第一篇：細胞培養(yǎng)基種類

細胞培養(yǎng)基的選擇及常用數(shù)據(jù)庫

日期：2012-04-13 來源：未知 作者：網(wǎng)友 點擊：次 細胞實驗技術(shù)

經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。

◆ MEM是由Eagle’s基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。

◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細胞設(shè)計的，現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。

◆ aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應(yīng)用于各種細胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細胞。

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設(shè)計的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。

◆ RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細胞培養(yǎng)而設(shè)計的，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細胞的培養(yǎng)。

以前經(jīng)常聽到有人問，這種細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個問題的答案可以很簡單，也可以好復(fù)雜。此話怎講?如果這種細胞是購自ATCC或其他的細胞庫，那很簡單，問供應(yīng)商就行了?；蛘哒业较嚓P(guān)的文獻，作為參考。Invitrogen網(wǎng)站上有一個Cell Line Database的工具，也很好用。選擇你感興趣的細胞類型，它就會彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等，有時還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟，很方便。Sigma網(wǎng)站上也有一個Media Expert，包括了培養(yǎng)基所有成分的功能描述、使用推介和參考文獻等，它還是一個解決問題能手，對于細胞培養(yǎng)中的常見問題，如細胞貼壁不好、培養(yǎng)基變色等，它都會列出可能的原因，并提供補救辦法。這個Expert果然不簡單!但如果你是著手建立一種全新細胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得花點時間自己試驗了。萬事開頭難嘛。因為沒有一個標(biāo)準(zhǔn)答案。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首選MEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細胞培養(yǎng)會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養(yǎng)基來，然后花大約兩周的時間做一個簡單的細胞生長實驗，來選擇其中最適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的最佳培養(yǎng)條件與文獻報道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件，細胞的生長狀態(tài)也時好時壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。

以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基，但配制過程就較為繁瑣，要溶解、調(diào)pH值，過濾，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差，而且有些實驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會有差異。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的，批間差會很小。大家是不是感覺液體培養(yǎng)基會貴很多，以前是這樣，但現(xiàn)在非也。HyClone和Invitrogen都在國內(nèi)建立了液體培養(yǎng)基的生產(chǎn)基地，生產(chǎn)和運輸成本大幅降低，所以現(xiàn)在的價格也只是50-60元/500ml，比干粉培養(yǎng)基貴不了多少，而且還幫你省了過濾器和時間。

血清含有生長因子可促進細胞的繁殖，含有附著因子可促進細胞的貼壁，同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質(zhì)、脂類及激素的來源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早，營養(yǎng)物質(zhì)越豐富，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養(yǎng)。由于瘋牛病的原因，到目前為止，我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區(qū)進口牛血清，因此市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲，或是國產(chǎn)的。

而血清批次間的差別就是不可避免的，這種差異來源于不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等，而且與取血動物的來源關(guān)系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時，也要盡量保持與原有的一批血清相似。現(xiàn)在很多公司都提供血清預(yù)留，你一旦選定了某個批次的血清，最好備足一年的量，這樣可以避免很多麻煩。

血清固然是細胞培養(yǎng)中不可或缺的成分，但正如上文所說，血清的批間差異大，更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病的影響，說不定哪天血清就突然沒得賣了，那對實驗的影響可非同小可。另外，血清的價格也很昂貴，雖說現(xiàn)在也有便宜的國產(chǎn)血清，但是高品質(zhì)的澳洲血清價格仍舊高企。因此，也有一些實驗室開始換用無血清培養(yǎng)基。

無血清培養(yǎng)基(Serum-Free Media)，通常以SFM表示，顧名思義，就是在細胞培養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少上述血清帶來的不利因素，使細胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。但它也不是完美的，從有血清培養(yǎng)過渡到無血清培養(yǎng)的條件并不像想象中那么直截了當(dāng)。處于發(fā)育的不同分化階段的細胞(例如干細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方，對生長因子和細胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時，也去除了一些血清蛋白具有的保護、解毒作用，因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外，它的價格也比普通的培養(yǎng)基貴很多。

現(xiàn)在有很多廠家生產(chǎn)無血清培養(yǎng)基。GIBCO這個細胞培養(yǎng)的金字招牌當(dāng)然少不了，它也是最早研制無血清培養(yǎng)基的。目前已經(jīng)開發(fā)了ES細胞、雜交瘤、CHO、293、昆蟲細胞、神經(jīng)細胞、淋巴細胞、角質(zhì)細胞、內(nèi)皮細胞等多種細胞的無血清培養(yǎng)基。上個月還推出了首個間充質(zhì)干細胞的無血清培養(yǎng)基，能使MSC維持未分化狀態(tài)超過9代。HyClone公司也有CHO、293、雜交瘤細胞、昆蟲細胞、病毒疫苗細胞的多種無血清培養(yǎng)基。Sigma則剛剛收購了澳大利亞JRH公司，有了JRH的EX-CELL系列，無血清培養(yǎng)基的選擇也更多了。

這么多種，要選擇起來也是個頭疼的事情。除了部分培養(yǎng)基是公開配方的，如用于培養(yǎng)內(nèi)皮細胞的MCDB 131(Sigma)，大部分液體培養(yǎng)基都是專利配方的，也就是說其中的成分是保密的。那么你只能是檢索文獻、讓供應(yīng)商推薦，然后用自己的細胞做幾次傳代培養(yǎng)來選出最合適的培養(yǎng)基。畢竟實踐出真知嘛。

