第一篇：分子生物學(xué)總結(jié)

SectionA 1 三個(gè)域：真細(xì)菌，古細(xì)菌，真核生物 2 組裝中的主要作用力：非共價(jià)健作用力

SectionB 1 蛋白質(zhì)純化的分析方法

正電荷：天冬氨酸 谷氨酸

負(fù)電荷：賴氨酸 精氨酸

組氨酸

極性：天冬酰胺 谷氨酰胺

蘇氨酸 絲氨酸 半胱氨酸

非極性：脂肪族 甘氨酸 丙氨酸 纈氨酸 亮氨酸

異亮氨酸 甲硫氨酸 脯氨酸

芳香族 苯丙氨酸

酪氨酸 色氨酸 Cys 二硫鍵 Gly 無手性 Pro 亞氨基酸

芳香族氨基酸最大吸收峰280mm 3 蛋白質(zhì)的一級(jí)(決定蛋白折疊及其最后的形狀的最重要的因素)：氨基酸脫水縮合形成肽鏈 N端到C端

共價(jià)鍵

二級(jí)：多肽鏈中空間結(jié)構(gòu)鄰近的肽鏈骨架通過氫鍵形成的特殊結(jié)構(gòu)。

α轉(zhuǎn)角

β螺旋 氫鍵為主要作用力

三級(jí)： 多肽鏈中的所有二級(jí)結(jié)構(gòu)和其他松散肽鏈區(qū)域（散環(huán)結(jié)構(gòu)）通過各種分子間作用力（非共價(jià)鍵為主），彎曲、折疊成具有特定走向的緊密球狀構(gòu)象。

非共價(jià)鍵

四級(jí)： 許多蛋白分子由多條多肽鏈（亞基，subunits）構(gòu)成。組成蛋白的各亞基以各種非共價(jià)鍵作用力為主，結(jié)合形成的立體空間結(jié)構(gòu)即為四級(jí)結(jié)構(gòu)。非共價(jià)鍵 偶極：電子云在極性共價(jià)鍵的兩原子間不均勻分布，使共價(jià)鍵兩端的原子分別呈現(xiàn)不同的電性

兼性離子：具有正電荷（堿性），又具有負(fù)電荷（酸性）的分子 雙極性分子：

Section C 1核酸的光學(xué)特性：

增色性：一種化合物隨著結(jié)構(gòu)的改變對(duì)光的吸收能力增加的現(xiàn)象 減色性：一種化合物隨著結(jié)構(gòu)的改變對(duì)光的吸收能力減少的現(xiàn)象 Reason: 堿基環(huán)暴露在環(huán)境中的越多，對(duì)紫外的吸收力越強(qiáng) Absorbance（吸收值）：Nucleotide > ssDNA/RNA > dsDNA 核酸的最大吸收峰260mm(堿基有芳香環(huán))芳香族氨基酸最大吸收峰280mm A260/A280:

純的 dsDNA：1.8 純的 RNA：2.0 純的 Protein：0.5 2 Tm 值（熔解溫度）：熱變性時(shí)，使得DNA雙鏈解開一半所需要的溫度。

Tm=2x(A+T)+ 4x(G+C)

Tm值與DNA分子的長度，及GC的含量成正比

Annealing（退火）:熱變性的DNA經(jīng)過緩慢冷卻后復(fù)性

快速冷卻： Stay as ssDNA

緩慢冷卻: 復(fù)性成dsDNA 3 脫氧核糖核酸與核糖核苷酸得到畫法 支持雙螺旋結(jié)構(gòu)的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)：查戈夫規(guī)則

X射線晶體衍射 5 雙螺旋的內(nèi)容：

雙鏈之間的關(guān)系：DNA分子由兩條鏈組成

雙鏈反向平行(5’?3’ 方向)

兩鏈的堿基通過氫鍵互補(bǔ)配對(duì)，A:T;G:C。

雙鏈序列反向互補(bǔ)

各基團(tuán)排列方式：糖-磷酸骨架DNA分子排列在外;

堿基對(duì)平面相互平行，排列在DNA分子的內(nèi)部?？臻g結(jié)構(gòu)為：右手雙螺旋結(jié)構(gòu)

每轉(zhuǎn)一圈~10個(gè)堿基對(duì)，每一圈長度33.2A

雙鏈螺旋中形成大溝，小溝。堿對(duì)DNA的影響：高pH值對(duì)DNA的影響比低pH值的要小。

高 pH 值(pH>11)會(huì)改變堿基構(gòu)象，使DNA變性（雙鏈解旋，成單鏈）

RNA的影響：高pH值，2’羥基會(huì)攻擊磷酸二酯鍵，使其斷裂，形成2’，3’-環(huán)式磷酸二酯鍵，從而使RNA分子斷裂 共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(convalently closed circular DNA, cccDNA）。即通過共價(jià)鍵結(jié)合形成的封閉環(huán)狀DNA分子。超螺旋DNA（Supercoil DNA）:松弛型雙鏈DNA進(jìn)一步旋轉(zhuǎn)后，再形成閉環(huán)結(jié)構(gòu)時(shí)，就會(huì)形成DNA超螺旋結(jié)構(gòu)

L=T+W 判斷是否為超螺旋 正負(fù)超螺旋 拓?fù)洚悩?gòu)酶：暫時(shí)斷裂DNA分子中一條或兩條單鏈上的磷酸二酯鍵，改變DNA分子的連接數(shù)及拓?fù)錉顟B(tài)。

功能：消除DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄等過程產(chǎn)生的超螺旋。

細(xì)胞中，Ⅰ型酶與Ⅱ型酶的活性保持一種平衡狀態(tài)。Ⅱ型酶的“使DNA超螺旋化” 與Ⅰ型酶“使DNA松馳化” 相抗衡，從而使DNA保持適當(dāng)?shù)某菪芏?。EB: 嵌入DNA配對(duì)堿基之間，使DNA分子在嵌入處局部解旋，增加ccDNA其它部位的正超螺旋 Type II RE

二型限制性內(nèi)切酶:識(shí)別位點(diǎn)一般為４～8個(gè)堿基對(duì)的回文序列

如：EcoRI

5’-GAATTC-3’

3’-CTTAAG-5

Section D 1 染色體的折疊：串珠結(jié)構(gòu) ：核心組蛋白:H2A, H2B, H3 and H4.連接組蛋白 H1

核小體

30nm纖絲

高級(jí)環(huán)狀結(jié)構(gòu)（染色質(zhì)的最高結(jié)構(gòu)）

緊密纏繞結(jié)構(gòu) 著絲粒：兩側(cè)是大量的名叫衛(wèi)星DNA的重復(fù)序列

端粒：上百個(gè)短的重復(fù)序列

作用：端粒DNA 形成特殊的環(huán)狀二級(jí)結(jié)構(gòu)，保護(hù)染色體末端不被核酸外切酶降解。

抵消DNA復(fù)制時(shí)每一輪復(fù)制都導(dǎo)致兩末端形成的后隨鏈比母鏈要短一截的現(xiàn)象對(duì)染色體的影響 異染色質(zhì)：高度濃縮，無轉(zhuǎn)錄活性

常染色質(zhì)：結(jié)構(gòu)松散，有轉(zhuǎn)錄活性

DNaseI 敏感區(qū)域：對(duì)區(qū)域內(nèi)DNA的轉(zhuǎn)錄活躍

串珠結(jié)構(gòu)

DNaseI 超敏感區(qū)域：轉(zhuǎn)錄活躍的基因的調(diào)控區(qū)域

DNA裸露 4 原核染色體結(jié)構(gòu)：非特異性DNA結(jié)合蛋白：類組蛋白

位點(diǎn)特異性DNA結(jié)合蛋白：與特殊的DNA序列結(jié)合

有其他特殊的生理功能：RNA polymerases

對(duì)結(jié)構(gòu)域的形成也很重要

復(fù)性動(dòng)力曲線：

Low C0t: 高重復(fù) 衛(wèi)星DNA Moderate C0t : 中重復(fù) 串聯(lián)基因簇

反轉(zhuǎn)座子 High C0t :單拷貝或低重復(fù)

大腸桿菌基因組 染色體結(jié)構(gòu)對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的影響

CpG 抑制→CpG位點(diǎn)中的胞嘧啶的C-5常發(fā)生甲基化(CpG甲基化），CpG 甲基化可能可以DNA轉(zhuǎn)錄被限制→哺乳動(dòng)物基因組中，有些區(qū)域含有很多未甲基化的CpG 位點(diǎn)，被稱為CpG 孤島。

甲基化—轉(zhuǎn)錄抑制

去甲基化—恢復(fù)轉(zhuǎn)錄

組蛋白的乙?；汉诵慕M蛋白N-端的Lys被乙?；?，DNA與核心組蛋白體解聚。Gene 表達(dá)被激活

去乙酰化：抑制 gene表達(dá)

