免疫就是正確的。進(jìn)口的疫苗可普免2—3次/年，在國(guó)產(chǎn)疫苗應(yīng)用安全的情況下可免疫3—4次/年。研究表明免疫母豬所產(chǎn)仔豬和非免疫母豬所產(chǎn)仔豬接種疫苗后，其免疫效應(yīng)均未受到母豬免疫的負(fù)面影響，盡管這一結(jié)果令人鼓舞，但還需進(jìn)行更多研究。

仔豬免疫的時(shí)間可據(jù)下游豬發(fā)病日齡確定。疫苗起效時(shí)間為2周，感染潛伏期約2周。當(dāng)母源抗體在3—8周下降到較低水平而環(huán)境中野毒感染壓力較大時(shí)，對(duì)于保育豬特別是10周齡后肥育豬是否獲得足夠保護(hù)？一般12周齡開始感染。應(yīng)在豬群出現(xiàn)臨床癥狀至少4周前施行免疫注射。商品豬群只注射1次即可；1針免疫4個(gè)月后再進(jìn)行第2次免疫。在第1次免疫2周后加強(qiáng)免疫一次；在加強(qiáng)免疫的3—4個(gè)月后再免疫。

新生仔豬3—4周齡首免，第一次免疫后間隔3周加強(qiáng)免疫一次。

在制定免疫程序時(shí)，還應(yīng)注意與其它免疫的相互干擾作用。至少7d的間隔；若PRRS弱毒疫苗免疫在前，最好有10d以上的間隔再免PCV2疫苗。

圓環(huán)病毒疫苗免疫效果通過(guò)常規(guī)的抗體檢測(cè)目前難以給出正確評(píng)價(jià)，可通過(guò)臨床癥狀、生產(chǎn)成績(jī)予以評(píng)估，免疫后對(duì)豬的健康狀況和增重改善明顯。圓環(huán)病毒疫苗應(yīng)用于PCV2急性感染，仔豬群呼吸困難、消瘦、皮炎，母豬群流產(chǎn)、產(chǎn)弱仔等，可減少母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱仔的數(shù)量，可明顯降低保育及生長(zhǎng)育肥豬發(fā)病率、死淘率；明顯提高日增重、豬群整齊度，降低料肉比，減少皮炎發(fā)病率，縮短出生至出欄時(shí)間；還有助于豬瘟疫苗、豬藍(lán)耳病疫苗、偽狂犬病疫苗免疫效果的正常發(fā)揮，降低機(jī)體對(duì)飼料霉菌毒素的敏感度。

第四篇：豬圓環(huán)病毒2型疫苗最新研究進(jìn)展

豬圓環(huán)病毒2型疫苗最新研究進(jìn)展

豬圓環(huán)病毒病是公認(rèn)的免疫抑制病之一，造成豬場(chǎng)損失慘重，疫苗免疫成了救命的稻草。從2011年豬圓環(huán)疫苗上市至今，已有17家圓環(huán)產(chǎn)品先后上市，目前，出現(xiàn)嚴(yán)重供大于求的現(xiàn)象，同時(shí)，養(yǎng)殖場(chǎng)也面臨著幸福的煩惱，大量產(chǎn)品的上市，產(chǎn)品價(jià)格可能下降，但是，面對(duì)玲瑯滿目的產(chǎn)品，如何選擇疫苗成了養(yǎng)殖場(chǎng)一個(gè)重要的課題，針對(duì)這些煩惱，本文希望能夠?yàn)轲B(yǎng)殖場(chǎng)選擇疫苗帶來(lái)幫助，避免走彎路，為養(yǎng)殖場(chǎng)服務(wù)。

1.PCV-2國(guó)內(nèi)外最新流行動(dòng)態(tài)