P.S.附上一些細胞培養(yǎng)中的小Tip，可能會對您有所啟發(fā)。(部分摘自Invitrogen的中文Focus)? 切記，細胞培養(yǎng)基的儲存條件是2-8攝氏度。如果細胞培養(yǎng)基不小心被凍，您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。

? 貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。

? 當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。

? 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

? 總之，大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。

? 血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往公認(rèn)的操作步驟，并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反，對大部分細胞而言，GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因為加熱可能使血清中的沉淀增加，使您誤以為污染。

? 如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生? 1.解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。2.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

3.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

4.若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

? 在進行傳代培養(yǎng)時，我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代，不進行活性檢測，您可能接種比你認(rèn)為的低的多的濃度的細胞，這常?？赡軐?dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。

? 貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液只能使用一周。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定。

? 在訂購的細胞到達后，應(yīng)立即復(fù)蘇，如果培養(yǎng)基還沒有準(zhǔn)備好，可將其放入液氮中，盡快復(fù)蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內(nèi)。

? 細胞復(fù)蘇往往是比較容易出問題的步驟。請在訂購細胞時就向供應(yīng)商索取詳細的復(fù)蘇步驟，并仔細閱讀。有些供應(yīng)商就不推薦在復(fù)蘇時離心，對此類細節(jié)，應(yīng)特別留意。

第二篇：培養(yǎng)基匯總

培養(yǎng)基成分匯總

顯色培養(yǎng)基

?大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 ?大腸菌群顯色培養(yǎng)基 ?大腸桿菌／大腸菌群顯色培養(yǎng)基

?TBX培養(yǎng)基 ?細菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基 ?O157顯色培養(yǎng)基 ?沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 ?李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基 ?金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基

?弧菌顯色培養(yǎng)基 ?念珠菌顯色培養(yǎng)基 ?阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基 ?腸球菌顯色培養(yǎng)基 ?尿道定位顯色培養(yǎng)基

菌落總數(shù)檢測培養(yǎng)基

?平板計數(shù)瓊脂（PCA）

?TTC營養(yǎng)瓊脂 ?營養(yǎng)肉湯（NB）?營養(yǎng)瓊脂（NA）?2216E瓊脂 ?標(biāo)準(zhǔn)I號營養(yǎng)瓊脂 ?標(biāo)準(zhǔn)II號營養(yǎng)瓊脂 ?胰胨大豆胨固綠瓊脂

?m-TGE肉湯 ?水平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基

?TGE培養(yǎng)基 ?CVT瓊脂 ?肉湯培養(yǎng)基 ?酵母粉瓊脂 ?平板計數(shù)瓊脂

?平板計數(shù)瓊脂（含麥芽提取物）

?2216E液體培養(yǎng)基 ?嗜冷菌計數(shù)瓊脂 ?NA培養(yǎng)基 ?MPC瓊脂培養(yǎng)基 ?接觸皿培養(yǎng)基 ?R2A瓊脂

大腸桿菌O157檢驗培養(yǎng)基

?三糖鐵（TSI）瓊脂

?月桂基硫酸鹽胰蛋白胨MUG培養(yǎng)基

?mEC肉湯 ?mTSB肉湯 ?SD-39瓊脂

?改良山梨醇麥康凱(CT-SMAC)瓊脂

?改良EC肉湯(mEC+n)

?半固體瓊脂

?山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)（SMAC）?改良麥康凱肉湯（CT-MAC）?月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯-MUG

?PBS-Tween20洗液 ?O157顯色培養(yǎng)基

大腸菌群、大腸桿菌檢驗培養(yǎng)基

?月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）

?EC肉湯 ?乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 ?乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基 ?去氧膽酸鹽瓊脂（DC）

?MR-VP培養(yǎng)基

?結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）

?西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂 ?腸道菌計數(shù)瓊脂（VRBDA）

?品紅亞硫酸鈉瓊脂 ?乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 ?亮綠乳糖培養(yǎng)基 ?腸道菌增菌肉湯（EE）

?LB肉湯 ?LB營養(yǎng)瓊脂 ?苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基 ?伊紅美藍瓊脂（EMB）?哥倫比亞MUG培養(yǎng)基

?BDS培養(yǎng)基 ?葡萄糖瓊脂 ?Andrade氏糖類肉湯 ?Korser氏枸椽酸鹽肉湯

?Endo培養(yǎng)基 ?緩沖MUG瓊脂 腸球菌、溶血性鏈球菌和糞鏈球菌檢驗培養(yǎng)基

?葡萄糖肉浸液肉湯 ?匹克氏肉湯基礎(chǔ)A ?肉浸液肉湯培養(yǎng)基 ?疊氮鈉葡萄糖肉湯 ?乙基紫疊氮鈉肉湯 ?KF鏈球菌瓊脂

?腸球菌瓊脂(膽鹽－七葉苷－疊氮鈉瓊脂)?濾膜腸球菌瓊脂 ?CATC瓊脂 ?膽鹽七葉苷瓊脂 ?哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)

?LIM培養(yǎng)基 ?BETA-SSA瓊脂 ?糞腸球菌瓊脂 ?緩沖蛋白胨水（BPW）?膽汁液態(tài)培養(yǎng)基 ?M-腸道菌瓊脂 ?THB培養(yǎng)基 ?PS瓊脂 ?腸球菌肉湯 ?腦心浸液肉湯（BHI）?腦心浸萃液肉湯 ?腦心浸液瓊脂（BHIA）

