第一篇：實(shí)驗(yàn)三園藝植物種質(zhì)資源調(diào)查

實(shí)驗(yàn)三園藝植物種質(zhì)資源調(diào)查

一、目的和要求

學(xué)習(xí)園藝植物種質(zhì)資源調(diào)查的方法，了解本地園藝植物種質(zhì)資源的種類(lèi)和生境。掌握種質(zhì)資源調(diào)查的內(nèi)容，認(rèn)識(shí)園藝種質(zhì)資源調(diào)查對(duì)栽培（為生產(chǎn)提供有直接栽培價(jià)值的材料）、育種和科學(xué)研究（為育種及利用作砧木或提供有價(jià)值的原始材料）的重要意義。

二、方法步驟

1.準(zhǔn)備階段建立調(diào)查小組—擬訂調(diào)查計(jì)劃---進(jìn)行試點(diǎn)調(diào)查---收集參考資料(氣象和地理等)---設(shè)計(jì)記載表格。

2.調(diào)查階段（野外還要進(jìn)行標(biāo)本采集和制作）。

3.總結(jié)階段。調(diào)查總結(jié)評(píng)價(jià)建議。

三、進(jìn)行資料查閱和調(diào)查

通過(guò)查找文獻(xiàn)、詢(xún)問(wèn)、實(shí)地考察等途徑調(diào)查你的家鄉(xiāng)都有哪些園藝種質(zhì)資源？用途、特點(diǎn)和利用情況，并給予評(píng)價(jià)。（還有哪些需要進(jìn)一步開(kāi)發(fā)？）

四、作業(yè)

寫(xiě)出種質(zhì)資源調(diào)查報(bào)告

附： 園藝種質(zhì)資源調(diào)查報(bào)告

概況（調(diào)查時(shí)間、地點(diǎn)、自然條件、生境）

園藝植物種質(zhì)資源分布情況以及特點(diǎn)：調(diào)查地區(qū)園藝植物的總體類(lèi)別（栽培種、野生種；果樹(shù)、蔬菜、觀(guān)賞植物）、特點(diǎn)；分類(lèi)及評(píng)價(jià)、利用情況；可借鑒的和不足地方等。

第二篇：《園藝植物生物技術(shù)》實(shí)驗(yàn)教案

實(shí)驗(yàn)一 現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室與實(shí)驗(yàn)儀器

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)儀器是開(kāi)展現(xiàn)代生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)平臺(tái)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室布局和儀器配置的掌握程度是學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu)完整性的重要體現(xiàn)。通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)參觀(guān)和老師講解加深同學(xué)們對(duì)現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃與布局及常用儀器設(shè)備的主要功能的認(rèn)識(shí)，掌握高速冷凍離心機(jī)、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等關(guān)鍵儀器的使用方法。

二、實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所選擇及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

園藝學(xué)院植物分子生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室與開(kāi)展現(xiàn)代生物技術(shù)研究直接相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室分工與布局和主要相關(guān)儀器：如與組織培養(yǎng)有關(guān)的超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、接種至、培養(yǎng)室等；與分子生物學(xué)有關(guān)的高速冷凍離心機(jī)、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。

三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1、相關(guān)背景知識(shí)回顧：對(duì)課堂講述的各種生物技術(shù)如分子標(biāo)記、細(xì)胞和組織培養(yǎng)等操作過(guò)程進(jìn)行回顧，重要指出每個(gè)環(huán)節(jié)要用到的必備儀器的作用、性能指標(biāo)、操作注意事項(xiàng)及儀器選購(gòu)中應(yīng)注意的問(wèn)題等。

2、每班分為兩小組簡(jiǎn)要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的布局及功能分區(qū)情況；針對(duì)每個(gè)分區(qū)的重要儀器進(jìn)行講述，結(jié)束時(shí)對(duì)所有參觀(guān)內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)要總結(jié)，并回答同學(xué)們的提問(wèn)。

四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)有很多易損儀器或有毒試劑，參觀(guān)時(shí)要求同學(xué)們認(rèn)真記錄，不要隨意動(dòng)手，以保證儀器和人身安全。

五、思考題

1、根據(jù)參觀(guān)內(nèi)容，描述本次參觀(guān)有了解到的主要儀器的名稱(chēng)、用途及使用中的注意事項(xiàng)。

2、一個(gè)現(xiàn)代化生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的基本功能的必備儀器有哪些？實(shí)驗(yàn)二 質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測(cè)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

質(zhì)粒是攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或表達(dá)的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質(zhì)粒的分離與提取時(shí)最常用、最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。質(zhì)粒的提取方法很多，大多包括3個(gè)主要步驟：細(xì)菌的培養(yǎng)、細(xì)菌的收集和裂解、質(zhì)粒DNA的分離和純化。本實(shí)驗(yàn)以堿裂解法為例介紹質(zhì)粒的抽提過(guò)程，應(yīng)掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理、步驟及各試劑的作用。

二、實(shí)驗(yàn)原理 在pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中，細(xì)菌的線(xiàn)性大分子量染色體DNA變性分開(kāi)，而共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA雖然變性但仍處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。通過(guò)離心，可除去大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提進(jìn)一步純化質(zhì)粒DNA。

三、主要儀器及試材

含有質(zhì)粒pUC18載體的大腸桿菌菌液及離心機(jī)、移液槍、離心管及質(zhì)粒DNA提取有關(guān)試劑。

液氮、及DNA提取有關(guān)試劑。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

（一）試劑配制:

1、LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分裝至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高壓滅菌15min，室溫貯存。

2、X-gal（20mg/ml）:20mg X-gal溶于1ml二甲基甲酰胺中，-20℃避光保存。

3、IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過(guò)濾滅菌后-20℃保存。

4、Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去離子滅菌雙蒸水中，定容至5ml，-20℃保存。

5、溶液I: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl（pH 8.0），10mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

6、溶液II:0.2N NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前臨時(shí)配制。

7、溶液III:醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 4.8。配制方法：5M KAc300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。

8、TE:10mM Tris-HCl（pH 8.0），1mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）1ml，0.5M EDTA（pH 8.0）0.2ml，加ddH2O至100ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

9、苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。

10、乙醇（無(wú)水乙醇、70%乙醇）。11、5×TBE:Tris-base 54g，硼酸27.5g，EDTA-Na·2H2O 4.65g，加ddH2O至1000ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

12、溴化乙錠（EB）：10mg/ml

13、Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNase-free）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加熱15min，分裝貯存于-20℃。14、6×loading buffer（上樣緩沖液）:0.25%溴酚藍(lán)，0.25%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。15、1%瓊脂糖凝膠:稱(chēng)取1g瓊脂糖與三角燒瓶中，加100ml 1×TBE，微波爐加熱至完全熔化，冷卻至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）至終濃度0.5ug/ml（注意：EB為強(qiáng)誘變劑，操作時(shí)帶手套），輕輕搖勻，緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩沖液1×TBE），即可上樣。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線(xiàn)37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、用無(wú)菌牙簽或槍頭挑取LB固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的單菌落，接種于20ml含有Amp抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖床-250r/min過(guò)夜培養(yǎng)。

3、吸取1.5ml菌液，12000g離心1min，收集菌體，倒掉菌液；吸取1.5ml菌液，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈。

4、加入200ul預(yù)冷的溶液I，重新懸浮細(xì)胞，震蕩混勻（注意：應(yīng)徹底混勻沉淀或碎塊）。

5、加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上2-3min，使細(xì)胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。

6、加入300ul預(yù)冷的溶液III，溫和顛倒混勻，見(jiàn)白色絮狀沉淀，置于冰上3-5min，使雜質(zhì)充分沉淀（溶液III為中和液，此時(shí)質(zhì)粒DNA復(fù)性，染色體和蛋白質(zhì)不可逆變性，形成不可溶復(fù)合物，同時(shí)K+使SDS-蛋白復(fù)合物沉淀）。

