第一篇：臨床現(xiàn)考中常見的問題

現(xiàn)考中的常見問題

一、現(xiàn)場考察的目的

1、評估是否遵循法規(guī)，指導(dǎo)原則及SOP進行Ⅱ、Ⅲ期臨床試驗。（四期不涉及現(xiàn)考）

2、確定受試者權(quán)益和安全性是否獲得保障。

3、確定臨床試驗資料的真實性。

4、促進臨床試驗更加規(guī)范。

二、現(xiàn)場檢查的類型

按檢查方式分類

1、定期、常規(guī)檢查

定期進行基地復(fù)核、機構(gòu)復(fù)核

2、有因檢查

在以下情況發(fā)生后進行的檢查稱為有因檢查：

被人舉報違規(guī)、嚴(yán)重違背GCP、同期承擔(dān)過多項目或多個相同項目、入組率過高或過快、安全性或有效性結(jié)果異常、既往不良行為。

現(xiàn)場檢查類型

1.按檢查方式分類 a）、飛行檢查：

當(dāng)研究者涉嫌有違規(guī)操作時可進行的突擊檢查，且不需要提前通知

b)、跟蹤檢查：

在整個實驗進行中或?qū)嶒灲Y(jié)束后針對整個實驗操作各方面的規(guī)范性進行的檢查

2、按檢查對象分類 a)、機構(gòu)/專業(yè)檢查

基地核查、機構(gòu)核查

b)、研究項目/專項檢查

在藥物報生產(chǎn)之后進行的檢查

三、檢查要點

1、實驗條件

a)、承擔(dān)臨床試驗機構(gòu)及相關(guān)專業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)資格。b)、具有《藥物臨床試驗批件》及倫理委員會批件。c)、具有并遵循所制定的臨床試驗管理制度。

d)、試驗人員承擔(dān)的相應(yīng)工作，研究時間應(yīng)與原始記錄和申報資料記載一致。e)、儀器、設(shè)備應(yīng)與試驗項目適應(yīng)，其型號、性能、使用記錄等應(yīng)與申報資料一致。

2、實驗記錄

知情同意書應(yīng)由受試者或其法定代理人簽署，必要時可電話核實。

3、試驗用藥的接收和使用

a)、質(zhì)檢報告、臨床試驗方案與總結(jié)報告，以及申請資料中試驗用藥批號應(yīng)一致。b)、試驗用藥的接收，使用和回收應(yīng)有記錄及相關(guān)人員簽名，接收，使用及剩余數(shù)量間的關(guān)系應(yīng)對應(yīng)一致。

c)、試驗用藥的用法用量及使用總量應(yīng)與用藥原始記錄及臨床試驗報告對應(yīng)一致。

4、數(shù)據(jù)溯源

a)、CRF與原始資料（需核查原始病歷，實驗室檢查，影像，ECG，Holter，胃腸鏡等檢查的原始記錄。。。）以及申報資料須對應(yīng)一致。

b)、原始資料中各種臨床檢查數(shù)據(jù)須能溯源，必要時應(yīng)對臨床檢查部門（檢驗科、影像室、各種檢查室等）進行核查。

現(xiàn)考中先考人員可抽取一些病例與原始數(shù)據(jù)核對，查看是否真是。

c)、臨床試驗總結(jié)報告中完成病例數(shù)與實際臨床試驗病例數(shù)對應(yīng)一致。

在此過程中，可能存在以下問題，總結(jié)報告中各個中心的的病例數(shù)與分中心小結(jié)中的病例數(shù)不一致，是因為分中心小結(jié)中的病例是包括了這個中心的所有病例，而總結(jié)報告中的病例數(shù)不包括剔除的病例

d)、統(tǒng)計報告與臨床試驗總結(jié)報告須對應(yīng)一致。

e)、藥動學(xué)與生物等效性試驗的原始圖譜溯源。

1）2）紙質(zhì)圖譜是否信息完整，并與數(shù)據(jù)庫中電子圖譜一致。原始圖譜及數(shù)據(jù)是否與總結(jié)報告對應(yīng)一致。3）4）進樣（或采集）時間與試驗時間、儀器使用時間是否對應(yīng)一致。圖譜記錄的測試樣品編號與對應(yīng)受試者標(biāo)本編號記錄是否對應(yīng)一致。

5、委托研究

a)、是否有委托證明材料，其所反映的委托單位，時間，項目及方案等是否與申報材料一致。

委托證明包括申辦方對我們CRO機構(gòu)的委托函及我們對醫(yī)院的委托函

b)、被委托單位出具的報告或圖譜是否為加蓋公章的原件。c)、可對被委托機構(gòu)現(xiàn)場核查，已確證其研究條件和研究情況。

6、現(xiàn)場核查中須注意的幾點區(qū)別

a)、違規(guī)與不規(guī)范的區(qū)別

? 違規(guī)是指違反了GCP和SOP的規(guī)定的操作行為

? 不規(guī)范則是指包括基地的培訓(xùn)不到位、在操作中存在漏洞不規(guī)范等可更正、可彌補的操作問題

b)、未作與不完整的區(qū)別 c）、造假與不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膮^(qū)別 d）、組織與個人行為的區(qū)別

