第一篇：微生物實驗室培養(yǎng)基制作個人總結

一．培養(yǎng)基的制備

儀器材料 微波爐、高壓滅菌器、玻璃器皿、三角瓶，PH試紙、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、氯化鈉、氫氧化鈉。操作方法

１． 肉湯培養(yǎng)基制作 ⑴成分

肉浸膏（0.3%牛肉膏）500ml 蛋白胨 5g 氯化鈉 2.5g 磷酸氫二鉀 0.5g ⑵準備工作 配制調節(jié)PH用的0.1M氫氧化鈉和1M氫氧化鈉溶液。⑶操作

①稱取牛肉膏，放入玻璃皿中，另入適量蒸餾水配成0.3%。②按比例加入適量蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鉀攪拌。③攪拌加熱至完全溶解。

④PH值調至7.8，煮沸10min，站足水分。

⑤待冷至40～50℃時，過濾。濾液分裝于無菌試管內（達試管的1/3）或每管加4-5ml。塞好棉塞。

⑥置高壓滅菌器內高壓滅菌（121.3℃，20分鐘即可）2．普通瓊脂培養(yǎng)基制作

⑴成分 肉湯培養(yǎng)基 500ml 瓊脂 8-15g ⑵制法

①先矯正肉湯培養(yǎng)基PH值。

②加入適量瓊脂煮沸溶解，矯正PH值至7.4～7.6。③滅菌后使雜質沉淀。

④取其上清液滅菌后分裝。倒入無菌平皿內凝固即成普通瓊脂平板。

二、平板劃線接種法 【方法】

1． 在平板底面上用記號筆作好標記，如菌種、班級，姓名、接種日期等，并在平板底面邊緣作一原劃線標記。

2．右手拿接種環(huán)，燒灼滅菌并冷卻后，取混合菌液少許。3．左手斜持（45°角）瓊脂平板，略開蓋，平板在乙醇燈火焰左前上方約5～6cm距離。右手持已取標本的接種環(huán)在瓊脂平板表面之一側邊緣，作原劃線，見圖5-2A。

4．接種環(huán)燒灼滅菌，冷卻后自原劃線末端沾取少許標本，使接種環(huán)與平板表面成30～40°角，運用腕力將接種環(huán)在平板上來回劃線，見圖5-2B。劃線要密但不能重疊，充分利用平板的表面積，不要劃破瓊脂表面，并注意無菌技術，避免空氣中細菌的污染。也可用分區(qū)劃線法，即從原劃線末端沾取標本后只劃平板的1/5～1/4，劃畢燒灼滅菌接種環(huán)，冷后同樣劃線，共計4～5次。接種環(huán)燒灼滅菌后方可放下（圖5-2C、D、E）。

三.細菌在培養(yǎng)基中生長特性的觀察 1.瓊脂培養(yǎng)基 ⑴大小

⑵形狀：圓形、不整形、針尖狀、露滴狀、同心圓狀、顆粒狀。⑶邊緣：整齊、波浪狀、鋸齒狀、卷發(fā)狀。

⑷表面性狀：光滑、粗糙、同心圓狀、放射狀、皺狀、顆粒狀。⑸濕潤度：濕潤、干燥。

⑹隆起度：表面隆起、輕度隆起、中央隆起、扣狀扁平。

⑺色澤及透明度：無色、白色、黃色、橙色、紅色；透明、半透明、不透明。⑻質地：堅硬、柔軟、粘稠。

⑼溶血性：α型溶血 菌落周圍有透明溶血環(huán)。

β型溶血 半透明帶綠色溶血環(huán)。

γ型溶血 不溶血。

藥物敏感試驗

基本原理

細菌對抗菌藥物的敏感試驗，通常簡稱為細菌的藥敏試驗。在給患傳染病動物進行治療時，測定細菌對藥物的敏感性，不僅有助于選擇合適的藥物，而且可為藥物的用量提供依據。某種細菌對藥物的敏感度，是指抑制該細菌生長所需的最低藥物濃度。細菌在體外的敏感度和臨床的療效大體是符合的，但也有不一致者。目前供藥敏試驗的方法很多，可歸納為兩大類，即稀釋法和擴散法。有的以抑制細菌生長為評定結果的標準，有的則以殺滅細菌為標準。一般可報告為某菌對某抗菌藥物敏感、輕度敏感或耐藥。

稀釋法是將抗菌藥物稀釋為不同的濃度，作用于被檢菌株，定量測定藥物對細菌的最低抑菌濃度(minimal inhibition concentration, MIC)或最低殺菌濃度(minimal bacteriocidal concentration, MBC)，可在液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中進行。