?Pfizer腸球菌選擇性瓊脂（PSE瓊脂）

?MEI培養(yǎng)基

沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基

?亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）

?膽硫乳瓊脂（DHL）

?SS瓊脂 ?亞硫酸鉍瓊脂（BS）?亞利桑那菌瓊脂（SA）?氯化鎂孔雀綠肉湯（MM，RV ?HE瓊脂（HE）?尿素酶瓊脂基礎(chǔ) ?V-P半固體瓊脂 ?硝酸鹽氰化鉀培養(yǎng)基基礎(chǔ)

?丙二酸鈉培養(yǎng)基 ?衛(wèi)矛醇半固體瓊脂

?GN增菌液 ?XLD培養(yǎng)基 ?WS瓊脂 ?葡萄糖銨培養(yǎng)基

?乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸瓊脂

?Tergitol-7瓊脂 ?A1培養(yǎng)基 ?LES Endo ?m-TEC瓊脂 ?現(xiàn)隱肉湯 ?醋酸鹽瓊脂 ?心浸液瓊脂 ?桔汁瓊脂 ?EEM培養(yǎng)基 ?胰蛋白胨膽鹽瓊脂 ?Elek氏培養(yǎng)基 ?Tergitol-7瓊脂 ?TTC乳糖瓊脂 ?MFC肉湯 ?MFC瓊脂

?煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）

?VRB-MUG瓊脂 ?pH7.3PBS緩沖液

?MEE肉湯 ?MI培養(yǎng)基 ?結(jié)晶紫中性紅膽鹽肉湯 ?艾格LT100肉湯 ?SOC培養(yǎng)基

?Aliz-gal肉湯（茜素-β-半乳糖苷瓊脂）MR-VP試驗用培養(yǎng)基）?去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽乳糖蔗糖瓊脂

?Honda 氏產(chǎn)毒肉湯 ?磷酸鹽緩沖液（pH7.2）?大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 ?大腸菌群顯色培養(yǎng)基

?營養(yǎng)肉湯（GB/T20944.1-2007標(biāo)準(zhǔn)）

金黃色葡萄球菌檢驗檢驗培養(yǎng)基

?腦心浸液肉湯（BHI）?胰蛋白胨大豆肉湯 ?Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)

?DNA酶瓊脂 ?7.5%氯化鈉肉湯 ?腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基 ?亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?葡萄球菌增菌肉湯 ?甲苯胺藍-DNA酶瓊脂 ?甘露醇高鹽瓊脂

?緩沖葡萄糖蛋白胨水（?葡萄糖半固體培養(yǎng)基

?動力－吲哚－尿素培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MIU)?亞硒酸鹽增菌液(SF)?醋酸鉛培養(yǎng)基 ?SIM培養(yǎng)基 ?乳糖肉湯 ?煌綠瓊脂

?去氧膽酸鹽枸櫞酸鹽瓊脂 ?吲哚培養(yǎng)基（蛋白胨水）

?EF-18瓊脂 ?RVS肉湯 ?MKTTn肉湯 ?賴氨酸鐵瓊脂（LIA）?改良MSRV培養(yǎng)基 ?SCCRAM肉湯 ?BPL瓊脂 ?BPLS瓊脂 ?改良BPLS瓊脂 ?MIO培養(yǎng)基 ?XLT4瓊脂 ?醋酸鉛瓊脂

?四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)?沙門氏菌顯色培養(yǎng)基 ?緩沖蛋白胨水（BPW）

?哥倫比亞CNA瓊脂基礎(chǔ)

?葡萄球菌選擇性瓊脂110（CHAPMAN瓊脂）

?甘露醇卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)

?V-J瓊脂

?改良Giolitti-Cantobi肉湯

?TMP瓊脂培養(yǎng)基

?(腦)心浸液瓊脂

?普通肉湯培養(yǎng)基

?葡萄球菌選擇性瓊脂

?10％氯化鈉胰酪胨大豆肉湯

?營養(yǎng)瓊脂斜面

?甘露醇氯化鈉瓊脂

?北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ)

?豆粉瓊脂（血瓊脂基礎(chǔ)）

?磷酸鹽緩沖液（pH7.2）

沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基

?D/E中和肉湯

?D/E中和瓊脂

?M-肉湯

?煌綠黃胺嘧啶瓊脂

?BGS瓊脂

?三糖鐵瓊脂（TSI）

?沙門氏志賀氏增菌液

?志賀氏菌增菌肉湯

培養(yǎng)基成分匯總2 弧菌檢驗檢驗培養(yǎng)基

?堿性蛋白胨水 ?TCBS瓊脂

?氯化鈉多粘菌素B肉湯基礎(chǔ)(SCPB)?慶大霉素瓊脂 ?我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?60g/L氯化鈉蛋白胨肉湯

?氯化鈉三糖鐵 ?胰胨大豆瓊脂斜面（TSA）

?42℃生長培養(yǎng)基 ?O/F培養(yǎng)基(HLGB)?氯化鈉結(jié)晶紫增菌液 ?氯化鈉蔗糖瓊脂 ?嗜鹽菌選擇性瓊脂 ?氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ) ?霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA)?T1N1瓊脂 ?T1N0肉湯 ?T1N3肉湯

?精氨酸葡萄糖斜面瓊脂（AGS）

?mCPC培養(yǎng)基 ?副溶血性弧菌瓊脂 ?副溶血性弧菌增菌液 ?3.5%Nacl三糖鐵 ?3%氯化鈉堿性蛋白胨水 ?3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂 ?3%氯化鈉三糖鐵(TSI)瓊脂

