第一篇：2007博士分子生物學(xué)進(jìn)展考試題專題

分子生物學(xué)進(jìn)展考試題

2007級(jí)博士研究生（基礎(chǔ)）用

一、iPS細(xì)胞研究最近成為熱點(diǎn)，并被《自然》和《科學(xué)》雜志評(píng)為2007年重大科學(xué)進(jìn)展之一。試詳細(xì)論述iPS細(xì)胞的原理、具體鑒定方法，并對(duì)其應(yīng)用前景和存在的問(wèn)題加以評(píng)論。

二、三、基因表達(dá)調(diào)控研究中，常用EMSA 和ChIP技術(shù)。試分別詳細(xì)論述其原試詳細(xì)論述蛋白質(zhì)相互作用研究的方法原理，并給出具體事例。理、具體方法，并比較兩者區(qū)別。

四、小分子RNA在基因表達(dá)調(diào)控中起到重要作用，試論述其作用原理并比較其異同。

五、六、試詳細(xì)介紹你最近所讀的一篇你最感興趣的科學(xué)論文。Real-time PCR的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。試論述其原理及如何應(yīng)用。

第二篇：分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展

分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展

[摘要] 分子生物學(xué)技術(shù)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的重要診療手段。本文概述醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中常用的分子生物學(xué)技術(shù)，列舉其在臨床病原微生物檢驗(yàn)、腫瘤診斷及評(píng)估、遺傳病診斷、免疫系統(tǒng)疾病診斷中的具體應(yīng)用，分析分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用中應(yīng)注意的問(wèn)題，并對(duì)發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行預(yù)測(cè)。

[關(guān)鍵詞] 分子生物學(xué)技術(shù)；醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)；應(yīng)用；

進(jìn)展分子生物學(xué)是以核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子為研究對(duì)象的學(xué)科，分子生物學(xué)技術(shù)即建立在核酸生化基礎(chǔ)上的一類研究手段，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中。研究?jī)?nèi)容也從DNA鑒定、擴(kuò)展到核酸及表達(dá)產(chǎn)物分析，技術(shù)不斷進(jìn)步為原微生物檢驗(yàn)、腫瘤診斷及評(píng)估、遺傳病診斷、免疫系統(tǒng)疾病診斷提供重要依據(jù)和創(chuàng)新思路?，F(xiàn)就分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述，試分析應(yīng)注意的問(wèn)題及預(yù)測(cè)發(fā)展趨勢(shì)。

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中常用的分子生物學(xué)技術(shù)概述

分子生物學(xué)技術(shù)的核心是聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，能在最短的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增。由此衍生出新PCR技術(shù)，如原位PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)定量PCR、鏈置換擴(kuò)增技術(shù)、LCR、NASBA、TAS等。此外，生物芯片技術(shù)、核酸探針技術(shù)、生物傳感器、SELEX技術(shù)、循環(huán)核酸分析技術(shù)都極大的完善了檢驗(yàn)技術(shù)，直接解釋生命規(guī)律，在臨床診斷和治療中意義重大。

分子生物學(xué)技術(shù)在臨床中的具體應(yīng)用

2.1 病原微生物檢驗(yàn) PCR和生物芯片技術(shù)用于病原微生物檢驗(yàn)術(shù)與傳統(tǒng)的培養(yǎng)鑒定、免疫測(cè)定相比，其具有高的敏感性，較短的耗時(shí)和更廣的適用范圍[1]。PCR通過(guò)向反應(yīng)管中加入特異性引物可同時(shí)鑒定出單種或多種病原體，即便存在大量死菌也能得到準(zhǔn)確結(jié)果，不受混合標(biāo)本和微生物生長(zhǎng)時(shí)間的限制。生物芯片技術(shù)則以其更高的靈敏性和高效率，同時(shí)檢測(cè)出上百種病原微生物，可用于快速查找樣本的耐藥基因指導(dǎo)臨床用藥。

2.2 腫瘤及遺傳病診斷 研究證實(shí)腫瘤及遺傳病幾乎都存在著一定的基因缺陷，只要找到人體中與基因相互作用的結(jié)合點(diǎn)，從基因水平診斷就能準(zhǔn)確診斷。通過(guò)基因芯片判定靶基因P53抑癌基因的突變，通過(guò)分子蛋白質(zhì)組學(xué)、生物傳感器和流式細(xì)胞術(shù)診斷腫瘤特異性標(biāo)志物。在遺傳病中，分子生物技術(shù)能識(shí)別患病家族基因存在的特定多態(tài)性，常用技術(shù)有DNA限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析，單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，熒光原位雜交染色體分析，酶基因調(diào)控和微陣列技術(shù)。

2.3 免疫系統(tǒng)疾病診斷 免疫系統(tǒng)疾病診斷關(guān)鍵是確定基因水平上的調(diào)控表達(dá)。如在人類免疫缺陷病毒的研究中，分子生物納米技術(shù)即以抗體為基礎(chǔ)，用免疫分析和磁性修飾的方法來(lái)檢測(cè)免疫物質(zhì)，通過(guò)酶、熒光劑、同位素把特異的抗體抗原與納米磁性微球固定，既能自動(dòng)檢測(cè)人免疫缺陷病毒1型和2型抗體，為人類防治病毒性疾病提供了有力的武器。

