第一篇：食品中羅丹明B測(cè)定（BJS,05）

食品中羅丹明B的測(cè)定 BJS 201905 1　 范圍 本方法規(guī)定了食品中羅丹明B的液相色譜測(cè)定方法及液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜確證方法。

本方法適用于半固態(tài)調(diào)味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜餞、水果干制品中羅丹明B的測(cè)定和確證。

2　 原理 試樣中羅丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，經(jīng)混合型陽(yáng)離子固相萃取小柱凈化，采用液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試樣中檢出羅丹明B后采用液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證。

3　 試劑和材料 除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。

3.1　 甲醇（CH3OH）：色譜純。

3.2　 乙腈（C2H3N）：色譜純。

3.3　 甲酸（CH2O2）：色譜純。

3.4　 氨水（NH?·H?O）：色譜純。

3.5　 含0.1%甲酸的水溶液: 取甲酸（3.3）1 mL用水稀釋至1000 mL，用濾膜（0.22 μm，水相）過(guò)濾后備用。

3.6　 50%甲醇水溶液:準(zhǔn)確量取500 mL甲醇（3.1）于1 L容量瓶中，用水定容至刻度。

3.7　 含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1 mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀釋至1000 mL。

3.8　 含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1 mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀釋至1000 mL，濾膜（0.22 μm，有機(jī)相）過(guò)濾后備用。

3.9　 含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1 mL甲酸（3.3）和35 mL乙腈（3.2），用水稀釋至100 mL，混勻。

3.10　 含5%氨水的甲醇溶液：取5 mL氨水（3.4），用甲醇稀釋至100mL，混勻。（臨用現(xiàn)配）3.11　 羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品：

羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品的分子式、相對(duì)分子量、英文名稱、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥99%。

表1 羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量 中文名稱 英文名稱 CAS登錄號(hào) 分子式 相對(duì)分子量 羅丹明B Rhodamine B 81-88-9 C28H31ClN2O3 479.01 3.12　 羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.0001 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，置于-18℃避光保存，有效期為6個(gè)月。

3.13　 中間標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取0.5 mL羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.12）于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，此溶液的濃度為500 ng/mL。置于4℃避光保存，有效期為1個(gè)月。

3.14　 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（3.9）將中間標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.13）稀釋成0.0 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用現(xiàn)配。

3.15　 混合型陽(yáng)離子固相萃取柱（60 mg/3mL）：基質(zhì)為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，或相當(dāng)者。使用前依次用3 mL甲醇，3 mL水活化。

3.16　 陶瓷均質(zhì)子。

4　 儀器和設(shè)備 4.1　 液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。

4.2　 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI源）。

4.3　 旋渦混合器。

4.4　 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000 r/min。

4.5　 電子天平：感量分別為0.0001 g和0.01 g。

4.6　 具塞離心管：50 mL。

4.7　 組織搗碎機(jī)。

4.8　 固相萃取裝置。

5　 試樣制備與保存 5.1　 半固態(tài)調(diào)味料 取適量樣品，搗碎，混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

5.2　 花椒及花椒粉 取適量樣品，粉碎后過(guò)40目篩，常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

5.3　 花椒油 充分混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

5.4　 牛肉干 取適量樣品，搗碎，混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

5.5　 蜜餞、水果干制品 取適量樣品，搗碎，混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

6　 測(cè)定步驟 6.1　 試樣前處理 6.1.1　 提?。簻?zhǔn)確稱取2 g（香辛料樣品稱取1 g，精確至0.01 g）試樣置于50 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入10.0 mL含0.1%甲酸的甲醇水溶液（3.7），混勻，加入陶瓷均質(zhì)子兩顆（調(diào)味油試樣除外），于旋渦混勻器上渦旋15 min，于8000 r/min離心10 min，取3 mL提取液層溶液過(guò)0.45 μm有機(jī)相濾膜后待凈化。

6.1.2　 凈化：準(zhǔn)確移取1.0 mL提取液（6.1.1）至固相萃取柱（3.15）中，依次用3 mL 0.1%甲酸水溶液（3.5）、3 mL水、3 mL甲醇淋洗固相萃取柱。用6 mL氨水甲醇溶液（3.10）洗脫目標(biāo)物，并收集洗脫液，洗脫溶液在45℃下，用氮?dú)獯抵两?，殘?jiān)?.0 mL 0.1%含酸的乙腈水溶液（3.9）溶解（香辛料樣液殘?jiān)?.5 mL溶解），過(guò)0.22 μm有機(jī)相濾膜上機(jī)測(cè)定。

6.2　 儀器參考條件 a)色譜柱：C18柱，4.6 mm×100mm，粒徑3.5 μm，或性能相當(dāng)者。

b)流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液（3.5），B為乙腈（3.2），梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

c)流速：1.0 mL/min。

d)柱溫：35℃。

e)進(jìn)樣量：10 μL。

f）激發(fā)波長(zhǎng)：550 nm；

發(fā)射波長(zhǎng)：580 nm。

表2 梯度洗脫程序 時(shí)間(min)流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）Initial 65 35 0.1 65 35 6.0 30 70 6.5 30 70 8.0 65 35 10.0 65 35 6.3　 空白試驗(yàn) 除不加試樣外，均按試樣同法操作。

7　 結(jié)果計(jì)算 試樣中羅丹明B的含量按式（1）計(jì)算獲得：

X=C×Vm×1000×f………….（1）式中：

X — 試樣中羅丹明B的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

c — 試樣中羅丹明B峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V — 試樣定容體積，單位為毫升（mL）；

m — 稱樣量，單位為克（g）;? — 稀釋因子。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

8　 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

9　 其他 當(dāng)稱樣量為2 g（香辛料樣品稱取1 g）時(shí)，本方法中羅丹明B的檢出限為0.0025 mg/kg，定量限為0.005 mg/kg；

