第一篇：細(xì)胞免疫學(xué)論文

【摘要】 作為一種具有靶向性的生物大分子，單克隆抗體始終是人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一，被廣泛用于治療腫瘤、病毒感染和抗移植排斥等。但鼠源單克隆抗體的臨床應(yīng)用受限于誘導(dǎo)產(chǎn)生人抗鼠抗體、腫瘤滲入量低、親和力低和半衰期短等。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及其向各學(xué)科的滲透，通過基因操作技術(shù)對(duì)抗體進(jìn)行改造，可使其適用于多種疾病的治療。抗體人源化已經(jīng)成為治療性抗體的發(fā)展趨勢(shì)，同時(shí)各種抗體衍生物也不斷涌現(xiàn)，它們從不同角度克服了抗體本身的應(yīng)用局限，也為治療人類疾病提供了利器。本文簡(jiǎn)要介紹上述技術(shù)的基本原理、特點(diǎn)和治療性抗體的研究進(jìn)展。

【關(guān)鍵詞】人--鼠嵌合抗體 生物導(dǎo)彈 人源化抗體 雙特異性抗體 【正文】

一、治療性抗體技術(shù)的研究背景 2000年前，人們將自白喉?xiàng)U菌培養(yǎng)上清液中分離到的可溶性毒素注入馬體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)得到的抗血清可以治療白喉，這是第一個(gè)用抗體治療疾病的例子。隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以及抗體基因結(jié)構(gòu)的闡明，DNA 重組技術(shù)開始被用于抗體的改造，人們可以根據(jù)需要對(duì)以往的鼠抗體進(jìn)行相應(yīng)的改造，以消除抗體應(yīng)用的不利性狀或增加新的生物學(xué)功能，還可用新的技術(shù)重新制備各種形式的重組抗體，標(biāo)志著基因工程抗體時(shí)代的來臨。自第一個(gè)基因工程抗體———人--鼠嵌合抗體于1984 年誕生以來，新型基因工程抗體不斷出現(xiàn)，包括人源化抗體、單價(jià)小分子抗體（Fab、單鏈抗體、單域抗體等）、多價(jià)小分子抗體（雙鏈抗體、三鏈抗體、微型抗體等）、某些特殊類型的抗體（雙特異抗體、抗原化抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體等）及抗體融合蛋白（免疫毒素、免疫黏連素等）等。用于制備新型抗體的噬菌體抗體庫技術(shù)成為繼雜交瘤技術(shù)之后生命科學(xué)研究中又一突破性進(jìn)展。在噬菌體抗體庫的基礎(chǔ)上，近年來又發(fā)展了核糖體展示抗體庫技術(shù)，利用核糖體展示技術(shù)篩選抗體的整個(gè)過程均在體外進(jìn)行，不經(jīng)過大腸桿菌轉(zhuǎn)化步驟，因此可以構(gòu)建高容量、高質(zhì)量的抗體庫，更易于篩選高親和力抗體和利用體外進(jìn)行的方法對(duì)抗體性狀進(jìn)行改造，核糖體展示抗體庫技術(shù)代表了抗體工程的未來發(fā)展趨勢(shì)。