分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗(yàn)應(yīng)用的新進(jìn)展

現(xiàn)階段分子生物學(xué)新技術(shù)的發(fā)展方興未艾，給人們提供了探索人類生命科學(xué)的工具，推動(dòng)了檢驗(yàn)學(xué)發(fā)展。分子生物技術(shù)最顯著的醫(yī)學(xué)成就是對(duì)遺產(chǎn)病中的致病基因的準(zhǔn)確定位及克隆，早在1998年就完成了遺傳性耳聾的基因克?。?003年SARS肆虐時(shí)，科學(xué)家就研制出專門診斷該病的基因芯片；2004年后實(shí)現(xiàn)了用多重PCR技術(shù)對(duì)我國(guó)新生兒多發(fā)的地中海貧血、苯丙酮尿癥、G6DP缺乏癥的產(chǎn)前和病例診斷；近年來(lái)，遺傳標(biāo)記技術(shù)的進(jìn)步，結(jié)合現(xiàn)有分子學(xué)研究技術(shù)，加速了遺傳基因圖譜的制作和相關(guān)疾病的基因檢測(cè)和鑒定，從而為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的加速發(fā)展提供了有效的載體。

存在問(wèn)題及發(fā)展趨勢(shì)

現(xiàn)階段面臨的問(wèn)題主要是技術(shù)相對(duì)復(fù)雜和儀器要求太高、藥品和反應(yīng)盒昂貴等[2]，限制了臨床推廣。首先，合理選用檢驗(yàn)項(xiàng)目的問(wèn)題，分子生物學(xué)方法具有高特異性和高靈敏性，但臨床中仍要根據(jù)實(shí)際需要選用經(jīng)濟(jì)合理的檢驗(yàn)項(xiàng)目，如結(jié)核菌培養(yǎng)和涂片鏡檢就能達(dá)到目的，不必舍廉選貴，增加患者負(fù)擔(dān)。其次，疾病診斷過(guò)度依賴檢驗(yàn)結(jié)果問(wèn)題，應(yīng)將臨床資料綜合考慮，不能僅靠分子生物學(xué)技術(shù)檢驗(yàn)結(jié)果就妄下診斷，忽略標(biāo)本取樣和檢驗(yàn)過(guò)程中的操作不當(dāng)及病程發(fā)展規(guī)律造成的假陽(yáng)性或是假陰性，貽誤病情。再者，上級(jí)部門管理不足問(wèn)題，國(guó)家相關(guān)部門要擔(dān)任監(jiān)管的職責(zé)，參考國(guó)際慣例，制定符合我國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)現(xiàn)狀的實(shí)驗(yàn)操作管理規(guī)章制度，嚴(yán)格培訓(xùn)檢驗(yàn)人員，規(guī)范試劑的準(zhǔn)入和儀器的管理，最大程度保證檢驗(yàn)結(jié)果的可信度。

雖然分子生物技術(shù)在臨床推廣應(yīng)用中存在著許多尚待解決的問(wèn)題，但是它仍然顯現(xiàn)出了快速發(fā)展的趨勢(shì)。未來(lái)其發(fā)展會(huì)傾向于：①現(xiàn)有、僅停留在實(shí)驗(yàn)室的分子生物學(xué)技術(shù)逐步向臨床實(shí)用型改進(jìn)，降低實(shí)驗(yàn)投入、簡(jiǎn)化操作步驟，推進(jìn)實(shí)驗(yàn)過(guò)程全自動(dòng)化的實(shí)施降低人為因素對(duì)結(jié)果的影響，根據(jù)臨床實(shí)際修正技術(shù)，提高檢驗(yàn)的特異性和敏感性。②積極推進(jìn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，加大儀器和檢驗(yàn)人員的培訓(xùn)投入，為分子生物學(xué)的臨床應(yīng)用提供必要的基礎(chǔ)保障，以先進(jìn)的、可持續(xù)性的實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)手段為臨床提供可靠的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] Yuregir OO,Sahin FI,Yilmaz Z,et al.Fluorescent in situ hybrid-ization studies in multiple myeloma[J].Hematology,2009,14(2):90-94.[2] 李鵬.現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,3(6):161.PCR在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用PCR現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

王耿新 劉德亮 王志群 陳獻(xiàn)業(yè)

山東省青島市腫瘤醫(yī)院 青島 266042

聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）又稱體外基因擴(kuò)增技術(shù)或 DNA 擴(kuò)增技術(shù)。自 1985 年美國(guó) PE-Cetus 公司的 K.B Mullis 等人首創(chuàng)了 PCR 技術(shù)之后，它以相當(dāng)驚人的速度被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域?，F(xiàn)今，PCR 技術(shù)已成為一種對(duì)標(biāo)本中特定的 DNA 片段進(jìn)行分析研究和檢測(cè)鑒定的重要方法。近20 年來(lái) PCR 技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)等各個(gè)研究領(lǐng)域和臨床應(yīng)用中發(fā)揮了重大的作用，在病原體鑒定、遺傳病診斷、免疫學(xué)研究、癌基因探索及治療等方面都作出了相應(yīng)的貢獻(xiàn)。

1.PCR 技術(shù)的基本原理與特點(diǎn) [1-2]

PCR 技術(shù)的基本原理是模仿 DNA 體內(nèi)復(fù)制的機(jī)制，在體外進(jìn)行擴(kuò)增特異的 DNA 片段。它主要是由三個(gè)基本步驟組成的循環(huán)反應(yīng)。首先是變性，用加熱的方法使雙鏈 DNA 解鏈成兩股單鏈；其次是復(fù)性，用降溫的辦法使這兩股單鏈按堿基互補(bǔ)的原則分別與加入的兩條人工合成的寡聚核苷酸鏈（引物）結(jié)合成雙鏈；最后是延伸，在合適的緩沖液、鎂離子及脫氧核苷酸存在的條件下，用 DNA 聚合酶進(jìn)行催化，按堿基配對(duì)的原則合成互補(bǔ)鏈。引物從 3 '端進(jìn)行延伸，合成的方向?yàn)?5 '端（一條人工合成的引物）至 3 '端，從而合成與模板 DNA 結(jié)構(gòu)相同的片段。重復(fù)上述三步驟，變性→復(fù)性→引物延伸的過(guò)程，經(jīng)過(guò)約 30 個(gè)周期的循環(huán)（每三個(gè)步驟為一周期，約需 2-3 分鐘），1-2 小時(shí)就能將所需基因擴(kuò)增幾百萬(wàn)倍，使極微量的所需 DNA 達(dá)到極易檢測(cè)的水平。其擴(kuò)增效率公式為： Y=（1+X）n，式中 Y 為擴(kuò)增數(shù)目，X 為放大效率，n 為循環(huán)次數(shù)。

