第一篇：供電技術(shù)心得體會(huì)

心得體會(huì)

通過(guò)這次課程設(shè)計(jì)，使我得到了很多的經(jīng)驗(yàn)，并且鞏固和加深以及擴(kuò)大了專(zhuān)業(yè)知識(shí)面，鍛煉綜合及靈活運(yùn)用所學(xué)知識(shí)的能力，正確使用技術(shù)資料的能力。知識(shí)系統(tǒng)化能力得到提高,設(shè)計(jì)過(guò)程中運(yùn)用了很多的知識(shí)，因此如何將知識(shí)系統(tǒng)化就成了關(guān)鍵。如本設(shè)計(jì)中用到了工廠供電的絕大多數(shù)的基礎(chǔ)理論和設(shè)計(jì)方案，因此在設(shè)計(jì)過(guò)程中側(cè)重了知識(shí)系統(tǒng)化能力的培養(yǎng)，為今后的工作和學(xué)習(xí)打下了很好的理論基礎(chǔ)。懂得了理論與實(shí)際相結(jié)合是很重要的，只有理論知識(shí)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，只有把所學(xué)的理論知識(shí)與實(shí)踐相結(jié)合起來(lái)，從理論中得出結(jié)論，才能真正為社會(huì)服務(wù)，從而提高自己的實(shí)際動(dòng)手能力和獨(dú)立思考的能力。從小事做起，從身邊做起，此次的課程設(shè)計(jì)是根據(jù)煤礦企業(yè)的變電所的電力主接線(xiàn)而設(shè)計(jì)的，但是，這并不妨礙對(duì)知識(shí)的融會(huì)貫通，只有對(duì)知識(shí)的深刻地理解與認(rèn)識(shí)，才能應(yīng)對(duì)以后千變?nèi)f化的工作崗位上遇到的艱難險(xiǎn)阻。

雖然這次課程設(shè)計(jì)我還有很多的不會(huì)，但是通過(guò)對(duì)課本知識(shí)的深刻的解讀與自己的認(rèn)識(shí)，我還是沒(méi)有放棄，而是更加的努力的去學(xué)習(xí)知識(shí)，也許這次課程設(shè)計(jì)并不算什么，它只是一個(gè)開(kāi)始，它開(kāi)啟了我們未來(lái)工作中的從事的各種設(shè)計(jì)的種種。我們是電專(zhuān)業(yè)的，此生必定與其結(jié)下不解的緣，我會(huì)更加的去學(xué)習(xí)，去了解，去愛(ài)上這門(mén)學(xué)科，一生一世。

第二篇：風(fēng)電技術(shù)清單

附件：風(fēng)電工程主要技術(shù)文件清單

1.綜合性標(biāo)準(zhǔn)或文件：

1.1 建設(shè)工程質(zhì)量管理?xiàng)l例 中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第279 號(hào)； 1.2 工程質(zhì)量監(jiān)督工作導(dǎo)則 建質(zhì)〔2003〕162 號(hào)； 1.3 電力建設(shè)工程質(zhì)量監(jiān)督規(guī)定(暫行)電建質(zhì)監(jiān)〔2005〕52 號(hào)； 1.4 電力建設(shè)文明施工規(guī)定及考核辦法 電建〔1995〕543 號(hào)； 1.5 電力建設(shè)工程施工技術(shù)管理導(dǎo)則 國(guó)電電源〔2002〕896 號(hào)； 1.6 實(shí)施工程建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)制性監(jiān)督規(guī)定（2000）建設(shè)部令81號(hào) 1.7 工程建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)制性條文(房屋建筑部分)建標(biāo)〔2002〕219 號(hào)； 1.8 工程建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)制性條文(電力工程部分)建標(biāo)[2006]102 號(hào)； 1.9 電力建設(shè)安全健康與環(huán)境管理工作規(guī)定 國(guó)電電源〔2002〕49 號(hào)； 1.10 電力建設(shè)安全工作規(guī)程（變電所部分）DL5009.3-2005 1.11 電力建設(shè)安全工作規(guī)程（架空電力線(xiàn)路部分）DL5009.2-2004 1.12 測(cè)繪資質(zhì)管理規(guī)定 國(guó)測(cè)法字〔2004〕4 號(hào)； 1.13 建設(shè)工程勘察設(shè)計(jì)資質(zhì)管理規(guī)定（2007）建設(shè)部令160 號(hào)； 1.14 建筑業(yè)企業(yè)資質(zhì)管理規(guī)定（2007）建設(shè)部令159 號(hào)； 1.15 工程建設(shè)施工企業(yè)管理規(guī)范

GB/T50430－2007 1.16 建設(shè)工程勘察設(shè)計(jì)管理?xiàng)l例

國(guó)務(wù)院令第293號(hào) 1.17 工程建設(shè)勘察企業(yè)管理規(guī)范

GB/T50380－2006 1.18 工程建設(shè)設(shè)計(jì)企業(yè)管理規(guī)范

GB/T50379－2006 1.19 關(guān)于加強(qiáng)測(cè)繪質(zhì)量管理的若干意見(jiàn) 國(guó)測(cè)國(guó)字[2008]8號(hào) 1.20 建設(shè)項(xiàng)目工程總承包管理規(guī)范

GB/T50358－2005 1.21建筑施工現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) JGJ 146 — 2004 1.22 施工現(xiàn)場(chǎng)臨時(shí)用電安全技術(shù)規(guī)范 JGJ 46 — 2005 1.23 電力工程調(diào)試能力資格管理辦法（2010版）中電建協(xié)〔2010〕51號(hào) 1.24建筑施工特種作業(yè)人員管理規(guī)定 建質(zhì)[2008]75號(hào) 1.25 工程監(jiān)理企業(yè)資質(zhì)管理規(guī)定（2007）建設(shè)部令158號(hào)； 1.26 建設(shè)工程項(xiàng)目管理規(guī)范 GB/T50326-2006； 1.27 建設(shè)工程監(jiān)理規(guī)范 GB 50319-2000； 1.28 國(guó)家重大建設(shè)項(xiàng)目文件歸檔要求與檔案整理規(guī)范 DA/T28-2002；

1.29 建設(shè)工程文件歸檔整理規(guī)范 GB/T50328-2001； 1.30 科學(xué)技術(shù)檔案案卷構(gòu)成的一般要求）GB/T 11822—2008 1.31 電子文件歸檔管理規(guī)范 GB/T 11894—2002 1.32 照片檔案管理規(guī)范

GB/T 11821—2002 1.33 重大建設(shè)項(xiàng)目檔案驗(yàn)收辦法

檔發(fā)〔2006〕2號(hào)

2.風(fēng)電工程專(zhuān)用標(biāo)準(zhǔn)

2.1 風(fēng)電場(chǎng)工程可行性研究報(bào)告設(shè)計(jì)概算編制辦法及計(jì)算標(biāo)準(zhǔn) FD001—2007 2.2 風(fēng)電場(chǎng)工程等級(jí)劃分及安全標(biāo)準(zhǔn)（試行）FD002—2007 2.3 風(fēng)電機(jī)組地基基礎(chǔ)設(shè)計(jì)規(guī)定（試行）FD003—2007 2.4 風(fēng)電場(chǎng)工程概算定額 FD004—2007 2.5 風(fēng)力發(fā)電廠設(shè)計(jì)技術(shù)規(guī)范 DL/T 5383—2007 2.6 風(fēng)力發(fā)電工程施工組織設(shè)計(jì)規(guī)范 DL/T 5384—2007 2.7 風(fēng)力發(fā)電場(chǎng)項(xiàng)目建設(shè)工程驗(yàn)收規(guī)程 DL /T 5191—2004 2.8 風(fēng)力發(fā)電機(jī)組驗(yàn)收規(guī)范 GB/T 20319—2006 2.9 風(fēng)力發(fā)電場(chǎng)運(yùn)行規(guī)程 DL/T 666-1999 2.10風(fēng)力發(fā)電場(chǎng)安全規(guī)程 DL 796-2001 2.11風(fēng)力發(fā)電場(chǎng)檢修規(guī)程 DL/T 797-2012

2.12風(fēng)力發(fā)電場(chǎng)項(xiàng)目可行性研究報(bào)告編制規(guī)程 DL/T 5067-1996 2.13風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 設(shè)計(jì)要求 JB/T 10300-2001 2.14風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 安全要求 GB 18451.1-2012 2.15風(fēng)電場(chǎng)風(fēng)能資源測(cè)量方法 GB/T 18709-2002 2.16風(fēng)電場(chǎng)風(fēng)能資源評(píng)估方法 GB/T 18710-2002 2.17風(fēng)力發(fā)電機(jī)組裝配和安裝規(guī)范 GB/T 19568-2004 2.18風(fēng)電場(chǎng)場(chǎng)址工程地質(zhì)勘察技術(shù)規(guī)定 發(fā)改能源[2003]1403號(hào) 2.19風(fēng)電特許權(quán)項(xiàng)目前期工作管理辦法 發(fā)改能源[2003]1403號(hào) 2.20風(fēng)電場(chǎng)工程前期工作管理暫行辦法 發(fā)改辦能源[2005]899號(hào) 2.21風(fēng)電場(chǎng)工程建設(shè)用地和環(huán)境保護(hù)管理暫行辦法 發(fā)改能源[2005]1511號(hào) 2.22風(fēng)電工程安全設(shè)施竣工驗(yàn)收辦法 水電規(guī)辦[2008]001號(hào)

2.23風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 第1部分：通用技術(shù)條件 GB/T 19960.1-2005 2.24風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 第2部分：通用試驗(yàn)方法 GB/T 19960.2-2005 2.25風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 電能質(zhì)量測(cè)量和評(píng)估方法 GB/T 20320-2006 2.26風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 異步發(fā)電機(jī) 第1部分：技術(shù)條件 GB/T 19071.1-2003 2.27風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 異步發(fā)電機(jī) 第2部分：試驗(yàn)方法 GB/T 19071.2-2003 2.28風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 塔架 GB/T 19072-2010 2.29風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 功率特性試驗(yàn) GB/T 18451.2-2012 2.30風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 電工術(shù)語(yǔ) GB/T 2900.53-2001 2.31風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 控制器 技術(shù)條件 GB/T 19069-2003 2.32風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 控制器 試驗(yàn)方法 GB/T 19070-2003 2.33風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 齒輪箱 GB/T 19073-2008 2.34風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 風(fēng)輪葉片 JB/T 10194-2000

2.35風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 偏航系統(tǒng) 第1部分：技術(shù)條件 JB/T 10425.1-2004 2.36風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 偏航系統(tǒng) 第2部分：試驗(yàn)方法 JB/T 10425.2-2004 2.37風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 制動(dòng)系統(tǒng) 第1部分：技術(shù)條件 JB/T 10426.1-2004 2.38風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 制動(dòng)系統(tǒng) 第2部分：試驗(yàn)方法 JB/T 10426.2-2004 2.39風(fēng)力發(fā)電機(jī)組 一般液壓系統(tǒng) JB/T 10427-2004 2.40風(fēng)電廠接入電力系統(tǒng)技術(shù)規(guī)定 GB/Z 19963-2011 3.電氣標(biāo)準(zhǔn)

