第一篇：高效液相色譜儀檢測食肉中瘦肉精含量

液相色譜法測定肉類食品中瘦肉精殘留量

摘要瘦肉精是一種動物用藥，將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。近期，國內(nèi)雙匯火腿腸出現(xiàn)食品安全問題所引發(fā)的“瘦肉精”事件令國人對食品安全頗為堪憂，因此 ,對動物肉類或內(nèi)臟中鹽酸克倫特羅的監(jiān)督檢測顯得十分必要。為此南京科捷應(yīng)用LC-600液相色譜儀，探討肉類樣品中瘦肉精（鹽酸克倫特羅）的前處理方法 ,了解本市肉品中鹽酸克倫特羅的殘留情況。用水提取肉品中鹽酸克倫特羅殘留量 ,我們用固相萃取法對肉類樣品提取液進(jìn)行凈化和濃縮 ,可以有效去除干擾 ,簡便 ,靈敏度高 ,適于在日常檢測工作中推廣使用。殘留監(jiān)測作為食品安全的重要課題。使之越來越廣泛地應(yīng)用于不同類型獸藥、農(nóng)藥及毒素類有毒有害物質(zhì)的檢測分析之中。關(guān)鍵詞瘦肉精鹽酸克倫特羅獸藥農(nóng)藥殘留高效液相色譜法 液相色譜儀 液相色譜 色譜儀 分析儀器

本方法的應(yīng)用范圍

本方法的檢測思路可供食品中農(nóng)藥、獸藥殘留檢測的借鑒。如獸藥殘留動物源食品中硝基呋喃類殘留(呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋馬唑酮)磺胺類藥物殘留(磺胺對甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹嚼啉)喹諾酮類(嚼喹酸、萘啶酸)氯羥吡啶、莫能菌素和鹽霉素、乙氧酰胺苯甲酯、氯霉素、伊維菌素、克倫特羅、尼卡巴嗪、土霉素、四環(huán)素、金霉素(國標(biāo)GBT14931．1)阿莫西林、盤尼西林及喹乙醇等。農(nóng)藥殘留氨基甲酸酯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥、百草枯、殺草快、草甘膦及氨基膦酸、苯并瞇唑類殺菌劑、利谷隆、滅草隆及敵草隆、三嗪類多種農(nóng)藥的檢測。

2.實驗步驟

(1)儀器和設(shè)備

①LC-600高效液相色譜儀整套配置如下

P600寶石恒流泵1臺UV600紫外檢測器1臺

7725i六通進(jìn)樣閥1只WS600色譜工作站1套

②勻漿機(jī) ③旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ④電子天平：0.01mg ⑤紫外分光光度計

⑥離心機(jī) ⑦固相萃取儀 HGC-8 ⑧固相小柱

（2）試劑

①鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品 ②乙醚；分析純 ③正己烷：分析純 ④甲醇：色譜純

⑤鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)液 ⑥lmol／I。鹽酸溶液 ⑦0．05mol／L乙酸緩沖液

⑧0．3mol／L乙酸緩沖液 ⑨lmol／LNaOH溶液 ’

⑩甲醇液：甲醇—重蒸水(75+25)

(2)儀器和設(shè)備

②勻漿機(jī) ③旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ④電子天平：0.01mg ⑤紫外分光光度計

⑥離心機(jī) ⑦固相萃取儀 HGC-8 ⑧固相小柱

(3)測定步驟

①提取和凈化 取組織樣品10g，加入30ml lmol／L鹽酸溶液勻漿，超聲波振蕩3h，5000r／mln的速度離心10min，—上清液用lmo]／LNaOH溶液滴至堿性，乙醚或正已烷抽三3次，抽提液在水浴鍋上蒸發(fā)至5ml后上Silioa小柱，以除去大部分雜質(zhì)，洗脫液上Alu—mina

A小柱，將待測成分吸附在小柱上，用0．05mol幾乙酸緩沖液(pH7．0)洗滌小柱3次，o．3mol／L乙酸緩沖液洗脫待測成分，冷凍干燥，用0．5ml甲醇液溶解后取100uL供高效液相色譜儀檢測。

②測定

a．色譜條件

色譜柱：C18柱，250mmX4.6mm

流動相：甲醇—水(75+25)

流速：0．65ml／mill

檢測波長：243nm

進(jìn)樣量：100uL

b．色譜測定 分析樣品按上述儀器操作條件供高效液相色譜儀分析。

③空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進(jìn)行。

(4)檢測限和回收率

本方法在豬的肌肉和肝臟組織中的檢測限為0．001ug/g’回收率范圍為80％±20％

傳真025-83738955銷售熱線025-83738955

技術(shù)咨詢025-84372573售后服務(wù)025-84372572

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第二篇：高效液相色譜儀驗證方案

高效液相色譜儀驗證方案 驗證文件類別：技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)編號：V-A-C-004-0部門：驗證委員會 頁碼：共1頁，第1頁高效液相色譜儀驗證方案版 次： ¨ 新訂 ¨ 替代： 起 草： 年 月 日 部門審核： 年 月 日 審閱會簽： （驗證委員會）批 準(zhǔn)： 年 月 日 實施日期： 年 月 日 復(fù)印數(shù)： 批準(zhǔn)： 分發(fā)至：