?BTB培養(yǎng)基 ?PAC斜面培養(yǎng)基 ?四號瓊脂

?纖維二糖-多粘菌素E（CC）瓊脂

?副溶血性弧菌顯色培養(yǎng)基 ?嗜鹽性試驗用胰胨水

四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌、嗜熱菌芽孢檢驗培養(yǎng)基

?菌種培養(yǎng)基 ?四環(huán)素檢定瓊脂 ?亞硫酸鹽瓊脂 ?改良亞硫酸鹽瓊脂 ?蛋白胨鹽溶液 ?亞硫酸鐵瓊脂 ?葡萄糖胰蛋白胨瓊脂

酵母菌、霉菌、念珠菌、青霉、曲霉檢驗培養(yǎng)基

?察氏瓊脂 ?產(chǎn)毒培養(yǎng)基

?馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）

?高鹽察氏瓊脂 ?沙氏瓊脂培養(yǎng)基 ?玉米粉瓊脂

?孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅培養(yǎng)基）?酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂（YDC）

?Candida Elective瓊脂

?DTM培養(yǎng)基 ?DRBC瓊脂 ?WORT瓊脂 ?WORT肉湯 ?YGC瓊脂

?改良綠色酵母菌和真菌肉湯

?Littman瓊脂 ?DG-18瓊脂 ?YM瓊脂 ?YM11瓊脂 ?OGY瓊脂 ?WL營養(yǎng)瓊脂 ?改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基 ?沙氏BHI瓊脂 ?營養(yǎng)鹽瓊脂

?馬鈴薯葡萄糖瓊脂（含氯霉素）

?高滲真菌學(xué)瓊脂 ?BIGGY瓊脂

?1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基

?SDAY培養(yǎng)基

?皮膚癬菌鑒別瓊脂（DTM）?馬鈴薯-蔗糖培養(yǎng)基 ?無機鹽瓊脂培養(yǎng)基 ?礦物鹽瓊脂 ?酵母蛋白胨培養(yǎng)基

蠟樣芽孢桿菌檢驗培養(yǎng)基

?甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)（MYP）

?胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)

?改良V-P培養(yǎng)基 ?胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)

?酪蛋白瓊脂 ?酚紅葡萄糖肉湯 ?硝酸鹽肉湯 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基

?布氏肉湯

?改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ) ?改良Camp-BAP氏瓊脂基礎(chǔ)

?TTC瓊脂基礎(chǔ) ?甘氨酸培養(yǎng)基 ?快速硫化氫試驗瓊脂 ?DNA酶甲基綠瓊脂基礎(chǔ) ?Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ) ?改良CCD瓊脂基礎(chǔ)(mCCD)?Bolton肉湯

?Mueller-Hinton瓊脂（MHA）

?哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)

?蛋白胨 ?布氏瓊脂 ?馬尿酸鈉培養(yǎng)基 ?波爾頓選擇性增菌肉湯

?CCDA基礎(chǔ)

乳酸菌、雙歧桿菌檢驗培養(yǎng)基

?改良番茄汁培養(yǎng)基 ?改良MC培養(yǎng)基 ?BLB培養(yǎng)基 ?MRS瓊脂 ?LBS瓊脂 ?M17瓊脂 ?M17肉湯 ?乳酸桿菌選擇性瓊脂

?APT瓊脂 ?BL瓊脂培養(yǎng)基 ?BBL瓊脂培養(yǎng)基 ?TPY瓊脂培養(yǎng)基 ?PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)

?MC培養(yǎng)基 ?APT肉湯 ?乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基

?MRS肉湯 ?雙歧桿菌BS培養(yǎng)基

李斯特氏菌檢驗檢驗培養(yǎng)基

(MMA)?糖發(fā)酵基礎(chǔ)肉湯

(LB1,LB2)基礎(chǔ)

?七葉苷培養(yǎng)基

?動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（A法）

?木糖-明膠培養(yǎng)基 ?臘樣芽孢桿菌選擇瓊脂基礎(chǔ)

?葡萄糖酪胨瓊脂 ?溶菌酶肉湯基礎(chǔ)

植物組培

?MS培養(yǎng)基 ?B5培養(yǎng)基 ?N6培養(yǎng)基 ?NLN培養(yǎng)基

阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基

?緩沖蛋白胨水 ?胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）?阪崎桿菌顯色培養(yǎng)基 ?腦心浸液肉湯（BHI）

?改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素

（mLST-Vm）

?阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI瓊脂）?結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA）

?TSA瓊脂

?腸道菌增菌肉湯（EE）?西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基

?CIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?改良Y培養(yǎng)基 ?改良磷酸鹽緩沖液 PSB

?ITC肉湯 ?半固體瓊脂 ?SSDC培養(yǎng)基（ISO）?改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基

李斯特氏菌檢驗檢驗培養(yǎng)基 ?Half–Fraser培養(yǎng)基 ?Fraser培養(yǎng)基 ?LPM瓊脂

?改良緩沖蛋白胨水（MBP）

?EB增菌液 ?UVM培養(yǎng)基 ?LM-137瓊脂 ?MFB培養(yǎng)基

?含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉湯（TSB-YE）?李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)?李氏菌增菌肉湯 ?半固體動力培養(yǎng)基 ?牛津瓊脂(OXA)基礎(chǔ) ?緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)

?PALCAM瓊脂 ?SIM動力培養(yǎng)基

?含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE）

?血液瓊脂基礎(chǔ)

培養(yǎng)基成分匯總3 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基

?緩沖蛋白胨水 ?胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）?阪崎桿菌顯色培養(yǎng)基 ?腦心浸液肉湯（BHI）