擴散法（diffusion method）是將抗菌藥物置于已接種待測細菌的固體培養(yǎng)基上（或內），抗菌藥物通過向培養(yǎng)基內的擴散，抑制敏感菌的生長，從而出現(xiàn)抑菌環(huán)（帶）。藥物擴散的距離越遠，達到該距離的藥物濃度就越低，故可根據抑菌環(huán)的大小，判斷細菌對藥物的敏感度。抑菌環(huán)（帶）邊緣的藥物含量即該藥物的敏感度。此法操作簡便，容易掌握，但只用于定性。因受紙片含藥量不均及接種量等多種因素影響，結果不夠準確，因此試驗時應同時設立已知敏感度的標準菌株作為對照。

器材準備

1．菌種 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、炭疽桿菌。

2．藥敏試紙 含青霉素、鏈霉素、慶大霉素、氯霉素、磺胺嘧啶等藥敏試紙，分裝于滅菌平皿中。

3．培養(yǎng)基 普通肉湯、普通瓊脂平板培養(yǎng)基。

4．其他 95％酒精、小鑷子、麥氏比濁管、1mL刻度吸管、橡皮膠頭等。

實驗步驟

1．試管雙倍稀釋法

（1）抗生素原液的配制及保存：將抗生素制劑無菌操作溶于適宜的溶劑如蒸餾水、磷酸鹽緩沖液中，稀釋至所需濃度。抗生素的最初稀釋劑通常用蒸餾水，但是有些抗生素必須用其它溶劑作初步溶解。常用抗生素原液的溶劑和最初稀釋劑見表6-1。若制劑中可能含有雜菌，配制后宜用細菌濾器過濾除菌（可用玻璃濾器或微孔濾膜，孔徑0.22?m，但不可用纖維墊濾器）。分裝小瓶，在－20℃冷凍狀態(tài)下保存，可保存3個月或更久，每次取出一瓶保存于4℃冰箱，可用1周左右。

（2）培養(yǎng)基：一般采用普通肉湯培養(yǎng)基。如細菌生長緩慢，可加入0.25％～1％葡萄糖或5％～10％血清。

（3）方法：被測菌種懸液的制備：將較多量的菌種移種于肉湯培養(yǎng)管中，置37℃溫箱中培養(yǎng)6h（生長緩慢者可培養(yǎng)過夜），使生長濁度達9×108個/mL（相當于麥氏比濁管第3管）。

抗生素溶液的雙倍連續(xù)稀釋：取13×100mm滅菌帶棉塞試管13支（管數(shù)多少可依具體需要而定）。另將上述菌液作1︰10 000倍稀釋（生長緩慢的細菌可稀釋1︰1 000或更少），除第1管加入稀釋菌液1.8mL外，其余各管均各加1.0mL。繼于第1管加入抗生素原液0.2mL，混合后吸出1.0mL加入第2管中，用同法依次稀釋至第12管，棄去1.0mL。第13管為生長對照。

表6-1 抗生素原液的溶劑和稀釋劑

抗生素

丁胺卡那霉素 氯芐青霉素 桿菌肽 羧芐青霉素 頭孢羥唑 頭孢唑林 頭孢甲氧霉素 頭孢菌素I 氯霉素 氯潔霉素 多粘菌素B或E 紅霉素

溶劑 蒸餾水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）

蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）

甲醇 蒸餾水 蒸餾水 甲醇

稀釋劑 蒸餾水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）

蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水

0.1mol/L PBS（pH值8.0）慶大霉素 卡那霉素

新青霉素I、II、III 青霉素G 萘啶酸 鏈霉素 四環(huán)素 妥布霉素 萬古霉素

蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 0.1mol/L NaOH

蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水

蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水 蒸餾水

培養(yǎng)及結果觀察：置37℃培養(yǎng)16～24h，觀察結果。凡藥物最高稀釋管中無細菌生長者，該管的濃度即為MIC。

MBC的測定：從無細菌生長的各管取材，分別劃線接種于瓊脂平板培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)過夜（或48h），觀察結果。瓊脂平板上無細菌生長而含抗生素最少的一管，即為MBC。也可將上述各管在37℃繼續(xù)培養(yǎng)48h，無細菌生長的最低濃度即相當于該抗生素的MBC。

結果報告：一般以MIC作為細菌對藥物的敏感度，如第1～8管無細菌生長，第9管開始有細菌生長，則把第8管抗生素的濃度報告為該菌對這種抗生素的敏感度；如全部試管均有細菌生長，則報告該菌對這種抗生素的敏感度大小為第1管中的濃度或對該藥耐藥；如除對照管外，全部都不生長時，則報告為細菌對該抗生素的敏感度等于或小于第12管的濃度，或高度敏感。

2．擴散法（K-B法）

（1）含藥濾紙片的制備：含有各種抗菌藥物的濾紙片是擴散法中應用最多的。目前，我國生產含藥濾紙片的單位不多，購買較為困難，即使購買也易過期失效，所以一般可應用自制的藥敏濾紙片。其方法如下：

濾紙片：選用新華1號定性濾紙，用打孔機打成直徑為6mm的小圓片，根據需要將數(shù)片包成一紙包或放入帶棉塞的小瓶或小平皿內，121℃滅菌15min，置100℃干燥箱內烘干備用。