二、各種抗體治療作用的機(jī)理與應(yīng)用 2.1 抗體的基本組成

抗體的基本單位是由4 條肽鏈組成的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，包括2 條相同的重鏈和2 條相同的輕鏈。重鏈和輕鏈分別由可變區(qū)和恒定區(qū)組成。可變區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)與抗體和抗原結(jié)合的多樣性直接有關(guān)，而恒定區(qū)的結(jié)構(gòu)與抗體的生物學(xué)活性相關(guān)。在少數(shù)情況下，抗體與抗原結(jié)合后可以對(duì)機(jī)體直接起保護(hù)作用，如用抗體中和毒素的毒性，但在多數(shù)情況下需要通過效應(yīng)功能滅活或清除外來抗原?？贵w的效應(yīng)功能有2 類，一類是通過激活補(bǔ)體，產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)，如細(xì)胞裂解、免疫黏附及調(diào)理作用，促進(jìn)炎癥反應(yīng)；另一類是通過抗體分子中的Fc 段與細(xì)胞表面Fc 受體的相互作用，通過其Fc段分別介導(dǎo)調(diào)理作用或抗體依賴性細(xì)胞毒作用。此外，治療性抗體的效應(yīng)和作用機(jī)理直接取決于它所識(shí)別的抗原決定簇，例如治療非何杰金氏B細(xì)胞淋巴瘤的抗CD20 抗體能影響細(xì)胞膜上離子通道的功能，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、增殖和凋亡。

由于多克隆抗體本身的局限性，所以直到單克隆抗體出現(xiàn)，抗體用于抗腫瘤治療才真正得以實(shí)現(xiàn)。自從1978 年成功制備出第一株抗黑色素瘤單抗以來，相繼出現(xiàn)了抗胃腸癌、肺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等的單克隆抗體。單克隆抗體殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能是抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞效應(yīng)（ADCC）及補(bǔ)體依賴性細(xì)胞溶解作用（CDC）。單克隆抗體與藥物、毒素或放射性物質(zhì)偶聯(lián)，成為一種全新的“生物導(dǎo)彈”，可用于導(dǎo)向治療，已越來越受到重視。另外，用單抗給予T 細(xì)胞所必需的重要表面信號(hào)分子交聯(lián)的刺激信號(hào)和生長(zhǎng)信號(hào)，體外誘導(dǎo)腫瘤特異性細(xì)胞毒T 淋巴細(xì)胞，可用于特異性、被動(dòng)性的免疫治療。

自身免疫病多與單或寡克隆抗體的異常增多有關(guān)。利用基因工程技術(shù)可制備針對(duì)這些異常抗體獨(dú)特型的抗抗體或與自身抗體結(jié)合并抑制其作用，或制備能模擬抗原的內(nèi)影像抗體用于中和體內(nèi)的自身抗體。目前針對(duì)不同的發(fā)病機(jī)制，治療方法趨于多樣化。許多變態(tài)反應(yīng)與IgE 有關(guān)。Fc 片段可與變應(yīng)原特異性IgE競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合嗜堿性粒細(xì)胞，封閉變應(yīng)原介導(dǎo)的組胺釋放。此外，還可生產(chǎn)出與患者IgE 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合變應(yīng)原的Fab 樣分子。

2.2 免疫毒素

免疫毒素是一種毒素肽和細(xì)胞選擇性靶向配體連接的融合蛋白，它能通過靶向結(jié)構(gòu)域的特異結(jié)合功能使毒素傳遞到靶細(xì)胞并與之作用進(jìn)而殺死腫瘤細(xì)胞。早期的免疫毒素是由無修飾生物毒素和鼠源抗體連接而成的，連接的方式常為化學(xué)偶聯(lián)法。由于非人源的毒素和鼠源抗體導(dǎo)致的免疫排斥反應(yīng)，以及低親和力和無靶向特異性，使免疫毒素?zé)o法在臨床中得到運(yùn)用。

新型免疫毒素是將毒素肽和細(xì)胞選擇性靶向配體都進(jìn)行改造后，再用工程菌或工程細(xì)胞實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。細(xì)胞選擇性靶向配體使用了工程抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白、表皮生長(zhǎng)因子以及IL-2等?？贵w的改造主要集中在降低免疫原性、提高親和力和增強(qiáng)實(shí)體腫瘤滲入率等方面，包括改用小分子工程抗體、人源化抗體、人源抗體和突變的高親和力抗體等。