組蛋白的磷酸化:對(duì)組蛋白 H1 磷酸化，抑制基因表達(dá) 其他組蛋白中心法則

Section E 1 DNA復(fù)制：細(xì)胞中，一條雙鏈DNA分子通過堿基配對(duì)，形成兩條與其序列相同的DNA雙鏈分子的過程。2

確定DNA半保留復(fù)制

半不連續(xù)復(fù)制 3 復(fù)制的基本步驟 復(fù)制為雙向

大腸桿菌的復(fù)制：

起始AT含量高的區(qū)域

參與蛋白：DnaA（復(fù)制起始因子)：識(shí)別并結(jié)合于重復(fù)序列上，驅(qū)使富含AT的重復(fù)序列解鏈，需負(fù)超螺旋，及ATP

DnaB(DNA解旋酶):DNA雙鏈解旋，形成復(fù)制叉

SSB:(單鏈結(jié)合蛋白):保持解旋部分的單鏈狀態(tài)

DnaG(引發(fā)酶/引物酶):RNA引物合成，引發(fā)復(fù)制 延伸

參與蛋白：DNA Pol III全酶：負(fù)責(zé)新鏈的合成:前導(dǎo)鏈，岡崎片段

DNA pol

I：復(fù)制中除去引物，填補(bǔ)引物處空缺

終止： 真核生物的復(fù)制：

一個(gè)細(xì)胞周期內(nèi)，一個(gè)DNA分子只能復(fù)制一次

Section F 1 復(fù)制忠實(shí)性的機(jī)制：

DNA復(fù)制的高精度：模板連和進(jìn)入核苷酸在DNA聚合酶的作用位點(diǎn)正確配對(duì)

3’到5’外切核酸酶對(duì)錯(cuò)誤堿基的校正

錯(cuò)配修復(fù) 2 holiday模型 3

Section K 編碼鏈 模板鏈 2 大腸桿菌的轉(zhuǎn)錄

RNAP酶：核心酶：a 亞基：aNTD對(duì)核心酶的組裝很重要。

aCTD在識(shí)別啟動(dòng)子、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平中起著非常重要的作用。

b 亞基：RNAP的催化中心。

與模板DNA、RNA產(chǎn)物、及底物核糖核苷酸緊密結(jié)合。

抗生素利福平結(jié)合在在b 亞基上，可以抑制RNAP的轉(zhuǎn)錄活性。

利福平只抑制轉(zhuǎn)錄的起始。

利迪鏈菌素只抑制延伸而不抑制轉(zhuǎn)錄起始

b’ 亞基：可能與RNAP的催化有關(guān)。

肝素與b’亞基結(jié)合后，能干擾RNAP與DNA的結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄。

w 亞基：可能與RNAP的組裝及維持RNAP結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有關(guān)

s factor(s因子)：s factor 在啟動(dòng)子特異性識(shí)別過程中至關(guān)重要 移動(dòng)慢的原因：可以保持與翻譯同步。

與有些基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)。

有利于轉(zhuǎn)錄終止

RNAP沒有3’ →5’外切酶活性，不能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄校正。其錯(cuò)配率達(dá)10-4。RNAP倒退暴露新合成的錯(cuò)配堿基，可以有利于其他輔助核酸酶將錯(cuò)配堿基切除，增加轉(zhuǎn)錄的忠實(shí)性。s70基礎(chǔ)啟動(dòng)子的一般結(jié)構(gòu)

-10 序列：它對(duì)轉(zhuǎn)錄起始時(shí)，RNAP打開DNA雙鏈的過程非常重要。-

10序列到TSS位點(diǎn)的距離對(duì)轉(zhuǎn)錄效率也有很大的影響-35 序列：增強(qiáng)RNAP s factor 的識(shí)別能力及與DNA的結(jié)合能力 4 影響啟動(dòng)子效率的DNA序列：

核心啟動(dòng)子的序列：與保守序列越像，效率越高。

TSS周圍序列：影響起始效率。

轉(zhuǎn)錄單位的前30個(gè)核苷酸的堿基序列：影響RNAP從啟動(dòng)子處移動(dòng)出去（啟動(dòng)子區(qū)清空）的速率。

核心啟動(dòng)子附近的調(diào)控元件。轉(zhuǎn)錄的起始：開放復(fù)合物 閉合復(fù)合物 無效起始

延伸：?jiǎn)?dòng)子的清空，鏈的延伸轉(zhuǎn)錄泡，s因子的循環(huán)利用

終止：依賴性 不依賴性

反復(fù)重復(fù)序列

Section L 1.順式作用元件（cis-acting elements）：一般為DNA上較為保守的、有著特異性序列或結(jié)構(gòu)的特定區(qū)域。它們只能影響與其在同一條染色體上的基因的活動(dòng)。如：?jiǎn)?dòng)子，轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)合位點(diǎn)等。

反式作用基因/調(diào)節(jié)基因（trans-acting genes，regulator genes）

可以影響與他們不在同一條染色體上的基因的表達(dá)水平的DNA元件。2 乳糖操縱子 色氨酸操縱子 正負(fù)調(diào)控都可以有誘導(dǎo)和阻遏兩種調(diào)控方式。

正控誘導(dǎo)：誘導(dǎo)因子活化激活因子，使其可以增加基因的表達(dá)。（Lac operon，CRP調(diào)控）正控阻遏：共阻遏物使激活因子失活，減少基因的表達(dá)。負(fù)控誘導(dǎo)：誘導(dǎo)因子使阻遏蛋白失活，增加基因的表達(dá)。（Lac operon，lac repressor）負(fù)控阻遏:共阻遏物活化阻遏蛋白，使其可以降低基因的表達(dá)。（Trp operon，trp repressor）

Section M 增強(qiáng)子 沉默子 TFIID：可與多種核心啟動(dòng)子元件或特異性轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，啟動(dòng)二類轉(zhuǎn)錄預(yù)起始復(fù)合物組裝的通用轉(zhuǎn)錄因子。

TBP(TATA-box binding protein):可識(shí)別并結(jié)合TATA-box TAFII（TBP-associated factor II）：TBP關(guān)聯(lián)蛋白，TFIID中與TBP形成復(fù)合體的所有蛋白，～13個(gè)。

TFII H的結(jié)構(gòu)與功能：蛋白激酶(4 個(gè)亞基)：催化蛋白磷酸化。將NTP（一般為ATP）的g-磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到蛋白上。

磷酸化 RNA pol II 中的CTD 結(jié)構(gòu)域。TFIIE 刺激TFIIH介導(dǎo)的磷酸化反應(yīng)。DNA 解旋酶/ATPase(5 亞基)：

水解ATP，利用其能量打開DNA的雙鏈 TBP(TATA-binding protein): 確保 RNA Pol I能正確定位到轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域上。

SP1 為組成性表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，在所有的細(xì)胞中都存在，與基因本底表達(dá)水平有關(guān) SL1，選擇因子,RNA Pol I起始轉(zhuǎn)錄所必需的因子 CTD:羧基末端結(jié)構(gòu)域，的磷酸化狀態(tài)與轉(zhuǎn)錄進(jìn)程有關(guān)

轉(zhuǎn)錄起始時(shí)期，CTD結(jié)構(gòu)域一般處于去磷酸化形式，與結(jié)合啟動(dòng)子有關(guān)。

轉(zhuǎn)錄延伸時(shí)期，CTD結(jié)構(gòu)域常處于磷酸化形式，與mRNA的加工有關(guān)。

Section N 1 DNA-binding domains（DBD）:DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域

螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)（域）

鋅指結(jié)構(gòu)（域）

堿性結(jié)構(gòu)（域）

Dimerization domains：二聚體化結(jié)構(gòu)域

亮氨酸拉鏈 螺旋 散環(huán) 螺旋 DBD+DM 激活結(jié)構(gòu)域 酸性激活結(jié)構(gòu)域 富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域 富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域 LBD

Section O 真核生物中mRNA 加工的一般過程 5’加帽: CTD作用：轉(zhuǎn)錄起始時(shí)，參與加帽反應(yīng)的三種酶結(jié)合在RNA Pol II的CTD結(jié)構(gòu)域上。轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物剛開始合成時(shí)，即對(duì)其5’端進(jìn)行加帽反應(yīng)。

作用：防止降解：核糖核酸酶一般不能降解帽結(jié)構(gòu)中的三磷酸鍵

幫助轉(zhuǎn)運(yùn)mRNA到細(xì)胞質(zhì)中

增強(qiáng)翻譯水平：mRNA需要帽結(jié)合蛋白的幫助才能更好的與核糖體結(jié)合 幫助去除pre-mRNA中的第一個(gè)內(nèi)含子。3’加Poly(A)尾：

作用：防止被核酸酶降解：增加mRNA的穩(wěn)定性

有助于mRNA從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)

參與pre-mRNA的最后一個(gè)內(nèi)含子的剪接。

增強(qiáng)mRNA的翻譯水平，增加基因的表達(dá) 剪接 甲基化 2 核酶有：有催化功能的RNA即為核酶

U2 U6 RNAP 3 RNA的多樣性：可變加工，反式剪接，RNA編輯 原核生物核糖體

真核生物核糖體 原核rRNA 加工的大致過程：形成多個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，與蛋白結(jié)合形成RNP，核苷酸修飾，逐級(jí)切割