7、吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的雜質(zhì)）至另一Eppendorf管中，加入2/3體積的異丙醇或2.5倍體積的預(yù)冷無(wú)水乙醇，混勻，室溫放置5min，4℃離心12000g ×15min。

8、倒盡上清，加75%乙醇浸洗沉淀除鹽1-2次，4℃離心 10000g×10min，棄上清，將沉淀在室溫或超凈工作臺(tái)上風(fēng)干。

9、將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

10、取制備的質(zhì)粒DNA 1-2ul，加適當(dāng)loading buffer混勻上樣，1%瓊脂糖凝膠2.5V/cm電泳1h進(jìn)行檢測(cè)。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物質(zhì)，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，盡量減少臺(tái)面污染。

2、DAN電泳時(shí)只能由負(fù)極到正極，電泳時(shí)要注意電極是否正確。

3、質(zhì)粒電泳檢測(cè)一般有三條帶，分別為質(zhì)粒的超螺旋、開(kāi)環(huán)、線(xiàn)型三種構(gòu)型。

六、思考題

簡(jiǎn)述質(zhì)粒DAN提取的步驟。

實(shí)驗(yàn)三 PCR技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一種體外核酸擴(kuò)增系統(tǒng)，是分子克隆技術(shù)中常用技術(shù)之一。PCR具有反應(yīng)快速、靈敏、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)掌握PCR原理，學(xué)習(xí)PCR操作過(guò)程。

二、實(shí)驗(yàn)原理

PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在環(huán)境下依賴(lài)于DNA聚合酶的酶促反應(yīng)。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板結(jié)合的特異性。反應(yīng)分為變性、退火、延伸三步，經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)，介于兩個(gè)引物之間的特異DNA片段得到大量擴(kuò)增。

三、主要儀器及試材

含有外源cDNA片段的質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因蘋(píng)果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關(guān)試劑。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1、調(diào)整模板濃度至5ng/ul。

2、按下列體系配制反應(yīng)混合液，混勻，離心5秒（注意加1滴礦物油覆蓋PCR管）。

Template DNA

2ul（20ng）10×buffer

2.0ul MgCl2（25mM）

1.5ul Primer F（10uM）

0.2ul Primer R（10uM）

0.2ul dNTPs（2mM）

2.0ul Taq（5U/ul）

0.2ul Add ddH2O to

20ul

3、PCR反應(yīng)循環(huán)條件設(shè)置：

95℃

3min

1cycle 94℃

1min

55℃

1min 72℃

90s

35cycles 72℃

10min

1cycle 4℃

forever

4、檢測(cè)：加2ul溴酚藍(lán)，混勻，短暫離心，取15ul反應(yīng)產(chǎn)物點(diǎn)樣電泳

5、在1%瓊脂糖凝膠上點(diǎn)樣電泳；EB染色，紫外觀(guān)察。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、引物設(shè)計(jì)應(yīng)具有特異性，依靠引物設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)；引物分裝成多管，不宜反復(fù)凍融多次；

2、PCR反應(yīng)的各種成分不能遺漏，操作應(yīng)戴手套，冰上操作；

3、根據(jù)引物的Tm值和擴(kuò)增片段長(zhǎng)度以及PCR儀的特性來(lái)設(shè)定PCR循環(huán)條件；

4、注意分析電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物時(shí)出現(xiàn)拖帶或非特異性擴(kuò)增帶、無(wú)DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。

六、思考題

簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的原理和步驟。

第三篇：《園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)大綱

《園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)大綱

課程編號(hào)：131010418s 適用專(zhuān)業(yè)：園藝專(zhuān)業(yè) 學(xué)時(shí)數(shù)：9 學(xué)分?jǐn)?shù)：0.5 執(zhí)筆者：董華芳

編寫(xiě)日期：2006年8月

一、課程的性質(zhì)和目的

《園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)》園藝專(zhuān)業(yè)的必修課程，本課程任務(wù)是教授植物組織培養(yǎng)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)及基礎(chǔ)理論，并培養(yǎng)學(xué)生運(yùn)用所學(xué)知識(shí)和實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的能力，為學(xué)生以后從事相關(guān)工作或研究打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

二、課程的教學(xué)內(nèi)容要求及學(xué)時(shí)分配

實(shí)驗(yàn)一 玻璃器皿、用具和器械的洗滌和滅菌（1學(xué)時(shí)）

內(nèi)容要求：

學(xué)會(huì)正確洗滌玻璃器皿、用具，使之達(dá)到實(shí)驗(yàn)的要求；學(xué)會(huì)正確使用高壓滅菌鍋，并對(duì)玻璃器皿、用具和器械的進(jìn)行正確的滅菌。

教學(xué)要求：

掌握洗滌實(shí)驗(yàn)用具和高壓滅菌的正確方法。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的要求：

寫(xiě)出洗滌實(shí)驗(yàn)用品的步驟和正確使用高壓滅菌的方法。

實(shí)驗(yàn)二 母液的配制（2學(xué)時(shí)）

內(nèi)容要求：

學(xué)會(huì)使用1/10000精度的分析天平和電子天平。

學(xué)會(huì)正確配置貯備液，包括藥品的溶解、混藥的順序。教學(xué)要求：

掌握貯備液的配置方法。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的要求：

寫(xiě)出配置貯備液的正確步驟并說(shuō)明此實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意的問(wèn)題

實(shí)驗(yàn)三 培養(yǎng)基的配制（2學(xué)時(shí)）

內(nèi)容要求：

學(xué)會(huì)熬制培養(yǎng)基。

學(xué)會(huì)正確分裝培養(yǎng)基及封口培養(yǎng)瓶。

培養(yǎng)基的正確滅菌。教學(xué)要求：

通過(guò)培養(yǎng)基的正確配置及滅菌，使我們對(duì)培養(yǎng)基的成分與性質(zhì)更加清楚，從而更好的利用它。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告的要求：

（1）寫(xiě)出配置培養(yǎng)基的正確步驟

（2）試比較培養(yǎng)基的滅菌和玻璃器皿的滅菌有什么不同。

實(shí)驗(yàn)四 植物莖尖快速繁殖技術(shù)（4學(xué)時(shí)）

內(nèi)容要求：

要求學(xué)生掌握植物快速繁殖的程序和操作方法，包括外植體的消毒、接種、繼代培養(yǎng)及污染原因的分析及控制方法。教學(xué)要求：

掌握莖尖剝離技術(shù)。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的要求： 寫(xiě)出植物快速繁殖的程序和操作方法，包括外植體的消毒、接種、繼代培養(yǎng)及污染原因的分析及控制方法。

三、課程成績(jī)的考核辦法

實(shí)驗(yàn)成績(jī)是由實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教師依據(jù)學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中的表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)完成情況以及撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告情況等綜合評(píng)定。每次實(shí)驗(yàn)成績(jī)?cè)u(píng)定等級(jí)依次為：A、B、C、D等。

四、參考教材

1.《園藝植物離體培養(yǎng)學(xué)》，陳振光主編，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1996年 2.《園藝植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)》，姜玲編, 1992年

第四篇：《園藝植物生物技術(shù)》實(shí)驗(yàn)教案

《園藝植物生物技術(shù)》實(shí)驗(yàn)教案

實(shí)驗(yàn)一 現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室與實(shí)驗(yàn)儀器

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)儀器是開(kāi)展現(xiàn)代生物技術(shù)研究的基礎(chǔ)平臺(tái)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室布局和儀器配置的掌握程度是學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu)完整性的重要體現(xiàn)。通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)參觀(guān)和老師講解加深同學(xué)們對(duì)現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃與布局及常用儀器設(shè)備的主要功能的認(rèn)識(shí)，掌握高速冷凍離心機(jī)、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等關(guān)鍵儀器的使用方法。