液相色譜質(zhì)譜確證法的檢出限為0.0025 mg/kg，定量限為0.005 mg/kg。

10　 確證實(shí)驗(yàn) 當(dāng)試樣中檢出羅丹明B時(shí)，可按附錄B方法進(jìn)行確證。

附錄A 羅丹明B液相色譜圖 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 min 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 mV Ex:550nm,Em:580nm 圖A.1羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（濃度：5 ng/mL）附錄B 羅丹明B確證實(shí)驗(yàn) B.1.液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜參考條件 a)色譜柱：C18柱，100×3.0 mm，粒徑1.7 μm，或性能相當(dāng)者。

b)流動(dòng)相：A為含0.1%甲酸的水溶液（3.8），B為含0.1%甲酸的乙腈溶液（3.9）。梯度洗脫程序見(jiàn)表B.1。

c)流速：0.4 mL/min。

d)柱溫：40℃。

e)進(jìn)樣量：1 μL。

h)質(zhì)譜參考條件參見(jiàn)B.2 表B.1 梯度洗脫條件 時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）0.00 80 20 1.5 80 20 2.5 5 95 3.5 5 95 4.5 80 20 5.5 80 20 B.2 質(zhì)譜參考條件 a)離子源：電噴霧離子源（ESI源）。

b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。

c)掃描方式：采用正離子模式掃描。

d)電噴霧電壓：5500 V。

e)離子源溫度：550℃。

f)霧化氣壓力：60.0 psi。

g)輔助氣壓力：50.0 psi h)氣簾氣壓力：25.0 psi i)定性離子對(duì)，定量離子對(duì)，去簇電壓和碰撞能量見(jiàn)表B.2。

表B.2羅丹明B質(zhì)譜參數(shù) 分析物 離子對(duì) m/z 去簇電壓 V 碰撞能量 eV 羅丹明B 443.2/399.3* 20 59 443.2/355.1 20 81 *代表定量離子對(duì)。

注：附錄B所列參考質(zhì)譜條件僅供參考，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。

B.3.定性判定 按照B.1和B.2的條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液。如果試樣中質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)），試樣中目標(biāo)化合物的兩個(gè)子離子的相對(duì)豐度與濃度和標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度和濃度一致，相對(duì)豐度偏差不超過(guò)表B.3規(guī)定的范圍，則可判定試樣中含有羅丹明B。

表B.3 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差 相對(duì)離子豐度（%）>50 >20~50 >10~20 ≤10 允許的相對(duì)偏差（%）±20 ±25 ±30 ±50 羅丹明B的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子色譜圖見(jiàn)圖B.1。

圖B.1 羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子色譜圖 本方法負(fù)責(zé)起草單位：成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院。

驗(yàn)證單位：

北京市疾病預(yù)防控制中心、山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、遼寧省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院、山西省食品藥品檢驗(yàn)所、四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院。

主要起草人：郭靚、李紹波、葉梅、肖全偉、喬秀明、林紅

第二篇：食品中辛基酚等5種酚類物質(zhì)的測(cè)定（BJS 201913）

附件2

食品中辛基酚等5種酚類物質(zhì)的測(cè)定

BJS

201913

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰兒配方食品、畜肉、禽蛋、水產(chǎn)品、罐頭食品、植物油中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A的測(cè)定。

2原理

試樣中加入同位素內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)乙腈提取，離心，取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。

3試劑和材料

除另行規(guī)定外，本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1

試劑

3.1.1

甲醇（CH3OH）：質(zhì)譜級(jí)。

3.1.2

乙腈（CH3CN）：質(zhì)譜級(jí)。

3.1.3

氨水（NH4OH）：色譜級(jí)。

3.2

試劑配制

0.05%

氨水溶液（V/V）：取氨水（3.1.3）0.5mL用水稀釋至1000

mL。

3.3

標(biāo)準(zhǔn)品

辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚、雙酚A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A

-D4同位素內(nèi)標(biāo)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見(jiàn)附錄A表A.1，純度≥98%。

3.4

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100

mg/L）：分別稱取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（3.3）10

mg（精確至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并轉(zhuǎn)移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為100

mg/L。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，貯存于-20

℃冰箱中，有效期12個(gè)月。

3.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1

mg/L）：分別準(zhǔn)確吸取辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100

mg/L)(3.4.1)

mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成1

mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3個(gè)月。

3.4.3同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100

mg/L）：分別稱取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A

-D4同位素內(nèi)標(biāo)（3.3）10

mg（精確至0.000

g），用甲醇（3.1.1）溶解，并轉(zhuǎn)移至100

mL容量瓶中，定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為100

mg/L。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，貯存于-20

℃冰箱中，有效期12個(gè)月。

3.4.4同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1

mg/L）：分別準(zhǔn)確吸取辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、雙酚A

-D4同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100

mg/L)(3.4.3)各1

mL至100

mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成1

mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，置于4

℃冰箱中保存，有效期3個(gè)月。

3.4.5

同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（100

μg/L）：分別準(zhǔn)確吸取同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1

mg/L)(3.4.4)各1

mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成100

μg

/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用時(shí)配制。

3.4.6混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液

(1

mg/L)(3.4.2)適量，加入同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1

mg/L）(3.4.4)，使辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A濃度分別為0.5

μg/L、1

μg/L、5

μg/L、10

μg/L、20

μg/L和50

μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用時(shí)配制。

3.5

材料

固相萃取小柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱）：200

mg，6

mL。

儀器和設(shè)備

4.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。

4.2天平：感量分別為0.001g和0.000

g。

4.3渦旋混合器。

4.4

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000

r/min。

4.5

超聲波清洗器。

分析步驟

5.1

試樣制備

5.1.1

乳粉、米粉：試樣混合均勻，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20℃冰箱冷藏保存。

5.1.2

禽蛋：取代表性試樣約200

g，去殼后用組織勻漿機(jī)攪拌均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.3水產(chǎn)品、畜肉：取代表性試樣約200

g，用勻漿機(jī)勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.4

植物油：試樣混合均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

5.1.5

罐頭食品：取罐頭中固形物試樣約50

g,用勻漿機(jī)勻漿均勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記，于-20

℃冰箱中冷藏保存。

冷藏保存后的樣品解凍后需再次經(jīng)勻漿機(jī)均質(zhì)后使用。

5.2

提取

準(zhǔn)確稱取1

g（精確至0.001

g）樣品于15

mL具塞玻璃試管中，加入0.1mL同位素內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（100

μg/L）(3.4.5)