由PCV-2引發(fā)的疾病已成全球流行之勢(shì)，在加拿大首次報(bào)道該病原引起PMWS后[1]，學(xué)者通過(guò)調(diào)查本國(guó)包括SPF豬、部分散養(yǎng)豬以及育肥豬發(fā)現(xiàn)，豬群中PCV-2血清中抗體普遍存在，但目前該病在加拿大仍然只是散發(fā)。在英國(guó)和北愛爾蘭，豬群血清中PCV-2抗體陽(yáng)性率分別為86％和92％。美國(guó)、法國(guó)、丹麥、意大利、西班牙、荷蘭、新西蘭、日本、韓國(guó)、墨西哥等國(guó)家也相繼報(bào)道豬群中存在PMWS。在我國(guó)豬群中PCV-2感染情況也不容樂(lè)觀。2000年郎洪武等[2]在北京、河北、山東、天津、江西、吉林、河南等7省(市)的22個(gè)豬群采集了559份血清，用ELISA方法檢測(cè)PCV-2抗體，其陽(yáng)性率高達(dá)5l％，表明我國(guó)豬群中存在PCV-2的感染。王忠田等[3]用PCR方法對(duì)我國(guó)北京、山東、河北、深圳、山西、天津、廣東等省(市)的12個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)病豬群進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型感染的流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明豬圓環(huán)病毒2型感染情況在我國(guó)豬群中相當(dāng)嚴(yán)重。李超等[4]在2010年對(duì)安徽省PCV-2流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明安徽省14個(gè)市(縣)的PCV-2抗體陽(yáng)性率平均為74.36％，表明安徽省豬群中普遍存在著PCV-2的感染。從上述報(bào)道表明PCV-2在我國(guó)豬群中廣泛存在。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，雖然豬群中PCV-2抗體陽(yáng)性率較高，但很大比例的抗體陽(yáng)性豬群并不表現(xiàn)出臨床癥狀。PCV-2與其他多種病原混合感染較為嚴(yán)重，調(diào)查發(fā)現(xiàn)沙門氏菌、大腸桿菌等細(xì)菌性病原與PCV-2混合感染率達(dá)到了20％[5]。陜西省PCV-2與PRV混合感染率是21.7％[6]。2005年陳義祥等對(duì)廣西地區(qū)197份組織病料檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PCV-2與PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染占總病料數(shù)量的57.73％。2003年王文軍等[7]對(duì)黑龍江地區(qū)PCV-2陽(yáng)性豬群的病料調(diào)查發(fā)現(xiàn)，藍(lán)耳病和豬瘟的陽(yáng)性率也較高。

哈爾濱獸醫(yī)研究所劉長(zhǎng)明[8]在2007年采用免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞染色試驗(yàn)（IPMA）對(duì)來(lái)自與黑龍江、吉林、河北、上海、內(nèi)蒙古、云南、江西等地的健康豬群480份血清和發(fā)病豬群424份血清，抗體陽(yáng)性率分別為79.2%和91.7%，表明PCV-2在豬群中感染率非常高。山東農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所吳家強(qiáng)博士檢測(cè)結(jié)果也證實(shí)PCV-2防控比較糟糕，PCV-2，2010年檢出率為34.66%（124/357），2011年檢出率為25.59%(174/588)；2012年檢出率為2

1.38%(147/683)，圓環(huán)病毒病依然嚴(yán)重，但有下降趨勢(shì)，這個(gè)和使用圓環(huán)疫苗免疫有關(guān)系。

第五篇：豬圓環(huán)?、蛐图拌b別診斷技術(shù)研究進(jìn)展

豬圓環(huán)?、蛐图拌b別診斷技術(shù)研究進(jìn)展

摘要：豬圓環(huán)病毒(porcine circovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科，該病毒有2個(gè)血清型：PCV1和PCV2。PCV1廣泛存在于豬體內(nèi)，無(wú)致病性；PCV2能直接或間接導(dǎo)致一系列豬的綜合性疾病。如豬繁殖與呼吸道綜合征病毒(PRRSV)，斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)，豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和成年豬皮炎腎病綜合征(PDNS)等，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重。為了深入了解PCV2致病因素，建立快速鑒別診斷技術(shù)，綜述了PCV2的豬圓環(huán)病毒病及其相關(guān)致病因素和目前應(yīng)用診斷技術(shù)研究情況。為研究探討PCV2的發(fā)生和診斷提供借鑒。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病Ⅱ型；診斷技術(shù)；致病基因