PCR 技術(shù)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速省時(shí)等特點(diǎn)。其靈敏度可達(dá)到 Pg 級(jí)，甚至達(dá)到 fg 級(jí) [3] 水平，而被擴(kuò)增的基因片段能與原基因片段保持不變。PCR 技術(shù)操作簡(jiǎn)便、快速而易掌握，并且對(duì)標(biāo)本要求不高。用過(guò)去的方法完成一項(xiàng)試驗(yàn)少則幾周，多則幾個(gè)月。應(yīng)用全自動(dòng) DNA 擴(kuò)增儀，整個(gè) PCR 過(guò)程均由電腦控制，只需數(shù)小時(shí)即可完成整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程，用極微量的粗制標(biāo)本就可獲取目的產(chǎn)物。

2.常用的幾種 PCR 及主要用途 [4-5]

2.1 定量 PCR ：用于 mRNA 定量及轉(zhuǎn)錄水平的研究。

2.2 抗原捕獲 PCR（AC-PCR）：用于病毒感染的檢測(cè)。

2.3 不對(duì)稱 PCR（Asymmetric PCR）：用于制備探針或測(cè)序。

2.4 彩色 PCR（CCA-PCR）“用于檢測(cè)某些多型別病毒的混合感染。

2.5 原位逆轉(zhuǎn)錄 PCR（In Situ RT-PCR）：定位檢測(cè)細(xì)胞中 RNA 病毒感染。

2.6 逆轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）：用于克隆 cDNA、檢測(cè) RNA 病毒、cDNA 探針。

2.7 反向 PCR（inverted PCR）：用于擴(kuò)增已知基因片段兩側(cè)的未知序列。

2.8 膜 PCR（membrane-bound PCR）：可去除污染的雜質(zhì)或 PCR 產(chǎn)物殘留，檢測(cè)低豐度靶 DNA。

2.9 間接原位 PCR（Indirect In Situ PCR）：定位檢測(cè)細(xì)胞中 DNA 病毒感染，是目前應(yīng)用較廣泛的一種原位 PCR 技術(shù)，其特異性比直接 PCR 強(qiáng)。

3.PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的地位

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，人類疾病多數(shù)是直接或間接與基因有關(guān) [6]，如腫瘤、糖尿病和心血管疾病等。在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷中我們經(jīng)歷了生化和免疫診斷的發(fā)展過(guò)程，由于各類擴(kuò)增技術(shù)的出現(xiàn)使我們進(jìn)入了基因診斷的新時(shí)代并成就了現(xiàn)代意義基因診斷的崛起。這將改變以往對(duì)疾病的表型認(rèn)識(shí)和表型診斷，從本質(zhì)上認(rèn)識(shí)疾病和診斷疾病。在各類擴(kuò)增技術(shù)中，PCR 的地位尤為突出。目前，全世界利用 PCR 技術(shù)診斷感染性疾病每年達(dá)幾千萬(wàn)人次，其費(fèi)用早已大幅下降，說(shuō)明 PCR 有著巨大的潛在市場(chǎng)。美國(guó)臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)于 1995 年頒布了關(guān)于感染性疾病分子診斷應(yīng)用范圍、條件和質(zhì)量控制細(xì)則等準(zhǔn)則文件 [7]。而國(guó)際臨床化學(xué)學(xué)會(huì)于 1998 年又發(fā)布了關(guān)于分子擴(kuò)增在臨床診斷中應(yīng)用的質(zhì)量評(píng)估基礎(chǔ)的文件并對(duì) PCR 操作的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行了詳細(xì)論述 [8]。由此可見，兩個(gè)權(quán)威性文件也都肯定了 PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面的重要性?；蛟\斷可能將是以后的發(fā)展方向并作為疾病的常規(guī)診斷技術(shù)。

4.PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用

4.1 PCR 技術(shù)在腫瘤方面的應(yīng)用

目前，腫瘤發(fā)病的分子機(jī)制尚不完全清楚。研究表明，人類許多常見的腫瘤疾病與某些病毒病因及腫瘤相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變有著密切的關(guān)系。PCR 技術(shù)的腫瘤病毒病因、腫瘤相關(guān)基因、腫瘤相關(guān)抑癌基因等研究方面已取得可喜成果。

據(jù)有關(guān)資料表明 [1，4] 前列腺癌、結(jié)腸癌和 Kaposi 肉瘤等與人巨細(xì)胞病毒（CMV）有關(guān)；鼻咽癌和 Burkitt 淋巴瘤與 EB 病毒有關(guān)；原發(fā)性肝癌與乙型肝炎病毒（HBV）有關(guān)；泌尿道腫瘤和食道腫瘤等與人乳頭瘤病毒（HPV）有關(guān)。人類腫瘤病毒病因中較為重要的一類病毒是 HPV，其中大部分只與良性增生有關(guān)，只有 16、18、31、35、39 等十余型與惡性腫瘤關(guān)系密切。PCR 在檢測(cè) HPV，尤其是第 16、18 型有無(wú)感染，對(duì)子宮頸癌的早期診斷及預(yù)防有著顯著的意義。

