第一篇：OLYMPUS生化一點總結(jié)

[原創(chuàng)]看了OLYMPUS生化一點總結(jié) Post By：2006-8-22 15:41:00 奧林巴斯光學工業(yè)株式會社創(chuàng)立于1919年，1920年首次在日本成功地將顯微鏡商品化，從而作為精密、光學技術(shù)的代表企業(yè)開始起步。

該公司以先進的光學技術(shù)及精密工藝為起點，經(jīng)過多年的研制與開發(fā)，于1968年初成功地生產(chǎn)出第一臺自動生化分析儀，從而首次涉足自動生化分析儀器領(lǐng)域。1974年生產(chǎn)出日本第一臺使用速率法的自動生化分析儀ACA4型（12通道）。從20世紀70年代初開始至90年代，Olympus公司生產(chǎn)了十幾種型號的大型及超大型自動生化分析儀，并于1994年開始進入中國市場。1996年以后更先后推出AU1000、AU400、AU640等大中型儀器，使在中國市場的占有量上升為500臺左右。在新世紀到來之時，Olympus公司推出了全新設計的AU2700及AU5400。Olympus新儀器的主要設計思想是使大型實驗室的成本消耗降低的同時儀器保養(yǎng)工作量也減少，而工作效率大為提高。

1、集束式點光源：該公司于1996年率先在AU600型生化儀上采用，以后生產(chǎn)的各機型均采用該技術(shù)，簡而言之，該系統(tǒng)在光源和比色杯之間使用一組特制透鏡，其目的是將原始光源燈投射出的光通過比色杯時將光束變成一束點光源（與傳統(tǒng)儀器的楔形光束部同）。這樣，即使比色杯最小反應體積只有120μl，光束也能完全通過。

2、光/數(shù)碼信號直接轉(zhuǎn)換技術(shù)：1996年該公司首次在AU600型生化儀上采用光/數(shù)碼信號直接轉(zhuǎn)換技術(shù)，它將光路種的光信號直接轉(zhuǎn)變成數(shù)碼信號，將電磁波對信號的干擾及信號傳遞過程種的衰減完全消除。在傳統(tǒng)光路種，儀器、電機、電源及生化儀本身均會產(chǎn)生大量電磁波，這些電磁波對電信號產(chǎn)生不同程度的干擾。同時，電信號在傳導過程中也有一定程度的衰減。這些因素都會影響測定結(jié)果的穩(wěn)定性和精確性。Olympus革新性的將光信號轉(zhuǎn)換成數(shù)碼信號，同時采用光導纖維傳輸信號，這樣可將測試精度提高進百倍，其發(fā)展趨勢必將是今后生化儀優(yōu)先采用的技術(shù)。

3、進樣系統(tǒng)：

（1）常規(guī)樣品：1980年該公司開始推廣軌道式進樣，最初采用后軌道，自1996年以后，該公司所有的生化儀全部改用側(cè)軌道和前軌道。使進樣既方便靈活又具有可擴展成自動化實驗室的潛力。每個樣本架可放置10個樣品，樣品架按功能及顏色分為常規(guī)、急診、質(zhì)控、定標、重測、空白樣品架，儀器能自動識別。

（2）急診樣品；：AU系列生化分析儀均采用兩種急診樣品插入方式。①獨立急診臺方式。生化儀備有一專用急診轉(zhuǎn)盤，可同時放置22個急診樣品，另有7個位置可放置質(zhì)控品和校準品，急診轉(zhuǎn)盤具有另冷藏功能，且可優(yōu)先檢測。如果使用專門配套的急診試劑，4min后即可查到7項急診結(jié)果；更設計有“一觸即發(fā)”功能，即使毫無操作儀器經(jīng)驗的人，也能勝任急診工作。一般情況下急診臺檢測血清樣品，也可以檢測尿、腦脊液燈。急診轉(zhuǎn)盤也具有條形碼閱讀功能。需要測定急診樣品時，可隨時插入，不影響常規(guī)樣品的測試排序。②樣品架急診方式。AU系列生化分析儀均可使用軌道進行急診樣品插入，方法為使用紅色樣品架，當軌道上放有紅色樣品架時，機器可自動判斷為急診檢測樣品。

（3）重測樣品：AU系列生化分析儀均可自動重測樣品，當測試樣品的結(jié)果超出了用戶定義的范圍，即可自動重測。如工結(jié)果偏高，則稀釋后再測（后稀釋）；如果結(jié)果偏低則增加樣品量后再測。

（4）樣品前稀釋：由于軟件功能種稀釋比例最高為1：150，當一些免疫及特殊項目需更大稀釋比例時，需使用前稀釋功能，其方法為將待測樣品加入比色杯中稀釋，稀釋倍數(shù)5～100倍，再將稀釋樣品加入測光比色杯中進行固定程序分析。

4、探針系統(tǒng)：傳統(tǒng)的液面探針技術(shù)檢測液面時通過阻抗，或者時測定電容電流。樣品探針設計中具有超聲波頭，而超聲波常常受周圍環(huán)境的影響。當環(huán)境污染改變可導致超聲波回音碼的變化。AU系列樣品探針為單根雙腔型探針。樣品量范圍1.6～25μl，再檢時從1μl開始，0.1μl步進，并采用隨量跟蹤技術(shù)以保證加樣零誤差。

⑴自動液面檢測：探針帶有感應裝置，探到液面后會自動停止下降。⑵隨量控制技術(shù)：探針可依據(jù)吸入液體的多少，自動調(diào)節(jié)探針的下降高度。探針液會自動調(diào)節(jié)高度以放置加注液體時濺到比色杯壁上，保證超微量分析的精確性。

⑶智能防撞保護功能：探針遇到縱向或橫向一定阻力后會停止運動以保護探針，但只停止被撞探針的運動，以前已加試劑及樣品的測試繼續(xù)進行。

⑷防堵及探測血凝塊功能：探針能自動探測血清中的血凝塊或纖維蛋白而報警。當發(fā)生堵針時，探針內(nèi)有一強水壓將堵物沖出，可免除堵針時造成的測試結(jié)果不準確。發(fā)生堵針并處理后的樣品會自動重測。