豬圓環(huán)病毒(PCV)是獸醫(yī)學(xué)上已知?jiǎng)游锊《局凶钚〉牟《?，根?jù)PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，將其分為PCV1和PCV2兩個(gè)型，其中PCV1無(wú)致病性[1]，廣泛存在于豬體內(nèi)及豬源傳代細(xì)胞系。PCV2則具有致病性，在臨床上主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征。PCV對(duì)酸性環(huán)境(pH3)、氯仿或者高溫(56℃和70℃)有抵抗作用。PCV在原代胎豬腎細(xì)胞、恒河猴腎細(xì)胞、BHK-21細(xì)胞上不生長(zhǎng)，可在PK-15細(xì)胞中生長(zhǎng)，但不引起細(xì)胞病變，且需將PCV盲傳多代才能使病毒有效增殖。在接種PCV的PK-15細(xì)胞培養(yǎng)物中加入d-氨基葡萄糖，可促進(jìn)PCV復(fù)制，使得感染PCV的細(xì)胞數(shù)量提高30％。感染PCV的細(xì)胞內(nèi)含有許多胞漿內(nèi)包涵體，少數(shù)感染細(xì)胞內(nèi)含有核內(nèi)包涵體。

PCV2屬圓環(huán)病毒科(Circoviridae)，是最小的無(wú)囊膜單鏈環(huán)狀DNA病毒，其單鏈環(huán)狀DNA染色質(zhì)由1759個(gè)堿基組成，有11個(gè)開放閱讀框架，編碼11種蛋白質(zhì)，豬圓環(huán)病毒的抵抗力較強(qiáng)，不易被滅活，在外界環(huán)境中可長(zhǎng)時(shí)間存活。由豬圓環(huán)病毒(PCV2)引起的豬圓環(huán)病，臨床表現(xiàn)為體質(zhì)下降、消瘦、皮膚發(fā)白、腹瀉、呼吸困難和黃疸。

PCV2與大多數(shù)典型的豬病原傳播不同，PCV2既可水平傳播，也可垂直傳播。Shibata等在近期研究中隨機(jī)的發(fā)現(xiàn)，臨床健康的豬體內(nèi)含有PCV2[2]，說(shuō)明PCV2可潛伏于健康豬群中，更出乎意料的是，科研工作者在懷孕母豬和哺乳期母豬的乳汁中檢測(cè)出PCV2[3] 1 豬圓環(huán)病毒病及其相關(guān)性致病因素

1.1 相關(guān)的致病因子

PCV2的致病因子主要與免疫刺激、宿主的敏感性和PCV2分離株有關(guān)[4]。研究表明，免疫刺激可以激發(fā)PCV2從感染向疾病方向發(fā)展而出現(xiàn)PMWS的機(jī)能障礙特征，這可能是由PRRSV或豬細(xì)小病毒(PPV)激活了巨噬細(xì)胞，從而促進(jìn)了PCV2的增殖。

在宿主敏感性研究中發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)白豬較杜洛克和大白豬更容易出現(xiàn)與PCV2相關(guān)的疾病爆發(fā)，而皮特蘭仔豬對(duì)與PCV2相關(guān)的疾病敏感性較低，且公豬的遺傳品系對(duì)PCV2相關(guān)疾病發(fā)病情況有顯著的影響。最新的證據(jù)則表明[5]，PCV2分離株在毒力上有一定的差異，但這種微小的分歧可能與病毒的地域來(lái)源有關(guān)，而與分離株的病毒毒力無(wú)關(guān)。

1.2 PCV2的協(xié)同感染疾病

PCV2的主要協(xié)同感染疾病在最初研究中傾向于豬肺炎支原體、PPV、PRRSV，可是隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)了如豬皮炎與腎炎綜合征、繁殖障礙、母豬流產(chǎn)和死亡綜合征和PMWS等很多疾病可能都會(huì)協(xié)同PCV2感染。

充分的證據(jù)表明，由于PCV2和PPV在豬體內(nèi)具有類似的靶細(xì)胞，而PPV提高免疫系統(tǒng)的功能導(dǎo)致了更嚴(yán)重的疾病，PCV2和PPV的雙重感染會(huì)引發(fā)比單個(gè)感染PCV2更嚴(yán)重的臨床癥狀和病變，在發(fā)生PCV2相關(guān)疾病PMWA的豬群中，PRRSV居最常見的協(xié)同感染因子名單之首，其檢出率高達(dá)52％[6]。豬呼吸道綜合征(PRDC)、增生和壞死性肺炎(PNP)、豬皮炎與腎炎綜合征(PDNS)是發(fā)生在斷奶、育成豬及成年豬群中的疾病，被認(rèn)為是由多種病因共同感染所致，由于PCV2在這些共同感染疾病中普遍存在，其在這些疾病的共同感染中扮演了何種角色已普遍引起了人們的關(guān)注[7-8]，但PCV2與PRRS和PMWS直接相關(guān)的證據(jù)[9-10]，愈來(lái)愈明顯。致病基因