目前，已知腫瘤相關(guān)基因有上百多種，但較常見的是 ras 家族的 H-ras、K-ras 和 N-ras 三種癌基因。它們的結(jié)構(gòu)相似，其表達(dá)產(chǎn)物是 P21 蛋白。在不同腫瘤中 ras 家族癌基因的 H-ras、K-ras 點(diǎn)突變多集中在第 12 和 61 號(hào)密碼子上，而 N-ras 在第 13 號(hào)密碼子上多發(fā)生突變。PCR 在癌基因的研究方面主要是 ras 基因與腫瘤的關(guān)系?，F(xiàn)已查明與 ras 基因突變有關(guān) [1，2，4，9，10] 的腫瘤有幾十種。如：各種急性慢性白血病、精原細(xì)胞癌、惡性黑色素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、卵巢癌、胰腺病、肺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、子宮瘤等。Rb 基因 [11] 是人類最早（1986 年）發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，其后又相繼發(fā)現(xiàn)了 P53、WT1、NF1、DCC、MCC、APC、P16 和 P21 等抑癌基因。在遺傳性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤研究中發(fā)現(xiàn)位于 13 號(hào)染色體上 Rb 基因的缺失與癌變有關(guān)。在許多常見腫瘤，如骨肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤中，常發(fā)現(xiàn)該基因失活 [11]。在對(duì) P53 基因的研究中 [12-14] 發(fā)現(xiàn)該基因的突變和缺失是許多腫瘤發(fā)生的原因，這些腫瘤主要有子宮頸癌、肝癌、成骨肉瘤等。遺傳學(xué)改變主要是引起癌基因激活和抑癌基因的失活，使基因發(fā)生突變、缺失、增加和易位等而導(dǎo)致了細(xì)胞癌變。PCR 不但能有效地檢測(cè)基因的突變、重排、易位等，而且能準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因表達(dá)量，可據(jù)此進(jìn)行腫瘤早期診斷、鑒別、分型、分期、治療及預(yù)后評(píng)估等。

近年，剛興起的熒光定量逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR [10] 在腫瘤診斷、治療和微轉(zhuǎn)移以及微小殘留病灶檢測(cè)等方面具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。研究表明，癌細(xì)胞或癌前期細(xì)胞在進(jìn)入血液循環(huán)以后，通過(guò)定量 RT-PCR 檢測(cè)外周血腫瘤特異性標(biāo)志物 mRNA，可進(jìn)行實(shí)體腫瘤的篩查，檢測(cè)腫瘤術(shù)后及淋巴轉(zhuǎn)移陰性的病人外周血腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，以便估計(jì)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，制訂合理的治療方案。另外，定量 RT-PCR 還可用于腫瘤耐藥基因（MDR1）[10] 表達(dá)水平檢測(cè)，為臨床篩選化療藥物及治療方法提供依據(jù)。

4.2 PCR 技術(shù)在遺傳病方面的應(yīng)用

PCR 技術(shù)首次臨床應(yīng)用 [10] 就是從檢測(cè)鐮狀細(xì)胞和 β-地中海貧血的基因突變開始的。十幾年來(lái)，該技術(shù)在遺傳病診斷的臨床應(yīng)用方面獲得了極大的成功。它能用于檢測(cè)已知基因序列的任何遺傳病基因的突變，如倒位、缺失 / 插入、動(dòng)態(tài)突變、部分高發(fā)的點(diǎn)突變及表達(dá)量的異常等都可通過(guò)基因分析直接檢測(cè)用于臨床進(jìn)行診斷，像地中海貧血、血友病、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、脆 X 綜合征、苯丙酮尿癥等這些遺傳性疾病。PCR 在遺傳病診斷及遺傳病預(yù)防與產(chǎn)前基因診斷方面具有明顯的應(yīng)用價(jià)值，PCR 產(chǎn)物直接測(cè)序已成為檢測(cè)遺傳病基因突變的常用方法。另外，PCR 在鑒定編碼抗生素耐藥性基因 [10]，尤其是在細(xì)菌不攜帶同源性序列且取單個(gè)菌落進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增時(shí)，具有較高的特異性和敏感性。

4.3 PCR 技術(shù)在感染性疾病方面的應(yīng)用 目前 PCR 在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中對(duì)感染性疾病的診斷 [10，15] 極具突出，只要核酸序列是清楚的，就可以檢測(cè)到任何有限的病原體。一般實(shí)驗(yàn)室可檢出 10-100 個(gè)基因拷貝，而目前，病原體抗原檢測(cè)方法一般需要 10 5 ～ 10 7 個(gè)病原體才能檢測(cè)到。PCR 技術(shù)的運(yùn)用解決了免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題，可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。再者，抗體檢測(cè)不能判定是現(xiàn)癥感染還是既往感染時(shí)，也需要用 PCR 方法來(lái)確定。另外，病原體感染后的發(fā)病時(shí)間和病情輕重均與病原體數(shù)量有關(guān)。如艾滋?。ˋIDS）由人免疫缺陷病毒（HIV）感染后，可根據(jù) HIV 檢測(cè)的含量預(yù)知發(fā)病的時(shí)間。因?yàn)?AIDS 潛伏期的長(zhǎng)短和臨床癥狀的輕重與血液中的病毒量呈顯著相關(guān)。在其它病毒性疾病中也多半存在類似情況，這均需 PCR 來(lái)定量說(shuō)明。

PCR 在 HBV 定量研究中表明，HBV 載量與肝炎的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后以及與藥物療效有關(guān)，并證明定量 PCR 是鑒別 HBV 感染各期的良好工具。該技術(shù)能有效地確定血清 HBeAg 轉(zhuǎn)陰和非活動(dòng)性攜帶者病人的 HBV DNA 水平，而常規(guī)雜交法則對(duì)這些低病毒血癥的 HBV DNA 探測(cè)不到。在抗病毒治療中，通過(guò)定量 PCR 檢測(cè) HBV 的載量，來(lái)觀察拉咪呋啶及多種聯(lián)合用藥治療慢性乙型肝炎的療效具有指導(dǎo)意義。

PCR 對(duì)某些傳染性疾病疫苗接種后感染的鑒別也是極為重要的。例如：腮腺炎病毒疫苗接種后感染的病例時(shí)有發(fā)生，是疫苗引起的還是野生型腮腺炎病毒引起的，這就需要一種行之有效的方法來(lái)進(jìn)行鑒別，以往的血清學(xué)、病毒培養(yǎng)及探針雜交等方法都很難做到。

