第一篇：細(xì)胞免疫療法最新調(diào)研

細(xì)胞免疫療法最新調(diào)研

一、以下為調(diào)研查到的確定開展細(xì)胞免疫療法的醫(yī)院（1）對細(xì)胞免疫療法極力推薦的三甲醫(yī)院：

1、廣州復(fù)大腫瘤醫(yī)院

? 國內(nèi)首批開展生物治療衛(wèi)生機(jī)構(gòu) ? 國內(nèi)率先開展聯(lián)合免疫療法治療方案醫(yī)院 ? 同時開展T-plus腫瘤免疫治療的研究與治療 ? 作術(shù)后及放化療后的配合使用細(xì)胞免疫治療

? 多應(yīng)用于：胰腺癌，肝癌，肺癌，食管癌，胃癌，乳腺癌

2、廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院 ? 國內(nèi)首批開展生物治療的衛(wèi)生機(jī)構(gòu) ? 研究：DC-CIK療法 ? 多應(yīng)用于：肝癌、胃癌 ? 應(yīng)用病例已達(dá)幾千余例（保留）

3、北京武警總隊(duì)第二醫(yī)院

? 中華醫(yī)學(xué)會腫瘤生物治療課題定點(diǎn)醫(yī)院 ? 國內(nèi)首家多細(xì)胞免疫治療醫(yī)院

? 研究：CIK細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD3AK細(xì)胞 ? 多應(yīng)用于：食道癌、肺癌、乳腺癌

? 應(yīng)用超過3000例

4、解放軍458醫(yī)院（廣州）? 細(xì)胞治療作為放化療的支持治療 ? 多應(yīng)用于：肺癌、乳腺癌、肝癌 ? 研究：DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、CAPRI細(xì)胞

5、天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院

? 到2008年9月，應(yīng)用CIK細(xì)胞對腫瘤患者實(shí)施免疫治療，已進(jìn)行300余例肺癌患者的治療。

6、解放軍第123醫(yī)院（安徽）? 安徽領(lǐng)先的腫瘤治療醫(yī)院 ? 研究：DC-CIK療法

? 多應(yīng)用：肝癌、食道癌、肺癌

7、漳州市醫(yī)院（福建）

? 生物免疫治療中心：一天接待不超過5名患者

8、解放軍第454醫(yī)院（南京）? 研究：DC-CIK療法 ? 多應(yīng)用：食道癌、膽癌

9、吉林省人民醫(yī)院

? 吉林省生物免疫治療最高可報90% ? 肺癌、胃癌

10、天津市人民醫(yī)院

? 多應(yīng)用：黑色素瘤、食道癌

? 研究：DC細(xì)胞、CIK細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD3AK細(xì)胞、γδT細(xì)胞

11、遼寧省人民醫(yī)院

? 多應(yīng)用：直腸癌、宮頸癌、乳腺癌 ? 研究：CIK細(xì)胞

12、上海仁濟(jì)醫(yī)院

? 應(yīng)用：乳腺癌、肺癌

13、遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 ? 多應(yīng)用：鼻咽癌、乳腺癌

14、?？谑腥嗣襻t(yī)院

? 海南生物診療報銷比例可達(dá)90% ? 研究：DC-CIK療法

? 應(yīng)用：胃癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌

15、洛陽市中心醫(yī)院

? 研究：NK細(xì)胞、T細(xì)胞（CLS生物療法）

16、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院

? 應(yīng)用：肝癌、胃癌

? 生物治療中心每日限制最多6人就診

17、解放軍漳州175醫(yī)院

18、武警山東省總隊(duì)醫(yī)院

? 應(yīng)用：肺癌、胃癌、腎癌、黑色素瘤

19、重慶市腫瘤醫(yī)院

? 研究：DC-CIK療法

? 應(yīng)用：肺癌，曾應(yīng)用于左腮腺米庫林氏病

20、山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院

（2）簡單提及有開展細(xì)胞免疫治療的醫(yī)院

1、中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院：簡單提及

2、廣州市第一人民醫(yī)院：生物免疫治療，“近期開展”。

3、廣東省第二人民醫(yī)院：免疫細(xì)胞治療，腫瘤二科。

4、廣州市紅十字會醫(yī)院：詳細(xì)提及，腫瘤生物治療。

5、廣州軍區(qū)總醫(yī)院：生物治療

6、中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院：簡單提及。

7、南方醫(yī)院：有生物治療中心

8、廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院：自體細(xì)胞免疫治療技術(shù)取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展