二、實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所選擇及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

園藝學(xué)院植物分子生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室與開(kāi)展現(xiàn)代生物技術(shù)研究直接相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室分工與布局和主要相關(guān)儀器：如與組織培養(yǎng)有關(guān)的超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、接種至、培養(yǎng)室等；與分子生物學(xué)有關(guān)的高速冷凍離心機(jī)、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。

三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1、相關(guān)背景知識(shí)回顧：對(duì)課堂講述的各種生物技術(shù)如分子標(biāo)記、細(xì)胞和組織培養(yǎng)等操作過(guò)程進(jìn)行回顧，重要指出每個(gè)環(huán)節(jié)要用到的必備儀器的作用、性能指標(biāo)、操作注意事項(xiàng)及儀器選購(gòu)中應(yīng)注意的問(wèn)題等。

2、每班分為兩小組簡(jiǎn)要介紹現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室的布局及功能分區(qū)情況；針對(duì)每個(gè)分區(qū)的重要儀器進(jìn)行講述，結(jié)束時(shí)對(duì)所有參觀(guān)內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)要總結(jié)，并回答同學(xué)們的提問(wèn)。

四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)有很多易損儀器或有毒試劑，參觀(guān)時(shí)要求同學(xué)們認(rèn)真記錄，不要隨意動(dòng)手，以保證儀器和人身安全。

五、思考題

1、根據(jù)參觀(guān)內(nèi)容，描述本次參觀(guān)有了解到的主要儀器的名稱(chēng)、用途及使用中的注意事項(xiàng)。

2、一個(gè)現(xiàn)代化生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的基本功能的必備儀器有哪些？

實(shí)驗(yàn)二 植物組織培養(yǎng)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

植物組織培養(yǎng)是現(xiàn)代生物技術(shù)研究的重要技術(shù)手段，在原生質(zhì)體融合、病毒脫除、離體快繁及遺傳轉(zhuǎn)化等領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用。胡蘿卜以其培養(yǎng)體系成熟、再生容易而被視為組織培養(yǎng)的理想外植體材料，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)胡蘿卜的組織培養(yǎng)使同學(xué)們掌握基本培養(yǎng)基的配制、滅菌及培養(yǎng)的基本技能。

二、實(shí)驗(yàn)原理

基于1902年德國(guó)科學(xué)家哈勃蘭特（Haberlandt）提出植物細(xì)胞的全能性理論，即指已分化的細(xì)胞仍然具有分化發(fā)育成新個(gè)體的潛能。在適宜的培養(yǎng)條件下，植物的細(xì)胞、組織或器官都具備再生成完整植物的能力。

三、主要儀器及試材

儀器：pH計(jì)、微波爐、高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、培養(yǎng)室、三角瓶、封口膜、無(wú)菌濾紙、手術(shù)刀片、鑷子、酒精燈、記號(hào)筆等

試材：新鮮胡蘿卜，培養(yǎng)基配制所需相關(guān)試劑

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

（一）培養(yǎng)基母液的配制（小規(guī)模實(shí)驗(yàn)應(yīng)按比例減少，避免造成很大的浪費(fèi)）：

1、大量元素(10倍液)：稱(chēng)取下列藥品分別溶解定容到1升后，加到5升存儲(chǔ)瓶中。

KNO

395 g NH4NO3

82.5 g KH2PO

48.5 g MgSO4?7H2O

18.5 g CaCl2?2H2O

22.0 g 注意事項(xiàng)：

（1）配置母液前要仔細(xì)清洗存儲(chǔ)容器

（2）應(yīng)按照順序分別徹底溶解后混合，每加完一種藥品，搖動(dòng)存儲(chǔ)瓶使其混合均勻；（3）溶解時(shí)最好加熱，以便充分溶解，避免沉淀的產(chǎn)生；

（4）夏季要用新制的蒸餾水，并加熱，這樣可以避免因?yàn)樗袔Ь窟^(guò)大而產(chǎn)生沉淀，同時(shí)可以減緩綠藻的生成；

（5）沉淀的產(chǎn)生一是由于溶解不充分就混合造成的渾濁型沉淀，所以配置時(shí)一定不要急；二是由于長(zhǎng)菌而產(chǎn)生絮狀沉淀，所以要用新制的蒸餾水并加熱。

2、微量元素母液的配制(100倍液)：取少量(200-300ml)溫水依次加入下列藥品，每加一種藥品后攪拌溶解，最后定容到1L：

KI

0.083 g H3BO0.62 g ZnSO4*7H2O

0.86 g NaMoO4*2H2O

0.025 g CuSO4*5H2O

0.0025 g CoCl2*6H2O

0.0025 g

MnSO4*4H2O

2.23 g(MnSO4*H2O 1.69 g)注意：配好后在室溫下放置10 h以上再放入冰箱保存，即刻放入冰箱易產(chǎn)生結(jié)晶沉淀。配制過(guò)程中產(chǎn)生沉淀的原因有：1.前一個(gè)沒(méi)徹底溶解就加入了后一個(gè)藥品；2.蒸餾水pH 值過(guò)高，可加幾滴鹽酸校正。

3、甘氨酸和肌醇的配制(100倍液)：

甘氨酸：0.2 g溶解定容到1L；肌醇：10 g溶解定容到1L

4、鐵鹽的配制（100倍液）：

稱(chēng)取EDTA 3.73 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 2.78 g，分別溶解后混合定容到1L，放入棕色細(xì)口瓶中，室溫放置10 h以上（防止結(jié)晶沉淀），然后放入4℃冰箱。

5、維生素B的配制（100倍液）：

VB組分 VB1(鹽酸硫氨素)VB6(鹽酸吡哆素)VB5(煙

酸)

改良MT 1g 1g 0.5g

MS 10 mg 50 mg 50 mg 分別稱(chēng)取順序溶解在溫?zé)岬恼麴s水中，定容到1L。

注: 需要溶解完一個(gè)再加另一個(gè)；VB5不易溶解，需要攪拌，必要時(shí)可以加熱。

6、Vc的配制（100倍液）：

稱(chēng)取Vc 0.5g 溶解在蒸餾水中，定容到1L即可。

7、其它溶液配制：

BA，NAA，IBA，GA3等激素類(lèi)試劑可先用少量1N NaOH徹底溶解，再加水定容。配好后室溫放置一段時(shí)間，再放入冰箱中冷藏保存。有些試劑在乙醇或鹽酸中也可溶解，但比較而言，用堿溶解比較穩(wěn)定，不易產(chǎn)生沉淀。

注意：母液最好不要配制太多，如果配制的量較大，短時(shí)間內(nèi)用不完，最好分裝一部分到小的細(xì)口瓶中，在制作培養(yǎng)基時(shí)使用。這樣不容易產(chǎn)生沉淀。

（二）培養(yǎng)基配制

母液配好后，按以下體種（或質(zhì)量）量取，最后用蒸餾水定溶到1L,調(diào)節(jié)pH至5.8，用塑料燒杯放入微波爐中充分溶解后分裝滅菌。

大量元素(10倍液)

ml 微量元素(100倍)ml 甘氨酸和肌醇(100倍)

ml 鐵鹽（100倍）

ml 維生素B（100倍）ml Vc（100倍）

ml 蔗糖

g 瓊脂

7.5 g

（三）接種與培養(yǎng)

在超凈臺(tái)上接種后，用記號(hào)筆做好標(biāo)簽，放置到光照培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)中涉及到酒精及砷汞等危險(xiǎn)品，注意人身安全的環(huán)境安全，廢液不要隨意亂倒。

2、外植體消毒及接種操作要規(guī)范，注意超凈臺(tái)的衛(wèi)生，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理