真核rRNA 加工的大致過程：甲基化，切割。內(nèi)含子剪接 原核tRNA 加工的大致過程:將多順反子前體切割，分離出單順反子前體

單順反子前體進(jìn)一步被切割，形成與成熟tRNA長度一致分子（RNases D, E, F，P

.堿基修飾，形成成熟tRNA 真核tRNA 加工的大致過程：5’-末端成熟，3’-末端成熟（添加5’-CCA-3’）去除內(nèi)含子 7 miRNA and siRNA的調(diào)控機(jī)制：mRNA降解，抑制翻譯，抑制轉(zhuǎn)錄

Section P 1 遺傳密碼的特性:

蛋白的編碼信息由三聯(lián)體密碼子組成。

密碼子為連續(xù)的，之間無間隔、無重疊。

除三個(gè)終止密碼子之外，每個(gè)密碼子對(duì)應(yīng)一種氨基酸

有密碼簡(jiǎn)并現(xiàn)象。即：多個(gè)密碼子對(duì)應(yīng)同一種氨基酸。

標(biāo)準(zhǔn)遺傳密碼子在各類生物中基本通用，不過少數(shù)生物體或細(xì)胞器中，有一些密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸與標(biāo)準(zhǔn)的不同。

生物對(duì)同義密碼子的使用經(jīng)常有偏好性。不同生物的密碼子偏好性不同。

基因一般不重疊。一段核酸分子一般只有一個(gè)開放閱讀框（open reading frame, ORF/可讀框），被翻譯成一個(gè)蛋白。

有些物種也有重疊基因的現(xiàn)象。開放閱讀框:ORF 從起始密碼子ATG 到終止密碼子

TGA,TAA or TAG 之間的連續(xù)的蛋白編碼序列

CDS 編碼序列 當(dāng)ORF可以預(yù)測(cè)一個(gè)蛋白時(shí) 3 tRNA 二級(jí)結(jié)構(gòu):三葉草結(jié)構(gòu) 4 tRNA的特異性加載：（翻譯的高保真性）

氨酰-tRNA合成酶對(duì)相應(yīng)tRNA分子有很強(qiáng)的專一性：第二密碼子：

氨酰-tRNA合成酶接受相應(yīng)氨基酸時(shí)有很強(qiáng)的忠實(shí)性：校正：雙篩選機(jī)制—酶的活性中心，酶中的編輯位點(diǎn) 氨酰-tRNA（AA-tRNA）： 3’-end加載了一個(gè)氨基酸的tRNA分子。是在蛋白質(zhì)合成中，將密碼子轉(zhuǎn)換氨基酸的適配器。

Section Q 1 密碼子與反密碼子的反向互補(bǔ)配對(duì) 一個(gè)tRNA可識(shí)別的密碼子數(shù)由反密碼子的第一位堿基決定

擺動(dòng)學(xué)說：第三位密碼子與第一位反密碼子的配對(duì)可以擺動(dòng)

反密碼子第一位為A或C時(shí)，配對(duì)無搖擺現(xiàn)象。3 核糖體的E，P，A位點(diǎn) A位：接受AA-tRNA部位.除了起始氨酰-tRNA，其他所有AA-tRNA都只能進(jìn)A位點(diǎn)。P位：肽?；?tRNA結(jié)合部位。起始氨酰-tRNA也進(jìn)入此位點(diǎn)。E位：空載tRNA離開核糖體的位點(diǎn)。4 核糖體各亞基的功能

核糖體小亞基功能：結(jié)合mRNA

促進(jìn)密碼子與反密碼子的正確結(jié)合 mRNA移位

大亞基的功能A位、P位、肽酰轉(zhuǎn)移酶（轉(zhuǎn)肽酶）中心等在大亞基上。

負(fù)責(zé)攜帶AA-tRNA、肽鍵/肽鏈的形成 5 翻譯的基本內(nèi)容 核糖體與mRNA結(jié)合

氨酰tRNA逐個(gè)進(jìn)入核糖體

氨酰tRNA通過反密碼子與mRNA互補(bǔ)配對(duì) 氨酰tRNA分子的氨基酸之間形成肽鍵。空載tRNA的釋放 肽鏈的釋放

第二篇：現(xiàn)代分子生物學(xué)總結(jié)

醫(yī)學(xué)細(xì)胞與分子生物學(xué)習(xí)題庫

一、名詞解釋

1．基因組

2．基因文庫

3．衛(wèi)星DNA

4．SD序列

5．分子克隆

6．載體

7．反式作用因子

8．粘性末端

9．限制性內(nèi)切酶

10．cDNA文庫

11．轉(zhuǎn)化率

12．質(zhì)粒拷貝數(shù)

13．體外重組

14．感受態(tài)細(xì)胞

15．探針

16．核酸雜交

17．陽性克隆

18．固相雜交

19．解鏈溫度

20．C值悖理

21．基因家簇

22．反義RNA

23．RNA干擾

24．魔斑

25．順式作用元件

二．填空題

1.真核生物基因組DNA序列可分為（）、（）和（）。

2.真核生物基因組高度重復(fù)序列包括（）、（）、（）和（）四種。

5.原核生物轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控的方式有（）和（）兩種方式；前者又可分為（）和（）；后者可分為（）和（）。

6.真核生物基因表達(dá)調(diào)控包括（）、（）、（）、（）和（）五個(gè)層次。

7.真核生物基因組DNA水平的調(diào)控包括（）、（）、（）、（）和（）五種方式。

8.反式作用因子可劃分為（）、（）和（）三類。

12.影響雜交的因素有（）、（）、（）、（）和（）。

15.逆轉(zhuǎn)錄酶是多功能酶，具有（）、（）、（）三種功能，但無（）作用。

16.DN的損傷突變類型有（）、（）、（）、（）和（）。

17.引起DNA損傷突變的因素是（）、（）、（）、（）和（）。

18.DNA的損傷修復(fù)方式有（）、（）、（）和（）。

20.病毒基因組可由（）或（）組成；細(xì)菌基因組由一條（）組成；真核生物基因組由（）和（）形成（）。

21.原核生物基因表達(dá)調(diào)控的方式有（）和（）；其中（）是主要的方式。

22.、操縱子由（）、（）和（）組成；受（）產(chǎn)物的調(diào)控。

23．順式作用元件按功能可劃分為（）、（）、（）和（）。

24．分子克隆技術(shù)的操作包括（）、（）、（）和（）等四個(gè)基本過程。

25．限制性內(nèi)切酶分為（）、（）、（）三種，其中只

有（）在基因工程操作中被應(yīng)用。

26.限制性內(nèi)切酶識(shí)別（）序列； DNA分子在該酶切割下可產(chǎn)生（）、（）或（）末端。

27．分子克隆中常用的工具酶有（）、（）、（）和（）。

28．分子克隆中常用的載體有（）、（）、（）和（）。

29．目的基因制備的常用方法有（）、（）、（）。

30．體外重組常用方法有（）、（）、（）和（）。

31．重組體導(dǎo)入原核生物細(xì)胞中的常用方法有（）和（）；重組體導(dǎo)入真核生物細(xì)胞中的常用方法有（）、（）和（）。

32．重組體的篩選方法有（）、（）、（）、（）。

33．cDNA文庫的構(gòu)建步驟是（）、（）（）、（）。

34．常用的核酸探針包括（）、（）和（）。

35．放射性同位素標(biāo)記常用的標(biāo)記方法有（）、（）、（）。

36．分子克隆中常用的非放射性同位素標(biāo)記物有（）、（）、（）等；常用的標(biāo)記方法有（）、（）。

37．核酸雜交技術(shù)可分為（）和（）兩種類型；后者又可分為（）和（）。

39．PCR技術(shù)的基本過程是（）、（）、（）。

40．影響PCR的因素有（）、（）、（）、（）、（）。

41．PCR反應(yīng)的特點(diǎn)是（）、（）、（）、（）。

45．限制性核酸內(nèi)切酶的作用特點(diǎn)是（）、（）、（）、（）。

50．DNA切除修復(fù)需要的酶有（）、（）和（）。

三、判斷題

1、生物越高度，基因組越龐大，基因數(shù)目就越多。（）

2、真核生物結(jié)構(gòu)基因都是單拷貝，rRNA基因?yàn)槎嗫截?。（?/p>

3、同基因是一類結(jié)構(gòu)上完全相同，表達(dá)產(chǎn)物功能也相同的一組基因。（）

4、真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（）

5、原核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為多順反子。（）

6、真核生物基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼的區(qū)域。（）

7、衛(wèi)星DNA實(shí)際上是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。

8、串聯(lián)重復(fù)序列是形成衛(wèi)星DNA 的基礎(chǔ)。

9、所有真核生物基因組中都有α衛(wèi)星DNA。

10、高度重復(fù)序列在真核生物細(xì)胞基因組中重復(fù)出現(xiàn)可達(dá)106次以上。

11、中度重復(fù)序列的長度和拷貝數(shù)很不均一。

12、短分散片段重復(fù)順序的平均長度約為3500-5000bp。

13、長分散片段重復(fù)順序的平均長度約為300bp。

14、中度重復(fù)序列大多不編碼蛋白質(zhì)。

15、高度重復(fù)序列中有一些可編碼蛋白質(zhì)。

16、中度重復(fù)順序一般具有種特異性。

17、每種組蛋白的基因在同一種生物中拷貝數(shù)是相同的。

18、不同生物中組蛋白基因在基因組中的排列不一樣。

19、端粒是所有生物染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)。

20、以RNA為模版合成出的DNA鏈叫負(fù)股鏈。

21、顛換是指原為嘧啶突變后變?yōu)猷堰省?/p>

22、置換是指原為嘧啶突變后變?yōu)猷堰省?/p>

23、重組修復(fù)也叫復(fù)制后的修復(fù)。

24、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中許多mRNA都是多順反子轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