5、恒溫系統(tǒng)：目前恒溫系統(tǒng)應用較為廣泛的使水浴式恒溫和空氣浴。水浴式恒溫是溫控裝置是反應溫度控制在37℃±0.1℃的水平，開機后水浴可以自動更換，換水后，儀器自動加入一定量水浴保護劑，其作用有：①使恒溫水具有導電性；②抑制細菌生長③潤化比色杯以免產(chǎn)生氣泡。測定期間÷恒溫水浴不斷循環(huán)轉(zhuǎn)動，通過恒溫水的導電性保持恒定的水浴量，通過溫控裝置保持37℃±0.1℃的水平。水浴恒溫的優(yōu)點是溫度均勻、穩(wěn)定；缺點是升溫緩慢，開機預熱時間長，因水質(zhì)化（微生物、礦物質(zhì)沉積）影響測定，因測要定期換水和比色杯。為了加熱均勻和防止變質(zhì)，往往要設置馬達循環(huán)轉(zhuǎn)動和添加防腐劑。

空氣浴恒溫的優(yōu)點是升溫迅速，無需保養(yǎng)；缺點是溫度易受外界環(huán)境影響。恒溫系統(tǒng)突破性地采用氟利昂為反應槽恒溫。反應杯放置在內(nèi)部密封有氟利昂的金屬環(huán)上，機內(nèi)專門一塊控制電路板，控制反應恒溫、使反應盤內(nèi)的溫度始終在30℃±0.1℃或37℃±0.1℃，而且變溫速度快。通過計算可得出25℃時的結(jié)果。恒溫可靠，使得樣品與試劑反應穩(wěn)定完全，保證檢驗數(shù)據(jù)準確。

獨創(chuàng)的恒溫液循環(huán)加溫方式，集干式空氣浴和水浴的優(yōu)點。它是在比色杯周圍循環(huán)流動一種無味、無污染、無變質(zhì)、不蒸發(fā)的穩(wěn)定液。在比色杯與恒溫液間有1mm空氣夾縫，恒溫液通過加熱夾縫的空氣達到恒溫。這種技術(shù)既有水浴恒溫溫度穩(wěn)定、均勻的優(yōu)點，又具有空氣浴升溫迅速、無需維護保養(yǎng)的優(yōu)點。恒溫液為熱容量高、蓄熱能量強、無腐蝕的液體，使恒溫均勻穩(wěn)定。加上比色杯為可永久使用的硬質(zhì)石英玻璃，免得定期更換與保養(yǎng)。

6、攪拌系統(tǒng)：

攪拌系統(tǒng)是指樣品與試劑混合后須迅速分布均勻，其目的是更好更快測定其反應系統(tǒng)中的吸光度變化。OLYMPUS生化分析儀采用獨創(chuàng)的四頭回旋式雙重清洗攪拌棒，攪拌棒表面采用不沾涂層，具有不沾異物，無攜帶污染物的特點。其攪拌為四頭螺旋式高度旋轉(zhuǎn)攪拌棒，旋轉(zhuǎn)方向與螺旋方向相反，這樣攪拌時比色杯內(nèi)容物不外溢，不產(chǎn)生氣泡，使檢測結(jié)果更準確。攪拌棒一頭攪拌樣品或試劑，另外三頭分別進行以清洗液清洗，溫水自動沖洗及風干，四個步驟同時進行。這樣，既加快了沖洗速度，又提高了沖洗質(zhì)量，使攪拌系統(tǒng)不產(chǎn)生攜帶污染。

7、沖洗系統(tǒng)：

吸樣針和攪拌棒：激流式單向沖洗和多步驟沖洗。樣品、試劑探針的沖洗采用全新的“激流”（瀑布）式單向沖洗池。水流為從上向下的單向沖洗，將探針攜帶的污物沖向一排水口（就像人在自來水龍頭洗手）。較之傳統(tǒng)的涌泉式（就像人在洗臉盆內(nèi)洗手，不能完全洗凈）沖洗更干凈、徹底。該技術(shù)用以改善沖洗效果，提高測試的準確性，防止交叉污染。

比色杯：OLYMPUS生化分析儀采用先進的溫水八步驟自動清洗比色杯，使用更新的抽干技術(shù)，每次沖洗后遺留水量少于1μL，然后進行風干，使比色杯沖洗更干凈，徹底，防止項目間的交叉污染。為了不影響速度，比色杯實行分組沖洗，即測定與沖洗同時進行，隨時準備好測定使用的比色杯。通過編碼盤測定每個比色杯，自動標出不合要求的比色杯，提示進一步處理。反應盤內(nèi)裝有高質(zhì)量石英玻璃制成的反應杯，杯子寬度0.5cm，使試劑和樣品用量大大減小，試劑量在200～300μL，樣品量3～26μL。由于是獨立的反應杯，當杯子污染或損壞時，便于取出清洗和更換。

比色杯沖洗八步流程：污染比色杯→加注清洗劑→吸干→加注清洗劑→吸干→加注溫水→吸干→加注溫水→吸干→加注溫水→吸干（殘留水量<1μL)→擦干、干燥→干凈比色杯。

8、比色杯 AU2700的反應盤共有330個比色杯，采用單盤雙輪式。比色杯為內(nèi)外2圈，比色杯內(nèi)外圈2個比色杯同時比色。比色杯采用硬質(zhì)石英玻璃，光徑6mm，耐酸耐堿，自動沖洗，可永久使用。儀器自動檢測比色杯透光性，當發(fā)現(xiàn)有未清洗干凈的比色杯時，會跳過該杯繼續(xù)進行檢測。

9、試劑系統(tǒng) AU系列生化分析儀均采用開放式設計，用戶可自行選擇試劑。試劑瓶可分120ml、60ml、30ml、15ml幾種，用戶根據(jù)工作量大小自行選定。使用120ml試劑瓶時，一瓶試劑可檢測多達4000個測試。該儀器使用條形碼閱讀試劑位及固定試劑位2種方式，開機后自動檢測試劑量及可測項目數(shù)量，試劑倉采用半導體制冷（4～12℃）。

用戶可根據(jù)自身經(jīng)濟實力選擇使用配套的試劑。如使用該公司試劑，條形碼登錄會自動檢測項目、出廠日期、有效期等。原廠試劑為濃縮型，儀器自動稀釋后進行檢測。該公司同時生產(chǎn)各種規(guī)格的定標液和質(zhì)控液，若使用該公司的定標液校正儀器能使測定結(jié)果更穩(wěn)定可靠。

10、電子系統(tǒng) 采用多微處理器（CPU）系統(tǒng)，各工作單元如光路、恒溫、加樣、攪拌、清洗等均有獨立CPU。各CPU之間的通訊采用無噪音干擾的網(wǎng)絡連接及傳送，以提高速度和準確性、穩(wěn)定性。操作系統(tǒng)采用Windows NT新圖形軟件。

