第一篇：微生物學(xué)讀書報(bào)告

讀書報(bào)告

——環(huán)境條件對(duì)微生物生長的影響

微生物的生長和繁殖受環(huán)境影響非常之大。微生物的數(shù)量極其巨大驚人，僅僅是人體身上就存在著2千克左右的微生物；其生長范圍極其廣泛，有高等微生物在的地方就有微生物在。而且微生物與人類的關(guān)系十分密切，像一把雙刃劍，給人類帶來利益的同時(shí)也帶了殘酷的破壞。那么，為了讓微生物這種資源得到更好的利用，了解環(huán)境與微生物的存活關(guān)系將有助于人們控制微生物的活性，殺死有害微生物，更好利用有益微生物。

影響微生物生長環(huán)境因素主要有物理、化學(xué)等方面。

高溫、常溫、低溫對(duì)微生物生長都有著很大的影響。溫度影響著微生物體內(nèi)酶的活性，影響著微生物的代謝……依照溫度將微生物分類有嗜溫，嗜熱，嗜冷等種類，嗜熱微生物就對(duì)發(fā)酵工業(yè)有著很重要的用途。高溫有利于非氣體物質(zhì)在發(fā)酵液中的擴(kuò)散和溶解；高溫可以還可以降低冷卻發(fā)酵產(chǎn)生熱量所需要的成本；嗜熱微生物生產(chǎn)的酶制劑的反應(yīng)溫度和耐熱性都比嗜溫微生物高尤其是DNA聚合酶有較強(qiáng)的熱穩(wěn)性。低溫可以降低酶促反應(yīng)的速度因此限制微生物的生長，于是我們可以利用低溫度對(duì)微生物代謝活動(dòng)的影響，在生產(chǎn)實(shí)踐中用低溫來保藏微生物菌種和食品等。寒冷溫度適宜蔬菜制品的儲(chǔ)藏；冷藏溫度用于果蔬、魚肉、禽蛋、乳制品的保存；冷凍溫度則可以使食品冷凍成為固態(tài)加以保存，同時(shí)也用作菌種保藏。就像家里的電冰箱一樣，根據(jù)不同的需要將不同的食品放在不同溫度下進(jìn)行儲(chǔ)藏。高溫可破壞細(xì)胞的部分組成成分，可引起蛋白質(zhì)和核酸的不可逆變性，還可使質(zhì)膜熱溶解從而內(nèi)含物泄漏死亡。可見，高溫對(duì)微生物有著致命的殺傷力，高溫滅菌成了一種普遍的滅菌方法，其主要有干熱滅菌法，濕熱滅菌法，這些對(duì)物品的保存起著相當(dāng)重要的作用。

水分是微生物細(xì)胞的主要成分，也是微生物的正常生長的條件。大多數(shù)微生物在高滲環(huán)境會(huì)使細(xì)胞原生質(zhì)脫水，發(fā)生質(zhì)壁分離因而抑制微生物的生長，而且一些微生物在完全干燥的情況下是不能生長的。在干燥和高滲壓的條件下會(huì)更好的對(duì)易被微生物感染的物品進(jìn)行保存。

其次，環(huán)境的酸堿度，氧氣和氧化還原電位和輻射對(duì)微生物的生命活動(dòng)有很大的影響。pH值會(huì)改變微生物蛋白質(zhì)的性質(zhì)，會(huì)影響菌體細(xì)胞膜的帶電荷性質(zhì)，改變環(huán)境營養(yǎng)物的可給性和有害物的毒性。而氧氣則是對(duì)微生物的生長有著直接的影響，大多數(shù)微生物利用氧氣參與細(xì)胞的代謝，在水中氧氣的可溶性是十分有限的，因此，在靜止的液體中氧氣的可利用性可能會(huì)成為影響微生物生長的限制性因子，不同的微生物對(duì)氧的需求與否是不同的，氧氣對(duì)厭氧微生物有這毒害作用，對(duì)好氧微生物來說就是必需的，因此清除環(huán)境中的氧分子可以抑制好養(yǎng)微生物的生長。可利用這種方式對(duì)食物進(jìn)行真空包裝，能夠有效的消除好癢微生物引起的食物腐敗過程，延長貨架期。微生物對(duì)輻射是比較敏感的，控制輻射方式可以有效的控制微生物的生長。例如，紫外光可以做微生物育種的誘變劑；利用一些輻射的強(qiáng)穿透性可用于食物的滅菌，也可延長食物的貨架期。

利用化學(xué)因子對(duì)微生物的影響，人們制造出了化學(xué)殺菌劑和抑制劑，據(jù)用途和模式主要有消毒劑、防腐劑和化學(xué)治療劑。其中，較為突出的醛類化學(xué)藥劑因其殺菌效力高常常用于醫(yī)用器械和用具；表面活性劑在臨床上用于皮膚和黏膜的消毒；分離和培養(yǎng)某些菌體時(shí)在培養(yǎng)基中添加染色劑可以提高分離效果。還有很多的藥劑都可殺死很多細(xì)菌。而防腐劑的利用更加充分，尤其在一些食品中。還有一類化學(xué)治療劑，廣泛的用于醫(yī)療事業(yè)，利用化學(xué)藥劑對(duì)微生物的選擇性毒性，很好得控制了由微生物引起的疾病，對(duì)人類做出了巨大貢獻(xiàn)。