?改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素（mLST-Vm）

?阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI瓊脂）?結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA）

?TSA瓊脂

?腸道菌增菌肉湯（EE）?西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基

?CIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?改良Y培養(yǎng)基 ?改良磷酸鹽緩沖液 PSB ?ITC肉湯 ?半固體瓊脂 ?SSDC培養(yǎng)基（ISO）?改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基

商業(yè)無菌檢驗培養(yǎng)基

產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基

?胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)（TSC）

?產(chǎn)芽孢肉湯

?亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂基礎(chǔ) ?多價蛋白胨-酵母膏（PY）培養(yǎng)基

?皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?皰肉牛肉粒 ?液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 ?卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 ?含鐵牛奶培養(yǎng)基 ?梭菌鑒別瓊脂（DCA）?強化梭菌鑒別瓊脂（DRCA）

?強化梭菌瓊脂 ?強化梭菌培養(yǎng)基（RCM）

?TSN瓊脂 ?亞硫酸鐵瓊脂 ?TBB培養(yǎng)基 ?CHO培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?SCHAEDLER瓊脂 ?厭氧菌瓊脂 ?CDC厭氧菌瓊脂

?亞硫酸鹽還原厭氧菌孢子液體培養(yǎng)基 ?溴甲酚紫葡萄糖肉湯 ?錳鹽營養(yǎng)瓊脂 ?卵黃瓊脂基礎(chǔ) ?酸性肉湯 ?皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?皰肉牛肉粒

消毒滅菌效果評價培養(yǎng)基

?溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基

?溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液

?營養(yǎng)肉湯(NB)?營養(yǎng)瓊脂 ?普通肉湯培養(yǎng)基 ?0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

化妝品檢驗檢驗培養(yǎng)基

?SCDLP液體培養(yǎng)基 ?卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂

?乙酰胺瓊脂 ?十六烷三甲基溴化銨瓊脂 ?甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基 ?明膠培養(yǎng)基基礎(chǔ)

PDP瓊脂培養(yǎng)基）?TTC卵磷脂-吐溫80-營養(yǎng)瓊脂

?HC瓊脂基礎(chǔ) ?改良LETHEEN瓊脂基礎(chǔ)

?TAT肉湯

?綠膿菌素測定培養(yǎng)基（PDP）

?沙氏葡萄糖瓊脂 ?沙氏葡萄糖氯霉素瓊脂 ?孟加拉紅培養(yǎng)基 ?7.5%氯化鈉肉湯 ?Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)

?Letheen肉湯 ?Letheen瓊脂 ?改良HC瓊脂

?雙料乳糖膽鹽（含中和劑）培養(yǎng)基

?乳糖膽鹽培養(yǎng)基

2010版中國藥典培養(yǎng)基

?抗生素檢定培養(yǎng)基1號(高pH)?抗生素檢定培養(yǎng)基1號（低pH)?抗生素檢定培養(yǎng)基2號（高pH）?抗生素檢定培養(yǎng)基2號（低pH）

?WILKINS-CHALGREN瓊脂

?MCP瓊脂 ?SC瓊脂基礎(chǔ)

一次性衛(wèi)生用品檢驗檢驗培養(yǎng)基

?0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 ?溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基

?液體沙氏培養(yǎng)基 ?沙氏瓊脂培養(yǎng)基 ?匹克氏肉湯基礎(chǔ)B

飲用天然礦泉水檢驗培養(yǎng)基

?皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) ?皰肉牛肉粒 ?營養(yǎng)瓊脂（NA）

?假單菌瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/CN瓊脂

?金氏B培養(yǎng)基 ?乙酰胺肉湯 ?金氏B培養(yǎng)基（KBA）

?0.1%蛋白胨水 ?胰蛋白胨水培養(yǎng)基 ?含鐵牛奶培養(yǎng)基 ?動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（B法）?緩沖動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 ?動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（A法）

?卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)

-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂基礎(chǔ)

?液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FT）

?腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基 ?腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基

?KF鏈球菌瓊脂 ?大腸菌群顯色培養(yǎng)基 ?乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 ?遠藤瓊脂(品紅亞硫酸鈉)培養(yǎng)基 ?亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液（BGB）

?乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 ?KF鏈球菌肉湯

美國藥典培養(yǎng)基（USP標(biāo)準(zhǔn)）

?V-J瓊脂培養(yǎng)基（USP）?液體大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基

?甘露醇鹽瓊脂培養(yǎng)基

?酪蛋白胨大豆卵磷脂吐溫20培養(yǎng)基 ?大豆-干酪素消化物瓊脂培養(yǎng)基 ?綠膿菌素測定培養(yǎng)基（?亞硫酸鹽?抗生素檢定培養(yǎng)基3號 ?0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基 ?抗生素檢定培養(yǎng)基4號 ?抗生素檢定培養(yǎng)基7號 ?抗生素檢定培養(yǎng)基8號 ?卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基

?抗生素5號

?支原體培養(yǎng)基基礎(chǔ)（含精氨酸）

?PPLO肉湯 ?硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 ?改良馬丁培養(yǎng)基 ?改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 ?玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基

?酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD）

?乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 ?麥康凱瓊脂培養(yǎng)基

?4-甲基傘形酮葡糖苷酸（MUG）培養(yǎng)基 ?四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB）?沙門、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基(SS)?亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)