藥液的配制：常用藥物的配制方法及所用濃度見表6-2。

表6-2 藥敏紙片的制備及含藥濃度

藥 物 青霉素 劑 量 注射用粉劑

制備方法

20mg加pH值6.0 PB緩沖液15.5mL，取1mL加PB緩沖液9mL

20mg加pH值6.0 PB緩沖液20mL 20mg加pH值7.8 PB緩沖液 8mL 以pH值7.8 PB緩沖液作100倍稀釋 以pH值6.0 PB緩沖液稀釋 20mg加水20mL溶解

藥液濃度（?g/mL）

200 1 000 2 500 2 500 1 000 1 000

紙片含量（?g）10 25 25 10 10 新青霉素 注射用粉劑

注射用粉劑

鏈霉素

注射用針劑 注射用針劑

氯霉素

口服粉劑 土霉素 口服粉劑或片劑

25mg粉末，加2.5mol/L HCl 15mL 溶解后，以pH值6.0 PB緩沖液或水稀釋 000 1 000 1 000 1 000 1 000 1 000 1 500 3 000 3 000 1 000 3 000 1 000 1 000 1 000 1 000 10 000 10 000 1 000 10 000 10 000 10 000 125 10 10 10 10 10 10 30 30 10 300 10 10 10 10 100 100 100 100 100 100 1.25 四環(huán)素 口服粉(片)

同土霉素

劑

注射用粉劑 口服片劑

以生理鹽水稀釋 同土霉素

以pH值3.0 PB緩沖液溶解后以pH值6.0 PB緩沖液稀釋

以pH值8.2 PB緩沖液溶解后稀釋 以水溶解，以pH值7.8 PB緩沖液稀釋 同紅霉素

以pH值7.8 PB緩沖液稀釋 以pH值7.8 PB緩沖液稀釋 以pH值7.2 PB緩沖液稀釋 以pH值7.8 PB緩沖液稀釋

以1mol/L NaOH 1mL溶解1片，用pH6.0 PB緩沖液稀釋 以1mol/L NaOH 1mL溶解1片，用pH6.0 PB緩沖液稀釋

以二甲基酰胺或丙酮溶解 以水稀釋

以水或pH值8.2 PB緩沖液稀釋 100mg加2.5mol/L HCl 1.25mL，加水至5mL，以pH值6.0 PB緩沖液稀釋 100mg加水1mL，濃HCl 0.7mL溶解，以pH8.2 PB緩沖液稀釋

100mg加水2mL，濃HCl 0.5mL溶解，以pH8.2 PB緩沖液稀釋

100mg加濃HCl 1mL，溶解后以pH6.0 PB緩沖液稀釋

1片研碎后加水2mL，濃HCl 0.25mL，以pH值6.0及7.8 PB緩沖液稀釋 金霉素

口服粉劑

新霉素 紅霉素 口服片劑 注射用粉劑 注射用粉劑

卡那霉素

注射用針劑

慶大霉素 注射用針劑 多粘菌素 注射用粉劑 萬古霉素 注射用粉劑 呋喃妥因 粉劑或片劑 呋喃西林 粉劑或片劑 痢特靈 磺胺嘧啶片劑

粉劑或針劑

鈉

磺胺二甲基針劑

嘧啶

長效磺胺 片劑 周效磺胺 片劑 磺胺甲基異惡唑

磺胺5-甲氧嘧啶

磺胺增效劑

片劑 片劑 片劑

含藥紙片的制備：將滅菌濾紙片用無菌鑷子攤布于滅菌平皿中，以每張濾紙片飽和吸水量為0.01mL計，每50張濾紙片加入藥液0.5mL，不時翻動濾紙片，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡30min即可。然后取出含藥紙片置于一紗布袋中，以真空抽氣使之干燥?；蛑苯訉V紙片攤于37℃溫箱中烘干，烘烤的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。對青霉素、金霉素等紙片的干燥宜用低溫真空干燥法。干燥后，立即裝入無菌的小瓶中加塞，置于干燥器內保存，也可將紙片貯藏于－20℃或家用冰箱冰凍。少量供工作用的紙片從冰箱中取出后應在室溫中放置1h，使紙片溫度和室溫平行，防止冷的紙片遇熱產生凝結水。

藥敏紙片的鑒定：取制好的紙片3張，以標準敏感菌株測其抑菌環(huán)，大小符合標準者則為合格。紙片的有效期一般為4～6個月。

（2）操作方法：K-B法是用含有一定量抗生素的藥敏紙片，貼在已接種試驗細菌的瓊脂平板上，經37℃培養(yǎng)后，抗生素濃度梯度通過紙片上彌散作用而形成，在敏感抗生素的有效范圍內，細菌的生長受到抑制，在有效范圍外，細菌能夠生長，故能形成一個明顯的抑菌環(huán)。以抑菌環(huán)的大小來判定試驗菌對某一抗生素是否敏感及敏感程度。

用接種環(huán)挑取菌落4～5個，接種于肉湯培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)4～6h。