和5

mL乙腈（3.1.2），渦旋混勻，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，取上層乙腈相；殘留部分再用5

mL

乙腈重復(fù)提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷凍2h，取出于8000

r/min離心5

min，取上清液待凈化。

5.3

凈化

取固相萃取柱（3.5），使用前用18

mL甲醇活化，6mL水平衡。將5.2項(xiàng)所得上清液加30

mL水稀釋,充分搖勻后以1

mL/min~2

mL/min的速度上樣，棄去濾液，用12

mL60

%甲醇水溶液（V/V）淋洗，棄去淋洗液，再用6

mL乙腈洗脫，洗脫液于50℃用氮?dú)獯抵两伞Ｓ?

mL甲醇溶解殘?jiān)?，待測(cè)。

5.4

空白試驗(yàn)

除不加樣品外，采用相同的分析步驟進(jìn)行操作。

5.5儀器參考條件

5.5.1色譜條件

a)

分析柱：

C18

柱（3

μm，50

mm

×

mm），或性能相當(dāng)者；捕集柱：

C18

柱（5

μm，50

mm

×

4.6

mm），或性能相當(dāng)者；捕集柱位于進(jìn)樣閥之前。

b）流動(dòng)相：A為0.05%氨水溶液（3.2），B為甲醇（3.1.1），洗脫梯度見(jiàn)表1。

c）流速：400

μL/min。

d)

柱溫：30℃。

e)

進(jìn)樣量：10

μL。

表1

梯度洗脫程序表

時(shí)間（min）

A(%)

B(%)

0

14.5

14.51

5.5.2

質(zhì)譜條件

a)

離子源：電噴霧離子源（ESI源）。

b)

檢測(cè)方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）。

c)

碰撞氣為高純氮?dú)?，干燥氣、霧化氣、鞘氣等均為氮?dú)饣蚱渌线m氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求，毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測(cè)離子對(duì)和定量離子對(duì)等信息詳見(jiàn)附錄B。

5.6

定性測(cè)定

按照超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物的色譜保留時(shí)間，當(dāng)試樣中檢出與某標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰保留時(shí)間一致的色譜峰（變化范圍在±2.5%之內(nèi)），并且試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子相對(duì)豐度比（k）的偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。

表2

定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度（%）

k＞50%

50%≥k＞20%

20%≥k＞10%

k≤10%

允許的最大偏差（%）

±

±

±

±

5.7定量測(cè)定

5.7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.4.6）分別按儀器參考條件（5.5）進(jìn)行測(cè)定，得到目標(biāo)化合物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中目標(biāo)化合物的濃度。

對(duì)照品色譜圖參見(jiàn)附錄C。

5.7.2試樣溶液的測(cè)定

將試樣溶液（5.3）按儀器參考條件（5.5）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中組分的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次；樣品中各待測(cè)組分的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性響應(yīng)范圍內(nèi)，若超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，應(yīng)用甲醇（3.1.1）稀釋后進(jìn)行分析。

結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

…………………………………………（1）

式中：

X—試樣中某種組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

c—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中某種組分的濃度，單位為納克每毫升（μg/L）；

co——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的過(guò)程空白樣品中某種組分的濃度，單位為微克每升（μg/L）

V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；

f—稀釋因子。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。

8檢出限和定量限

當(dāng)稱樣量為1

g，定容體積為1

mL時(shí)，本方法中辛基酚、正辛基酚、壬基酚、正壬基酚和雙酚A的檢出限均為1.0μg/kg，定量限均為2.0μg/kg。

9其他

9.1實(shí)驗(yàn)中所用的器具均為玻璃材質(zhì)，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的管線均為不銹鋼或聚四氟乙烯材質(zhì)。

9.2

嚴(yán)格控制試劑空白，空白值應(yīng)不得對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生明顯影響，否則扣除空白時(shí)會(huì)引起較大的誤差。

附錄A

辛基酚等5種酚類物質(zhì)相關(guān)信息

表A.1

辛基酚等5種酚類物質(zhì)英文名稱、中文名稱、分子式、CAS號(hào)、相對(duì)分子質(zhì)量

序號(hào)

中文名稱

英文名稱

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子量

辛基酚

4-tert-Octyl

phenol

140-66-9

C14H22O

206.33

正辛基酚

4-n-Octyl

phenol

1806-26-4

C14H22O

206.33

壬基酚

Nonylphenol

25154-52-3

C15H24O

220.35

正壬基酚

4-n-Nonylphenol

104-40-5

C15H24O

220.35

雙酚A

Bisphenol

A

80-05-7

C15H16O2

228.29

辛基酚-13C6

4-tert-Octylphenol-13C6

1173020-24-0

C14H22O

212.28

正辛基酚-D17

4-n-Octyl

phenol-D17

1219794-55-4

CD3(CD2)7C6H4OH

223.43

壬基酚-13C6

3,6,3-Nonylphenol-13C6

1173020-38-6

C15H24O

226.40

正壬基酚-D4

4-n-Nonylphenol

-2,3,5,6-D4,OD

358730-95-7

C15H19D5O

225.38

雙酚A-D4

Bisphenol

A

-3,3’,5,5’-D4

347841-41-2

C15H12

D4O2

232.31

附錄B

超高效液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜參考條件

質(zhì)譜參考條件

a）電離方式：電噴霧負(fù)離子模式；

b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

c）離子源溫度(TEM):650℃;

d）霧化氣(Gas1):

55;

e）輔助氣(Gas2):

65；

f）氣簾氣(Gurtain

Gas):

20;

g）電噴霧電壓：-4500V；

h）干燥氣流速：11

L/min；

i）定性離子、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見(jiàn)表B.1。

表B.1

化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)