7、可能存在主要問題

a)、無SFDA批件（這種情況現(xiàn)在較少）或批件效期已過（申辦方一般會在批件過期之前開展試驗）

b)、無倫理委員會批件或先實施，后批準(zhǔn)

違規(guī)行為：

? 方案：方案或修訂后的方案沒有經(jīng)過倫理委員會的批準(zhǔn)就實施，或是先實施后經(jīng)過批準(zhǔn)的行為都是違規(guī)的行為。

? 研究者：過倫理是如果我們的研究者也是倫理委員會的成員之一，則不能參加倫理委員會的投票，否則屬于違規(guī)行為。

? 安全性報告：嚴(yán)重不良事件延遲或未向倫理委員會提交備案的行為。不規(guī)范行為：

? 招募廣告：在醫(yī)院張貼招募廣告之前需要先經(jīng)過這家醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)并備案后方可，所以在此之前需先了解這家醫(yī)院對招募廣告的要求。

c)、知情同意書確實或簽署存在問題

? 丟失或不完整，并得不到合理解釋；

? 知情最好粘貼在原始病例中，預(yù)先留出粘貼頁；

? 簽署時間，最低也要在首次服用試驗藥物之前。

對于個別可能存在未簽署知情同意書便進入試驗，或先納入后簽署的行為，我們的底線要求是知情同意書簽署時間必須在服藥之前，對于有些已經(jīng)做過檢查后才參加試驗的患者需要在簽過字之后才可以服用藥物，這個是必須要保證的。

d)、應(yīng)用錯誤或非母語：

? 國際多中心臨床試驗中由于知情同意書比較長、專業(yè)術(shù)語比較多，即便是附有中文譯本，但仍然可能存在中英文翻譯不一致的情況，這時我們就要考慮實驗中的條件、要求是否能夠遵循、符合我國的法律法規(guī)。

? 知情同意書的的修改方案應(yīng)按照首研的要求進行，如果分中心有單獨的要求也要針對這個中心的要求進行修改，但這份修改后的知情同意書只在這一家中心實施。

e)、違背試驗方案

f)、無原始病歷或原始病歷中記錄不全 g）、檢查結(jié)果不能溯源

h)、試驗用藥接收，發(fā)放，回收數(shù)量不符或記錄不全 i)、同期承擔(dān)過多項目或多個相同項目。

四、詳細(xì)問題分析

問題1—知情同意

1.知情同意書丟失或不完整，且無合理解釋。2.未簽署知情同意書就進行，或先納入，后簽署

3.應(yīng)用錯誤或非母語的知情同意書版本或其內(nèi)容不合乎要求 4.受試者/研究者未簽署日期或任意修改日期

如果研究者沒有簽署日期，需要讓研究者補簽，并要保證簽署時間的正確性。

5.受試者與研究者筆跡相同或多位受試者筆跡一致 6.未提供副本給受試者 現(xiàn)考時應(yīng)將副本撕下。

問題2—違背試驗方案

1.未按隨機編號入組，入組日期與編號順序不符，未按藥物編號依入組時間順序發(fā)放藥物。

要保證患者的入組日期進行藥物發(fā)放、編號。

2.入組受試者不符合納入標(biāo)準(zhǔn)或排出標(biāo)準(zhǔn)要求（肝酶過高，腎功異常，ECG異常等）

對于肝腎功能異常的患者，我們要根據(jù)實際情況進行入組可能性的判斷，對于一些影響不大的患者在入組困難時可以入組，但要保證對此患者全程合理有效的關(guān)注。

3.未完成方案規(guī)定的檢查項目（僅有用藥前檢查，檢查項目不全等）或未遵循規(guī)定的時間窗。

4.未記錄合并用藥或應(yīng)用禁用藥物。

對于一些老年患者或特殊患者，在整個試驗中如果沒有合并用藥的可能性不大，應(yīng)關(guān)注此類患者的真實性。要求記錄通用名及起止時間。

問題3—原始病歷溯源

1.不能提供住院病歷

要求在醫(yī)院中可查到整個住院記錄。

2.住院病歷中無任何與藥物臨床試驗有關(guān)的記錄或記錄不全 3.無用藥處方及起止日期。4.無AEs 觀察及記錄。5.門診受試者無門診病歷。

● ● ● 住院病歷中未查見原始報告單 檢驗室未查見書面或電子文檔

檢驗室書面文檔極不規(guī)范（廢紙記錄，無關(guān)記錄紙背面潦草記錄，鉛筆記錄，記錄不完整……）

● ● ● 檢驗報告復(fù)印件缺頁眉（無姓名，時間，機印改為手寫……）時序性不一致或多處修改 檢驗單連號，或缺財務(wù)章 ● ● ● ● ● ● ● 大量檢驗單不粘貼或無序粘貼。心電圖結(jié)果溯源