11、條形碼登錄 AU系列生化儀條形碼系統(tǒng)均為標準配置。條形碼識別采用混合式，可使用NW7,Code128，Zof5standard，ISBTCode1，Zof5interleaved等，最大可使用22位。AU系列生化儀共采用5部條形碼登錄。配備有樣品架、樣品管（患者ID號）、急診樣品、試劑

1、試劑2共5部條形碼閱讀器。

12、軟件功能 采用Windows NT軟件，圖形操作界面。AU2700主計算機能存儲60000個患者數(shù)據(jù)，20000個反應曲線，并通過Internet進行遠程培訓及儀器故障判斷。在樣品質(zhì)量分析種，可分析出溶血、脂濁、黃疸及血凝塊等情況并給予提示報警。

第二篇：生化實驗總結(jié)

一、實驗技術(shù)

1.關(guān)于糖：本學期我們學習了兩種總糖樣品處理方法（面粉總糖酸水解以及肌糖原無氧酵解）以及兩種測定還原糖含量的方法（斐林試劑熱滴定及3，5-二硝基水楊酸法）。還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計）。

一種是費林試劑熱滴定定糖法：在沸熱條件下,用還原糖溶液滴定一定量的費林試劑時, 將費林試劑中的銅離子還原為氧化亞銅, 以亞甲基藍為指示劑, 稍過量的還原糖立即將藍色的氧化型亞甲基藍還原為無色的還原型亞甲基藍, 指示滴定終點。

另一個是3，5-二硝基水楊酸法測定還原糖：還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。

關(guān)于肌糖元酵解

2.關(guān)于蛋白質(zhì)含量測定：本學期我們學習了醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白、氨基酸聚酰胺薄膜層析，以及利用溶解度差異提取血清中不同蛋白，并通過 BCA法、Folin酚法、凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量

3.關(guān)于酶活性學習了纖維素酶活力測定以及酶最適PH測定 4.關(guān)于稀堿法酵母核糖核酸提取以及紫外吸收法測定濃度

二、關(guān)于感悟 經(jīng)過半年的生化實驗的學習讓我受益菲淺。在生化實驗課即將結(jié)束之時，總結(jié)這學期的收獲與不足。取之長、補之短，在今后的學習和工作中有所受用。

三、這半年的生化實驗主要有菲林試劑熱滴定定糖法、folin-酚法測蛋白、稀堿法提取酵母RNA、醋酸纖維薄膜電泳、RNA定量測定-UV吸收法、纖維素酶活力的測定、最適PH選取、肌糖元的酵解作用、N-末端氨基酸殘基的測定--DNS-CL法柱層析分離色素、凱式定氮法等實驗。

在這些實驗中，凱式定氮法是給我印象最深的一個實驗，因為這個實驗使我認識了改良式凱式蒸餾儀的基本結(jié)構(gòu)，同樣的也讓我透過這次實驗掌握了凱式定氮法的操作技術(shù)。在這次實驗中，我和我的同組者-韓文志犯了一些錯誤，而且是很不就應犯的錯誤，我們都忘了在做實驗時要加入新的沸石，這是個很低級的錯誤，差點引起溶液的暴沸。透過這次錯誤我認識到，很多知識，即使是老師在怎樣說，它也只是理論，當我們不能把它應用到實踐中去時，它對我們都是毫無好處的。此刻更深的認識到了理論結(jié)合實際的觀點。在這次實驗中我們損壞了改良式凱式蒸餾儀，并且賠了錢，錢不是問題，重要的是操作的問題，我覺得我們在做實驗時還是對儀器不是很熟悉，做實驗時不認真。

還有一個是柱層析分離色素，這個實驗主要是掌握吸附層析的原理和操作技術(shù)，我記得這次實驗我是第二個到的實驗室，當時還很有成就感，進來后就稱菠菜，還有研磨，這是很累人的活，我覺得，因為想把它研磨的好些，又想

快點做實驗，于是就一向磨一向磨，直到做下一步時才覺得手腕有點累。我記得在加棉花時，由于不明白就應加多厚，提取色素時還很是膽戰(zhàn)心驚的。我覺得在這個實驗中，裝柱這一步是很重要的，于是我們很留意的裝，直到柱面很平。直到最后，分離色素后，看到我們的色帶分離的很好，很是高興。

半年實驗做下來，最“苦”的要數(shù)“菲林試劑熱滴定定糖法”這個實驗了。這個實驗要求我們正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點。由于全部滴定過程務必在沸騰狀態(tài)下快速進行，而且終點不容易把握，我們滴了好幾十次才確定了終點。當時我的同組者-韓文志已經(jīng)被火烤的不行了。

在這半年的十幾次的實驗的學習中，我受益頗多。毫無疑問，它培養(yǎng)了我的動手潛力。每個實驗我都會親自去做，不放下每次鍛煉的機會。經(jīng)過這半年，我的動手潛力有了明顯的提高；它讓我養(yǎng)成了課前預習的好習慣。一向以來就沒能養(yǎng)成課前預習的好習慣（雖然一向明白課前預習是很重要的），但經(jīng)過這半年，讓我不僅僅深深的懂得課前預習的重要，更領(lǐng)會了課前預習的好處。只有在課前進行了認真的預習，在做實驗時效率才會更高，才能收獲的更多、掌握的更多；它還提高了我處理數(shù)據(jù)的潛力；做實驗就會有數(shù)據(jù)，有數(shù)據(jù)就要處理，數(shù)據(jù)處理的是否得當將直接影響實驗成功與否。

半年實驗雖然收獲很多，但在這中間，我也發(fā)現(xiàn)了我存在的很多不足。我的動手潛力還不夠強，當有些實驗需要很強的動手潛力時我還不能從容應對；我的探索方式還有待改善，當應對一些復雜的實驗時我還不能很快很好的完成；我的數(shù)據(jù)處理潛力還得提高，當眼前擺著一大堆復雜數(shù)據(jù)時我處理的方式及潛力還不足，不能用最佳的處理手段使實驗誤差減小到最小程度……總之，生化實驗課讓我收獲頗豐，同時也讓我發(fā)現(xiàn)了自身的不足。在實驗課上學得的，我將發(fā)揮到其它中去，也將在今后的學習和工作中不斷提高、完善；在此間發(fā)現(xiàn)的不足，我將努力改善，透過學習、實踐等方式不斷提高，克服那些不應成為學習、獲得知識的障礙。在今后的學習、工作中有更大的收獲，在不斷地探索中、在無私的學習、奉獻中實現(xiàn)自己的人身價值！

第三篇：2010生化實驗室管理總結(jié)