3.1 建筑電氣工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 50303-2002 3.2 電氣設(shè)備交接試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) GB 50150-2006 3.3 電氣裝置安裝工程電纜線(xiàn)路施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB 50168-2006 3.4 電氣裝置安裝工程接地裝置施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB 50169-2006 3.5 電氣裝置安裝工程盤(pán)、柜及二次回路結(jié)線(xiàn)施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB 50171-2012 3.6 電氣裝置安裝工程35kV及以下架空電力線(xiàn)路施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB 50173-92 3.7 電氣裝置安裝工程低壓電器施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB 50254-96 3.8 電氣裝置安裝工程高壓電器施工與驗(yàn)收規(guī)范 GBJl47-2010 3.9 電氣裝置安裝工程電力變壓器、油浸電抗器、互感器施工及驗(yàn)收規(guī)范 GBJ148-2010 3.10電氣裝置安裝工程母線(xiàn)裝置施工及驗(yàn)收規(guī)范 GBJl49-2010 3.11 110～500kV架空電力線(xiàn)路施工及驗(yàn)收規(guī)范 GBJ 50233-2005 3.12 110～500kV架空電力線(xiàn)路工程施工質(zhì)量及評(píng)定規(guī)程 DL/T 5168-2002 3.13電力建設(shè)施工及驗(yàn)收技術(shù)規(guī)范 DL/T 5007 3.14箱式變電站技術(shù)條件 DL/T 537-2002 3.15變電所設(shè)計(jì)技術(shù)規(guī)程 DL/T 5103-2012 3.16電氣裝置安裝工程質(zhì)量檢驗(yàn)及評(píng)定規(guī)程

第1部分：通則 DL/T5161.1-2002 第2部分：高壓電氣施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.2-2002 第3部分：電力變壓器、油浸電抗器、互感器施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.3-2002 第4部分：母線(xiàn)裝置施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.4-2002 第5部分：電纜線(xiàn)路施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.5-2002 第6部分：接地裝置施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.6-2002 第8部分：盤(pán)、柜及二次回路接線(xiàn)施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.8-2002 第9部分：蓄電池施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.9-2002 第10部分：35kV及以下架空電力線(xiàn)路施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.10-2002 第12部分：低壓電器施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.12-2002 第13部分：電力變流設(shè)備施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.13-2002 第14部分：起重機(jī)電氣裝置施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.14-2002

第16部分：1kV及以下配線(xiàn)工程施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.16-2002 第17部分：電氣照明裝置施工質(zhì)量檢驗(yàn) DL/T5161.17-2002 3.17 110kV及以上送變電工程啟動(dòng)及竣工驗(yàn)收規(guī)程 DL/T782-2001 3.18 國(guó)家電網(wǎng)公司十八項(xiàng)電網(wǎng)重大反事故措施 國(guó)網(wǎng)生技[2005]400號(hào) 3.19 電氣裝置安裝工程1kV及以下配線(xiàn)工程施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB50303-2002 3.20 火力發(fā)電廠與變電站設(shè)計(jì)防火規(guī)范 GB50229-2006 3.21 建筑物防雷裝置檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 GB/T21431-2008 3.22 用電安全導(dǎo)則 GBT 13869-2008 3.23 35kV-110kV變電所設(shè)計(jì)規(guī)范 GB50059-2011 3.24 66kV及以下架空電力線(xiàn)路設(shè)計(jì)規(guī)范 GB 50061-2010 4.建筑工程標(biāo)準(zhǔn)

4.1 建筑工程施工質(zhì)量驗(yàn)收統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn) GB 50300-2001 4.2 電力建設(shè)施工質(zhì)量驗(yàn)收及評(píng)定規(guī)程第1 部分：土建工程 DL/T5210．1-2005 4.3 110kV-1000kV變電站、換流站

土建工程施工質(zhì)量檢驗(yàn)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) Q/GDW 183-2008 4.4 建筑工程冬期施工規(guī)程 JGJ 104 —2011 4.5 工程測(cè)量規(guī)范 GB50026—2007 4.6 建筑變形測(cè)量規(guī)范 JGJ 8－2007 4.7 濕陷性黃土地區(qū)建筑規(guī)范

GB 50025－2004 4.8 電力工程地基處理技術(shù)規(guī)程 DL/T 5024—2005 4.9 建筑樁基技術(shù)規(guī)范 JGJ 94－2008 4.10 建筑樁基檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 JGJ 106－2003 4.11 混凝土結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范 GB50010-2010 4.12 建筑地基基礎(chǔ)工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB50202-2002； 4.13 建筑地基處理技術(shù)規(guī)范 JGJ79-2002； 4.14 混凝土結(jié)構(gòu)工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB50204-2011； 4.15 地下防水工程質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB50208-2011； 4.16 混凝土質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn) GB 50164-2011;4.17 混凝土強(qiáng)度檢驗(yàn)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) GBJ50107－2010;4.18 清水混凝土應(yīng)用技術(shù)規(guī)程 JGJ 169－2009 4.19.鋼 筋 焊 接 驗(yàn) 收 規(guī) 程 JGJ 18— 2012 4.20 鋼筋機(jī)械連接通用技術(shù)規(guī)程 JGJ 107--2010 4.21 鋼結(jié)構(gòu)工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 50205—2001 4.22 建筑鋼結(jié)構(gòu)焊接技術(shù)規(guī)程 JGJ 81—2002 4.23 鋼結(jié)構(gòu)用抗剪型高強(qiáng)度連接副及技術(shù)條件 GB/T3632-2008

4.24 建筑防腐工程施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB50212-2002； 4.25建筑防腐蝕工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范

GB50224-2010 4.25 砌體結(jié)構(gòu)工程設(shè)計(jì)規(guī)范 GB 50003 －2011 4.26 砌體結(jié)構(gòu)工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 50203—2011 4.27多孔磚砌體結(jié)構(gòu)技術(shù)規(guī)范 JGJ 137 －2001 4.28蒸壓加氣混凝土建筑應(yīng)用技術(shù)規(guī)程 JGJ/ T17－2008 4.29屋面工程質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 50207—2012 4.30屋面工程技術(shù)規(guī)范 GB 503454.31建筑地面工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 50209 4.32建筑裝飾裝修工程質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 50210 4.33 電力建設(shè)房屋工程質(zhì)量通病防治工作規(guī)定 4.34 建設(shè)工程質(zhì)量檢測(cè)管理辦法（2005）4.35 給水排水管道工程施工及驗(yàn)收規(guī)范 GB 502424.36 通風(fēng)與空調(diào)工程施工質(zhì)量驗(yàn)收規(guī)范 GB 502434.37 高聳結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范 GBJ 501354.38建筑地基基礎(chǔ)設(shè)計(jì)規(guī)范 GB 50007-2011 5.相關(guān)材料標(biāo)準(zhǔn)

5.1 混凝土結(jié)構(gòu)用成型鋼筋

5.2鋼筋混凝土用鋼 第1部分：熱軋光圓鋼筋

5.3鋼筋混凝土用鋼 第2部分：熱軋帶肋鋼筋

5.4鋼筋混凝土用鋼 第3部分: 鋼筋焊接網(wǎng)

5.5通用硅酸鹽水泥

5.6混凝土用水標(biāo)準(zhǔn)

5.7普通混凝土用砂、石質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法

5.8建筑用砂

5.9建筑用卵石、碎石 GB/T146855.10用于水泥和混凝土中的粉煤灰 GB 15965.11粉煤灰混凝土應(yīng)用技術(shù)規(guī)范 GBJ 1465.12用于水泥和混凝土中的粉狀高爐礦渣 GB 180465.13高強(qiáng)高性能混凝土用礦物外加劑 GB/T187365.14混凝土外加劑 GB 8076 5.15混凝土外加劑應(yīng)用技術(shù)規(guī)范 GB 501195.16混凝土泵送劑 JC 4735.17混凝土防凍劑 JC 4755.18混凝土膨脹劑 JC 476

—2012 —2010 —2001 電建質(zhì)監(jiān)〔2004〕18 號(hào)建設(shè)部令141號(hào) －2008 －2002 －2006

JG/T 226－2008

GB 1499.1－2008

GB 1499.2－2007

GB 1499.3－2002

GB 175 － 2007

JGJ 63 －2006

JGJ 52－2006

GB／T14684-2001 －2001 －2005 －1990 —2008 —2002 －2008 －2003 －2001 －2004 －2001

5.19砂漿.混凝土防水劑 JC 474－2008 5.20混凝土外加劑中釋放氨的限量 GB 18588 —2001 5.21水泥基灌漿材料應(yīng)用技術(shù)規(guī)程

GB/T50448－2008 5.22水泥基灌漿材料 JC/T 986 —2005 5.23建筑用鋼結(jié)構(gòu)防腐涂料 JG/T 224 －2007 5.24鋼結(jié)構(gòu)防火涂料 GB 14907 －2002 5.25電力工程地下金屬構(gòu)筑物防腐技術(shù)導(dǎo)則

DL/T5394－2007 6 本工程全部設(shè)計(jì)、設(shè)備、施工、調(diào)試的技術(shù)文件 6.1 風(fēng)電機(jī)組安裝調(diào)試工程驗(yàn)收文件 6.1.1風(fēng)電機(jī)組技術(shù)說(shuō)明書(shū)；

6.1.2風(fēng)電機(jī)組訂貨合同中的有關(guān)技術(shù)性能指標(biāo)要求； 6.1.3風(fēng)電機(jī)組塔架及其基礎(chǔ)設(shè)計(jì)圖紙與有關(guān)技術(shù)要求。6.2 升壓站設(shè)備安裝調(diào)試工程驗(yàn)收文件 6.2.1設(shè)備技術(shù)性能說(shuō)明書(shū)； 6.2.2設(shè)備訂貨合同及技術(shù)條件； 6.2.3電氣施工設(shè)計(jì)圖紙及資料。6.3 中控樓和升壓站建筑等工程文件 6.3.1設(shè)計(jì)圖紙及技術(shù)要求； 6.3.2施工合同及有關(guān)技術(shù)說(shuō)明。6.4 場(chǎng)內(nèi)電力線(xiàn)路工程驗(yàn)收文件

6.4.1架空電力線(xiàn)路勘測(cè)設(shè)計(jì)、施工圖紙及其技術(shù)條件； 6.4.2施工合同。6.5 交通工程驗(yàn)收文件

6.5.1公路施工設(shè)計(jì)圖紙及有關(guān)技術(shù)條件； 6.5.2施工合同。

第三篇：電加熱爐技術(shù)協(xié)議

RT2-80-8型 臺(tái)車(chē)式電阻爐 技術(shù)協(xié)議 甲方： 乙方：

（甲方）與——————————有限公司(乙方)經(jīng)過(guò)友好協(xié)商，甲方?jīng)Q定委托乙方設(shè)計(jì)制造《RT2-80-8型臺(tái)車(chē)式電阻爐》壹臺(tái)，并達(dá)成如下協(xié)議： 用途

金屬熱處理。

二、主要技術(shù)參數(shù)

1.額定加熱功率：

80KW 2.額定工作溫度：

800℃

3.工作電壓、頻率：

380V±5

50HZ 4.控制電壓：

220V±5 5.控溫精度：±2℃ 6.溫度均勻性：±10℃

7.控溫區(qū)：

2區(qū) 8.工作區(qū)尺寸（長(zhǎng)×寬×高）：

1800×1200×1000mm 9.最大裝爐量：≤2000kg 10.空爐升溫時(shí)間：≤2h（室溫20℃-800℃）11.爐殼表面溫升：≤40℃

12.設(shè)備質(zhì)量：

4500 kg 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)介 設(shè)備組成

該設(shè)備由爐殼、爐襯、臺(tái)車(chē)及其驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)、加熱元件、爐底板、爐門(mén)及其升降機(jī)構(gòu)、電氣控制系統(tǒng)等組成。爐殼

采用Q235A、6mm鋼板與型鋼焊接成形，面板選用16mm鋼板制作，面板上設(shè)有收縮縫，可防止面板受熱變形，整個(gè)爐殼具有結(jié)構(gòu)堅(jiān)固耐用而且美觀的效果。爐襯