為保存圖譜，解釋結(jié)果正常故未保留，或圖譜給受試者保存。部分圖譜缺受試者姓名，檢查時間及結(jié)果分析。圖譜文字本為機打，但裁減后改為手寫。胃腸鏡檢查無原始報告單。

較多檢驗報告及心電圖報告缺頁眉，凡報告為復(fù)印件者頁眉處姓名，日期均為手寫。

● ● ● ● ● 治療前后檢查間隔1月或更長，但多份檢驗單聯(lián)號。多份檢驗單修改報告時間（如1997-2000，2003-2008，……）檢驗報告時間先于送檢時間數(shù)月或晚于送檢時間半年。

移花接木（受試者甲生化報告不能溯源，其檢測值完全同受試者乙）所有免疫檢查報告申請人與報告人筆跡相同，且報告人均為檢驗科主任簽名。

問題4—藥物管理

1.無藥物管理相關(guān)記錄或記錄不完整 2.試驗用藥接受，發(fā)放，回收數(shù)量不符 3.藥物分發(fā)不當(dāng) 4.回收藥物數(shù)量異常

5.接收藥物不核對或不登記廠家、批號，效期 6.試驗用藥檢測報告所檢批號非臨床用藥批號 7.藥物儲存不當(dāng)

特殊藥物可能，避光、防潮藥物，藥物包裝盒要確保完整

8.過期藥物仍用于臨床試驗

過期藥物要及時回收，結(jié)束后也要及時回收

9.試驗結(jié)束后較長時間在試驗中心仍查見試驗用藥

問題5—不良事件

現(xiàn)考關(guān)注問題：對方案的遵從性、溯源性、安全性 1.原始病歷中無AE記錄

原始病例中沒有不良事件記錄表；或不良事件記錄表或不良事件隨訪表記錄不全

2.AE未記錄于CRF中（肝腎功能異常，血小板降低，ECG異常）

研究者沒有意識到的不良事件，這個問題較嚴(yán)重：如果發(fā)生不良事件而沒有記錄，大家應(yīng)進行高度關(guān)注，；例如：實驗室檢查入組時正常，而在出組時異常，這就是不良事件。

3.原始病歷和CRF記錄不符

4.日記卡記錄的AE未在CRF或/和原始病歷中記錄

研究者可能疏忽患者在病歷卡中填寫的不舒服情況。

5.不按規(guī)定報告SAE 6.與其他中心比較AE發(fā)生率過低

各個中心發(fā)生不良事件的幾率應(yīng)該是相差不大的，如果在某個中心不良事件發(fā)生率較其他中心少或是沒有，則這個中心受試者真實性便存在可疑。

問題6—研究者資格

1.不符合研究者資格人員實施藥物臨床試驗

2.不符合研究者資格人員填寫CRFs 或簽署試驗文件

3.研究者未充分或未參加試驗或PI未履行相應(yīng)職責(zé)。

對于沒有資格或是正在學(xué)習(xí)階段的研究者需在后面讓有資格的研究者在后面簽上字。

問題討論：

1、在醫(yī)院之外的地方張貼招募廣告是否還需要過倫理？

只需在首研倫理進行備案

2、如果受試者在入選時打破了隨機，是否要剔除這部分病例

這個問題應(yīng)該依據(jù)自己的數(shù)據(jù)管理報告情況而定，如果患者充足則可以剔除，如果患者不足可以不剔除。

3、受試者簽認(rèn)證代碼表或者類似這樣的需受試者簽名的文件，明顯看上去是研究者自己簽的，這個問題如何處理？

這種情況很普遍，還有就是受試者簽的不是中文全名而是字母縮寫，這個問題應(yīng)該提早發(fā)現(xiàn)提早解決，確保受試者的筆跡不同，如果到了試驗最后就很難補救了。

4、如果發(fā)生SAE，已經(jīng)填寫SAE報告表，還需要填寫不良事件表嗎？SAE要寫隨訪報告嗎？

? 如果發(fā)生了SAE填寫了SAE報告表后便不需再填寫不良事件表了。? 如果發(fā)生了SAE嚴(yán)格上講必須要把首次、隨訪、總結(jié)三次報告填寫完整，但如果研究者不能完成這三個報告也要把首次和總結(jié)填寫完成。