菌液稀釋：用滅菌生理鹽水稀釋培養(yǎng)液使?jié)岫认喈斢诹蛩徜^標準管（配制方法：1.175％氯化鋇0.5mL、1％硫酸溶液99.5mL，充分混勻，將此溶液置于與肉湯培養(yǎng)基相同的試管中，用前充分振搖）。

用無菌棉拭子蘸取上述肉湯培養(yǎng)液，在管壁上擠壓，除去多余的液體，用棉拭子涂滿瓊脂表面，蓋好平皿，在室溫下干燥5min，待平板表面稍干即可放置含藥紙片。

用滅菌鑷子以無菌操作取出含藥紙片貼在涂有細菌的平板培養(yǎng)基表面。一個直徑9cm的平皿最多只能貼7張紙片，6張紙片均勻地貼在離平皿邊緣15mm處，一張位于中心。貼紙片時要輕輕按壓，以保證與培養(yǎng)基密切接觸。將平皿放37℃恒溫箱，培養(yǎng)16～18h，觀察結果（如圖6-1）。結果判定：觀察含藥紙片周圍有無抑菌環(huán)，量取其直徑（包括紙片直徑）大小，用毫米數(shù)記錄，按抑菌環(huán)直徑的大小報告敏感、中度敏感和耐藥，具體標準見表6-3。

表6-3 抗菌藥物的抑菌環(huán)與敏感標準

抗菌藥物 丁胺卡那霉素 腸桿菌、腸球菌 葡萄球菌和青霉素敏感細菌 嗜血桿菌 桿菌肽 腸桿菌科 綠膿桿菌 先鋒霉素I 氯霉素 氯林可霉素 粘菌素

復方甲氧異惡唑 紅霉素 每片含藥量(?g)

耐藥 10 10 10 10 100 100 30 30 2 10 25 15

≤11 ≤11 ≤10 ≤19 ≤8 ≤17 ≤13 ≤14 ≤12 ≤14 ≤8 ≤10 ≤13

抑菌環(huán)的直徑（mm）

中等敏感 12～13 12～13 12～23

9～12 18～22 14～16 15～17 13～17 15～16 9～10 11～15 14～17

敏感 ≥14 ≥14 ≥24 ≥20 ≥13 ≥23 ≥17 ≥18 ≥18 ≥17 ≥11 ≥16 ≥18 慶大霉素 卡那霉素 甲氧苯青霉素 萘啶酸 新霉素 呋喃妥因 苯唑青霉素 青霉素G 葡萄球菌 其他細菌 30 5 30 30 300 1 10 10 300 10 300 300 10 30 2

≤12 ≤13 ≤9 ≤13 ≤12 ≤14 ≤10 ≤20 ≤11 ≤8 ≤11 ≤12 ≤12 ≤11 ≤9 ≤14

13～14 14～17 10～13 14～18 13～16 15～16 11～12 21～28 12～21 9～11 12～14 13～16 13～18 12～13 10～11 15～16

≥15 ≥18 ≥14 ≥19 ≥17 ≥17 ≥13 ≥29 ≥22 ≥12 ≥15 ≥17 ≥19 ≥14 ≥12 ≥17 多粘菌素B 鏈霉素 磺胺 四環(huán)素 妥布霉素 萬古霉素 氯潔霉素

注意事項

1．稀釋法

（1）接種量：接種細菌量的多少與MIC有一定關系。如用敏感的葡萄球菌對氯芐青霉素進行檢測時，接種量增加1 000倍，MIC只略有增加，但對甲氧苯青霉素的敏感度則因接種量的不同而有較大變化，即使同一菌株，接種量小時為敏感，接種量增大時，其MIC則增加許多倍。

（2）培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基的組成成分應保持恒定，外觀清晰透明，pH值適宜。為了觀察方便，還可向各管中加入葡萄糖及指示劑，以指示劑顏色的改變判定其是否生長。同時要注意選擇適宜的培養(yǎng)溫度，一般在12～18h觀察藥敏試驗結果。如時間過長，細菌將會在高濃度的藥物中生長。其原因，一是由于被輕度抑制的細菌開始繁殖，另一方面則是因為有些抗生素在37℃情況下不穩(wěn)定，在其被破壞之后，受抑制的細菌也會再次生長繁殖。

（3）對于一些色澤深或本身呈混濁的中草藥，其試管培養(yǎng)后不易觀察細菌的生長情況?？蓮呐囵B(yǎng)管移至平板培養(yǎng)基上，觀察各管中的細菌是否被殺死。這種方法只能測定藥物的最低殺菌濃度。

抑菌圈圖示

含藥紙片

抑菌圈

細菌菌苔（4）稀釋時，每一個稀釋度均應更換吸管。菌液及抗生素的加量要準確。

2．擴散法

（1）K-B紙片擴散法必須使用Mueller-Hintion（MHA）培養(yǎng)基，因其解釋度的數(shù)據是用此培養(yǎng)基積累的，MHA培養(yǎng)基普通冰箱可保存2～3周，用前須放37℃10min，以使形成的水霧干燥。此培養(yǎng)基適合于快速生長的細菌，生長緩慢的細菌或厭氧菌，不宜采用K-B技術及其解釋標準。