目 錄1.設(shè)備基本情況1.1 概述1.2 基本情況3 職責(zé)3.1 驗證委員會3.2 工程處3.3 QC4 驗證內(nèi)容4.1 安裝確認(rèn)4.1.1 安裝確認(rèn)所需文件資料4.1.2 關(guān)鍵性儀表及消耗性備品4.1.3 評價儀器的安裝是否符合GMp及供應(yīng)商提議的要求4.1.4 起草標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2 校正4.2.1 紫外檢測器4.2.1.1 固定波長紫外檢測器波長示值誤差的校正4.2.1.2 可調(diào)波長紫外—可見光檢測器波長示值誤差和重復(fù)性誤差的檢定4.2.2 高壓泵4.3 運(yùn)行確認(rèn)4.3.1 紫外檢測器4.3.2 高壓泵4.4 性能確認(rèn)4.4.1 最小檢測濃度4.4.2 定性、定量測量的重復(fù)性4.5 擬訂再驗證項目及周期4.6 驗證結(jié)果評定與結(jié)論1.設(shè)備基本情況1.1 概述本高效液相色譜儀主要由一個二元泵、一個柱溫箱、一個可變紫外檢測器、一個帶有20μL定量環(huán)的進(jìn)樣器和一臺工作站組成，各部分由工作站軟件控制。本儀器主要用于分析原料和成品的有關(guān)物質(zhì)和含量。1.2 基本情況設(shè)備編號：設(shè)備名稱：高效液相色譜儀型 號：生產(chǎn)廠家： 供貨廠家： 安裝日期： 使用部門： 工 作 間： 保 管 員：2．驗證目的 為確認(rèn)高效液相色譜儀測試數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，性能穩(wěn)定，特制訂本驗證方案，對高效液相色譜儀進(jìn)行驗證。驗證過程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行，若因特殊原因確需變更時，應(yīng)填寫驗證方案變更申請及批準(zhǔn)書，報驗證委員會批準(zhǔn)。3 職責(zé)3.1 驗證委員會1.負(fù)責(zé)驗證方案的審批。2.負(fù)責(zé)驗證的協(xié)調(diào)工作，以保證本驗證方案規(guī)定項目的順利實施。3.負(fù)責(zé)驗證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核。4.負(fù)責(zé)驗證報告的審批。5.負(fù)責(zé)再驗證周期的確定。3.2 工程處1.負(fù)責(zé)設(shè)備的安裝、調(diào)試，并做好相應(yīng)的記錄。2.負(fù)責(zé)建立設(shè)備檔案。3.負(fù)責(zé)數(shù)字顯示器、記錄儀的校正。3.3質(zhì)量部1.負(fù)責(zé)驗證用對照品、樣品及其它消耗性備品的準(zhǔn)備2.負(fù)責(zé)備品、備件的保存。3.負(fù)責(zé)設(shè)備儀器的操作。4.負(fù)責(zé)記錄各種測試結(jié)果。5.負(fù)責(zé)擬訂再驗證項目及周期。6.負(fù)責(zé)收集各項驗證、試驗記錄，起草驗證報告，報驗證委員會。7.負(fù)責(zé)起草儀器使用、維護(hù)保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。4 驗證內(nèi)容4.1 安裝確認(rèn)4.1.1 安裝確認(rèn)所需文件資料 工程處在設(shè)備開箱驗收后建立設(shè)備檔案，整理使用手冊等技術(shù)資料，歸檔保存。4.1.2 關(guān)鍵性儀表及消耗性備品 列出關(guān)鍵性儀表及消耗性備品的目錄，匯總統(tǒng)計，作為儀器的關(guān)鍵資料，用來與儀器以后的變動做比較。4.1.3 評價儀器的安裝是否符合GMp及供應(yīng)商提議的要求 查閱設(shè)備采購定單、操作手冊等，列出設(shè)備安裝、使用所需條件，包括溫度、濕度、通風(fēng)條件、電路等。檢查儀器安裝與使用所處的環(huán)境條件，是否符合上述要求。4.1.4 起草標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程--高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程--高效液相色譜儀維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程--高效液相色譜儀校正規(guī)程4.2 校正4.2.1 紫外檢測器4.2.1.1 固定波長紫外檢測器波長示值誤差的校正通常用一塊濾光片獲得指定波長的光者，可小心將濾光片取出，用高精度的分光光度計檢定。4.2.1.2 可調(diào)波長紫外—可見光檢測器波長示值誤差和重復(fù)性誤差的檢定取120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/l硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，搖勻，即得重鉻酸鉀的硫酸溶液將檢測器與記錄儀聯(lián)好，接通電源預(yù)熱穩(wěn)定后，用注射器注入重鉻酸鉀的硫酸溶液將吸收池充滿，在235nm、257nm、313nm、350nm波長處檢定儀器的波長示值誤差。