但是，在利用這些藥劑的同是也要注意一些問題。例如，防腐劑在食品方面的利用對(duì)食品品質(zhì)和對(duì)人們健康的影響。最近，食品的安全衛(wèi)生問題引起了人們的廣泛關(guān)注，雖然防腐劑可以延長食品的保存期，但是要注意方式與量的使用。并且，我國對(duì)抗生素的依賴已經(jīng)達(dá)到了非常嚴(yán)重的地步，抗生素的濫用已經(jīng)使微生物對(duì)很多抗生素產(chǎn)生了抗性，迫使人們用更大劑量的抗生素解決微生物造成的醫(yī)療問題，如此反復(fù)形成了惡性循環(huán)。由此，希望這種情況的到及時(shí)的制止。

利用微生物的一些性質(zhì)，可以處理環(huán)境污染問題，解決一些醫(yī)療事故，制作加工食品，制造能源物質(zhì)等，但是在利用的同時(shí)要注意方式和量，凡事不可過度，水能載舟亦能覆舟。凡事有利必有弊，利用對(duì)微生物生長環(huán)境的控制來控制微生物必定會(huì)有一些弊端，若是控制不當(dāng)，導(dǎo)致微生物突變，而人類無法控制，那么，也許對(duì)人類對(duì)世界都會(huì)是災(zāi)難！所以，適當(dāng)利用這些資源，使其為人類所用的同時(shí)，盡量將其“副作用”降到最低！

第二篇：微生物學(xué)讀書匯報(bào)

微生物與植物抗逆性

自然環(huán)境的各種因素是經(jīng)常變化的，旱澇冷凍鹽堿蟲害病害以及大氣、水質(zhì)、土壤污染等不良環(huán)境條件即為逆境或脅迫。植物在長期的系統(tǒng)發(fā)育中逐漸形成了對(duì)逆境的適應(yīng)和抵抗能力，這種適應(yīng)和抵抗能力稱為抗逆性。任何植物的抗逆性都不是驟然形成的。遇到逆境使，植物會(huì)做出反應(yīng)，這個(gè)逐步適應(yīng)的變化過程稱為鍛煉。

在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，對(duì)作物產(chǎn)量影響最大的是病蟲害和干旱等。日愈嚴(yán)重的環(huán)境污染問題、食品安全問題對(duì)要求對(duì)現(xiàn)今農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛運(yùn)用的化學(xué)農(nóng)藥提出嚴(yán)峻挑戰(zhàn)；在中國這樣一個(gè)干旱缺水狀況嚴(yán)重的農(nóng)業(yè)大國，增強(qiáng)植物抗旱性是從事自然科學(xué)研究者研究的熱點(diǎn)。微生物學(xué)的快速發(fā)張，微生物在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、工業(yè)生產(chǎn)加工等各領(lǐng)域的廣泛運(yùn)用，為植物抗逆性研究提供了新的思路，新的可能。

微生物運(yùn)用于植物病蟲害的防治是現(xiàn)今“綠色農(nóng)業(yè)”發(fā)展的新的出路。除了現(xiàn)在在廣泛研究的運(yùn)用“生物農(nóng)藥”等外部施用的生物制劑（大部分是微生物次生代謝產(chǎn)物或直接是微生物本身）防治植物病蟲害，許多研究發(fā)現(xiàn)，與植物共生或是營寄生生活的真菌、細(xì)菌等都有增強(qiáng)植物抗病蟲害能力的作用。許多感染植物的內(nèi)生真菌能產(chǎn)生多種生物堿和真菌毒素如黑麥草堿、麥角堿、波胺和覃青毒素等，這些次生代謝物因?qū)κ巢輨?dòng)物和昆蟲等具有毒性，阻抑昆蟲和食草動(dòng)物的采食、抵抗病蟲害等，從而能提高植物對(duì)多種食草昆蟲的抗性。其中較為人熟知和運(yùn)用較廣的就是蘇云金桿菌。有學(xué)者從黃瓜、小麥、白菜以及番茄四種植物莖中發(fā)現(xiàn)兩株植物內(nèi)生放線菌Lj20和St24，用其粗提物處理番茄植株后，測定了根、莖、葉中過氧化氫酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)、過氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，發(fā)現(xiàn) CAT、PPO和POD酶的活性都有所增強(qiáng)的。結(jié)果表明，Lj20和St24的代謝物不僅對(duì)病原菌具有直接抑制作用，而且可通過提高植物體內(nèi)防御性酶活性來提高植物的抗病性。