25、限制性內(nèi)切酶切割的DNA片段都具有粘性末端。

26、原核生物中mRNA一般不需要轉(zhuǎn)錄后加工。

27、增強(qiáng)子并沒有啟動(dòng)子活性，卻具有增強(qiáng)啟動(dòng)子活性，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄起始的效能。

28、在雙向復(fù)制中一條鏈按5′→3′的方向合成，另一條鏈按3′→5′的方向合成。

29、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞復(fù)制在多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)起始進(jìn)行。

30、真核細(xì)胞的基因是不連續(xù)的，轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA都必須經(jīng)過加工。（31、生物DNA分子的大小等于基因的總和。（）

32、所有多肽鏈經(jīng)核糖體翻譯出來即有正常生理功能。

33、核糖體是蛋白質(zhì)和rRNA構(gòu)成的功能復(fù)合體。

34、機(jī)體的各種細(xì)胞中含有相同的遺傳信息，所以有相同的表達(dá)，35、在負(fù)控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，阻遏蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄。

36、在負(fù)控阻遏系統(tǒng)中，阻遏蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄。

37、CAP結(jié)合在啟動(dòng)子上時(shí)，能促進(jìn)RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。）

38、CAP首先與cAMP形成復(fù)合物才能與啟動(dòng)子結(jié)合。

39、RBS是指mRNA起始密碼AUG前的一段非翻譯區(qū)。

40、反義RNA由反義基因轉(zhuǎn)錄而來。

41、轉(zhuǎn)錄后基因沉默被稱為RNAi。

42、細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成旺盛時(shí)，mRNA鏈上核糖體數(shù)量就多，poly（A）也較長。

43、限制性核酸內(nèi)切酶是原核生物所特有的酶。

44、只有Ⅱ型限制性核酸內(nèi)切酶在分子生物學(xué)中被應(yīng)用。

45、COS區(qū)是指λ噬菌體粘性末端構(gòu)成的區(qū)域。

53、基因擴(kuò)增是指某些基因的拷貝數(shù)大量增加的現(xiàn)象。

54、基因重排是DNA水平調(diào)控的重要方式之一

55、所有核酸的合成都是以堿基配對(duì)為基礎(chǔ)的。

56、甲基化程度與基因的表達(dá)一般呈反比關(guān)系。

57、基因的甲基化程度愈高，其表達(dá)則降低。

58、去除組蛋白基因轉(zhuǎn)錄活性降低。

59、常染色質(zhì):結(jié)構(gòu)松散，基因不表達(dá)。

60、異染色質(zhì):結(jié)構(gòu)緊密，基因表達(dá)。

61、有基因表達(dá)活性的染色質(zhì)DNA對(duì)DNaseⅠ更敏感。

62、真核生物基因調(diào)控主要也是在轉(zhuǎn)錄水平上進(jìn)行的。

四、選擇題：

1.原核生物基因組中的復(fù)制起始點(diǎn)有（）

A．1個(gè)B．2個(gè)C．多個(gè)D．1000個(gè)以上

2．真核生物基因組中的復(fù)制起始點(diǎn)有（）

A．1個(gè)B．2個(gè)C．多個(gè)D．1000個(gè)以上

3.真核生物基因之間的間隔區(qū)與基因組大?。ǎ?/p>

A．有關(guān)B．無關(guān)C．成正比E．成反比

４.衛(wèi)星DNA的長度一般為()

A．5-10bpB．300bpC．100bpD．500-1000bp

５.在大腸桿菌細(xì)胞中DNA復(fù)制的保真性主要是下列哪個(gè)酶的作用（A．DNA聚合酶ⅠB．DNA聚合酶Ⅱ

C．DNA聚合酶ⅢD．DNA連接酶

６.既有內(nèi)切酶活力，又有連接酶活力的是

A．拓?fù)洚悩?gòu)酶B．DNA聚合酶Ⅱ

C．解螺旋酶D．DNA連接酶）

7.轉(zhuǎn)錄過程中遺傳信息的轉(zhuǎn)遞方向是()

A．DNA→RNAB．RNA→DNAC．DNA→DNAD．RNA→RNA

8.hnRNA是()

A．存在于細(xì)胞核內(nèi)的tRNA前體B.存在于細(xì)胞核內(nèi)的mRNA前體

C.存在于細(xì)胞核內(nèi)的rRNA前體D.存在于細(xì)胞核內(nèi)的snRNA前體

9.以RNA為模板合成DNA的酶是（）

A．DNA聚合酶ⅢB．DNA聚合酶ⅠC．RNA聚合酶D．反轉(zhuǎn)錄酶

10.蛋白質(zhì)的生物合成中肽鏈延伸方向是（）

A．5→3B．從N端到C端C．3→5D．從C端到N端，，11.蛋白質(zhì)翻譯后的加工主要包括（）。

A．氨基酸側(cè)鏈修飾B．水解修飾

C．二硫鍵的形成D． 上述各種修飾都包括

12.操縱子調(diào)控系統(tǒng)屬于哪一種水平的調(diào)控（）

A．復(fù)制水平的調(diào)節(jié)B。轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)

C．翻譯水平的調(diào)節(jié)D。轉(zhuǎn)錄后加工的調(diào)控

13.與乳糖操縱子操縱基因結(jié)合的物質(zhì)是（）

A．RNA聚合酶B．DNA聚合酶C．阻遏蛋白D．誘導(dǎo)物

14、參與線粒體DNA復(fù)制的酶是（）

A．polαB．polδC．polβD．polγ

15、參與領(lǐng)頭鏈DNA復(fù)制的酶是（）

A．polαB．polδC．polβD．polγ

16、端粒酶是一種()

A．逆轉(zhuǎn)錄酶B．RNA聚合酶C．DNA聚合酶D．DNA酶

17.含稀有堿基最多的RNA是（）

A．mRNAB、rRNAC．5S-rRNAD．tRNA

18.大腸桿菌DNA連接酶需要下列哪一種輔助因子？（）

A．FAD作為電子受體B．NADP+作為磷酸供體

C．NAD+形成活性腺苷酰酶D．NAD+作為電子受體

19.真核生物RNA聚合酶I催化轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是（）

A．mRNAB．45S-rRNAC．5S-rRNAD．tRNA

20.魔斑是指（）

A．ppGppB．cAMPC．cGMPD．7mGppp

21.CAP復(fù)合體與操縱子結(jié)合的部位是（）

A．啟動(dòng)子B．操縱基因C．結(jié)構(gòu)基因D．調(diào)節(jié)基因

22.基因的甲基化修飾一般發(fā)生在（）

A．CpGB．ApGC．GpTD．TpG

23.有基因表達(dá)活性的染色質(zhì)DNA對(duì)下列那個(gè)酶敏感性增加？（）

A．DNaseⅠB．DNA polⅠC．DNA polⅡD.Rnase H

24.真核生物的RNA聚合酶識(shí)別的是（）

A．啟動(dòng)子B．增強(qiáng)子C．TF-DNA復(fù)合體D．RF

25.在分子生物學(xué)中被應(yīng)用的限制性核酸內(nèi)切酶是（）

A．Ⅰ型B．Ⅱ型C．Ⅲ型D．以上都沒用

26.限制性核酸內(nèi)切酶錯(cuò)位切割產(chǎn)生（）

A．粘性末端B．平頭末端C．3’-磷酸D．5’-羥基

27.大腸桿菌DNA連接酶只能連接（）

A．粘性末端B．平頭末端C．3’-磷酸D．5’-羥基

28.pBR322是（）

A．復(fù)制型載體B．表達(dá)型載體C．穿梭載體D．噬菌體載體

29、pUC載體是（）

A．復(fù)制型載體B．表達(dá)型載體C．穿梭載體D．噬菌體載體

30.M13噬菌體是（）

A．單鏈DNA噬菌體B．雙鏈DNA噬菌體

C．RNA噬菌體D．都不是

31、B．表達(dá)型載體C．穿梭載體D．噬菌體載體

五．問答題

1．分子克隆中常用的工具酶有哪些？各有何用途？

2．何謂載體？分子克隆中常用的載體有哪些？理想的載體應(yīng)具備哪些條件？

3．何謂PCR？試述PCR基本技術(shù)原理和影響因素。

4．常用的核酸探針有哪些類型？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？

5．將目的DNA與載體DNA連接起來的方法有哪些？并用文或圖表示各種連接過程。

6．簡(jiǎn)述原核生物與真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

9．體外重組常用的連接方法有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？

13．何謂核酸雜交？常用的雜交方法有哪些？

28.何謂宿主細(xì)胞？分子克隆中常用的宿主細(xì)胞有哪些？宿主細(xì)胞應(yīng)具備哪些條件？

31.簡(jiǎn)述重組體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法

35、DNA損傷修復(fù)有哪些類型？試述各類型的修復(fù)方式。

第三篇：分子生物學(xué)復(fù)習(xí)總結(jié)