關(guān)于新藥臨床試驗現(xiàn)場考核注意事項

1.ICF核查注意事項：保證所有病例均有知情同意書，注意知情同意書簽署日期療前實驗室檢查日期之前（或者同一天），核查醫(yī)生和患者是否均已簽字，并核查科研病例中是否留下的患者聯(lián)系方式，并隨機抽打電話，詢問患者是否參加試驗以及當(dāng)時服藥后療效情況（省局核查醫(yī)院時會隨機抽20%-40%詢問有患者是否參加實驗，服藥多少天，療效如何等等）。2.實驗室檢查核查注意事項：核查化驗單是否齊全，心電圖核查（需注意療前療后是否為同一人的心電圖，并且注意心率是否和CRF記錄一致）；血常規(guī)、血生化核查：需要到醫(yī)院檢驗科儀器中核查到方可，這樣方為溯源，以防止醫(yī)生人為造出假化驗單，針對部分病例可能缺少便常規(guī)和尿常規(guī)、可以允許有少量患者缺少，不可以大范圍缺少。

針對CRF中異常檢查尤其是血生化中異常較為明顯的數(shù)值，要重點核查，省局官員會重點核查那些化驗單的真實性，會針對總結(jié)報告和統(tǒng)計報告中安全性檢查異常（如療前正常療后異常的檢查），假如有臨場解釋的話，也需要核查總結(jié)異常解釋是否和CRF解釋一致（或是和DRQ異常解答一致）

3.試驗結(jié)題資料完整性：方案、臨床批件、倫理批件、試驗物資交接單、試驗藥品銷毀證明、實驗室質(zhì)控證明、試驗啟動培訓(xùn)記錄、研究者簽名樣張、受試者完成目錄、受試者簽認(rèn)代碼表等等

4.試驗藥物的發(fā)放與回收：注意核對藥物發(fā)放記錄表每一藥物發(fā)放和回收是否與CRF中藥物發(fā)放是否一致，如果可以做到的話，實驗結(jié)束后回收藥物數(shù)量總數(shù)要與CRF記錄總數(shù)一致。尤其注意脫落病例的回收藥物情況是否一致。

5.核對本實驗重要的指標(biāo)（不容易造假的一項指標(biāo)）：需要核查每一例患者是否有X光片檢查報告單（注意報告背面可以顯示有復(fù)寫紙印跡），并且核查是否存在X片子，如果醫(yī)院保留患者X光片到醫(yī)院儀器上（即如生化檢查一樣，存有電子版）需要核查，如沒有電子版的話，則需要核查該院放射科X光片患者登記本，以保證確實該患者做過X光片檢查。

6.核查科研病例中數(shù)值是否與CRF中一致。

7.針對受試者拼音縮寫：南方的醫(yī)院可能會導(dǎo)致拼寫錯誤。

8.入選表是否保證隨機，需要各中心患者服藥日期與藥物順序號一致即可。

9特殊病例---脫落病例、剔除病例等要與總結(jié)報告和分中心小結(jié)表一致。

10.篩選表病例轉(zhuǎn)歸以及篩選失敗原因。

第二篇：期轉(zhuǎn)現(xiàn)常見問題

期轉(zhuǎn)現(xiàn)常見問題

1．何時可以申請期轉(zhuǎn)現(xiàn)？

期轉(zhuǎn)現(xiàn)申請時間為該合約上市之日起至交割月份前一個月倒數(shù)第三個交易日（含當(dāng)日）。

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)要在交易日11：30前提交申請。

2．客戶想申請期轉(zhuǎn)現(xiàn)，需要提交哪些材料？

雙方客戶應(yīng)向交易所提交下屬材料：期轉(zhuǎn)現(xiàn)申請、現(xiàn)貨買賣協(xié)議、相關(guān)貨款證明、相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)倉單（或入庫單或存貨單）等貨物持有證明。

會員可以通過大商所網(wǎng)站（.cn）/業(yè)務(wù)指引/交割業(yè)務(wù)指引/業(yè)務(wù)資料欄目下載《期轉(zhuǎn)現(xiàn)申請表》。

3．期轉(zhuǎn)現(xiàn)審批時限？

采用標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)時，交易所在申請當(dāng)日內(nèi)予以審批。

采用非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)時，交易所在收到申請后的三個交易日內(nèi)予以審批。

4．期轉(zhuǎn)現(xiàn)批準(zhǔn)日當(dāng)天，交易雙方的持倉按照什么價格平倉？

批準(zhǔn)日結(jié)算時，交易所將交易雙方的期轉(zhuǎn)現(xiàn)持倉按協(xié)議價格進行結(jié)算處理，產(chǎn)生的盈虧計入當(dāng)日平倉盈虧。

5．交易所負(fù)責(zé)買賣雙方的倉單交收和貨款支付嗎？

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)中，交易所負(fù)責(zé)買賣雙方的倉單交收和貨款支付；非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)中，交易所不負(fù)責(zé)貨物交收和貨款支付，由雙方客戶自行約定。