9、粵北人民醫(yī)院：提及生物治療。

10、深圳市人民醫(yī)院：擁有生物治療室。

11、佛山市第一人民醫(yī)院：晚期肺癌和晚期胃腸癌的細(xì)胞免疫治療。

12、中國醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院（北京）

13、第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院（上海）

（3）全國腫瘤排名較前并開展了細(xì)胞免疫治療的醫(yī)院：

1、中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院（排名第一）

2、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院（排名第二）

3、天津市腫瘤醫(yī)院（排名第三）

4、第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院（排名第五）

5、南方醫(yī)院（排名第八）

——相信還有很多已開展了細(xì)胞免疫療法，而未在官網(wǎng)或其他渠道宣傳的三甲醫(yī)院。

二、估算：

1、細(xì)胞免疫治療現(xiàn)行應(yīng)用較多的腫瘤類型為：肺癌、胃癌、黑色素瘤、肝癌、食道癌、乳腺癌。相關(guān)規(guī)定，三甲醫(yī)院才能資格開展細(xì)胞免疫療法。

2、開展生物細(xì)胞免疫治療的三甲醫(yī)院的比例：以廣東65家三甲醫(yī)院（2011年），可查的在官方網(wǎng)站記載有生物免疫療法的，共有13家，比例達(dá)到20%，若按照這個比例，全國共有超過1000家三甲醫(yī)院，則大約有200家三甲在開展生物細(xì)胞免疫治療腫瘤。

3、治療費(fèi)用：綜合幾家明確給出價格參考的醫(yī)院為依據(jù)，有治療胃癌在2.5至5萬一個療程，肝癌在3萬/療程，另有2.6萬/療程。我們保守估計(jì)以2.5萬/療程作為參考值。

4、療程的時間：可查的細(xì)胞免疫治療過程為：采血、培養(yǎng)、回輸三大塊，送GMP實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行體外誘導(dǎo)6-7天，然后分5-6天，每天2次回輸，約2周一個療程。

5、市場容量的估算：以現(xiàn)時細(xì)胞免疫療法的普及程度，按保守每家醫(yī)院5例/月，廣東省13家三甲1年約780例：2.5萬/療程* 780例=1950萬左右；全國約12000例，市場容量在2.7億到3億間。

第二篇：人體免疫細(xì)胞閱讀答案

閱讀短文，完成7～8題。（共4分）

人體免疫細(xì)胞能發(fā)現(xiàn)并殺死被感染的細(xì)胞而不傷害健康的細(xì)胞，其機(jī)理一直困惑著人們?？茖W(xué)家最近初步揭開了其中的奧秘，原來被感染的細(xì)胞能發(fā)出信號向免疫細(xì)胞求救。

美國馬里蘭大學(xué)的一個科研小組最近在英國《自然》雜志上發(fā)表論文指出，人體細(xì)胞中大都含有肽，它是細(xì)胞健康狀態(tài)的標(biāo)志物。細(xì)菌或病毒侵入細(xì)胞后會破壞該細(xì)胞，同時自己也分解繁殖。這時肽分子就會與細(xì)菌或病毒碎片結(jié)合。這樣，附近的免疫細(xì)胞就得到該細(xì)胞受感染的信號，然后通知其他免疫細(xì)胞一同將受感染的細(xì)胞及其中的感染物殺死。

該科研小組是利用X射線晶體分析法發(fā)現(xiàn)這一奧秘的。他們選用了能誘發(fā)某些白血病的HTLV病毒作為研究對象，并在免疫細(xì)胞T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了這一病毒的受體。當(dāng)肽分子與該病毒殘片結(jié)合后，就會激發(fā)附近的T細(xì)胞上該病毒的受體，從而使T細(xì)胞發(fā)揮作用?？茖W(xué)家說，T細(xì)胞上含有上百萬個不同的受體，利用它可發(fā)現(xiàn)大量細(xì)菌或病毒并將受其感染的細(xì)包殺死。

