第一篇：微生物學(xué)名詞

1、微生物：肉眼看不見(jiàn)的，必須借助于顯微鏡才能看見(jiàn)的微小生物。

2、比表面積：表面積與體積之比。

3、原核微生物：是一大類(lèi)細(xì)胞核無(wú)核膜包裹，只存在稱(chēng)為核區(qū)的裸露的DNA的原始單細(xì)胞微生物。

4、糖被：具有一定的外形，相對(duì)穩(wěn)定的附于細(xì)胞壁外面的一層松散透明的粘液物質(zhì)稱(chēng)為莢膜/糖被。

5、菌膠團(tuán)：多個(gè)細(xì)菌的莢膜連在一起的，其中包含著許多細(xì)菌，稱(chēng)為菌膠團(tuán)。

6、菌落：?jiǎn)渭?xì)胞接種到固體培養(yǎng)基形成的一個(gè)肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞群體。

7、菌苔：在固體培養(yǎng)基上，許多菌落連成一片，稱(chēng)為菌苔。

8、克?。河梢粋€(gè)細(xì)胞發(fā)育而來(lái)的菌落。

9、基內(nèi)菌絲：生長(zhǎng)于培養(yǎng)基中吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的菌絲。

10、氣生菌絲：當(dāng)基內(nèi)菌絲發(fā)育到一定階段時(shí)，向空間長(zhǎng)出的菌絲。

11、真核微生物：細(xì)胞核具有核膜，能進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞質(zhì)中存在線粒體或同時(shí)存在葉綠體等細(xì)胞器的微小微生物。

12、菌絲體：菌絲有分枝，分枝的菌絲相互交錯(cuò)而成的群體，稱(chēng)為菌絲體。

13、有隔菌絲：有橫隔膜將菌絲分隔成許多個(gè)細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞含有一個(gè)至多個(gè)細(xì)胞核的菌絲。

14、無(wú)隔菌絲：無(wú)隔菌絲中沒(méi)有橫隔膜，整個(gè)菌絲就是一個(gè)細(xì)胞，菌絲內(nèi)有許多核，為多核菌絲。

15、由擔(dān)孢子萌發(fā)而來(lái)。由初級(jí)菌絲進(jìn)一步萌發(fā)而來(lái)。由二級(jí)菌絲發(fā)育而來(lái)。

18、同宗配合：是由同一菌株的兩根菌絲，甚至同一菌絲的分支相互接觸，形成的接合孢子。

19、異宗配合：是有不同菌株的菌絲相互接觸形成的接合孢子

20、病毒粒子：成熟的具有侵染了的病毒顆粒。

21、核心：病毒核酸位于毒核的中心形成核心。

22、噬菌斑：指在細(xì)菌培養(yǎng)基上接種噬菌體后出現(xiàn)的透明斑。

23、裂解量：平均每一個(gè)宿主細(xì)胞裂解后所產(chǎn)生的子代噬菌體數(shù)目，叫裂解量。

24、溫和噬菌體：噬菌體感染細(xì)胞后，將其核酸整合到宿主DNA上，并且可以隨宿主DNA的復(fù)制而進(jìn)行同步復(fù)制，在一般情況下，不引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。

25、烈性噬菌體：在寄主細(xì)胞內(nèi)增值產(chǎn)生大量子代噬菌體，并引起菌體裂解的噬菌體

26、溶源菌：攜帶有噬菌體DNA的寄主細(xì)胞。

27、光能自養(yǎng)微生物：以日光為能源，以co2為碳源的微生物。

28、光能異養(yǎng)微生物：以簡(jiǎn)單有機(jī)物有機(jī)酸醇為供氫體，利用光能將CO2還原為有機(jī)物質(zhì)的微生物。

29、化能自養(yǎng)微生物：以無(wú)機(jī)體氧化過(guò)程中放出的化學(xué)能為能源，以CO2或碳酸鹽為唯一獲主要碳源的微生物。

30、加富培養(yǎng)基：在普通培養(yǎng)基內(nèi)加入額外營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的一類(lèi)營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基

31、選擇培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某種抑制雜菌生長(zhǎng)的抑制劑，以間接促進(jìn)目標(biāo)微生物的生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。

32、殺死物體上全部微生物的方法。殺死或消除物體表面或內(nèi)部的部分微生物的方法。用理化方法防止抑制微生物生長(zhǎng)的方法。

35、化療：利用對(duì)病源菌具有高度毒力而對(duì)宿主細(xì)胞基本無(wú)毒的化學(xué)物質(zhì)來(lái)抑制宿主體內(nèi)病源微生物的生長(zhǎng)繁殖。

36、C/N：指碳元素與氮元素物質(zhì)的量的比值。

37、培養(yǎng)基：天然的或人工配制而成的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。

38、有氧呼吸：在有氧條件下，底物脫下的氫各呼吸鏈傳遞產(chǎn)生的CO2，ATP，能量過(guò)程。

39、無(wú)氧呼吸：在無(wú)氧條件下，底物脫下的氫經(jīng)部分呼吸鏈傳遞，最終與活化態(tài)氧結(jié)合生成水，并釋放能量的過(guò)程。

40、發(fā)酵：指在無(wú)氧條件下，微生物以有機(jī)物分解不徹底的中間產(chǎn)物為受氫體，同時(shí)產(chǎn)生各種不同的代謝產(chǎn)物并釋放少量能量的生物氧化過(guò)程。

41、生物氧化：微生物細(xì)胞中能量的釋放。

42、分批發(fā)酵,向發(fā)酵罐中一次性投入培養(yǎng)料,發(fā)酵完畢后一次性的放出酵料，放料后再重復(fù)投料滅菌接種發(fā)酵等過(guò)程。

43、連續(xù)發(fā)酵：是發(fā)酵過(guò)程中一邊補(bǔ)入新鮮料液，一邊以相近流速放料，維持發(fā)酵液原來(lái)的體積的發(fā)酵方法。

44、濕重法：將微生物培養(yǎng)液離心，收集沉淀后，稱(chēng)重得到濕重。

45、干重法：將單位體積培養(yǎng)液離心得到細(xì)胞沉淀物，以清水洗凈，置于1000-105°C烘箱干燥過(guò)液去除水分稱(chēng)量，得到菌體的干重。

46、世代：細(xì)菌以裂殖的方式繁殖，一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞分裂成兩個(gè)細(xì)胞的間隔被稱(chēng)為世代。

47、代時(shí)：一個(gè)世代所需的時(shí)間。

48、生長(zhǎng)速率：?jiǎn)挝辉獣r(shí)間內(nèi)細(xì)胞數(shù)目或細(xì)胞生物量的增加。

第二篇：微生物學(xué)教學(xué)大綱

微生物學(xué)課程教學(xué)大綱

課程中文名稱(chēng)：微生物學(xué)

課程英文名稱(chēng)：Microbiology 課程類(lèi)別：專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課

課程編號(hào): 09003011 課程歸屬單位：生命科學(xué)學(xué)院 制定時(shí)間：2007年7月20日

一、課程的性質(zhì)、任務(wù)

微生物是生命科學(xué)的主要研究對(duì)象，學(xué)生應(yīng)從宏觀到微觀的各個(gè)層次上系統(tǒng)地了解微生物。通過(guò)本課程的學(xué)習(xí)，應(yīng)對(duì)微生物學(xué)有一個(gè)全面的了解，系統(tǒng)地掌握微生物學(xué)的基礎(chǔ)理論、基本知識(shí)和基本操作技能，掌握微生物學(xué)的基本研究方法和手段，為進(jìn)一步深入學(xué)習(xí)生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)課打下良好的基礎(chǔ)。

1、教學(xué)的基本要求

（一）基礎(chǔ)理論和基本知識(shí)要求

（1）系統(tǒng)地掌握各類(lèi)微生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能，掌握其營(yíng)養(yǎng)、代謝、生長(zhǎng)以及遺傳變異、基因重組和生態(tài)分布等方面的微生物學(xué)基礎(chǔ)理論。

（2）較全面的了解微生物對(duì)于人類(lèi)日常生活的影響，以及微生物在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品加工和環(huán)境保護(hù)等方面的應(yīng)用。

（3）掌握研究微生物的基本方法和基本操作技能的理論基礎(chǔ)。

（二）基本技能要求

（1）掌握微生物學(xué)的制片、染色和觀察技術(shù)。（2）掌握微生物細(xì)胞大小和數(shù)量的測(cè)定方法。（3）掌握微生物的分離、培養(yǎng)技術(shù)。（4）了解環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。

2、適用專(zhuān)業(yè)和學(xué)時(shí)數(shù)

本大綱適用于生物技術(shù)和生物科學(xué)專(zhuān)業(yè)本科生?？倢W(xué)時(shí)數(shù)81，其中理論學(xué)時(shí)數(shù)為54，實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)數(shù)為27。

3、本課程與其他課程的聯(lián)系

微生物學(xué)是生物技術(shù)和生物科學(xué)專(zhuān)業(yè)的一門(mén)重要專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課程。學(xué)習(xí)該課程必須具備普通生物學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等方面的知識(shí)。

4、推薦教材和參考書(shū)

（一）教材

（1）周德慶編著《微生物學(xué)教程》，高等教育出版社，2002.5。（2）沈萍等編著《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》，第三版，高等教育出版社，1999.6。

（二）參考書(shū)

（1）沈萍著《普通微生物學(xué)》，高等教育出版社，2000。（2）J.Nicklin etc《Microbiology》，科學(xué)出版社，1999。

5、教學(xué)方法與媒體要求

本課程的理論課要求采用計(jì)算機(jī)多媒體教學(xué)手段輔助教學(xué)。

二、教學(xué)內(nèi)容及安排 理論教學(xué)部分54學(xué)時(shí)。第一章 緒論（2學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物及微生物學(xué)的定義、微生物的類(lèi)群和分類(lèi)地位、微生物的特點(diǎn)、微生物學(xué)的發(fā)展史、真原核微生物的區(qū)別、微生物對(duì)于人類(lèi)的關(guān)系和重要性。

1、基本概念：微生物、微生物學(xué)。

2、教學(xué)重點(diǎn)：微生物及微生物學(xué)的概念、真原核微生物的區(qū)別。

3、教學(xué)難點(diǎn)：微生物的特點(diǎn)。第一節(jié) 微生物與微生物學(xué)

微生物與微生物學(xué)的基本概念，微生物學(xué)的研究對(duì)象，微生物學(xué)的分科和基本任務(wù)。第二節(jié) 微生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史

微生物學(xué)發(fā)展過(guò)程的五個(gè)時(shí)期及各時(shí)期的代表人物。第三節(jié) 微生物在生物分類(lèi)中的地位

生物分類(lèi)的發(fā)展，目前生物分類(lèi)的進(jìn)展，微生物在生物分類(lèi)中的地位。第四節(jié) 微生物的特點(diǎn)

微生物與其他生物的相似性，微生物的八大特點(diǎn)。第五節(jié) 真原核微生物的主要區(qū)別

真原核微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和生理生化上的主要區(qū)別。第六節(jié) 微生物對(duì)于人類(lèi)社會(huì)發(fā)展的重要性

從醫(yī)藥衛(wèi)生、食品加工、發(fā)酵工業(yè)、農(nóng)業(yè)，微生物在現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展中的作用等多個(gè)方面闡述微生物對(duì)于人類(lèi)發(fā)展的影響，說(shuō)明學(xué)習(xí)微生物學(xué)的重要性。第二章 原核微生物（8學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：原核生物的概念、細(xì)菌的形態(tài)、大小與結(jié)構(gòu)、細(xì)菌的繁殖，放線菌、藍(lán)細(xì)菌和其他的原核微生物。