?綠膿菌素測定用培養(yǎng)基（PDP瓊脂培養(yǎng)基）

?哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 ?抗生素檢定培養(yǎng)基6號

?0.1%蛋白胨水 ?梭菌增菌培養(yǎng)基 ?1%聚山梨醇脂玉米粉瓊脂 ?支原體瓊脂培養(yǎng)基 ?支原體肉湯培養(yǎng)基

?支原體肉湯培養(yǎng)基（不含瓊脂和酚紅）?支原體瓊脂培養(yǎng)基（含精氨酸）

?麥迪、麥白霉素檢定培養(yǎng)基（普通輕質(zhì)斜面培養(yǎng)基）?阿奇霉素檢定培養(yǎng)基 ?制霉素檢定培養(yǎng)基 ?多粘菌素B用培養(yǎng)基 ?抗生素檢定培養(yǎng)基9號 ?青霉素酶制備培養(yǎng)基 ?沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ?沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 ?胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基 ?胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基 ?1%聚山梨醇酯80-玉米粉瓊脂培養(yǎng)基

?沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ?沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 ?溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基

?大豆-干酪素消化物培養(yǎng)基 ?BairdParker瓊脂培養(yǎng)基 ?溴化十六烷基三甲胺瓊脂培養(yǎng)基

?假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基F ?假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基P ?液體乳糖培養(yǎng)基 ?液體亞硒酸鹽胱氨酸培養(yǎng)基

?連四硫酸鹽培養(yǎng)基 ?煌綠瓊脂培養(yǎng)基 ?XLD瓊脂培養(yǎng)基 ?亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基 ?三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 ?麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 ?伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基（Levine）

?沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ?馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ?緩沖氯化鈉蛋白胨培養(yǎng)液PH7.0 ?大豆酪蛋白消化物瓊脂培養(yǎng)基

歐洲藥典培養(yǎng)基（EP標(biāo)準(zhǔn)）

?肉湯培養(yǎng)基A ?瓊脂培養(yǎng)基B ?瓊脂培養(yǎng)基C ?肉湯培養(yǎng)基D ?增菌肉湯培養(yǎng)基E ?瓊脂培養(yǎng)基F ?肉湯培養(yǎng)基G ?瓊脂培養(yǎng)基H ?肉湯培養(yǎng)基I ?瓊脂培養(yǎng)基J ?瓊脂培養(yǎng)基K ?瓊脂培養(yǎng)基L ?瓊脂培養(yǎng)基M ?瓊脂培養(yǎng)基N ?瓊脂培養(yǎng)基O ?培養(yǎng)基P ?培養(yǎng)基Q ?培養(yǎng)基R

?緩沖氯化鈉蛋白胨溶液（PH7.0）

?瓊脂培養(yǎng)基S ?RV肉湯 ?甘露醇鹽瓊脂

?膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基 ?三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 ?乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 ?PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液

?營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ?營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 ?甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基 ?念珠菌顯色培養(yǎng)基

第三篇：在細胞苗生產(chǎn)中使用培養(yǎng)基的幾點感受

在細胞苗生產(chǎn)中使用培養(yǎng)基的幾點感受

山西

宋寶敏

生物制品的生產(chǎn)離不開細胞培養(yǎng), 細胞培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的重要因素。目前，國內(nèi)尚沒有關(guān)于細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的國家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)執(zhí)行各自的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的質(zhì)量管理存在較大差別。有一個系統(tǒng)全面的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，可以相對統(tǒng)一培養(yǎng)基質(zhì)量。

多數(shù)細胞的培養(yǎng)采用合成培養(yǎng)基，而且還需要在合成培養(yǎng)基中添加一定量的血清來支持細胞的生長增殖。培養(yǎng)基和血清這兩個原輔材料的質(zhì)量直接關(guān)系到產(chǎn)品的質(zhì)量。

我們企業(yè)生產(chǎn)所使用的細胞培養(yǎng)基大多為MEM或DMEM合成培養(yǎng)基，添加一定比例的血清來進行。在生產(chǎn)過程中，毒種和細胞的種類不變，生產(chǎn)的過程是按 GMP的要求進行檢查評定的，這兩個環(huán)節(jié)相對于產(chǎn)品的影響相對小，但細胞培養(yǎng)基更換批號或更換廠家，血清批次間的差異經(jīng)常出現(xiàn)影響細胞生長的情況。這兩樣原輔料使用將要結(jié)束時車間就要求采供部購買同廠家、同批次的培養(yǎng)基及血清（在有效期內(nèi)），否則必須先提供小樣來先試驗。這樣不僅給采供帶來購買難度，而且采購周期會很長，同時一個“換批次會影響質(zhì)量”的信息潛在操作人員的意識里，即使同廠家的培養(yǎng)基經(jīng)驗證對細胞生長幾乎沒影響，由于潛意識往往造成細胞培養(yǎng)過程中總感覺不如原來使用的批次，要經(jīng)過一段時間的使用才能轉(zhuǎn)過來。

在實際生產(chǎn)時，因培養(yǎng)基相對容易購買，所以基本在開產(chǎn)前根據(jù)生產(chǎn)計劃把一個周期的量基本備足。而血清則不同，每批可能適合某些細胞系，一旦準(zhǔn)備更換批號，更不用說更換廠家了，必須做連續(xù)三到五批的生長試驗，通過細胞的生長情況和細胞數(shù)選定血清批次。此處有一更換批號后細胞數(shù)對比數(shù)據(jù)(恕不寫明廠家）。兩個批號A和B