2010---2011學年下學期華龍區(qū)三中生物化學實驗室儀器室管理工作總結(jié)

2010---2011學年下學期華龍區(qū)三中生物化學實驗室儀器室管理工作總結(jié)

一、實驗室的管理

實驗教學是生物、化學教學的一個重要組成部分，做好生物、化學實驗，讓學生鞏固即得知識，培養(yǎng)學生實驗技能，是中學生物、化學教學目標之一。

回想當初剛接手生物、化學實驗室儀器室管理工作時，以前上課時沒有感受到，看似簡單的準備試驗，看似清閑的儀器管理，其實還有許多意想不到的不易。首先，又臟又亂的實驗室隨著我的汗流浹背被清理出一桶又一桶的垃圾,落滿塵土的試驗臺面擦了一遍又一遍,終于露出干凈的本色,剛裝修完的地面、走廊地面落下一塊一塊的青石灰泥，也隨著我手中的小鏟一下又一下的揮舞和著滴滴汗水終于被徹底鏟除干凈。還有實驗室里幾百個藥品的試劑瓶讓我茫然無措，幾萬元成堆的新進儀器讓人無從下手，為了盡快熟悉他們，我整理、清洗了所有的櫥柜里的儀器、藥品，對照賬目，一一排查，很快對實驗室里的儀器藥品都做到了心中有數(shù)。對儀器的擺放重新科學規(guī)劃，把儀器與藥品在有限的空間里巧妙地用柜子隔開，儀器室藥品室看起來井井有條、干凈整潔，加上幾盆自己養(yǎng)殖的吊蘭、菊花，不僅凈化了室內(nèi)空氣，又平添了幾分生機。如今學校新的實驗樓已經(jīng)建成，兩室需再次搬遷，幾十萬元的儀器藥品仍需再次規(guī)劃擺放，熱火朝天的勞動帶來的大汗淋漓又再次驅(qū)走三九寒冬的寒意。新年開學，立即著手新實驗室、新儀器室的整理，每天一上班就在實驗室、儀器室里清點、搬運、擺放儀器，每天從上班忙到下班，一連三四個星期的時間，有同事問我:“你也沒事，搬到新樓上咋不下來了呢？”不是沒事，是沒閑事，凈忙事，抓緊忙完儀器整理擺放還要準備中招分組實驗，一項又一項的工作在那排著隊呢，哪里會有時間下樓來呢。

其次，實驗儀器的準備，尤其是分組實驗儀器的準備不僅繁雜，還需要謹慎細心。教學一線的老師們工作十分繁重，實驗通知單常常是顧不上寫。準備好的儀器藥品，上課前，老師們?nèi)∽邔嶒瀮x器時，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有遺漏的儀器藥品，為了配合好教學，我有時親自及時把儀器藥品送到任課教師手中，我還參照教學進度計劃，仔細認真鉆研教材，明確教材中的每一個實驗所用儀器、藥品，主動提醒課任老師，不僅可以提早查漏補缺，免去了任課教師填寫實驗通知單的程序，減輕了負擔。

針對每次生物分組實驗，利用我以前擔任過生物課的優(yōu)勢，儀器的準備、擺放、回收、清洗全由我一人動手，為任課教師節(jié)省了寶貴的時間和精力?；瘜W分組實驗也正在往這個方向努力。當然中招實驗兩科需要的儀器太多，一個人根本擺放不及，仍然需要科任老師協(xié)助。生物化學分組實驗儀器準備和清洗回收工作相當繁重，幾乎每一件用過的玻璃儀器、水槽、污物桶等都得認真清洗，這些工作都需要消耗很多氣力和時間，經(jīng)常被這些瑣碎的工作累得腰酸背痛是常有的事，但是干一行愛一行是咱老實人的本分。

實驗室在學校屬于后方保障部門，為教學一線的老師們服務是工作重點，我在準備好化學、生物實驗，管理各個實驗室、儀器室、藥品室的同時，物理老師需要時，我也會全心全意地為他們解決。實驗室工作繁雜瑣碎，做好一線老師的后勤，盡可能減輕他們的工作強度，分擔它們的后顧之憂，是實驗員的責任。

二、儀器室的管理

1．做好購置儀器、藥品先行申請、入庫驗收工作，同時填寫入庫清單，及時完善儀器明細賬。

2、做到購物有登記，帳目清楚，帳物卡三對應工作。教學儀器的借用嚴格按照教學儀器借用制度實行登記，如期歸還，追還等。

3、儀器做到常清點，常保養(yǎng)，常維修，保證抽查準確，隨取隨用。

對顯微鏡等教學精密儀器，做到了定期檢修、除塵、防銹、保養(yǎng)等工作。對標本類實施了定期檢查、防蛀等加以妥善管理。

4、對新的實驗儀器的性能、使用、操作方法做了充分了解，能熟煉地操作使用，更好地配合了任課老師的實驗教學工作。

5、定期對儀器室、實驗室進行衛(wèi)生大掃除，平時做好兩室保潔工作，及時做好迎檢工作。

6、按時完成了本期的實驗任務，在新的一年里，要更進一步加強學習，使自己的管理工作更上一個臺階。

這一學年尤其是上學期的迎檢工作比較多，在這里感謝領(lǐng)導和課任老師的幫助，使每次的迎檢工作都得到了上級部門的認可?；厥卓纯?，查漏補缺，也曾有一些紕漏，如藥品借用雖然都有詳細及時的往來記錄，但是沒有把庫存和損耗隨機賬合并成一個賬冊，這一項已經(jīng)改正，新的藥品庫存損耗隨機賬冊已經(jīng)設計投入使用。再有，平時補充購買實驗材料時，沒有做到詳細詢問記錄每一筆校資投入賬，在上級領(lǐng)導詢問時沒能脫口而出準確的儀器藥品資金投入數(shù)，這一點也已改正。因此以后在工作中還要不斷地汲取經(jīng)驗、查漏補缺、改進工作作風，更加謹慎細致，努力把兩室管理工作、教學服務工作開展得更好。建議學校建設多媒體實驗室一個，以改進我校實驗教學。

生化儀器管理員

2011年7月

第四篇：生化知識點一句話總結(jié)