將記錄紙速調(diào)到4mm/min，將檢測器波長調(diào)到較規(guī)定波長低5nm處（例如檢定257nm時，檢測器波長先調(diào)到252nm，調(diào)記錄筆到中間位置，然后每15秒改變1nm，直至規(guī)定的波長高5nm處，記錄各點(diǎn)的吸收度，分別找出最小與最大點(diǎn)的波長與標(biāo)準(zhǔn)波長之差即為波長示值誤差。每點(diǎn)重復(fù)測3次，最小與最大值之差即為波長重復(fù)性誤差。標(biāo) 準(zhǔn)：固定波長紫外檢測器波長示值誤差應(yīng)<±2nm可調(diào)波長紫外-可見檢測器波長示值誤差應(yīng)<±2nm，重復(fù)性誤差<±1nm。基線漂移≤5×10-3（AU/h）；基線噪聲≤5×10-4（AU）最小檢測濃度（靜態(tài)）_ch 4×10-8g/ml（奈的甲醇溶液）。4.2.2 高壓泵校正泵流量設(shè)定值：將儀器的輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器連接好，以甲醇為流動相，按表1設(shè)定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準(zhǔn)確收集至規(guī)定的時間，稱重，按下式計算SS。表1 SS的檢定流量設(shè)定值（ml/min）0.51.02.0測量次數(shù)333收集流動相時間（min）864允許誤差3%2%2%計算公式：Fm=(W2-W1)/ρ·t Ss =(Fm-Fs)/Fs ×100%其中：Fm為流量實測值(ml/min)，F(xiàn)s為流量設(shè)定值(ml/min)，W2為容量瓶加流動相的重量(g)，W1為容量瓶的重量(g)，ρ為實驗溫度下流動相的密度(g/cm3)，t為收集流動相的時間(min)4.3 運(yùn)行確認(rèn)進(jìn)行運(yùn)行確認(rèn)的目的是在不使用任何試樣的條件下，確認(rèn)該儀器能夠達(dá)到設(shè)計要求。4.3.1 紫外檢測器基線漂移和基線噪聲的測定。將儀器的各部分連接好，紫外檢測器波長調(diào)到254nm，流動相為100%甲醇，流速為1.0ml/min，紙速為5mm/min，吸收度范圍選擇最靈敏檔，開機(jī)，待基線穩(wěn)定后，記錄基線30~40分鐘，計算基線漂移和噪聲?；€漂移應(yīng)≤5×10-3(AU/h),基線噪聲應(yīng)≤5×10-4(AU)。4.3.2 高壓泵流量穩(wěn)定性誤差SR的檢定。將儀器的輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器連接好，以甲醇為流動相，按表2 設(shè)定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準(zhǔn)確收集至規(guī)定的時間，稱重，按下式計算SR。表2 SR 的檢定流量設(shè)定值（ml/min）0.51.02.0測量次數(shù)333收集流動相時間（min）864允許誤差3%2%2%計算公式：SR =(Fmax-Fmin)/F×100% 其中：Fmax為同一組測量中流量最大值（ml/min），F(xiàn)min為同一組測量中流量最小值（ml/min），F(xiàn) 為同一組測量中算術(shù)平均值（ml/min）。4.4性能確認(rèn)4.4.1 最小檢測濃度在靜態(tài)條件下，用注射器注入4×10-8g/ml萘的甲醇溶液，樣品峰高應(yīng)大于或等于兩倍基線燥聲峰高，按下式計算最小檢測濃度。Ct=2·HN.C/H式中：Ct:最小檢測濃度（g/ml）HN:噪聲峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y高度cm）C:樣品濃度（g/ml）H:樣品峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y高度cm）4.4.2 定性、定量測量的重復(fù)性將1×10—4g/ml 萘的甲醇溶液，注入高效液相色譜儀中，檢測波長254nm，流動相為甲醇，流速1.0ml/min。重復(fù)進(jìn)樣8次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），應(yīng)小于等于1.5%。4.5擬訂再驗證項目及周期 質(zhì)量處負(fù)責(zé)根據(jù)設(shè)備儀器情況，確定再驗證周期項目及周期，報驗證委員會審核。4.6 驗證結(jié)果評定與結(jié)論QC負(fù)責(zé)收集各項驗證、試驗結(jié)果記錄，起草驗證報告，報驗證委員會。驗證委員會負(fù)責(zé)對驗證結(jié)果進(jìn)行綜合評審，做出驗證結(jié)論。