采用高鋁耐火磚與硅酸鋁陶瓷纖維材料組成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，爐底、爐門(mén)口、采用耐火材料砌筑，其余部位用高鋁陶瓷纖維板和折疊塊制作，高鋁耐火磚的砌筑漿料采用生熟料+粘結(jié)劑。可提高磚縫強(qiáng)度，從而提高整體爐襯高溫機(jī)械強(qiáng)度和使用壽命，能夠承受爐子荷重和熱應(yīng)力，在高溫狀態(tài)下保持體積穩(wěn)定和適應(yīng)溫度急變的熱振穩(wěn)定性能，根據(jù)筑爐規(guī)范，磚縫厚度≤1~2mm，并合理預(yù)留膨脹縫。砌好的爐墻具備表面平整，磚縫整齊，所有磚縫相互對(duì)錯(cuò)砌筑，墻體顏色一致。整體結(jié)構(gòu)具有質(zhì)量輕、保溫性能好、熱效率高等優(yōu)點(diǎn)，爐殼外表溫度≤40℃。爐襯的砌筑完全按照筑爐規(guī)范及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，爐襯使用壽命≥2年。電熱元件

采用牌號(hào)為OCr25AL5高電阻合金絲繞制成羅圈狀電阻絲并用電橋檢測(cè)其電阻，精確到1/1000Ω。

加熱元件分布在兩側(cè)墻和爐底。

引出幫與電阻絲的連接采用鉆孔套入焊接法，減小連接電阻，提高加熱元件使用壽命。電熱元件的布置按照爐底密、兩側(cè)墻較疏的原則分布，有利于提高溫度均勻度。加熱元件繞制后經(jīng)退火處理，去除繞制產(chǎn)生的應(yīng)力。電阻絲壽命≥1年。爐底板

爐底板采用牌號(hào)為CrMnN的耐熱鋼鑄件，熱強(qiáng)度高抗撞擊。爐門(mén)及其升降機(jī)構(gòu)

爐門(mén)外殼用Q235A的鋼板焊接而成；

爐門(mén)內(nèi)襯用高鋁陶瓷纖維板和折疊塊制作；

爐門(mén)與爐口密封采用斜鍥輪壓緊機(jī)構(gòu)自動(dòng)密封，即爐門(mén)兩側(cè)分別裝有大、小導(dǎo)輪各一對(duì)，爐體的爐口兩側(cè)各有一根帶斜鍥的導(dǎo)軌，爐門(mén)兩側(cè)的導(dǎo)輪沿導(dǎo)軌上下運(yùn)行，當(dāng)爐門(mén)關(guān)閉到位時(shí)，導(dǎo)輪進(jìn)入導(dǎo)軌斜鍥內(nèi)將爐門(mén)與爐口自動(dòng)壓緊密閉。

爐門(mén)升降驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)由帶電磁制動(dòng)器電動(dòng)機(jī)和擺線(xiàn)針輪減速器組成，通過(guò)鏈傳動(dòng)驅(qū)動(dòng)爐門(mén)上下運(yùn)行，爐門(mén)運(yùn)行設(shè)有上下限位開(kāi)關(guān)。臺(tái)車(chē)及其驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)

臺(tái)車(chē)殼體用Q235A鋼板和型鋼焊接而成

臺(tái)車(chē)內(nèi)襯的面磚和電阻絲擱磚用高鋁耐火磚砌筑，底部用輕質(zhì)耐火磚和硅藻土保溫磚砌筑，筑爐規(guī)范與爐體內(nèi)襯相同。

采用專(zhuān)用密封機(jī)構(gòu)使臺(tái)車(chē)與爐體保持密封，阻止?fàn)t內(nèi)熱量外溢。臺(tái)車(chē)驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)由帶電磁制動(dòng)器電動(dòng)機(jī)和蝸輪減速器組成，通過(guò)三角皮帶傳動(dòng)和鏈傳動(dòng)驅(qū)動(dòng)臺(tái)車(chē)進(jìn)出爐膛運(yùn)行，臺(tái)車(chē)運(yùn)行設(shè)有進(jìn)出限位開(kāi)關(guān)。電氣控制

8.1電控柜采用2mm厚的冷軋鋼板制作，內(nèi)外表面噴電腦漆，其面板裝有電流表、電壓表、溫控表、溫度記錄儀、定時(shí)器及控制開(kāi)關(guān)和指示燈。

8.2溫度控制按爐膛前后分二區(qū)控制，主回路采用雙向可控硅模塊過(guò)零調(diào)功觸發(fā)，可控硅采用風(fēng)冷形式，設(shè)有過(guò)載、過(guò)熱及過(guò)流保護(hù)等功能。

8.3控制儀表主要由日本島田系列數(shù)顯式智能型溫控儀對(duì)爐膛加熱區(qū)實(shí)現(xiàn)PID調(diào)節(jié)控制，具有多量程輸入，溫度任意設(shè)定和超溫報(bào)警功能。

8.4爐門(mén)開(kāi)關(guān)與加熱控制電氣連鎖，當(dāng)爐門(mén)離開(kāi)下限位，加熱自動(dòng)關(guān)閉，反之，只有當(dāng)爐門(mén)關(guān)閉到位時(shí)，加熱才能啟動(dòng)。爐門(mén)與臺(tái)車(chē)運(yùn)行有連鎖控制，爐門(mén)開(kāi)足，臺(tái)車(chē)才能啟動(dòng)，臺(tái)車(chē)進(jìn)爐膛到位，爐門(mén)才能啟動(dòng)。

8.5電氣控制系統(tǒng)設(shè)有電源總閘，加熱主回路設(shè)有空氣開(kāi)關(guān)，在可控硅前設(shè)有快速熔斷器作為短路、過(guò)載、過(guò)流保護(hù)、超溫自動(dòng)切斷加熱主回路電源。8.6 主要電氣元件選用施耐德或國(guó)內(nèi)知名產(chǎn)品。8.7 電控柜設(shè)計(jì)和制造符合國(guó)際電工標(biāo)準(zhǔn)（IEC），儀表、電氣元件和計(jì)量單位均符合國(guó)際單位（SI）標(biāo)準(zhǔn)。

8.8 爐溫檢測(cè)：選用二支K分度號(hào)的鎳鉻-鎳硅電偶設(shè)置在前后工 作區(qū)內(nèi)測(cè)控爐內(nèi)溫度。

四、成套供應(yīng)范圍

1.RT2-80-8型臺(tái)車(chē)式電阻爐（包括臺(tái)車(chē)）

1臺(tái) 2.電氣控制柜

套 3.18kg/m輕軌

6m×2根 3.現(xiàn)場(chǎng)二次接線(xiàn)材料

1套 4.產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)：

1份

五、交貨周期 合同生效之日起，50天內(nèi)交付使用。

六、安裝調(diào)試

乙方負(fù)責(zé)設(shè)備在甲方現(xiàn)場(chǎng)的安裝調(diào)試，乙方給予積極的配合。產(chǎn)品的工藝調(diào)試由甲方負(fù)責(zé)，乙方給予配合。

七、人員培訓(xùn)及售后服務(wù)

1.設(shè)備安裝調(diào)試時(shí)乙方技術(shù)人員負(fù)責(zé)培訓(xùn)甲方的操作人員及維修人員； 2．設(shè)備質(zhì)保期為壹年；

3．在質(zhì)保期內(nèi)非人為因果引起的設(shè)備故障，由乙方免費(fèi)修復(fù)；

4．質(zhì)保期過(guò)后，乙方繼續(xù)為甲方做好服務(wù)工作，確保設(shè)備正常使用。甲方：簽字：

第四篇：技術(shù)作圖總結(jié)電

一.火災(zāi)應(yīng)急照明和疏散指示標(biāo)志

1.高層建筑的下列部位應(yīng)設(shè)置應(yīng)急照明：

1）樓梯間、防煙樓梯間前室、消防電梯間及其前室、合用前室和避難層（間）。

2）配電室、消防控制室、消防水泵房、防煙排煙機(jī)房、供消防用電的蓄電池室、自備發(fā)電機(jī)房、電話(huà)總機(jī)房以及發(fā)生火災(zāi)時(shí)仍需堅(jiān)持工作的其它房間。

3）觀眾廳、展覽廳、多功能廳、餐廳和商業(yè)營(yíng)業(yè)廳等人員密集的場(chǎng)所。

4）公共建筑內(nèi)的疏散走道和居住建筑內(nèi)走道長(zhǎng)度超過(guò)20m的內(nèi)走道。人防工程不宜大于10m 2.疏散用的應(yīng)急照明，其地面最低照度不應(yīng)低于0.5lx。

消防控制室、消防水泵房、防煙排煙機(jī)房、配電室和自備發(fā)電機(jī)房、電話(huà)總機(jī)房以及發(fā)生火災(zāi)時(shí)仍需 堅(jiān)持工作的其它房間的應(yīng)急照明，仍應(yīng)保證正常照明的照度。

3.除二類(lèi)居住建筑外，高層建筑的疏散走道和安全出口處應(yīng)設(shè)燈光疏散指示標(biāo)志。

4.疏散應(yīng)急照明燈宜設(shè)在墻面上或頂棚上。安全出口標(biāo)志宜設(shè)在出口的頂部；疏散走道的指示標(biāo)志宜設(shè)在疏散走道及其轉(zhuǎn)角處距地面1.OOm以下的墻面上。走道疏散標(biāo)志燈的間距不應(yīng)大于20m。5.應(yīng)急照明和疏散指示標(biāo)志，可采用蓄電池作備用電源，且連續(xù)供電時(shí)間不應(yīng)少于20min；高度超過(guò)1OOm的高層建筑連續(xù)供電時(shí)間不應(yīng)少于30min。

二.安全出口標(biāo)志燈布置

1.設(shè)置在建筑物通向室外的出口和應(yīng)急出口處；

2.多層、高層建筑各樓層樓梯間、消防電梯的前室的出口處； 3.公共建筑中人員聚集的觀眾廳、會(huì)堂、比賽館、展覽廳等通向疏散通道或前廳、側(cè)廳、休息廳的出口處。

三.常用光源適用場(chǎng)所

1.白熾燈：1）.要求照度不很高的場(chǎng)所

2）.局部照明、應(yīng)急照明

3）.要求頻閃效應(yīng)小或開(kāi)關(guān)頻繁的地方

4）.避免氣體放電燈對(duì)無(wú)線(xiàn)電或測(cè)試設(shè)備干擾的場(chǎng)所 5）.需要調(diào)光的場(chǎng)所

高度較低的房間、倉(cāng)庫(kù)、辦公室、禮堂、宿舍、次要道路、圖書(shū)館等

2.鹵鎢燈：1）.照度要求較高,顯色性要好,且無(wú)振動(dòng)的場(chǎng)所

2）.要求頻閃效應(yīng)小的場(chǎng)所 3）.需要調(diào)光的場(chǎng)所

禮堂、體育館等

3.熒光燈1）.懸掛高度較低,又需要照度較高的場(chǎng)所

2）.需要正確識(shí)別色彩的場(chǎng)所

辦公室、學(xué)校等

4.熒光高壓汞燈照度要求高，但對(duì)光色無(wú)特殊要求的場(chǎng)所

道路照明、廣場(chǎng)照明

5.金屬鹵化物燈房子高大，要求照度較高、光色較好的場(chǎng)所

體育館、禮堂等

6.高壓鈉燈1）.要求照度高,但對(duì)光色無(wú)要求場(chǎng)所

2）.多煙塵場(chǎng)所

道路照明、露天場(chǎng)地等

四.常用色表色溫適用場(chǎng)所

暖光源:（>3300K）：居室、餐廳、宴會(huì)廳、多功能廳、四季廳、（室內(nèi)花園）、酒吧、咖啡廳、重點(diǎn)陳列廳 中間光源:（3300-5300）教室、辦公室、會(huì)議室、閱覽室、一般營(yíng)業(yè)廳、普通餐廳、一般休息室、洗衣房 冷光源:（>5300）：設(shè)計(jì)室、計(jì)算機(jī)房 圍棋臺(tái)面