2.3 抗體－細(xì)胞因子融合蛋白

細(xì)胞因子能激活某些免疫細(xì)胞，包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞等。應(yīng)用細(xì)胞因子治療癌癥能夠引起免疫應(yīng)答，但這種免疫反應(yīng)是非特異的，常產(chǎn)生全身毒性。有人嘗試使用抗體工程技術(shù)將細(xì)胞因子與抗體連接形成融合蛋白，通過靶向作用，細(xì)胞因子在腫瘤組織的靶細(xì)胞上聚集，在局部殺傷腫瘤細(xì)胞，而非特異性毒性將減少或消失。常用的細(xì)胞因子包括IL-

2、IL-12和GM-CSF 等，融合的部位可以是全長(zhǎng)型抗體或ScFv的N端或C端?？贵w－細(xì)胞因子融合蛋白作為一種新型的腫瘤免疫治療藥物，其抗體功能域可引導(dǎo)細(xì)胞因子濃集在腫瘤組織的微環(huán)境中，之后抗體部分直接抑制腫瘤細(xì)胞活性，并誘導(dǎo)二次免疫應(yīng)答，多重作用的相加使抗體－細(xì)胞因子融合蛋白對(duì)腫瘤的抑制作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)使用抗體或細(xì)胞因子。由于全長(zhǎng)型抗體Fc上存在兩個(gè)效應(yīng)細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)，功能更為強(qiáng)大，其中一個(gè)位點(diǎn)與細(xì)胞因子結(jié)合，激活效應(yīng)細(xì)胞，另一個(gè)與FcγR結(jié)合，引發(fā)抗體依賴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用(ADCC)。

三、治療性抗體的制備技術(shù)與研究意義

由識(shí)別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一性抗體稱為單克隆抗體，可視為第二代抗體。由于其具有特異性高、親和力強(qiáng)、效價(jià)高、血清交叉反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在基礎(chǔ)研究、臨床診斷及治療、免疫預(yù)防等領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。在治療上，單克隆抗體主要用于抗腫瘤、抗器官移植排斥反應(yīng)、抗感染、解毒等。近年來將單抗與核素、各種毒素（如白喉外毒素或蓖麻毒素）或藥物通過化學(xué)偶聯(lián)或基因重組制備成導(dǎo)向藥物，用于腫瘤的治療成為研究的重點(diǎn)。制備單克隆抗體的常規(guī)方法是免疫小鼠，雜交瘤可在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中產(chǎn)生無限量單克隆抗體。對(duì)大多數(shù)雜交瘤來說，現(xiàn)已可用體外方法生產(chǎn)單克隆抗體而無需應(yīng)用動(dòng)物。體外單克隆抗體生產(chǎn)系統(tǒng)已有多種，但大規(guī)模生產(chǎn)治療性單克隆抗體需用中空纖維系統(tǒng)，其成功與否取決于雜交瘤的固有特性，如細(xì)胞生長(zhǎng)和單克隆抗體生產(chǎn)能力等。因此，大量生產(chǎn)以供臨床研究應(yīng)用還有困難，但有幾種方法可以解決這些問題，如嵌合單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人單克隆抗體的產(chǎn)生。其中，人源化抗體是一個(gè)重要的里程碑，并伴隨著一系列重大的技術(shù)革新，如PCR技術(shù)、抗體庫技術(shù)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等。人源化抗體的形式也從最初的嵌合抗體、改型抗體等逐步發(fā)展為今天的人抗體?？贵w人源化已經(jīng)成為治療性抗體的發(fā)展趨勢(shì)，同時(shí)各種抗體衍生物也不斷涌現(xiàn)，它們從不同角度克服了抗體本身的應(yīng)用局限，也為治療人類疾病提供了更多利器。