一星期后，統(tǒng)計(jì)污染率，并對(duì)未污染材料的生長(zhǎng)狀況進(jìn)行觀(guān)察，并分析產(chǎn)生污染的可能原因。

七、思考題

影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些？

主要參考文獻(xiàn)

1.張婭，曾君祉，周志勇，陳毓荃，黃華樑。胡蘿卜組織培養(yǎng)和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立。植物學(xué)通報(bào),2005，22:37-42。

2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室柑橘課題組。實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料）。實(shí)驗(yàn)三 植物DNA的提取、純化及檢測(cè)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

DNA 提取是開(kāi)展分子生物學(xué)的重要前提之一，高質(zhì)量的DNA直接關(guān)系到分子標(biāo)記、基因克隆、圖譜構(gòu)建及功能基因組研究等工作的成敗。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)了解常用DNA提取方法的原理和技術(shù)，掌握改良CTAB法提取植物DNA以及DNA檢測(cè)技術(shù)，為將來(lái)從事園藝植物生物技術(shù)研究奠定基礎(chǔ)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

植物的遺傳物質(zhì)是DNA，植物細(xì)胞內(nèi)含有豐富的遺傳物質(zhì)。在機(jī)械研磨、高溫和去污劑的共同作用下，植物細(xì)胞破裂，DNA從細(xì)胞核釋放到提取緩沖液中。經(jīng)蛋白質(zhì)強(qiáng)變性劑處理結(jié)合離心，除去蛋白質(zhì)和色素等雜質(zhì)，再用乙醇沉淀便可獲得高純度的DNA。

DNA電泳是依據(jù)DNA帶負(fù)電荷，而不同濃度的瓊脂糖凝膠孔徑大小不同，在外加電場(chǎng)的作用下DNA由負(fù)極向正極移動(dòng)，分子量小的移動(dòng)快而分子量大的移動(dòng)慢，最終達(dá)到不同分子量大小的DNA分離的目的。

三、主要儀器及試材

水浴鍋、離心機(jī)、移液槍、研缽、離心管、核酸電泳系統(tǒng)等；新鮮健康植物葉片，液氮、及DNA提取有關(guān)試劑。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟 1.藥品的配制: CTAB提取液：

(1)100 mM Tris-HCl(PH 8.0)，1.5 M NaCl，50 mM EDTA(PH 8.0)(2)1% PVP，2% CTAB(3)取少許(1)加到(2)中，攪拌成糊狀,后加(1)至足量，65℃水浴充分溶解備用。使用前要在65℃溫浴一會(huì)兒，然后加入1-4%巰基乙醇，混均勻。苯酚：氯仿：異戊醇（25∶24∶1）：

重蒸酚65℃水浴溶解，在燒杯中加入80ml溫?zé)岬恼麴s水，加入少許8-羥基喹啉，溶解后加入100ml重蒸酚，再加入100ml氯仿：異戊醇（24：1），加入20克Tris Base，磁力攪拌器上攪拌1.5 h左右至停止攪拌后很快分層，然后裝入棕色瓶中，4℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?.DNA的粗提

在裝有葉片的離心管中加入石英砂少許（約0.07克），用尖頭玻棒將材料研細(xì)后加入600 ul CTAB提取液，再繼續(xù)研磨一會(huì)兒使其懸浮均勻，然后在65℃水浴鍋中溫浴60分鐘，隔15分鐘取出上下輕輕顛倒幾次，水浴之后，加入500 ul苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），上下晃動(dòng)10分鐘以上，其間置于37℃水浴鍋中溫浴一會(huì)（冬季），使之充分混勻，然后10000-12000 rpm離心5-10分鐘，吸取上清液轉(zhuǎn)至另一離心管中，加入60 ul 5M NaCl，再加入-20℃冰凍無(wú)水乙醇1 ml，輕輕顛倒數(shù)次，混合均勻后冰凍30分鐘沉淀DNA，然后8000-10000 rpm離心5分鐘，棄上清液，加入1 ml 70%酒精浸泡2小時(shí)或過(guò)夜，8000 rpm離心5分鐘,棄酒精之后在工作臺(tái)上風(fēng)干DNA，注意不要過(guò)干，否則會(huì)使以后溶解困難。3.DNA的純化：

向風(fēng)干后的DNA中加入500 ul 1×TE，37℃水浴15-30分鐘至DNA完全溶解，加5 ul 5 mg/ml Rnase，37℃水浴6小時(shí)，然后加入700 μl苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），上下顛倒離心管約10分鐘，至充分混勻，10000-12000 rpm離心5分鐘，吸取上層液至另一離心管中，加入700 μl氯仿：異戊醇（24：1），顛倒10分鐘（方法同上），10000 –12000 rpm離心5分鐘，吸取上層液至另一離心管中，加入60 μl 5M NaCl，再加入1 ml冷凍的無(wú)水乙醇，輕輕顛倒，然后在-20℃冰箱中置30分鐘沉淀DNA，8000-10000 rpm離心2-3分鐘，使DNA分散狀緊貼在管壁上，棄酒精，加70%酒精1ml浸泡，2小時(shí)后換一次，后浸泡過(guò)夜，8000 rpm離心3分鐘后棄酒精，風(fēng)干，加50-100 μl TE充分溶解備用。

4、DNA檢測(cè)

（1）取DNA原液15 μl稀釋至3.0 ml，用UV-1601型紫外分光光度計(jì)測(cè)定230 nm、260 nm及280 nm的吸光值。高質(zhì)量的DNA要求：A260/A230>2.0； 1.7

（3）向一定量的DNA中加入限制性?xún)?nèi)切酶EcoR I至4-5 U/μg DNA，37℃消化過(guò)夜，用0.5×TBE，0.8%瓊脂糖凝膠2.5V/cm電泳3 h進(jìn)行檢測(cè)。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)中的液氮、氯仿、苯酚、EB等都是危險(xiǎn)或有毒物質(zhì)，操作時(shí)要戴手套，并在專(zhuān)門(mén)區(qū)域操作。

2、DAN電泳時(shí)只能由負(fù)極到正極，電泳時(shí)要注意電極是否正確。

六、思考題

簡(jiǎn)述DAN提取的步驟及主要試劑的作用。

主要參考文獻(xiàn)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室柑橘課題組。實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料）。實(shí)驗(yàn)四 質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測(cè)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

質(zhì)粒是攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或表達(dá)的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質(zhì)粒的分離與提取時(shí)最常用、最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。質(zhì)粒的提取方法很多，大多包括3個(gè)主要步驟：細(xì)菌的培養(yǎng)、細(xì)菌的收集和裂解、質(zhì)粒DNA的分離和純化。本實(shí)驗(yàn)以堿裂解法為例介紹質(zhì)粒的抽提過(guò)程，應(yīng)掌握堿裂解法抽提質(zhì)粒的原理、步驟及各試劑的作用。

二、實(shí)驗(yàn)原理 在pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中，細(xì)菌的線(xiàn)性大分子量染色體DNA變性分開(kāi)，而共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA雖然變性但仍處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)。將pH調(diào)至中性并有高鹽存在及低溫的條件下，大部分染色體DNA、大分子量RNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍然為可溶狀態(tài)。通過(guò)離心，可除去大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清液中，然后用酚、氯仿抽提進(jìn)一步純化質(zhì)粒DNA。

三、主要儀器及試材

含有質(zhì)粒pUC18載體的大腸桿菌菌液及離心機(jī)、移液槍、離心管及質(zhì)粒DNA提取有關(guān)試劑。

液氮、及DNA提取有關(guān)試劑。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

（一）試劑配制:

1、LB培養(yǎng)基:NaCl 10g，酵母提取物（Yeast extract）5g，蛋白胨（Peptone）10g，瓊脂粉15g，加ddH2O至1000ml。分裝至500ml三角瓶（250ml/瓶）。高壓滅菌15min，室溫貯存。