內(nèi)生真菌對(duì)植物抗逆性的增益作用既表現(xiàn)在生物脅迫(如阻抑昆蟲和食草動(dòng)物的采食、抵抗 病蟲害等)，也表現(xiàn)在非生物脅迫(如抗高溫、抗干旱等)方面。與植物共生或是營寄生的微生物除了對(duì)病原菌、害蟲有直接的抑制甚至殺滅的作用之外，還可以誘導(dǎo)植物產(chǎn)生許多的抗性因子。植物產(chǎn)生的植物效應(yīng)因子如絲氨酸蛋白酶、幾丁質(zhì)脫乙?；浮?2kD木聚糖酶等。有學(xué)者研究木霉發(fā)現(xiàn)，木霉能產(chǎn)生的揮發(fā)性和非揮發(fā)性的抗菌次生代謝產(chǎn)物多達(dá)幾百種，能對(duì)細(xì)菌、真菌類引起的植物病有有效的防治作用，還可以誘導(dǎo)植物免疫形同基因表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)病害的防治。木霉菌誘導(dǎo)植物抗性可通過以下三種途徑實(shí)現(xiàn)：增強(qiáng)MAMPs分子（植物效應(yīng)因子）激發(fā)的免疫反應(yīng)；減少效應(yīng)因子誘發(fā)的感病性；提高效應(yīng)因子激發(fā)的免疫反應(yīng)。Sml是從綠木霉分泌物中分離出的一種富含半胱氨酸的疏水蛋白，不僅對(duì)植物和微生物無毒，還能誘導(dǎo)睡到、棉花和玉米活性酶的釋放以及多種防御反應(yīng)基因的表達(dá)，如MAPK基因可受木霉菌特異性誘導(dǎo)，而MAPK表達(dá)的MAPK蛋白是絡(luò)氨酸受體激酶信號(hào)通路中重要的效應(yīng)物質(zhì)，可調(diào)控多個(gè)基因的表達(dá)。研究表明，植物受到干旱脅迫時(shí)，會(huì)產(chǎn)生特定的滲透物質(zhì)，如脯氨酸、甜菜堿等，一些寄生在植物中的菌類可以分泌特定物質(zhì)誘導(dǎo)植物相應(yīng)基因表達(dá)，從而提高植物的抗逆性。

自然界存在著大量的對(duì)人類有益的充滿潛力的微生物。然而，我們除了不斷的發(fā)掘其用途同時(shí)，也應(yīng)該注意對(duì)生態(tài)的維持。微生物大都處在生態(tài)系統(tǒng)的基礎(chǔ)地位，在物質(zhì)循環(huán)中的扮演至關(guān)重要的角色。對(duì)微生物的利用不是不知節(jié)制地發(fā)掘最大的益處，而是在確保生態(tài)平衡的基礎(chǔ)上尋求人類生存的有利因素。

第三篇：華中科技大學(xué) 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 報(bào)告格式

華中科技大學(xué) 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 報(bào)告

班級(jí)：日期：年月日 指導(dǎo)教師：實(shí)驗(yàn)組別：姓名：組員姓名：

實(shí)驗(yàn)名稱：

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康腶aaaaaa

二、實(shí)驗(yàn)原理

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三、實(shí)驗(yàn)材料

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四、實(shí)驗(yàn)方法

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五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

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六、思考題

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七、實(shí)驗(yàn)感悟

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第四篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

細(xì)菌群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。測定細(xì)胞物質(zhì)的方法有細(xì)胞干重的測定，細(xì)胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測定，代謝產(chǎn)物的測定等?？傊瑴y定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。本實(shí)驗(yàn)主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。

一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

（一）目的要求

1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。

2．掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。

（二）基本原理

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。目前國內(nèi)外常用的計(jì)菌器有：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、Peteroff-Hauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等，它們都可用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等懸液的計(jì)數(shù)，基本原理相同。后兩種計(jì)菌器由于蓋上蓋玻片后，總?cè)莘e為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。除了用這些計(jì)菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細(xì)菌學(xué)檢查。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡單。但此法的缺點(diǎn)是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時(shí)間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。本實(shí)驗(yàn)以血球計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行顯微鏡直接計(jì)數(shù)。另外兩種計(jì)菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。

用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各列有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖l5-1。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。每一個(gè)大方格邊長為lmm，則每一個(gè)大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.lmm3(萬分之一毫升)。

圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造

（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造

（二）A.正面圖；B.縱切面圖； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板；2.蓋玻片；3.計(jì)數(shù)室

計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。

設(shè)五個(gè)中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則

1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）

同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×16×104×B=32000A·B（個(gè)）

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母

2．儀器或其他用具 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細(xì)滴管。

（四）操作步驟

l．菌懸液制備

以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙骸?/p>

2．鏡檢計(jì)數(shù)室

在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3．加樣品

將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。

取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。

4．顯微鏡計(jì)數(shù)

加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。

調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對(duì)于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。

在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格(可選4個(gè)角和中央的一個(gè)中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來計(jì)算樣品的含菌量。

5．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

使用完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。

（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

l．結(jié)果

將結(jié)果記錄于下表中。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml

12345

第一室

第二室

2．思考題

(1)根據(jù)你的體會(huì)，說明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?