2、基本概念：原核、原核生物、間體、芽孢、鞭毛、莢膜。

3、教學(xué)重點(diǎn)：細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，尤其是原核生物特有的結(jié)構(gòu)。

4、教學(xué)難點(diǎn)：細(xì)胞壁的構(gòu)造。第一節(jié) 免疫學(xué)的概念

細(xì)菌細(xì)胞的基本形態(tài)、細(xì)胞的大小和排列方式。第二節(jié) 細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能

細(xì)菌的細(xì)胞壁與革蘭氏染色反應(yīng)、細(xì)胞膜和間體、細(xì)胞質(zhì)與內(nèi)含物、原核和質(zhì)粒等一般結(jié)構(gòu)；莢膜、鞭毛、芽孢等特殊構(gòu)造；各細(xì)胞結(jié)構(gòu)的功能。第三節(jié) 細(xì)菌的群體形態(tài)和繁殖

細(xì)菌的群體形態(tài)特征——菌落、菌苔和液體培養(yǎng)特征及其在細(xì)菌分類(lèi)中的作用；菌落和菌苔的概念；細(xì)菌的繁殖方式。第四節(jié) 放線菌

放線菌的形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)；繁殖方式；放線菌的主要類(lèi)群。第五節(jié) 藍(lán)細(xì)菌

藍(lán)細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊構(gòu)造，藍(lán)細(xì)菌的繁殖。第六節(jié) 其他類(lèi)群的微生物

枝原體、衣原體和立克次氏體的基本特征，與其他原核生物的區(qū)別。

第三章 真核微生物（5學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)，真菌無(wú)性繁殖和有性繁殖、真菌的代表類(lèi)群、真菌對(duì)于人類(lèi)的影響和重要性。

2、基本概念：真菌、菌絲、菌絲體。

3、教學(xué)重點(diǎn)：真菌的特殊形態(tài)、真菌的繁殖和孢子類(lèi)型。

4、教學(xué)難點(diǎn)：真菌的繁殖。第一節(jié) 真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)

真菌的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)和特殊構(gòu)造。第二節(jié) 真菌的繁殖

真菌的繁殖方式（無(wú)性繁殖和有性繁殖）及其特點(diǎn)；各類(lèi)繁殖所形成的孢子類(lèi)型。真菌的準(zhǔn)性生殖。第三節(jié) 酵母菌

酵母菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)、繁殖方式及生活史。第四節(jié) 真菌的代表類(lèi)群

真菌各代表類(lèi)群的形態(tài)結(jié)構(gòu)，繁殖特點(diǎn)，生活史和生活環(huán)境，常見(jiàn)真菌在實(shí)際中的應(yīng)用或?qū)θ祟?lèi)造成的危害。

第四章 非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物——病毒（4學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：病毒的定義、病毒的一般特征、病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、病毒的增殖、病毒的溶原性、亞病毒。

2、基本概念：病毒、病毒粒子、溫和噬菌體、類(lèi)病毒、朊病毒。

3、教學(xué)重點(diǎn)：病毒的一般形態(tài)特征；病毒的增殖。

4、教學(xué)難點(diǎn)：噬菌體的增殖過(guò)程。第一節(jié) 病毒的一般特征

病毒的定義；一般形態(tài)特征。第二節(jié) 病毒的分類(lèi)

病毒的分類(lèi)方法和病毒的主要類(lèi)群。第三節(jié) 噬菌體的特性和復(fù)制方式

噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、增殖方式和增殖過(guò)程；噬菌體與人類(lèi)的關(guān)系。第四節(jié) 愛(ài)滋病毒

愛(ài)滋病毒的發(fā)現(xiàn)、愛(ài)滋病的發(fā)病特點(diǎn)，愛(ài)滋病毒對(duì)人類(lèi)的危害。第五節(jié) 亞病毒

亞病毒的種類(lèi)和特點(diǎn)。亞病毒與人類(lèi)的關(guān)系。第五章 微生物的營(yíng)養(yǎng)（4學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物的營(yíng)養(yǎng)、微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型、吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式、培養(yǎng)基。

2、基本概念：微生物的四大營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型病毒、微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式、培養(yǎng)基。

3、教學(xué)重點(diǎn)：微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型和培養(yǎng)基。

4、教學(xué)難點(diǎn)：微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式。第一節(jié) 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其功能

微生物生長(zhǎng)所需的碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因素、礦質(zhì)元素和水等六大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。第二節(jié) 微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型

微生物的四大營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型——光能自養(yǎng)型微生物、光能異養(yǎng)型微生物、化能自養(yǎng)型微生物和化能異養(yǎng)型微生物的概念，各類(lèi)型微生物的生理特點(diǎn)。第三節(jié) 微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式

微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式（被動(dòng)運(yùn)輸、促進(jìn)擴(kuò)散、主動(dòng)運(yùn)輸和基團(tuán)轉(zhuǎn)位）和運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)。

第四節(jié) 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基的概念；培養(yǎng)基的配制過(guò)程；培養(yǎng)基的種類(lèi)；配制培養(yǎng)基的原則。第六章 微生物的代謝（6學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物的能量代謝、能量代謝的類(lèi)型、己糖的分解代謝、特殊物質(zhì)的分解代謝、代謝的調(diào)節(jié)

2、基本概念：產(chǎn)生ATP的三種方式，能量代謝的三種方式。

3、教學(xué)重點(diǎn)：微生物的能量代謝。

4、教學(xué)難點(diǎn)：微生物的代謝調(diào)節(jié)。第一節(jié) 微生物的能量代謝

ATP產(chǎn)生的三種方式（基質(zhì)水平磷酸化、氧化磷酸化和光合磷酸化）；微生物能量代謝的類(lèi)型（有氧呼吸、無(wú)氧呼吸和發(fā)酵作用）。第二節(jié) 微生物的分解代謝

己糖代謝的四條途徑（EMP、HMP、ED和TCA）及其特點(diǎn)。第三節(jié) 微生物的特殊合成代謝

生物固氮作用的機(jī)制；肽聚糖大分子的合成。第四節(jié) 微生物代謝的調(diào)節(jié)

酶活性調(diào)節(jié)和酶合成調(diào)節(jié)的類(lèi)型和機(jī)制；微生物代謝調(diào)節(jié)在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用。第七章 微生物的生長(zhǎng)（5學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物的生長(zhǎng)及其測(cè)定、生長(zhǎng)曲線、環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。

2、基本概念：代時(shí)、生長(zhǎng)曲線、光修復(fù)、暗修復(fù)。

3、教學(xué)重點(diǎn)：微生物的生長(zhǎng)曲線。

4、教學(xué)難點(diǎn)：環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。第一節(jié) 微生物生長(zhǎng)

微生物生長(zhǎng)的定義；微生物群體生長(zhǎng)的測(cè)定方法。第二節(jié) 微生物的生長(zhǎng)規(guī)律——生長(zhǎng)曲線

生長(zhǎng)曲線的定義；生長(zhǎng)曲線的繪制方法；生長(zhǎng)曲線的四個(gè)時(shí)期及不同時(shí)期微生物細(xì)胞特點(diǎn)；生長(zhǎng)曲線對(duì)于實(shí)際生產(chǎn)的指導(dǎo)意義。第三節(jié) 環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響

溫度、氧氣、PH值、水份、滲透壓、輻射線和化學(xué)藥物對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響；高溫滅菌的原理及方法；消毒和滅菌的概念。

第八章 微生物的遺傳變異和基因重組（6學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物的遺傳物質(zhì)、基因突變和誘變育種、微生物的基因重組。

2、基本概念：基因突變、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)化、接合。

3、教學(xué)重點(diǎn)：基因重組。

4、教學(xué)難點(diǎn)：基因重組。第一節(jié) 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

轉(zhuǎn)化、噬菌體感染和植物病毒的重建等三個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)；遺傳物質(zhì)存在的部位和方式。第二節(jié) 基因突變和誘變育種

基因突變的類(lèi)型和特點(diǎn)，突變率；基因突變的機(jī)制；自發(fā)突變與誘發(fā)突變?cè)谟N上的應(yīng)用。

第三節(jié) 基因重組（原核生物和真菌）

原核生物基因重組——轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合及原生質(zhì)體融合。第四節(jié) 基因工程

基因工程的基本操作、基因工程的應(yīng)用和發(fā)展前景。第五節(jié) 菌種保藏

菌種的衰退與復(fù)壯，菌種的保藏。第九章 微生物生態(tài)（5學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物在自然界的分布、微生物之間的相互作用關(guān)系、微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用。

2、基本概念：微生物區(qū)系、極端環(huán)境微生物、微生物間的八種關(guān)系、生物固氮作用、氨化作用、硝化作用、反硝化作用。

3、教學(xué)重點(diǎn)：微生物之間的相互關(guān)系；微生物在自然界氮素循環(huán)中的作用。

4、教學(xué)難點(diǎn)：微生物在自然界氮素循環(huán)中的作用。第一節(jié) 微生物在自然界中的分布

微生物在土壤、水、空氣和生物體中的分布；極端環(huán)境微生物。第二節(jié) 微生物之間的相互關(guān)系

微生物間的八種相互關(guān)系。

第三節(jié) 微生物與動(dòng)物和植物的相互關(guān)系

微生物與動(dòng)物的互生、共生和寄生關(guān)系；微生物與植物的互生、共生和寄生關(guān)系。第四節(jié) 微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用

微生物在自然界碳素、氮素、磷素和硫素等物質(zhì)循環(huán)中的作用。第十章 免疫血清學(xué)（6學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：傳染與傳染病、影響傳染的因素、非特異性免疫、特異性免疫。

2、基本概念：傳染、傳染病、非特異性免疫、特異性免疫、抗原、免疫球蛋白。

3、教學(xué)重點(diǎn)：非特異性免疫和特異性免疫，抗原抗體反應(yīng)。

4、教學(xué)難點(diǎn)：抗原抗體反應(yīng)。第一節(jié) 傳染與免疫

傳染與傳染病；影響傳染的因素。第二節(jié) 非特異性免疫

非特異性免疫方式——屏障結(jié)構(gòu)、吞噬作用、炎癥反應(yīng)等。第三節(jié) 特異性免疫

免疫器官、免疫細(xì)胞及其作用和免疫分子（抗原、抗體）及其作用。第四節(jié) 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用

抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律，主要的抗原抗體反應(yīng)，現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)等。第十一章 微生物的分類(lèi)與鑒定（3學(xué)時(shí)）

1、基本內(nèi)容：微生物的分類(lèi)單元、種的定義、微生物的命名、原核微生物的分類(lèi)和分類(lèi)綱要綱要、真核微生物的分類(lèi)系統(tǒng)和分類(lèi)綱要、微生物的鑒定。

2、基本概念：種、亞種、菌株、分類(lèi)、命名、鑒定。

3、教學(xué)重點(diǎn)：物種的定義；微生物的分類(lèi)、命名和鑒定。

4、教學(xué)難點(diǎn)：微生物的分類(lèi)系統(tǒng)。第一節(jié) 微生物的分類(lèi)單元和物種的概念

微生物的分類(lèi)單元；物種的定義；亞種以下的分類(lèi)單元。第二節(jié) 微生物的命名

微生物的命名方法和命名原則。第三節(jié) 原核生物的分類(lèi)綱要

原核生物常用的分類(lèi)系統(tǒng)。第四節(jié) 真核生物的分類(lèi)綱要

真菌的代表性分類(lèi)系統(tǒng)。第五節(jié) 微生物的鑒定

原核微生物的鑒定方法（傳統(tǒng)的分類(lèi)鑒定方法和現(xiàn)代的分類(lèi)鑒定方法）。

三、實(shí)踐教學(xué)內(nèi)容與安排（27學(xué)時(shí)）

實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)觀察（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)二 革蘭氏染色反應(yīng)（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌的芽孢染色（2學(xué)時(shí)）