7．第二段中,它（肽）是細(xì)胞健康狀態(tài)的標(biāo)志物的意思是（▲）（2分）

A．人體細(xì)胞在健康狀態(tài)下，其中才會有肽分子存在。

B.肽在細(xì)菌或病毒入侵后能發(fā)生求救信號，維護(hù)人體健康。

C．人體在健康的狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)含有的肽相對較多。

D．肽分子能將入侵的細(xì)菌或病毒分解并與其碎片結(jié)合。

8．下列說法不符合原文意思的一項(xiàng)是（▲）（2分）

A．向免疫細(xì)胞發(fā)生求救信號的是人體細(xì)胞中的肽分子。

B．肽分子與細(xì)菌或病毒的碎片結(jié)合后，會激發(fā)T細(xì)胞內(nèi)肽的受體。

C．最終殺死細(xì)菌或病毒的是T細(xì)胞中的細(xì)菌或病毒的受體。

D．T細(xì)胞中的受體，不僅殺死了細(xì)菌或病毒，還殺死了受感染的細(xì)胞。

參考答案：

7、B [解題思路］

它（肽）是細(xì)胞健康狀態(tài)的標(biāo)志物的意思是肽在細(xì)菌或病毒入侵后能發(fā)出求救信號，維護(hù)人體健康。

A項(xiàng)把因果關(guān)系倒轉(zhuǎn)了。是肽維護(hù)人體健康，而不是在健康狀態(tài)下才會有肽分子存在。

C項(xiàng)也是犯了同樣的錯誤，應(yīng)是有肽在，人體才會健康，而不是相反。

D項(xiàng)是從肽分子的功能方面說的，不是對題目中那句話的直接的解釋。

8、B項(xiàng)肽分子與細(xì)菌或病毒的碎片結(jié)合后，激發(fā)的是T細(xì)胞內(nèi)病毒的受體，而非肽的受體。

第三篇：免疫細(xì)胞的分離和保存技術(shù)

免疫細(xì)胞的分離和保存技術(shù)

用體外方法對機(jī)體各種具有免疫反應(yīng)的細(xì)胞分別作鑒定、計(jì)數(shù)和功能測定，是觀察機(jī)體免疫狀態(tài)的一種重要手段。為此，須將各種參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞從血液或臟器中分離出來。參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞主要包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。由于檢測的目的和方法有同，分離細(xì)胞的需求和技術(shù)也異。有的僅需分離白細(xì)胞，有的則需分離單個核細(xì)胞（mononuclearcell），其中含淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocyte），有的則需分離T細(xì)胞和B細(xì)胞以及其亞群。分離細(xì)胞選用的方法應(yīng)力求簡便可行，并能獲得高純度、高獲得率、高活力的細(xì)胞?，F(xiàn)用分離細(xì)胞群的原則，一是根據(jù)各類細(xì)胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以組分，另一則按照各類細(xì)胞的表面標(biāo)志，包括細(xì)胞表面的抗原和受體加以選擇性分離。

一、白細(xì)胞的分離

（一）血液中紅細(xì)胞與白細(xì)胞比例約600～1000:1，兩者的比重不同其沉降速度亦異，通常用兩種方法加以分離。

本法是利用血細(xì)胞自然沉降率的分離法，采集血液后應(yīng)及時抗凝，通常選用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固。操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫30～60min后，血液分成明顯三層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細(xì)胞，緊貼紅細(xì)胞層上面的灰白層為白細(xì)胞，輕輕吸取即得富含白細(xì)胞的細(xì)胞群，離心洗滌后加入少量蒸餾水或含氯化銨的Gey溶液，經(jīng)短時間的低滲處理，使紅細(xì)胞裂解，經(jīng)過反復(fù)洗滌可得純度較高的白細(xì)胞懸液。

（二）聚合物加速沉淀法

本法是利用高分子量的聚合物如明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮（polyvinylpyrolidone，PVP）等使紅細(xì)胞凝集成串，加速紅細(xì)胞沉降，使之與白細(xì)胞分離。本法的細(xì)胞獲得率比自然沉降法高。

二、外周血單個核細(xì)胞的分離

外周血中單個核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞密度較大，為1.090左右，而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075～1.090，血小板為1.030～1.035。為此利用一種密度介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液（分層液）做密度梯度離心，使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種。

（一）Ficoll分層液法

主要用于分離外周血中的單個核細(xì)胞，是一種單次密度梯度離心分離法。聚蔗糖－泛影葡胺是一種較理想的細(xì)胞分層液，其主要成分是一種合成的蔗糖聚合物稱聚蔗糖（商品名為Ficoll），分子量為40kD，具有高密度、低滲透壓、無毒性的特點(diǎn)。高濃度的Ficoll溶液粘性高，易使細(xì)胞聚集，故通常使用60g/L的低濃度溶液，密度為1.020，添加比重為1.200的泛影葡胺（urografin）以增加密度。國外常用商品Isopaque或Hypaque，故又稱Ficoll-Hypaque分層液，將適量340g/L泛影葡胺加入Ficoll溶液中即可配制成密度合適分層液。分離人外周淋巴細(xì)胞以密度為1.077±0.001的分層液最佳，因?yàn)槿说募t細(xì)胞密度為1.093，粒細(xì)胞密度為1.092，單個核細(xì)胞在1.076～1.090之間。而不同動物血中的單個核細(xì)胞對分離液的密度要求各不相同，如小鼠為1.088，馬為1.090。分離時先將分層液置試管底層，然后將肝素化全血以Hanks液或PBS液作適當(dāng)稀釋后，輕輕疊加在分層液上面，使兩者形成一個清晰的界面。水平式離心后，離心管中會出現(xiàn)幾個不同層次的液體和細(xì)胞帶（圖20-1）。

紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度大于分層液，同時因紅細(xì)胞遇到Ficoll而凝集成串錢狀而沉積于管底。血小板則因密度小而懸浮于血漿中，唯有與分層液密度相當(dāng)?shù)膯蝹€核細(xì)胞密集在血漿層和分層液的界面中，呈白膜狀，吸取該層細(xì)胞遞經(jīng)洗滌高心重懸。本法分離單個核細(xì)胞純度可達(dá)95％，淋巴細(xì)胞約占90％～95％，細(xì)胞獲得率可達(dá)80％以上，其高低與室溫有關(guān)，超過25℃時會影響細(xì)胞獲得率。

（二）Percoll分層液法

這是一種連續(xù)密度梯度離心分離法。Percoll是一種經(jīng)聚乙烯吡喀烷酮(PVP)處理的硅膠顆粒，對細(xì)胞無毒性。利用Percoll液經(jīng)高速離心后形成一個連續(xù)密度梯度的原理，將密度不等的細(xì)胞分離純化。用Percoll原液(密度1.135)與約等量雙離子強(qiáng)度的磷酸緩沖液均勻混合，高速離心后，使分層液形成一個從管底到液面密度逐漸遞減的連續(xù)密度梯度，再將已制備的單個核細(xì)胞懸液輕輕疊加在液面上，低速離心后，便得四個細(xì)胞層。表層為死細(xì)胞殘片和血小板，底層為粒細(xì)胞和紅細(xì)胞，中間有兩層，上層富含單個核細(xì)胞(75％)，下層富含淋巴細(xì)胞(98％)(圖-2)。該法是純化單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的一各較好的方法，但操作流程較長，手續(xù)較多。

圖-2 連續(xù)密度梯度離心法分離單個核細(xì)胞中各細(xì)胞成分的分布示意圖

三、淋巴細(xì)胞及其亞群的分離

為研究免疫細(xì)胞的功能，常需高純度的淋巴細(xì)胞或其亞群，分離方法介紹如下。

（一）、純淋巴細(xì)胞群的采集

通常利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在條件下，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，據(jù)此建立許多從單個核細(xì)胞懸液中去除單核細(xì)胞的方法，藉以獲得高純度的淋巴細(xì)胞群。

（1）粘附貼壁法

將已制備的單個核細(xì)胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃溫箱靜置1h左右，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞均貼于平皿壁上，而未貼壁的非粘附細(xì)胞幾乎為純淋巴細(xì)胞，繼用橡皮刮下貼壁的細(xì)胞即為純單核細(xì)胞群。因B細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象，用本法分離的淋巴細(xì)胞群中B細(xì)胞有所損失。

（2）吸附柱過濾法

將單個核細(xì)胞懸液注入裝有玻璃纖維或葡聚糖凝膠SephadexG10的柱層中，凡有粘附能力的細(xì)胞絕大部分被吸附而粘滯在柱層中，從柱上洗脫下來的細(xì)胞主要是淋巴細(xì)胞。此法簡單易行，對細(xì)胞極少損害。

（3）磁鐵吸引法

利用單核細(xì)胞具有吞噬的特性，在單個核細(xì)胞懸液中加直徑為3μm的羰基鐵顆粒，置37℃溫箱內(nèi)短時旋轉(zhuǎn)搖動，待單核細(xì)胞充分吞噬羰基鐵顆粒后，用磁鐵將細(xì)胞吸至管底，上層液中含較純的淋巴細(xì)胞。

（二）、淋巴細(xì)胞亞群的分離

分離相當(dāng)純化的淋巴細(xì)胞亞群是細(xì)胞免疫檢驗(yàn)的基本技術(shù)。其原則是根據(jù)相應(yīng)細(xì)胞的特性和不同的標(biāo)志加以選擇性純化。凡根據(jù)細(xì)胞的特性和標(biāo)志選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽性選擇法；而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞是為陰性選擇。常用以下幾種方法：

（1）E花環(huán)沉降法

本法是將淋巴細(xì)胞與一定比例的綿羊紅細(xì)胞混合，待淋巴細(xì)胞形成E花環(huán)后，繼用淋巴細(xì)胞分層液分離細(xì)胞。浮懸在分層界面而不形成E花環(huán)的群則富含B細(xì)胞，而沉降在管底的形成E花環(huán)的細(xì)胞用低滲法處理，使圍繞細(xì)胞周圍的綿羊紅細(xì)胞快速裂解，則獲得純的T細(xì)胞。