2、X-gal（20mg/ml）:20mg X-gal溶于1ml二甲基甲酰胺中，-20℃避光保存。

3、IPTG（200mg/ml）:1g IPTG溶于4ml去離子雙蒸水中，定容至5ml，過(guò)濾滅菌后-20℃保存。

4、Amp（100mg/ml）:1g Amp溶于4ml去離子滅菌雙蒸水中，定容至5ml，-20℃保存。

5、溶液I: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl（pH 8.0），10mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

6、溶液II:0.2N NaOH，1% SDS。配制方法：2N NaOH 1ml，10% SDS 1ml，加ddH2O至10ml，使用前臨時(shí)配制。

7、溶液III:醋酸鉀（KAc）緩沖液，pH 4.8。配制方法：5M KAc300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml（視冰醋酸情況，也可按6:3:1配制），貯存于4℃。

8、TE:10mM Tris-HCl（pH 8.0），1mM EDTA（pH 8.0）。配制方法：1M Tris-HCl（pH 8.0）1ml，0.5M EDTA（pH 8.0）0.2ml，加ddH2O至100ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

9、苯酚:氯仿:異戊醇（25:24:1）。

10、乙醇（無(wú)水乙醇、70%乙醇）。11、5×TBE:Tris-base 54g，硼酸27.5g，EDTA-Na·2H2O 4.65g，加ddH2O至1000ml。高壓滅菌15min，貯存于4℃。

12、溴化乙錠（EB）：10mg/ml

13、Rnase A（RNA酶A）:不含DNA酶（DNase-free）RNase A的10mg/ml，TE配制，沸水加熱15min，分裝貯存于-20℃。14、6×loading buffer（上樣緩沖液）:0.25%溴酚藍(lán)，0.25%二甲苯青FF，40%（W/V）蔗糖水溶液。15、1%瓊脂糖凝膠:稱(chēng)取1g瓊脂糖與三角燒瓶中，加100ml 1×TBE，微波爐加熱至完全熔化，冷卻至60℃左右，加EB母液（10mg/ml）至終濃度0.5ug/ml（注意：EB為強(qiáng)誘變劑，操作時(shí)帶手套），輕輕搖勻，緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩沖液1×TBE），即可上樣。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、取含有pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌菌液于LB固體培養(yǎng)基上劃線(xiàn)37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、用無(wú)菌牙簽或槍頭挑取LB固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的單菌落，接種于20ml含有Amp抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃搖床-250r/min過(guò)夜培養(yǎng)。

3、吸取1.5ml菌液，12000g離心1min，收集菌體，倒掉菌液；吸取1.5ml菌液，再次收集菌體，盡量將菌液倒干凈。

4、加入200ul預(yù)冷的溶液I，重新懸浮細(xì)胞，震蕩混勻（注意：應(yīng)徹底混勻沉淀或碎塊）。

5、加入400ul新配置的溶液II，輕柔顛倒混勻（不可劇烈震蕩），并將離心管置于冰上2-3min，使細(xì)胞膜裂解（溶液II為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。

6、加入300ul預(yù)冷的溶液III，溫和顛倒混勻，見(jiàn)白色絮狀沉淀，置于冰上3-5min，使雜質(zhì)充分沉淀（溶液III為中和液，此時(shí)質(zhì)粒DNA復(fù)性，染色體和蛋白質(zhì)不可逆變性，形成不可溶復(fù)合物，同時(shí)K+使SDS-蛋白復(fù)合物沉淀）。

7、吸取800ul上清液（注意：不要吸到漂浮的雜質(zhì)）至另一Eppendorf管中，加入2/3體積的異丙醇或2.5倍體積的預(yù)冷無(wú)水乙醇，混勻，室溫放置5min，4℃離心12000g ×15min。

8、倒盡上清，加75%乙醇浸洗沉淀除鹽1-2次，4℃離心 10000g×10min，棄上清，將沉淀在室溫或超凈工作臺(tái)上風(fēng)干。

9、將沉淀溶于40ul 滅菌超純水或TE（含RNase A 20ug/ml），37℃水浴30min，以降解RAN，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

10、取制備的質(zhì)粒DNA 1-2ul，加適當(dāng)loading buffer混勻上樣，1%瓊脂糖凝膠2.5V/cm電泳1h進(jìn)行檢測(cè)。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)中的液氮、氯仿、EB等都是有毒物質(zhì)，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，盡量減少臺(tái)面污染。

2、DAN電泳時(shí)只能由負(fù)極到正極，電泳時(shí)要注意電極是否正確。

3、質(zhì)粒電泳檢測(cè)一般有三條帶，分別為質(zhì)粒的超螺旋、開(kāi)環(huán)、線(xiàn)型三種構(gòu)型。

六、思考題

簡(jiǎn)述質(zhì)粒DAN提取的步驟。

主要參考文獻(xiàn)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室柑橘課題組。實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料）。

實(shí)驗(yàn)五 PCR技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一種體外核酸擴(kuò)增系統(tǒng)，是分子克隆技術(shù)中常用技術(shù)之一。PCR具有反應(yīng)快速、靈敏、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)掌握PCR原理，學(xué)習(xí)PCR操作過(guò)程。

二、實(shí)驗(yàn)原理

PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在環(huán)境下依賴(lài)于DNA聚合酶的酶促反應(yīng)。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板結(jié)合的特異性。反應(yīng)分為變性、退火、延伸三步，經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)，介于兩個(gè)引物之間的特異DNA片段得到大量擴(kuò)增。

三、主要儀器及試材

含有外源cDNA片段的質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因蘋(píng)果、番茄葉片總DNA；外源基因的特異引物及PCR儀與相關(guān)試劑。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1、調(diào)整模板濃度至5ng/ul。

2、按下列體系配制反應(yīng)混合液，混勻，離心5秒（注意加1滴礦物油覆蓋PCR管）。

Template DNA

2ul（20ng）10×buffer

2.0ul MgCl2（25mM）

1.5ul Primer F（10uM）

0.2ul Primer R（10uM）

0.2ul dNTPs（2mM）

2.0ul Taq（5U/ul）

0.2ul Add ddH2O to

20ul

3、PCR反應(yīng)循環(huán)條件設(shè)置：

95℃

3min

1cycle 94℃

1min

55℃

1min 72℃

90s

35cycles 72℃

10min

1cycle 4℃

forever

4、檢測(cè)：加2ul溴酚藍(lán)，混勻，短暫離心，取15ul反應(yīng)產(chǎn)物點(diǎn)樣電泳

5、在1%瓊脂糖凝膠上點(diǎn)樣電泳；EB染色，紫外觀(guān)察。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、引物設(shè)計(jì)應(yīng)具有特異性，依靠引物設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)；引物分裝成多管，不宜反復(fù)凍融多次；

2、PCR反應(yīng)的各種成分不能遺漏，操作應(yīng)戴手套，冰上操作；

3、根據(jù)引物的Tm值和擴(kuò)增片段長(zhǎng)度以及PCR儀的特性來(lái)設(shè)定PCR循環(huán)條件；

4、注意分析電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物時(shí)出現(xiàn)拖帶或非特異性擴(kuò)增帶、無(wú)DNA帶或DNA帶很弱的可能原因。

六、思考題

簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的原理和步驟。

主要參考文獻(xiàn)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室柑橘課題組。實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料

實(shí)驗(yàn)六 PCR產(chǎn)物的TA克隆

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

采用同源序列法克隆特定基因或DNA片段是果樹(shù)上常用的分子克隆方法。相對(duì)于粘性末端來(lái)說(shuō)，克隆具有平末端的雙鏈PCR產(chǎn)物效率較低。目前，有兩種方法可以采用，一種是在特異引物設(shè)計(jì)時(shí)引入酶切位點(diǎn)，另一種是TA克隆。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)掌握PCR產(chǎn)物TA克隆的原理，學(xué)習(xí)PCR產(chǎn)物純化及回收，以及PCR產(chǎn)物與TA克隆載體的連接。