實(shí)驗(yàn)四 微生物細(xì)胞大小的測(cè)定（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)五 微生物細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定（3學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)六 培養(yǎng)基的制備與滅菌（4學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)七 微生物的純系分離（3學(xué)時(shí)）

實(shí)驗(yàn)八 真菌形態(tài)及微生物菌落形態(tài)觀察（2學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)九 環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響（4學(xué)時(shí)）

第三篇：微生物學(xué)教學(xué)大綱

微生物學(xué)》課程教學(xué)大綱

理論教學(xué)大綱

緒論（2學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1掌握微生物和微生物學(xué)的概念及微生物所包括的主要類(lèi)群

2了解微生物在生物界的分類(lèi)地位、微生物學(xué)的發(fā)展階段和現(xiàn)代微生物學(xué)的發(fā)展概況。

二、主要內(nèi)容： 1 微生物學(xué)的研究對(duì)象 2 微生物學(xué)及其主要分枝 3 微生物學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史

三、講授重點(diǎn)：

微生物學(xué)的任務(wù)和內(nèi)容，微生物發(fā)展史。

四、講授難點(diǎn)： 微生物的特點(diǎn)

第一章 原核微生物（6學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1重點(diǎn)掌握細(xì)菌、放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其它主要特征。2了解立克次氏體、衣原體、支原體、藍(lán)細(xì)菌的主要特征。

二、主要內(nèi)容：

1細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其功能、繁殖方式、菌落特征；細(xì)菌分類(lèi)及其代表類(lèi)群 2放線菌的形態(tài)構(gòu)造、繁殖方式、菌落特征；放線菌的代表類(lèi)群 3藍(lán)細(xì)菌、支原體、立克次氏體、衣原體的一般結(jié)構(gòu)和特性。

三、講授重點(diǎn)：

細(xì)菌細(xì)胞的特點(diǎn)、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏染色原理。

四、講授難點(diǎn)：

細(xì)菌細(xì)胞的一般結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)。

第二章 真核微生物形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能（5學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1掌握霉菌、酵母菌和蕈菌的概念和基本形態(tài)結(jié)構(gòu)； 2較熟練掌握真菌的繁殖方式、有性和無(wú)性孢子類(lèi)型。3原核微生物與真核微生物的主要區(qū)別； 4了解五個(gè)亞門(mén)真菌的分類(lèi)方法及其代表菌

二、主要內(nèi)容

1酵母菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)；

2酵母菌的繁殖方式、生活史和菌落特征； 3霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)； 4霉菌的繁殖及孢子類(lèi)型； 5 霉菌的菌落； 6蕈菌（大型真菌）7常見(jiàn)真菌代表菌屬

三、講授重點(diǎn)：

真核微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌落特征、繁殖方式。

四、講授難點(diǎn)：

子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌亞門(mén)真菌的分類(lèi)方法。

第三章 病毒（4學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的

1掌握病毒的一般屬性和類(lèi)群。

2熟練掌握病毒的種類(lèi)、形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成、繁殖過(guò)程、溶源性。3熟練掌握噬菌體形態(tài)和結(jié)構(gòu)以及噬菌體的類(lèi)型

二、主要內(nèi)容

1病毒的概念及特點(diǎn)；

2病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成、繁殖方式； 3噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、繁殖方式； 4植物病毒和動(dòng)物病毒

三、講授重點(diǎn)：

病毒的定義、基本形態(tài)結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成、各類(lèi)病毒的宿主。噬菌體的繁殖方式和特點(diǎn)

四、講授難點(diǎn)：

病毒的結(jié)構(gòu)；病毒的粒子種類(lèi)；病毒的類(lèi)群。

第四章 微生物營(yíng)養(yǎng)（4學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1掌握微生物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其功用、微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型； 2掌握物質(zhì)運(yùn)輸?shù)姆绞胶蜋C(jī)理； 3掌握培養(yǎng)基的種類(lèi)與配制原則；

二、主要內(nèi)容

1微生物的六種營(yíng)養(yǎng)要素； 2微生物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型； 3營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的方式； 4培養(yǎng)基的配制和種類(lèi)。

三、講授重點(diǎn)：

微生物的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)，營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型和吸收營(yíng)養(yǎng)的機(jī)制。

四、講授難點(diǎn)：

培養(yǎng)基的配制原則和種類(lèi)

第五章 微生物的代謝（3學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1掌握微生物呼吸和能量代謝；呼吸基質(zhì)和能源；呼吸類(lèi)型；有氧呼吸；無(wú)氧呼吸作用；發(fā)酵作用。2掌握微生物的代謝調(diào)節(jié)方式；

二、主要內(nèi)容

1微生物的產(chǎn)能代謝；

2微生物特有的合成代謝途徑分解代謝和合成代謝間的聯(lián)系； 3微生物代謝調(diào)節(jié)

三、講授重點(diǎn)： 微生物的呼吸和發(fā)酵。

四、講授難點(diǎn)：

微生物代謝調(diào)節(jié)：酶合成的調(diào)節(jié)和酶功能的調(diào)節(jié)

第六章 微生物的生長(zhǎng)及其控制（6學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1熟練掌握純培養(yǎng)的基本步驟和技術(shù)；

2熟練掌握細(xì)菌個(gè)體生長(zhǎng)和群體生長(zhǎng)的規(guī)律，單細(xì)胞微生物一次培養(yǎng)生長(zhǎng)曲線； 3掌握微生物生長(zhǎng)測(cè)定的方法；

4掌握影響微生物生長(zhǎng)的重要環(huán)境因素；

二、主要內(nèi)容

1微生物生長(zhǎng)的測(cè)定； 2微生物的生長(zhǎng)規(guī)律； 3影響微生物生長(zhǎng)的主要因素； 4微生物培養(yǎng)法； 5微生物生長(zhǎng)的控制；

三、講授重點(diǎn)：

測(cè)定微生物生長(zhǎng)繁殖的方法，微生物生長(zhǎng)的規(guī)律及環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響

四、講授難點(diǎn)： 微生物生長(zhǎng)的控制

第七章 微生物的遺傳變異和育種（6學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1了解遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)； 2掌握微生物突變體的主要類(lèi)型；

3掌握基因突變、微生物育種的基本原理和基本方法；

二、主要內(nèi)容

1遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)； 2基因突變和誘變育種； 3基因重組； 4基因工程；

三、講授重點(diǎn)：

遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)，原核微生物的基因重組主要方式和特點(diǎn)，基因工程原理。

四、講授難點(diǎn)：

細(xì)菌的基因重組方式。微生物誘變育種方法。

第八章 菌種的保藏（2學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的： 1了解菌種衰退的原因；

2掌握菌種保藏的基本方法和原理；

二、主要內(nèi)容： 1菌種的衰退和復(fù)壯； 2菌種的保藏；

三、講授重點(diǎn)： 菌種保藏的基本方法

四、授難點(diǎn)： 菌種保藏的基本原理

第九章 微生物生態(tài)（3學(xué)時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1了解微生物在自然界的分布狀況，以及在自然界中所起的作用； 2掌握微生物與生物環(huán)境間的關(guān)系； 3掌握微生物處理污水的一般方法；

二、主要內(nèi)容： 1微生物在自然界的分布 2微生物與生物環(huán)境間的關(guān)系 3微生物與環(huán)境保護(hù)

三、講授重點(diǎn)：

微生物與生物環(huán)境間的關(guān)系

四、教學(xué)難點(diǎn)：

微生物處理污水的一般方法

第十章 傳染與免疫（4小時(shí)）

一、教學(xué)目的：

1了解傳染與免疫的機(jī)制； 2掌握免疫學(xué)方法及其應(yīng)用；

二、主要內(nèi)容： 1有關(guān)免疫的基本概念 2 免疫系統(tǒng) 3抗原 4抗體 5細(xì)胞因子 6補(bǔ)體 7免疫應(yīng)答 8細(xì)胞免疫 9體液免疫 10血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)

三、講授重點(diǎn)： 抗原與抗體概念，血清學(xué)技術(shù)。

四、講授難點(diǎn)：

機(jī)體的免疫反應(yīng)，血清學(xué)技術(shù)。

第四篇：環(huán)境微生物學(xué)

一．緒論

1）微生物：微生物是肉眼看不見(jiàn)的，必須在電子顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下才能看見(jiàn)的所有微小生物的總稱(chēng)。

2）微生物的特點(diǎn)：1個(gè)體極小2分布廣種類(lèi)繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細(xì)胞核，原核微生物只有擬核。第一章

4）病毒：病毒是沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，專(zhuān)性寄生在活的敏感宿主體內(nèi)的超微小生物。

5）病毒的特點(diǎn)：只能在電子顯微鏡下看見(jiàn)。沒(méi)有核糖體，沒(méi)有酶系統(tǒng)，不具備代謝能力，必須專(zhuān)性寄生在活的敏感宿主細(xì)胞內(nèi)。

6）病毒的分類(lèi)：按專(zhuān)性宿主分類(lèi)：動(dòng)物病毒，植物病毒，細(xì)菌病毒，放線菌病毒，藻類(lèi)病毒，真菌病毒。按核算分類(lèi)：DNA病毒，RNA病毒。7）類(lèi)病毒：類(lèi)病毒是比病毒更加小的致病感染因子。

8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質(zhì)感染顆粒）。9）病毒的繁殖過(guò)程：1吸附2侵入3復(fù)制與聚集4宿主細(xì)胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，隨即引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。溫和噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復(fù)制，宿主細(xì)胞不裂解而繼續(xù)生長(zhǎng)，不引起宿主細(xì)胞裂解。含有溫和噬菌體宿主細(xì)胞被稱(chēng)作溶原細(xì)胞。溶原細(xì)胞內(nèi)的溫和噬菌體核酸，稱(chēng)為原噬菌體。

11）噬菌體：噬菌體是感染細(xì)菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。第二章

12）細(xì)菌的形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。分別稱(chēng)為球菌，桿菌，螺旋菌和絲狀菌。13）細(xì)菌：一大類(lèi)細(xì)胞核無(wú)核膜包裹，只存在稱(chēng)作擬核區(qū)的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物。14）細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：細(xì)菌為單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所有的細(xì)菌均有如下結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。部分細(xì)菌有特殊結(jié)構(gòu)：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。

15）細(xì)胞壁：細(xì)胞壁是包圍在細(xì)菌體表最外層的，堅(jiān)韌而有彈性的薄膜。16）原生質(zhì)體：原生質(zhì)體包括細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。

17）細(xì)胞質(zhì)膜：細(xì)胞質(zhì)膜是緊貼在細(xì)胞壁的內(nèi)側(cè)而包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的膜。（半滲透膜），含有蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和多糖。脂質(zhì)是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。18）細(xì)胞質(zhì)膜的生理功能：1,維持滲透壓的梯度和溶質(zhì)的轉(zhuǎn)移2，膜上含有合成細(xì)胞壁和形成橫膈膜組分的膜，故在膜的外表面合成細(xì)胞壁3，膜內(nèi)的中間體含有細(xì)胞色素，參與呼吸作用。4，細(xì)胞質(zhì)膜上含有酶，進(jìn)行物質(zhì)代謝和能量代謝5，細(xì)胞質(zhì)膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長(zhǎng)出，為鞭毛提供附著點(diǎn)。19）核糖體;合成蛋白質(zhì)