附件1關(guān)鍵性儀表及消耗性備品情況儀器名稱儀器編號型 號關(guān)鍵性儀表儀表名稱生產(chǎn)廠家型號校正證書編號保存處校正周期消耗性備品品名生產(chǎn)廠家型號數(shù)量單位保存處 確認(rèn)使用部門 年 月 日工程部 年 月 日驗證委員會 年 月 日

附件2 儀器安裝條件檢查記錄設(shè)備名稱設(shè)備編號型 號安裝條件要求實際安裝條件溫度10～30℃濕度小于65%通風(fēng)水電氣汽

其它條件

工作臺不受陽光直射。室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性氣體或其它影響測定的氣體干擾。周圍應(yīng)無影響測定的強(qiáng)電場、磁場和強(qiáng)烈震動。確認(rèn)使用部門 年 月 日工程部 年 月 日驗證委員會 年 月 日

附件3高效液相色譜儀校正記錄設(shè)備名稱設(shè)備編號型 號溫度：濕度：甲醇密度：泵流量設(shè)定值誤差FstW2W1FmFm均值Ss標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定判定檢測者 復(fù)核人 年 月 日確認(rèn)使用部門 年 月 日工程部 年 月 日驗證委員會 年 月 日附件4高效液相色譜儀運(yùn)行確認(rèn)記錄設(shè)備名稱設(shè)備編號型 號測試項目 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定實測結(jié)果結(jié)論 實測結(jié)果 結(jié)論 判定基線漂移≤5×10-3(AU/h)基線噪聲≤5×10-4(AU)流量穩(wěn)定性檢測者 復(fù)核者 年 月 日復(fù)核者 年 月 日 確認(rèn)使用部門 年 月 日工程部 年 月 日驗證委員會 年 月 日附件5 高效液相色譜儀性能確認(rèn)記錄設(shè)備名稱設(shè)備編號型 號測試項目標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定測定結(jié)果判定最小檢測濃度＜4×10－8g/ml定性定量重復(fù)性RSD≤1.5%檢測者 復(fù)核者 年 月 日復(fù)核者 年 月 日確認(rèn)使用部門 年 月 日工程部 年 月 日驗證委員會 年 月 日附件6 高效液相色譜儀再驗證項目及周期設(shè)備編號： 設(shè)備名稱： 型號： 序號項目標(biāo)準(zhǔn)驗證方法周期1線路連接檢查線路、接地2附件檢查檢查操作記錄、操作手冊等3清潔清潔儀器外部4泵流量設(shè)定值和穩(wěn)定性基線漂移和基線噪聲最小檢測濃度定性定量重復(fù)性詳見驗證方法起草： 工程部長： 驗證委員會： 年 月 日

第三篇：LC1620A高效液相色譜儀 生產(chǎn)廠家

LC1620A高效液相色譜儀價格優(yōu)惠，專業(yè)生產(chǎn)銷售廠家：鄭州南北儀器設(shè)備有限公司（南北設(shè)備集團(tuán)），南北通過向客戶提供領(lǐng)先的技術(shù)、產(chǎn)品，更為優(yōu)異的質(zhì)量和服務(wù)，更高的性價比價值體來追求行業(yè)第一 可靠的性能.穩(wěn)定準(zhǔn)確的輸液能力，是高精度分析的可靠保證。

LC1620A高壓恒流泵采用了專利的端面凸輪設(shè)計，最大程度避免了加工和裝配誤差，結(jié)合經(jīng)過精密計算設(shè)計的凸輪曲線，從而獲得高精度流量。

豐富的功能紫外檢測器具有：

.豐富的功能

.波長自動校準(zhǔn)和修正功能

.波長掃描功能

.波長時間程序功能

.檢測池最大耐壓為15Mpa，便于串聯(lián)其他檢測器

自動化的操作.功能強(qiáng)大的智能化反控工作站，所有系統(tǒng)設(shè)置均可在電腦上完成。配合準(zhǔn)確度和重復(fù)性高的自動進(jìn)樣器，您只需在軟件上設(shè)置好條件，即能輕松完成整個分析過程。

更強(qiáng)的檢測能力.除了常規(guī)的紫外檢測器，LC1620A還可配置示差折光檢測器和蒸發(fā)光散射檢測器。無論您的實驗室是從事制藥、質(zhì)量控制、食品安全、化學(xué)、環(huán)境等何種應(yīng)用領(lǐng)域，LC1620A都能為您提供適合的行之有效的檢測方案，幫助您分析各種各樣的化合物，全面滿足您分析檢測的需求。

多方位的細(xì)節(jié)設(shè)計.流量監(jiān)控功能：對流動相進(jìn)行實時監(jiān)控，雙預(yù)警設(shè)計，當(dāng)達(dá)到設(shè)定值時，系統(tǒng)會報警提示或自動停泵，有效保護(hù)HPLC系統(tǒng)。