（2）接種用的菌液濃度必須標準化，以細菌在平板上的生長恰呈融合狀態(tài)為標準，接種后應及時貼含藥紙片和放入35℃（或37℃）培養(yǎng)。

（3）培養(yǎng)的溫度要恒定，時間為16～18h，結果不宜判讀過早。因培養(yǎng)過久，細菌能恢復生長，使抑菌環(huán)變小。培養(yǎng)時不應增加CO2，以防某些抗菌藥物形成的抑菌圈大小發(fā)生改變及影響培養(yǎng)基的pH值。

第二篇：微生物實驗室一般狀況總結

微生物實驗室及設備

一、選址：

1.實驗室應選擇在清潔安靜的場所，遠離生活區(qū)，鍋爐房與交通要道；

2.實驗室應選擇在光線充足，通風良好的場所，要與生產加工車間有一定距離；

3.實驗室應選擇在方便選樣與檢驗，距離車間較近的工作場所．

二、結構和布局：

根據實驗實際需要，主要包括以下三大部分：細菌實驗室、理化實驗室、辦公室．

1.辦公室 2.理化分析實驗室：（或者和細菌檢驗操作室合并）①理化分析室（物理化學分析，可兼作感觀檢驗室）②儀器室（兼放細菌室顯微鏡等少量儀器）3．細菌實驗室： ①細菌檢驗操作室； ②無菌室（微生物的擴培、接種制細胞培養(yǎng)液，滅菌后培養(yǎng)基的分裝）； ③培養(yǎng)基制作室（培養(yǎng)基的配制，但滅菌后的培養(yǎng)基接種需在無菌室操作）；

一般布局要求如下：

1.辦公室：辦公室是化驗人員進行原始記錄等各項工作的場所，是與非化驗室人員交往較多的場所，只需有桌、椅等簡單設施即可．

2.細菌檢驗操作室（常規(guī)操作）細菌檢驗操作室是細菌檢驗主要操作室，主要設施是實驗臺．實驗臺的要求：a.實驗臺面積一般不小于2.4×1.3m； b.實驗臺位置應在實驗室中心位置，要有充足光線． c.實驗臺兩側安裝小盆與水龍頭； d.實驗臺中間設置試劑架，架上裝有日光燈與插座； e.實驗臺材料要以耐熱、耐酸堿為宜．

3.無菌室：無菌室通過空氣的凈化和空間的消毒為微生物實驗提供一個相對無菌的工作環(huán)境，無菌室是處理樣品和接種培養(yǎng)的主要工作間，應與細菌檢驗操作室緊密相連．為滿足無菌室無菌要求，無菌間應滿足以下布局：a.入口避開走廊，設在細菌檢驗操作室內； b.與操作室用兩道緩沖間隔開； c.無菌室與緩沖間均裝有紫外燈，要求每3平米安裝30ｗ紫外燈一盞； d.無菌室內設有實驗臺（實驗臺與邊臺皆可），紫外燈距實驗臺面要小于1.5m； e.無菌室與操作室之間設有雙層窗構成小通道．

4.培養(yǎng)基制作室：培養(yǎng)基室是制作、配制微生物培養(yǎng)所需培養(yǎng)基及檢驗用試劑的場所，其主要設備應為邊臺與藥品柜．

a.邊臺上要放置電爐，以滿足熔化煮沸培養(yǎng)基時用； b.邊臺材料要耐高熱、耐酸堿； c.藥品柜分門別類存放一些一般藥品及試劑； d.危險、易腐易燃有毒有害藥品單獨設保險柜存放； e.邊臺上要放天平，以稱取藥品用．

5.洗滌消毒室：洗滌消毒室用以消毒洗滌待用與已用之玻璃器皿，培養(yǎng)基及污物，其面積應大于10m2（此區(qū)域的部分職能可在理化分析室完成）．

為滿足洗滌消毒的功能，洗滌消毒室應設有：

a.1-2個洗滌池，洗滌池上下水網要暢通；b.器皿柜或實驗臺，以放置洗滌好器皿；

c.高壓滅菌鍋，其所用電源應滿足用電負荷；d.室內安有通風裝置（通風柜）或換氣扇； e.有條件的單位還可在該室內，設供日常檢驗用水蒸餾水器裝置．

6.理化分析室（如果沒有條件，這個可以和微生物常規(guī)實驗室合并）理化分析室是物理化學分析的主要操作室a.實驗臺與細菌操作室要求相同b.設置通風柜以滿足加熱、消化、干燥、燒灼和化學處理等工作需要；c.洗滌池．

7.儀器室：如果沒有條件，這個可以和微生物常規(guī)實驗室合并，用以放置顯微鏡、電子天平及理化分析用小型儀器；a.要求清潔干燥、防潮防蟲、避光； b.儀器臺要穩(wěn)固、牢靠．