過(guò)去，對(duì)結(jié)核病等其他分支桿菌病的診斷方法雖然很多，但均不夠理想。簡(jiǎn)便易行的方法經(jīng)常查不到抗酸桿菌，也無(wú)法鑒別結(jié)核桿菌與其他分支桿菌。用分支桿菌培養(yǎng)的方法且陽(yáng)性率較低又耗時(shí)，而麻風(fēng)桿菌在體外又不能培養(yǎng)，主要靠感染組織的涂片或切片鏡檢。其他方法，如血清學(xué)、氣相色譜等方法的敏感性及特異性都不夠理想，PCR 技術(shù)的運(yùn)用使上述問(wèn)題得到了解決。還有 PCR 技術(shù)在技術(shù)性病監(jiān)控和性病病原體的檢測(cè)方面也正在擴(kuò)大，并列為監(jiān)控手段和作為檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。

5.PCR 技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用中的問(wèn)題 5.1 假陽(yáng)性

通常 PCR 在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用中所面臨的問(wèn)題之一是擴(kuò)增產(chǎn)物污染帶來(lái)的假陽(yáng)性，而實(shí)驗(yàn)室污染又是假陽(yáng)性的主要因素。只要實(shí)驗(yàn)室被擴(kuò)增產(chǎn)物污染，擴(kuò)增片段隨時(shí)都可能污染新的樣本并又被同一 PCR 反應(yīng)體系擴(kuò)增出來(lái)而產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的根本措施就是在封閉狀態(tài)下進(jìn)行擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。近年發(fā)展了一種熒光定量 PCR 技術(shù)，從根本上解決了 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物污染和不能定量的問(wèn)題。該技術(shù)把基因擴(kuò)增 PCR、分子雜交和光化學(xué)融為一體，實(shí)現(xiàn)了對(duì) PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行全過(guò)程的封閉，并進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)和自動(dòng)分析結(jié)果，進(jìn)一步提高了其特異性。由于造成假陽(yáng)性的因素相對(duì)單一，因此假陽(yáng)性并不是困惑檢驗(yàn)工作的主要原因。

5.2 假陰性

PCR 假陰性的原因相對(duì)較為復(fù)雜，主要包括有儀器設(shè)備的質(zhì)量、試劑開殼劑和操作問(wèn)題、PCR 產(chǎn)物的電泳檢測(cè)時(shí)間及有關(guān) PCR 反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)等。PCR 儀本身的質(zhì)量問(wèn)題能使擴(kuò)增效率下降或造成非特異性擴(kuò)增而出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性。離心機(jī)的質(zhì)量問(wèn)題或使用不正確，可造成離心標(biāo)本模板不能分離而產(chǎn)生假陰性。試劑開殼劑和操作問(wèn)題造成標(biāo)本 DNA 沒(méi)有暴露出來(lái)，致使擴(kuò)增無(wú)法進(jìn)行而導(dǎo)致假陰性。PCR 產(chǎn)物的電泳檢測(cè)時(shí)間一般為 48h 以內(nèi)，大于 48h 后帶型不規(guī)則甚致消失不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶而程現(xiàn)假陰性。PCR 反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有模板核酸的制備、引物的質(zhì)量與特異性、酶的質(zhì)量及 PCR 循環(huán)條件等，在這些環(huán)節(jié)中操作不當(dāng)都可引起假陰性。另外，Mg 2+ 濃度和物理因素變性等對(duì) PCR 擴(kuò)增效率影響也很大。Mg 2+ 濃度過(guò)高可降低 PCR 擴(kuò)增的特異性，濃度過(guò)低則影響 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)量。而變性溫度低，變性時(shí)間短，極有可能出現(xiàn)假陰性；退火溫度過(guò)低，可致非特異性擴(kuò)增而降低異性擴(kuò)增效率；退火溫度過(guò)高，影響引物與模板的結(jié)合而降低 PCR 擴(kuò)增效率，最終都可導(dǎo)致 PCR 擴(kuò)增失敗。還有靶序列變異使引物與模板失去互補(bǔ)序列，其 PCR 擴(kuò)增也不會(huì)成功。

6.PCR 技術(shù)的應(yīng)用前景 自從 PCR 技術(shù)誕生以來(lái)，隨著其深入不斷的發(fā)展與完善，許多與其相關(guān)的新類型及改良的新方法在不斷的涌現(xiàn)，這些派生出的新類型和新方法解決了以往傳統(tǒng) PCR 的瓶頸問(wèn)題。雖然，PCR 可對(duì)基因分析直接檢測(cè)用于臨床進(jìn)行診斷，但大部分基因突變還是難以直接檢測(cè)。近年來(lái)，分子診斷技術(shù)最大突破就是集擴(kuò)增、檢測(cè)和靶定量于一體的實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)的問(wèn)世。該技術(shù)的出現(xiàn)，對(duì)基因檢測(cè)和基因分型的應(yīng)用范圍將進(jìn)一步擴(kuò)大，為 PCR 的臨床應(yīng)用帶來(lái)曙光。因此，PCR 技術(shù)將有極大的發(fā)展空間和廣泛的應(yīng)用前景，它將對(duì)腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)和基因治療等進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用起著積極重要的作用。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中，PCR 的應(yīng)用將更加廣泛和深入。相信在不久的將來(lái)，隨著 PCR 技術(shù)的更進(jìn)一步完善，它將作為常規(guī)檢驗(yàn)方法進(jìn)行全面普及，發(fā)揮更大的作用，為全人類健康做出更大的貢獻(xiàn)。

參考文獻(xiàn)