五.辦公建筑照明照度標(biāo)準(zhǔn)值

設(shè)計(jì)室、高檔辦公用500lx，資料、檔案200lx，其余辦公300lx 六.住宅建筑電源插座要求

1.《住宅設(shè)計(jì)規(guī)范》電源插座的數(shù)量：

1）.臥室、廚房：一個(gè)單相三線(xiàn)和一個(gè)單相二線(xiàn)的插座兩組 2）.起居室（廳）：一個(gè)單相三線(xiàn)和一個(gè)單相二線(xiàn)的插座三組

3）.衛(wèi)生間：防濺水型一個(gè)單相三線(xiàn)和一個(gè)單相二線(xiàn)的組合插座一組

4）.布置洗衣機(jī)、冰箱、排氣機(jī)械和空調(diào)器等處：專(zhuān)用單相三線(xiàn)插座各一個(gè)

2.住宅的空調(diào)電源插座、電源插座與照明，應(yīng)分路設(shè)計(jì)；廚房電源插座和衛(wèi)生間電源插座宜設(shè)置獨(dú)立回路 七.火災(zāi)應(yīng)急廣播揚(yáng)聲器的設(shè)置

1）.民用建筑內(nèi)揚(yáng)聲器應(yīng)設(shè)置在走道和大廳等公共場(chǎng)所。

2）.其數(shù)量應(yīng)能保證從一個(gè)防火分區(qū)內(nèi)的任何部位到最近一個(gè)揚(yáng)聲器的距離不大于25m。

走道內(nèi)最后一個(gè)揚(yáng)聲器至走道末端的距離不應(yīng)大于12.5m。

第五篇：電生理基本技術(shù)

電生理基本技術(shù)

一電刺激。

二生物放大器正確選擇，植物性神經(jīng)沖動(dòng)幅度多為50-100μV。不同組織，應(yīng)采用不同的參 數(shù)。如 ECG：振幅0.1-2mV，靈敏度0.5-1mV，時(shí)間常數(shù)0.1-1.0s，高頻濾波1KHz 植物性神經(jīng)沖動(dòng)：振幅50-150μV，靈敏度25-100μV，時(shí)間常數(shù)0.01-0.1s，高頻濾波3-5KHz 中樞神經(jīng)元單位放電振幅100-300μV, 靈敏度50-100μV，時(shí)間常數(shù)0.01-0.1s，高頻濾波5-10KHz

三玻璃微電極

常用尖端0.5-5μm，向細(xì)胞內(nèi)插入時(shí)，需小于0.5μm（細(xì)胞直徑的1/10~1/100），且尖端的傾斜度應(yīng)相當(dāng)緩和，一般微電極可分為金屬微電極和玻璃微電極兩類(lèi)。

金屬微電極，現(xiàn)多用鍍鉑鎢絲電極（platinum-plated tungsten electrode），在鎢絲上鍍鉑，可極大改善電極的電學(xué)特性，噪聲可大大降低，加之機(jī)械強(qiáng)度大，適合長(zhǎng)期體外記錄(paré D，Gaudreau H.Projection cells and interneurons of the lateral and basolateral amygdala: distinct firing patterns and differential relation to the thera and delta rhythms in conscious cats.J Neursci, 1996,16(10):3334-3350 現(xiàn)要也常用鍍銀碳纖維電極。玻璃微電極記錄易受機(jī)械位移的影響，加之尖端的電解質(zhì)會(huì)漏出或堵塞，不適合半小時(shí)以上的長(zhǎng)時(shí)間記錄，玻璃微電極可分單管和多管微電極。

毛坯管在國(guó)外多用Pyrex管，國(guó)內(nèi)多用GG-17和95料玻管。細(xì)胞外記錄多采用外徑1.5-2mm玻璃，細(xì)胞內(nèi)記錄則采用外徑1mm細(xì)玻管，內(nèi)外徑之比約為2:3或5:6，長(zhǎng)6-8cm。拉制前必須經(jīng)過(guò)清潔處理。

清潔液：用等量的(250ml)王水(可反復(fù)應(yīng)用)。一般毛坯管捆成把放入清潔液中1-2h，取出自來(lái)水沖洗20-30min，再放入無(wú)水酒精中洗滌，再放入盛滿(mǎn)蒸餾水燒杯中加熱煮沸10min，倒去蒸餾水，再換新蒸餾水反復(fù)3次，再放入烤箱中烤干，備用，切不可用市售的洗滌劑，以防降低電極充灌液的表面張力而影響沖灌。

充灌液常用3mol/L KCl，為避免Cl-擴(kuò)散，也可用2mol/L醋酸鉀或檸檬酸鉀充灌，也有人用 0.5-1mol/L NaCl(低濃度)充灌可降低噪音。細(xì)胞外記錄時(shí)，最后再用3-4mol/L NaCl +2%旁 胺天藍(lán)溶液定位。在膜片鉗中還常加鈣螯合劑，如EGTA。阻抗與不同組織相關(guān)。

四電生理實(shí)驗(yàn)中噪聲和干擾的形成和排除。(一)來(lái)源。

1干擾信號(hào)與生物電生理信號(hào)的鑒別。準(zhǔn)確區(qū)分生物電信號(hào)與干擾的偽跡是電生理實(shí)驗(yàn)的先決條件。

2來(lái)源。主要有三個(gè)方面

其一。物理性干擾。1)靜電和電磁的干擾實(shí)驗(yàn)室附近高壓電，室內(nèi)日光燈可產(chǎn)生50Hz的靜電干擾，尤其是交流電，尤其是50Hz頻率干擾最大(電子設(shè)備為50Hz)。其特點(diǎn)是幅度大，波形規(guī)則。

2)噪聲干擾電子元件本身產(chǎn)生雜亂無(wú)章電壓和電流稱(chēng)噪聲，一般與放大器內(nèi)部元件的質(zhì)量與性能有關(guān)。

其二。接地不良。1)地線(xiàn)電阻應(yīng)小。2)儀器故障。產(chǎn)生漏電電流，在地線(xiàn)上形成電位差，產(chǎn)生干擾。3)地線(xiàn)行走過(guò)程中打圈，形成線(xiàn)圈，易接受電場(chǎng)和磁場(chǎng)的干擾。4)各儀器設(shè)備應(yīng)采用一點(diǎn)接地的方式，若采用多點(diǎn)接地，形成大地回路，也會(huì)引起干擾。5)地線(xiàn)過(guò)長(zhǎng)與電源線(xiàn)形成交流環(huán)路。6)誤用市電三孔中性線(xiàn)作為大地線(xiàn)(中性線(xiàn)上有4-5A電流)。

其三。生理性干擾。1)大腦電活動(dòng)時(shí)，眨眼、眼球運(yùn)動(dòng)均對(duì)腦電具有干擾作用。2)實(shí)驗(yàn)中環(huán)境溫度過(guò)低，動(dòng)物寒戰(zhàn)、抖動(dòng)，引起肌電的發(fā)放而干擾記錄，或因呼吸運(yùn)動(dòng)引起記錄部位機(jī)械位移引起干擾信號(hào)。3)心電干擾，頻率與心電一致。(二)排除。

1物理性干擾。1)屏蔽法用于低頻電和靜電干擾，屏蔽線(xiàn)分布電容較大，線(xiàn)與線(xiàn)之間不可平行排列，更不可為了美觀而將多線(xiàn)扎在一起，這會(huì)加大分布電容，易偶合高頻干擾噪聲。2)遠(yuǎn)離法。3)改變位置法。依電流方向相反，產(chǎn)生反向磁場(chǎng)的原理，改變各個(gè)儀器的位置或放大器輸入的方位，會(huì)使干擾磁場(chǎng)抵消，微電極放大器探頭阻抗高，易引入干擾，實(shí)驗(yàn)前可反復(fù)調(diào)整其方向和位置。4)微電極記錄時(shí)盡量減少微電極本身的阻抗，減少輸入阻抗及干擾信號(hào)在這個(gè)阻抗上形成干擾電壓降，微電極到探頭的連線(xiàn)<5cm。5)用監(jiān)聽(tīng)器監(jiān)聽(tīng)噪聲，以便及時(shí)排除。

2儀器質(zhì)量，盡量改進(jìn)。接地不良。地線(xiàn)應(yīng)盡量短粗，不能與電源線(xiàn)平行或打圈，不 要接在電源線(xiàn)的中性線(xiàn) 上，地線(xiàn)單獨(dú)埋設(shè)，埋置處應(yīng)較潮濕，附近無(wú)大型變壓電動(dòng)機(jī)，并在坑內(nèi)加些食鹽。4檢查各儀器 是否漏電。

5慢生物電變化時(shí)用乏極化電極，實(shí)驗(yàn)對(duì)象宜安靜，勿受振動(dòng)。

(三)刺激偽跡過(guò)大及防止。1)盡量減少刺激脈沖的波寬和強(qiáng)度。2)在動(dòng)物體或標(biāo)本上，盡量延長(zhǎng)刺激部位 的距離，在刺激電極 和引導(dǎo)電極之間加一接地電極，此電極離引導(dǎo)電極愈近，刺激偽跡就越小采用變換刺激極性，結(jié)合疊加處理，可抵消偽跡。

注微電極中高濃度充灌液易蒸發(fā)，造成電極回路的開(kāi)路，因此常在微電極插入Ag-AgCl絲或鉑金絲后，在微電極尾部開(kāi)口處涂上一層凡士林，防止水分蒸發(fā)。

動(dòng)物麻醉和制動(dòng)下，體溫會(huì)下降，故應(yīng)保溫調(diào)節(jié)，加溫維持肛溫36-38℃.記錄脊髓背角或腹角神經(jīng)元將脊柱前后拉直以減小呼吸運(yùn)動(dòng)造成的位移。記錄腦神經(jīng)元應(yīng)在表面用溫?zé)崾炛瞥梢挥筒?，防止血管博?dòng)和呼吸運(yùn)動(dòng)的影響。

五細(xì)胞內(nèi)微電極記錄

多用幼年離體標(biāo)本，其原因1)幼年動(dòng)物骨骼骨化不完全，結(jié)締組織少，神經(jīng)組織易于分離，標(biāo)本耐缺氧能力強(qiáng)，有的標(biāo)本可存活數(shù)小時(shí)至數(shù)天，但標(biāo)本也可能發(fā)育不完全，如背根和腦干到脊髓的投射纖維要到三周動(dòng)物才完全。神經(jīng)纖維髓鞘化不全，其藥理作用與成年動(dòng)物也不同。從實(shí)驗(yàn)角度上講，脊髓背腹根短，不利于電生理刺激記錄。小鼠一般應(yīng)小于15g，制備標(biāo)本才 有可能成功，而這樣小鼠背腹根神經(jīng)節(jié)不利于電生理實(shí)驗(yàn)。最適合的動(dòng)物是金黃地鼠(hamster)，介于大小鼠之間，制備標(biāo)本活性很好，可能與其冬眠習(xí)性有關(guān)，而且其脊髓背腹根長(zhǎng)達(dá)20-25mm，利于電生理記錄。動(dòng)物選擇仍依實(shí)驗(yàn)而定，同一標(biāo)本，不同中樞結(jié)構(gòu)對(duì)缺氧耐受力也不同。金黃地鼠，若觀察脊髓背角神經(jīng)元活動(dòng)，可用150-160g體重的鼠均可，但要研究腹角神經(jīng)元，則體重不宜超過(guò)30g。離體標(biāo)本的灌流注，如ACSF。其中緩沖液成分有兩種，一是重碳酸鹽(bicarbonate)溫度低(4℃)，配方有利于降低組織興奮性。二是磷酸鹽緩沖液和HEPES緩沖液其優(yōu)點(diǎn)是接近于 人體環(huán)境。各種緩沖液一般都先配母液，臨用前一天，或臨用前稀釋