二、實(shí)驗(yàn)原理

TA克隆是利用耐熱聚合酶，如Taq聚合酶、Tfl、Tth等具有末端轉(zhuǎn)移酶活性，而不具有3’一5’外切酶的校準(zhǔn)活性，即在PCR產(chǎn)物的兩個(gè)3’末端加上未配對(duì)的單一A凸出尾，質(zhì)粒載體提供線(xiàn)性3’末端單一的T凸出尾，使該載體能夠直接與PCR產(chǎn)物高效連接。TA克隆技術(shù)比其它PCR克隆方法有更高的重組效率。

三、主要儀器及試材

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒（Promega公司）、pMD18-T載體（TaKaRa公司）以及感受態(tài)大腸桿菌、高速冷凍離心機(jī)、移液槍、瓊脂糖凝膠電泳等相關(guān)儀器及試劑。

四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1、PCR擴(kuò)增片段純化回收

將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，割膠，利用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒收集PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，具體操作步驟參考試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2、連接反應(yīng) 反應(yīng)體系組成

pMD18-T

0.5-1.0 ul PCR fragment

1.0-4.5 ul ddH2O

0-3.0 ul Ligation Solution I

5.0 ul 混合后，置于室溫下放置數(shù)小時(shí)或過(guò)夜連接。

3、重組子轉(zhuǎn)化（熱激法）

1）在含適當(dāng)濃度的Ampicillin的LB平板上，涂抹4 ul IPTG（200mg/ml）和40 ul x-gal（20mg/ml），然后暗置30 min以上；

2）冰上冷凍新滅菌的1.5 ml 離心管； 3）取出感受態(tài)大腸桿菌，冰上放置凍融；

4）取新滅菌的1.5 ml 離心管，加入50 ul感受態(tài)細(xì)胞和10 ul連接反應(yīng)液，用移液槍輕輕吸打均勻，在冰上放置30 min；

5）熱激：將離心管在42 ℃下水浴90秒鐘。請(qǐng)勿搖動(dòng)離心管； 6）冰鎮(zhèn)：快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴，1-2分鐘；

7）復(fù)蘇：每管加400 ul液體LB培養(yǎng)基，在37 ℃搖床溫和搖動(dòng)45 min-60 min； 8）涂皿：取150 ul均勻涂布于“1）”已制備好的LB平板上；

9）培養(yǎng)：在37 ℃下倒置培養(yǎng)12-16 h，即可觀(guān)察到藍(lán)白相間的菌落。白色菌落為含有外源插入片段的轉(zhuǎn)化子，藍(lán)色是載體自連的轉(zhuǎn)化子。轉(zhuǎn)化子可以在4 ℃下保持1個(gè)月；

10）單菌落培養(yǎng)：用滅菌的牙簽，挑選白色的單菌落到盛有含50 mg/ml Ampicillin的5 ml液體LB培養(yǎng)基的50 ml離心管中，在37 ℃搖床上培養(yǎng)過(guò)夜（12-16 h）。

4、質(zhì)粒DNA的分離 參考有關(guān)文獻(xiàn)。

5、檢測(cè)

采用相同的引物對(duì)進(jìn)行PCR再擴(kuò)增，或質(zhì)粒上根據(jù)插入片段兩端的酶切位點(diǎn)而進(jìn)行限制性酶切，通過(guò)電泳可以檢測(cè)出片段是否克隆成功。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、連接溫度不宜太高，連接溫度過(guò)高（>28℃）可使背景增加，使重組克隆菌減少。降低連接溫度可以提高白斑率；

2、熱激過(guò)程注意勿搖動(dòng)離心管。

六、思考題

簡(jiǎn)述PCR產(chǎn)物TA克隆的原理和步驟。

主要參考文獻(xiàn)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室柑橘課題組。實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，2002，武漢（課題組內(nèi)部資料。

第五篇：園藝植物栽培學(xué)實(shí)驗(yàn)講義 2

《園藝植物栽培學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案

實(shí)驗(yàn)一 蔬菜種子的處理技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

種子是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要生產(chǎn)資料，種子的形態(tài)特征及生理特性各異，有些種子具有休眠特性，有些種子具有較硬的種皮或者是種子中含有萌發(fā)抑制物等。需要對(duì)種子進(jìn)行一定的處理才能發(fā)芽或提高種子發(fā)芽率。要求掌握常見(jiàn)的種子處理的原理及方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

種子質(zhì)量是由種子不同特性綜合而成的一種概念，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上要求種子具有優(yōu)良的品種特性和優(yōu)良的種子特性，包括品種質(zhì)量和播種質(zhì)量?jī)煞矫?，品種質(zhì)量是指與遺傳特性有關(guān)的品質(zhì)，包括種子的真實(shí)性及品種純度。播種質(zhì)量是指種子播種后與田間出苗有關(guān)的質(zhì)量，包括種子凈度、發(fā)芽率、千粒重、含水量等內(nèi)容。

三、實(shí)驗(yàn)材料

1、材料 黃瓜種子、絲瓜種子、番茄種子、黒籽南瓜種子、硫酸銅、高錳酸鉀、福爾馬林。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

采用對(duì)黃瓜、番茄、絲瓜、生菜種子、黒籽南瓜進(jìn)行消毒處理，觀(guān)察種子的發(fā)芽率及發(fā)芽勢(shì)；采用低溫處理、冷水浸種、溫水浸種、激素處理幾種方法處理種子，觀(guān)察種子的發(fā)芽率及發(fā)芽勢(shì)。

五、結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)二 蔬菜的播種育苗技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

根據(jù)不同園藝植物種子的形態(tài)特征特性、不同的時(shí)期及目的，選擇相應(yīng)的播種方法。其中，穴盤(pán)育苗是培育優(yōu)質(zhì)種苗常用的方法之一，因此要求掌握穴盤(pán)育苗技術(shù)；掌握播種量的計(jì)算方法。首先都要對(duì)種子進(jìn)行播種量的估算，播種量與種子的凈度、純度、發(fā)芽率等有關(guān)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

將精選和處理過(guò)的繁殖材料以一定的方式和方法播入或插入土中或其他基質(zhì)中，稱(chēng)為播種。播種質(zhì)量關(guān)系到成苗數(shù)、苗的整齊度及質(zhì)量，進(jìn)而影響到產(chǎn)品產(chǎn)量、品質(zhì)、商品性等性狀。提前浸種催芽、可充分滿(mǎn)足園藝植物種子萌發(fā)所需水分，并在人工控制的溫度、水分及空氣條件下，促使種子發(fā)芽快而整齊。要求掌握播種量的計(jì)算及常用的播種方法及技術(shù)。

三、實(shí)驗(yàn)材料

1、材料 黃瓜種子、絲瓜種子、番茄種子、黒籽南瓜種子、生菜種子、128孔穴盤(pán)

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、播種期的確定

根據(jù)園藝植物的種類(lèi)和品種特性、氣候條件播種方式及市場(chǎng)需求而定。

2、播種量的確定

根據(jù)園藝植物種類(lèi)、種子質(zhì)量、播種方式和方法、密度、播種季節(jié)及自然災(zāi)害等條件而確定。

3、播種深度

根據(jù)種子大小、土壤質(zhì)地、土壤濕度、溫度及氣候條件等綜合因素確定播種深度，一般覆土厚度為種子的5-7倍左右，沙質(zhì)土播種宜深；土壤濕度大，溫度適宜時(shí)宜淺；氣候干燥宜深，濕潤(rùn)季節(jié)宜淺。