1.楊道理 , 王寶成主編.DNA 擴(kuò)增技術(shù)與醫(yī)學(xué)應(yīng)用.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社.1992,51-54,283,396.2.郭永軍.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在腫瘤研究中的應(yīng)用.國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤分冊(cè).1991,18(1):1-3.3.陳志杰主編.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)新技術(shù).濟(jì)南 : 山東科學(xué)技術(shù)出版社.1993 ： 544.4.陳意生 , 史景泉主編.腫瘤分子細(xì)胞生物學(xué).北京：人民軍醫(yī)出版社.2002 ： 190-192,270,287-288.5.楊占秋 , 劉建軍 , 肖紅 , 等主編.診斷與實(shí)驗(yàn)病毒學(xué).鄭州 : 鄭州大學(xué)出版社.2002:167-169.6.T.D.蓋萊哈特 , F.S.柯林斯 , D.金斯伯格主編.孫開來(lái)主譯.醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)原理.北京 : 科學(xué)出版社.2001:92-116.7.Enns RK, Bromley SE, Day SP, et al.Molecular diagnostic methods for infectious diseases;approved guideline.Natl Commit Clin Lab Stand, 1995:1-10.8.Neumaier M, Braun A, Wagener C.Fundamentals of quiality assessment of molecular amplification methods in clinical diagnostics(IFCC document).Clin Chem, 1998,44:12-26.9.王俊茹 , 鄧國(guó)仁 , 劉為俊.ras 基因突變與人類腫瘤.癌癥.1993,12(1):82-83.10.盧圣棟主編.生物技術(shù)與疾病診斷——兼論人類基因治療.北京：化學(xué)工業(yè)出版社.2002 ： 83-98,117,142.11.顧健人 , 曹雪濤 , 主編.基因治療.北京：科學(xué)出版社.2001:120-121.12.May Wong, Jack Gruber.Viral Interactions with the P53 Gene in Human Cancer.Journal of the National Cancer Institute, 1994,86(3):177.13.李貸宗 , 曹宇清 , 何麗萍 , 等.人原發(fā)性肝癌 P53 基因缺失和突變.腫瘤.1991,11(5):195.14.陳竺 , 強(qiáng)伯勤 , 方福德主編.基因組科學(xué)與人類疾病.北京：科學(xué)出版社.2001 ： 176.15.Tang YW, Procop GW.Persing DH.Molecular diagnostics of infectious diseases.Clin Chem.1997,43:2021-2038.

第三篇：在分子生物學(xué)博士與地理信息學(xué)博士婚禮上的致辭(原創(chuàng))

在分子生物學(xué)博士與地理信息學(xué)博士婚禮上的致辭

尊敬的各位領(lǐng)導(dǎo)、各位來(lái)賓，女士們、先生們：

大家中午好！歡迎各位親朋好友參加李海峰先生、王慧敏小姐的婚禮，受新娘父母的委托，由我擔(dān)任本場(chǎng)婚禮的司儀。

首先，我們?yōu)檫@一對(duì)新人的結(jié)合感到由衷的驕傲，大家知道：新郎李海峰先生是武漢大學(xué)的博士研究生，目前在廣州無(wú)限極博士后流動(dòng)站從事研究工作；新娘王慧敏小姐是中國(guó)地質(zhì)大學(xué)的碩士研究生，目前在武漢大學(xué)攻讀博士學(xué)位。在座的親朋好友當(dāng)中，也有很多碩士、博士研究生，可以毫不夸張的說(shuō)，兩位是江漢假日酒店開業(yè)以來(lái)學(xué)歷最高的一對(duì)新人，大家的到來(lái)使這里蓬蓽生輝，華堂添彩。

其次，我們這一對(duì)新人的結(jié)合可以說(shuō)是佳偶天成，大家知道：新郎李海峰先生所研究的專業(yè)為分子生物學(xué)（molecular biology science），基于微觀的角度，從研究分子的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)而闡明生命現(xiàn)象的本質(zhì)；新娘王慧敏小姐所研究的專業(yè)為地理信息系統(tǒng)（geographic information system），基于宏觀的角度，運(yùn)用信息技術(shù)和數(shù)據(jù)分析的方法研究國(guó)家地理。一個(gè)是微觀世界的分子，一個(gè)是宏觀世界的地理，大家說(shuō)這樣的結(jié)合是不是一種絕配！

最后，為我們今天這一對(duì)新人的結(jié)合送上希望和祝福：

一是希望你們孝順父母、尊重師長(zhǎng)、關(guān)愛(ài)他人，運(yùn)用作用力與反作用力的原理，用等量的愛(ài)回報(bào)父母師長(zhǎng)對(duì)你們的饋贈(zèng)；遵循能量守恒的原則，將大家的給予化成愛(ài)的分子，回報(bào)社會(huì)。

二是希望你們處理好學(xué)業(yè)、工作和生活的關(guān)系，對(duì)于你們而言學(xué)業(yè)和工作就像是銀河系，而日常生活像是太陽(yáng)系，當(dāng)太陽(yáng)系在銀河系中運(yùn)轉(zhuǎn)的時(shí)候，它自身的運(yùn)轉(zhuǎn)也一刻沒(méi)有停歇，所以不要為了科學(xué)研究而忘卻生活。

三是希望你們正確對(duì)待愛(ài)情和婚姻的轉(zhuǎn)變，愛(ài)因斯坦的關(guān)于相對(duì)論曾經(jīng)有一個(gè)注明的論斷，“到底是雞過(guò)馬路，還是馬路過(guò)雞，這取決于你的參考坐標(biāo)。”其實(shí)，他想說(shuō)的是，很多事情其實(shí)都不是非得分出一個(gè)對(duì)錯(cuò)，這也許就是婚姻的真諦。

最后，我還要由衷地祝福兩位新人！愿你們的愛(ài)情充滿正能量，在今后的生活中不斷地發(fā)光、發(fā)熱。同時(shí)也衷心地祝福各位來(lái)賓，愿大家萬(wàn)事如意，幸福安康！

第四篇：協(xié)和醫(yī)科大學(xué)2004年分子生物學(xué)(博士入學(xué)考試試題 回憶版)

協(xié)和醫(yī)科大學(xué)2004年分子生物學(xué)（博士）

1.名解:

同工酶 染色體 染色質(zhì) 核基質(zhì) 轉(zhuǎn)化 密碼子的偏嗜性 基因簇

2.簡(jiǎn)答

為什么核酸和蛋白都是有方向的?