20）擬核：細(xì)胞的核因沒(méi)有核膜和核仁，故稱(chēng)為原始核或擬核。21）鞭毛：有細(xì)胞質(zhì)膜上的鞭毛基粒長(zhǎng)出穿過(guò)細(xì)胞壁伸向體外的一條纖細(xì)的波浪狀的絲狀物叫鞭毛。

22）細(xì)菌的染色方法簡(jiǎn)單染色法和復(fù)合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無(wú)菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。2用草酸銨結(jié)晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。3用碘-碘化鉀溶液媒染1MIN，傾去多余染液。4用中性脫色劑如乙醇或丙醇脫色，革蘭氏陽(yáng)性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無(wú)色。5，用番紅溶液復(fù)染1MIN，革蘭氏陽(yáng)性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。24）革蘭氏染色的機(jī)制：1）革蘭氏染色與細(xì)菌等電點(diǎn)有關(guān)系：革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)比革蘭氏陰性菌的等電點(diǎn)低，說(shuō)明革蘭氏陽(yáng)性菌帶的負(fù)電荷比革蘭氏陰性菌多。革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)低，與草酸銨結(jié)晶紫結(jié)合的牢固，對(duì)乙醇脫色抵抗力強(qiáng)，所以革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。2，革蘭氏染色與細(xì)胞壁有關(guān)：革蘭氏陽(yáng)性菌的脂質(zhì)的含量很低，肽聚糖含量高，革蘭氏陰性菌則相反，因此用乙醇脫色時(shí)革蘭氏陰性菌的脂質(zhì)被乙醇溶解，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的孔徑和通透性，乙醇很易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)將結(jié)晶紫和碘-碘化鉀復(fù)合物提取出來(lái)，噬菌體呈現(xiàn)無(wú)色。3,*革蘭氏陽(yáng)性菌含特殊的RNA-Mg2+鹽與革蘭氏染色有關(guān)。25）放線菌：放線菌因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。分為三類(lèi)營(yíng)養(yǎng)菌絲，氣生菌絲，孢子絲。

26）放線菌的結(jié)構(gòu)：放線菌的菌體由纖細(xì)的，長(zhǎng)短不一的菌絲組成，菌絲分枝，為單細(xì)胞，在菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中，核物質(zhì)不斷復(fù)制分裂，然后細(xì)胞不形成橫膈膜，也不分裂，而是無(wú)數(shù)分枝的菌絲組成很細(xì)密的菌絲體。第三章

27）原生動(dòng)物：原生動(dòng)物是動(dòng)物中最原始，最低等，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的單細(xì)胞動(dòng)物。28）原生動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型：1全動(dòng)性營(yíng)養(yǎng)2植物性營(yíng)養(yǎng)3腐生性營(yíng)養(yǎng)

29）原生動(dòng)物的繁殖：有性生殖和無(wú)性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動(dòng)物的作用：所有原生動(dòng)物在污水生物處理過(guò)程中都起著指示生物的作用。31）主要的原生動(dòng)物：P71 32）微型后生動(dòng)物：原生動(dòng)物以外的多細(xì)胞動(dòng)物叫后生動(dòng)物。因有些后生動(dòng)物體型微小，要借助光學(xué)顯微鏡方可看得清楚，故叫微型后生動(dòng)物。33）藻類(lèi)的繁殖;有性生殖和無(wú)性生殖。P84 34）真菌：真菌屬低等生物，種類(lèi)繁多，形態(tài)，大小各異，包括酵母菌，霉菌及各種傘菌。真菌屬真核微生物，有單細(xì)胞和多細(xì)胞之分。

35）酵母菌：酵母菌是單細(xì)胞真菌。分發(fā)酵型和氧化型兩種。氧化型的酵母菌則是無(wú)發(fā)酵能力或發(fā)酵能力弱而氧化能力強(qiáng)的酵母菌。球擬酵母菌，白色假絲酵母菌，類(lèi)酵母的阿氏囊霉屬，短梗霉屬在石油加工業(yè)中起積極作用，如石油脫蠟，降低石油的凝固點(diǎn)等。處理廢水及用酵母菌檢測(cè)重金屬。

36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無(wú)性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生

38）霉菌的繁殖：有性孢子和無(wú)性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。39）傘菌：無(wú)毒的有機(jī)廢水可用于培養(yǎng)食用菌的菌絲體。40）酶：酶是由細(xì)胞產(chǎn)生的，能在體內(nèi)或體外起催化作用的一類(lèi)具有活性中心和特殊構(gòu)想的生物大分子。

41）酶的分類(lèi)：化學(xué)組分；單成分酶（只含有蛋白質(zhì)）和全酶（蛋白質(zhì)及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時(shí)存在起作用）

42）全酶的分類(lèi)：1酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物2酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子

43）酶的分類(lèi)：六類(lèi)，氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶類(lèi)，裂解酶類(lèi)，異構(gòu)酶類(lèi)和合成（連接）酶類(lèi)。

44）酶的反應(yīng)通式：氧化還原酶類(lèi)：AH2+B=A+BH2

轉(zhuǎn)移酶類(lèi)：AR+B=A+BR

水解酶類(lèi)：AB+H2O=AOH+BH

裂解酶類(lèi)：AB=A+B

異構(gòu)酶：---------葡萄糖=果糖（例）

合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi

或

A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專(zhuān)一性（只作用一種或以類(lèi)物質(zhì)）3酶的催化反應(yīng)條件溫和4酶對(duì)環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高

46）酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程式：

E酶S底物ES中間產(chǎn)物P最終產(chǎn)物

47）酶的濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：下圖

48)底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P116 49)溫度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：上圖 50)PH對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P117 51)激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：凡能激活酶的物質(zhì)稱(chēng)酶的激活劑。分為無(wú)機(jī)離子激活劑和有機(jī)化合物兩類(lèi)。

52)抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：引起抑制作用的物質(zhì)稱(chēng)為酶的抑制劑。抑制作用是指由于某些物質(zhì)與酶的活性部位結(jié)合。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。

53)培養(yǎng)基;根據(jù)各種微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需要，包括水，碳源，能源，氮源，無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子等按一定的比例配置而成的，用以培養(yǎng)微生物的基質(zhì)，稱(chēng)為培養(yǎng)基。

54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營(yíng)養(yǎng)物的濃度及配比3調(diào)PH值4考慮加生長(zhǎng)因子5培養(yǎng)基物美價(jià)廉

55)培養(yǎng)基的種類(lèi)：按培養(yǎng)基組成物的性質(zhì)分類(lèi)：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基），復(fù)合培養(yǎng)基。按物理性質(zhì)分為;液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基對(duì)微生物的功能和用途不同：選擇培養(yǎng)基，鑒別培養(yǎng)基，加富培養(yǎng)基。56)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入微生物細(xì)胞的方式：?jiǎn)渭償U(kuò)散，促進(jìn)擴(kuò)散，主動(dòng)運(yùn)輸，基團(tuán)轉(zhuǎn)位

57)單純擴(kuò)散：?jiǎn)渭償U(kuò)散是物理過(guò)程，不包括細(xì)胞的主動(dòng)代謝。雜亂運(yùn)動(dòng)的，水溶性的溶質(zhì)分子（水，無(wú)機(jī)鹽，O2，CO2）通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜中含水的小孔從高濃度區(qū)向低濃度區(qū)擴(kuò)散，不與膜上的分子發(fā)生反應(yīng)，這種擴(kuò)散是非特異的，擴(kuò)散速度慢。

58)促進(jìn)擴(kuò)散：細(xì)胞膜上的載體蛋白分子有和被運(yùn)輸物質(zhì)特異結(jié)合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質(zhì)結(jié)合，形成的底物-載體蛋白復(fù)合體，便從高濃度向低濃度區(qū)域擴(kuò)散或越膜。由于被運(yùn)輸物質(zhì)的濃度在膜的內(nèi)表面較低，所以復(fù)合體傾向解離，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)就留在細(xì)胞內(nèi)，而載體回到膜的外表面，只要存在需要運(yùn)輸物質(zhì)的越膜濃度梯度，這個(gè)過(guò)程就將繼續(xù)進(jìn)行，從而加快了物質(zhì)的運(yùn)輸速度。不消耗能量。

59)主動(dòng)運(yùn)輸：當(dāng)微生物細(xì)胞內(nèi)積累的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度高于細(xì)胞外的濃度時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)就不能按濃度梯度擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)，而是逆濃度梯度被“抽”進(jìn)細(xì)胞內(nèi)。這一過(guò)程需要滲透酶和消耗能量。滲透酶在此過(guò)程中起改變平衡點(diǎn)的作用，這種需要能量和滲透酶的逆濃度梯度積累營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程。60)基團(tuán)轉(zhuǎn)位：基團(tuán)轉(zhuǎn)位是存在于某些原核生物中的一種物質(zhì)運(yùn)輸方式。與主動(dòng)運(yùn)輸相比，有一個(gè)復(fù)雜的運(yùn)輸系統(tǒng)，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)發(fā)生了化學(xué)變化，主要用于糖的運(yùn)輸，運(yùn)輸總效果與主動(dòng)運(yùn)輸相似，可以逆濃度梯度將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移向細(xì)胞內(nèi)，結(jié)果使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的物質(zhì)濃度大大超過(guò)未改變結(jié)構(gòu)的同類(lèi)物質(zhì)的濃度。需要代謝能量。61)微生物的能量代謝：P135-P150

62）微生物的生長(zhǎng)：微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，按照自己的代謝方式進(jìn)行新陳代謝活動(dòng)。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細(xì)胞質(zhì)量不斷迅速增長(zhǎng)，稱(chēng)為生長(zhǎng)。

63）微生物的發(fā)育：從生長(zhǎng)到繁殖這個(gè)由量變到質(zhì)變的過(guò)程叫發(fā)育 64）代時(shí)：細(xì)菌兩次細(xì)胞分裂之時(shí)的時(shí)間。65）生長(zhǎng)曲線：

66)微生物的生存因子：微生物除了需要營(yíng)養(yǎng)外，還需要環(huán)境中合適的生存因子，例如：溫度，PH，氧化還原電位，溶解氧，太陽(yáng)輻射，活度與滲透壓，表面張力等。

67)根據(jù)微生物對(duì)溫度的最適生長(zhǎng)需求，可將微生物分為4大類(lèi)：嗜冷菌，嗜中溫菌，嗜熱菌及嗜超熱菌。

68)大多數(shù)細(xì)菌，藻類(lèi)和原生動(dòng)物的最適PH為6.5-7.5，他們對(duì)PH的適應(yīng)范圍為4-10。69)任何兩種濃度的溶液被半滲透膜隔開(kāi)，均會(huì)產(chǎn)生滲透壓。

70)微生物之間的關(guān)系：微生物之間的關(guān)系有種內(nèi)的關(guān)系和種間的關(guān)系。相同種內(nèi)的關(guān)系有競(jìng)爭(zhēng)和互助。不同種間關(guān)系有6種，競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，原始合作關(guān)系，共生關(guān)系，偏害關(guān)系，捕食關(guān)系，寄生關(guān)系。

71)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系：競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系是指不同的微生物種群在同一環(huán)境中，對(duì)食物等營(yíng)養(yǎng)，溶解氧，空間和其他共同要求的物質(zhì)互相競(jìng)爭(zhēng)，互相收到不利影響。