(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測方法。

二平板菌落計(jì)數(shù)法

（一）目的要求

學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。

（二）、基本原理

平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長成的一個(gè)單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。

平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。

（三）器材

1．菌種 大腸桿菌菌懸液。

2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。

3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，盛有4.5ml無菌水的試管，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。

（四）操作步驟

l．編號(hào)

取無菌平皿9套，分別用記號(hào)筆標(biāo)明10-

4、10-

5、10-6。(稀釋度)各3套。另取6支盛有4.5mL無菌水的試管，依次標(biāo)是10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-6。

2．稀釋

用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，精確地放0.5ml至10-1的試管中，此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。

OptionsEmail Replies將10-1試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時(shí)不要太猛太快，吸時(shí)吸管伸人管底，吹時(shí)離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋?！溆嘁来晤愅疲麄€(gè)過程如圖15-3所示。

放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。

3，取樣

用三支1mL無菌吸管分別吸取10-

4、10-5和10-6。的稀釋菌懸液各lmL，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無菌平皿中，每個(gè)平皿放0.2mL。

不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀釋菌液放入平皿臼，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復(fù)平板間的操作誤差。

圖15—3平板菌落計(jì)數(shù)操作步驟

4．倒平板．

盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。由于細(xì)菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細(xì)菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計(jì)數(shù)。

待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5．計(jì)數(shù)

培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5

一般選擇每個(gè)平板上長有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。實(shí)際工作中同一稀釋度重復(fù)對(duì)照平板不能少于三個(gè)，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，減少誤差。由10-

4、10-

5、10-6三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。

平板菌落計(jì)數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。

平板菌落計(jì)數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號(hào)，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺(tái)上適當(dāng)吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對(duì)號(hào)接種于不同稀釋度編號(hào)的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。

涂布平板用的菌懸液量一般以0.1ml較為適宜，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養(yǎng)時(shí)菌液仍會(huì)在平板表面流動(dòng)，不易形成單菌落。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．結(jié)果

2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表

稀釋度10-410-510-6

Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均

每毫升中的cfu

2．思考題

(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?

(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?

(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。

(4)當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問題出在哪里?

(5)用倒平板法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時(shí)間(48h)后觀察結(jié)果?

三 光電比濁計(jì)數(shù)法

一、目的要求

1．了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理。

2．學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。

二、基本原理

當(dāng)光線通過微生物菌懸液時(shí)，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖15-4)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，以樣品液所測得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的菌數(shù)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，菌體計(jì)數(shù)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測定等方法。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

光電比濁計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動(dòng)控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。因此，對(duì)于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計(jì)數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來確定。另外，對(duì)于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進(jìn)行測定。

圖15—4 比濁法測定細(xì)胞濃度的原理

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液

2．儀器或其他用具 721型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。

（四）操作步驟

1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

（1）編號(hào) 取無菌試管7支，分別用記號(hào)筆將試管編號(hào)為1、2、3、4、5、6、7。

（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106、12×106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。再分別裝入已編好號(hào)的1至7號(hào)無菌試管中。

（3）測OD值 將1至7號(hào)不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。比色測定時(shí)，用無菌生理鹽水作空白對(duì)照，并將OD值填入下表

管號(hào)12345678

細(xì)胞數(shù)106/ml

光密度（OD）

每管菌懸液在測定OD值時(shí)均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定

(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2．樣品測定

將待測樣品用無菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時(shí)用無菌生理鹽水作空白對(duì)照。

各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。

3．根據(jù)所測得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。

（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

l．結(jié)果

每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)×稀釋倍數(shù)

2．思考題

(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?

(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)用價(jià)值?

(3)本實(shí)驗(yàn)為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實(shí)驗(yàn)中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?

四 大腸桿菌生長曲線的測定

(一)目的要求

1．通過細(xì)菌數(shù)量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長線。

2．復(fù)習(xí)光電比濁法測量細(xì)菌數(shù)量的方法。

(二)基本原理

大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時(shí)期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細(xì)菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對(duì)人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長具有重要意義。

用于測定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實(shí)驗(yàn)作了介紹。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖15-5)測定“klett units”值的光度計(jì)。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個(gè)帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時(shí)間(橫坐標(biāo))取樣測定，以測得的klett units為縱坐標(biāo)，便可很方便地繪制出細(xì)菌的生長曲線。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/0.002換算出所測菌懸液的OD值。

圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶

(三)器材

1．菌種 大腸桿菌

2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

3．儀器或其他用具 722型分光光度計(jì)，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。

圖15—6 直接用試管測OD值

(四)操作步驟

1．標(biāo)記

取11支無菌大試管，用記號(hào)筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。

2．接種

分別用5ml無菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過夜培養(yǎng)液(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。

3．培養(yǎng)

將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。

4．比濁測定

用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照，選用600nm波長進(jìn)行光電比濁測定。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對(duì)細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定，使其光密度值在0.1~0.65之內(nèi)(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。

本操作步驟也可用簡便的方法代替：

1．用1ml無菌吸管取0.25ml大腸桿菌過夜培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計(jì)的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個(gè)大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點(diǎn)，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。

2．分別在培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準(zhǔn)確度愈高。

(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．結(jié)果

(1)將測定的OD600值填入下表：

培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值OD600

(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。

2．思考題

(1)如果用活菌計(jì)數(shù)法制作生長曲線，你認(rèn)為會(huì)有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點(diǎn)？

(2)細(xì)菌生長繁殖所經(jīng)歷的四個(gè)時(shí)期中，哪個(gè)時(shí)期其代時(shí)最短？若細(xì)胞密度為103/ml，培養(yǎng)4.5h后，其密度高達(dá)2×108/ml，計(jì)計(jì)算出其代時(shí)。

(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期？根據(jù)細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？

評(píng)論這張

第五篇：環(huán)境微生物學(xué)

一．緒論

1）微生物：微生物是肉眼看不見的，必須在電子顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下才能看見的所有微小生物的總稱。