◎ RNase P中的RNA稱M1RNA?！?rRNA前體加工過程需要甲基化，主要是在核糖2’羥基上，真核生物rRNA甲基化程度比原核生物rRNA甲基化程度高?！?真核生物rRNA前體的甲基化、假尿苷?；约扒懈钍怯蓅noRNA指導的。◎ 真核生物tRNA基因的數(shù)目比原核生物tRNA基因的數(shù)目大。◎ 組蛋白、呼腸孤病毒和不少植物病毒的mRNA并無poly A尾巴?！?多聚腺苷化可被類似物3’脫氧腺苷即冬蟲夏草素阻止?！?真核生物mRNA內(nèi)部甲基化堿基為N6-甲基腺嘌呤（m6A）。DNA上的甲基化發(fā)生在CpG島上的胞嘧啶的5'-C上形成5'甲基胞嘧啶。◎ 第一類內(nèi)含子包括：四膜蟲rRNA內(nèi)含子、幾種酵母線粒體的內(nèi)含子、噬菌體T4胸苷酸合成酶的內(nèi)含子等，它們有較大的同源性，可自我拼接。◎ 真核蛋白結(jié)構(gòu)基因內(nèi)含子有GT-AG規(guī)律?！?真核生物中U1、U2、U4、U5、U6 snRNA參與hnRNA的拼接，U3 snRNA參與rRNA的加工?！?DNA核酸內(nèi)切酶識別的是特異核苷酸序列，而RNA核酸內(nèi)切酶識別的是加工部位的空間結(jié)構(gòu)?！?RNA復制的最低速度為35bp每秒?！?噬菌體RNA的高級結(jié)構(gòu)參與了翻譯的調(diào)節(jié)控制。◎ 堿基類似物進入體內(nèi)要轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳暮塑账岵拍鼙憩F(xiàn)出抑制作用?！?蛋白質(zhì)合成的能量是GTP?！?蛋白質(zhì)合成的早期研究是用大腸桿菌的無細胞體系進行的?！?在少數(shù)大腸桿菌噬菌體R17、Qβ的RNA基因組中，部分基因的遺傳密碼是重疊的?！?I可與U、A、C配對?！?識別mRNA上多肽合成起始點的是16SrRNA?！?核糖體大小亞基與mRNA有不同的結(jié)合特性。◎ 多聚核糖體有三維空間結(jié)構(gòu)，6個以上的核糖體組成的多聚核糖體有穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)?！?氨酰tRNA合成酶催化的氨基酸活化由是在可溶性胞質(zhì)內(nèi)完成的，而不是在核糖體上完成的?！?氨酰tRNA合成酶催化的氨基酸活化首先是氨基酸的羧基端通過酸酐鍵與AMP上的5’-P相連，再轉(zhuǎn)移到tRNA3'端核糖上的2'或3'-OH上形成酯鍵，但只有3'形式才能夠參與下面的轉(zhuǎn)肽反應?！?活化每分子氨基酸需消耗2個高能磷酸鍵?！?當有某種tRNA突變分子出現(xiàn)時，也必定有可以識別正常氨基酸的tRNA存在?！?tRNAf與fMet結(jié)合參與肽鏈合成的起始。tRNAm攜帶正常Met摻入肽鏈?！?除了fMet-tRNAf之外，所有的氨酰tRNA必須與EF-Tu、GTP結(jié)合后才能進入70S核糖體A位點?！?嘌呤霉素的結(jié)構(gòu)與氨酰tRNA 3’末的AMP相似，與肽酰轉(zhuǎn)移酶而終止肽鏈合成。◎ 真核的RNA常只有一個AUG起始密碼子，每種mRNA只能轉(zhuǎn)譯出一種多肽?！?氯霉素、四環(huán)素、鏈霉素只抑制原核生物的轉(zhuǎn)譯。新霉素、卡那霉素與原核生物細胞30S亞基結(jié)合，引起密碼錯讀?！?亞胺環(huán)己酮只作用于80S核糖體，只抑制真核生物的轉(zhuǎn)譯。白喉毒素與EF2結(jié)合而抑制肽鏈移位?！?信號肽常見的氨基酸有：丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸。◎ 多肽在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的修飾有：N-信號肽的切除、形成雙硫鍵、線性多肽呈一定的空間結(jié)構(gòu)、初步的糖基化作用?！?線粒體定向肽富含正電荷氨基酸，如絲氨酸、蘇氨酸?！?tRNA突變可校正結(jié)構(gòu)基因上的某些突變，使基因產(chǎn)物仍有功能，這稱為基因校正突變?！?許多抗生素、毒素都是多肽合成抑制劑。◎ 脂類分子為生物小分子，它們可以聚集成超分子結(jié)構(gòu)?！?生物大分子具有高度的特異性，生物間的差別都由它們決定。多糖、肽類聚合物的結(jié)構(gòu)由合成它們的酶決定?！?細胞代謝的原則和方略：將各類物質(zhì)分別納入各自的共同代謝途徑，以少數(shù)種類的反應如氧化還原、基團轉(zhuǎn)移、水解合成、基團脫加、異構(gòu)反應等轉(zhuǎn)化為種類繁多的分子?！?關(guān)鍵的中間代謝物有：6-磷酸葡萄糖、丙酮酸、乙酰輔酶A。◎ 生酮氨基酸有：亮氨酸、異氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸。它們在代謝途徑中能生成乙酰乙酸?！?絲氨酸脫羧后形成膽胺，是腦磷脂的組成部分。它在接受甲硫氨酸給出的甲基后形成膽堿，是卵磷脂的組成部分?！?任何催化劑，包括酶在內(nèi)，僅能改變化學反應速度，不改變化學反應的平衡點?！?在一條代謝途徑中，某些關(guān)鍵部位的正反應和逆反應往往是由不同的酶所催化，一種酶催化正的反應，另一種種酶催化逆的反應。這類反應稱為相對立的單向反應?！?NADPH主要來自于磷酸戊糖途徑?！?酶活性的調(diào)節(jié)包括酶的變構(gòu)效應和共價修飾?！?草酰乙酸作為合成氨基酸和核苷酸的前體物質(zhì)，能被產(chǎn)物連續(xù)地反饋抑制?！?對PEP羧化酶的激活有：嘧啶核苷酸的前饋激活，乙酰輔酶A的反饋激活，前體二磷酸果糖的前饋激活。◎ 正常情況下，細胞的能荷約為0.9，變化范圍為0.85——0.95。◎ 連鎖代謝反應中一個酶被激活后，連續(xù)地發(fā)生其它酶的激活，導致原始信號的放大，這樣的連鎖代謝反應系統(tǒng)稱為級聯(lián)系統(tǒng)（casade system）?！?cAMP可為環(huán)磷酸二酯酶水解產(chǎn)生5’AMP?！?蛋白激酶A有兩種同工酶形式：Ⅰ型和Ⅱ型，它們至少有四個功能域：2個cAMP結(jié)合區(qū)域，1個二聚化區(qū)域，1個與催化亞基作用的區(qū)域?！?磷酸化酶激酶是一種鈣離子依賴的蛋白激酶，細胞內(nèi)底物為磷酸化酶b。糖原磷酸化酶同時受到共價修飾和變構(gòu)作用的調(diào)節(jié)?！?肌磷酸化酶激活的級聯(lián)反應中第一個酶的全稱為肌糖原磷酸化酶激酶的激酶?！?高等動物細胞中酶活性的調(diào)節(jié)為磷酸化/去磷酸化作用。細菌中酶活性的調(diào)節(jié)為腺苷?；?去腺苷?；饔??！?核膜直接參與DNA復制的起始過程。