分子生物學(xué)

一．緒論

1．分子生物學(xué)研究的主要內(nèi)容包括：1）DNA重組技術(shù)；2）基因表達(dá)調(diào)控的研究；3）生物大分子的結(jié)構(gòu)功能研究；4）基因組、功能基因組與生物信息學(xué)研究。P11

2.分子生物學(xué)研究的三大理論和兩大技術(shù)保證 ：1）40年代確定了遺傳信息的攜帶者，即基因的分子載體是DNA而不是蛋白質(zhì)，解決了遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)問題；2）50年代提出了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)制，解決了基因的自我復(fù)制和世代交替問題；3）50年代末至60年代，相繼提出了“中心法則”和操縱子學(xué)說，成功地破譯了遺傳密碼，充分認(rèn)識(shí)了遺傳信息的流動(dòng)和表達(dá)。兩大技術(shù)保證：1）DNA的體外切割和連接；2）DNA的核苷酸序列分析技術(shù)。

二．染色體與DNA

3.核小體是由H2A、H2B、H3、H4各兩個(gè)分子生成的八聚體和由大約200bpDNA組成的。八聚體在中間，DNA分子盤繞在外，而H1則是在核小體的外面。每個(gè)核小體只有一個(gè)H1。核小體的形成是染色體中DNA壓縮的第一個(gè)階段。

4.原核生物DNA的主要特征：1）原核生物中一般只有一條染色體，且大都帶有單拷貝基因，只有少數(shù)基因（如rRNA基因）是以多拷貝形式存在的；2）整個(gè)染色體DNA幾乎全部由功能基因與調(diào)控序列所組成；3）幾乎每個(gè)基因序列都與它所編碼的蛋白質(zhì)序列成線性對(duì)應(yīng)狀態(tài)。

5．真核細(xì)胞染色體具有如下特征：1）分子結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定；2）能夠自我復(fù)制，使親、子代之間保持連續(xù)性；3）能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，從而控制整個(gè)生命過程；4）能夠產(chǎn)生可遺傳的變異。

6.染色體上的蛋白質(zhì)包括組蛋白和非組蛋白。組蛋白是染色體的結(jié)構(gòu)蛋白，它與DNA形成核小體。

7．組蛋白具有如下特性：1）進(jìn)化上的極端保守性；2）無組織特異性；3）肽鏈上氨基酸分布的不對(duì)稱性，堿性氨基酸集中分布在N端的半條鏈上；4）組蛋白的修飾作用，包括甲基化、乙?；?、磷酸化及ADP核糖基化等；5）富含賴氨酸的組蛋白H5，H5的磷酸化在蛋白質(zhì)的失活過程中起重要作用。

8.非組蛋白有：HMG蛋白、DNA結(jié)合蛋白、H24非組蛋白。

9.C值反常現(xiàn)象：真核細(xì)胞基因組的最大特點(diǎn)是它含有大量的重復(fù)序列，而且功能DNA序列大多被不編碼的蛋白質(zhì)的非功能DNA所隔開。所謂C值，通常是指一種是生物體單倍體基因組DNA的總量。

10.DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)：是指兩條多核苷酸反向平行盤繞所生成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。二級(jí)結(jié)構(gòu)的分類，右手螺旋：A-DNA和B-DNA;右手螺旋：Z-DNA。

11.DNA的半保留復(fù)制機(jī)制：DNA在復(fù)制過程中堿基間的氫鍵首先斷裂，雙螺旋被分開，每條鏈分別作為模板合成新鏈，產(chǎn)生互補(bǔ)的兩條鏈。這樣新形成的兩個(gè)DNA分子與原來DNA分子的堿基順序完全一樣。因此，每個(gè)子代分子的一條鏈來自親代DNA,另一條鏈則是新合成的，所以這種復(fù)制方式被稱為DNA半保留復(fù)制。

12.真核生物DNA的復(fù)制與原核生物DNA復(fù)制的區(qū)別：1）真核生物每條染色體上可以有多處復(fù)制起點(diǎn)，而原核生物只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；2）真核生物的染色體在全部完成復(fù)制之前，各個(gè)起始點(diǎn)上DNA的復(fù)制不能再開始，而在快速生長的原核生物中，復(fù)制起始點(diǎn)上可以連續(xù)開始新的DNA復(fù)制，表現(xiàn)為雖只有一個(gè)復(fù)制單元，但可以有多個(gè)復(fù)制叉。

13.原核細(xì)胞染色體DNA復(fù)制的功能單位是復(fù)制子，由起始物位點(diǎn)和復(fù)制起點(diǎn)兩個(gè)部分組成。起始物位點(diǎn)編碼復(fù)制調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，復(fù)制起點(diǎn)與蛋白質(zhì)相互作用并啟動(dòng)復(fù)制。

14.錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)修復(fù)的原則是“保存母鏈，修復(fù)子鏈”，找出錯(cuò)誤堿基所在的DNA鏈，進(jìn)行修復(fù)。

15.轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上可自主復(fù)制和移位的基本單位。可分為：IS序列、復(fù)合式轉(zhuǎn)座子、Tna家族。

三、生物信息的傳遞（上）從DNA到RNA

16.DNA是儲(chǔ)藏遺傳信息的最重要的生物大分子，DNA雙鏈可以分為：編碼鏈和模板鏈。

17.轉(zhuǎn)錄的基本過程：模板識(shí)別、轉(zhuǎn)錄起始、通過啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄的延伸和終止。

18.?因子的作用：使RNA聚合酶全酶識(shí)別啟動(dòng)子序列的特異性總共提高了107倍。

19.轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物：當(dāng)新生RNA鏈達(dá)到6-9個(gè)核苷酸使才能形成穩(wěn)定的RNA聚合酶-DNA-RNA三元復(fù)合物，釋放?因子，表示轉(zhuǎn)錄起始的終止，轉(zhuǎn)錄進(jìn)入延伸期。，20.啟動(dòng)子是一段位于結(jié)構(gòu)基因5端上游區(qū)的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板

DNA準(zhǔn)確地相結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性。啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)：1）轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)；2）-10區(qū)(TATA區(qū))；3）-35區(qū)(TTGACA區(qū))。

21.原核生物DNA的-10區(qū)與-35區(qū)的距離為16-19bp時(shí)，能夠維持啟動(dòng)子的活性。另外，增強(qiáng)子也具有強(qiáng)化轉(zhuǎn)錄起始的作用。

22.真核生物啟動(dòng)子區(qū)包括:TATA區(qū)、CAAT區(qū)、GC區(qū)、增強(qiáng)子，習(xí)慣上將TATA區(qū)上游的保守序列稱為上游啟動(dòng)子元件或上游激活序列。

23.原核生物mRNA與真核生物mRNA的特征比較：

原核生物mRNA的特征：1）原核生物mRNA的半衰期短；2）許多原核生物mRNA以多順，反子的形式存在；3）原核生物mRNA的5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端沒有或只有較短的poly(A)

結(jié)構(gòu)。，真核生物mRNA的特征：1）真核生物mRNA的5端存在帽子結(jié)構(gòu)；2）絕大多數(shù)真核生物

mRNA具有poly(A)尾巴。

四、生物信息的傳遞（下）mRNA-蛋白質(zhì)

24.三聯(lián)子密碼：mRNA上每3個(gè)核苷酸翻譯成蛋白質(zhì)多肽鏈上的一個(gè)氨基酸，這三個(gè)核苷酸就稱為密碼，也叫三聯(lián)子密碼。

25.移碼突變：在開放閱讀框內(nèi)插入非3的倍數(shù)的密碼子引起的突變叫做移碼突變。

26.密碼子的簡(jiǎn)并性：由一種以上密碼子編碼同一種氨基酸的現(xiàn)象稱為密碼子的簡(jiǎn)并性，對(duì)應(yīng)于同一種氨基酸的密碼子稱為同義密碼子。

27.rRNA的三葉草型二級(jí)結(jié)構(gòu)，由受體臂、TΨC臂、多余臂、反密碼子臂、D臂組成，其中最重要的兩條臂是受體臂和反密碼子臂。

28.核糖體由大、小兩個(gè)亞基組成，小亞基組要負(fù)責(zé)對(duì)模板mRNA進(jìn)行特異性識(shí)別，mRNA的結(jié)合位點(diǎn)也在小亞基上；大亞基負(fù)責(zé)攜帶氨基酸及tRNA的功能，肽鍵的形成，AA-tRNA、肽基-tRNA的結(jié)合等，A位、P位、轉(zhuǎn)肽酶中心等主要在大亞基上。