6．客戶申請了標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)，什么時候能拿到貨款/倉單？

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)在批準(zhǔn)日結(jié)算后，賣方拿到貨款，買方接到倉單。

7．期轉(zhuǎn)現(xiàn)的手續(xù)費按照什么標(biāo)準(zhǔn)收??？

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)手續(xù)費按交割手續(xù)費標(biāo)準(zhǔn)收取，不再另收交易手續(xù)費。

非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)手續(xù)費按交易手續(xù)費標(biāo)準(zhǔn)收取。

8．當(dāng)日新建的持倉可以申請期轉(zhuǎn)現(xiàn)嗎？

可以。

9．標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)與非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)有什么區(qū)別？

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)在申請當(dāng)日審批，非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)在三個交易日內(nèi)審批。

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)收取交割手續(xù)費，非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)收取交易手續(xù)費。

標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)中，交易所負(fù)責(zé)買賣雙方的倉單交收和貨款支付；非標(biāo)準(zhǔn)倉單期轉(zhuǎn)現(xiàn)中，交易所不負(fù)責(zé)貨物交收和貨款支付。

第三篇：面試項目經(jīng)理職位常見問題現(xiàn)

1)你做項目經(jīng)理幾年了? 能講下你作為項目經(jīng)理主要的職責(zé)是什么么?

2)你目前工作中遇到的最大挑戰(zhàn)是什么?

3)能舉例講一個你在管理項目中遇到的一個困難, 你最終是如何解決的?

4)平時項目進度是怎么監(jiān)控的?

5)你的項目中都管理哪些數(shù)據(jù), 怎么收集及分析的.6)項目出現(xiàn)人手問題時, 你是怎么處理的?

7)有沒有出現(xiàn)在一些問題上和經(jīng)理意見分歧的時候, 你是怎么處理的?

8)項目中會出現(xiàn)那些決策, 你般怎么做決策, 你會做么?

9)你在把那些內(nèi)容記錄在風(fēng)險管理中?

10)如果項目需要員工周末加班, 但那些員工并不是你的直接下屬, 出現(xiàn)過不合作的情況么, 怎么處理的?

11)項目經(jīng)理需要那些必須的素質(zhì), 你的強項和弱項有哪些?

12)有和其他部門合作的經(jīng)驗么, 合作上遇到過困難么? 遇到不合作怎么處理?

13)你的項目的主要參與人(stakeholder)都有哪些?

14)當(dāng)遇到跟產(chǎn)品經(jīng)理意見不一致時, 怎么處理?

15)你如何安排一天的工作?

16)當(dāng)項目順利進行時, 有額外的新需求進來, 你如何處理?

17)當(dāng)前項目的資金運行情況怎么樣?

18)嘗試過敏捷開發(fā)么? 遇到過什么問題, 有哪些不足?

19)項目使用三方產(chǎn)品么, 如何采購及簽定三方合同?

20)你對項目中出現(xiàn)的技術(shù)問題關(guān)注么, 參與技術(shù)討論么? 遇到重大技術(shù)問題如何處理?

第四篇：臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試常見問題總結(jié)

臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試常見問題總結(jié)

臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試是每一個醫(yī)生都必須面對的考試，大量的醫(yī)學(xué)內(nèi)容是需要記憶的，讓很多考生非常困擾，對于臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試復(fù)習(xí)過程中常遇到的一些問題的解決方法搜索整理了一下，希望能夠幫到大家！

1.基礎(chǔ)差：這就要求你花費比別人更多的時間來看書或聽課，厚積方能勃發(fā)，量的積累才能達(dá)到質(zhì)的變化?；蛘邎缶W(wǎng)上學(xué)習(xí)班，這樣能有針對性的系統(tǒng)復(fù)習(xí)，能少走彎路，事半功倍。

2.學(xué)習(xí)效率低：每天看書的時間也不少，可是為什么知識點還不是很清楚呢？所以學(xué)習(xí)計劃是關(guān)鍵。看書時，一定要記筆記，認(rèn)為重點的一定要重點記憶和標(biāo)記，方便以后復(fù)習(xí)的時候再重點溫習(xí)。不能反反復(fù)復(fù)在一個內(nèi)容上磨蹭，有些內(nèi)容實在不懂，課后要通過做題來鞏固，掌握該知識點的出題特點，有技巧的記憶是關(guān)鍵。

3.不注意勞逸結(jié)合：不要讓學(xué)習(xí)成為思想負(fù)擔(dān)。我們往往在拼命壓迫自己的時候，不論是在身體上還是在精神上都承受著沉重的負(fù)荷，時間久了是不健康的。您每天8小時學(xué)習(xí)，從16點～凌晨1點多，時間久了心理上也會疲勞，適當(dāng)?shù)淖叱鰜?，聽聽音樂，放松一下，這樣生活，人才能恢復(fù)活力，學(xué)習(xí)才能提高效率醫(yī)|學(xué)敎 育網(wǎng)。