腦片膜片鉗實(shí)驗(yàn)方法

腦片膜片鉗實(shí)驗(yàn)方法 文獻(xiàn)綜述一 1966年，Yamamoto和McIlwain首次在腦片上記錄了電生理活動(dòng)(1966a, b)，證實(shí)了腦組織在體外也能存活，并保持很好的活性狀態(tài)。此后，該方法在生理學(xué)研究中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，并為中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理和藥理學(xué)領(lǐng)域突飛猛進(jìn)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。1989年，Blanton將腦片電生理記錄與細(xì)胞的膜片鉗記錄結(jié)合起來(lái)，建立了腦片膜片鉗記錄技術(shù)，這為在細(xì)胞水平研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)離子通道或受體在神經(jīng)環(huán)路中的生理和藥理學(xué)作用及其機(jī)制提供了可能性。

在腦片電生理記錄中，實(shí)驗(yàn)者可以按不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹苯訙?zhǔn)確地改變腦片灌流液的成份和條 件，如溫度、酸度和滲透壓、通氧狀態(tài)、以及離子通道或細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的阻斷劑等另外，實(shí)驗(yàn)者還能借助顯微鏡準(zhǔn)確地放置記錄電極和刺激電極，同時(shí)，可借助一些特殊的加藥裝置，將一定濃度的藥物加到整個(gè)腦片或是腦片上的特定區(qū)域上，研究電信號(hào)沿神經(jīng)環(huán)路的傳遞規(guī)律。在電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，活性較好的腦片還可用于生物化學(xué)或解剖學(xué)的分析。這些優(yōu)點(diǎn)使實(shí)驗(yàn)者能獲得準(zhǔn)確的神經(jīng)生理學(xué)的研究結(jié)果，也是其應(yīng)用較在位大腦廣泛的原因所在。

海馬腦片是中樞神經(jīng)系統(tǒng)研究中應(yīng)用最為廣泛標(biāo)本之一。其原因有以下幾點(diǎn):

1、海馬與腦的其它部位相對(duì)隔離，較易剝離，且剝離后受到的損傷較小

2、海馬具有高度分化的片層結(jié)構(gòu)，一方面，海馬神經(jīng)環(huán)路在片層中的分布有一定的空間規(guī)律，如錐體細(xì)胞胞體分布在錐體細(xì)胞層，而雪氏側(cè)支突觸分布于輻射層，且海馬中存在一個(gè)三突觸聯(lián)系的回路，即穿通纖維-齒狀回顆粒細(xì)胞層、苔狀纖維-CA3區(qū)錐體細(xì)胞層、雪氏側(cè)支-CA1區(qū)錐體細(xì)胞層等，因此，在海馬中可以較準(zhǔn)確地記錄到特定神經(jīng)元或突觸的反應(yīng)另一方面，這種板層結(jié)構(gòu)有利于解釋在某一部位記錄到的細(xì)胞外場(chǎng)電位的意義。這些都使海馬成為電生理學(xué)研究的理想標(biāo)本。本文對(duì)海馬腦片膜片鉗的操作規(guī)程及注意事項(xiàng)總結(jié)如下。

一、海馬腦片的制備

腦片制備中，海馬分離應(yīng)在斷頭后10分鐘內(nèi)完成，5~6分鐘為宜。在分離海馬時(shí)，還應(yīng)注意不要扭轉(zhuǎn)或撕扯海馬，更不要損傷海馬。分離海馬的速度和質(zhì)量是保證海馬腦片制備成功的關(guān)鍵所在。

評(píng)價(jià)腦片活性最簡(jiǎn)單的方法是記錄腦片上的群峰。在一個(gè)狀態(tài)良好的腦片上記錄到的群峰在一個(gè)很寬的刺激強(qiáng)度范圍內(nèi)始終是單峰的。出現(xiàn)多個(gè)群峰往往提示抑制性突觸功能已受損，這是腦片最早的病理生理學(xué)改變。如果僅存在突觸前纖維群峰(Fiber Volley, FV)，或FV峰大于突觸后反應(yīng)，這提示腦片活性極差，有活性的突觸已所剩無(wú)幾，為激發(fā)突觸反應(yīng)需要更多的突觸前纖維參與，需中止實(shí)驗(yàn)。在活性較好的腦片中，F(xiàn)V峰幾乎探測(cè)不到，或遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于突觸后反應(yīng)。

有時(shí)會(huì)莫名其妙地出現(xiàn)一些問(wèn)題，突觸標(biāo)本中突觸后神經(jīng)元看上去狀態(tài)良好，但做了很多天甚至幾周都沒(méi)有得到有用的數(shù)據(jù)。在這種情況下，須要耐心地思考失敗的原因，并設(shè)法解決。首先，應(yīng)該檢查溶液，用其它實(shí)驗(yàn)室制備的標(biāo)本或更換實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。對(duì)于腦片的制備而言，切片機(jī)出現(xiàn)的機(jī)械故障會(huì)損壞腦片的質(zhì)量?？傊趯?shí)驗(yàn)的全過(guò)程中能盡量注意每一個(gè)細(xì)節(jié)問(wèn)題，出現(xiàn)問(wèn)題后反復(fù)嘗試，實(shí)驗(yàn)就會(huì)容易起來(lái)。

二、海馬腦片的膜片鉗記錄

1、將刺激電極放置在含突觸前纖維腦片區(qū)域附近

在突觸傳遞的研究中，應(yīng)該同時(shí)記錄突觸前和突觸后神經(jīng)元的電信號(hào)，雖然，并不是所有突觸前神經(jīng)元胞體的動(dòng)作電位均可傳導(dǎo)至突觸(Vincent, 1996)。由于在突觸前和突觸后兩個(gè)神經(jīng)元上同時(shí)做膜片鉗記錄較困難，因此，需要用其它的方法來(lái)誘發(fā)突觸前動(dòng)作電位的發(fā)放。用刺激電極可在單個(gè)或多個(gè)突觸前細(xì)胞或軸突誘發(fā)動(dòng)作電位。另外，還可以用局部施加神經(jīng) 遞質(zhì)的方法來(lái)誘導(dǎo)動(dòng)作電位，如用短促的壓力、離子電泳或籠鎖谷氨酸光解等方法將谷氨酸加到突觸前胞體或軸突上，可以誘導(dǎo)出多個(gè)動(dòng)作電位。

用電極刺激 在神經(jīng)元培養(yǎng)皿中，可以用連接了電源(通常是膜片鉗放大器)的微電極直接刺激突觸前神經(jīng)元。在這種情況下，通常需要用負(fù)壓吸引使突觸前的細(xì)胞貼緊刺激電極，防止刺激電流的逸出。通過(guò)膜片鉗放大器給脈沖刺激的優(yōu)點(diǎn)是，它可以記錄到突觸前細(xì)胞被激活的胞外電信號(hào)(Role, 1987)。從培養(yǎng)的神經(jīng)元和腦片上找到有突觸聯(lián)系的一對(duì)神經(jīng)元是很困難的，但在神經(jīng)元培養(yǎng)中有單個(gè)神經(jīng)元的Autapic突觸就會(huì)方便許多。

可以用膜片鉗電極或尖端較細(xì)的一對(duì)鎢電極給突觸前軸突纖維施加電壓脈沖。用電極刺激可將Ag/AgCl電極置于孵育槽中與其構(gòu)成一電流回路。刺激電流一定要與膜片鉗放大器記錄電路隔離開(kāi)，以防止刺激電流漏入記錄電極中，而使刺激尾跡變得很大。為此，施加刺激需要一個(gè)未接地的隔離器。隔離器可以用外界脈沖刺激或計(jì)算機(jī)來(lái)控制。另外，還需要將刺激尾跡縮小到最小，以排除其對(duì)突觸信號(hào)起始段的干擾。為達(dá)到該目的，需將刺激電路的回路電極置于合適的位置或用膜片鉗放大器提高串聯(lián)電阻補(bǔ)償?shù)男省?/p>

刺激電極的位置 通常將刺激微電極或刺激電極置于突觸前軸突通過(guò)的部位。但有時(shí)突觸前軸突在制備腦片時(shí)即被去除。如果腦片制備時(shí)局部神經(jīng)環(huán)路被破壞，實(shí)驗(yàn)中就很難成功地記錄到突觸后電流。實(shí)際上，切腦片的角度是保存局部神經(jīng)環(huán)路最重要的因素之一，合適的角度既可使突觸后神經(jīng)元保存完好，也可保留部分較長(zhǎng)的突觸前纖維用于電刺激。用胞外電極刺激激活的神經(jīng)纖維較多，而且，每次刺激激活的纖維數(shù)目也會(huì)不同。如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍⒉煌膫鲗?dǎo)通路分開(kāi)，那么，必須要證明兩個(gè)刺激電極激活的纖維各不相同。

2、全細(xì)胞記錄

用可視化膜片鉗尋找清楚、且表面光滑、折光性較好的突觸后神經(jīng)元。在加了正壓后，將記錄電極移入腦片視野中，并接近事先選好的神經(jīng)元，然后，調(diào)整電極與神經(jīng)元的相對(duì)位置，利用負(fù)壓形成穩(wěn)定的高阻封接。用短簇的脈沖負(fù)壓使細(xì)胞破膜，穩(wěn)定2~3分鐘，觀察封接測(cè)試波形起始段與基線(xiàn)間的差值是否在100pA以?xún)?nèi)，封接電阻是否大于200M，如果是，且較 穩(wěn)定，再迅速補(bǔ)償串聯(lián)電阻和慢電容，舍棄串聯(lián)電阻大于30M的細(xì)胞，且在記錄過(guò)程中監(jiān)測(cè)串聯(lián)電阻的變化，當(dāng)變化大于20%時(shí)，中止記錄。如果細(xì)胞狀態(tài)不好，就馬上重新制備腦片，以提高實(shí)驗(yàn)效率。

3、判斷突觸前纖維

在記錄電刺激的突觸反應(yīng)時(shí)，可以驗(yàn)證刺激電極是否放置在突觸前神經(jīng)元或軸突上，在實(shí)驗(yàn)中，如果記錄不到突觸反應(yīng)，說(shuō)明刺激電極位置不正確，這時(shí)可以稍微移動(dòng)刺激電極的位置。如果還記錄不到，這可能還與組織片活性較差有關(guān)，可以更換組織片或改進(jìn)切片角度加以解決。電刺激方波時(shí)程一般設(shè)定為0.1~0.2ms，恒流條件下刺激強(qiáng)度一般為0.1~3mA，恒壓 條件下刺激強(qiáng)度為5~40V.4、突觸反應(yīng)的判斷及其波幅穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)

突觸信號(hào)的判斷 突觸信號(hào)樣的假象波有三個(gè)來(lái)源。第一、鄰近纖維的活動(dòng)使靜止細(xì)胞產(chǎn)生電壓波動(dòng)第二、如果恒流刺激強(qiáng)度過(guò)大，電流就可被注入突觸后神經(jīng)元，使其產(chǎn)生失活時(shí)間類(lèi)似EPSP或EPSC的信號(hào)，其信號(hào)幅度隨刺激強(qiáng)度的變化而變化第三、直接刺激突觸后神經(jīng)元誘導(dǎo)出突觸樣的動(dòng)作電位，這種反應(yīng)緊接著刺激尾跡發(fā)生，沒(méi)有翻轉(zhuǎn)電位，使突觸后 神經(jīng)元膜電位超極化和向記錄電極內(nèi)液中加入10mM的QX-314，均可避免突觸后神經(jīng)元產(chǎn)生動(dòng)作電位。但QX-314可阻斷多種突觸激活的通道(Otis, 1993)，在某些情況下它還可以增加漏電流。