五、結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)三 花卉的扦插繁殖

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

扦插繁殖是利用園藝植物器官的再生能力，以植物的根、莖、葉等為繁殖材料，將其插入基質(zhì)中，給予一定的條件使其再生成完整的獨(dú)立個(gè)體。了解園藝植物扦插育苗的原理，掌握扦插育苗的基本方法。

二、實(shí)驗(yàn)材料

1、材料

月季枝條、扶桑

2、用具

修枝剪、河沙、珍珠巖、蛭石、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、苗床準(zhǔn)備

以河沙、蛭石、珍珠巖按4：3：3比例配置，100倍液的福爾馬林進(jìn)行消毒，處理后密封過(guò)夜，攤開(kāi)晾曬至氣味消失即可進(jìn)行扦插。

2、插穗的選擇和修剪

在采穗圃中選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害、品質(zhì)優(yōu)良的植株作母株，于母株上選擇謝花后或開(kāi)花前枝條粗壯、節(jié)間短、木質(zhì)化程度好、葉片發(fā)育完整的枝條作插穗。

3、插前生根處理

浸泡法：用2號(hào)ABT生根粉30ppm至50ppm液，將插穗以50根至100根綁為1捆，下端2厘米浸入該溶液2小時(shí)至4小時(shí)，取出后插入苗床，深3厘米至5厘米。

快蘸法：用50%酒精和萘乙酸或吲哚丁酸配成500 mg/L溶液，將插穗下端2厘米浸入該溶液中2秒至5秒，待藥液稍干后，立即扦入苗床。

4、扦插方法

月季扦插多用直插法。扦插深度為插穗長(zhǎng)的1/3至1/2，一般深達(dá)第二個(gè)芽眼處即可。扦插時(shí)，首先用與插穗粗細(xì)相等的竹簽穿孔，再將月季插穗插入壓實(shí)。扦插密度以葉互不接觸為宜。扦插時(shí)，長(zhǎng)插穗與短插穗要分別扦插，防止長(zhǎng)短不一，參差不齊，相互影響光照及生長(zhǎng)。同時(shí)，品種不要混雜，按品種分段扦插，排列整齊有序，便于管理。插后立即用細(xì)眼噴壺噴水，不要噴灑過(guò)急，以免泥土污染插穗葉片及沖出插穗。蓋上塑料薄膜，保持床內(nèi)溫度和濕度。

5、插后管理

扦插后充分澆水，前10天勤噴水，保持較濕的環(huán)境；10天后，控制噴水，見(jiàn)干再?lài)姡３至栏蔂顟B(tài)。并適當(dāng)噴施千分之二的磷酸二氫鉀溶液，促進(jìn)生長(zhǎng)。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)四 蔬菜的嫁接繁殖

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過(guò)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)園藝植物常用的嫁接技術(shù)，掌握嫁接成活的關(guān)鍵技術(shù)和具體操作。

二、實(shí)驗(yàn)原理

接穗嫁接到砧木上后，在砧、穗削面，由死細(xì)胞的殘留物形成一層褐色隔膜，之后在愈傷組織激素的刺激下，傷口周?chē)?xì)胞核形成層細(xì)胞分裂旺盛，并使褐色隔膜破裂，形成愈傷組織，將砧木接穗間的空間填滿(mǎn)，向內(nèi)形成新的木質(zhì)部，向外形成新的韌皮部，導(dǎo)管和篩管也相互溝通，形成一個(gè)新的整體。

三、實(shí)驗(yàn)材料與用具

1、材料 黃瓜、黒籽南瓜

2、嫁接針、刀片、嫁接夾

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

一、生產(chǎn)點(diǎn)直插法：砧木苗第2片真葉吐芽，接穗苗第1片真葉直徑1厘米時(shí)，為最佳嫁接期。用刀片切去砧木生長(zhǎng)點(diǎn)，再用竹針從切口垂直插入4～５毫米。接穗從子葉節(jié)下５毫米處，與下胚軸成30°角切斷，呈4～５毫米長(zhǎng)的橢園形切面。然后取下竹針，將帶子葉的接穗插入針孔內(nèi)，使接穗與砧木相吻合并用塑料夾固定。噴霧凈水后，置于保濕小拱棚內(nèi)。接后3天內(nèi)保持95％的濕度，白天溫度25～28℃，夜間18～20℃。4天后小通風(fēng)，8天后可揭膜煉苗。25天左右進(jìn)入三葉一心期可定植。

二、靠接法：將營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)的砧木，在離子葉節(jié)5～10毫米處的胚軸上，從上向下斜切6～10毫米的口，在接穗子葉節(jié)下20～30毫米自下而上斜切6～8毫米的口，然后將接穗舌形楔插入砧木的切口里，用微型塑料夾固定接口，并用土埋好接穗的根。20天左右切斷接穗基部，其他管理基本同直插法。

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)五 花卉的盆栽技術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解園藝植物育苗營(yíng)養(yǎng)土的組成、配制、應(yīng)用及床土消毒方法等。掌握花卉盆栽的基本原則及相關(guān)技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)材料

綠寶、也門(mén)鐵、散尾葵、金邊吊蘭、龍血樹(shù)、園土、腐殖土、尿素、過(guò)磷酸鈣、多菌靈、花盆。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、掌握幾種常見(jiàn)基質(zhì)的類(lèi)型及特點(diǎn)

土壤、有機(jī)肥； 疏松填充物：如腐熟馬糞、草炭土、珍珠巖、沙子、爐灰等。速效肥：保證養(yǎng)分的充足供給和快速供給。包括各類(lèi)化學(xué)肥料。營(yíng)養(yǎng)土的配方較多，但生產(chǎn)上普遍采用田土1／

3、馬糞或草炭土或堆肥等腐熟的有機(jī)肥2／3，土壤過(guò)于黏重時(shí)適當(dāng)加入一些爐灰或沙子，配合混勻之后按每立方米體積床土中加入過(guò)磷酸鈣或磷酸二銨1-2千克、尿素250-300克、硝酸鉀0.5-1千克草木灰5-10千克，最后過(guò)篩去掉顆粒物，即配成營(yíng)養(yǎng)土。

2、掌握營(yíng)養(yǎng)土配制的基本原則

①?zèng)]有病原菌和害蟲(chóng)；② 營(yíng)養(yǎng)豐富并且各組分比例適當(dāng)；③pH6.5左右； ④ 結(jié)構(gòu)良好，疏松適度。營(yíng)養(yǎng)成分全，透氣性能好，保水能力強(qiáng)的特點(diǎn)

3、掌握基質(zhì)的基本消毒方法

① 物理消毒法

蒸汽消毒、高溫發(fā)酵、太陽(yáng)暴曬等 ②化學(xué)消毒法

福爾馬林、多菌靈、氯化苦、溴甲烷

4、掌握大盆花卉及小盆花卉栽培的技術(shù)要領(lǐng)。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)六 茄果類(lèi)、豆類(lèi)、瓜類(lèi)蔬菜的開(kāi)花結(jié)果習(xí)性觀(guān)察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

（1）掌握茄果類(lèi)蔬菜莖的分枝類(lèi)型及其整枝的方式及開(kāi)花結(jié)果的特點(diǎn)；（2）掌握瓜類(lèi)的結(jié)果習(xí)性及分枝狀況，以便在栽培上采用相應(yīng)的技術(shù)措施；

（3）掌握不同類(lèi)型的豆類(lèi)蔬菜的莖蔓生長(zhǎng)習(xí)性及其花器官構(gòu)造，了解其開(kāi)花結(jié)果習(xí)性。

二、實(shí)驗(yàn)材料 番茄、黃瓜、豇豆

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（1）由指導(dǎo)老師講述番茄有限生長(zhǎng)類(lèi)型及無(wú)限生長(zhǎng)類(lèi)型的分枝特性，并進(jìn)行常用的整枝法示范，由老師進(jìn)行摘除腋芽的整形示范。（2）在田間對(duì)黃瓜進(jìn)行分枝及花著生狀況調(diào)查記錄；