（2）尼龍毛分離法

本法利用B細(xì)胞和單核細(xì)胞具有易粘附于尼龍纖維表面的特性，可將T和B細(xì)胞分開。操作原則是取松散而經(jīng)過處理的尼龍毛（聚酰胺纖維），均勻充填在內(nèi)徑5～6nm的聚乙烯塑料管（飲料管即可）內(nèi)，經(jīng)Hanks液浸透保溫，將單個核細(xì)胞懸液加入柱內(nèi)，放37溫箱靜置1～2h。用預(yù)溫的含10％～20％小牛血清培養(yǎng)液灌洗，洗脫液內(nèi)含有非粘附的T細(xì)胞，重復(fù)灌洗幾次以除去管內(nèi)殘留的T細(xì)胞。再用冷或溫培養(yǎng)液邊沖邊洗邊擠壓塑料管，此時洗脫液內(nèi)富含B細(xì)胞。如此得到的T細(xì)胞純度在90％以上，B細(xì)胞純度可達(dá)80％。

（3）親和板結(jié)合分離法

利用親和層析法分離淋巴細(xì)胞亞群，其原理是各種淋巴細(xì)胞亞群具有不同的抗原性，將相應(yīng)抗體結(jié)合于塑料平板上，繼加細(xì)胞懸液，凡抗原陽性的細(xì)胞則與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原陰性的細(xì)胞可從未吸附的細(xì)胞懸液中獲?。▓D-3）。同樣若用特異性抗原交聯(lián)在塑料板上，則可分離得具有特異抗原受體的淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞受體與特異抗原或抗體接觸，可引起細(xì)胞激活，因此，凡欲去除細(xì)胞懸液內(nèi)某一細(xì)胞亞群時，本法更適用。如要分離CD4+或CD8+細(xì)胞，則可用抗CD4或CD8單克隆抗體吸附。用抗Ig抗體則可分離B細(xì)胞。同樣，用活化的C3包被，可分離出有C3受體的細(xì)胞。

圖-3 親和分離法圖解

（4）熒光激活細(xì)胞分離儀分離法

熒光激活細(xì)胞分離儀（fluorescenceactivatedcellsorter，F(xiàn)ACS）主要由4部分組成：①細(xì)胞流動系統(tǒng)及氣壓流速控制系統(tǒng)，②激光系統(tǒng)，③檢測與訊號處理系統(tǒng)，④細(xì)胞分選系統(tǒng)。其主要原理是細(xì)胞經(jīng)熒光染色后，通過高速流動系統(tǒng)，細(xì)胞排成單行，逐個流經(jīng)檢測區(qū)進(jìn)行測定。當(dāng)細(xì)胞從流動室噴嘴處流出時，超聲振蕩攪動液流，使液流斷裂成一連串的均勻小滴（40000個/s），每小滴內(nèi)最多含一個細(xì)胞（其中只有百分之幾的液滴中含細(xì)胞），細(xì)胞經(jīng)激光束照射產(chǎn)生熒光和散射光，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成脈沖信號，數(shù)據(jù)經(jīng)電腦處理，分辨細(xì)胞的類型。如識別的是預(yù)計(jì)所需的細(xì)胞時（如T細(xì)胞、B細(xì)胞要其亞群），在細(xì)胞樣品流斷裂成小滴時，使液滴瞬即感應(yīng)陽電荷、陰電荷或不帶電荷，使所需的細(xì)胞在電場偏轉(zhuǎn)下進(jìn)入不同的收集管（圖-4）。用FACS分離細(xì)胞準(zhǔn)確快速，能保持細(xì)胞活力，并可在無菌條件下進(jìn)行，但儀器昂貴，極少用于常規(guī)，而多數(shù)僅作為研究的手段。

圖-4 熒光激活細(xì)胞分離儀簡圖

四、吞噬細(xì)胞的分離和收集

人外周血中單核－巨噬細(xì)胞可通過Pecoll密度梯度分離法獲取，但數(shù)量較少，用血量多。用斑蝥敷貼法可從人體組織液中獲取較純的巨噬細(xì)胞，不需作進(jìn)一步體外分離，細(xì)胞量損失較少。該法是用濾紙蘸取10％中藥斑蝥酒精浸出液，貼敷在臂內(nèi)側(cè)皮膚表面，4～5h后皮膚局部充血，48h后局部形成水皰，吸取皰中的組織液，內(nèi)含巨噬細(xì)胞。但此法對病人皮膚有一定損傷，有時可引起局部感染，應(yīng)慎用。

欲獲取小鼠、大鼠、豚鼠等小動物的巨噬細(xì)胞，可經(jīng)腹腔內(nèi)注入少許石蠟油，3～4天后沖洗出腹腔滲出液，所得細(xì)胞懸液中70％～80％為巨噬細(xì)胞。