化合物

Q1

Q3

DP/V

CE/V

辛基酚

205

133*

-80

205

117

-80

-80

正辛基酚

205

106*

-80

205

119

-80

-54

4-壬基酚

219

133*

-80

219

147

-80

4-正壬基酚

219

106*

-80

219

119

-80

雙酚A

227

212*

-80

227

133

-80

辛基酚-13C6

211

139*

-73

正辛基酚-D17

222

108*

-80

壬基酚-13C6

225.1

138.9*

-90

正壬基酚-D4

223

110*

-80

雙酚A-D4

231

216*

-80

*

定量離子。

附錄C

超高效液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

雙酚A

雙酚A-D4

B.2

B.1

壬基酚-13C6

4-壬基酚

B.4

B.3

4-正壬基酚

壬基酚-D4

B.6

B.5

對(duì)辛基酚-13C6

4-辛基酚

B.8

B.7

4-正辛基酚

辛基酚-D17

B.10

B.9

0.01

μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物MRM色譜圖

圖C.1

雙酚A；圖C.2

雙酚A-D4；圖C.壬基酚；圖C.4壬基酚-13C6；圖C.5正壬基酚；圖C.6

正壬基酚-D4；圖C.7辛基酚；圖C.8

辛基酚-13C6；圖C.9正辛基酚；圖C.10

正辛基酚-D17

本方法負(fù)責(zé)起草單位：中國(guó)食品藥品檢定研究院。

方法驗(yàn)證單位：北京市疾病預(yù)防控制中心、國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心、陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、中國(guó)肉類食品綜合研究中心、遼寧省食品檢驗(yàn)檢測(cè)院、湖北省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院。

方法主要起草人：寧霄、金紹明、邵兵、黃傳峰、曹進(jìn)、丁宏、張爍。

第三篇：豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測(cè)定（BJS 201909）

豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測(cè)定

BJS

201909

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豆腐、豆干、火鍋底料、麻辣燙底料及火鍋和麻辣燙的食材中諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、雙氟沙星、司帕沙星、環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星的測(cè)定和確證。

原理

采用0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液提取樣品中的喹諾酮類化合物，經(jīng)離心和過(guò)濾后，上清液經(jīng)HLB固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)和確證，內(nèi)標(biāo)法定量。

試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純，水為GB/T

6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1

乙腈（CH3CN）：色譜純。

3.2

甲醇（CH3OH）：色譜純。

3.3

甲酸（CHOOH）：色譜純。

3.4

甲醇（CH3OH）。

3.5

氨水（NH4OH）：濃度25%～28%。

3.6

乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2Na2O8·2H2O）。

3.7

檸檬酸（C6H8O7·H2O）。

3.8

磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。

3.9

氫氧化鈉（NaOH）。

3.10

鹽酸（HCl）：含HCI

38%。

3.11

乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

3.12

磷酸氫二鈉溶液（0.2

mol/L）：稱取71.63

g磷酸氫二鈉（3.8），用水溶解并定容至1000

mL。

3.13

檸檬酸溶液（0.1

mol/L）：稱取21.01

g檸檬酸（3.7），用水溶解并定容至1000

mL。

3.14

Mcllvaine緩沖溶液：將1000

mL

0.1

mol/L檸檬酸溶液（3.13）與625

mL

0.2

mol/L磷酸氫二鈉溶液（3.12）混合，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至4.0±0.1。

3.15

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（0.1

mol/L）：稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉（3.6）至1625mL

Mcllvaine緩沖溶液（3.14）中，超聲使其溶解。

3.16

5%甲醇水溶液：取5

mL甲醇（3.4），用水稀釋至100

mL。

3.17

25%氨水甲醇溶液：取25

mL氨水（3.5），用甲醇（3.4）稀釋至100

mL。

3.18

標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見(jiàn)附錄A表A.1，純度≥99%。

3.19

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：分別精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品（3.18）約10

mg，置10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超聲使溶解，用乙腈（3.1）定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0

mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，轉(zhuǎn)移至溶劑瓶中于-18℃以下避光保存，有效期6個(gè)月。

3.20

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.19）1

mL于100

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為0.01

mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（環(huán)丙沙星、沙拉沙星濃度約0.015mg/mL），于4℃以下避光保存，有效期3個(gè)月。

3.21

混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液的配制：準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.20）1

mL至10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為1.0

μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（環(huán)丙沙星、沙拉沙星濃度約1.5

μg/mL），于4℃以下避光保存，臨用新配。

3.22

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制：分別稱取氘代同位素標(biāo)準(zhǔn)品（3.18）約10

mg，至10

mL容量瓶中，加入0.2

mL甲酸（3.3），超聲溶解，用乙腈（3.1）稀釋至刻度，配制成濃度為1.0

mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18℃以下避光保存，有效期6個(gè)月。

3.23

混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液的配制：準(zhǔn)確吸取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.22）0.01mL于10

mL容量瓶中，用甲醇（3.2）定容至刻度，配制成濃度為1.0

μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，于4℃以下避光保存，臨用新配。

3.24

固相萃取小柱（500

mg，6

mL）：HLB柱或相當(dāng)者。使用前依次以6

mL甲醇、6mL水活化，保持柱體濕潤(rùn)。

儀器和設(shè)備

4.1

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。

4.2

分析天平：感量0.001g和0.00001

g。

4.3

渦旋振蕩器

4.4超聲儀

4.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8000

r/min

4.6

均質(zhì)器

4.7

氮?dú)鉂饪s儀

測(cè)定步驟

5.1

試樣制備與保存

豆制品、火鍋和麻辣燙的食材

從待檢樣品中取出樣品約500g，用組織搗碎機(jī)充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于-18℃冷凍存放。

火鍋底料、麻辣燙底料

固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，用組織搗碎機(jī)充分搗碎混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于4℃冷藏存放。

半固體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，放入研缽中，迅速研磨均勻，裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記于4℃冷藏存放。

液體狀：從待檢樣品中取出樣品約500g，攪拌均勻后裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于4℃冷藏存放。