多突觸激活 通常情況下，刺激電流可激活多個(gè)突觸前纖維，在突觸后可記錄到多種突觸信號(hào)。因此，有必要用一些選擇性阻斷劑阻斷一些不在研究范圍內(nèi)的突觸活動(dòng)。而且，刺激一束纖維，通?？杉せ疃鄠€(gè)同種的突觸前纖維。不同的刺激強(qiáng)度下，被激活的突觸前纖維數(shù)目不同，從而引起的突觸反應(yīng)也會(huì)不同。因此，要仔細(xì)調(diào)節(jié)刺激部位和刺激強(qiáng)度以便能刺激到單一的軸突(Stevens, 1995;Zhang, 1994a)。

胞內(nèi)刺激突觸前細(xì)胞是刺激單個(gè)軸突最好且最穩(wěn)定的方法。甚至在單個(gè)突觸前神經(jīng)元被激活后，在突觸后記錄到的反應(yīng)也是由多種神經(jīng)遞質(zhì)共同作用的結(jié)果。多突觸活動(dòng)是突觸活動(dòng)的疊加效應(yīng)，這包括去極化和超級(jí)化反應(yīng)。在一些標(biāo)本中，這是不可避免的。通?？捎盟幬镒钄嗖辉谘芯糠秶鷥?nèi)的突觸活動(dòng)。提高灌流液中鈣鎂等二價(jià)陽(yáng)離子的濃度至5mM，以增加動(dòng)作電位的閾值，就可以有效地減少多突觸活動(dòng)。通常情況下，突觸反應(yīng)是否來(lái)自單突觸可以根據(jù)如下條件來(lái)判斷潛伏時(shí)在0.5~1.5ms的范圍內(nèi)，高頻刺激時(shí)突觸反應(yīng)立即消失，突觸 反應(yīng)的上升支和下降支較平滑，且無(wú)長(zhǎng)潛伏時(shí)成份(Berry, 1976)。

電刺激引起的突觸反應(yīng)波幅在一定范圍內(nèi)的波動(dòng)是一種正?，F(xiàn)象，但記錄過(guò)程中有電流衰減發(fā)生，當(dāng)記錄過(guò)程中電流衰減大于10~15%，就必須中止實(shí)驗(yàn)。如果電流衰減不可避免，就需記錄較長(zhǎng)時(shí)間確定電流衰減的速度。低頻刺激(0.1~1Hz)下，記錄幾分鐘，觀察突觸反應(yīng)波幅的相對(duì)穩(wěn)定性。

電極內(nèi)液成份與受體敏感性 在形成全細(xì)胞記錄后，胞內(nèi)成份會(huì)被電極內(nèi)液成份所稀釋而發(fā)生改變，但在10分鐘內(nèi)即可達(dá)到平衡。因此，要記錄G蛋白耦聯(lián)受體的活性時(shí)，應(yīng)向電極內(nèi)液中加入10~100uM 的GTP(Trussell, 1987)。離子通道耦聯(lián)的NMDA和GABAA受體的特性在全細(xì)胞記錄過(guò)程中也會(huì)隨時(shí)間的變化而衰減。在記錄時(shí)可用多種方法來(lái)避免或減小其衰減，如提高電極內(nèi)液EGTA的濃度或用BAPTA等快速絡(luò)合劑代替EGTA，使胞內(nèi)鈣濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于1μM；向電極內(nèi)液中加入mM級(jí)的ATP；采用穿孔膜片鉗記錄等。另外，電極的串聯(lián)電阻小于10MΩ或突觸距胞體較近時(shí)受體的敏感性會(huì)很快下降。

電壓鉗制是否準(zhǔn)確 在電壓鉗制不足的情況下，記錄突觸后電流，雖然，可以為突觸藥理學(xué)和突觸效能的活動(dòng)依賴(lài)性的改變提供很有用的信息，但這些數(shù)據(jù)不能用于突觸后電流幅度和時(shí)程的準(zhǔn)確估計(jì)。那么，我們?nèi)绾闻袛嗝看斡涗洉r(shí)電壓鉗制的質(zhì)量呢？如果突觸后電流來(lái)自樹(shù)突遠(yuǎn)端，那么，該突觸后電流的鉗制質(zhì)量就較低(Silver, 1996)。另外，還有一些判斷鉗制質(zhì)量的方法，如突觸電流的上升時(shí)間較長(zhǎng)(如AMPA受體電流的上升時(shí)間大于1ms)；在某一突觸后電流的翻轉(zhuǎn)電位下可見(jiàn)到雙相的突觸后電流等。

評(píng)價(jià)電壓鉗制質(zhì)量最常用的方法就是在一次記錄后，繪制上升時(shí)間對(duì)下降時(shí)間曲線(xiàn)圖。如果上升和下降時(shí)間被樹(shù)突過(guò)濾過(guò)，則該曲線(xiàn)呈正相關(guān)關(guān)系，上升或下降時(shí)間與幅度間就會(huì)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系?？傊?，上升時(shí)間受樹(shù)突過(guò)濾的影響要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于下降時(shí)間。因此，如果隨上升時(shí)間的變化，下降時(shí)間變化較小，這種情況下的下降時(shí)間是可靠(Hestrin, 1990)。需要注意的是，上升時(shí)間與下降時(shí)間相關(guān)性較差并不足以判斷電壓鉗制的質(zhì)量。Johnston等對(duì)樹(shù)突上突觸反應(yīng)的鉗制效果做了深入的討論(Brown and Johnston, 1983;Spruston, 1993)。Husser(1997)等建議用突觸電導(dǎo)隨鉗制電位的變化來(lái)檢測(cè)樹(shù)突突觸反應(yīng)的幅度和動(dòng)力學(xué)特性。

在突觸后電流較大時(shí)也存在鉗制的偏差。這時(shí)，由電極串聯(lián)電阻引起的電壓降會(huì)影響到突觸后電流的幅度和形狀。若想驗(yàn)證是否存在這個(gè)問(wèn)題，可以向灌流液中加入少許受體的高親和力的阻斷劑，觀察突觸后電流的時(shí)程是否會(huì)隨其峰值的下降而變化，因?yàn)?，受體的阻斷不會(huì)改變其動(dòng)力學(xué)特性(Otis, 1996;Zhang, 1994b)另外，可以改變串聯(lián)電阻補(bǔ)償?shù)乃?，觀 察在不同的補(bǔ)償水平下突觸后電流會(huì)不會(huì)改變(Llano, 1991;Takahashi, 1995)。在許多情況下，有可能在發(fā)現(xiàn)偏差后更正突觸后電流的下降時(shí)間。值得注意的是，串聯(lián)電阻可以帶來(lái)其它的偏差，如對(duì)波形的濾波效應(yīng)。盲法膜片鉗記錄中，串聯(lián)電阻通常要大于10MΩ，因此，這種影響是不可避免的。但可以用公式1/(2pRseriesCM)計(jì)算記錄系統(tǒng)的過(guò)濾水平，確定突觸后電流峰值和形狀受影響的程度。

5、突觸反應(yīng)的記錄

現(xiàn)在許多實(shí)驗(yàn)室都開(kāi)始應(yīng)用膜片鉗技術(shù)記錄培養(yǎng)神經(jīng)元間、組織片中和異體移植組織中的突觸傳遞。與尖電極記錄相比，它具有明顯的優(yōu)勢(shì)。如，記錄的成功率較高，較高的信噪比，能較準(zhǔn)確地鉗制胞電位等。膜片鉗甚至可以應(yīng)用于在位突觸活動(dòng)的記錄(Covey, 1996)。

記錄自發(fā)突觸后反應(yīng) 自發(fā)的突觸后反應(yīng)有兩個(gè)來(lái)源。一是局部神經(jīng)環(huán)路中動(dòng)作電位發(fā)放引起的遞質(zhì)釋放，另一個(gè)是突觸囊泡中遞質(zhì)的自發(fā)釋放，后者被稱(chēng)為微突觸反應(yīng)(miniature synaptic event)。由于動(dòng)作電位依賴(lài)性的自發(fā)突觸反應(yīng)幅度與微突觸反應(yīng)差別并不大，因此沒(méi)有必要將兩者區(qū)分開(kāi)來(lái)。為記錄到很純的微突觸反應(yīng)，可以用TTX來(lái)阻斷動(dòng)作電位依賴(lài)性 自發(fā)突觸反應(yīng)，另外，去除灌流液中的鈣或向其中加入鈣通道阻斷劑鎘，即可以阻斷電刺激誘發(fā)的遞質(zhì)釋放。但如果多個(gè)囊泡在同一個(gè)突觸末梢中同步釋放，則以上兩種方法的效果就不同了(Korn, 1994)。

自發(fā)性突觸活動(dòng)的發(fā)放頻率通常小于幾Hz。發(fā)育期標(biāo)本上，自發(fā)性突觸活動(dòng)的頻率就非常低(Edwards, 1990)，因此，需要記錄較長(zhǎng)時(shí)間才能獲得足夠用于分析的突觸反應(yīng)。如果自發(fā)性突觸反應(yīng)的頻率很高，多個(gè)突觸的反應(yīng)就會(huì)重疊在一起，就不能通過(guò)上升或下降支的時(shí)間來(lái)判斷是單個(gè)突觸反應(yīng)或是多個(gè)突觸反應(yīng)的疊加，從而，給數(shù)據(jù)分析帶來(lái)許多麻煩。突觸反應(yīng)的頻率受溫度的影響較大(Fatt, 1952)，因此，在特定的實(shí)驗(yàn)中，可以通過(guò)調(diào)節(jié)灌流液的溫度來(lái)調(diào)整合適的突觸反應(yīng)頻率。局部施加去極化或超極化溶液也可以誘發(fā)自發(fā)突觸活動(dòng)(Bekkers, 1992;Tang, 1994)。在一些標(biāo)本中，在刺激誘發(fā)的突觸反應(yīng)之后，自發(fā)性突觸反應(yīng)的頻率會(huì)顯著增高，在含有鍶的灌流液中尤其如此(Dodge, 1969;Goda, 1994)。這一事實(shí)可用于檢測(cè)與特定突觸活動(dòng)相關(guān)的量子大小(Otis, 1996)。

數(shù)據(jù)采集 突觸反應(yīng)可用計(jì)算機(jī)軟件通過(guò)特定的采集卡采集到計(jì)算機(jī)硬盤(pán)上。記錄電刺激的突觸活動(dòng)時(shí)，還須用計(jì)算機(jī)產(chǎn)生一個(gè)TTL脈沖以激活刺激器，并由隔離器經(jīng)刺激電極刺激突觸前纖維。

所需的數(shù)據(jù)量 電刺激所誘導(dǎo)的突觸信號(hào)的記錄中，其數(shù)據(jù)量取決于信噪比和信號(hào)的變異度。對(duì)電刺激誘導(dǎo)的全細(xì)胞電流記錄而言，高信噪比不是問(wèn)題，但在記錄自發(fā)突觸信號(hào)時(shí)，信噪比就變得比較重要了。實(shí)驗(yàn)前最好做預(yù)實(shí)驗(yàn)，估計(jì)獲得準(zhǔn)確的均數(shù)所需記錄的信號(hào)數(shù)。當(dāng)然，也應(yīng)了解給定的刺激頻率下突觸信號(hào)的穩(wěn)定性。對(duì)于電刺激誘導(dǎo)的突觸信號(hào)，其峰值的變異 系數(shù)較小，因此，以0.1Hz的刺激頻率記錄5~10次就足夠了。對(duì)于自發(fā)性突觸信號(hào)來(lái)說(shuō)，信號(hào)峰值的變異度較大，通常大于20%，為得到較可靠的結(jié)果往往需要記錄100個(gè)以上的信號(hào)。實(shí)際上，要得出準(zhǔn)確的變異，往往需要記錄成百上千次信號(hào)，這也是得到較可靠的信號(hào)峰值分布規(guī)律的必要條件。在低頻刺激下記錄突觸信號(hào)時(shí)，要控制系統(tǒng)誤差，使記錄保持穩(wěn)定，須要制備活性較好的標(biāo)本，并要有配套的穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)條件。精確的測(cè)量控制是保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠性的基礎(chǔ)，而且，每次實(shí)驗(yàn)都要對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的評(píng)價(jià)。