五、淋巴細(xì)胞的保存和活力測定

（一）、分離細(xì)胞的保存

在某些情況下，分離所得細(xì)胞需要加以保存，否則活力迅速下降，甚至死亡。

（1）短期保存技術(shù)

將分離到的細(xì)胞用適量含10％～20％滅活小牛血清的Hanks、Tc-199、RPMI1640或其他培養(yǎng)液稀釋重懸。所用培養(yǎng)液要求等滲，具緩沖作用，并對細(xì)胞無毒性。通常置4℃保存較好，可減低細(xì)胞代謝活動。要注意不要迅速改變細(xì)胞所處的溫度，以免造成細(xì)胞“溫度”休克。

（2）長期冷凍保存技術(shù)

利用液氮深低溫（－196℃）環(huán)境保存細(xì)胞，是當(dāng)前世界上通用的細(xì)胞長期保存技術(shù)。其原理在于深低溫環(huán)境可中斷細(xì)胞的代謝，但在降溫過程由于冰晶的形成和滲透壓的改變均可導(dǎo)致細(xì)胞的損傷和部分死亡，所以在冷凍過程中一定要加用冷凍保護(hù)劑，常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（dimethylsulfoxide，DMSO）。冷凍時的降溫速度和細(xì)胞解凍時的升溫速度對細(xì)胞活力的保存有很大影響。條件合適時，凍存細(xì)胞一旦復(fù)蘇，恢復(fù)37℃培養(yǎng)，其形態(tài)和代謝活動均可恢復(fù)正常。操作的原則是先對需凍存的細(xì)胞作活細(xì)胞計(jì)數(shù)，低速離心后，取沉積細(xì)胞用含10％二甲亞砜的小牛血清配制成適當(dāng)濃度的細(xì)胞懸液，分裝于凍存管內(nèi)，速即放入降溫過渡站中，避免二甲亞砜對細(xì)胞的損傷。繼而進(jìn)行降溫冷凍，目前常用兩步降溫法，即迅速降溫至一選擇好的臨界溫作為過渡站，如－80℃低溫冰箱過夜，或在液氮罐液面以上的一層空間放置片刻，然后再放入液氮中。如需復(fù)蘇細(xì)胞，則需迅速解凍以恢復(fù)細(xì)胞的活力，要求在20s以內(nèi)完全融化。將凍存管自液氮中取出，立即放入40℃溫水中，融化后即從水中取出，吸出細(xì)胞懸液，加入10倍的培養(yǎng)液中混勻，繼而低速離心，盡快洗去保護(hù)劑，再懸于新培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)并檢查細(xì)胞活力，然后置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

（二）、細(xì)胞活力測定

細(xì)胞活力常用百分比表示，活力的大小對試驗(yàn)結(jié)果有很大影響。細(xì)胞活力的測定有許多方法，最簡便常用的方法是臺盼藍(lán)（trypanblue）染色法。臺盼藍(lán)又稱錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色，但死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色。免疫檢測試劑中常用的防腐劑有硫柳汞、疊氮鈉、抗生素等。

1.疊氮鈉是HRP的抑制劑，凡是和HRP接觸的試劑，一定不能用；

2.硫柳汞在ELISA試劑中可普遍使用，但因其有毒，較少使用；

3.市面許多試劑盒產(chǎn)品，用抗生素做防腐劑較多，如慶大。

4.如果試劑僅在實(shí)驗(yàn)室短期使用，其實(shí)并不需加防腐劑，常規(guī)試劑放4度冰箱，抗體、酶等加甘油分裝凍存即可。

5.梅里埃生產(chǎn)的HIV診斷試劑中提到：對照血清的防腐用0.1g/L硫酸慶大霉素和0.2ml/L肉桂醛。

6.防污染可添加0.02%的疊氮鈉，或0.01%的硫柳汞。疊氮鈉在多數(shù)情況下有用且有效，但在有些實(shí)驗(yàn)中卻不合適，因?yàn)樗茏钄嗉?xì)胞的電子傳遞鏈，對許多生物體都有毒醫(yī)學(xué) 教育網(wǎng) 搜 集整理性，因此不能用于活體實(shí)驗(yàn)；因?yàn)楹邪被芨蓴_許多標(biāo)記方法；不能用于辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體。而硫柳汞不含氨基，不影響基質(zhì)的穩(wěn)定性。如果將抗體應(yīng)用于生物活性檢測、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，一般不使用任何防腐劑，這些實(shí)驗(yàn)用的抗體應(yīng)少量分裝冷存，切忌反復(fù)凍融。