.柱塞桿在線清洗功能： 高壓恒流泵采用雙密封圈設(shè)計，有效清洗緩沖鹽，減少關(guān)鍵部件磨損，延長使用壽命。

第四篇：豬肉中瘦肉精的檢測

豬肉中瘦肉精的檢測

摘 要

鑒于鹽酸克倫特羅(瘦肉精)在動物性食品中的殘留對人體和國民經(jīng)濟(jì)造成了巨大的危害，本文介紹了動物肌肉組織中殘留鹽酸克倫特羅(瘦肉精)的幾種分析檢測方法，并對未來的發(fā)展方向作了展望。

關(guān)鍵詞：瘦肉精 GC-MS HPLC ELISA 引言

瘦肉精是一類藥物，而不是某一種特定的藥物，任何能夠促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。在中國，通常所說的瘦肉精是指克倫特羅(Clenbuterol，CLB)【1】，而普通消費(fèi)者則把此類藥物統(tǒng)稱為瘦肉精。當(dāng)它們以超過治療劑量5—10倍的用量用于家畜飼養(yǎng)時，即有顯著的營養(yǎng)“再分配效應(yīng)”——促進(jìn)動物體蛋白質(zhì)沉積、促進(jìn)脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率，因此，β—受體激動劑被大量非法用于畜牧生產(chǎn)，其中最常用的有克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等。長期食用含有β—受體激動劑殘留的食品將對人體健康產(chǎn)生極大的危害，可誘發(fā)和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、臉、頸部骨骼肌震顫；另外還能引起代謝紊亂，對糖尿病人可發(fā)生酸中毒或酮中毒【2】。

鹽酸克倫特羅(Clenbuteerol，CLB)，又名克喘素、氨哮素、雙氯醇胺，俗名瘦肉精，化學(xué)名為α—[(叔丁氨基)甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇鹽酸鹽，分子式為C12 H18Cl12N2O?HCl，相對分子質(zhì)量為313.65。

目前，檢測瘦肉精殘留常用的色譜技術(shù)有高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法(GC—MS)、高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC—MS)、毛細(xì)管電泳法(CE)等。中國已將高效液相色譜法（HPLC）作為檢測飼料中鹽酸克倫特羅殘留的半確證法，將GC—MS 法定為確證性方法，主要用于最后確認(rèn)和仲裁。對于動物性食品，GB/T 5009.192—2003 “動物性食品中克倫特羅殘留量的測定”規(guī)定的第一法為氣相色譜—質(zhì)譜法，第二法為高效液相色譜法，第三法為酶聯(lián)免疫法。下面將會對這三種方法逐一進(jìn)行說明，并簡單介紹毛細(xì)管電泳法（CE）【3】。2 動物性食品（豬肉）中鹽酸克倫特羅的檢測方法

2.1 氣相色譜—質(zhì)譜法(GC—MS)

GC—MS法優(yōu)點(diǎn)是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)結(jié)合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。GC—MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低【4】。下面將以島津公司采用的GC—MS法檢測瘦肉精為例，對儀器與試劑的選擇、樣品的處理方法等方面進(jìn)行介紹。

2.1.1儀器與試劑

儀器：島津GCMS—QP2010 Plus；

試劑：鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CLB）標(biāo)準(zhǔn)品，內(nèi)標(biāo)（Clenbuterol—D9，CLB—D9），N，O—雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA），C18固相萃取小柱（100 mg，3 mL）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取鹽酸克倫特羅和內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配成濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，放置于4℃冰箱中避光保存，使用時用甲醇稀釋成1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液和內(nèi)標(biāo)使用液。

2.1.2 分析條件

色譜柱：Rtx—5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)進(jìn)樣口溫度：220℃ 柱溫程序：70℃(0.6 min)—25℃/min—220℃(6 min)—25℃/min—280℃(5 min)恒線速度方式，柱流量0.9 mL/min 不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣時間1 min 接口溫度：280 ℃ 離子源溫度：200 ℃ 溶劑切割時間：8 min 檢測離子：

CLB：檢測 m/z 86，187，243，262，CLB—D9：檢測 m/z 95，187，262 以克倫特羅(m/z86)與內(nèi)標(biāo)峰(m/z 95)的峰面積比校準(zhǔn)定量。

2.1.3 樣品制備

精密稱取(2 ± 0.01)g 己絞碎的豬肉于具塞離心管中，加入4 mL 0.1 mol/L 鹽酸溶液，旋渦振蕩5 min，超聲10 min，12000 r/min 離心5 min后，傾出上清液，沉淀再分別用0.1 mol/L 鹽酸4 mL，2 mL 兩次提取，提取方法同上，合并上清液。