2）微生物的特點(diǎn)：1個(gè)體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細(xì)胞核，原核微生物只有擬核。第一章

4）病毒：病毒是沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，專性寄生在活的敏感宿主體內(nèi)的超微小生物。

5）病毒的特點(diǎn)：只能在電子顯微鏡下看見。沒有核糖體，沒有酶系統(tǒng)，不具備代謝能力，必須專性寄生在活的敏感宿主細(xì)胞內(nèi)。

6）病毒的分類：按專性宿主分類：動(dòng)物病毒，植物病毒，細(xì)菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。按核算分類：DNA病毒，RNA病毒。7）類病毒：類病毒是比病毒更加小的致病感染因子。

8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質(zhì)感染顆粒）。9）病毒的繁殖過程：1吸附2侵入3復(fù)制與聚集4宿主細(xì)胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，隨即引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。溫和噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復(fù)制，宿主細(xì)胞不裂解而繼續(xù)生長，不引起宿主細(xì)胞裂解。含有溫和噬菌體宿主細(xì)胞被稱作溶原細(xì)胞。溶原細(xì)胞內(nèi)的溫和噬菌體核酸，稱為原噬菌體。

11）噬菌體：噬菌體是感染細(xì)菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。第二章

12）細(xì)菌的形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。分別稱為球菌，桿菌，螺旋菌和絲狀菌。13）細(xì)菌：一大類細(xì)胞核無核膜包裹，只存在稱作擬核區(qū)的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物。14）細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：細(xì)菌為單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所有的細(xì)菌均有如下結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。部分細(xì)菌有特殊結(jié)構(gòu)：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。

15）細(xì)胞壁：細(xì)胞壁是包圍在細(xì)菌體表最外層的，堅(jiān)韌而有彈性的薄膜。16）原生質(zhì)體：原生質(zhì)體包括細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。

17）細(xì)胞質(zhì)膜：細(xì)胞質(zhì)膜是緊貼在細(xì)胞壁的內(nèi)側(cè)而包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的膜。（半滲透膜），含有蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和多糖。脂質(zhì)是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。18）細(xì)胞質(zhì)膜的生理功能：1,維持滲透壓的梯度和溶質(zhì)的轉(zhuǎn)移2，膜上含有合成細(xì)胞壁和形成橫膈膜組分的膜，故在膜的外表面合成細(xì)胞壁3，膜內(nèi)的中間體含有細(xì)胞色素，參與呼吸作用。4，細(xì)胞質(zhì)膜上含有酶，進(jìn)行物質(zhì)代謝和能量代謝5，細(xì)胞質(zhì)膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長出，為鞭毛提供附著點(diǎn)。19）核糖體;合成蛋白質(zhì)

20）擬核：細(xì)胞的核因沒有核膜和核仁，故稱為原始核或擬核。21）鞭毛：有細(xì)胞質(zhì)膜上的鞭毛基粒長出穿過細(xì)胞壁伸向體外的一條纖細(xì)的波浪狀的絲狀物叫鞭毛。

22）細(xì)菌的染色方法簡單染色法和復(fù)合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。2用草酸銨結(jié)晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。3用碘-碘化鉀溶液媒染1MIN，傾去多余染液。4用中性脫色劑如乙醇或丙醇脫色，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。5，用番紅溶液復(fù)染1MIN，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。24）革蘭氏染色的機(jī)制：1）革蘭氏染色與細(xì)菌等電點(diǎn)有關(guān)系：革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn)比革蘭氏陰性菌的等電點(diǎn)低，說明革蘭氏陽性菌帶的負(fù)電荷比革蘭氏陰性菌多。革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn)低，與草酸銨結(jié)晶紫結(jié)合的牢固，對(duì)乙醇脫色抵抗力強(qiáng)，所以革蘭氏陽性菌呈紫色。2，革蘭氏染色與細(xì)胞壁有關(guān)：革蘭氏陽性菌的脂質(zhì)的含量很低，肽聚糖含量高，革蘭氏陰性菌則相反，因此用乙醇脫色時(shí)革蘭氏陰性菌的脂質(zhì)被乙醇溶解，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的孔徑和通透性，乙醇很易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)將結(jié)晶紫和碘-碘化鉀復(fù)合物提取出來，噬菌體呈現(xiàn)無色。3,*革蘭氏陽性菌含特殊的RNA-Mg2+鹽與革蘭氏染色有關(guān)。25）放線菌：放線菌因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長而得名。分為三類營養(yǎng)菌絲，氣生菌絲，孢子絲。

26）放線菌的結(jié)構(gòu)：放線菌的菌體由纖細(xì)的，長短不一的菌絲組成，菌絲分枝，為單細(xì)胞，在菌絲生長過程中，核物質(zhì)不斷復(fù)制分裂，然后細(xì)胞不形成橫膈膜，也不分裂，而是無數(shù)分枝的菌絲組成很細(xì)密的菌絲體。第三章

27）原生動(dòng)物：原生動(dòng)物是動(dòng)物中最原始，最低等，結(jié)構(gòu)最簡單的單細(xì)胞動(dòng)物。28）原生動(dòng)物的營養(yǎng)類型：1全動(dòng)性營養(yǎng)2植物性營養(yǎng)3腐生性營養(yǎng)