從上述資料可以總結出簡單微生物實驗室須具備以下幾點：1.辦公室即實驗紀錄整理和相關資料文獻存放區(qū)2.常規(guī)操作區(qū)包括（1）微生物試驗結果的顯微和理化檢測（2）試劑、檢驗用儀器存放；藥品需分門別類存放；危險、易腐易燃有毒有害藥品單獨設保險柜存放（3）培養(yǎng)基的一般配制；但培養(yǎng)基滅菌后的分裝與接種必須在無菌條件下操作3.無菌操

作區(qū)此區(qū)域為潔凈區(qū)，作為微生物接種擴培和微生物發(fā)酵產物后處理工作區(qū)；超凈工作臺可代替無菌室，提供相對無菌的工作平臺．其構造主要有電器部分、送風機、三級過濾器（初、中、高）及紫外燈等。

特別注意：高壓滅菌器材設備要獨處放置。

三、一般儀器設備

1.恒溫培養(yǎng)箱：主要用于實驗室微生物的培養(yǎng)，一般有（1）普通培養(yǎng)箱：一般控制的溫度范圍為：室溫＋５～６５度，又分為電熱恒溫培養(yǎng)箱和隔水式恒溫培養(yǎng)箱．（2）生化培養(yǎng)箱：一般控制的溫度范圍為：５～５０度．（3）恒溫恒濕箱：一般控制的溫度范圍為：５～５０度，控制的濕度范圍為：５０～９０％．可作為霉菌培養(yǎng)箱．4）厭氧培養(yǎng)箱：適用于厭氧微生物的培養(yǎng)．可根據實際需要選用．

2.電熱恒溫干燥箱：用于吸管，平皿類玻璃器皿的干熱、滅菌和烘烤．

3.高壓蒸汽滅菌鍋（又叫高壓滅菌鍋）：培養(yǎng)基、試驗用培養(yǎng)皿等用品的滅菌．

4.冰箱：做暫時保藏菌種用.5.電子天平：一般要求具備精度達到萬分之一的分析天平．

6.顯微鏡：觀察微生物形態(tài)的必備儀器．

7.均質器：用于均質樣品，有旋轉刀片式和拍擊式可以選擇；例如旋轉振蕩器．

8．蒸餾水器：提供蒸餾水；根據現(xiàn)實情況，非必需.9．水浴鍋：部分培養(yǎng)溫度需要水?。ㄈ绱竽c桿菌檢驗）

10.超凈工作臺：超凈工作臺作為代替無菌室的一種設備，使用簡單方便，為實驗的開展提供一個相對無菌的操作臺．超凈工作臺根據風向分為水平式和垂直式．

11.搖床培養(yǎng)機：，制備細胞培養(yǎng)液時，用以搖勻接種微生物、細菌和細胞等.其它可能用到的設備：恒溫水浴箱、菌落計數(shù)器、電位 pH計、高速離心機、冷凍離心機、紫外-分光光度儀等設備．

四、常規(guī)玻璃器皿

1.移液管：用于移取少量液體，常用的吸管有0.1刻度1mL及1.0刻度的10mL吸管等．

2.培養(yǎng)皿：為硬質玻璃雙碟，常用于分離培養(yǎng)，蓋與底大小應合適，常用規(guī)格為90mm．

3.三角燒瓶與廣口瓶：多用于盛培養(yǎng)基及配制溶液，常用的規(guī)格有250mL、500mL、1000mL．

4.燒杯：供盛液或煮沸用，常用的規(guī)格為100mL、250mL、500mL、1000mL ．

5.量筒：用于液體測量，常用規(guī)格為100mL、250mL、1000mL ．

6.試管：用于菌種培養(yǎng)，有多種規(guī)格．

7.載玻片蓋玻片：菌種涂片觀察用．

8.微量移液管：移取微量液體，一般有1000～5000μl，100～1000μl，10～200μl，1～20μl，0.1～2μl等多種規(guī)格.其它，如試管架、毛刷、酒精燈、接種針、接種環(huán)、牛皮紙、脫脂棉等．

五、化學試劑和培養(yǎng)基

參照所需購買試劑和培養(yǎng)基原材料以及消毒液．

第三篇：食用菌實驗-培養(yǎng)基制作

實驗二

母種培養(yǎng)基制作

一、實驗目的掌握斜面試管培養(yǎng)基的配制、消毒與滅菌等制作過程，為菌種轉管、組織分離制作母種打下基礎。

二、常用培養(yǎng)基配方

1．馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)

去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000毫升，pH自然。2.PDA綜合培養(yǎng)基

去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，磷酸二氫鉀3.0克，硫酸鎂1.5克，維生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。

三、實驗材料和用具

天平、電爐，18×180毫米試管，止水夾。紗布，棉塞，牛皮紙，皮筋，手套、菜板、刀、恒溫箱，三角漏斗、支架（每組一套）。手提式高壓滅菌鍋。馬鈴薯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂等。