將上清液全部上樣至C18 柱，用5 mL 水清洗小柱后，使用0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸溶液=1：1(v/v)的酸化甲醇解析，加磷酸緩沖液調(diào)至pH=7，定容至2 mL。將該溶液以0.1 mL/min的流速推過聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）毛細(xì)管整體柱萃取后，用0.2 mL 的甲醇解析，加50 μL 的內(nèi)標(biāo)使用液后以氮吹儀濃縮至干。加入100 μL 甲苯和100 μLBSTFA，渦旋混勻30 s，置于微波爐中小火衍生5 min。衍生反應(yīng)完成后取出冷卻至室溫后再加入300 μL 甲苯，充分混勻，待氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)樣。

2.1.4 結(jié)論

該法在樣品提取后，用C18 小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整體柱進(jìn)一步富集凈化，經(jīng)N，O—雙三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，選擇離子監(jiān)測方式進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜測定。

該方法具有檢測限低、重現(xiàn)性好、回收率高、樣品用量少等特點(diǎn)，適合于豬肉樣品中鹽酸克倫特羅的定性、定量測定。但GC—MS的缺點(diǎn)是檢測過程煩瑣、檢測時間長、需貴重儀器、難于操作、價格昂貴。

2.2 高效液相色譜法(HPLC)【5】

HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的β—激動劑及其代謝產(chǎn)物，而且HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實現(xiàn)分析過程的自動化。

HPLC 法【6】中常用的檢測器有電化學(xué)檢測器、紫外檢測器。

2.2.1 材料與儀器

甲醇：色譜純；

試驗用水：均為超純水； 其余試劑：均為分析純；

鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所；

鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液： 取鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品24.98 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配成含鹽酸克倫特羅1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，貯于冰箱中，不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液由標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋而得；

Dionex AT330(美國)高效液相色譜儀：由P680四元泵、UVD170U紫外檢測器和AT330恒溫箱組成；

超聲波提取器(SB25200BTD)； 離心機(jī)(6 000 r/min)；

DSY22型電熱恒溫水浴鍋。

2.2.2 色譜條件

色譜柱采用Diamonsil ODS2C18 柱(5 μm，150 mm ×4.6 mm I.D)；檢測波長為244 nm； 流動相甲醇∶水=26 ∶74；流速1.0 mL /min； 柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20μL。

2.2.3 樣品制備

取10 g絞碎肉試樣，加0.1 mol/L高氯酸20 mL 勻漿，超聲提取20 min，80℃ 加熱30 min，冷卻后離心(4 000 r/min)15 min。沉淀加0.1 mol/L高氯酸5 mL洗滌、離心，將上清液合并，用1 mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至11，加入25 mL乙醚，振蕩提取20 min，回收有機(jī)相，再用20 mL乙醚重復(fù)萃取2次，合并有機(jī)相，蒸發(fā)至干。用0.1 mol/L HC1溶解，純水定容至10 mL。

2.2.4 結(jié)論

目前，中國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15ng/g，其優(yōu)點(diǎn)是專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測精確度較高，而且假陽性率低，與GC—MS 法相比樣品不必衍生【7】；缺點(diǎn)是樣品處理時間長，檢測

過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實際應(yīng)用中受到一定的限制【8】。2.3 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA）

目前，檢測CLB較高效的免疫分析技術(shù)是ELISA技術(shù)。早在1992年，Oriundi就通過ELISA法對尿液和血清中的β—興奮劑殘留進(jìn)行直接分析，該方法既適于實驗室大量樣品的檢測，也適于屠宰場地少量樣品的迅速檢測【9】。目前，英國的Randox Laborato—ries Ltd和德國的r—biopharm公司均開發(fā)出了檢測肉品、飼料中CLB殘留的ELISA試劑盒。中國在應(yīng)用EIA檢測CLB方面的研究起步晚，但近幾年取得了明顯的進(jìn)展，目前已有幾種試劑盒研制開發(fā)成功【10】。

2.3.1 測定原理

“瘦肉精”（克侖特羅）競爭酶標(biāo)免疫檢測的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。酶聯(lián)板的微孔包被有針對兔抗克侖特羅特異性抗體的羊抗體【11】（第2抗體）。加入兔抗克侖特羅特異性抗體（第1抗體）與第2抗體結(jié)合而被固定，洗滌后加入標(biāo)準(zhǔn)液或樣品溶液與酶結(jié)合物（酶標(biāo)記抗原），標(biāo)準(zhǔn)液或樣品中的游離抗原與酶標(biāo)抗原競爭兔抗克侖特羅特異性抗體上有限的結(jié)合位點(diǎn)【12】。通過洗滌除去沒有與特異性抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原，加入酶基質(zhì)（過氧化脲）和發(fā)色劑（四甲基聯(lián)苯胺）并孵育，結(jié)合到板上的酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的底物。加酸終止反應(yīng)后，顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色?！?3】在單波長450納米處測吸光度，吸收光強(qiáng)度與樣品中的克侖特羅濃度成反比。