◎ 脂肪和糖原都是作為供能物質(zhì)被貯存的?！?葡萄糖進入肌肉和脂肪細胞的運輸是它們利用葡萄糖的限制過程?！?可逆地與膜結(jié)合，并以其膜結(jié)合型和可溶型的互變來影響酶的活性和調(diào)節(jié)酶的活性，這類酶稱雙關(guān)酶?！?雙關(guān)酶與膜結(jié)合狀態(tài)和溶解狀態(tài)的構(gòu)象不同，其理化性質(zhì)和動力學參數(shù)也不同?！?細胞內(nèi)ATP濃度的變化，可通過雙關(guān)酶的膜結(jié)合型/可溶型比值的改變來調(diào)節(jié)糖代謝的流量和去向?！?線粒體內(nèi)膜的跨膜電位（ΔΨ）為導肽的蛋白轉(zhuǎn)移提供能量?！?凡牽引蛋白跨膜運送至線粒體內(nèi)基質(zhì)的導肽，一般均含有導向基質(zhì)肽段和水解部位?！?泛素的甘氨酸與底物賴氨酸的遠端氨基形成異肽鍵。通常一個蛋白可以結(jié)合幾個泛素分子?！?電位門控通道有：Na+通道、K+通道、Ca2+通道，由一條肽鏈組成，跨膜部分形成α-螺旋，中央部分形成離子通道。配體門控通道有：乙酰膽堿受體通道、氨基酸受體、單胺類受體通道、Ca2+激活的K+通道?！?神經(jīng)組織對靶細胞膜透性和細胞代謝的調(diào)節(jié)可通過神經(jīng)遞質(zhì)、局部遞質(zhì)、循環(huán)激素三種方式進行。◎ 細胞質(zhì)膜受體分：依賴于神經(jīng)遞質(zhì)的離子通道、與信號轉(zhuǎn)導蛋白相偶聯(lián)的受體、生長因子受體?！?體是信使RNA與蛋白質(zhì)的復合物。它保護mRNA免受核酸酶的作用和控制其翻譯功能?！?翻譯控制RNA為20-30bp的寡聚核苷酸，可抑制翻譯作用，具寡聚尿苷酸，可與信使RNA形成雙鏈?！?酵母中的質(zhì)粒為2μDNA，它包裝在核小體中。◎ 病毒表達系統(tǒng)有：牛痘病毒（為雙鏈DNA病毒）、昆蟲多角體病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒。◎ Ti質(zhì)粒只用于雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物的轉(zhuǎn)基因。◎ DNA完全降解長用于建立次級基因文庫。◎ 常用載體有：細菌質(zhì)粒、酵母質(zhì)粒、噬菌體、病毒?！?表示修飾基團在堿基上的寫在堿基符號左方，表示修飾基團在核糖上的寫在堿基符號左方?！?Am表示：2’-O-甲基腺苷。ψ表示：假尿嘧啶核苷。DHU表示：二氫尿嘧啶核苷?！?雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的主要依據(jù)有：X-光衍射數(shù)據(jù)、Norweger研究、Chargaff規(guī)則、電位滴定行為?！?原核細胞中，DNA常與多胺（精胺、亞精胺）結(jié)合；正核細胞中DNA一般與組蛋白結(jié)合?！?提純的DNA為白色纖維狀固體，RNA為白色粉末，不溶于有機溶劑。◎ 瓊脂糖凝膠電泳一般分離較大的分子，聚丙烯酰胺凝膠電泳用于分離較小的分子?！?核酸的變性指核酸雙螺旋的氫鍵的斷裂，變成單鏈。核酸的降解是指多核苷酸鏈上的共價鍵（3’，5’-磷酸二酯鍵）的斷裂?！?變性后DNA的粘度降低，浮力密度升高，生物活性喪失。DNA的變性是爆發(fā)式的?！?DNA制品應保存在較高濃度的緩沖液或溶液中。常用1M/L的NaCl保存。◎ 苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸在近紫外區(qū)有光吸收是因為其R基團上含有苯環(huán)共軛雙鍵系統(tǒng)?！?含兩個以上肽鍵的化合物在堿性溶液中與銅離子生成紫紅色到藍紫色的絡合物，稱雙縮脲反應。◎ 蛋白一級結(jié)構(gòu)又稱共價結(jié)構(gòu)。包括肽鏈的數(shù)目、端基組成、氨基酸序列和二硫鍵位置?！?單體蛋白是由幾個獨立的肽段以二硫鍵連接而成的小分子蛋白。◎ 蛋白質(zhì)變性的表現(xiàn)有：⑴喪失生物活性；⑵溶解度降低，粘度加大，擴散系數(shù)變小；⑶化學性質(zhì)的變化；⑷對蛋白酶降解敏感性加大?！?蛋白質(zhì)變性主要是由蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而引起的?！?血漿脂蛋白按其密度分為：乳糜微粒、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白，由脂蛋白、磷脂、脂肪、膽固醇組成，是各種脂質(zhì)在體內(nèi)的運輸形式?！?活性中心是指酶分子中直接和底物結(jié)合，并和酶的催化作用直接有關(guān)的部位。有兩個功能部位：結(jié)合部位和催化部位?！?酶濃縮液加入等體積的甘油，于-20℃保存?！?維生素B2是核躺醇與6，7-二甲基異咯嗪和縮合物?！?生物素的結(jié)構(gòu)為帶有戊酸側(cè)鏈的噻吩與尿素結(jié)合的駢環(huán)?！?葉酸分子由蝶啶、對氨基苯甲酸、L-谷氨酸連接二而成。◎ 葉酸參與核酸的合成，是骨髓巨紅細胞、白細胞等細胞成熟和分裂所必需的物質(zhì)?！?維生素C是一種己糖酸內(nèi)酯?！?植物中，維生素C、谷胱甘肽、NADP+的氧化還原反應相偶聯(lián)，是呼吸系統(tǒng)的基礎?！?硫辛酸是含硫的脂肪酸，是丙酮酸脫氫酶、α-酮戊二酸脫氫酶的輔基，在轉(zhuǎn)?；衅鹱饔??！?維生素D是固醇類物質(zhì)?！?糖鏈突出于細胞膜表面是細胞間識別的基礎。◎ 胰凝乳蛋白酶專一地切斷苯丙氨酸和亮氨酸的羧端肽鍵?！?酶蛋白的熒光主要來自色氨酸與酪氨酸?！?血紅蛋白與氧結(jié)合的過程呈協(xié)同效應，是通過血紅蛋白的變構(gòu)現(xiàn)象來實現(xiàn)的。它的輔基是血紅素。由組織產(chǎn)生的二氧化碳擴散至紅細胞，從而影響血紅蛋白和氧氣的親和力，這稱為波爾效應?！?膠原蛋白是由3股肽鏈組成的超螺旋結(jié)構(gòu)的大分子蛋白，并含有稀有的羥脯氨酸和羥賴氨酸，它們是在翻譯后經(jīng)羥化加工而形成的?！?胰島素是胰島-β-細胞分泌的多肽激素，是由前胰島素原經(jīng)專一性蛋白水解，失去N端信號肽成為胰島素原。再經(jīng)肽酶激活失去C肽，最后形成具有生物活性的胰島素?！?橫紋肌的結(jié)構(gòu)蛋白主要是肌動蛋白和肌球蛋白。它們各自通過線性締合而成細肌絲和粗肌絲，肌肉的運動和肌原纖維的收縮就是這兩種絲相互滑動的結(jié)果。◎ 多聚L-谷氨酸的比旋隨PH改變是因為構(gòu)象改變，L-谷氨酸的比旋隨PH改變是因為電荷不同?！?蛋白的磷酸化位點有絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸?！?