4方法欠缺：其實臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試不難，關(guān)鍵看我們能不能有足夠的時間和堅定的毅力。以上兩點您都有，那么您的問題在哪里呢？我認(rèn)為主要是方法。不要把臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試看的多難，只要按照計劃學(xué)習(xí)就一定能通過。

5.戰(zhàn)略上藐視敵人：有些人自我感覺良好輕視對手，這里提醒一句，無論你是哪個學(xué)校的都不可以放松，畢竟康是的范圍還是很廣的。最后，預(yù)祝大家取得好的成績，順利通過考試！

附：考場注意事項：

1、多備一支筆。

規(guī)定黑色水筆答題外，建議考生再多準(zhǔn)備一支筆。

2、不要讓考場中可能出現(xiàn)的情況影響自己。

原因：你在考場中可能會碰到非常緊張焦躁、情況不斷的考生，這時，一定要把握住自己，千萬不要浪費時間在和考試無關(guān)的事物上。

3、考場突遇好久未見的朋友，不要出現(xiàn)情緒波動。

原因：考場按學(xué)科分，考生很有可能遇到自己的朋友、同事，談起自己現(xiàn)在工作、生活情況等等，不要因此而影響自己的情緒。醫(yī)學(xué)`教育網(wǎng)搜集整理畢竟馬上要進考場了，心理上的波動都可能會影響正常發(fā)揮。

4、習(xí)慣監(jiān)考老師站在身邊。

原因：有些考生會出現(xiàn)如果監(jiān)考老師站在自己身邊就會覺得渾身不自在，沒有思路，落不下筆的情況，這其實都是緊張的心理在作怪。考生要學(xué)會集中注意在試卷和答題上，營造好像只有自己一個人的答題環(huán)境。

5、考完單門，盡快離開考場，不要對答案。

6、注意身體，不要生病。如果生病也不要影響心態(tài)。

原因：考試前，要特別注意冷暖，不要讓自己生病。但萬一正好有些感冒、發(fā)燒，也不要給自己太大的心理壓力。其實，如果考試中完全投入到做題中，身體上的一些小病并不會帶來太大的影響。關(guān)鍵是心態(tài)上千萬不要總覺得自己處在劣勢，那么這場仗，還沒打就已經(jīng)輸

第五篇：臨床熒光PCR結(jié)果分析及常見問題

臨床熒光PCR結(jié)果分析及常見問題

中國人民解放軍三零二醫(yī)院 王海濱

一、熒光 PCR 技術(shù)在臨床診、療中的應(yīng)用

PCR 技術(shù)是于 1983 年由 Mullis 發(fā)明，后來傳到我國，但是由于實驗污染的問題，1998 年衛(wèi)生部取締 PCR 實驗方法在臨床診斷中的應(yīng)用。熒光 PCR 出現(xiàn)后，污染減少很多，但近幾年由于磁珠的應(yīng)用，污染又再起。2003 年，PCR 在 SARS 的早期診斷中非常有效，當(dāng)時使用的是電泳法。H1N1 甲型流感（2009）：熒光 PCR 技術(shù)作為確診指標(biāo)（755 份 / 天）。疾病易感基因的研究（SNP）： CR1/ 丙型肝炎 IL-28B。疾?。[瘤）易感基因的鑒定。

二、影響臨床熒光 PCR 檢測結(jié)果的因素

（一）影響臨床熒光 PCR 檢測結(jié)果的常見因素

1.檢驗因素：

實驗室硬件、儀器、試劑、人員素質(zhì)、技術(shù)水平、管理水平。2.非檢驗因素：

標(biāo)本采集、質(zhì)量、部位、標(biāo)本保存、條件、時間、標(biāo)本中的干擾物質(zhì)、樣本丟失！

（二）加強檢測前標(biāo)本的質(zhì)量管理——避免問題重復(fù)發(fā)生

規(guī)范標(biāo)本前處理流程、制度化的重要性，建立不合格標(biāo)本記錄和定期總結(jié)制度、制定解決措施與可行路徑（編號和項目錯誤等），查找標(biāo)本丟失可能的環(huán)節(jié)。加強本室新進工作人員流程培訓(xùn)，經(jīng)常性進行臨床醫(yī)護的交流與培訓(xùn)。

（三）實驗室分區(qū)

分為：試劑配制、核酸提取、PCR 擴增以及開放產(chǎn)物分析等區(qū)域。分區(qū)目的：通過物理分割達(dá)到標(biāo)本、試劑或使用器具等被沾染或摻入污染，標(biāo)本間的交叉污染等。

分區(qū)要求：至少要有清潔的試劑配制和核酸制備區(qū)