29）原生動(dòng)物的繁殖：有性生殖和無性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動(dòng)物的作用：所有原生動(dòng)物在污水生物處理過程中都起著指示生物的作用。31）主要的原生動(dòng)物：P71 32）微型后生動(dòng)物：原生動(dòng)物以外的多細(xì)胞動(dòng)物叫后生動(dòng)物。因有些后生動(dòng)物體型微小，要借助光學(xué)顯微鏡方可看得清楚，故叫微型后生動(dòng)物。33）藻類的繁殖;有性生殖和無性生殖。P84 34）真菌：真菌屬低等生物，種類繁多，形態(tài)，大小各異，包括酵母菌，霉菌及各種傘菌。真菌屬真核微生物，有單細(xì)胞和多細(xì)胞之分。

35）酵母菌：酵母菌是單細(xì)胞真菌。分發(fā)酵型和氧化型兩種。氧化型的酵母菌則是無發(fā)酵能力或發(fā)酵能力弱而氧化能力強(qiáng)的酵母菌。球擬酵母菌，白色假絲酵母菌，類酵母的阿氏囊霉屬，短梗霉屬在石油加工業(yè)中起積極作用，如石油脫蠟，降低石油的凝固點(diǎn)等。處理廢水及用酵母菌檢測重金屬。

36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生

38）霉菌的繁殖：有性孢子和無性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。39）傘菌：無毒的有機(jī)廢水可用于培養(yǎng)食用菌的菌絲體。40）酶：酶是由細(xì)胞產(chǎn)生的，能在體內(nèi)或體外起催化作用的一類具有活性中心和特殊構(gòu)想的生物大分子。

41）酶的分類：化學(xué)組分；單成分酶（只含有蛋白質(zhì)）和全酶（蛋白質(zhì)及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時(shí)存在起作用）

42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物2酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子

43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶類，裂解酶類，異構(gòu)酶類和合成（連接）酶類。

44）酶的反應(yīng)通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2

轉(zhuǎn)移酶類：AR+B=A+BR

水解酶類：AB+H2O=AOH+BH

裂解酶類：AB=A+B

異構(gòu)酶：---------葡萄糖=果糖（例）

合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi

或

A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質(zhì)）3酶的催化反應(yīng)條件溫和4酶對(duì)環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高

46）酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程式：

E酶S底物ES中間產(chǎn)物P最終產(chǎn)物

47）酶的濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：下圖

48)底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P116 49)溫度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：上圖 50)PH對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P117 51)激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：凡能激活酶的物質(zhì)稱酶的激活劑。分為無機(jī)離子激活劑和有機(jī)化合物兩類。

52)抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：引起抑制作用的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。抑制作用是指由于某些物質(zhì)與酶的活性部位結(jié)合。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。

53)培養(yǎng)基;根據(jù)各種微生物對(duì)營養(yǎng)的需要，包括水，碳源，能源，氮源，無機(jī)鹽及生長因子等按一定的比例配置而成的，用以培養(yǎng)微生物的基質(zhì)，稱為培養(yǎng)基。

54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營養(yǎng)物的濃度及配比3調(diào)PH值4考慮加生長因子5培養(yǎng)基物美價(jià)廉

55)培養(yǎng)基的種類：按培養(yǎng)基組成物的性質(zhì)分類：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基），復(fù)合培養(yǎng)基。按物理性質(zhì)分為;液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基對(duì)微生物的功能和用途不同：選擇培養(yǎng)基，鑒別培養(yǎng)基，加富培養(yǎng)基。56)營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入微生物細(xì)胞的方式：單純擴(kuò)散，促進(jìn)擴(kuò)散，主動(dòng)運(yùn)輸，基團(tuán)轉(zhuǎn)位

57)單純擴(kuò)散：單純擴(kuò)散是物理過程，不包括細(xì)胞的主動(dòng)代謝。雜亂運(yùn)動(dòng)的，水溶性的溶質(zhì)分子（水，無機(jī)鹽，O2，CO2）通過細(xì)胞質(zhì)膜中含水的小孔從高濃度區(qū)向低濃度區(qū)擴(kuò)散，不與膜上的分子發(fā)生反應(yīng)，這種擴(kuò)散是非特異的，擴(kuò)散速度慢。

58)促進(jìn)擴(kuò)散：細(xì)胞膜上的載體蛋白分子有和被運(yùn)輸物質(zhì)特異結(jié)合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質(zhì)結(jié)合，形成的底物-載體蛋白復(fù)合體，便從高濃度向低濃度區(qū)域擴(kuò)散或越膜。由于被運(yùn)輸物質(zhì)的濃度在膜的內(nèi)表面較低，所以復(fù)合體傾向解離，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)就留在細(xì)胞內(nèi)，而載體回到膜的外表面，只要存在需要運(yùn)輸物質(zhì)的越膜濃度梯度，這個(gè)過程就將繼續(xù)進(jìn)行，從而加快了物質(zhì)的運(yùn)輸速度。不消耗能量。