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的cAMP通路

什么是內(nèi)切酶的星號(hào)活性

3.判斷對(duì)錯(cuò),說(shuō)明理由

關(guān)于乳糖操縱子的4.論述

給定一個(gè)cDNA序列,如何表達(dá),純化到蛋白質(zhì)

5.填空

協(xié)和生化的老主任是誰(shuí)(這道題好變態(tài))

誰(shuí)用什么實(shí)驗(yàn)證明了核酸是遺傳物質(zhì)

可以磷酸化的氨基酸是哪三個(gè)

帶苯環(huán)的氨基酸是哪三個(gè)

DNA在多少nm有最大的光吸收,為什么?

第五篇：分子生物學(xué)

分子生物技術(shù)在微生物鑒定中的應(yīng)用

摘要：微生物多樣性是生物多樣性的重要組成部分。由于微生物和 動(dòng)、植物 相比, 存在著多種顯著差異。而傳統(tǒng)的基于微生物培養(yǎng)與純種分離的技術(shù)具有很大的局限性，分子生物學(xué)及其有關(guān)技術(shù)的長(zhǎng)足進(jìn)展及其在為生物中的使用, 使微生物的研究進(jìn)入了分子的階段。

關(guān)鍵詞：16SrDNA PCR 溫度梯度電泳 變性梯度凝膠電泳 微生物包括了從原核到真核的不同類群的生物: 細(xì)菌、放線菌、原生動(dòng)物、真菌、部分藻類和病毒, 是生物多樣性的重要組成部分。此外, 微生物多樣性與其他生物類群相比有許多獨(dú)特之處, 包括: 1)生存環(huán)境多樣;2)生長(zhǎng)、繁殖速度多樣;3)營(yíng)養(yǎng)、代謝類型多樣;4)生活方式多樣。因而, 微生物多樣性的研究無(wú)論對(duì)于生態(tài)系統(tǒng)功能的完整理解, 還是對(duì)于微生物資源的利用和開發(fā)都具有特殊重要的意義[1]。微生物作為生態(tài)系統(tǒng)中極重要的一員, 對(duì)動(dòng)植物的生長(zhǎng)，生態(tài)系統(tǒng)中的能流和物質(zhì)循環(huán)及環(huán)境污染物的降解和解毒等方面起著重要作用并且與人的生活健康息息相關(guān)。隨著微生物的不斷發(fā)現(xiàn)及研究，傳統(tǒng)微生物技術(shù)越來(lái)越不能滿足其發(fā)展的需要，最主要的不足是丟失了微生物的多樣性, 許多報(bào)道都指出, 在自然環(huán)境中有相當(dāng)多的菌種(約90%-99%)用傳統(tǒng)方法無(wú)法培養(yǎng)出來(lái)[2].這對(duì)于微生物基因組學(xué)研究來(lái)說(shuō)是很不利的.，導(dǎo)致研究的片面性并且效率低下。而分子生物學(xué)技術(shù)則避開了傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)分離的環(huán)節(jié), 而是采取直接從樣品中抽取所含微生物總DNA, 然后通過(guò)16S rDNA, PCR, RAPD, DGGE

和RFLP 等多種分子生物學(xué)研究手段, 對(duì)直接提取的總DNA進(jìn)行分析, 了解其中所包含的微生物DNA 的種類和含量, 以研究樣品中微生物的實(shí)際組成, 同時(shí)可以利用直接提取得到的總DNA 建立基因文庫(kù), 并從中篩選有用的基因。由于是直接從樣品中提取總DNA, 中間沒(méi)有任何篩選性的過(guò)程, 因此, 所得DNA 能夠準(zhǔn)確地反映樣品中微生物的實(shí)際情況, 避免了傳統(tǒng)培養(yǎng)方法不能真實(shí)反映微生態(tài)實(shí)際情況的缺點(diǎn), 也不會(huì)丟失樣品中存在的任何微生物,同時(shí), 這種方法能夠很容易、大批量地取得同一環(huán)境下乃至不同環(huán)境下的不同微生物的同源基因, 為微生物比較基因組學(xué)研究開辟了道路.此外, 用直接提取的總DNA 構(gòu)建的基因文庫(kù), 包含了大量以前因?yàn)闊o(wú)法培養(yǎng)而不能獲得的微生物基因, 從這些文庫(kù)中發(fā)現(xiàn)全新的具有巨大應(yīng)用價(jià)值的抗生素類、酶類及其他生物活性物質(zhì)的基因應(yīng)該是非常有潛力的。1．16SrRNA比較測(cè)序