72)原始合作關(guān)系：原始合作關(guān)系是指兩種可以單獨(dú)生活的生物共存于同一環(huán)境中，相互提供營(yíng)養(yǎng)及其他生活條件，雙方互為有利，相互受益。當(dāng)兩者分開(kāi)時(shí)各自可單獨(dú)生存。

73)共生關(guān)系：共生關(guān)系是指兩種不能單獨(dú)生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中，各自執(zhí)行優(yōu)勢(shì)的生理功能，在營(yíng)養(yǎng)上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關(guān)系就叫共生關(guān)系。74)偏害關(guān)系：共存于同一環(huán)境的兩種微生物，甲方對(duì)乙方有害，乙方對(duì)甲方無(wú)任何影響。一種微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，其中有的產(chǎn)物對(duì)一種（或一類(lèi)）微生物生長(zhǎng)不利，或者抑制或者殺死對(duì)方。上述這種微生物與微生物之間的對(duì)抗關(guān)系叫偏害關(guān)系。分非特異性偏害和特異性偏害。

75)捕食關(guān)系：有的微生物不是通過(guò)代謝產(chǎn)物對(duì)抗對(duì)方，而是吞食對(duì)方，這種關(guān)系稱(chēng)為捕食關(guān)系。

76)寄生關(guān)系：一種生物需要在另一種生物體內(nèi)生活，從中社區(qū)營(yíng)養(yǎng)才得以生長(zhǎng)繁殖，這種關(guān)系成為寄生關(guān)系。77)微生物在土壤中的分布：土壤中微生物的類(lèi)群、數(shù)量與分布，由于土壤質(zhì)地發(fā)育母質(zhì)、發(fā)育歷史、肥力、季節(jié)、作物種植狀況、土壤深度和層次等等不同而有很大差異。土壤微生物中細(xì)菌最多，作用強(qiáng)度和影響最大，放線菌和真菌類(lèi)次之，藻類(lèi)和原生動(dòng)物等數(shù) 量較少，影響也小。土壤中微生物的水平分布取決于碳源。土壤中微生物的垂直分布與紫外輻射的照射，營(yíng)養(yǎng)，水，溫度等因素有關(guān)。78)遺傳和變異是一切生物最本質(zhì)的屬性。

79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中形成的系統(tǒng)。80)遺傳可改變的一面是變異

81)遺傳是相對(duì)的，變異是絕對(duì)的。82)遺傳和變異的物質(zhì)基礎(chǔ)DNA：P203 83)基因突變：基因突變即微生物的DNA被某種因素引起堿基的缺失，置換或插入，改變了基因內(nèi)部原有的堿基排列順序，從而引起其后代表現(xiàn)型的改變。當(dāng)后代突然變現(xiàn)和親代顯然不同的，能遺傳的性狀時(shí)，就稱(chēng)為突變。

84)自發(fā)突變：自發(fā)突變是指某種微生物的自然條件下，沒(méi)有人工參與而發(fā)生的基因突變。原因有多因素低劑量的誘變效應(yīng)，互變異構(gòu)效應(yīng)。

85)誘發(fā)突變：誘發(fā)突變是利用物理或化學(xué)的因素處理微生物群體，促使少數(shù)個(gè)體細(xì)胞的DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，在基因內(nèi)部堿基配對(duì)發(fā)生錯(cuò)差，引起微生物的遺傳性狀發(fā)生突變。分物理誘變，化學(xué)誘變，復(fù)合處理及其協(xié)同效應(yīng)，定向培育和馴化。

86)基因重組：兩個(gè)不同形狀個(gè)體細(xì)胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發(fā)生遺傳變異，產(chǎn)生新品種，此過(guò)程稱(chēng)為基因重組。

87)雜交;雜交是通過(guò)雙親細(xì)胞的融合，使整套染色體的基因重組；或者是通過(guò)雙親細(xì)胞的溝通，使部分染色體基因重組。

88)轉(zhuǎn)化：受體細(xì)胞直接吸收來(lái)自供體細(xì)胞的DNA片段，并把它整合到自己的基因組里，從而獲得了供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)象，成為轉(zhuǎn)化。

89)轉(zhuǎn)導(dǎo);通過(guò)溫和噬菌體的媒介作用，把供體細(xì)胞內(nèi)特定的基因攜帶至受體細(xì)胞中，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱(chēng)為轉(zhuǎn)導(dǎo)。

90)質(zhì)粒：質(zhì)粒在原核微生物中除有染色體外，還含有另一種較小的，攜帶少量遺傳基因的環(huán)狀DNA分子，稱(chēng)為質(zhì)粒，也叫染色體外DNA。質(zhì)粒在基因工程中常被用作基因轉(zhuǎn)移的運(yùn)載工具-載體。

91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，又叫基因剪接或核酸體外重組?；蚬こ淌怯萌斯し椒ò阉枰哪骋还w生物的DNA提取出來(lái)，在離體的條件下用限制性?xún)?nèi)切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長(zhǎng)度有幾千個(gè)核苷酸，用DNA連接酶把它和質(zhì)粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導(dǎo)入某一受體細(xì)胞中，以便外來(lái)的遺傳物質(zhì)在其中進(jìn)行復(fù)制，擴(kuò)增和表達(dá)，再進(jìn)行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對(duì)外源基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離提純，從而獲得新品種。92)基因工程操作分5步：1先從供體細(xì)胞中選擇獲取帶有目的基因的DNA片段（基因分離）； 2將目的DNA的片段和質(zhì)粒在體外重組；（體外重組）3將重組體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞（載體傳遞）；4重組體克隆的篩選與鑒定（復(fù)制表達(dá)）；5外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離與提純（篩選，繁殖）

93）天然淡水水體是人類(lèi)生活和工業(yè)生產(chǎn)用水的水源，也是水生動(dòng)物和植物生長(zhǎng)繁殖的場(chǎng)所。

94）水體自?xún)暨^(guò)程;1有機(jī)污染物排入水體后被水體稀釋?zhuān)袡C(jī)和無(wú)機(jī)固體物沉降至河底。2水體中好氧細(xì)菌利用溶解氧把有機(jī)物分解為簡(jiǎn)單有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，并用以組成自身有機(jī)體，水中溶解氧急速下降至零，此時(shí)魚(yú)類(lèi)絕跡，原生動(dòng)物，輪蟲(chóng)，浮游甲殼動(dòng)物死亡，厭氧細(xì)菌大量繁殖，對(duì)有機(jī)物進(jìn)行厭氧分解。3水體中溶解氧在異樣菌分解有機(jī)物時(shí)被消耗，大氣中的氧剛?cè)苡谒捅谎杆儆玫?，盡管水中藻類(lèi)在白天進(jìn)行光合作用放出氧氣，但復(fù)氧速率小于耗氧速率，氧垂曲線下降。在最缺氧點(diǎn)，有機(jī)物的耗氧速率等于河流的復(fù)氧速率。再往下游的有機(jī)物減少，復(fù)氧速率大于耗氧速率，氧垂1曲線上升。如果河流不再被有機(jī)物污染，河水中溶解氧恢復(fù)到原來(lái)的水平，甚至達(dá)到飽和。4隨著水體的自?xún)?，有機(jī)物缺乏和其他原因（例如陽(yáng)光照射，溫度，PH變化，毒物及生物的抗?jié)嵶饔玫龋┦辜?xì)菌死亡。據(jù)測(cè)定，細(xì)菌死亡數(shù)大約為80%-90%.95）碳循環(huán)：

96）脂質(zhì)的轉(zhuǎn)化：P274 97）氮循環(huán)：P278 98）顯微鏡的分辨率：指顯微鏡能分辨出物體兩點(diǎn)間的最小距離

分辨力=0.61xλ/N.A.計(jì)算題

采用目鏡為16X，物鏡為40/0.65的光學(xué)系統(tǒng)，直徑為0.3μm的微生物在顯微鏡下是否可分辨 解：

分辨率=0.61xλ/N.A.由題目知：N.A.=0.65

λ=0.55

分辨率=0.61x（0.55/0.65）=0.516μm>0.3μm

不可分辨

第五篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

微 生 物 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告（格式標(biāo)準(zhǔn)）

(生命科學(xué)專(zhuān)業(yè))

教 師：黎 勇

目錄索引

實(shí)驗(yàn)一 油鏡的使用和細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法 3

實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌的革氏染色與芽孢染色 5

實(shí)驗(yàn)三 常用培養(yǎng)基的配制 7

實(shí)驗(yàn)四 酵母菌霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及酵母死活細(xì)胞的鑒別 8

實(shí)驗(yàn)

五、微生物大小的測(cè)定與顯微計(jì)數(shù) 10

實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境中微生物的檢測(cè)和分離純化 11

實(shí)驗(yàn)七 細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng) 12

實(shí)驗(yàn)八（綜合實(shí)驗(yàn)）化能異養(yǎng)微生物的分離與純化 13

課程名稱(chēng)： 微生物學(xué)

實(shí)驗(yàn)班級(jí)：化生系生命科學(xué)本科

實(shí)驗(yàn)日期：

指導(dǎo)教師：黎勇 實(shí)驗(yàn)一 油鏡的使用和細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法

〔目的要求〕學(xué)習(xí)并熟練掌握油鏡的使用技術(shù)；觀察細(xì)菌的基本形態(tài)；學(xué)習(xí)觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性的基本方法。

〔基本原理〕

1.N2A=n2sinα

2.D=λ/2N.A

3.目鏡可提高放大倍數(shù)，但有效放大率取決于鏡口率。已經(jīng)分辨的物體不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。

4.用懸滴法或凹玻片法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性時(shí)，可以通過(guò)真運(yùn)動(dòng)能定向地由一處快速運(yùn)動(dòng)來(lái)區(qū)別于顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)。

〔器材用具〕顯微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水紙、擦鏡紙；細(xì)菌、放線菌等固定裝片；培養(yǎng)18小時(shí)左右的B.subtilis.S.arueus菌斜面培養(yǎng)物；無(wú)菌水、生理鹽水。

〔方法步驟〕：

（一）油鏡的使用

鏡檢裝片在中倍（或高倍鏡）下找到目的物，并使位于視野正中

聚光鏡上升到最高位置，虹彩光圈開(kāi)到最大，鏡頭轉(zhuǎn)開(kāi)成八字形

在玻片的鏡檢部位（光斑處）滴一滴香柏油

油鏡轉(zhuǎn)入正下方

側(cè)視小心上升載物臺(tái)（縮短鏡頭與裝片距離，鏡頭浸入油中，至油圈不擴(kuò)大為止鏡頭幾與裝片接觸）粗調(diào)器徐徐下降載物臺(tái)（密切注視視野，當(dāng)捕捉到物像時(shí)，立即用細(xì)調(diào)器校正）仔細(xì)觀察并繪圖

取出裝片，清洗油鏡：擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油

擦鏡紙沾少許二甲苯擦去殘留（用手指輔助，迅速拭擦一、二次）

用清潔擦鏡紙仔細(xì)擦干二甲苯（2-3次）。

（二）細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法：涂片

干燥

火焰固定

染色

水洗

干燥

油鏡觀察

（三）細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察 取潔凈蓋玻片，四周涂上凡士林

滴加一小滴菌懸液

凹玻片的凹窩向下蓋于蓋玻片上

翻轉(zhuǎn)觀察

〔結(jié)果分析〕

1、畫(huà)一圓圈表示視野，選取所觀察的微生物繪圖，注意特殊結(jié)構(gòu)、形狀和排列。（描繪時(shí)按視野實(shí)際大小5－10倍繪制）

菌名：大腸桿菌

菌名：金黃色葡萄球菌

放大倍數(shù)：100310（35）

放大倍數(shù)：100310（35）

特殊結(jié)構(gòu)：無(wú) 特殊結(jié)構(gòu)：無(wú)