PCV的基因組為單股、負(fù)鏈、環(huán)狀DNA，病毒基因組以滾環(huán)模式(rolling circle model)進(jìn)行復(fù)制。PCV2的復(fù)制起始區(qū)位于一個(gè)324 bp的片段上，其包含1個(gè)莖-環(huán)結(jié)構(gòu)、保守的九核苷酸基序(AAGTATTAC)、3個(gè)六核苷酸重復(fù)序列(CGGCAG)和2個(gè)五核苷酸重復(fù)序列，Rep和Rep’的共表達(dá)是起始PCV2的復(fù)制所必須的，對(duì)PCV2的保守九核苷酸基序進(jìn)行突變，從而影響病毒的復(fù)制過(guò)程，Rep和Rep’蛋白協(xié)同定位于同一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，二者既可以形成同源復(fù)合物，也可以形成異源復(fù)合物。

據(jù)研究報(bào)道認(rèn)為，豬圓環(huán)病的致病基因可能與ORFl-6這6個(gè)編碼框編碼的蛋白有關(guān)，其中ORFl為Rep基因，編碼2種蛋白，負(fù)責(zé)PCV2的復(fù)制；ORF2為Cap基因，編碼Cap蛋白，是PCV2病毒的唯一結(jié)構(gòu)蛋白，可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體；ORF3編碼的一種蛋白可以誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡[11-12]。

研究表明，ORF3誘導(dǎo)TNF-α達(dá)到較高水平可能與并發(fā)PPV和PMWS直接相關(guān)，ORF5誘導(dǎo)的IL-6可能與PDNS有關(guān)(PDNS也是IL-6明顯增強(qiáng))[13]，OFFR2基因表達(dá)的IL-10可能是感染豬逐漸發(fā)展成更嚴(yán)重的PMWS，而ORFl表達(dá)的Thl(IFN-γ)和Th2(IL-13)PMWS和PDNS有某種聯(lián)系[14]。鑒別診斷技術(shù)

3.1 PCR方法

復(fù)合PCR技術(shù)具有單聯(lián)PCR技術(shù)同樣的優(yōu)點(diǎn)，又能一次反應(yīng)同時(shí)方便快捷的檢測(cè)鑒別多種不同病原體。夏平安教授[15]等針對(duì)可引起豬免疫抑制病的重要病原PRRSV和PCV2建立了一種復(fù)合PCR檢測(cè)方法，根據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)美洲型標(biāo)準(zhǔn)株部分開放閱讀框保守序列和PCV2基因保守序列，設(shè)計(jì)合成了2對(duì)特異引物，最終建立了可同時(shí)檢測(cè)PRRSV和PCV2的復(fù)合PCR診斷方法。

馮志新等研究設(shè)計(jì)合成了一套引物和TaqMan探針，特異性擴(kuò)增PCV2-ORF2基因，通過(guò)反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了快速定量檢測(cè)PCV2的實(shí)時(shí)PCR方法。該方法具有較好的特異性和重復(fù)性，對(duì)PCV2 DNA檢測(cè)的下限為1拷貝／uL，敏感性比常規(guī)PCR高106倍[16]。

Chae等報(bào)道了一種半槽式多重PCR，成功進(jìn)行PCV1、PCV2和PPV的鑒別診斷，在98個(gè)精液樣品中發(fā)現(xiàn)，有20個(gè)陽(yáng)性的PCV和42個(gè)陽(yáng)性PPV，與半槽式PCR診斷結(jié)果相同。當(dāng)PCV或PPV在人為污染的精液樣本中存在時(shí)，運(yùn)用該技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)：PCV和PPVDNA主要存在精

液和一小部分無(wú)精子中。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該方法具有較高的敏感性和特異性，可以很好地區(qū)別PCV或PPV在豬上的感染。

Kathleen運(yùn)用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)Rep基因(ORF1)在自然感染的豬群和實(shí)驗(yàn)室人工感染的豬群的肺、淋巴結(jié)等組織，可以檢測(cè)到2.2×103～2．2×1010／mLPCV2拷貝數(shù)。同時(shí)，他們檢測(cè)到在所有被PMWS感染的豬群中都存在Rep基因，即證明了存在PCV2的混合感染的可能性。