7.吐溫-20是作為穩(wěn)定劑，可減少非特異性黏合。甘油是防止凍融過程中的固-液相變而引起蛋白變性，能有效地增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，-20度凍存時甘油的濃度可以在20~30%。

第四篇：研究人員揭開艾滋病毒如何“劫持”人體免疫細(xì)胞

研究人員揭開艾滋病毒如何“劫持”人體免疫細(xì)胞

更多相關(guān)新聞時間:2014-3-26 9:50:49,點(diǎn)擊:111

哈爾濱工業(yè)大學(xué)生命學(xué)院黃志偉教授課題組，在世界上首次揭示了艾滋病病毒毒力因子（Vif）的結(jié)構(gòu)，闡明了Vif如何“劫持”人免疫細(xì)胞的分子機(jī)制，為研制全新艾滋病藥物提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。相關(guān)論文日前在《自然》雜志上在線發(fā)表。

艾滋病病毒猶如一把鎖，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)如何，始終困擾著廣大學(xué)者。在艾滋病病毒的9大基因中，Vif是其毒力因子，可以視為針對人類進(jìn)化而生的，作用就是在人體免疫細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行病毒生成和復(fù)制。30多年來，人類對艾滋病一直缺少有效療法，關(guān)鍵在于Vif自身或其功能性復(fù)合物的原子水平結(jié)構(gòu)圖未被解析和繪出。“換句話解釋，艾滋病病毒Vif通過‘劫持’人免疫細(xì)胞內(nèi)蛋白降解系統(tǒng)來弱化人免疫細(xì)胞，從而逃避免疫細(xì)胞對艾滋病病毒的識別和防御?！秉S志偉說。

黃志偉課題組的研究自2012年7月開始，在1年多的時間里，他們弄清了Vif五元復(fù)合物結(jié)構(gòu)，顯示出Vif結(jié)構(gòu)自身形成與目前所有已知蛋白結(jié)構(gòu)不一樣的折疊，同時揭示了Vif如何“劫持”人CBF-β以及CUL5 E3連接酶復(fù)合物的分子機(jī)制。

黃志偉說，揭示Vif的結(jié)構(gòu)為未來艾滋病治療從雞尾酒式的混合用藥方式，轉(zhuǎn)向研制靶向治療藥物提供了一個新思路。目前，黃志偉課題組正在和國內(nèi)相關(guān)高校實(shí)驗(yàn)室密切合作，進(jìn)行艾滋病新藥的研發(fā)和攻關(guān)。

第五篇：2013年世界抗癌日 cls生物免疫療法治療進(jìn)展

2013年世界抗癌日 cls生物免疫療法治療進(jìn)展

文章來源：新醫(yī)大五附院 轉(zhuǎn)載請注明

新醫(yī)大五附院官網(wǎng)資訊：世界癌癥日是UICC于2000年發(fā)起，活動時間定于每年的2月4日，旨在倡導(dǎo)新的方法促進(jìn)各組織間的合作，加快癌癥研究、預(yù)防及治療等領(lǐng)域的進(jìn)展，為人類造福。預(yù)防癌癥和提高癌癥患者生活質(zhì)量是反復(fù)出現(xiàn)的主題。2012年世界癌癥日的主題是：“共同參與，成就奇跡(Togetheritispossible)”。

癌癥是一個全球主要的死亡原因：2004年，癌癥死亡人數(shù)達(dá)740萬(約占所有死亡人數(shù)的13%)。肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝癌和乳癌是每年大多數(shù)癌癥死亡的罪魁禍?zhǔn)?。男女最?；嫉陌┌Y類型有所不同。超過30%的癌癥死亡是可以避免的。煙草使用是癌癥單一最重要的的危險因素。癌癥由一個單細(xì)胞變異造成。這種變異可由外部因子和遺傳基因因素造成。全球癌癥死亡人數(shù)將繼續(xù)增加，2030年，死亡人數(shù)預(yù)計(jì)將達(dá)1200萬。

癌癥是一組可影響身體任何部位的多種疾病的通稱。使用的其它術(shù)語為惡性腫瘤和贅生物。癌癥的一個定義特征是快速產(chǎn)生異常細(xì)胞，這些細(xì)胞超越其通常邊界生長并可侵襲身體的毗鄰部位和擴(kuò)散到其它器官。這一過程被稱之為轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移是癌癥致死的主要原因。2013年，推出的世界癌癥日的主題為“你了解癌癥嗎?(Cancer,didyouknow?)”，旨在消除人們對癌癥的錯誤認(rèn)知，消除公眾對癌癥治療的恐懼。引導(dǎo)公眾養(yǎng)成健康的生活方式，注重早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，提高生存質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)減緩并最終控制癌癥死亡率增長這一目標(biāo)。