氨基酸定量分析的經(jīng)典方法是茚三酮。氨基酸序列測定中最普遍的方法是PITC法?！?內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的表面附著大量核糖體是肽鏈合成的場所，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的腔內(nèi)是新生肽鏈折疊、修飾的場所。高爾基體的主要功能是糖蛋白的肽鏈修飾和蛋白分類及細胞定位?！?分離蛋白混合物的方法主要是根據(jù)蛋白的下列性質(zhì)：分自大小、溶解度、電荷、吸附作用/對其它分子的親和力?！?蛋白的磷酸化是可逆的，蛋白磷酸化需要蛋白激酶，蛋白去磷酸化需要蛋白磷酸酯酶?！?骨骼肌肉的收縮主要由兩種收縮蛋白肌動蛋白和肌球蛋白以及兩種跳進蛋白肌鈣蛋白和凝血酶原所完成?！?真核細胞中已合成的蛋白質(zhì)通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜運輸時有信號肽、信號識別顆粒、停泊蛋白、信號肽酶等參與識別和運輸作用?！?免疫球蛋白G在用木瓜蛋白酶處理時，可產(chǎn)生Fab片段，在用胃蛋白酶處理時，可產(chǎn)生Fab’2片段。◎ 氨基酸脫羧酶需要磷酸吡哆醛作為輔酶，絲氨酸轉(zhuǎn)羥甲基酶需要四氫葉酸作為輔酶?！?蛋白激酶對糖代謝的調(diào)節(jié)在于調(diào)節(jié)糖原磷酸化酶和糖原合成酶?！?酶可以分位六大類：氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂合酶、異構(gòu)酶、連接酶合成酶 ◎ 用酶偶聯(lián)法測定果糖-6-磷酸激酶的活性可以用醛縮酶、丙酮酸異構(gòu)酶和甘油磷酸異構(gòu)酶和NADH測定340nm光吸收的變化；也可以用磷酸烯醇式丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶和NADH測定340nm光吸收的變化。◎ 果糖磷酸激酶催化F-6-P和ATP生成F-1,6-P。其逆反應由果糖-1,6-二磷酸酯酶催化。逆向反應和正向反應不是同一個酶催化，構(gòu)成了一個循環(huán)稱底物循環(huán)?！?在動物組織中蛋白激酶就其底物磷酸化的殘基種類，可分為三類：Ser/Thr、Tyr、Ser/Thr/Tyr蛋白激酶，而在微生物中還發(fā)現(xiàn)His殘基的蛋白激酶。◎ 一個有效的自殺性抑制劑應具備：⑴無酶不反應；⑵為靶酶專一激活；⑶與靶酶反應比解離更迅速。◎ 酶與酶或酶與蛋白相互作用是廣泛存在的，如酶與抗體，酶蛋白與蛋白激酶，酶與蛋白類激活劑或抑制劑，除此之外有蛋白水解酶對蛋白質(zhì)的降解，凝血過程中各個因子形成的級聯(lián)反應，補體系統(tǒng)中各組分，的相互作用，信號轉(zhuǎn)導過程中諸多蛋白質(zhì)質(zhì)間的相互作用，肌肉中各組分間的相互作用?！?生物體內(nèi)有一些核苷酸衍生物可作為輔酶而作用，如NAD+、NADP+、FAD、CoA?！?一些生長因子有酶的活性，如表皮生長因子（GEF）受體有蛋白酪氨酸激酶活性，轉(zhuǎn)化生長因子β（TGFβ）受體有蛋白有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性。◎ 核酸分子中含有嘌呤堿、嘧啶堿，所以對波長260nm的光有強烈的吸收?！?轉(zhuǎn)移核糖核酸一般是由74個到85個核苷酸所組成?！?真核生物染色體DNA的主要結(jié)構(gòu)特點是內(nèi)含子和重復序列?！?細菌氨基酸饑餓時，rRNA的合成受到ppGpp、ppGppp的調(diào)節(jié)，其合成是由空載tRNA引起的?！?核苷酸生物合成時，從IMP（肌苷酸）轉(zhuǎn)變?yōu)锳MP經(jīng)過腺苷酰琥珀酸，轉(zhuǎn)變?yōu)镚MP經(jīng)過黃嘌呤核苷酸（XMP）?！?作為克隆載體的質(zhì)粒須具備的條件有：復制起點、篩選標記、在非功能區(qū)的單一酶切位點。◎ 核苷三磷酸在代謝中起重要作用。ATP是能量和磷酸基團轉(zhuǎn)移的重要物質(zhì)，UTP參與單糖轉(zhuǎn)變和多糖合成，CTP卵磷脂合成，GTP供給肽鏈合成時所需的能量?！?A5’pppp5’A經(jīng)蛇毒磷酸二酯酶部分酶解可以產(chǎn)生ATP和AMP。◎ 造成一個單順反子產(chǎn)生多種蛋白質(zhì)的原因有：基因重排、選擇性拼接和RNA編輯。◎ 真核生物tRNA的加工有剪切、修飾、剪接、接CCA、編輯?！?snRNA主要參與mRNA的加工成熟，snoRNA主要參與rRNA的加工成熟?！?已知核糖體失活蛋白有兩類，它們分別具有位點專一性的N-糖苷酶和磷酸二酯酶活性 ◎ 纖維素和直鏈淀粉都是葡萄糖的多聚物，在纖維素中葡萄糖的構(gòu)型是β-吡喃，連接方式為1→4連接；在直鏈淀粉中葡萄糖的構(gòu)型是α-吡喃，連接方式為1→4連接。◎ 辛基葡萄糖可以用來增溶膜蛋白?！?直鏈淀粉是一種多糖，它的基本單位是α-D-葡萄糖，它們以1→4糖苷鍵連接；纖維素也是一種多糖，它的基本單位是β-D-葡萄糖，它們以1→4糖苷鍵連接?！?在脂肪酸的分解代謝過程中，長鏈脂酰輔酶A以脂酰肉堿的形式運到線粒體內(nèi)，經(jīng)過β-氧化作用，生成乙酰輔酶A，參加三羧酸循環(huán)?！?用于膜蛋白研究的去垢劑應具備的性質(zhì)是親水親脂平衡值大于15，臨界團粒濃度高?！?研究放射性同位素標記的配基與膜上受體結(jié)合常用的方法有：平衡透析、超離心、凝膠過濾、超濾?！?腦下垂體分泌的屬于糖蛋白激素有促卵泡激素、促甲狀腺激素、促黃體生成激素?！?維生素A是萜類化合物；維生素C是糖類化合物；維生素D是固醇類化合物?！?視紫紅蛋白的輔基是11-順視黃醛?！?生物體內(nèi)關(guān)鍵的三個中間代謝物是：6-磷酸葡萄糖、丙酮酸、乙酰CoA ◎ 在糖異聲作用中由丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸，在線粒體內(nèi)丙酮酸生成草酰乙酸是丙酮酸羧化酶催化的，同時消耗1ATP；然后在細胞質(zhì)內(nèi)經(jīng)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶催化，生成磷酸烯醇式丙酮酸，同時消耗1GTP?！?生物工程主要包括：發(fā)酵工程、基因工程、細胞工程、蛋白質(zhì)工程、糖工程。◎ NO是最小的信號分子，其主要功能有：⑴改變cGMP水平參與神經(jīng)遞質(zhì)信號轉(zhuǎn)導；⑵抑制血小板凝集，⑶激活DNA修復酶；⑷高濃度時促進前列腺素合成；⑸引起細胞衰老和死亡。