16SrDNA是編碼原核生物16SrRNA的基因，長(zhǎng)度約1500bp，存在于所有的原核生物的基因組中，由多個(gè)保守區(qū)和與之相間的多個(gè)可變區(qū)組成。保守區(qū)為所有細(xì)菌共有，細(xì)菌之間無(wú)顯著差異；可變區(qū)在不同細(xì)菌之間存在一定程度的差異，具有細(xì)菌屬或種特異[3]。2.PCR近年來(lái),對(duì)環(huán)境樣品總DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增, 推動(dòng)了利用分子標(biāo)記技術(shù)研究微生物的多樣性。PCR技術(shù)是美國(guó)letus公司人類遺傳研究室的科學(xué)家與1983年發(fā)明的一種在體外快速擴(kuò)增特異基因或DNA 序列的方法, 其目的是將極微量DNA大量擴(kuò)增。該技術(shù)模仿生物體內(nèi)DNA 的復(fù)制過(guò)程,首先使DNA 變性, 兩條鏈解開;然后使引物模板退火, 二者堿基配對(duì);耐高溫的Taq DNA 聚合酶以4種dNTP為底物, 在引物的引導(dǎo)下合成與模板鏈互補(bǔ)的DNA 新鏈[4]。PCR 技術(shù)可在體外快速擴(kuò)增DNA, 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高的特點(diǎn)。當(dāng)然常規(guī) PCR技術(shù)也存在很多的問(wèn)題，如出現(xiàn)假陽(yáng)性、形成引物二聚體、傳統(tǒng)的PCR技術(shù)一次擴(kuò)增只能檢測(cè)一種微生物、RNA病毒的PCR檢測(cè)操作繁瑣，中間污染環(huán)節(jié)多，易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果等.為了彌補(bǔ)上面這些不足，一些新的PCR技術(shù)逐漸衍生出來(lái)并被用于實(shí)踐，如熱啟動(dòng)PCR、巢式PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR、多重PCR、通用引物PCR、PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、隨機(jī)引物DNA 多態(tài)性擴(kuò)增（RAPD）、限制性長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）、實(shí)時(shí)熒光PCR（real-time PCR）等[5]。3.電泳分離及其顯示方法

除過(guò)我們熟知的瓊脂糖凝膠電泳并用溴乙錠(EB)染色方法和聚丙烯酰氨凝膠電泳(PAGE 分離)銀染方法外, 還有一些通過(guò)特殊的電泳分離技術(shù)而建立的分子標(biāo)記, 如變性梯度凝膠電泳(DGGE), 可分離長(zhǎng)度相同但是序列不同的DNA 片段的混合物。對(duì)于特異性引物PCR 擴(kuò)增的環(huán)境微生物的16SrRNA 基因, 一般的電泳很難將序列不同的片段分開。DGGE膠在聚丙烯酰氨膠中添加了線性梯度的變性劑, 可以形成從低到高的線性梯度, 在一定溫度下, 同一濃度的變性劑中, 不同序列的產(chǎn)物，其部分解鏈程度不同。DNA 解鏈程度不同決定其電泳的遷移率, 結(jié)果不同的產(chǎn)物在凝膠上分離開。在變性條件適當(dāng)?shù)那闆r下, 該技術(shù)能分辨一個(gè)堿基對(duì)。DGGE 技術(shù)在微生物群落結(jié)構(gòu) 的研究、微生物種群的動(dòng)態(tài)分析、富集培養(yǎng)以及分離物的分析、16SDNA 同源性的分析中得到廣泛應(yīng)用[6]。

溫度梯度電泳(TGGE)是利用不同構(gòu)象的分子具有不同的變 性溫度來(lái)進(jìn)行分離, 最先應(yīng)用于DNA /RNA 的分子構(gòu)象分析和序列變異分析, 是一種新出現(xiàn)的檢測(cè)點(diǎn)突變的電泳技術(shù), 其最大特點(diǎn)上具有高分辨能力。單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)也是根據(jù)不同的結(jié)構(gòu)對(duì)DNA在凝膠中遷移速率影響很大, 結(jié)果不同序列的DNA 片段在凝膠上得以高分辨率的分離?；蛐酒煞譃閏DNA 芯片、寡核苷酸芯片及基因組芯片。在一定條件下, 載體上的核酸分子可以與來(lái)自樣品的序列互補(bǔ)的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進(jìn)行標(biāo)記, 在專用的芯片閱讀儀上就可以檢測(cè)到雜交信號(hào)[7]。

分子生物學(xué)技術(shù)在環(huán)境微生物研究中的應(yīng)用中rRNA 技術(shù)提供了一種擺脫傳統(tǒng)的純種培養(yǎng)方法而鑒定環(huán)境微生的途徑,并已被廣泛應(yīng)用于微生物的各個(gè)領(lǐng)域。雖然當(dāng)前,標(biāo)準(zhǔn)rRNA 技術(shù)的靈敏度還難以檢測(cè)到低豐度的(低于1/ 1 000)在群落中僅占很小比例的微生物種類, 從而使之在微生物生態(tài)以及環(huán)境學(xué)上的應(yīng)用受到很大的限制。然而, rRNA 技術(shù)與其它的分子技術(shù)以及特別是與傳統(tǒng)的純種培養(yǎng)方法相結(jié)合, 具備分析微生物多樣性的巨大潛力。隨著這些新的分子方法的不斷改進(jìn)以及rRNA 數(shù)據(jù)庫(kù)中序列信息的不斷增加, 我們能探知更多的未知的微生物世界。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊永華，姚健.分子生物學(xué)方法在微生物多樣性研究中的應(yīng)用[J].生物多樣性，2000 8(3):337-342.[2]李 紅,周友兵,陳炳耀,胡錦矗.分子生物學(xué)技術(shù)在微生物多樣性研究中的應(yīng)用[J].河北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然版),2003 12(23).[3]朱詩(shī)應(yīng)，戚中田.１６ＳｒＤＮＡ擴(kuò)增及測(cè)序在細(xì)菌鑒定與分類中的應(yīng)用[J].微生物與感染,2013 8(2):104-109.[4，7] 高小朋, 張欠欠, 任桂梅.分子生物學(xué)技術(shù)在環(huán)境微生物研究中的應(yīng)用[J].延安大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008 9(27)：27-45.[5] 路則寶，白現(xiàn)廣。分子生物學(xué)技術(shù)在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].紅河學(xué)院學(xué)報(bào)，2013 4（1）38-46.[6]雷正瑜.16RsDNA序列分析技術(shù)在微生物鑒定中的應(yīng)用[J].湖北生態(tài)工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006 1（4）：35-45.