5.2

樣品溶液制備

提取：稱取5.0

g均勻樣品（精確至0.001g），置50

mL離心管中，精密加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（3.23）0.1mL，加入20

mL

0.1

mol/L

EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15），渦旋混勻1min，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，上清液轉(zhuǎn)移至50

mL容量瓶中，殘?jiān)肊DTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15）同法重復(fù)提取兩次，每次10

mL，合并上清液至同一容量瓶中，用EDTA-Mcllvaine

緩沖溶液（3.15）定容至刻度，混勻。用濾紙過(guò)濾（必要時(shí)10000

r/min離心5

min后過(guò)濾），續(xù)濾液待凈化。

凈化：精密吸取上述待凈化液25.0

mL，以約1

mL/min的流速全部通過(guò)固相小柱（3.24），用3

mL

5%甲醇水溶液（3.16）淋洗，抽干，先后以6

mL甲醇、3

mL氨水甲醇（3.17）洗脫，合并甲醇及氨水甲醇洗脫液，45

℃氮吹至近干，準(zhǔn)確加入2.0

mL流動(dòng)相初始比例復(fù)溶液溶解殘?jiān)^(guò)0.22

μm濾膜，續(xù)濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。

5.3

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

稱取5.0

g空白試樣（精確至0.001g），置50

mL離心管中，除不加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液外，其余同5.2操作處理后得到空白基質(zhì)，共制備6份。

分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（3.21）0

mL、0.010

mL、0.020

mL、0.050

mL、0.100

mL、0.200

mL及混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（3.23）0.025

mL于試管中，氮吹至近干，精密加入1.0

mL空白基質(zhì)復(fù)溶，過(guò)0.22

μm濾膜，制成濃度為0

ng/mL、10

ng/mL、20

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、200

ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（環(huán)丙沙星、沙拉沙星濃度為0

ng/mL、15

ng/mL、30

ng/mL、75

ng/mL、150

ng/mL、300

ng/mL，同位素內(nèi)標(biāo)濃度約25ng/mL）。

5.4

測(cè)定

5.4.1

液相色譜參考條件

1）

色譜柱：C18色譜柱，2.1

mm×50

mm×1.7

μm，或性能相當(dāng)者。

2）

柱溫：40℃。

3）

流速：0.25

mL/min。

4）

進(jìn)樣量：2

μL。

5）

流動(dòng)相：A-5

mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸），B-乙腈。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1

梯度洗脫條件

時(shí)間（min）

A(%)

B(%)

0

10.5

13.1

5.4.2

質(zhì)譜參考條件

1）

電離方式：電噴霧電離（ESI）；

2）

掃描方式：正離子掃描；

3）

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM；

4）

離子源參數(shù)參考條件：

離子源接口電壓，4000

V；離子源接口溫度，350

℃；脫溶劑溫度，250

℃；離子源加熱溫度，400

℃；霧化氣流速，2.9

L/min；干燥氣流速，10.0

L/min；加熱氣流速，10.0

L/min。

5）定性離子對(duì)、定量離子對(duì)參見(jiàn)表2。

表2

喹諾酮類藥物主要質(zhì)譜參數(shù)

序號(hào)

組分

母離子

子離子

Q1

預(yù)四極桿電壓

碰撞電壓

Q3

預(yù)四極桿電壓

（m/z）

（m/z）

（V）

(V)

（eV）

諾氟沙星

320.2

*302.0

231.1

氧氟沙星

362.2

*318.2

261.1

洛美沙星

352.0

*265.0

308.0

培氟沙星

334.0

290.1

*316.2

氟羅沙星

370.0

*326.0

269.0

沙拉沙星

386.2

342.0

299.1

*368.1

雙氟沙星

400.0

*356.0

299.0

司帕沙星

393.0

*349.0

292.0

環(huán)丙沙星

332.1

*314.1

287.8

231.0

達(dá)氟沙星

358.0

*340.1

283.2

82.1

恩諾沙星

360.0

*342.1

316.0

245.2

D8-環(huán)丙沙星

340.3

322.1

D5-恩諾沙星

365.1

321.1

D5-諾氟沙星

325.3

307.2

注：1.“*”表示定量離子；2.所列質(zhì)譜參考條件是在島津（LC/MS-8050）質(zhì)譜儀上完成的，此處所列試驗(yàn)用儀器型號(hào)僅供參考，不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)方法使用者嘗試不同廠家或型號(hào)的儀器；3.對(duì)不同質(zhì)譜儀，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳；4.由于喹諾酮類化合物離子化受基質(zhì)干擾較為

顯著，方法使用者可根據(jù)實(shí)際情況選擇表中所列離子對(duì)進(jìn)行定性定量測(cè)定。

5.4.3

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.3）按濃度由低到高依次進(jìn)樣檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.5

定性

在相同實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)；且試樣譜圖中各組分定性離子的相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液定性離子的相對(duì)豐度，其允許偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍時(shí)，則可確定為樣品中存在此種待測(cè)物?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）典型圖譜見(jiàn)附錄B。

表3

定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度，%

＞50%

＞20%～50%

＞10%～20%

≤10%

允許的相對(duì)偏差，%

±20%

±25%

±30%

±50%

5.6

定量

待測(cè)樣液中喹諾酮藥物的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、氟羅沙星以氘代諾氟沙星為內(nèi)標(biāo)，洛美沙星、雙氟沙星、環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星以氘代環(huán)丙沙星為內(nèi)標(biāo)，司帕沙星、沙拉沙星、恩諾沙星以氘代恩諾沙星為內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)法定量。本方法中所列內(nèi)標(biāo)能基本滿足方法要求，如條件允許，可采用各化合物的對(duì)應(yīng)同位素化合物作為內(nèi)標(biāo)。

結(jié)果計(jì)算

試樣測(cè)定結(jié)果按公式（1）計(jì)算目標(biāo)物的含量：

………….(1)

式中：

X——試樣中被測(cè)組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；

m——試樣的稱樣量，單位為克（g）；

C——由工作曲線計(jì)算得到的試樣中被測(cè)組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V——定容體積，單位為毫升（mL）。

F——稀釋倍數(shù)

計(jì)算結(jié)果需扣除空白值（空白基質(zhì)），并保留三位有效數(shù)字。

檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度

7.1

靈敏度

諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星檢出限均為5

μg/kg，環(huán)丙沙星檢出限為7.5

μg/kg，沙拉沙星檢出限為7.5

μg/kg。

諾氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟羅沙星、雙氟沙星、司帕沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星定量限均為15