59)主動(dòng)運(yùn)輸：當(dāng)微生物細(xì)胞內(nèi)積累的營養(yǎng)物質(zhì)濃度高于細(xì)胞外的濃度時(shí)，營養(yǎng)物質(zhì)就不能按濃度梯度擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)，而是逆濃度梯度被“抽”進(jìn)細(xì)胞內(nèi)。這一過程需要滲透酶和消耗能量。滲透酶在此過程中起改變平衡點(diǎn)的作用，這種需要能量和滲透酶的逆濃度梯度積累營養(yǎng)物質(zhì)的過程。60)基團(tuán)轉(zhuǎn)位：基團(tuán)轉(zhuǎn)位是存在于某些原核生物中的一種物質(zhì)運(yùn)輸方式。與主動(dòng)運(yùn)輸相比，有一個(gè)復(fù)雜的運(yùn)輸系統(tǒng)，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)發(fā)生了化學(xué)變化，主要用于糖的運(yùn)輸，運(yùn)輸總效果與主動(dòng)運(yùn)輸相似，可以逆濃度梯度將營養(yǎng)物質(zhì)移向細(xì)胞內(nèi)，結(jié)果使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的物質(zhì)濃度大大超過未改變結(jié)構(gòu)的同類物質(zhì)的濃度。需要代謝能量。61)微生物的能量代謝：P135-P150

62）微生物的生長：微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷吸收營養(yǎng)物質(zhì)，按照自己的代謝方式進(jìn)行新陳代謝活動(dòng)。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細(xì)胞質(zhì)量不斷迅速增長，稱為生長。

63）微生物的發(fā)育：從生長到繁殖這個(gè)由量變到質(zhì)變的過程叫發(fā)育 64）代時(shí)：細(xì)菌兩次細(xì)胞分裂之時(shí)的時(shí)間。65）生長曲線：

66)微生物的生存因子：微生物除了需要營養(yǎng)外，還需要環(huán)境中合適的生存因子，例如：溫度，PH，氧化還原電位，溶解氧，太陽輻射，活度與滲透壓，表面張力等。

67)根據(jù)微生物對(duì)溫度的最適生長需求，可將微生物分為4大類：嗜冷菌，嗜中溫菌，嗜熱菌及嗜超熱菌。

68)大多數(shù)細(xì)菌，藻類和原生動(dòng)物的最適PH為6.5-7.5，他們對(duì)PH的適應(yīng)范圍為4-10。69)任何兩種濃度的溶液被半滲透膜隔開，均會(huì)產(chǎn)生滲透壓。

70)微生物之間的關(guān)系：微生物之間的關(guān)系有種內(nèi)的關(guān)系和種間的關(guān)系。相同種內(nèi)的關(guān)系有競爭和互助。不同種間關(guān)系有6種，競爭關(guān)系，原始合作關(guān)系，共生關(guān)系，偏害關(guān)系，捕食關(guān)系，寄生關(guān)系。

71)競爭關(guān)系：競爭關(guān)系是指不同的微生物種群在同一環(huán)境中，對(duì)食物等營養(yǎng)，溶解氧，空間和其他共同要求的物質(zhì)互相競爭，互相收到不利影響。

72)原始合作關(guān)系：原始合作關(guān)系是指兩種可以單獨(dú)生活的生物共存于同一環(huán)境中，相互提供營養(yǎng)及其他生活條件，雙方互為有利，相互受益。當(dāng)兩者分開時(shí)各自可單獨(dú)生存。

73)共生關(guān)系：共生關(guān)系是指兩種不能單獨(dú)生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中，各自執(zhí)行優(yōu)勢的生理功能，在營養(yǎng)上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關(guān)系就叫共生關(guān)系。74)偏害關(guān)系：共存于同一環(huán)境的兩種微生物，甲方對(duì)乙方有害，乙方對(duì)甲方無任何影響。一種微生物在代謝過程中產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，其中有的產(chǎn)物對(duì)一種（或一類）微生物生長不利，或者抑制或者殺死對(duì)方。上述這種微生物與微生物之間的對(duì)抗關(guān)系叫偏害關(guān)系。分非特異性偏害和特異性偏害。

75)捕食關(guān)系：有的微生物不是通過代謝產(chǎn)物對(duì)抗對(duì)方，而是吞食對(duì)方，這種關(guān)系稱為捕食關(guān)系。

76)寄生關(guān)系：一種生物需要在另一種生物體內(nèi)生活，從中社區(qū)營養(yǎng)才得以生長繁殖，這種關(guān)系成為寄生關(guān)系。77)微生物在土壤中的分布：土壤中微生物的類群、數(shù)量與分布，由于土壤質(zhì)地發(fā)育母質(zhì)、發(fā)育歷史、肥力、季節(jié)、作物種植狀況、土壤深度和層次等等不同而有很大差異。土壤微生物中細(xì)菌最多，作用強(qiáng)度和影響最大，放線菌和真菌類次之，藻類和原生動(dòng)物等數(shù) 量較少，影響也小。土壤中微生物的水平分布取決于碳源。土壤中微生物的垂直分布與紫外輻射的照射，營養(yǎng)，水，溫度等因素有關(guān)。78)遺傳和變異是一切生物最本質(zhì)的屬性。

79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統(tǒng)發(fā)育過程中形成的系統(tǒng)。80)遺傳可改變的一面是變異