四、實驗步驟與方法 1．PDA培養(yǎng)基的配制 2．裝管、捆把 3．滅菌

鍋內加適量水→ 滅菌物品放內鍋→

加熱 → 壓力表0.05Pa 時放氣 →壓力表1.15Pa(121-126℃)時計時30分鐘。

4.擺斜面。滅菌后將試管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板條上，使試管內斜面的長度為試管長度的3／5。放置凝固后備用。

五、作業(yè)思考題

1．制作PDA培養(yǎng)基過程中，為什么要用牛皮紙將整捆的棉塞部分封蓋滅菌? 2．滅菌時，加熱水沸后，在鍋內壓力升至0.5Pa 時，為什么要打開放氣閥? 3．寫出試管培養(yǎng)基制作的工藝流程。4．消毒與滅菌是同一概念嗎?為什么?

實驗三

原種培養(yǎng)基制作

原種即二級種，就是將試管中的母種，接入菌種瓶內，等菌絲長滿后形成的菌種。

一、實驗目的

通過實驗初步掌握原種培養(yǎng)基的配料、裝瓶(袋)、滅菌、消毒、接種、培養(yǎng)等生產工藝流程。并了解原種培養(yǎng)基的不同配方及不同的制作方法。

二、實驗材料和用具 天平，立式或臥式高壓滅菌鍋，菌種瓶或菌種袋(菌種瓶口徑3厘米，容積750毫升)，塑料套環(huán)，塑料繩，擦布，錐形搗木。稱，大盆

麥粒，麥麩，棉籽殼，不銹鋼鍋，石膏，碳酸鈣，白糖，牛皮紙，皮筋，三、培養(yǎng)基配方

1．木屑米糠培養(yǎng)基(適用于香菇、木耳、猴頭菇、楊樹菇等木腐生類食用菌)：木屑(鋸木屑)78千克，米糠或麥麩20千克，石膏1千克，蔗糖(俗稱白糖)1千克。料水比為1：1．4～1．6，使含水量達到60%，即用手握抓材料時指縫現(xiàn)水而不滴水。

2．麥粒培養(yǎng)基(適用于平菇、草菇、猴頭、金針菇等)： 麥粒200千克，蔗糖2千克，碳酸鈣2千克，水500升。

3．棉籽殼培養(yǎng)基(適于多種食用菌)：

棉籽殼78%，麥麩10%，玉米粉10%，過磷酸鈣1%，白糖l%，水料比約1:1.1-1.2。

四、實驗步驟與方法 1．培養(yǎng)基的配制

1)木屑米糠培養(yǎng)基的配制：

拌料：根據計劃生產原種的數(shù)量，計算出各種原料的用量，分別稱取后，將不溶性輔料和主料摻拌均勻，將可溶性輔料加入水中溶解，逐漸潑入拌好的主料中，摻拌均勻，繼續(xù)加水拌料。拌料時，邊加水，邊測含水量，以便控制水分，不至過多或不足。含水量的測定：拌好料后，用手抓一把培養(yǎng)料在手中緊握，手指縫中有水滲出但不下滴為適宜。料水比約為1:1.2-1.4 裝瓶（袋）：將培養(yǎng)料裝入750毫升的菌種瓶(或500毫升罐頭瓶)中，邊裝邊搗實(但不宜過緊，太緊則透氣性差，菌絲生長不良)，以手按結實有彈性為宜，一直裝到菌種瓶的瓶肩處。

打孔：培養(yǎng)料裝好后，用錐形木棒從瓶中央向下打一個洞，洞深離瓶底部2～3厘米，這樣一是可以增加瓶內氧氣；二是有助于菌絲沿著洞穴向下蔓延；三是便于固定菌種塊，不致游動而影響成活，有利于瓶下部菌絲生長良好。

擦瓶：打洞后，用濕毛巾或濕布多次將瓶口和瓶外粘附的培養(yǎng)料擦凈，擦干，以免接種后污染

包扎：塞上棉塞，用牛皮紙將瓶口及棉塞包住，用繩扎緊。也可在瓶口上先放一層牛皮紙，再蓋一層聚丙烯塑料薄膜，扎緊瓶口。2)棉籽殼培養(yǎng)基的配制：

棉籽殼原種培養(yǎng)基的配制方法同木屑培養(yǎng)基的相似，只是裝瓶時培養(yǎng)料的壓實要比木屑的緊，因棉籽殼顆粒較大，且能留有較多的空隙。3)麥粒培養(yǎng)基的配制：

浸料：將小麥粒用水浸4-8小時，煮沸20—30分鐘，煮沸的過程中就加入蔗糖。最后使麥粒熟而不開花。濾去水分(濾液可制母種培養(yǎng)基或栽培時拌料用)，攤在通風處晾30—40分鐘，使麥粒表皮不濕為宜。