視野觀察下微生物的形態(tài)

2、油鏡使用時(shí)為什么必須干燥裝片？

防止水油分層，光受到折射而影響油鏡性能的發(fā)揮

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

首次實(shí)驗(yàn)中有幾個(gè)要點(diǎn)：一是按無(wú)菌操作取用菌；二是涂片技術(shù)的掌握；三是油鏡使用技術(shù)。凡實(shí)驗(yàn)中學(xué)生的所思所想，如無(wú)菌操作技術(shù)要點(diǎn)、自行處理實(shí)驗(yàn)材料、失敗與思考等均可進(jìn)行討論（如涂片時(shí)蒸餾水不宜過(guò)多、取用菌時(shí)防止菌被灼燙變形、取菌宜少不宜多等均是可以討論的內(nèi)容）。

實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌的革氏染色與芽孢染色

〔目的要求〕觀察細(xì)菌菌落的特征；掌握簡(jiǎn)單染色法、革蘭氏染色法的原理及操作步驟；在油鏡下觀察細(xì)菌個(gè)體形態(tài)；學(xué)習(xí)環(huán)境中微生物的檢查方法，并加深對(duì)微生物分布廣泛性的認(rèn)識(shí)

〔器材用具〕E.coliB.subtilisS.aureus.的斜面培養(yǎng)物（18－24小時(shí)）以及菌落平板各一個(gè)；染液：草酸銨結(jié)晶紫、劃蘭氏染液、盧戈氏碘、95%的乙醇、蕃紅；無(wú)菌水、顯微鏡、載片、濾紙、液體石蠟是、、擦鏡紙、接種環(huán)。

〔方法內(nèi)容〕：

（一）實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中微生物的檢查

（二）革蘭氏染色法 涂片固定

冷卻

結(jié)晶紫染色1min 水洗

碘媒染1min 95%乙醇30-60s 水洗

番紅復(fù)染2－3min

水洗

干燥

油鏡鏡檢

（三）芽孢染色 涂片固定

孔雀綠加熱染色（勿干）5min 水洗

番紅復(fù)染1min

水洗

鏡檢

〔結(jié)果分析〕實(shí)驗(yàn)結(jié)果被染成紫色者即為革蘭氏陽(yáng)性，被染成紅色者為革蘭氏陰性；菌體染成紅色，芽孢被染成綠色。

菌名：大腸桿菌

菌名：金黃色葡萄球菌

放大倍數(shù)：100310（35）

放大倍數(shù)：100310（35）

染色反應(yīng)：紅色（陰性）染色反應(yīng)：紫色（陽(yáng)性）

菌名：枯草芽孢桿菌

放大倍數(shù)：100310（35）

染色反應(yīng)：紫色（陽(yáng)性）

圖1 視野觀察下細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)

圖2 枯草芽孢桿菌芽孢形態(tài)圖

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

嚴(yán)格掌握脫色程度，是成敗的關(guān)鍵。若脫色時(shí)間過(guò)度，則陽(yáng)性菌初時(shí)之紫色脫出，復(fù)染成紅色，誤成陰性，反之脫色時(shí)間不足，陰性菌在初染時(shí)的紫色未能脫出，復(fù)染時(shí)不能染成紅色，誤以為陽(yáng)性菌；涂片不能厚；盧弋氏碘即用即配。

作業(yè)

1、繪出所觀察到到細(xì)菌的視野圖，并說(shuō)明染色反應(yīng)。

2、哪些因素會(huì)影響到革蘭氏染色結(jié)果的正確？其中是關(guān)鍵的一步是什么？ 菌齡及培養(yǎng)條件和染色技術(shù)是最主要的，關(guān)鍵是脫色。

3、怎樣對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色，以證明你的結(jié)果的正確？

與已知菌混合涂片比較。

實(shí)驗(yàn)三 常用培養(yǎng)基的配制

〔目的要求〕了解培養(yǎng)基的配制原理；了解培養(yǎng)基常規(guī)配制程序；了解培養(yǎng)基過(guò)程各環(huán)節(jié)的要求和注意事項(xiàng)。了解半合成培養(yǎng)基的配制原理，學(xué)習(xí)掌握肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基的配制方法。

〔器材用具〕等配各種培養(yǎng)基的組成成分，瓊脂、1N NaoH溶液 1N HCl天平或臺(tái)秤高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。藥匙、稱(chēng)量紙、pH試紙、記號(hào)筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙報(bào)紙等。

〔方法步驟〕

(一)玻璃器皿的洗滌和包裝 以小組為單位清洗、控水，按9個(gè)為一組，分別用報(bào)紙包好并放入烘箱中等待滅菌。

(二)液體及固體培養(yǎng)基的配制過(guò)程

原料稱(chēng)量（按配方次序）

溶解

調(diào)節(jié)ｐH 過(guò)濾澄清

分裝

塞棉塞和包札

滅菌

分別按教材配方配制牛肉膏蛋白胨、馬鈴薯液體及固體培養(yǎng)基。

(三)培養(yǎng)基的分裝 用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及彈簧夾制作分裝裝置

選用153150平口試管或150mL錐形瓶貼上標(biāo)簽

分裝（至試管高度1/4-1/3，斜面制作用1/5，半固體用1/3）

要求：每人制作斜面3支。其余分裝至錐形瓶中。

(四)棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎 分別制作試管及錐形瓶棉塞并塞好好以牛皮紙包裝頭部。

(五)培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基用濕熱法滅菌；皿用干熱法分別滅菌。

(六)斜面和平板的制作（下次試驗(yàn)完成）

(七)培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查（下次實(shí)驗(yàn)完成）

(八)無(wú)菌水的制備 同時(shí)制作無(wú)菌生理鹽水，置錐形瓶中備用。

〔結(jié)果分析〕

以斜面接種培養(yǎng)驗(yàn)證培養(yǎng)基配制效果；

以平板制作及接種24小時(shí)培養(yǎng)驗(yàn)證滅菌效果；

簡(jiǎn)述移液管包裝的注意事項(xiàng)。

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

滅菌器的滅菌效果必須間隔一段時(shí)間，加以驗(yàn)證，主要方法除無(wú)菌檢查外，還通過(guò)壓力試紙同時(shí)滅菌來(lái)驗(yàn)證其壓力與溫度；培養(yǎng)基通常成批制作備用。但制作后，其貯藏時(shí)間有一定限制，一般室溫條件下不超過(guò)三周；冰箱4℃條件下可貯藏半年，過(guò)期不能用。

作業(yè)：

1、記錄培養(yǎng)基的成分和名稱(chēng)

2、分析所配制培養(yǎng)基的碳源、氮源、能源及無(wú)機(jī)鹽、維生素的來(lái)源。所配制均為天然培養(yǎng)基，各成分主要來(lái)自有機(jī)質(zhì)，微量元素可以由自來(lái)水提供。

3、什么是天然培養(yǎng)基？什么是半合成、合成培養(yǎng)基？

實(shí)驗(yàn)四 酵母菌霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察及酵母死活細(xì)胞的鑒別

〔目的要求〕觀察并掌握酵母菌霉菌的菌落特征、個(gè)體形態(tài)、生長(zhǎng)及繁殖方式。學(xué)習(xí)酵母死活細(xì)胞的鑒別方法。

〔材料用具〕釀酒酵母、紅酵母、假絲酵母；(釀酒酵母和紅酵母菌落平板各一個(gè)。釀酒酵母豆芽汁斜面及釀酒酵母醋酸鈉斜面各一支，假絲酵母加蓋片培養(yǎng)的平板)；7.6%孔雀綠染液，0.5%蕃紅染液，蘇丹黑染液，二甲苯，中性紅染液，碘液；目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺；載片及蓋片。

〔方法步驟〕

(一)菌落特征的觀察

(二)個(gè)體形態(tài)與出芽

(三)子囊孢子的觀察

(四)酵母死活細(xì)胞的觀察。

〔結(jié)果分析〕描述釀酒酵母霉菌的菌落形態(tài)特征；繪圖釀酒酵母的菌體、出芽方式及細(xì)胞細(xì)節(jié)；

（一）酵母的菌落濕潤(rùn)，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；

菌名：釀酒酵母

放大倍數(shù)：100310（35）

特殊結(jié)構(gòu)：芽（出芽繁殖）

（二）霉菌

菌落特征：干燥，正反面及中央與邊緣不一致；大而疏松。

（如右圖）

菌名：青霉（Penicillium）

菌名：毛霉（Circinella）

放大倍數(shù)：100310（35）

放大倍數(shù)：100310（35）

特殊結(jié)構(gòu)：分生孢子梗（帚狀分枝）

特殊結(jié)構(gòu)：孢子囊

菌名：曲霉（Aspergillus）

菌名：根霉（Rhizopus）

放大倍數(shù)：模式圖

放大倍數(shù)：100310（35）

特殊結(jié)構(gòu)：足細(xì)胞 特殊結(jié)構(gòu)：假根

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

作業(yè)：

1、繪圖說(shuō)明所觀察到的酵母菌、霉菌的形態(tài)特征。

實(shí)驗(yàn)

五、微生物大小的測(cè)定與顯微計(jì)數(shù)

〔目的要求〕學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法；了解血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造及計(jì)數(shù)原理，掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。

〔材料用具〕啤酒酵母；顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺；血球計(jì)數(shù)板；蓋玻片，載玻片，滴管，試管，無(wú)菌水，〔方法步驟〕

(一)酵母細(xì)胞大小測(cè)定

(1)目鏡測(cè)微尺的校正(2)細(xì)胞大小的測(cè)定

(二)顯微計(jì)數(shù)法

(1)鏡檢計(jì)數(shù)室

(2)菌懸液制備及加樣

(3)計(jì)數(shù)

(4)清洗計(jì)數(shù)板

〔結(jié)果分析〕結(jié)果記錄入表中。

1、目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果（精確到零點(diǎn)幾小格）物鏡倍數(shù)

（目鏡均為10倍）目鏡測(cè)微尺的格數(shù)（小格）

鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)（小格）

目鏡測(cè)微尺的每格的長(zhǎng)度（μm）40倍

2、酵母菌大小測(cè)定結(jié)果 菌號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 目鏡測(cè)微尺的格數(shù)（小格）長(zhǎng)軸

短軸

酵母大小平均值＝±（保留小數(shù)點(diǎn)后2位）

長(zhǎng)軸＝

3、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)酵母菌懸液計(jì)數(shù)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)次數(shù) 各中格中菌數(shù) 總菌數(shù) 稀釋倍數(shù)平均值

菌數(shù)(個(gè)/mL)1

短軸＝

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

作業(yè)：

1.什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡和物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺校正。2..根據(jù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)說(shuō)明血細(xì)胞計(jì)數(shù)法的誤差主要來(lái)自哪些方面？如何減少誤差？ 3..在滴加菌液時(shí)，為什么要先置蓋玻片然后滴加菌液？能否先加菌液再置蓋玻片？ 4..用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物數(shù)量時(shí)，哪些步驟易造成誤差？如何預(yù)防？計(jì)算細(xì)胞數(shù)目時(shí)此法是否可以適用？ 實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境中微生物的檢測(cè)和分離純化 〔目的要求〕

1、學(xué)習(xí)并掌握各種無(wú)菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進(jìn)行微生物的劃線分離接種