4三次試驗的細胞數(shù)，A批號血清對應(yīng)細胞數(shù)為（1）207×10（2)189×104（3）203×104

B批號血清對應(yīng)細胞數(shù)為（1）197×104（2)181×104（3）192×104。

血清因為價格貴等原因總得在一個周期內(nèi)至少換兩個批號。另一個因素是在加血清的培養(yǎng)基采用微孔濾膜過濾除菌時經(jīng)常出現(xiàn)濾器被雜質(zhì)堵塞的情況，這時就需要有備用濾器，同時容易污染。不僅如此好多資料表明血清的添加有好多缺點：

1、血清都是批量生產(chǎn)，各批之間差異很大；

2、血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶、補體、抗體、細菌毒素等都會影響細胞生長，甚至造成細胞死亡；

3、血清的使用使得實驗和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化困難，其中的蛋白質(zhì)使得某些轉(zhuǎn)基因蛋白生物藥品生產(chǎn)中分離純化工作很難完成；

4、血清質(zhì)量問題還會對接種病毒以及毒價產(chǎn)生影響，例產(chǎn)毒少，毒價低；

5、血清內(nèi)含有雜質(zhì)等等說法不一。

鑒于上述使用情況，看來培養(yǎng)基的生產(chǎn)有必要有一個統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和控制方法。尤其是細胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)，不僅要有統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和控制方法，更要不斷有新的培養(yǎng)基產(chǎn)品的推出，好多廠家日益重視對無血清培養(yǎng)基的研發(fā)，這是一個有重大意義的工作，在原有培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加成分明確或部分明確的血清替成分。疫苗生產(chǎn)企業(yè)期待新型無血清培養(yǎng)基的上市，無血清培養(yǎng)基可以避免血清的批間質(zhì)量變動對細胞生長的影響，可以降低企業(yè)的實驗成本、儲存成本損耗及采供難度；還可以提高產(chǎn)品的表達水品易于細胞純化，在操作過程中易于滅菌。但同時企業(yè)更關(guān)注這種產(chǎn)品的質(zhì)量，這樣就又提到對培養(yǎng)基的生產(chǎn)企業(yè)有一國家的統(tǒng)一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和控制方法，并附帶培養(yǎng)基使用的統(tǒng)一的SOP。使用這樣的原輔料的企業(yè)，企業(yè)的產(chǎn)品才更容易均

一、穩(wěn)定、質(zhì)量可控。

第四篇：Sc-U誘導(dǎo)培養(yǎng)基

Sc－U誘導(dǎo)培養(yǎng)基

SC Minimal Medium and Plates

SC is synthetic minimal defined medium for yeast.0.67% yeast nitrogen base(without amino acids)

2% carbon source(i.e.glucose or raffinose棉子糖)

0.01%(adenine, arginine, cysteine, leuine, lysine, threonine, tryptophan, uracil)

0.005%(aspartic acid, histidine, isoleucine, methionine, phenylalanine, proline, serine, tyrosine, valine)

2% agar(for plates)

1.Dissolve the following reagents in 900 ml deionized water(800 ml if preparing medium containing raffinose).Note: We make medium and plates as we need them and weighout each amino acid.Many researchers prepare 100X solutions of each amino acid that they need.Reminder: Omit uracil to make selective plates for growing pYES2 transformants.6.7 g Yeast Nitrogen Base

0.1 g each 0.05 g each

adenine aspartic acid

arginine histidine

cysteine isoleucine

leucine methionine

lysine phenylalanine

threonine proline

tryptophan serine

uracil(U)tyrosine

valine

2.If you are making plates, add the agar after dissolving the reagents above.3.Autoclave at 15 psi, 121°C for 20 minutes.4.Cool to 50°C and add 100 ml of filter-sterilized 20% glucose or 200 ml of filtersterilized10% raffinose.5.Pour plates and allow to harden.Invert the plates and store at +4°C.Plates are stable for 6 months.Induction Medium

If you are making induction medium, follow Steps 1-3 above except dissolve the reagents in 800 ml of deionized water.Cool the medium to 50°C and add 100 ml of filter-sterilized 20% galactose and 100 ml of filter-sterilized 10% raffinose to the medium.

第五篇：食用菌實驗-培養(yǎng)基制作

實驗二

母種培養(yǎng)基制作

一、實驗?zāi)康恼莆招泵嬖嚬芘囵B(yǎng)基的配制、消毒與滅菌等制作過程，為菌種轉(zhuǎn)管、組織分離制作母種打下基礎(chǔ)。

二、常用培養(yǎng)基配方

1．馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)

去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000毫升，pH自然。2.PDA綜合培養(yǎng)基

去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，磷酸二氫鉀3.0克，硫酸鎂1.5克，維生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。

三、實驗材料和用具

天平、電爐，18×180毫米試管，止水夾。紗布，棉塞，牛皮紙，皮筋，手套、菜板、刀、恒溫箱，三角漏斗、支架（每組一套）。手提式高壓滅菌鍋。馬鈴薯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂等。

四、實驗步驟與方法 1．PDA培養(yǎng)基的配制 2．裝管、捆把 3．滅菌

鍋內(nèi)加適量水→ 滅菌物品放內(nèi)鍋→

加熱 → 壓力表0.05Pa 時放氣 →壓力表1.15Pa(121-126℃)時計時30分鐘。

4.擺斜面。滅菌后將試管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板條上，使試管內(nèi)斜面的長度為試管長度的3／5。放置凝固后備用。

五、作業(yè)思考題

1．制作PDA培養(yǎng)基過程中，為什么要用牛皮紙將整捆的棉塞部分封蓋滅菌? 2．滅菌時，加熱水沸后，在鍋內(nèi)壓力升至0.5Pa 時，為什么要打開放氣閥? 3．寫出試管培養(yǎng)基制作的工藝流程。4．消毒與滅菌是同一概念嗎?為什么?