而對于腫瘤患者的治療，一般情況下，臨床上都是先手術(shù)治療，再考慮化療，但是療效往往不令人滿意，主要是病情會反復(fù)，治療不夠徹底。加上化療對身體的巨大傷害，導(dǎo)致患者的病情越來越重，那么。對于腫瘤的治療我們還有什么更好的治療方案嗎?這個問題一直困擾著腫瘤專家們，直到21世紀(jì)隨著科技的進(jìn)步，尤其是分子生物學(xué)技術(shù)和細(xì)胞工程技術(shù)的飛速發(fā)展，生物免疫治療技術(shù)的問世，為腫瘤專家解決了困擾已久的問題。

生物免疫治療的誕生，使腫瘤患者不手術(shù)也能治好病

生物免疫治療是通過一定的生物技術(shù)在高標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)培養(yǎng)出DC免疫細(xì)胞和CIK腫瘤殺傷細(xì)胞，然后采用獨(dú)特的雙養(yǎng)雙輸法，對DC、CIK細(xì)胞培養(yǎng)、增殖，結(jié)合為一體后回輸患者體內(nèi)，直接殺傷癌細(xì)胞并重建自體免疫系統(tǒng)的治療方法。與傳統(tǒng)的治療方法不同，生物免疫治療主要是調(diào)動人體的天然抗癌能力，補(bǔ)充和平衡體內(nèi)因各種原因恢復(fù)緩慢的機(jī)體免疫機(jī)能環(huán)境，能根據(jù)患者自身的體質(zhì)，合理調(diào)節(jié)生物免疫治療的治療周期，實(shí)現(xiàn)預(yù)防和抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的醫(yī)學(xué)觀點(diǎn),實(shí)現(xiàn)癌癥患者最想要的醫(yī)學(xué)訴求

生物免疫治療技術(shù)具有不傷身體、無痛等優(yōu)點(diǎn)，減輕患者化療毒副作用的同時，還能提高患者自身的免疫與生活質(zhì)量，并適用于幾乎所有的腫癌疾病。由于生物免疫治療技術(shù)是利用人體自身的免疫細(xì)胞，而不是傳統(tǒng)的化學(xué)藥品來殺傷腫癌細(xì)胞的，因此該技術(shù)安全無毒副作用，適用于癌癥各階段的治療，在腫癌生物治療中心開展以來已為無數(shù)癌癥患者解除了病痛的折磨，讓更多的癌癥患者重新找回了健康的狀態(tài)。

該技術(shù)對于早期癌癥患者能夠起到有望“根治”的效果，對于中晚期的癌癥患者來說，可修復(fù)受損機(jī)體，提升患者自身免疫力，從而達(dá)到延長患者生命周期，提高患者生活質(zhì)量的目的。對于已發(fā)生轉(zhuǎn)移、體質(zhì)較弱的晚期腫瘤患者，能激活體內(nèi)的免疫功能，通過高特異功能的免疫細(xì)胞，識別和殺傷腫瘤，促進(jìn)治療，控制腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，有效延長患者生存時間，提升生存質(zhì)量。生物免疫治療以其獨(dú)有的優(yōu)勢，給腫瘤患者帶來新的希望!相關(guān)推薦閱讀：

近年來，央視關(guān)于生物免疫治療的相關(guān)報道：

·2009年3月衛(wèi)生部頒布《醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法》衛(wèi)醫(yī)政發(fā)【2009】18號，將生物免疫治療納入第三類技術(shù)進(jìn)行管理。

·2011年4月17日，中央電視臺《新聞聯(lián)播》節(jié)目對生物免疫治療作出了權(quán)威報道，稱“生物免疫治療獲得重大進(jìn)展，早期癌癥三分之一可治愈”。

·2011年10月3日，生物免疫治療領(lǐng)域的三位科學(xué)家榮獲2011諾貝爾醫(yī)學(xué)獎。

·2012年2月4日(世界抗癌日)央視13套《新聞直播間》欄目對腫瘤生物治療進(jìn)行了相關(guān)報道，更多閱讀 004km.cn 報道中指出：生物免疫治療是腫瘤的綠色療法，它如同細(xì)胞“導(dǎo)彈”，對腫瘤的識別能力較強(qiáng)，能精確點(diǎn)殺腫瘤細(xì)胞，而不會傷及人體正常組織，為腫瘤治療提供了新的選擇。

·2012年3月6日央視2套《交易時間》報道：“生物免疫治療在不損傷機(jī)體正常免疫的情況下，清除血液、淋巴中殘存的癌細(xì)胞，減少了腫瘤細(xì)胞復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的幾率，而治療費(fèi)用僅為化療及靶向藥物傳統(tǒng)方式的一半?！?/p>