2.3.2 樣品制備

取粉碎的肉樣5克，與25毫升50 mmol/L HCl混合，振蕩1.5小時。稱6克均質(zhì)物，加入離心管中。10~15℃條件下4 000轉(zhuǎn)/分鐘或更高的轉(zhuǎn)速離心15分鐘。轉(zhuǎn)移上清液到另1個離心管中，加300微升1摩爾/升氫氧化鈉混合15分鐘。加入4毫升500毫摩爾/升磷酸二氫鉀緩沖液（pH值3.0），簡單混合，并在4℃保存至少1.5小時或過夜。10~15℃條件下4 000轉(zhuǎn)/分鐘或更高的轉(zhuǎn)速離心15分鐘。分離全部上清液，使其升至室溫，然后用C18柱純化【14】。

C18柱純化樣品必須在室溫條件下，并嚴(yán)格控制過柱時流速。用3毫升甲醇洗滌柱子，控制流速為1滴/秒。用2毫升洗滌液（50毫摩爾/升磷酸二氫鉀緩沖液pH值3.0）洗滌柱子。將肉樣的全部上清液進(jìn)柱，控制流速為每4秒1滴。用2毫升洗滌液，洗滌柱子，流速為1滴/秒。用正壓除去殘留的流體并用空氣或氮?dú)獯?分鐘，干燥柱子。用1毫升甲醇洗脫樣品，控制流速為每4秒1滴。在50~60℃并在弱空氣或氮?dú)饬飨峦耆舭l(fā)甲醇溶劑【15】。用1毫升蒸餾水溶解干燥的殘留物，取20微升進(jìn)行分析。取10克飼料樣品，用10毫摩爾/升鹽酸溶解，連續(xù)震蕩10分鐘，用濾紙過濾，在濾液中加入120微升1毫摩爾/升氫氧化鈉進(jìn)行中和，檢查pH值，用氫氧化鈉控制pH值在6.5~7.5之間，取上清液20微升進(jìn)行分析，稀釋倍數(shù)為25。

2.3.3 測定步驟

所有試劑及樣品在開始檢測前必須回升至室溫，測定操作在20~24℃下進(jìn)行。用盒中緩沖液以體積1∶10的比例稀釋實際用量的克侖特羅抗體濃縮液，稀釋前混勻抗體，不要猛烈振蕩。取出試驗需要數(shù)量的微孔板條，足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做2個平行試驗，記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。剩余的微孔板條

放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，2~8℃冷藏。

每個微孔底部加100微升稀釋后的抗體溶液，室溫孵育微孔板15分鐘，避免光線照射。孵育的同時進(jìn)行酶標(biāo)記物的稀釋，洗板，甩出孔中液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打，直到紙上無明顯水跡（拍打3次），以保證完全除去孔中的液體。

用250微升蒸餾水充入孔中，再次甩掉微孔中液體，并在吸水紙上拍打，重復(fù)操作2次。加洗滌水的移液器管尖必須置于微孔上方約0.5厘米處打出洗滌水，避免將板孔中的游離抗體帶入洗滌水中。洗板后立即進(jìn)行下步操作，不要讓板孔干燥【16】。加入20微升標(biāo)準(zhǔn)品和處理好的樣品到各自的微孔底部，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做2個平行實驗。加入100微升稀釋的酶標(biāo)記物至微孔底部，輕輕震蕩微孔，并在桌面上作圓周運(yùn)動以混勻。移液器管尖不要接觸到孔中的混合物，避免交叉污染。室溫孵育微孔板30分鐘，避免放置，盡可能每隔10分鐘輕輕振蕩1次，準(zhǔn)備好酶基質(zhì)，并注意避光放置。

在洗板過程中加洗滌水的移液器置于微孔板上方0.5厘米處打出洗滌水，避免將板孔中的游離酶標(biāo)記物帶入洗滌水中。不要讓板孔干燥，迅速加入100微升酶基質(zhì)到每個孔中，操作步驟要迅速，避免反應(yīng)時間相差過長。移液器管尖不要接觸微孔中的混合物，避免交叉污染。室溫暗處孵育微孔板15分鐘，暗處避光放置，同時，準(zhǔn)備好反應(yīng)停止液。每孔加入100微升反應(yīng)停止液，混勻，60分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測量450納米處波長吸光度值【17】。

2.3.4 結(jié)論

ELISA的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、操作簡便、檢測迅速、價格便宜；缺點(diǎn)是仍不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測，而且假陽性率高。

故而，ELISA方法只是一種大范圍的篩選方法，它不能起到定性和定量的作用，檢測結(jié)果出現(xiàn)可疑，可以用其他檢測方法進(jìn)行定性和定量分析。