裝瓶：加入碳酸鈣，拌勻后裝瓶。裝瓶時要注意邊裝瓶邊將瓶輕輕地扣動，使瓶內培養(yǎng)料松緊度上下一致，裝至粒面至瓶肩部。瓶口包扎同前。2．滅菌

包扎好的料瓶（袋）放入高壓滅菌鍋內進行滅菌。在1．5千克／平方厘米壓力下，滅菌2小時即可。如用土蒸鍋常壓滅菌，須將水燒開后繼續(xù)蒸10小時，緩慢降溫后取出使用。

六、作業(yè)思考題

1．原種培養(yǎng)基裝滿瓶后，為什么要用濕毛巾或濕布多次擦洗瓶外和瓶頸? 2．原種培養(yǎng)基裝好后，為什么要在當天及時進行滅菌? 3．原種培養(yǎng)基裝瓶后，用錐形搗木在其中內插一個圓洞的目的是什么? 4．原種培養(yǎng)基裝滿瓶后，其瓶的上部培養(yǎng)料是松一些好，還是緊一些好?為什么? 5．培養(yǎng)料裝得過松過緊都將產生什么樣的結果?

第四篇：微生物實驗室守則

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應予以適當束結，嚴禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內嚴禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結束後，需加以清理，物品並應歸於原位。

3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應隨時保持乾淨。

4.應熟悉實驗室內所有設備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應清理乾淨，並清點附件是否齊備，關閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發(fā)現(xiàn)有任何異狀，即報告指導老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.不可於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經許可嚴禁攜出室外。9.接種針（環(huán)）於接菌前後務必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。

12.實驗結束後，應確實關閉所有不用之電源。

13.任何意外事件，應即報告助教及指導老師，亦應熟知其應變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

微生物實驗室守則

1.須著長及膝蓋之實驗衣，並穿著長褲，若有長髮應予以適當束結，嚴禁穿著拖鞋或涼鞋。實驗室內嚴禁喧嘩嬉鬧、追逐、抽煙及吃食等行為。

2.非必要物品勿置於實驗室之桌面，實驗結束後，需加以清理，物品並應歸於原位。3.實驗前後消毒桌面及手部，實驗時操作桌面應隨時保持乾淨。

4.應熟悉實驗室內所有設備，配置及正確操作方法。

5.顯微鏡使用後應清理乾淨，並清點附件是否齊備，關閉電源後再拔掉插頭，並歸定位，發(fā)現(xiàn)有任何異狀，即報告指導老師處理，任何配件或裝置避免任意交換或拆卸。

6.於點燃酒精燈時噴酒精，並隨時注意自己及他人之安全，酒精燈不用時應即熄滅。

7.實驗所用之菌體有些為致病菌，故須以無菌操作且避免用手及口的動作，如咬手指或用舌頭舔濕標籤。

8.實驗用之所有菌體或器具未經許可嚴禁攜出室外。

9.接種針（環(huán)）於接菌前後務必以酒精燈滅菌。

10.含菌體之容器，應妥予加蓋，非必要時切勿任意打開。

11.實驗後待丟棄物品應妥善包裹或予殺菌處理再丟棄；固體培養(yǎng)基則不得倒入水槽中。

12.實驗結束後，應確實關閉所有不用之電源。13.任何意外事件，應即報告助教及指導老師，亦應熟知其應變措施。

14.實驗操作過程中必須隨時注意自身及他人之安全，若有危及自身及他人安全之事件或違反實驗守則者，本實驗課成績一律以零分計。

第五篇：微生物實驗室規(guī)則

微生物實驗室規(guī)則

1、進實驗室應穿工作服，離室時脫去放在指定處所，工作服應定期消毒洗滌。

2、非必要物品勿帶入實驗室。

3、實驗室內應保持肅靜；不得高聲談笑；不準吸煙和進食；無菌室在工作前、工作后均須全面清掃、消毒。

4、如帶有細菌的增菌液污染桌面或地面，應立即用消毒溶液傾覆其上，半小時后方可抹去；如有污染物污染工作服，應立即將工作服脫去以高壓蒸汽法滅菌。

5、如有污染物污染手部，應立即將手浸泡消毒液內，經5分鐘后，再用肥皂和水刷洗干凈。如有污染物吸入口內，應立即吐出，并以大量清水漱口，根據需要亦可服用有關藥物以防發(fā)生感染染。

6、接種環(huán)用后應立即在酒精燈火焰上燒灼滅菌；沾菌的吸管、玻片等用后應分別浸泡在盛有消毒液的玻璃缸內，其他已污染的試管、平皿等亦必須置于專用容器內，經滅菌后再進行洗滌。

7、用于消毒的酒精應放在加蓋搪瓷缸內，如不慎著火，應立即用搪瓷蓋蓋上與空氣隔絕即可滅掉火焰。

8、工作完畢時工作臺用沾有消毒液的抹布擦拭干凈，地面應用墩布擦拭干凈。

9、檢驗人員應具備高度責任感，以嚴謹?shù)目茖W態(tài)度從事檢驗工作。