三、試劑配制

（一）試劑配制室的設(shè)置與維護

以空間內(nèi)無核酸氣溶膠為準(zhǔn)?。龎骸⑶鍧嵾M風(fēng)(壁掛式空調(diào))。

試劑冰箱內(nèi)勿存放病原或核酸相關(guān)物品！定期清潔除霜！2 ．有效氯消毒液清潔實驗室臺面、地面。3 ．移液器：使用前的清潔。．離心機等：每周定期木漿紙巾擦拭，方法?！耙淮涡晕锲返氖褂脹]有質(zhì)控就沒有質(zhì)量保證

對一個完整的實驗，一定要注意有空白對照，陰性對照與臨界對照，臨界對照是對精密度的考核。另外，有平行定量標(biāo)準(zhǔn)品。如果試驗測的是血清，質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品也應(yīng)該是血清，而不是人造核酸。

質(zhì)控品在結(jié)果報告中的應(yīng)用非常重要： 1.空白對照

一般放在第一孔的位置，監(jiān)控擴增試劑及環(huán)境污染。2.陰性對照

第二孔位置，監(jiān)控核酸提取，試劑是否污染，可自行制備。3.臨界對照

實驗室自行制作，是實驗精確度需求。4.等效定量標(biāo)準(zhǔn)品

中間位置或最后，實驗準(zhǔn)確性前提，參與核酸提取，標(biāo)準(zhǔn)范圍寬。

（六）質(zhì)控品的制作

HBVDNA ：介質(zhì)的選擇、臨界質(zhì)控的制作： 400IU/ML-50IU/ML ； HCVRNA ：介質(zhì)的選擇、臨界質(zhì)控的制作： 3000IU/ML-100IU/ML ； EBVDNA/CMVDNA/H1N1/HPV 等定性試劑盒的質(zhì)控，陽性標(biāo)本，穩(wěn)定性實驗；質(zhì)控品的朔源： WHO 標(biāo)準(zhǔn)或 COBAS 等；自建質(zhì)控品：建立數(shù)據(jù)記錄（穩(wěn)定性等）；室間質(zhì)控與室內(nèi)質(zhì)控的有機結(jié)合！

（七）HBVDNA 結(jié)果分析（質(zhì)控在控與失控）HBVDNA 結(jié)果分析，就是熒光曲線的分析，要盡可能保證報告的數(shù)值，低限值和高于低限值的線要平行，盡可能不要失控。

臨界質(zhì)控品： 400IU/ml ；基線的選擇：平均熒光值的 3-7% ；斜率：保持在 3.0-3.6(均值 3.3)；相關(guān)系數(shù)： r=0.999。

1.COBAS 定量內(nèi)標(biāo)(QS)的失控

PPT21 顯示的是 COBAS 定量內(nèi)標(biāo)失控的情況。2.不同定量區(qū)域 QS 值分布

PPT22 顯示的是不同定量區(qū)域 QS 的分布，例數(shù)是 900 多例。如果內(nèi)標(biāo)出現(xiàn)了失控，定量值就無法參考了。

3.假陰性曲線的識別

在熒光 PCR 曲線里面，如果有熒光曲線是陰性、不規(guī)則的，要考慮是不是有干擾物質(zhì)，在試劑配制或者標(biāo)本里邊有干擾物質(zhì)。此時需要復(fù)檢。

五、實驗室人員（與職稱和學(xué)歷無關(guān)）

（一）實驗室人員分類

1.實習(xí)型：

按照操作說明進行操作，但環(huán)節(jié)控制、環(huán)節(jié)間銜接和防污染意識差！2.工作型：

能夠再現(xiàn)說明書操作要求，具有質(zhì)量環(huán)節(jié)控制意識，具有一定的防污染常識，但發(fā)現(xiàn)問題和解決問題能力稍差。

3.示教型：

明晰試驗操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，并能夠?qū)ο录壒ぷ魅藛T進行演示和示教，具有完整的防污染意識、質(zhì)量實現(xiàn)和一定的發(fā)現(xiàn)問題解決問題能力。

4.專家型：

能對商品試劑盒存在的問題進行改進，具有提前預(yù)知的質(zhì)量意識。

（二）移液器的使用

移液器的使用，是小問題，大學(xué)問。1.移液器加吸頭的要點，需慢慢壓，不能用力壓。2.不同量程移液器的應(yīng)用要點（液體性質(zhì)）。3.移液器連續(xù)分液掛滴對實驗的影響。4.如何避免移液器連續(xù)分液導(dǎo)致的污染。5.移液器吹打混勻帶來的污染！6.移液器的清洗，需要高壓嗎？ 7.移液器的校準(zhǔn)，很多單位無法實現(xiàn)。