3.2 ELISA和ELISA試劑盒

林彥星等應(yīng)用原核表達(dá)的PCV2衣殼(Cap)蛋白作為診斷抗原，初步建立了一種檢測(cè)PCV2抗體的間接ELISA方法[17]。實(shí)驗(yàn)表明該方法具有較高的敏感性和特異性，適于大規(guī)模檢測(cè)PCV2血清抗體的流行病學(xué)調(diào)查。秦承學(xué)等將PCV2 ORF1和ORF2基因分別插入桿狀病毒和大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，用親和層析方法提純獲得重組衣殼(Cap)與復(fù)制(Rep)蛋白，用細(xì)胞融合技術(shù)獲得2株Cap和Rep蛋白單克隆抗體，以重組Cap和Rep蛋白作為抗原，通過(guò)反應(yīng)重要條件的優(yōu)化，建立了間接ELISA方法，有較好的特異性和重復(fù)性，可用于PCV2抗體檢測(cè)和疫苗免疫抗體鑒別診斷[18]。

研究人員研究對(duì)3種抗免疫球蛋白G的ELISA試劑盒檢測(cè)抗PCV2a和PCV2b抗體，同時(shí)也檢測(cè)了抗PCV2和PCV1抗體，55頭3周齡的小豬隨機(jī)分成7組，其中7頭為陰性對(duì)照，8頭接種PCV2a，8頭接種PCV2b，8頭接種PCV1，其余的24頭接種不同廠家的3種疫苗，收集1周的血液樣本，分別用3種試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)數(shù)值都大于0.94，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PCV2a和b抗體沒(méi)有根本區(qū)別，沒(méi)有檢測(cè)出PCV1抗體，但1種試劑盒可鑒別出經(jīng)疫苗B接種的豬體內(nèi)的PCV2a或PCV2b抗體[19]。

3.3 競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(C-ELISA)

Walker以分離的PCV2細(xì)胞培養(yǎng)物作為抗原，以PCV2特異性單克隆抗體作為競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)物，C-ELISA敏感性和特異性達(dá)到99.58％和97.14％。McNelilly等建立了PCV特異性抗原捕獲ELISA，其與定量病毒分離，可以區(qū)別PCV的臨床和亞臨床感染。

3.4 間接免疫熒光試驗(yàn)

間接免疫熒光技術(shù)常用于豬圓環(huán)病毒感染的血清學(xué)普查，其特點(diǎn)是快速、特異、敏感，是目前診斷PCV2常用的血清學(xué)方法。在用于抗體檢測(cè)時(shí)，可將PCV2按種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的PK-15細(xì)胞上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，經(jīng)丙酮固定干燥后即可。此方法不僅可以用于檢測(cè)抗體，而且可以用已知PCV特異性抗體檢測(cè)抗原，主要用于PCV的分離鑒定及豬源細(xì)胞PCV污染情況的普查，為疾病診斷和凈化豬源細(xì)胞提供了有效手段。

3.5 免疫金標(biāo)檢測(cè)

浙江大學(xué)發(fā)明公開了一種豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)抗原或抗體檢測(cè)試紙條。檢測(cè)試紙條既可以豬圓環(huán)病毒2型抗原也可以檢測(cè)血清中的PCV抗體，檢測(cè)試劑條操作簡(jiǎn)單，易于大范圍推廣應(yīng)用，具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。

3.6 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一種新的具有明顯優(yōu)勢(shì)的擴(kuò)增技術(shù)，能夠在63℃～65℃等溫條件下擴(kuò)增特異的DNA序列，在30～60min可以得到肉眼可見的結(jié)果，該技術(shù)在禽流感的快速診斷中已成功運(yùn)用。據(jù)研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析表明，此技術(shù)的敏感性高于PCR，同時(shí)，在檢測(cè)PCV1，PPV，PRV時(shí)無(wú)交叉反應(yīng)，特異性較高，能夠完成對(duì)PCV2的快速檢測(cè)和定性分析，為PCV2的診斷提供了一種快速敏感的檢測(cè)方法。

3.7 基因芯片技術(shù)