2.4 毛細(xì)管電泳法（CE）【18】

毛細(xì)管電泳法（CE）非常適用于難以用傳統(tǒng)的液相色譜法分離的離子化樣品的分離與分析。優(yōu)點(diǎn)是有很大的靈活性許多分離參數(shù)如緩沖液的組成和pH 值毛細(xì)管的類型以及所使用的電場的波形都可以調(diào)節(jié)，操作簡便，所需樣品量極少，一般只需幾納升。缺點(diǎn)是檢測時間仍很長，不能滿足在線檢測，儀器復(fù)雜、缺乏配套的檢測器 CLB檢測技術(shù)的未來趨勢和發(fā)展方向

當(dāng)前，造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國內(nèi)外檢測CLB 的方法、手段還不完善，還沒有建立準(zhǔn)確、迅速、方便、精確的檢測方法。鑒于目前國內(nèi)外檢測CLB 各種方法的進(jìn)展情況以及CLB 濫用及殘留的嚴(yán)峻性，建立一種克服上述各種檢測方法缺點(diǎn)的簡便、快速、精確、可實現(xiàn)在線檢測的CLB 技術(shù)勢在必行。

生物傳感器技術(shù)(Biosensor，BS)【19】和滴金免疫技術(shù)(DIGFA)【20】是兩種快速、高效的殘留物分析技術(shù)，如能研究、開發(fā)運(yùn)用到檢測生物樣品中CLB的殘留可能會產(chǎn)生理想的效果。

納米材料是非常敏感的化學(xué)和生物傳感器，固定有能選擇性結(jié)合靶分子的生物探針的納米傳感器稱為納米生物傳感器。它們能和生物芯片、免疫技術(shù)、標(biāo)記

技術(shù)等技術(shù)手段結(jié)合，從而使檢測更加高效、簡便。與液質(zhì)聯(lián)用分析克倫特羅的方法相比，基于碳納米管的無標(biāo)記電化學(xué)免疫傳感器免除了樣品分析前的固相萃取及純化步驟，使得操作方法更簡便。與ELISA 法相比，該傳感器同樣具有樣品處理簡單及高能量的優(yōu)點(diǎn)。此外，該傳感器的方法很少受到基質(zhì)效應(yīng)的影響，或者至少比在ELISA 方法中的影響小【21】。

納米金免疫標(biāo)記技術(shù)，是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到納米金顆粒表面的包被過程，由于金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中【22】。

可以預(yù)見的是，在未來一定會有更加靈敏、快捷、方便的檢測方法問世，從而使豬肉中瘦肉精的檢測問題得到徹底解決。

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第五篇：瘦肉精檢測

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所關(guān)于

外銷生豬“瘦肉精”檢測的報告

開封市動物衛(wèi)生監(jiān)督所：

為了保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，保障人民身體健康，全面推進(jìn)和諧社會的創(chuàng)建，2010年6月21日，通許縣畜牧局下發(fā)文件開展世博會期間整頓生豬經(jīng)營處等檢疫秩序活動，特別是重點(diǎn)開展 “瘦肉精”的檢測工作，堅決杜絕在飼料中使用萊克多巴胺及克倫特羅等違禁藥物，整頓和規(guī)范飼料、獸藥市場，嚴(yán)厲打擊假冒偽劣產(chǎn)品，實現(xiàn)全縣生豬生產(chǎn)的安全無污染，確保外銷到市場的是“放心豬”。

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所認(rèn)真學(xué)習(xí)貫徹了縣局文件精神，開展以“瘦肉精”和重大動物疫病為主的檢測檢驗；加大對使用“瘦肉精”的打擊力度，建立生豬疫病防治體系，確保生豬及其加工產(chǎn)品的質(zhì)量安全。對檢測出“瘦肉精”的生豬產(chǎn)地在3個月內(nèi)禁止外銷，經(jīng)檢測合格后重新申請進(jìn)入市場。逐步推行生豬產(chǎn)品市場準(zhǔn)入制度、“一豬一標(biāo)一碼”標(biāo)識管理制度。對生豬“瘦肉精”進(jìn)行重點(diǎn)抽檢，檢驗中凡發(fā)現(xiàn)有“瘦肉精”的生豬均進(jìn)行銷毀，并向產(chǎn)地通報和封停該地生豬進(jìn)入市場。

據(jù)匯總統(tǒng)計，2010年6月至8月份我縣共外銷生豬8603頭。分批次發(fā)往浙江省慈溪市、江蘇省無錫市、安徽省和縣、浙江省寧波市、江蘇省常州市、廣東省湛江市、安徽省合肥市、安徽省淮南市、安徽蒙城縣等九個城市和地區(qū)?！笆萑饩睓z測全部呈現(xiàn)陰性。其中6月份外銷生豬2053頭，抽檢生豬尿樣110多個，檢測結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，合格率達(dá)到100%。7月份外銷生豬3190頭，抽檢生豬尿樣160多個，檢測結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，合格率達(dá)到100%。8月份外銷生豬3360頭，抽檢生豬尿樣170多個，檢測結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，合格率達(dá)到100%。

二○一○年九月八日

主題詞：瘦肉精 抽檢 報告

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所二○一○年九月八日印