29.蛋白質(zhì)合成的生物學(xué)機(jī)制。大致步驟：氨基酸的活化，肽鏈的起始，肽鏈的延伸，肽鏈的終止及釋放，肽鏈的折疊和加工。

A.氨基酸的活化：氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下生成活化氨基酸：AA-tRNA。（原核

fMetMet生物首先被活化的是fMet-tRNA,真核生物則是Met-tRNA）

B.翻譯的起始：（IF因子的參與）核糖體上三個(gè)與氨酰-tRNA結(jié)合的位點(diǎn)：A位、P位、E位。在原核細(xì)胞核糖體翻譯起始時(shí)，只有fMet-tRNAfMet能與第一個(gè)P位點(diǎn)結(jié)合，其他所有tRNA都必須通過A位到達(dá)P位，再由E位離開核糖體。

C.肽鏈的延伸：包括后續(xù)AA-rRNA與核糖體結(jié)合、肽鍵的生長、移位三個(gè)步驟。

D.肽鏈的終止：RF與終止密碼子相結(jié)合后，誘導(dǎo)肽基轉(zhuǎn)移酶把一個(gè)水分子而不是氨基酸加到延伸中的肽鏈上，水解P位上與多肽鏈與tRNA之間的二脂鍵。

E.蛋白質(zhì)的前體加工：包括N端fMet或Met切除，二硫鍵的形成，特定氨基酸的修飾，切除新生肽鏈中非功能片段。

30.信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1）一般帶有10-15個(gè)疏水氨基酸；2）在靠近該序列N端常常有1個(gè)或數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸；3）在其C-末端靠近蛋白酶切割位點(diǎn)處常常帶有數(shù)個(gè)極性氨基酸，離切割位點(diǎn)最近的那個(gè)氨基酸往往帶有很短的側(cè)鏈（丙氨酸或甘氨酸）。

31.信號(hào)肽假說:1）完整的信號(hào)肽是保證蛋白質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)的必要條件；2）僅有信號(hào)肽還不足以保證蛋白質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)的發(fā)生；3）信號(hào)序列的切除并不是運(yùn)轉(zhuǎn)所必需的；4）并非所有的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)都有可降解的信號(hào)肽。

32.信號(hào)肽的定義：能啟動(dòng)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的任何一段多肽。

33.前導(dǎo)肽對(duì)線粒體蛋白質(zhì)的識(shí)別和跨膜有關(guān)鍵作用。

34.前導(dǎo)肽的結(jié)構(gòu)和功能：1）前導(dǎo)肽通常是疏水的；2）帶正電荷的堿性氨基酸（特別是精氨酸）含量較為豐富，它們分散于不帶電荷的氨基酸序列之間；3）羥基氨基酸（特別是絲氨酸）含量較高；4）有形成兩親α-螺旋結(jié)構(gòu)的能力；5）帶正電荷的堿性氨基酸在前導(dǎo)肽中有重要作用，如果它們被不帶電荷的氨基酸所取代，就不能發(fā)揮牽引蛋白質(zhì)的過膜的作用。

五、分子生物學(xué)研究方法：

35.電泳：指帶電粒子在電場(chǎng)中向與自身電荷相反的電荷的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。

36.遷移率：電泳分子在電場(chǎng)作用下遷移的速度，它與電場(chǎng)強(qiáng)度和電泳分子本身攜帶的凈電荷成正比，與分子的摩擦系數(shù)成反比。

37.分子雜交：標(biāo)記的探針DNA變性后與變性后的靶DNA/RNA通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，形成雜種分子的過程。

38.核酸探針：是指能與特定核苷酸序列發(fā)生特異性互補(bǔ)的已知核苷酸片段，因而可檢測(cè)樣品中特定的基因序列。

39.聚合酶鏈?zhǔn)椒从?PCR)技術(shù)

原理：將雙鏈DNA分子在臨近沸點(diǎn)的溫度下加熱分離成兩條單鏈DNA分子，DNA聚合酶以單鏈DNA作為模板并利用反應(yīng)混合物中的四種脫氧核苷三磷酸合成新生的DNA互補(bǔ)鏈。PCR三步曲:DNA解鏈（變性，90-95℃）；引物與模板DNA相結(jié)合（退火，45-55℃）；DNA合成（延伸，72℃左右）。

2+PCR反應(yīng)應(yīng)加入：模板DNA、PCR引物、四種核苷酸及適當(dāng)濃度的Mg。

40.瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳的區(qū)別：

1）前者是水平電泳，后者是垂直電泳；2）前者為DNA本身的電荷，后者為SDS復(fù)合后的電荷；3）前者為EB染色，后者為考馬斯亮藍(lán)染色。

41.DNA序列分析：Sanger雙脫氧終止法。

六、基因的表達(dá)調(diào)控（上）

42.組成型合成蛋白質(zhì)：合成速率不受環(huán)境變化或代謝狀態(tài)影響的蛋白質(zhì)。與之對(duì)應(yīng)的是適應(yīng)型或調(diào)解型蛋白質(zhì)。

43.順式作用元件（DNA上）與反式作用因子（蛋白質(zhì)上）

順式作用元件:是指對(duì)基因表達(dá)有調(diào)節(jié)活性的DNA序列，其活性只影響其自身處在同一個(gè)DNA

分子上的基因，同時(shí)，DNA序列通常不編碼蛋白質(zhì)，多位于基因旁側(cè)內(nèi)含子

中，如增強(qiáng)子。

反式作用因子：是能調(diào)節(jié)與它們接觸的基因表達(dá)的擴(kuò)散分子（通常是蛋白質(zhì)），如轉(zhuǎn)錄子；

其編碼基因與其識(shí)別或結(jié)合的靶核苷酸序列不在同一個(gè)DNA分子上。

44.原核基因調(diào)控機(jī)制的類型：負(fù)控誘導(dǎo)和負(fù)控阻遏，其調(diào)節(jié)產(chǎn)物是阻遏蛋白；正控誘導(dǎo)和

正控阻遏，其調(diào)節(jié)產(chǎn)物是激活蛋白。

45.通過代謝物調(diào)節(jié)的基因活性主要有可誘導(dǎo)和可阻遏兩大類。

可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)：是指一些基因在特殊的誘導(dǎo)物或化合物的作用下，由原來關(guān)閉的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣?/p>

作狀態(tài)即在某些物質(zhì)的誘導(dǎo)下使基因活化，如大腸桿菌的乳糖操縱子。

可阻遏調(diào)節(jié)：這類基因平時(shí)都是開啟的，處在生產(chǎn)蛋白質(zhì)或酶的工作過程中，由于一些特殊

代謝物或化合物的積累而將其關(guān)閉，阻遏了基因的表達(dá)。

46.弱化子：當(dāng)操縱子被阻遏，RNA合成被終止時(shí)，起終止轉(zhuǎn)錄信號(hào)作用的那一段核苷酸被

稱為弱化子。

47.葡萄糖效應(yīng)（降解物的抑制作用）：指當(dāng)葡萄糖和其他糖類一起作為細(xì)菌的碳源時(shí)葡萄糖總是優(yōu)先被利用，葡萄糖的存在阻止了其他糖類的利用的現(xiàn)象。

48.轉(zhuǎn)錄因子：是轉(zhuǎn)錄起始過程中，RNA聚合酶所需要的輔因子，它是能參與正調(diào)控的反式

作用因子。

49．乳糖操縱子包括三個(gè)結(jié)構(gòu)基因：Z、Y和A，以及啟動(dòng)子、控制子和阻遏子等。

50．Lac操縱子的控制模型：

1）Z、Y、A基因的產(chǎn)物由一條多順反子的mRNA分子所編碼；

2）該mRNA分子的啟動(dòng)區(qū)（P）位于阻遏基因（I）與操縱區(qū)（O）之間，不能單獨(dú)起始半乳糖苷酶和透過酶基因的高效表達(dá)；

3）操縱區(qū)是DNA上的一小段序列（僅為26bp），是阻遏物的結(jié)合位點(diǎn)；

4）當(dāng)阻遏物與操縱區(qū)相結(jié)合時(shí)，lac mRNA的轉(zhuǎn)錄起始受到抑制；

5）誘導(dǎo)物通過與阻遏物結(jié)合，改變它的三維構(gòu)象，使之不能與操縱區(qū)相結(jié)合，從而激發(fā)lac mRNA的合成。

51．Lac操縱子的誘導(dǎo)物：異乳糖，異丙基巰基半乳糖苷（IPTG），巰甲基半乳糖苷（TMG）。

52．Trp操縱子的負(fù)控阻遏系統(tǒng)：trpR基因突變常常引起trp mRNA的組成型合成，該基因產(chǎn)物因此被稱為輔阻遏蛋白。當(dāng)培養(yǎng)基中的色氨酸含量較高時(shí)，它與游離的輔阻遏蛋白相結(jié)合，并使之與操縱區(qū)DNA緊密結(jié)合；當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸供應(yīng)不足時(shí)，輔阻遏物失去色氨酸并從操縱區(qū)上解離，trp操縱子去阻遏。