μg/kg，環(huán)丙沙星定量限為22.5

μg/kg，沙拉沙星定量限為22.5

μg/kg。

7.2

準(zhǔn)確度

本方法在15.0～100.0

μg/kg的添加水平上的回收率范圍為65.0%～120.0%。

7.3

精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%。

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)品信息

表A.1

標(biāo)準(zhǔn)品中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量

序號(hào)

化合物名稱

英文名

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子質(zhì)量

諾氟沙星

Norfloxacin

70458-96-7

C16H18FN3O3

319.33

氧氟沙星

Ofloxacin

82419-36-1

C18H20FN3O4

361.37

洛美沙星

Lomefloxacin

98079-51-7

C17H19F2N3O3

351.35

培氟沙星

Pefloxacin

70458-92-3

C17H20FN3O3

333.36

氟羅沙星

Fleroxacin

79660-72-3

C17H18F3N3O3

369.34

鹽酸沙拉沙星

Sarafloxacin

Hydrochloride

91296-87-6

C20H18ClF2N3O3

421.81

鹽酸雙氟沙星

Difloxacin

Hydrochloride

91296-86-5

C21H20ClF2N3O3

435.85

司帕沙星

Sparfloxacin

110871-86-8

C19H22F2N4O3

392.40

環(huán)丙沙星

Ciprofloxacin

85721-33-1

C17H18FN3O3

331.34

甲磺酸達(dá)氟沙星

Danofloxacin

mesylate

119478-55-6

C20H24

FN3O6S

453.48

恩諾沙星

Enrofloxacin

93106-60-6

C19H22FN3O3

359.39

D8-環(huán)丙沙星

Ciprofloxacin-d8

/

C17H10D8FN3O3

339.39

D5-恩諾沙星

Enrofloxacin-d5

/

C19H17D5FN3O3

364.37

D5-諾氟沙星

Norfloxacin-d5

/

C16H13D5FN3O3

324.37

注：市售標(biāo)準(zhǔn)品中部分為其鹽酸鹽或甲磺酸鹽。

附錄B

14種喹諾酮類化合物多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）譜圖

14種喹諾酮類化合物火鍋底料基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液(100

ng/mL，氘代內(nèi)標(biāo)為25

ng/mL)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）譜圖

本方法負(fù)責(zé)起草單位：四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院

方法的參與驗(yàn)證單位：上海市食品藥品檢驗(yàn)所、遼寧省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院、深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心、山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院。

主要起草人：余曉琴，李道霞，黃麗娟，成長(zhǎng)玉，李澍才，唐昌云

第四篇：食品中匹可硫酸鈉的測(cè)定（2019）

附件

食品中匹可硫酸鈉的測(cè)定

（BJS

201911）

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品（含保健食品）中匹可硫酸鈉的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于果凍、蜜餞、糖果、飲料等食品（含與上述基質(zhì)相同的保健食品及片劑、硬膠囊劑保健食品）中匹可硫酸鈉的測(cè)定。

原理

試樣粉碎后經(jīng)水或甲醇溶液提取，必要時(shí)經(jīng)聚酰胺凈化后，經(jīng)反相色譜柱分離，電噴霧離子源離子化，多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

試劑和材料

除另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T

6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1

試劑

3.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

3.1.2

甲醇（CH3OH）。

3.1.3

無(wú)水乙醇（CH3CH3OH）。

3.1.4

氨水（NH3?H2O）：濃度25

%~28

%。

3.1.5乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

3.1.6

三氯乙酸（C2HCl3O2）。

3.1.7聚酰胺固相萃取柱：取1

g聚酰胺粉（層析用，200目），用10

mL水活化，并裝填于帶有適量脫脂棉花的10

mL一次性注射器中。亦可采用商品化固相萃取小柱（1000

mg，6

cc），使用前用水活化，或按商品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行活化操作。

3.2

試劑配制

3.2.1

三氯乙酸溶液（1

%）：稱取10

g三氯乙酸（3.1.6），加1000

mL水溶解。

3.2.2

%甲醇溶液：量取700

mL甲醇（3.1.2），加水定容至1000

mL。

3.2.3無(wú)水乙醇-氨水-水溶液（7+1+2，體積比）：量取100

mL氨水（3.1.4），700

mL無(wú)水乙醇（3.1.3），水200

mL，混勻。

3.2.4乙酸銨溶液（10

mmol/L）:稱取0.77

g乙酸銨（3.1.5），加入1000

mL水溶解，經(jīng)0.22

μm水相微孔濾膜過(guò)濾后備用。

3.3

標(biāo)準(zhǔn)品：匹可硫酸鈉，其中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A。

3.4

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000

mg/L）：準(zhǔn)確稱取匹可硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品10

mg（精確至0.00001

g），置于10

mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1000

mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃避光保存，有效期1個(gè)月。

3.4.2

標(biāo)準(zhǔn)使用液（5

mg/L）：取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.4.1）1

mL于200

mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為5

mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，4℃避光保存，有效期7天。

3.4.3

標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)使用液（3.4.2）適量，用水配制成質(zhì)量濃度為5

ng/mL、10

ng/mL、50

ng/mL、100

ng/mL、250

ng/mL、500

ng/mL，或依儀器響應(yīng)和實(shí)際情況配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

3.5

材料

3.5.1

微孔濾膜：0.22

μm，PES濾膜和PTFE濾膜。

儀器與設(shè)備

4.1液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。

4.2

分析天平：感量分別為0.0001

g和0.00001

g

4.3

超聲波水浴。

4.4

恒溫水浴鍋。

4.5

固相萃取裝置。

試樣制備

5.1

果凍、蜜餞、糖果、固體飲料、片劑、硬膠囊劑

取適量代表性樣品（硬膠囊劑取內(nèi)容物），采用搗碎、剪碎或研碎等方式混勻，裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記。

5.2

液體飲料

充分混勻，直接取用。

分析步驟

6.1

試樣提取

6.1.1

果凍

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于50

mL離心管中，加入20

mL水，80

℃水浴至膠質(zhì)溶散，水浴過(guò)程中注意搖散，提取液轉(zhuǎn)移至25

mL容量瓶中，加入2.5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25

mL，待凈化。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.2

蜜餞

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于50

mL離心管中，準(zhǔn)確加入40

mL水，超聲提取15

min，8000

r/min離心5

min，上清液轉(zhuǎn)移至50

mL容量瓶中，用5mL水洗滌殘?jiān)礈煲翰⑷胪蝗萘科?，加?