（3）豆類(lèi)蔬菜開(kāi)花結(jié)莢的習(xí)性調(diào)查，著重調(diào)查豇豆的第一花序著生節(jié)位、花數(shù)、以2～4花序著生相對(duì)的節(jié)位。

（2）對(duì)黃瓜、絲瓜、番茄等進(jìn)行植株調(diào)整。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)七 園林植物的整形、修剪

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

園林植物修剪，就是按照不同植物種類(lèi)的自然生長(zhǎng)發(fā)育特性和園林生長(zhǎng)需要，采用人工控制其長(zhǎng)勢(shì)、調(diào)節(jié)控制植物開(kāi)花結(jié)果，防治病蟲(chóng)害，保證園林植物枝葉茂盛、繁花似錦，提高植物的觀(guān)賞性。

二、實(shí)驗(yàn)材料

月季、五色梅、三角梅

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（1）月季的修剪 月季是一年多次抽稍，多次開(kāi)花的花灌木，休眠期短剪或回縮強(qiáng)枝，剪除交叉枝、病蟲(chóng)枝、并生枝、弱枝及內(nèi)膛過(guò)密枝。生長(zhǎng)期可多次修剪，可于花后新稍飽滿(mǎn)芽處短剪（花梗下方第2芽~第3芽處），剪口芽很快萌發(fā)抽稍，形成花蕾，花謝后再剪，如此重復(fù)。

（2）三角梅的修剪 對(duì)于已開(kāi)花的植株，一年可進(jìn)行2次修剪，第一次結(jié)合早春換盆，從基部剪去過(guò)密枝、纖細(xì)枝、病蟲(chóng)枝，同時(shí)縮剪徒長(zhǎng)枝，對(duì)保留的枝條也要進(jìn)行短截。第二次在花謝后，酌情疏枝、剪去枯枝、弱枝、內(nèi)堂枝，保留的枝條在30厘米處截去頂梢，同時(shí)將所有的側(cè)枝剪短，促使多發(fā)新枝，形成更多的花芽。生長(zhǎng)衰弱的大齡老株，可行重剪，即每個(gè)大枝僅保留基部的2-3個(gè)芽，其余全數(shù)剪去，促成植株更新復(fù)壯。

（3）五色梅耐修剪，要使其成為圓頭狀優(yōu)美樹(shù)冠，需經(jīng)常進(jìn)行摘心。當(dāng)幼苗長(zhǎng)到約10厘米高時(shí)即摘心，促使其從基部萌發(fā)分枝，保留3—5個(gè)枝條作為主枝，待主枝長(zhǎng)到一定長(zhǎng)度再行摘心，使主枝生長(zhǎng)均衡。位于上部的主枝先摘心，位于下部的主枝后修剪，上部主枝在摘心時(shí)去枝量略多于下部主枝，這樣各枝間生長(zhǎng)勻稱(chēng)，便形成了圓頭狀株形。植株成形之后，隨著枝條不斷生長(zhǎng)，以后要經(jīng)常疏枝和短截。每年春季結(jié)合換盆，把過(guò)密枝、纖弱枝、交叉枝及病蟲(chóng)枝從基部疏剪掉。保留的枝條，根據(jù)生長(zhǎng)情況分別留2—4個(gè)芽短裁。開(kāi)花后及時(shí)剪除殘花，以免消耗養(yǎng)分。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)八 園藝植物營(yíng)養(yǎng)液的配制與管理

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）了解比例施肥泵的工作原理及使用方法；（2）掌握營(yíng)養(yǎng)液的配制方法。

二、實(shí)驗(yàn)材料

硝酸鈣、硝酸鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硝酸銨、尿素、硫酸鉬等。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

(1)在營(yíng)養(yǎng)液的許多鹽類(lèi)中，以硝酸鈣最容易和其它鹽類(lèi)起化合作用，如硝酸鈣與硫酸鉀相遇，容易產(chǎn)生硫酸鈣沉淀，硝酸鈣與磷酸鹽相遇，也容易產(chǎn)生磷酸鈣沉淀。因此，在配制營(yíng)養(yǎng)液時(shí)，硝酸鈣要單獨(dú)溶解在1個(gè)容器里，稀釋后才能和其它鹽類(lèi)混合在一起。

(2)硝酸鈣以外的其它大量元素和微量元素，可以混合溶解在1個(gè)容器中。

(3)在大面積生產(chǎn)中，為了配制方便，以及在水培中自動(dòng)調(diào)整營(yíng)養(yǎng)液，一般都是先配制濃液（母液），然后再進(jìn)行稀釋。濃液與稀釋液的配比為1∶100。

(4)為了調(diào)整營(yíng)養(yǎng)液pH值的范圍，需要有一個(gè)專(zhuān)門(mén)盛酸的容器。酸液一般稀釋10%的濃度，其成分為硝酸和磷酸。由于向營(yíng)養(yǎng)液中投放硝酸和磷酸，營(yíng)養(yǎng)液中的一部分氮由硝酸供給，營(yíng)養(yǎng)液中的磷主要由磷酸供給，一般不另外再放磷肥。

(5)用來(lái)配制營(yíng)養(yǎng)液的水有硬水與軟水之分，所謂硬水與軟水，一般以水中鈣的含量多少來(lái)劃分，目前以含鈣90～100ppm以上者稱(chēng)為硬水，不足90ppm者稱(chēng)為軟水。軟水中除鈣的含量少以外，鎂及其它鹽類(lèi)的含量也少。正因?yàn)槿绱耍菜貐^(qū)和軟水地區(qū)的營(yíng)養(yǎng)液配方中的各種鹽類(lèi)和酸的用量應(yīng)有所不同。軟水地區(qū)配制營(yíng)養(yǎng)液時(shí)，應(yīng)該增加硝酸鈣的用量，使鈣的濃度達(dá)到120ppm以上，同時(shí)軟水中碳酸鹽的濃度也低，酸的用量也應(yīng)該相應(yīng)地減少。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)九 園藝植物的病蟲(chóng)害防治

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

（1）掌握蔬菜常見(jiàn)的病蟲(chóng)害特征特性；（2）掌握常見(jiàn)病蟲(chóng)害的防治方法。

二、實(shí)驗(yàn)材料

番茄、黃瓜、生菜、豇豆

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（1）觀(guān)察茄果類(lèi)、瓜類(lèi)、豆類(lèi)、綠葉菜類(lèi)蔬菜病害及蟲(chóng)害特征；

（2）對(duì)茄果類(lèi)、瓜類(lèi)、豆類(lèi)、綠葉菜類(lèi)蔬菜出現(xiàn)的病蟲(chóng)害進(jìn)行防治，觀(guān)察用藥后的變化，總結(jié)各種病蟲(chóng)害的防治方法。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

實(shí)驗(yàn)十 蔬菜深液流栽培/ 蔬菜、花卉的立體栽培/ 管道無(wú)土栽培

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

深液流技術(shù)(Deep Flow Technique, DFT)指植株大部分根系浸泡在液層較深(5～10㎝)的營(yíng)養(yǎng)液中，通過(guò)營(yíng)養(yǎng)液循環(huán)流動(dòng)提高營(yíng)養(yǎng)液溶解氧含量,滿(mǎn)足根系呼吸需要的一種水培技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)材料 絲瓜、番茄、生菜

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（1）選用絲瓜、生菜、番茄等為材料，學(xué)習(xí)和掌握蔬菜的蔬菜深液流栽培、、立體栽培、道無(wú)土栽培技術(shù)。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

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