53．trp操縱子的弱化作用：前導(dǎo)肽基因中有兩個(gè)相鄰的色氨酸密碼子，所以這個(gè)前導(dǎo)肽的翻譯必定對(duì)tRNATrp十分敏感。1）當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸的濃度很低時(shí)，負(fù)載有色氨酸的tRNATrp也就少，這樣翻譯通過兩個(gè)相鄰的色氨酸密碼子的速度就會(huì)很慢，當(dāng)4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時(shí)，核糖體才進(jìn)行到1區(qū)（或停留在兩個(gè)相鄰的Trp密碼子處），這時(shí)的前導(dǎo)區(qū)結(jié)構(gòu)是2-3配對(duì)，不形成3-4配對(duì)的終止結(jié)構(gòu)，所以轉(zhuǎn)錄可以繼續(xù)進(jìn)行，直到將trp操縱子中的結(jié)構(gòu)基因全部轉(zhuǎn)錄。2）而當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸的濃度高時(shí)，核糖體可順利通過兩個(gè)色氨酸密碼子，在4區(qū)被轉(zhuǎn)錄之前，核糖體就到達(dá)2區(qū)，這樣使2-3不能配對(duì)，3-4區(qū)可以著有配對(duì)形成莖-環(huán)狀終止結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停止，trp操縱子中的結(jié)構(gòu)基因被關(guān)閉而不再合成色氨酸。所以，弱化子對(duì)RNA聚合酶的影響依賴于前導(dǎo)肽翻譯中核糖體所處的位置。

54．半乳糖操縱子包括3個(gè)結(jié)構(gòu)基因：異構(gòu)酶（galE），半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷轉(zhuǎn)移酶（galT），半乳糖激酶（galK）。這三個(gè)酶的作用是使半乳糖變成葡萄糖-1-磷酸。

55．Gal操縱子與lac操縱子所不同的是galR與galE、T、K及操縱區(qū)O等的距離都很遠(yuǎn)，而galR產(chǎn)物對(duì)galO的作用與lacI-lacO的作用相同。

56．基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是生物最經(jīng)濟(jì)的調(diào)控方式。轉(zhuǎn)錄生成mRNA以后，再翻譯生成或翻譯后水平進(jìn)行“微調(diào)”，是對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控的補(bǔ)充，它使基因表達(dá)的調(diào)控更加適應(yīng)生物本身的需求和外界條件的變化。

57．mRNA 3’端poly(A)的長短對(duì)翻譯效率有很大影響。細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成旺盛時(shí)，mRNA鏈上核糖體數(shù)量就多，mRNA鏈上的poly(A)也較長。當(dāng)某些mRNA鏈不再被翻譯時(shí)，核糖體就被釋放出來，其poly(A)也相應(yīng)縮短。

七、基因的表達(dá)與調(diào)控（下）

58．基因擴(kuò)增：指某些基因的拷貝數(shù)專一性大量增加的現(xiàn)象，它使細(xì)胞在短時(shí)期內(nèi)產(chǎn)生大量的基因產(chǎn)物以滿足生長發(fā)育的需要，是基因活性調(diào)控的一種方式。

59．基因重排：將一個(gè)基因從遠(yuǎn)離啟動(dòng)子的地方移到距離它很近的位點(diǎn)從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，這種方式被稱為基因重排。

60．DNA的甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達(dá)。

61．真核生物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控大多數(shù)是通過順式作用元件和反式作用因子復(fù)雜的相互作用來實(shí)現(xiàn)的。

順式作用元件：是指存在于基因DNA中的特異性調(diào)控序列。真核基因的順式作用元件按照功能可以分為啟動(dòng)子和增強(qiáng)子。

反式作用因子：是能直接或間接地識(shí)別或結(jié)合在各種順式作用元件8-12bp核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的一組蛋白質(zhì)。順式作用元件必須與反式作用因子結(jié)合才能對(duì)轉(zhuǎn)錄起到調(diào)控作用。

62．蛋白激酶根據(jù)底物蛋白質(zhì)被磷酸化的氨基酸殘基種類可以分為三大類：1）絲氨酸/蘇氨酸型；2）酪氨酸型；3）組氨酸型。

63．依賴于cAMP的蛋白激酶稱為A激酶（PKA）。依賴于Ca2+的蛋白激酶稱為C激酶（PKC）。

64．酪氨酸激酶（PTK）包含跨膜受體家族與胞質(zhì)非受體家族兩大類?？缒な荏w家族由胞外結(jié)合配體結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu)域組成。

65．應(yīng)答元件：能與某個(gè)（類）專一蛋白因子結(jié)合，從而控制基因特異性表達(dá)的DNA上游序列。

66．熱激蛋白調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)制：1）在沒有受熱或其他環(huán)境脅迫時(shí)，HSF主要以單體形式存在于細(xì)胞質(zhì)和核內(nèi)。2）受到熱激活其他環(huán)境脅迫時(shí)，細(xì)胞內(nèi)變形蛋白增多，它們都與HSF競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合Hsp70，從而釋放HSF，使之形成三體并輸入核內(nèi)，HSF被迅速磷酸化。3）HSF與HSE的特異性結(jié)合，引起包括Hsp70在內(nèi)的許多熱激應(yīng)答基因表達(dá)，大量產(chǎn)生Hsp70蛋白。4）隨著熱激溫度的消失，細(xì)胞出現(xiàn)大量游離的Hsp70蛋白，它們與HSF結(jié)合，形成沒有DNA結(jié)合能力的單體并脫離DNA。

八、疾病與人類健康

67．癌基因可分為兩大類：病毒癌基因和細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因。

第四篇：分子生物學(xué)實(shí)習(xí)總結(jié)

分子生物學(xué)實(shí)習(xí)總結(jié)

三天的分子生物學(xué)實(shí)習(xí)，我能認(rèn)真聽老師的講解和很好的按照老師的安排完成實(shí)驗(yàn)。期間，接觸和學(xué)習(xí)到了很多有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法、儀器的使用、技術(shù)，而且對(duì)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)有一個(gè)大致的了解，學(xué)習(xí)到很多以前沒有接觸過的知識(shí)。

這幾天來做的不足的地方有：

1.預(yù)習(xí)不夠充分。只是瀏覽了實(shí)驗(yàn)報(bào)告上的原理、操作等內(nèi)容，并沒有深入了解每一個(gè)步驟的操作會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)有什么的作用和影響。實(shí)驗(yàn)失敗了，不能自主找到原因。

2.實(shí)驗(yàn)操作過程不夠細(xì)心。實(shí)驗(yàn)要求十分細(xì)心，嚴(yán)謹(jǐn)和專注。實(shí)驗(yàn)中很多細(xì)小的地方還是沒有很好的注意到。

3.遇到不懂的沒有及時(shí)發(fā)問。實(shí)驗(yàn)就是一個(gè)讓我們實(shí)操的過程，一邊操作一邊鞏固書本上的知識(shí)。過程中，遇到不明白的地方應(yīng)該及時(shí)問別人活著自己翻閱資料，力求把實(shí)驗(yàn)弄透徹。

但是我還是有很多收獲的：

1.對(duì)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)有了了解。例如實(shí)驗(yàn)的基本的流程和操作，常用的方法等基礎(chǔ)知識(shí)已經(jīng)有了一定了解，對(duì)以后的實(shí)驗(yàn)會(huì)有一定的幫助。

2.最基本的移液槍、離心機(jī)、渦旋器等的使用還有實(shí)驗(yàn)中的PCR儀、電泳等有一定的認(rèn)。3.學(xué)會(huì)了嚴(yán)謹(jǐn)和細(xì)心。實(shí)驗(yàn)所用的材料都是比較昂貴的，而且實(shí)驗(yàn)只要一步錯(cuò)了，就得重做。所以需要非常嚴(yán)謹(jǐn)。不僅僅是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，其他實(shí)驗(yàn)也要求，所以培養(yǎng)這個(gè)有點(diǎn)對(duì)以后的實(shí)驗(yàn)非常有好處。

4.學(xué)會(huì)了堅(jiān)持。很多次因?yàn)閷?shí)驗(yàn)做的時(shí)間很長，大家都會(huì)很累，但是，還是要堅(jiān)持，一點(diǎn)點(diǎn)累都受不了是不能把實(shí)驗(yàn)做好的。開始慢慢了解到做科研的人員的辛酸，長時(shí)間整天呆在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)，這需要很大的毅力。

5.把握實(shí)驗(yàn)機(jī)會(huì)，讓自己學(xué)得更多。實(shí)驗(yàn)過程中，只要有實(shí)操的機(jī)會(huì)，我都會(huì)去操作。因?yàn)檎f和做是不一樣的。而且在操作中能加深鞏固知識(shí)和學(xué)得更加深入。