基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的，工作原理是應(yīng)用已知核酸序列作為探針與互補(bǔ)的靶核苷酸序列雜交，通過(guò)隨后的信號(hào)檢測(cè)進(jìn)行定性與定量分析。基因芯片是在一微小的基片(硅片、玻片、塑料片等)表面集成了大量的分子識(shí)別探針，能夠在同一時(shí)間內(nèi)平行分析成千上萬(wàn)的基因，進(jìn)行大信息量的篩選與檢測(cè)分析?；蛐酒夹g(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于禽流感和口蹄疫等重大疾病的快速診斷及分型和定型，但在PCV2混合感染的相關(guān)疾病的快速診斷和鑒定上還沒(méi)見報(bào)道?？梢灶A(yù)見，在不久的未來(lái)可能會(huì)出現(xiàn)基因芯片技術(shù)在PCV2引起的相關(guān)疾病上的應(yīng)用。

3.8 原位雜交(ISH)技術(shù)

ISH具有高度敏感性，在國(guó)內(nèi)外已經(jīng)建立了多種方法。應(yīng)用ISH既可以對(duì)PCV1和PCV2進(jìn)行分型，又可以檢測(cè)PCV與其他病毒的混合感染。劉方娜等根據(jù)GenBank中已發(fā)表的豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)基因序列，在ORF2內(nèi)設(shè)計(jì)l對(duì)特異性引物，利用PCR反應(yīng)擴(kuò)增出371 bp的核酸片段，回收并純化PCR產(chǎn)物，用地高辛標(biāo)記，建立了地高辛標(biāo)記核酸探針診斷PCV2的方法[20]。該探針與8個(gè)PCV2重組菌的核酸抽提物均能發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照組豬圓環(huán)病毒I型(PCVI)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬偽狂犬病病毒(PRV)的核酸雜交均為陰性；對(duì)PCV2 DNA的最低檢測(cè)量為lOpg。結(jié)論與討論

PCV2與一系列豬的綜合感染相關(guān)，這些疾病包括PMWS，PNP，PDNS，PRDC。很顯然，這些疾病的發(fā)生與發(fā)展，至少與PCV2損毀豬的免疫系統(tǒng)有關(guān)，比如，PMWS發(fā)展是由于免疫系統(tǒng)異常和免疫抑制有關(guān)。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，PCV2在淋巴組織的淋巴細(xì)胞、組織細(xì)胞和巨細(xì)胞廣泛存在，導(dǎo)致體液免疫和細(xì)胞免疫失敗。同時(shí)，由于PCV2分離株在毒力和地理分布上相差較大，這就意味著它的病原學(xué)意義有相當(dāng)高的研究?jī)r(jià)值。

有文獻(xiàn)報(bào)道，PCV2可以感染牛，接種PCV2完全可以致死8周齡的小鼠，這是否意味感染別的動(dòng)物還需要進(jìn)行很多的調(diào)查研究。目前，PCV2的研究?jī)A向與動(dòng)物解剖，然后進(jìn)行分型和鑒定，這明顯不利于動(dòng)物安全生產(chǎn)、疾病的控制和人類自生安全。PCR技術(shù)有存在假陽(yáng)性的問(wèn)題，ELISA雖然特異性和敏感性較高，但它所用時(shí)間較長(zhǎng)，在快速診斷方面顯然不足，LAMP技術(shù)花費(fèi)時(shí)間較少，敏感性和特異性也較高，但他是一個(gè)相對(duì)較新的技術(shù)，還需要更多的臨床驗(yàn)證，基因芯片技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于禽流感、口蹄疫和人類重大疾病的快速診斷及分型和定型，但在PCV2診斷和鑒定上還沒(méi)見報(bào)道。如何與PCV2相關(guān)疾病的混合感染中進(jìn)行快速的分型和定型鑒定，如何加強(qiáng)傳統(tǒng)診斷技術(shù)的完善，以及加大對(duì)PCV2分子致病特性的研究力度，是科學(xué)工作者努力探索的問(wèn)題；從而建立快速、敏感、準(zhǔn)確的分子診斷技術(shù)和診斷方法，定期檢測(cè)和預(yù)測(cè)即將流行的毒株，不斷提高傳統(tǒng)技術(shù)敏感度和特異性，同時(shí)不斷推廣和完善新方法、新技術(shù)，為早期、快速、特異、敏感地鑒別診斷此病毒，為有效地防控PCV2暴發(fā)與蔓延具有重大的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義，控制PCV2對(duì)全世界養(yǎng)殖業(yè)及公共衛(wèi)生構(gòu)成的巨大威脅。

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