實驗三

原種培養(yǎng)基制作

原種即二級種，就是將試管中的母種，接入菌種瓶內(nèi)，等菌絲長滿后形成的菌種。

一、實驗?zāi)康?/p>

通過實驗初步掌握原種培養(yǎng)基的配料、裝瓶(袋)、滅菌、消毒、接種、培養(yǎng)等生產(chǎn)工藝流程。并了解原種培養(yǎng)基的不同配方及不同的制作方法。

二、實驗材料和用具 天平，立式或臥式高壓滅菌鍋，菌種瓶或菌種袋(菌種瓶口徑3厘米，容積750毫升)，塑料套環(huán)，塑料繩，擦布，錐形搗木。稱，大盆

麥粒，麥麩，棉籽殼，不銹鋼鍋，石膏，碳酸鈣，白糖，牛皮紙，皮筋，三、培養(yǎng)基配方

1．木屑米糠培養(yǎng)基(適用于香菇、木耳、猴頭菇、楊樹菇等木腐生類食用菌)：木屑(鋸木屑)78千克，米糠或麥麩20千克，石膏1千克，蔗糖(俗稱白糖)1千克。料水比為1：1．4～1．6，使含水量達到60%，即用手握抓材料時指縫現(xiàn)水而不滴水。

2．麥粒培養(yǎng)基(適用于平菇、草菇、猴頭、金針菇等)： 麥粒200千克，蔗糖2千克，碳酸鈣2千克，水500升。

3．棉籽殼培養(yǎng)基(適于多種食用菌)：

棉籽殼78%，麥麩10%，玉米粉10%，過磷酸鈣1%，白糖l%，水料比約1:1.1-1.2。

四、實驗步驟與方法 1．培養(yǎng)基的配制

1)木屑米糠培養(yǎng)基的配制：

拌料：根據(jù)計劃生產(chǎn)原種的數(shù)量，計算出各種原料的用量，分別稱取后，將不溶性輔料和主料摻拌均勻，將可溶性輔料加入水中溶解，逐漸潑入拌好的主料中，摻拌均勻，繼續(xù)加水拌料。拌料時，邊加水，邊測含水量，以便控制水分，不至過多或不足。含水量的測定：拌好料后，用手抓一把培養(yǎng)料在手中緊握，手指縫中有水滲出但不下滴為適宜。料水比約為1:1.2-1.4 裝瓶（袋）：將培養(yǎng)料裝入750毫升的菌種瓶(或500毫升罐頭瓶)中，邊裝邊搗實(但不宜過緊，太緊則透氣性差，菌絲生長不良)，以手按結(jié)實有彈性為宜，一直裝到菌種瓶的瓶肩處。

打孔：培養(yǎng)料裝好后，用錐形木棒從瓶中央向下打一個洞，洞深離瓶底部2～3厘米，這樣一是可以增加瓶內(nèi)氧氣；二是有助于菌絲沿著洞穴向下蔓延；三是便于固定菌種塊，不致游動而影響成活，有利于瓶下部菌絲生長良好。

擦瓶：打洞后，用濕毛巾或濕布多次將瓶口和瓶外粘附的培養(yǎng)料擦凈，擦干，以免接種后污染

包扎：塞上棉塞，用牛皮紙將瓶口及棉塞包住，用繩扎緊。也可在瓶口上先放一層牛皮紙，再蓋一層聚丙烯塑料薄膜，扎緊瓶口。2)棉籽殼培養(yǎng)基的配制：

棉籽殼原種培養(yǎng)基的配制方法同木屑培養(yǎng)基的相似，只是裝瓶時培養(yǎng)料的壓實要比木屑的緊，因棉籽殼顆粒較大，且能留有較多的空隙。3)麥粒培養(yǎng)基的配制：

浸料：將小麥粒用水浸4-8小時，煮沸20—30分鐘，煮沸的過程中就加入蔗糖。最后使麥粒熟而不開花。濾去水分(濾液可制母種培養(yǎng)基或栽培時拌料用)，攤在通風(fēng)處晾30—40分鐘，使麥粒表皮不濕為宜。

裝瓶：加入碳酸鈣，拌勻后裝瓶。裝瓶時要注意邊裝瓶邊將瓶輕輕地扣動，使瓶內(nèi)培養(yǎng)料松緊度上下一致，裝至粒面至瓶肩部。瓶口包扎同前。2．滅菌

包扎好的料瓶（袋）放入高壓滅菌鍋內(nèi)進行滅菌。在1．5千克／平方厘米壓力下，滅菌2小時即可。如用土蒸鍋常壓滅菌，須將水燒開后繼續(xù)蒸10小時，緩慢降溫后取出使用。

六、作業(yè)思考題

1．原種培養(yǎng)基裝滿瓶后，為什么要用濕毛巾或濕布多次擦洗瓶外和瓶頸? 2．原種培養(yǎng)基裝好后，為什么要在當(dāng)天及時進行滅菌? 3．原種培養(yǎng)基裝瓶后，用錐形搗木在其中內(nèi)插一個圓洞的目的是什么? 4．原種培養(yǎng)基裝滿瓶后，其瓶的上部培養(yǎng)料是松一些好，還是緊一些好?為什么? 5．培養(yǎng)料裝得過松過緊都將產(chǎn)生什么樣的結(jié)果?