三天的分子生物學(xué)實(shí)習(xí)雖然很累，因?yàn)橐焯烊ピ簶?，而卻實(shí)驗(yàn)時(shí)間都比較長。但是還是很有意義的，因?yàn)閷W(xué)習(xí)到很到東西，收獲了很多。

老師也為我們準(zhǔn)備了很多的材料和準(zhǔn)備，實(shí)驗(yàn)才做得那么快和順利，其實(shí)，實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)化了很多了，而且我們所做的實(shí)驗(yàn)都是已經(jīng)設(shè)計(jì)好的，按照操作做就行了。如果時(shí)間和資金允許，應(yīng)該設(shè)立一些自主完成的實(shí)驗(yàn)，這樣可以培養(yǎng)我們更加多的能力，開闊知識(shí)面和拓寬思維。

第五篇：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

1.TOMY全自動(dòng)滅菌鍋的使用

（1）檢查排放蒸汽的水壺，腔體內(nèi)的水位與托板齊平。（2）SET鍵設(shè)置溫度和時(shí)間（121℃，20min）（3）關(guān)閉排氣閥，Start機(jī)器開始運(yùn)行，Check Heat檢查設(shè)置的溫度，Stop鍵終止機(jī)器運(yùn)行。（4）程序運(yùn)行結(jié)束，旋開排氣閥或機(jī)器自行排氣至壓力為0。溫度降至80℃以下壓力為0時(shí)方可開蓋。運(yùn)行過程中勿接觸蓋子。（5）腔體內(nèi)經(jīng)常清潔。2.LB液體培養(yǎng)基（1000mL）

將胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g完全溶解在950mL去離子水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，加入去離子水至總體積為1000mL，121℃濕熱滅菌20min。冷卻后4℃保存?zhèn)溆?。固體還要再加瓊脂。3.堿裂解法

堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性染色體DNA在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離它們的。在pH值介于12.0～12.5這個(gè)狹窄的范圍內(nèi)，線性的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而被變性，盡管在這樣的條件下，共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的氫鍵會(huì)斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈彼此纏繞，仍會(huì)緊密的結(jié)合在一起。當(dāng)加入 pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液，恢復(fù)pH至中性時(shí)，共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的兩條互補(bǔ)鏈仍保持在一起，因此復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，而線性的染色體DNA的兩條互補(bǔ)鏈彼此完全分開，復(fù)性就不會(huì)那么迅速而準(zhǔn)確，它們纏繞形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA，蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。

溶液Ⅰ：葡萄糖，Tris-HCl，EDTA 葡萄糖能增加溶液的黏度，防止DNA受機(jī)械作用而降解。EDTA可螯合Mg2+、Ca2+等金屬離子，抑制DNase對(duì)DNA的降解作用。溶液Ⅱ：氫氧化鈉，SDS 氫氧化鈉加入后堿性環(huán)境12-12.5促使染色體DNA與質(zhì)粒的變性解離成單鏈。SDS是一種陰離子去垢劑，它的主要作用有：①溶解細(xì)胞膜上的脂肪與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜；②解聚細(xì)胞中的核蛋白，使蛋白質(zhì)與DNA分開；③SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀；④SDS能抑制核酸酶的作用，防止對(duì)DNA的降解。

溶液Ⅲ：乙酸鉀。用pH4.2的KAc溶液是為了調(diào)整溶液pH至中性，使變性的質(zhì)粒DNA能夠復(fù)性，并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/L醋酸鉀(KAc)有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物凝聚而沉淀。4.loading buffer 電泳指示劑溴酚蘭在堿性液體中呈紫蘭色，一般與蔗糖、甘油組成上樣緩沖液。作用：①增加樣品比重，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)。②形成肉眼可見的指示帶，預(yù)測(cè)核酸電泳的速度和位置。③使樣品呈色，使加樣操作更方便。5.限制性內(nèi)切酶（I型）限制性內(nèi)切酶：能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在識(shí)別點(diǎn)附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的雙鏈，但是切割的核苷酸順序沒有專一性，是隨機(jī)的。

(II型)限制性內(nèi)切酶：能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在該順序內(nèi)的固定位置上切割雙鏈。這類限制性內(nèi)切酶的識(shí)別和切割的核苷酸都是專一的，因此，這種限制性內(nèi)切酶是DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一。

（III型）限制性內(nèi)切酶：也有專一的識(shí)別順序，但不是對(duì)稱的回文順序,在識(shí)別順序旁邊幾個(gè)核苷酸對(duì)的固定位置上切割雙鏈。但這幾個(gè)核苷酸對(duì)不是特異性的。因此，這種限制性內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生的一定長度DNA片段，具有各種單鏈末端。因此不能應(yīng)用于基因克隆。6.引物設(shè)計(jì)和選擇目的DNA序列區(qū)域時(shí)遵循下列原則： 引物長度約為16～30bp；引物中G+C含量通常為40%～60%，可按Tm＝4(G+C)+2(A+T)粗略估計(jì)引物的解鏈溫度；四種堿基應(yīng)隨機(jī)分布，在3’端不存在連續(xù)3個(gè)G或C，因這樣易導(dǎo)致錯(cuò)誤；引物3’端最好與目的序列閱讀框架中密碼子第一或第二位核苷酸對(duì)應(yīng)，以減少由于密碼子擺動(dòng)產(chǎn)生的不配對(duì)；在引物內(nèi)，尤其在3’端應(yīng)不存在二級(jí)結(jié)構(gòu)；兩引物之間尤其在3’端不能互補(bǔ)，以防出現(xiàn)引物二聚體，減少產(chǎn)量；引物5’端對(duì)擴(kuò)增特異性影響不大，可引入酶切位點(diǎn)或突變位點(diǎn)；引物不與模板結(jié)合位點(diǎn)以外的序列互補(bǔ)；簡(jiǎn)并引物應(yīng)選用簡(jiǎn)并程度低的密碼子；引物的濃度一般為0.1～0.5μmol/L，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性產(chǎn)物擴(kuò)增，引物濃度偏低則降低產(chǎn)量。7.dNTP 常用的濃度為20～200μmol/L，而且4種dNTP的終濃度相等，以減少合成中由于某種dNTP的不足而出現(xiàn)的錯(cuò)誤摻入；dNTP濃度過高雖可加快反應(yīng)速度，但會(huì)增加堿基的錯(cuò)誤摻入率，同時(shí)會(huì)抑制Taq DNA聚合酶的反應(yīng)活性；適當(dāng)?shù)牡蜐舛葧?huì)提高反應(yīng)的精確度；注意協(xié)調(diào)Mg2+濃度和dNTP濃度之間的關(guān)系。8.感受態(tài)

處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)菌經(jīng)低溫CaCl2處理后接受外源DNA的能力顯著增加。細(xì)菌處于容易吸收外源 DNA的狀態(tài)叫感受態(tài)。在自然條件下，很多質(zhì)粒都可通過細(xì)菌接合作用轉(zhuǎn)移到新的宿主內(nèi)，但在人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體中，一般缺乏此種轉(zhuǎn)移所必需的mob 基因，因此不能自行完成從一個(gè)細(xì)胞到另一個(gè)細(xì)胞的接合轉(zhuǎn)移。如需將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進(jìn)受體細(xì)菌，需誘導(dǎo)受體細(xì)菌產(chǎn)生一種短暫的感受態(tài),以攝取外源DNA。9.轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化是將外源DNA 分子引入受體細(xì)胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段。轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株，即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體(R-,M-)，它可以容忍外源DNA 分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。10.DNA連接酶

有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶；DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過牛小腸堿性磷酸酶CIP處理克服； 連接反應(yīng)的溫度在37℃時(shí)有利于連接酶的活性。但是在這個(gè)溫度下，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個(gè)折中的溫度，即12～16℃，連接12～16h（過夜），這樣既可最大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定；

pMD18-T Vector 是一種高效克隆PCR 產(chǎn)物（TA Cloning）的專用載體，該載體由pUC18 載體改建并在其3’端添加“T”而成

大部分耐熱性DNA聚合酶進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)都有在PCR產(chǎn)物的3’末端添加一個(gè)“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR產(chǎn)物的連接、克隆效率；

轉(zhuǎn)化是指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)入細(xì)菌的過程 11.α互補(bǔ)

重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞后，還需對(duì)轉(zhuǎn)化菌落進(jìn)行篩選鑒定。利用α互補(bǔ)現(xiàn)象進(jìn)行篩選是最常用的一種鑒定方法； α互補(bǔ)：質(zhì)粒載體上lacZ’基因編碼的α肽段與失去了正常氨基端的β-半乳糖苷酶突變受體菌之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象，由α互補(bǔ)而形成的有功能活性的β半乳糖苷酶，可以用Xgal顯色測(cè)定出來；任何攜帶著lacZ’基因的質(zhì)粒載體在轉(zhuǎn)化β半乳糖苷酶突變的大腸桿菌細(xì)胞后，在含有Xgal的培養(yǎng)基平板上形成藍(lán)色菌落，而含有重組質(zhì)粒載體的克隆往往是白色菌落。