81)遺傳是相對(duì)的，變異是絕對(duì)的。82)遺傳和變異的物質(zhì)基礎(chǔ)DNA：P203 83)基因突變：基因突變即微生物的DNA被某種因素引起堿基的缺失，置換或插入，改變了基因內(nèi)部原有的堿基排列順序，從而引起其后代表現(xiàn)型的改變。當(dāng)后代突然變現(xiàn)和親代顯然不同的，能遺傳的性狀時(shí)，就稱為突變。

84)自發(fā)突變：自發(fā)突變是指某種微生物的自然條件下，沒有人工參與而發(fā)生的基因突變。原因有多因素低劑量的誘變效應(yīng)，互變異構(gòu)效應(yīng)。

85)誘發(fā)突變：誘發(fā)突變是利用物理或化學(xué)的因素處理微生物群體，促使少數(shù)個(gè)體細(xì)胞的DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，在基因內(nèi)部堿基配對(duì)發(fā)生錯(cuò)差，引起微生物的遺傳性狀發(fā)生突變。分物理誘變，化學(xué)誘變，復(fù)合處理及其協(xié)同效應(yīng)，定向培育和馴化。

86)基因重組：兩個(gè)不同形狀個(gè)體細(xì)胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發(fā)生遺傳變異，產(chǎn)生新品種，此過程稱為基因重組。

87)雜交;雜交是通過雙親細(xì)胞的融合，使整套染色體的基因重組；或者是通過雙親細(xì)胞的溝通，使部分染色體基因重組。

88)轉(zhuǎn)化：受體細(xì)胞直接吸收來自供體細(xì)胞的DNA片段，并把它整合到自己的基因組里，從而獲得了供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)象，成為轉(zhuǎn)化。

89)轉(zhuǎn)導(dǎo);通過溫和噬菌體的媒介作用，把供體細(xì)胞內(nèi)特定的基因攜帶至受體細(xì)胞中，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。

90)質(zhì)粒：質(zhì)粒在原核微生物中除有染色體外，還含有另一種較小的，攜帶少量遺傳基因的環(huán)狀DNA分子，稱為質(zhì)粒，也叫染色體外DNA。質(zhì)粒在基因工程中常被用作基因轉(zhuǎn)移的運(yùn)載工具-載體。

91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，又叫基因剪接或核酸體外重組?；蚬こ淌怯萌斯し椒ò阉枰哪骋还w生物的DNA提取出來，在離體的條件下用限制性內(nèi)切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長度有幾千個(gè)核苷酸，用DNA連接酶把它和質(zhì)粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導(dǎo)入某一受體細(xì)胞中，以便外來的遺傳物質(zhì)在其中進(jìn)行復(fù)制，擴(kuò)增和表達(dá)，再進(jìn)行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對(duì)外源基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離提純，從而獲得新品種。92)基因工程操作分5步：1先從供體細(xì)胞中選擇獲取帶有目的基因的DNA片段（基因分離）； 2將目的DNA的片段和質(zhì)粒在體外重組；（體外重組）3將重組體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞（載體傳遞）；4重組體克隆的篩選與鑒定（復(fù)制表達(dá)）；5外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離與提純（篩選，繁殖）

93）天然淡水水體是人類生活和工業(yè)生產(chǎn)用水的水源，也是水生動(dòng)物和植物生長繁殖的場所。

94）水體自凈過程;1有機(jī)污染物排入水體后被水體稀釋，有機(jī)和無機(jī)固體物沉降至河底。2水體中好氧細(xì)菌利用溶解氧把有機(jī)物分解為簡單有機(jī)物和無機(jī)物，并用以組成自身有機(jī)體，水中溶解氧急速下降至零，此時(shí)魚類絕跡，原生動(dòng)物，輪蟲，浮游甲殼動(dòng)物死亡，厭氧細(xì)菌大量繁殖，對(duì)有機(jī)物進(jìn)行厭氧分解。3水體中溶解氧在異樣菌分解有機(jī)物時(shí)被消耗，大氣中的氧剛?cè)苡谒捅谎杆儆玫?，盡管水中藻類在白天進(jìn)行光合作用放出氧氣，但復(fù)氧速率小于耗氧速率，氧垂曲線下降。在最缺氧點(diǎn)，有機(jī)物的耗氧速率等于河流的復(fù)氧速率。再往下游的有機(jī)物減少，復(fù)氧速率大于耗氧速率，氧垂1曲線上升。如果河流不再被有機(jī)物污染，河水中溶解氧恢復(fù)到原來的水平，甚至達(dá)到飽和。4隨著水體的自凈，有機(jī)物缺乏和其他原因（例如陽光照射，溫度，PH變化，毒物及生物的抗?jié)嵶饔玫龋┦辜?xì)菌死亡。據(jù)測定，細(xì)菌死亡數(shù)大約為80%-90%.95）碳循環(huán)：

96）脂質(zhì)的轉(zhuǎn)化：P274 97）氮循環(huán)：P278 98）顯微鏡的分辨率：指顯微鏡能分辨出物體兩點(diǎn)間的最小距離

分辨力=0.61xλ/N.A.計(jì)算題

采用目鏡為16X，物鏡為40/0.65的光學(xué)系統(tǒng)，直徑為0.3μm的微生物在顯微鏡下是否可分辨 解：

分辨率=0.61xλ/N.A.由題目知：N.A.=0.65

λ=0.55

分辨率=0.61x（0.55/0.65）=0.516μm>0.3μm

不可分辨