6、突觸反應(yīng)的分析

(1)刺激誘發(fā)的突觸反應(yīng)的分析

突觸反應(yīng)的大小和形狀 突觸電流和電位的檢測(cè)指標(biāo)有潛伏時(shí)(latency)、峰值(amplitude)、10~90%上升時(shí)間(10~90% rise time)、1/2峰值時(shí)的波寬(half width)、失活的指數(shù)擬合時(shí)間常數(shù)(exponential decay curve)(圖1)。潛伏時(shí)是刺激尾跡(stimulus artifact)的起始時(shí)間到突觸電流或電位峰值的5%間的時(shí)間間隔(Zhang, 1994a)，潛伏時(shí)包括幾部分的延遲突觸前軸突發(fā)放和傳播動(dòng)作電位的時(shí)間、神經(jīng)末梢去極化到遞質(zhì)釋放的突觸延遲、遞質(zhì)擴(kuò)散到突觸后并引起受體激活的時(shí)間。由于遞質(zhì)擴(kuò)散和受體激活的速度相當(dāng)快，因此，突觸延遲是突觸前神經(jīng)末梢發(fā)放動(dòng)作電位和出現(xiàn)突觸后反應(yīng)間的時(shí)間間隔(Isaacson, 1995;Katz, 1965;Zhang, 1994a)。

突觸反應(yīng)的幅度是其峰值與反應(yīng)前基線(xiàn)間的差值。信噪比較低時(shí)，須要計(jì)算突觸反應(yīng)前多個(gè)點(diǎn)和突觸反應(yīng)峰值前后多個(gè)點(diǎn)的均值，然后，以它們間的差值作為突觸反應(yīng)的幅度。上升時(shí)間用從峰值的10%到90%的時(shí)間描述較為準(zhǔn)確。由于潛伏時(shí)的存在，很難判斷突觸反應(yīng)開(kāi)始的時(shí)間和到達(dá)峰值的時(shí)間。當(dāng)刺激尾跡嚴(yán)重地干擾了突觸反應(yīng)起始的判斷時(shí)，也可以用20 ~80%上升段的時(shí)間來(lái)描述上升時(shí)間。突觸反應(yīng)時(shí)程可以用以下幾種方法來(lái)描述：

1、1/2峰值間的時(shí)間，它包括了上升時(shí)間和下降時(shí)間；

2、突觸反應(yīng)的下降支經(jīng)多種指數(shù)擬合(如單指數(shù)擬合、雙指數(shù)擬合和多指數(shù)擬合)產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)時(shí)間常數(shù)(decay time constant)。

圖2自發(fā)突觸反應(yīng)的分析。A將膜電位鉗制于-70 mV時(shí)記錄的微小興奮性突觸后電流B 多個(gè)微小興奮性突觸后電流升支相重合的疊加圖及其波幅的直方圖。

雙脈沖易化(paired pulse facilitation, PPF)，即以較短的間隔重復(fù)刺激突觸前纖維兩次，第二次刺激誘發(fā)的突觸反應(yīng)大于第一次刺激的現(xiàn)象，這是一種突觸前現(xiàn)象，它可反映突觸前遞質(zhì)釋放概率的變化。

最小刺激誘發(fā)的突觸反應(yīng) 記錄最小刺激(僅能激活一個(gè)或少數(shù)幾個(gè)突觸前纖維的刺激)誘發(fā)的突觸反應(yīng)可用于估計(jì)量子的大小，這種刺激有時(shí)可以誘發(fā)突觸反應(yīng)(success)，而有時(shí)則不能(failure)，其誘導(dǎo)出的突觸反應(yīng)的均值可用于估計(jì)單個(gè)量子的大小。

可分析電刺激誘發(fā)的突觸反應(yīng)的軟件 有許多常規(guī)軟件均可用于突觸反應(yīng)的分析，如Axon公司開(kāi)發(fā)的pClAMP軟件包，WaveMetrics公司開(kāi)發(fā)的Igor Pro等，均可用于電刺激誘發(fā)的突觸反應(yīng)的分析。

(2)自發(fā)性突觸反應(yīng)的分析

突觸反應(yīng)的檢測(cè) 目前有三種方法判斷自發(fā)性突觸反應(yīng)(Hwang，1999)。第一、峰值超過(guò)即定閾值，該方法受基線(xiàn)波動(dòng)的影響較大，這可以通過(guò)基線(xiàn)加以彌補(bǔ)第二、峰值相對(duì)于基線(xiàn)的變化量超過(guò)閾值，它受高頻噪聲的干擾較大，而且，很難設(shè)定一個(gè)合適的閾值，為克服這些不足，可以在處理時(shí)對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行濾波處理，除去高頻噪聲第三、與即定的波形模板進(jìn)行比較，然后，判斷是否突觸反應(yīng)，該方法對(duì)符合模板的突觸反應(yīng)具有很高的敏感性，但在設(shè)定模板前，必須知道所要研究的突觸反應(yīng)的一系列參數(shù)的范圍，如果模板設(shè)計(jì)不合理，將大大降低探測(cè)的敏感性，而且這種方式尤其不適于有信號(hào)重疊或多個(gè)突觸成份數(shù)據(jù)的分析。

PCLAMP 9.0對(duì)自發(fā)突觸反應(yīng)的分析基于波形模板，只要模板設(shè)計(jì)得當(dāng)，探測(cè)概率也較高。另外，Copenhagen等用Igor Pro開(kāi)發(fā)了一個(gè)分析程序minifit.ipf。該程序?qū)Φ诙N方法做了一些改進(jìn)，分三步探測(cè)突觸反應(yīng)。第一步，粗篩可能的突觸反應(yīng)，包括它們的起始時(shí)間和峰值時(shí)間第二步，用突觸反應(yīng)起始與峰值間的差值計(jì)算可能的突觸反應(yīng)的波幅，去除波幅 小于閾值的波形第三步，對(duì)起始點(diǎn)之前數(shù)點(diǎn)和峰值時(shí)間后的多個(gè)點(diǎn)取平均值，以排除噪聲的影響，并計(jì)算兩者間的差值對(duì)突觸反應(yīng)的峰值做更精確的估計(jì)，如果該波幅低于閾值，與會(huì)從數(shù)據(jù)庫(kù)中被刪除。除波幅閾值的判斷標(biāo)準(zhǔn)外，該程序還還引入了上升時(shí)間、下降時(shí)間和波形時(shí)程范圍等描述波形模板的參數(shù)來(lái)進(jìn)一步判斷突觸反應(yīng)。該程序還可用于測(cè)量突觸反應(yīng)的生物物理學(xué)特征。它可計(jì)算10~90%上升時(shí)間，描述突觸反應(yīng)的上升相的動(dòng)力學(xué)。該程序調(diào)用了Levenberg-Marquardt非線(xiàn)性曲線(xiàn)擬合函數(shù)對(duì)突觸反應(yīng)的下降相做單指數(shù)或雙指數(shù)擬合，通過(guò)雙指數(shù)擬合與單指數(shù)擬合的比較檢驗(yàn)，計(jì)算其失活時(shí)間常數(shù)。該程序還提供了一個(gè)非常有用的功能，就是將所有記錄到的非連續(xù)的突觸反應(yīng)以上升支的中點(diǎn)為基礎(chǔ)相疊加，做逐點(diǎn)平均，這樣，既可以降低噪聲，也可以計(jì)算其動(dòng)力學(xué)特征參數(shù)。

總之，腦片膜片鉗記錄成功的前提是制備活性較好的腦片，記錄條件優(yōu)化后，實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性、可重復(fù)性和準(zhǔn)確性均較高，在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用較為廣泛。許多神經(jīng)毒物可影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的突觸傳遞功能，腦片膜片鉗技術(shù)將為實(shí)時(shí)、準(zhǔn)確、高效地研究這些毒物作用的機(jī)制提供可靠的技術(shù)支持。

腦片技術(shù)(1)準(zhǔn)備樣品。

(2)取大鼠，斷頭，在60s內(nèi)快速將腦取出并置于含95%氧和5%二氧化碳的冰冷生理鹽水中冷卻3-5min用清潔、鋒利的解剖刀清除軟膜等組織，在此過(guò)程中避免擠壓和使腦變形的動(dòng)作。(3)用氰丙烯酸鹽膠(Cynoacrylate glue)將其按所需方向固定于切片裝置的皿槽中，并放一塊瓊脂。即刻用冰水傾倒其上直到浸埋為止。保持腦組織在低溫狀態(tài)下以減小由于缺氧而損傷是至關(guān)重要的，并持續(xù)通氣。

(4)用振動(dòng)切片機(jī)切成400μm厚的切片，將切片移至內(nèi)含32-35℃生理鹽水的記錄槽內(nèi)，水中持續(xù)通以95%氧和5%二氧化碳?xì)?/p>

(5)腦片放于5% CO2和95%O2飽和的Krebs堿性緩沖液5ml，在37℃下孵育5-15min平衡。(6)在35℃生理鹽水中孵育30-60min后開(kāi)始記錄電活動(dòng)(也有不進(jìn)入這步，而直接在SS中孵育30min以上。

不用任何消化酶、避免酶損傷離子通道。一般腦片多用于膜片鉗記錄和腦片在位的原位分子雜交。

(1)膜片鉗技術(shù) 常用方式有：吹打清潔后封接；盲插封接。第一種方法是用帶有正壓記錄的記錄微電極吹掉靶細(xì)胞周?chē)纳窠?jīng)纖維網(wǎng)之后，再與細(xì)胞膜進(jìn)行封接。這一過(guò)程是在紅外微分干涉相差顯微鏡直視下進(jìn)行。這種方法可在較大神經(jīng)元上記錄，也可在較小的神經(jīng)元上記錄，甚至可在一個(gè)神經(jīng)元的不同部位插上不同電極?？梢赃x擇不同的細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行封接。但盲插法只要一般解剖顯微鏡即可，不需清潔，又可免去吹打?qū)?xì)胞及突觸結(jié)構(gòu)的傷害。但它不能選擇細(xì)胞。目前已將膜片鉗技術(shù)發(fā)展到與碳纖電極相結(jié)合的優(yōu)點(diǎn)?？梢詸z測(cè)到單個(gè)囊泡的釋放。而膜電容監(jiān)測(cè)方法難以測(cè)到胞吐和胞飲的過(guò)程。而碳纖電極原理是電化學(xué)方法，檢測(cè)碳纖電極的前端加上可使被檢測(cè)物質(zhì)快速氧化的電壓(如600-800mV)，使電極端面周?chē)a(chǎn)生很強(qiáng)的電場(chǎng)，當(dāng)可被氧化的物質(zhì)接近這個(gè)電場(chǎng)時(shí)，就會(huì)被氧化釋放電子到碳纖電極從而產(chǎn)生電流。

根據(jù)測(cè)量的需要，通常在碳纖電極上加上恒 定電壓和周期電壓。采用恒定電壓的安培測(cè)量法具有最高的時(shí)間分辨率，而采用周期電壓的快循環(huán)電壓測(cè)定法(如采用周期三角波)則可區(qū)分被氧化物質(zhì)類(lèi)別。一般碳纖電極為5-10μm，電極一端與放大器相連，周?chē)糠值脑∫罕匦杞^緣。碳纖電極必需牢固固定,以保持剛性減小振動(dòng)。而且碳纖電極的電流放大器必需要有足夠的帶寬(3-5KHz)，一般膜片鉗放大器能滿(mǎn)足要求。普通的碳纖電極主要插于玻璃毛細(xì)管中用玻璃電極拉制器搠制?？捎媚z粘接碳纖維和玻璃管以保證二者緊密結(jié)合。但碳纖電極也有一個(gè)缺點(diǎn)即是記錄的是細(xì)胞局部活動(dòng)而非全細(xì)胞。