（三）質(zhì)量環(huán)節(jié)意識的培養(yǎng)（輪流當(dāng)主任）

1.環(huán)節(jié)控制能力

質(zhì)量環(huán)節(jié)的認(rèn)知：明晰實驗操作環(huán)節(jié)的組成和目的！關(guān)鍵環(huán)節(jié)的實現(xiàn)：細(xì)節(jié)的嚴(yán)謹(jǐn)性與準(zhǔn)確性！環(huán)節(jié)的連貫性與細(xì)節(jié)實現(xiàn)：實現(xiàn)完整實驗！2.防污染素質(zhì)

實驗室環(huán)境防污染意識：具備科學(xué)防污染清潔意識和實現(xiàn)能力，如標(biāo)本外溢的處理、實驗室環(huán)境（空氣、桌面、地面、移液器等）清潔，實驗廢物的管理和處理，離心機的清潔和維護等。標(biāo)本間交叉污染的預(yù)防意識和實現(xiàn)能力：避免移液過程中的隱形迸濺污染（移液器）；試劑加樣過程中的沾染污染；標(biāo)準(zhǔn)品的攜帶污染等。擴增產(chǎn)物的外露污染：產(chǎn)物回流預(yù)防能力；產(chǎn)物處理流程。

（四）人員的培養(yǎng)與專業(yè)技能比對

不同職務(wù)、職稱和學(xué)歷人員同時進行；環(huán)節(jié)操作與結(jié)果同時計分；比對結(jié)果記錄在案并作為評聘指標(biāo)。

六、試劑盒的質(zhì)量與評價

（一）評價標(biāo)準(zhǔn)：抗干擾-理論值與實際值的吻合。

1.特異性：不同血清型對特異性的影響，抗污染性能和污染試劑 2.敏感性：血清量、加樣量對敏感性的影響（1+1=2 ？）, 試劑系統(tǒng)的組成與敏感性 : 引物、探針序列的選擇與用量，跨欄式試劑： 10 9-10 2 IU/ml 應(yīng)處在線性范圍內(nèi)、且均存在熒光信號的上平臺。

3.重復(fù)性：取決于核酸提取方法與擴增效率。

（二）關(guān)于臨界檢測結(jié)果的漂移

例如，本場檢測的時候，一個病人，一次檢測是 53IU，一次是 <20IU，這都是漂移，這個技術(shù)方法性能本身，是正常的和合理的。但這種漂移的原因，是試劑盒核酸提取的穩(wěn)定性問題。

七、關(guān)于內(nèi)標(biāo)

（一）實時熒光定量 PCR 無需內(nèi)標(biāo)

實時熒光定量 PCR 技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在軟件之中，通過對每個樣品 Ct 值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。

1.Ct 值的重現(xiàn)性：

PCR 循環(huán)在到達(dá) Ct 值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此 Ct 值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的 Ct 值是恒定的。

2.Ct 值與起始模板的線性關(guān)系：

由于 Ct 值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量 PCR 是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)本同步進行核酸提取的曲線定量方法。

（二）內(nèi)標(biāo)對實時熒光定量 PCR 的影響

若在待測樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標(biāo)，則 PCR 反應(yīng)變?yōu)殡p重 PCR，雙重 PCR 反應(yīng)中存在兩種模板之間的干擾和競爭，尤其當(dāng)兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時，這種競爭會表現(xiàn)得更為顯著。但由于待測樣品的起始拷貝數(shù)是未知的，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內(nèi)標(biāo)。正因如此，定量方法雖然加入內(nèi)標(biāo)，仍為一種半定量方法。

美國 Texas 大學(xué)的科研人員進行了外標(biāo)法定量和內(nèi)標(biāo)法定量的方法學(xué)比較，得出的結(jié)論是：內(nèi)標(biāo)法作為定量或半定量的手段是不可靠的，而外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。

AppliedBiosystems 公司的 7700 型實時熒光定量 PCR 儀是全球公認(rèn)的熒光定量 PCR 的金標(biāo)準(zhǔn)，可實現(xiàn)多色熒光同時檢測，但定量檢測仍然采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，而不用內(nèi)標(biāo)進行定量。

（三）內(nèi)標(biāo)對 PCR 擴增的影響

PPT34 顯示的是內(nèi)標(biāo)對 PCR 擴增的影響。

左圖，可以看到加入內(nèi)標(biāo)后線性范圍變窄，無內(nèi)標(biāo)線性范圍較寬。右圖，無內(nèi)標(biāo)時是直線，有內(nèi)標(biāo)后，變成曲線。

個人建議：試劑盒在報批時，或使用單位對試劑盒質(zhì)量進行評估時，使用內(nèi)標(biāo)對試劑盒性能進行評價！檢定：正如 ELISA 試劑盒的批批檢！

八、如何就分子診斷結(jié)果與臨床和患者溝通？

醫(yī)生和患者，都會對檢驗結(jié)果提出一些質(zhì)疑。質(zhì)量、速度應(yīng)該還是個硬道理，應(yīng)該權(quán)威的結(jié)果加虛心的請教。