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL，待凈化。

6.1.3糖果

6.1.3.1壓片糖果

稱取0.5

g（精確到0.0001

g）試樣于50

mL離心管中，準(zhǔn)確加入10

mL

%甲醇溶液（3.2.2），渦旋30

s，超聲提取30

min，8000

r/min離心5

min。取上清液1

mL于5

mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，過(guò)PTFE微孔濾膜，待測(cè)?？筛鶕?jù)實(shí)際濃度用水適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。

6.1.3.2其他糖果

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于小燒杯中，加入40

mL水，80℃水浴至樣品溶解（膠基糖果水浴15min，水浴過(guò)程中注意搖散），轉(zhuǎn)移至50

mL容量瓶中，用5

mL水洗滌燒杯，洗滌液并入同一容量瓶，加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL，待凈化。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.4

固體飲料

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于50

mL離心管中，加入25

mL水，80℃水浴10

min，8000

r/min離心5

min，收集提取液，加入20

mL水洗滌殘?jiān)?，渦旋30

s，8000

r/min離心5

min，合并兩次提取液，于提取液中加入5

mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50

mL。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.5

液體飲料

稱取1

g（精確到0.001

g）試樣于25

mL具塞比色管中，加入20

mL水，80℃水浴10

min，放冷后加入2.5mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25

mL。若提取液渾濁，可取適量8000

r/min離心5

min，上清液待凈化。

6.1.6

片劑、硬膠囊劑

同“6.1.3.1壓片糖果”。

6.2

試樣凈化

6.2.1果凍、液體飲料

取10

mL待凈化液至已活化的聚酰胺固相萃取柱（3.1.7）內(nèi)，待溶液流盡后，依次用10

mL水、15

mL

%甲醇溶液（3.2.2）洗滌，20

mL無(wú)水乙醇-氨水-水溶液（3.2.3）洗脫，收集洗脫液于80

℃水浴上蒸發(fā)至近干，用水定容至10

mL，過(guò)0.22

μm

PES或PTFE濾膜，待測(cè)。可根據(jù)實(shí)際濃度用水適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。

6.2.2蜜餞、其他糖果、固體飲料

凈化操作同“5.2.1果凍、蜜餞、液體飲料”，洗脫液于80

℃水浴上蒸發(fā)至近干，用水定容至5

mL，過(guò)0.22

μm

PES或PTFE濾膜，待測(cè)?？筛鶕?jù)實(shí)際濃度用水適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。

6.3

空白試樣

稱取空白試樣適量，與試樣同法處理，制得空白基質(zhì)溶液。

6.4

儀器參考條件

6.4.1

色譜條件

6.4.1.2色譜柱：C18柱，2.1

mm×100

mm，2.6

μm，或同等性能的色譜柱。

6.4.1.2

流動(dòng)相：10

mmol/L乙酸銨溶液+乙腈（85+15）

6.4.1.3

流速：0.3

mL/min

6.4.1.4

柱溫：35℃

6.4.1.5進(jìn)樣量：5

μL

6.4.2質(zhì)譜條件

6.4.2.1離子源：電噴霧離子源（ESI）。

6.4.2.2

掃描方式：正離子掃描。

6.4.2.3檢測(cè)方式：多反應(yīng)模式（MRM）。

6.4.2.4干燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮?dú)饣蚱渌线m氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求，噴霧電壓、離子源溫度、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度。

6.4.2.5參考監(jiān)測(cè)離子對(duì)和參考參數(shù)

表1匹可硫酸鈉定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)參考值

名稱

母離子

子離子

去簇電壓（V）

碰撞能（V）

匹可硫酸鈉

438.2

183.9*

120

438.2

278.2

120

*定量離子對(duì)

6.5

試樣測(cè)定

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液和試樣溶液分別注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中測(cè)定。根據(jù)保留時(shí)間和相對(duì)離子對(duì)豐度比定性，外標(biāo)峰面積定量。

表2

定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度（%）

>50

>20—50

>10—20

≤10

允許的相對(duì)偏差（%）

±20

±25

±30

±50

空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按試樣同法處理。

結(jié)果計(jì)算

試樣中匹可硫酸鈉的含量按下式計(jì)算：

式中：

X—食品中匹可硫酸鈉（以C18H13NNa2O8S2?H2O計(jì)）的含量，mg/kg；

c—試品溶液中匹可硫酸鈉（以C18H13NNa2O8S2?H2O計(jì)）的濃度，ng/mL；

V—試品稀釋液體積，mL；

1000—單位換算；

m—試品質(zhì)量，g。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

檢測(cè)方法的靈敏度、精密度、專屬性

9.1

靈敏度

果凍、蜜餞、其他糖果、飲料取樣量為1

g，稀釋倍數(shù)為25時(shí)，定量限為0.125

mg/kg，檢出限為0.05

mg/kg；壓片糖果、片劑、硬膠囊劑取樣量為0.5

g，稀釋倍數(shù)為50時(shí)，定量限為0.5

mg/kg，檢出限為0.2

mg/kg。

9.2精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15%。

9.3

專屬性

空白試驗(yàn)應(yīng)無(wú)干擾。

附錄A

匹可硫酸鈉相關(guān)信息

表A.1

匹可硫酸鈉名稱、CAS號(hào)、分子式、分子量、結(jié)構(gòu)式

名稱

CAS號(hào)