2、學(xué)習(xí)掌握平板菌落計(jì)數(shù)法 〔基本原理〕

土壤是微生物生活的大本營(yíng)，是生物多樣性的重要場(chǎng)所，也是發(fā)揚(yáng)微生物資源的重要基地，可以從中分離純化得到許多的菌株。劃線法是常用的分離與純化方法，通過(guò)無(wú)菌操作條件下，“漸劃漸稀”的效應(yīng)而得到菌落純的菌株。

平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋?zhuān)蛊渲械奈⑸锍浞址稚⑿纬蓡蝹€(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品含菌量。這種方法為活菌計(jì)數(shù)法，廣泛應(yīng)用于生物制品及污染程度（含菌指數(shù)）的檢測(cè)。

〔材料與用品〕

土樣10g，無(wú)菌平皿（20套）及無(wú)菌水，牛肉膏蛋白胨平板（2只）；取液器（0.5mL及1mL各三支）；無(wú)菌有帽試管，三角瓶，無(wú)菌涂棒，接種環(huán)，記號(hào)筆，酒精燈，火柴，試管架 〔方法步驟〕

1、周?chē)h(huán)境中微生物的檢測(cè)

平板分4個(gè)區(qū)做好標(biāo)記

用未洗的手指及肥皂洗過(guò)的手指（1次、2次、3次，或其它）分別在四個(gè)區(qū)上涂抹

倒置到37℃培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果。

2、土壤中微生物分離純化及平板計(jì)數(shù)

采土樣（5－20cm）土10g，裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中，封好袋口

1.0g加入99mL無(wú)菌水（三角瓶）中

1mL無(wú)菌吸管0.5mL加入到4.5mL無(wú)菌水試管中，吹吸三次，振蕩均勻(10-3)。同法得10－4－10－6土壤溶液

用接種環(huán)沾取10-2土壤懸液在已經(jīng)凝固的平板表面進(jìn)行劃線分離

分別取各濃度土壤懸液0.1mL對(duì)號(hào)均勻地放入已寫(xiě)好稀釋度的牛肉膏蛋白胨平板，用無(wú)菌涂棒涂勻（多涂幾遍）。每個(gè)濃度做3個(gè)平板?！步Y(jié)果分析〕

1、有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí)，棄用。

2、選擇平均菌落數(shù)在30－300之間的平板。只有一個(gè)濃度符合此范圍時(shí)，以該平均菌落數(shù)為準(zhǔn)；有兩個(gè)濃度的平板菌落數(shù)在30－300之間時(shí)，按兩者的總數(shù)平均決定，比值小于2，取平均，比值大于2則取較少的菌落總數(shù)。所有菌落數(shù)大于300，取稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)；所有菌落數(shù)均小于30，取稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)（即當(dāng)所有菌落數(shù)均不在30－300之間時(shí)，此實(shí)驗(yàn)的精確度要求下，可以最接近30或300的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)）。

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

土壤中的菌數(shù)量在哪個(gè)數(shù)量級(jí)？你分離的微生物主要有哪些種類(lèi)？為什么？

105數(shù)量級(jí)，主要是細(xì)菌，也有酵母。主要通過(guò)其菌落特征來(lái)判斷。細(xì)菌的菌落為濕潤(rùn)，其正反面顏色一般一致，普遍比較小。酵母的菌落濕潤(rùn)，大而隆起，顏色多樣，正反面顏色一致，不透明，邊緣整齊；而霉菌菌落特征：干燥，正反面及中央與邊緣不一致；大而疏松。

實(shí)驗(yàn)七 細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)

〔目的要求〕了解細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)方法；通過(guò)對(duì)不同細(xì)菌對(duì)不同含碳、氮化合物的分解利用情況，了解基代謝多樣性；學(xué)習(xí)不同培養(yǎng)基基中的不同生長(zhǎng)現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。

〔實(shí)驗(yàn)原理〕各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣，因而代謝產(chǎn)物存在差別。細(xì)菌的這種代謝方式可供鑒別細(xì)菌之用。用生理生化試驗(yàn)的方法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，從而鑒別細(xì)菌的種屬，稱(chēng)為細(xì)菌的生理生化反應(yīng)。有些細(xì)菌能發(fā)酵葡萄糖，而不能分解乳糖；有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸和氣體；有的細(xì)菌則只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溴甲酚紫（ｐH4.4紅色～ｐH6.2黃色），當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，培養(yǎng)基由紫色變黃，氣體的產(chǎn)生則可由試管中倒置的杜氏小管中有無(wú)氣泡來(lái)判斷。大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇，V.P.試驗(yàn)為陰性。其進(jìn)行混合酸發(fā)酵，故甲基紅試驗(yàn)為陽(yáng)性。產(chǎn)氣桿菌則進(jìn)行丁二醇發(fā)酵，V.P試驗(yàn)為陽(yáng)性，甲基紅試驗(yàn)為陰性。

〔材料用具〕E.coli，變形桿菌，枯草芽孢桿菌，產(chǎn)氣桿菌，糞水中分離的未知菌種斜面，糖發(fā)酵培養(yǎng)基；超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱，試管，移液管，杜氏小管。甲基紅試劑、V.P.試劑。

〔實(shí)驗(yàn)步驟〕各取4支相應(yīng)的培養(yǎng)基，標(biāo)記好發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱(chēng)、所接菌種名及組號(hào)，1支接大腸桿菌，1支接變形桿菌，1支接未知斜面菌種，1支不接。

1、糖發(fā)酵試驗(yàn)

2、甲基紅試驗(yàn)

3、V.P.試驗(yàn)

接種后37℃分別培養(yǎng)24h、48h、48h，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表中?！矊?shí)驗(yàn)結(jié)果〕

表7－1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 編號(hào) 大腸桿菌 枯草芽孢桿菌 產(chǎn)氣桿菌 未知菌 CK 葡萄糖發(fā)酵

乳糖發(fā)酵

甲基紅實(shí)驗(yàn)

V.P.試驗(yàn)

〔實(shí)驗(yàn)討論〕

如：討論通過(guò)哪些生理生化反應(yīng)可以區(qū)分大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌？

大腸桿菌不產(chǎn)生丁二醇，V.P.試驗(yàn)為陰性。其進(jìn)行混合酸發(fā)酵，故甲基紅試驗(yàn)為陽(yáng)性。產(chǎn)氣桿菌則進(jìn)行丁二醇發(fā)酵，V.P試驗(yàn)為陽(yáng)性，甲基紅試驗(yàn)為陰性。

實(shí)驗(yàn)八（綜合實(shí)驗(yàn)）化能異養(yǎng)微生物的分離與純化 [目的要求]

1．掌握細(xì)菌、放線菌、酵母苗和霉菌稀釋分離、劃線分離等技術(shù)。

2．學(xué)習(xí)從樣品中分離、純化出所需菌株。

3．學(xué)習(xí)并掌握平板傾注法和斜面接種技術(shù)，了解培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類(lèi)微生物的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時(shí)間。

4．學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)法。[基本原理]

土壤是微生物生活的大本營(yíng)，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類(lèi)微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離細(xì)菌、放線菌和霉菌；白面曲(發(fā)面用的引子)或酒曲或果園土中分離酵母菌。

為了分離和確保獲得某種微生物的單苗落，首先要考慮制備不同稀釋度的苗懸液。各類(lèi)菌的稀釋度因菌源、采集樣品時(shí)的季節(jié)、氣溫等條件而異。其次，應(yīng)考慮各類(lèi)微生物的不同特性，避免樣品中各類(lèi)微生物的相互干擾。細(xì)菌或放線苗在中性或微堿性環(huán)境較多．但細(xì)菌比放線萌生長(zhǎng)快，分離放線菌時(shí)，一般在制備土壤稀釋液時(shí)添加10%酚或在分離培養(yǎng)基中加相應(yīng)的抗生素以抑制細(xì)菌和霉菌(如加鏈霉素25-50μg mL以抑制細(xì)菌；添加制霉菌素50μg／mL或多菌靈30μ／mL以抑制霉菌)；酵母苗和霉菌都喜酸性環(huán)境，一般酵母菌只能以糖為碳源，不能直接利用淀粉，酵母菌在pH 5時(shí)生長(zhǎng)極快。而細(xì)菌生長(zhǎng)適宜的酸堿度為pH7，所以分離酵母菌時(shí)只要選擇好適宜的培養(yǎng)基和pH，可降低細(xì)菌增殖率，霉菌生長(zhǎng)慢，也不干擾酵母菌分離。若分離霉菌，需降低細(xì)菌增殖率，一般培養(yǎng)基臨用前須添加滅過(guò)菌的乳酸或鏈霉素。為了防止菌絲蔓延干擾菌落計(jì)數(shù)，分離霉菌時(shí)常在培養(yǎng)基中加入化學(xué)抑制劑。要想獲得某種微生物的純培養(yǎng)，還需提供有利于該微生物生長(zhǎng)繁殖的最適培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。四大類(lèi)微生物的分離培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間見(jiàn)表所示。[材料與用品] 1.菌源 選定采土地點(diǎn)舌。鏟去表土層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g，裝入已滅過(guò)菌的牛皮紙袋內(nèi)．封好袋口，并記錄取樣地點(diǎn)、環(huán)境及日期。土樣采集后應(yīng)及時(shí)分離，凡不能立即分離的樣品，應(yīng)保存在低溫、干燥條件下，盡量減少其中菌種的變化。從面曲中分離酵母菌。也可用酒曲等替代。

2．培養(yǎng)基 肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、高氏合成一號(hào)培養(yǎng)基、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基(制平板和斜面，3．無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水 配制生理鹽水．分裝于250mL錐形瓶中，每瓶裝99mL(或95mL分離霉菌用)，每瓶?jī)?nèi)裝10粒玻璃珠；分裝試管，每管裝約4.5-5mL(不超過(guò)試管高度的1／5)。

4．其他試劑與用品 無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌移液管、無(wú)菌玻璃涂棒(刮刀)、稱(chēng)量紙、藥匙、洗耳球、10％酚溶液。[實(shí)驗(yàn)步驟]

1．稀釋分離法平板分離菌有傾注法和涂布法兩種。本次實(shí)驗(yàn)分離細(xì)菌、放線菌、霉菌時(shí)采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法：

(1)細(xì)菌的分離 1)制備土壤稀釋液 稱(chēng)取土樣1 g，在火焰旁加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水錐形瓶中．振蕩10一20min，使土樣中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成10-2稀釋度的土壤稀釋液。然后按10倍稀釋法進(jìn)行稀釋分離，以制備10-2稀釋度為例，具體操作過(guò)程如下：取4.5 mL無(wú)菌水試管6支，按10-2......10-7順序編號(hào)，放置在試管架上。取無(wú)菌移液管一支，從移液管包裝紙?zhí)?中間撕口，將包裝紙?zhí)追殖缮稀⑾聝啥?，去除下段包裝紙?zhí)?，在移液管上端管口裝橡皮頭，取出下段移液管紙?zhí)追胖米烂妫杂沂帜粗?、食指、中指拿住移液管卜端的橡皮頭，將吸液端口及移液管外部表面迅速通過(guò)火焰2～3次，殺滅撕紙?zhí)讜r(shí)可能污染的雜菌，切忌不要用手指去觸摸移液管吸液端口及外部。左手持錐形瓶底，以右手掌及小指、無(wú)名指夾住錐形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞(棉塞夾在于上，不能亂放在桌上)，將lmL移液管的吸液端伸進(jìn)振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部，用手指輕按橡皮頭，在錐形瓶?jī)?nèi)反復(fù)吹吸二次(吹吸時(shí)注意第二次液面要高于第一次吹吸 的液面)，然后準(zhǔn)確吸取0.5mL10-2土壤稀釋液，右手將棉塞插回錐形瓶上，左手放下錐形瓶，換持一支盛有4.5mL無(wú)菌水的試管，依前法在火焰旁拔除試管帽(或棉塞)，將0.5m10-2土壤稀釋液注入4.5m1無(wú)菌水試管內(nèi)，制成l0-3的土壤稀 釋液，將此移液管通過(guò)火焰再插入原來(lái)包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi)，以備再用。另取一只未用過(guò)的無(wú)菌移液管在試管內(nèi)反復(fù)吹吸三次，然后取出移液管，并將其通過(guò)火焰再插入原來(lái)包裝移液管的下段紙?zhí)變?nèi)，以備再用。蓋上試管帽。右手持10-3稀釋液試管在左手十敲打20～30次。混勻土壤稀釋液。再?gòu)募執(zhí)兹〕鲈瓉?lái)的移液管，插入稀釋液已搖勻的試管內(nèi)，再吹吸三次，然后準(zhǔn)確吸出o.5mL 10-3的稀釋液。置第二支裝有4.5 m1無(wú)菌水試管，制成10-4：土壤稀釋液。用同法再制成 10-