第五篇：生化試驗思考題總結(jié)

Shaonanlee 黑暗舞者DID 生化實驗思考題總結(jié)

1.蛋白質(zhì)定量測量的方法有哪些？簡要說明其原理。

答：a.紫外吸收，在280nm處有最大吸收峰。

b.定氮法，利用蛋白質(zhì)中氮元素含量為16%固定比例來測定。

c.分光光度計法，利用OD值和蛋白質(zhì)濃度成正比的原理。顯色劑為考藍。d.雙縮脲法。也是利用顯色反應。e.Folin酚法。

2.如果凝膠過濾層析分離的蛋白質(zhì)樣品中含有多種蛋白質(zhì)，在各蛋白質(zhì)分子量已知的情況下，如何判斷哪一種蛋白質(zhì)時所想要的？

答：現(xiàn)在假設有三種蛋白質(zhì)a b c，分子質(zhì)量a>b>c。

那么，a最先流出，在體積V1處有一個洗脫體積，對應的a的溶液濃度在 V1處也最高，就會有一個OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值，對應不同的洗脫體積，就可以篩選出想要的蛋白質(zhì)。如果想要b，那么在第 二個吸收峰的時候，找到相應的洗脫體積，然后在其附近的所接到的溶液 進行選取。就會得到想要的蛋白質(zhì)。

3.如果鹽析后的樣品不經(jīng)脫鹽處理便上樣電泳，對其結(jié)果有何影響？

答：如果沒有去除清蛋白里面的鹽分，則會使電泳速度下降。原因在于溶液離子

強度太大，蛋白質(zhì)表面的電荷減少，所以導致電泳速度下降，甚至無法泳動。

4.對電泳所得的結(jié)果如何進行定量分析？

答：將電泳完畢的樣品（凝膠），按條帶寬度的分布剪下，分別把每個小塊樣品

用NaOH溶液漂洗，再將漂洗過的溶液進行OD值的測量。

Shaonanlee 黑暗舞者DID

5.使SDS-PAGE具有高分辨率的三個因素是什么？

答：濃縮效應。電荷效應。分子篩效應。

6.實驗所得的各點數(shù)據(jù)中，哪些易出現(xiàn)較大的誤差？

答：有兩個點。第一個，在三十秒的點，反應速度太快，時間如果掌握不準，容易

出現(xiàn)誤差。另一個，在3min的點，反應速度很慢，斜率小，則倒數(shù)大，所以 時間掌握不好，也容易出現(xiàn)大誤差。

7.假如把堿性磷酸酶對底物的親和力提高十倍，實驗方案該如何修改？

答：把底物和酶的濃度都降低。

8.請舉出三種提取質(zhì)粒的方法，并簡要說明其中一種方法的原理。

答：堿裂解（要求原理，書上有）；一步法（見書上46，47頁有關(guān)TELT試劑的內(nèi)容）

；SDS法；煮沸法。

9.分析質(zhì)粒DNA切割不完全的原因。

答：a.質(zhì)粒因素：堿裂解時間太長，無法復性；乙醇揮發(fā)不完全，影響酶的活性。

b.酶的因素：酶的濃度太高或者太低。或者酶的活性降低。

c.酶切體系：溫度不是最適溫度；時間不夠長；緩沖溶液的問題。

10.分析酶切后沒有觀察到目的DNA的原因。

答：a.重組失敗。

b.酶切失敗。

c.目的基因量太少。

11.從哪些方面可預防PCR出現(xiàn)假陽性結(jié)果？

答：假陽性就是出現(xiàn)了不該出現(xiàn)的條帶。

a.防止污染，例如模板的污染。b.引物設計合適，保證特異性。c.控制反應條件。

d.必要時，要減少循環(huán)次數(shù)。