(2)腦片雜交。

(3)腦片標(biāo)記，使突觸攝入放射性標(biāo)記神經(jīng)遞質(zhì)或前體，然后神經(jīng)腦片攝入，使神經(jīng)末梢遞質(zhì)貯存庫(kù)被選擇性標(biāo)記。在37℃孵育30-60min，然后用灌流液沖洗腦片，將腦片移入小室中灌流。灌流小室由直徑5mm的玻管制面，兩 端用塞子，調(diào)整塞子位置，使小室內(nèi)的體積為0.25-0.3ml。兩頭為流入管和流出管，為使腦片去極化，可加入一根鉑金絲作為刺激電極。每小室中移入2-5片腦片，用37℃灌流液灌流小室，速度為0.25-0.3ml/min，收集灌流液(每2-5min收集一次，共20-30min)，測(cè)定基礎(chǔ)釋放量。然后用電極刺激或加入不同物質(zhì)，使之去極化，測(cè)定流出液的放射性活性。用液體閃爍記數(shù)儀或HPLC電化學(xué)檢測(cè)。℃℃

(4)舉例

海馬腦片神經(jīng)元中的K+濃度測(cè)定法 先準(zhǔn)備好振動(dòng)切片機(jī)，并將所有器械將要接觸大鼠腦部位的部分放于4℃的細(xì)胞外液中。切片機(jī)切片刀先放一塊瓊脂，后腦組織可用502膠水或其它的膠張貼)成年大鼠，體重120-200g，乙醚麻醉下切開(kāi)頭皮，暴露顱骨，斷頭取腦。(幼年大鼠更好，則不必切開(kāi)頭皮和麻醉，可直接斷頭取腦，取腦過(guò)程中，不斷地加4℃SS，并將枕葉和額葉切除，放于切片機(jī)通氣的4℃的SS液體中)。取腦后放置于4℃，95%O2，5%CO2混合氣體飽和ACSF中凈血降溫，然后將腦置于用人工腦脊髓液預(yù)先濕潤(rùn)的濾紙上，沿正中線(xiàn)分開(kāi)大腦半球，由腦腹內(nèi)側(cè)沿皮層邊緣剝離雙側(cè)海馬，在4℃供氧條件下，用刀片垂直于海馬長(zhǎng)軸，用手切將其切成400-500μm的腦片，將全部腦片置于36℃ACSF中，并不斷通入混合氣，孵育2h，ACSF pH調(diào)節(jié)7.3-7.4。(或?qū)⒛X組織放于振動(dòng)切片機(jī)上，基本控制大致的位置。用切片機(jī)切成8片左右，再取其 中較好的幾片進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將腦片在SS中將丘腦部分去除，保留皮層和海馬，取海馬CA1區(qū)，可以皮層的嗅溝作為標(biāo)記。再的取出切片放于孵育液中，通氣的孵育30min以上，再打碎所要部分的細(xì)胞，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。)

實(shí)驗(yàn)時(shí)，將孵育腦片置于36℃恒溫浴槽內(nèi)的尼龍網(wǎng)上，液面略高于液氣交界面，并不斷通入混合氣體供氧，氣體流量控制在400/分鐘，ACSF由蠕動(dòng)泵以2-4ml/min速度持續(xù)灌流。雙極不銹剛電極置于CA3區(qū)神經(jīng)纖維 上，刺激電流0.3-1nA，時(shí)間為50-150ms，Ag-AgCl作參考電極，一端連碚灌槽，另一端與離子計(jì)、示波器接地相連。用多維手動(dòng)微電極推進(jìn)器分別將普通及K+選擇性微電極刺入神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)。兩電極尾部均經(jīng)Ag-AgCl絲與ISE-1型離子計(jì)探頭相連，從離子計(jì)數(shù)字監(jiān)控表測(cè)刺激前后細(xì)胞膜電位(Em)、離子電極電位(Ee)及反應(yīng)離子活度的電位(Ek=Ee-Em)，并將Em, Ee顯示于示波器中，實(shí)驗(yàn)后將刺激前后電極電位換算成相應(yīng)神經(jīng)元K+活度，并加以校正。

在測(cè)量時(shí)，理想的配置方案是讓離子選擇性微電極和普通微電極兩者同時(shí)都在同一神經(jīng)元中。那么兩電極的Em值相同。若不能在同一神經(jīng)元，則多測(cè)幾次求其增均值。不過(guò)，用雙管微電極，則必須用兩個(gè)放大器。活度測(cè)定一般采取校正曲線(xiàn)法。

注意(1)拉制微電極時(shí)，頸部不能太長(zhǎng)，以便于液膜和內(nèi)充液的灌注。

(2)電極硅化時(shí)，防止硅化層太厚而阻塞尖端。(3)選擇電極前，一定要先測(cè)量電極的穩(wěn)定性，選擇好的電極。(4)灌注離子交換劑時(shí)，若內(nèi)有氣泡，可用手拉伸玻璃針把它引出，但要在放大100倍顯微鏡下觀察進(jìn)行.(5)鉀離子選擇性電極使用前，應(yīng)將電極下端浸入0.1mol/L KCl溶液內(nèi)，靜置1-2h，否則電極可能會(huì)出現(xiàn)明顯 的電位漂移。(6)為避免電極污染，制成后不宜久放，宜于當(dāng)天使用。(7)腦薄片制作時(shí)，要在冰浴中進(jìn)行，以減少術(shù)中出血。且以快而不損傷組織為原則。注意盡可能剝凈腦膜，切片避免薄片變形，破裂或卷曲。(8)人工配制腦脊髓時(shí)，溶液用ddH2O及化學(xué)試劑新鮮配制。灌流液灌注速度以每分鐘灌注更新率達(dá)6-10次不宜。

附 離子選擇性微電極，即離子敏感性微電極(ISME)，其特點(diǎn)對(duì)細(xì)胞損傷小，可制成雙管微電極。當(dāng)鉀離子選擇性微電極插入神經(jīng)元內(nèi)，產(chǎn)生電位Ee是反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)K+的電位和細(xì)胞膜電位Em之和，即Ee=E+Em。另一普通微電極插入神經(jīng)元內(nèi)，可記錄到細(xì)胞膜電位Em，通過(guò)減法器，可得到E=Ee=Em，再通過(guò)校正雙曲線(xiàn)法，可求得細(xì)胞內(nèi)K+離子活度。

1單管選擇性微電極的制作(1)微電極處理 選用硬度高(GG-17)、管壁厚、或電阻率較高的玻璃毛坯，經(jīng)1:1濃硫酸和濃硝酸浸泡，自來(lái)水沖洗，蒸餾水煮沸后烤干備用。用微電極拉制儀拉成小于1μm的微電極。直流電阻為50±10MΩ。

(2)電極尖端疏水化 潔凈玻璃表面具有親水性，故充灌的非水溶性離子交換劑將很快被水相物質(zhì)所取代。因而，在灌注離子交換劑前，需對(duì)電極尖端進(jìn)行疏水化處理。即硅化。在直徑約15cm，高約3cm玻璃盤(pán)內(nèi)放入約10根玻璃微電極。上面加蓋，蓋上有一小孔。加溫到150℃，維持15-30min以烘干電極，在小孔中滴入六甲基二硅烷約300μl，維持在150℃約40-60min，用其蒸氣硅烷化。還可將少量15%六甲基二硅烷注射到微電極轉(zhuǎn)窄處。由于存在微絲，硅化溶液會(huì)自然充入微電極頂部。注入硅化液的微電極應(yīng)在室溫下靜置1h，然后置250℃烘箱同烤1h。加熱蒸去未與玻璃鍵合的硅化液組分。

(3)離子交換劑和內(nèi)部電解質(zhì)溶液的灌注 將玻璃電極倒置在金屬框中，并放在250℃烘箱烘1h。冷卻后，用毛細(xì)玻璃管自尾部向硅烷化后的電極尖端注入相應(yīng)的0.5mol/L KCl，至電極肩部為止。然后將玻璃管自尾部向硅烷化后的電極尖端注入相應(yīng)的0.5mol/L KCl，至電極肩部為止。然后將玻璃微電極尖端1-2mm浸入Fluka K+-Cocktil 60031 10min左右，樹(shù)脂可在電極尖端形成100μm左右液柱，最后作尾部灌注時(shí)，如果硅化處理良好，樹(shù)脂注入后略加引導(dǎo)，會(huì)自動(dòng)流向尖端，且樹(shù)脂與玻璃封接穩(wěn)定。

(4)尾端處理 為防止水分蒸發(fā)，在尾部封以礦物油，然后將Ag-AgCl絲導(dǎo)入?，F(xiàn)在一般有固定的玻璃管，不必進(jìn)行特殊處理了。一般拉微電極，分兩步，拉出的微電極尖端細(xì)，但尖端不長(zhǎng)。一般第一步溫度為60.2℃，第二步為37℃。玻管應(yīng)放直，否則可能拉出的玻管不正。

2雙管微電極制作。(1)將兩單管毛坯粘在一起或火焰中封在一起。(2)拉成雙管微電極(3)在加壓下用蒸餾水充注一管，使其防止硅烷化。(4)將別一管頂端于硅酮溶液中浸5-10s，使其從頂端起200-500μm內(nèi)硅化。(5)加熱干燥整個(gè)雙管電極，從20℃開(kāi)始至200℃至少烤1h。(6)借助顯微鏡操縱器將其頂端頂著的瓷物撕開(kāi)，通常使尖端為2-3μm。(7)用直接注射法，以0.15mol/L NaCl水溶液充注非離子選擇管。(8)將電極浸入離子交換樹(shù)劑內(nèi)約10-15s，以便液體離子交換劑灌入硅化管頂端。(9)用注射法以0.5mol/L KCl灌注此管的其余部分。(10)尾端封以礦物油。然后將Ag-AgCl絲導(dǎo)入。

3鉀離子選擇性微電極的保存。經(jīng)硅化后電極未充液前可保存數(shù)天，最好在干燥空氣中保存。微電極保存待用時(shí)，需將其頂端浸在0.5mol/L KCl中。

4K+選擇性微電極校準(zhǔn)。每次測(cè)定前，要在各種不同濃度KCl(3-300mmol/L)溶液(150mmol/L NaCl作背景)測(cè)試各電極的靈敏度。KCl溶液濃度每變10倍，鉀離子選擇性微電極反映出電位斜率為50-55mV，斜率過(guò)低時(shí)，棄去不用。

注(1)微電極多次插入和拔出細(xì)胞，其尖端可能受損或污染上雜質(zhì)，使其輸出電位變得不穩(wěn)定。因而每次測(cè)量時(shí)，都要檢查插入細(xì)胞前和拔出細(xì)胞后的電位值是否一致，若不一致，則測(cè)量數(shù)據(jù)無(wú)效，應(yīng)更換微電極。(2)離子選擇性微電機(jī)有測(cè)量的是離子活度，而不是離子濃度。離子活度(a)與離子濃度(c)之間關(guān)系：a=f?c。f為活度系數(shù)，主要決定于溶液的離子強(qiáng)度和離子電荷數(shù)，同時(shí)也在某種程度上決定于溶液的組分。因而在生物介質(zhì)高離子強(qiáng)度下，不能再用離子濃度代替活度。(3)整個(gè)測(cè)量應(yīng)在恒溫和屏蔽下進(jìn)行。(4)應(yīng)維持細(xì)胞的正常生理狀況。