5、10-

6、10一7的土壤稀釋液(為避免稀釋過(guò)程誤差，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，最好每一個(gè)稀釋度更換一支移液管)：最后用的移液管重新放人紙?zhí)變?nèi)。待滅菌后，再洗刷或?qū)⒂眠^(guò)的移液管放在廢棄物筒中．用3%-5%來(lái)蘇爾浸泡l h后再滅菌洗滌。2)傾注法分離 取無(wú)菌培養(yǎng)皿6-9套，分別于培養(yǎng)皿底面按稀釋度編號(hào)。稀釋完畢后，用原來(lái)的移液管從菌液濃度最小的10-7土壤稀釋液開(kāi)始吸取1mL稀釋液，按無(wú)菌操作技術(shù)加到和應(yīng)編號(hào)的無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)。再依同方法分別吸取1mLl0-

6、10-5的土壤稀釋液，各加到和應(yīng)編號(hào)為10-

6、10-5的無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)。將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至45-50度左右，分別傾入到已盛有I0-

5、10-

6、10-7土壤稀釋液的無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)。注意：溫度過(guò)高易將菌燙死，且皿蓋上冷凝水太多，會(huì)影響分離效果；低于45％培養(yǎng)基易凝固，平板易出現(xiàn)凝塊、高低不平。傾倒培養(yǎng)基時(shí)注意無(wú)菌操作，要在火焰旁進(jìn)行。左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶底部，左手同時(shí)用小指和手掌將棉塞拔開(kāi)，灼燒瓶口．用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開(kāi)一縫，至瓶口正好伸入，傾入培養(yǎng)基約12-15 mL，將培養(yǎng)皿在桌面上輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使稀釋的菌懸液與融化的瓊脂培養(yǎng)基混合均勻．混勻后靜置桌上，待凝。3)培養(yǎng) 待平板完全冷凝后，將平扳倒置于35-37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24～48h觀察結(jié)果。

(2)放線菌的分離

1)制備土壤稀釋液 稱(chēng)取土樣l g，加入盛有99m1并裝有玻璃珠的無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水錐形瓶中．并加人lo滴10％酚溶液(抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，可用l％的重鉻酸鉀溶液代替lo%酚溶液．效果更好)。振蕩后靜置5min，即成10-2土壤稀釋液。

2)傾注法分離 按前法將土壤稀釋液分別稀釋為10-

3、10-

4、10-5三個(gè)稀釋度，然后用無(wú)菌移液管依次分別吸取lmL 10-

5、l0-

4、10-3土壤稀釋液于對(duì)應(yīng)編號(hào)的無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用高氏合成1號(hào)培養(yǎng)基依前法傾倒平板，每個(gè)稀釋度做2～3個(gè)平行培養(yǎng)皿。理鹽水內(nèi)，振蕩20min，即成10-2的面曲稀釋液。若選用果園上樣，也依前法稱(chēng)取土樣，制成10-2壤稀釋液。3)涂布法分離 依前法向無(wú)菌培養(yǎng)皿中傾倒已融化并冷卻至45-50℃的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基，待平板冷凝后，用無(wú)菌移液管分別吸取上述l0-

6、l0-

5、10-4三個(gè)稀釋度苗懸液0.1mL，依次滴加于對(duì)應(yīng)編號(hào)已制備好的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基平板上。右手持無(wú)菌玻璃涂棒，左手拿培養(yǎng)皿，并用拇指將皿蓋打開(kāi)一縫，在火焰旁右手持玻璃涂棒于培養(yǎng)皿平板表面將菌液自平板中央均勻向四周涂布擴(kuò)散，切忌用力過(guò)猛將菌液直接推向平板邊緣或?qū)⑴囵B(yǎng)基劃破。4)培養(yǎng) 接種后，將平板倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2～3 d觀察結(jié)果。

2劃線分離法 菌種被其他雜苗污染時(shí)或混合菌懸液常用劃線法進(jìn)行純種分離。此法將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細(xì)胞在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散成由單個(gè)微生物細(xì)胞繁殖而成的菌落，從而達(dá)到純化目的。平板制作方法如前所述。但劃線分離的培養(yǎng)基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每皿約傾倒20mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面光滑。劃線分離主要有連續(xù)劃線法和分區(qū)劃線法兩種。(1)連續(xù)劃線法 連續(xù)劃線法是從平板邊緣一點(diǎn)開(kāi)始，連續(xù)作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當(dāng)中不需灼燒接種環(huán)上的菌。以無(wú)菌操作用接種環(huán)直接取平板上待分離純化的菌落。將菌種點(diǎn)種在平板邊緣一處，取出接種，燒去多余菌體。將接種環(huán)再次通過(guò)稍打開(kāi)皿蓋的縫隙伸人平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻．然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成30～40°的角度，以手腕力量在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線。接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內(nèi)劃破培養(yǎng)基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊。劃線完畢，關(guān)上皿蓋。灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。培養(yǎng)皿倒置于適溫的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)(以免培養(yǎng)過(guò)程中皿蓋冷凝水滴下，沖散巳分離的菌落)。培養(yǎng)后在劃線甲板上觀察沿劃線處長(zhǎng)出的菌落形態(tài)，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。(2)分區(qū)劃線法平板分四區(qū)，故又稱(chēng)四分區(qū)劃線法。劃線時(shí)每次將平板轉(zhuǎn)動(dòng)60一70°劃線，每換一次角度，應(yīng)將接種環(huán)上的菌燒死后，再在上次劃線末尾處繼續(xù)劃線。取菌、接種、培養(yǎng)方法與連 續(xù)劃線法相似。分區(qū)劃線法劃線分離的平板分4個(gè)區(qū)，其中第四區(qū)是單菌落的主要分布區(qū)，故其劃線面積應(yīng)最大。為防止第四區(qū)內(nèi)劃線與l、2、3區(qū)線條和接觸，應(yīng)使4區(qū)線條與l區(qū)線條和平行，這樣區(qū)與區(qū)間線條夾角最好保持120度左右。先將接種環(huán)沾取少量菌在平板1區(qū)劃3～5條平行線，取出接種環(huán)，左手關(guān)上皿蓋．將平板轉(zhuǎn)動(dòng)60～70°，右手把接種環(huán)上多余苗體燒死，將燒紅的接種環(huán)在子板邊緣冷卻，再按以上方法以1區(qū)劃線的苗體為菌源，由1區(qū)向2區(qū)作第二次早行劃線。第二次劃線完畢，同時(shí)再把平皿轉(zhuǎn)動(dòng)約60一70°，同樣依次在5、1區(qū)劃線。劃線完畢，灼燒接種環(huán)，關(guān)上皿蓋，同上法培養(yǎng)，在劃線區(qū)觀察單菌落。本次實(shí)驗(yàn)在分離細(xì)菌的平板上選取單菌落。于肉膏蛋白胨平板上再次劃線分離，使菌進(jìn)一步純化。劃線接種后的平板，倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

3．微生物菌落計(jì)數(shù)(平板菌落計(jì)數(shù)法)含菌樣品的微生物經(jīng)稀釋分離培養(yǎng)后，每一個(gè)活苗細(xì)胞可以在平板上繁殖形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的菌落。故可根據(jù)平板上菌落的數(shù)目．推算出每克含菌樣品中所含的活菌總數(shù)。每克菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)＝(同一稀釋度的3個(gè)平板上菌落平均數(shù)X稀釋倍數(shù))/含菌樣品克數(shù)。一般由三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每克含菌樣品中的總活菌數(shù)和同一稀釋度出現(xiàn)的 總活菌數(shù)均應(yīng)很接近，不同稀釋度平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)應(yīng)呈規(guī)律性地減少。如相差較大，表示操作不精確。通常以第二個(gè)稀釋度的平板上出現(xiàn)50個(gè)左右菌落為好。也可用菌落計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。

4．平板菌落形態(tài)及個(gè)體形態(tài)觀察 從不同平板上選擇不同類(lèi)型菌落用肉眼觀察，區(qū)分細(xì)菌、放線菌、酵母茵和霉菌的菌落形態(tài)特征。并用接種環(huán)挑菌，看其與基質(zhì)結(jié)合緊密程度。再用接種環(huán)挑取不同菌落制片，在顯微鏡下進(jìn)行個(gè)體形態(tài)觀察。記錄所分離的含菌樣品中明顯不同的各類(lèi)菌株的主要菌落特征和細(xì)胞形態(tài)。

5.分離純化菌株轉(zhuǎn)接斜面(斜面接種)在分離細(xì)菌、放線菌，酵母苗和霉菌的不同平板上選擇分離效果較好，認(rèn)為已經(jīng)純化的苗落各挑選一個(gè)用接種環(huán)接種斜面。將細(xì)菌接種于肉膏蛋白胨斜面，放線菌接種于高氏1號(hào)斜面，酵母菌和霉菌接種于豆芽汁葡萄糖斜面上。貼好標(biāo)簽，在各自適宜的溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)后觀察是否為純種，記錄斜面培養(yǎng)條件及苗苔特征。置冰箱保藏。[實(shí)驗(yàn)報(bào)告] 1.簡(jiǎn)述分離微生物純種的原則及列出分離操作過(guò)程的關(guān)鍵無(wú)菌操作技術(shù)。2.四大類(lèi)微生物的分離方法及培養(yǎng)條件

3.分離的微生物平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果

4.樣品中單菌落菌株的菌落培養(yǎng)特征與鏡檢形態(tài) 5.斜面培養(yǎng)條件及菌苔特征(包括純化結(jié)果)。

[思考題] 1.稀釋分離時(shí)．為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45～50℃左右才能傾入到裝有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)? 2.劃線分離時(shí)為什么每次都要將接種環(huán)上多余的菌體燒掉?劃線時(shí)為何不能重疊? 1.3.在恒溫箱中培養(yǎng)微生物時(shí)為何培養(yǎng)皿均需倒置? 4.分離某類(lèi)微生物時(shí)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)其他類(lèi)微生物，請(qǐng)說(shuō)明原因。應(yīng)該如何進(jìn)一步分離和純化；經(jīng)過(guò)-次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應(yīng)采用哪種分離方法最合適? 5.根據(jù)哪些菌落特征可區(qū)分細(xì)菌、放線苗、酵母菌與霉菌?它們的細(xì)胞結(jié)構(gòu)表現(xiàn)在菌落形態(tài)上有什么聯(lián)系？