分子式

分子量

結(jié)構(gòu)式

匹可硫酸鈉

Sodium

picosulfate

10040-45-6

C18H13NNa2O8S2

481.41

附錄B

標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

B.1

標(biāo)準(zhǔn)品總離子流色譜圖（250ng/mL）

B.2標(biāo)準(zhǔn)品提取離子（定量）色譜圖（250ng/mL）

B.3標(biāo)準(zhǔn)品提取離子（定性）色譜圖（250ng/mL）

本方法負(fù)責(zé)起草單位：廣東省藥品檢驗(yàn)所

驗(yàn)證單位：廣東省食品檢驗(yàn)所（廣東省酒類檢測(cè)中心）、廣東省食品工業(yè)研究所有限公司（廣東省質(zhì)量監(jiān)督食品檢驗(yàn)站）、國(guó)家糖業(yè)質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、上海食品藥品檢驗(yàn)所、中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)院、中國(guó)食品藥品檢定研究院

主要起草人：何嘉雯、溫家欣、賴宇紅、劉亞雄、羅卓雅、方繼輝

第五篇：實(shí)習(xí)六 食品中人工合成色素的測(cè)定

實(shí)習(xí)六

食品中人工合成色素的測(cè)定

（一）原理

聚酰胺是一種高分子化合物，又稱“尼龍6”，在酸性條件下可與水容性酸性染料牢固結(jié)合；在堿性條件下則可解吸色素，用紙層析法或薄層層析法進(jìn)行分離鑒別后，再與標(biāo)準(zhǔn)比較予以定性、定量。

（二）試劑

1． 聚酰胺粉（尼龍6）200目 2． 正丁醇 3． 無(wú)水乙醇 4． 1%氨溶液

5． 乙醇-氨液（9：1）6． 20%檸檬酸

7． 0.1%色素標(biāo)準(zhǔn)貯備液(1mg/ml):精確稱取商品色素胭脂紅、莧菜紅0.1克容于蒸餾水，稀釋至100毫升。

8． 展開(kāi)劑（臨用現(xiàn)配）正丁醇：無(wú)水乙醇：1%氨水（6：2：3）

（三）儀器 9． 沙氏漏斗-G3 10．抽濾瓶：500ml 11．100 ml，500 ml 12．血紅蛋白吸管 13．展開(kāi)缸

14．玻璃水泵

15．帶塞刻度比色管：10 ml 16．恒溫水浴

17．量筒：25 ml，50 ml 18．天平19．吹風(fēng)機(jī)

20．吸管：1 ml 21．白瓷蒸發(fā)皿 22．中速層吸濾紙 23．溫度計(jì) 24．PH試紙 25．玻璃棒 26．滴管(四)操作方法

1.樣品處理（汽水類樣品）：將樣品用兩個(gè)杯子反復(fù)傾倒100次除去CO2，精確吸取樣品50 ml放入100 ml燒杯中，加熱到70℃，備用。2．吸附去雜質(zhì)：稱取聚酰氨粉1g，加少量水調(diào)成糊狀后倒入前處理的70℃的樣品中，充分?jǐn)嚢枋箻右荷厝勘晃?，將樣液全部移入沙?G3漏斗抽濾，用300ml 70℃ PH=4的蒸餾水分多次洗滌沉淀物，至洗液與原蒸餾水PH相同為止（洗滌過(guò)程必須充分?jǐn)嚢瑁顾玫南礈煲号c聚酰氨粉充分接觸）。3.解吸: 用乙醇氨溶液15mlf分三次洗滌色素，解吸過(guò)程時(shí)時(shí)攪拌直至濾出液無(wú)色為止并收集全部解吸液。

4．濃縮: 將色素解吸液置于蒸發(fā)皿中在80℃水浴上濃縮至0.5-1ml，轉(zhuǎn)入10ml刻度試管中，用少量50%乙醇洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入并入刻度試管中。

5紙層析定性:為了判斷樣品中存在有幾種色素以及是什么色素，必須進(jìn)行紙層析進(jìn)行鑒定。經(jīng)上述濃縮后樣品色素溶液于新華中速層析濾紙（8cm*16cm）距底邊2cm的基線上點(diǎn)樣點(diǎn)樣點(diǎn)的直徑應(yīng)不超過(guò)2毫米為宜，樣點(diǎn)間距離以及左右紙邊各距2厘米。點(diǎn)樣量20微升，同時(shí)根據(jù)樣品顏色點(diǎn)上色素標(biāo)準(zhǔn)溶液點(diǎn)作對(duì)照。用展開(kāi)劑在展開(kāi)槽展開(kāi)（展開(kāi)前層析缸及濾紙先用相應(yīng)的溶劑系統(tǒng)平衡10分鐘后再展開(kāi)）。待溶劑前沿到達(dá)離起始線12cm處，將濾紙取出于空氣中晾干，測(cè)量各色素點(diǎn)的Rf值，于標(biāo)準(zhǔn)色素Rf值對(duì)照確定何種色素（以標(biāo)準(zhǔn)色素斑點(diǎn)Rf值衡量樣品各色素斑點(diǎn)的Rf值是否于標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)在同一條直線上，色素的顏色是否完全一致，就可確定樣品色素屬于何種色素）。

Rf（比移值）=斑點(diǎn)移動(dòng)距離/溶劑前沿距離 所使用的展開(kāi)劑有：

1)正丁醇︰無(wú)水乙醇︰1%氨水 = 6︰2︰3 2)正丁醇︰吡啶︰1%氨水 = 6︰3︰4 3)異丁醇︰無(wú)水乙醇︰水 = 3︰2︰2 6．紙層析定量：將紙色譜的條狀色斑剪下，用少量熱水洗滌數(shù)次，洗液移入10ml比色管中，并加水稀釋至刻度，作比色測(cè)定用。

分別吸取0.0 0.1 0.2 0.3 0.4ml胭脂紅或莧菜紅色素標(biāo)準(zhǔn)液分別置于10ml比色管中，各加水稀釋至刻度。目視比色。

（五）結(jié)果計(jì)算

X（g/kg，g/L）=A/（m*V2/V1）

式中 A：測(cè)定樣液中色素的含量（mg）

m：樣品質(zhì)量或體積（g，ml）V1：樣品解吸后總體積（ml）V2：樣液點(diǎn)紙?bào)w積（ml）