人源化抗體是從鼠源單抗到全人抗體的過渡形式，在鼠單抗的基礎(chǔ)上，用人抗體恒定區(qū)置換鼠抗體的相應(yīng)部位，形成人鼠嵌合抗體。利用DNA重組技術(shù)將鼠單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)人鼠嵌合抗體，其人源化程度可達(dá)到70%左右。嵌合抗體完整地保留了異源單抗的可變區(qū)，最大限度地保持了其親和性，降低了免疫原性。美國(guó)食品藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)的抗體藥物中有4個(gè)是嵌合抗體。但由于其整個(gè)可變區(qū)都是異源的，所以嵌合抗體的異源性還很明顯，解決HAMA的效果并不理想。

由于天然抗體主要是通過調(diào)理作用、ADCC 或依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒效應(yīng)起到殺傷靶細(xì)胞的作用，因此天然抗體的細(xì)胞毒效應(yīng)有限。下列幾種途徑可以增加抗體對(duì)靶細(xì)胞的殺傷，如免疫結(jié)合物、抗體細(xì)胞因子融合蛋白、雙特異性抗體、細(xì)胞內(nèi)抗體等。

雙特異性抗體亦稱雙功能抗體，是同一抗體的3 個(gè)抗原結(jié)合部位分別針對(duì)3 個(gè)不同的抗原，在結(jié)構(gòu)上是雙價(jià)的，而與抗原結(jié)合的功能是單價(jià)的。雙特異性抗體可以用化學(xué)交聯(lián)、細(xì)胞融合和基因工程等方法獲得。由于它可以同時(shí)與3 種抗原發(fā)生反應(yīng)，并使之交聯(lián)，因而可介導(dǎo)標(biāo)記物與靶抗原的結(jié)合，或使某種效應(yīng)分子定位于靶細(xì)胞；此外，又由于它與抗原結(jié)合的單價(jià)性，不易引起靶抗原的調(diào)變，從而可提高抗體的某些生物學(xué)效應(yīng)。雙特異性抗體重鏈的異質(zhì)性使其FC 片段與FC受體結(jié)合的能力明顯減弱，減少了該抗體在體內(nèi)的非特異性分布。雙特異性抗體的這些特性使它在診斷和治療上有廣泛的應(yīng)用前景。目前，作為治療腫瘤用的雙功能抗體常采用抗腫瘤相關(guān)抗原（TAA）及CD3 或抗TAA 及CD16，這類雙特異性抗體在

荷瘤動(dòng)物模型中無論是抑瘤試驗(yàn)還是殺傷試驗(yàn)均獲得了良好結(jié)果。無論采用何種免疫活性細(xì)胞的效應(yīng)分子，其殺傷均無MHC限制，這為臨床應(yīng)用提供了許多方便，目前已有一些雙功能抗體正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

一般的抗體在細(xì)胞內(nèi)合成后分泌到胞外，如果在抗體的N端或C端加入引導(dǎo)序列，就能使抗體表達(dá)定位在亞細(xì)胞部位，如胞漿、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或細(xì)胞核部位。這種在細(xì)胞內(nèi)合成并作用于細(xì)胞內(nèi)組分的抗體稱為細(xì)胞內(nèi)抗體或內(nèi)抗體。細(xì)胞內(nèi)抗體可以提供一種獨(dú)有的研究分子功能的新方法，它可以在細(xì)胞內(nèi)抑制病毒復(fù)制、抑制生長(zhǎng)因子受體或癌蛋白表達(dá)，因此有用于基因治療的前景，研究較多的是用細(xì)胞內(nèi)抗體抑制I型人類免疫缺損病毒I型（HIV-I）和抗腫瘤。

雙特異抗體是指具有兩種抗原結(jié)合特性的抗體，可同時(shí)結(jié)合兩個(gè)不同的抗原或抗原決定簇。與mAb相比，雙特異抗體具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)較低濃度即可殺傷或溶解腫瘤細(xì)胞；(2)對(duì)低表達(dá)或不表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞有殺傷或抑制作用；(3)激活結(jié)合的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，協(xié)助殺傷腫瘤細(xì)胞。早期研制雙特異抗體的方法是采用細(xì)胞工程，即將兩株各自分泌不同特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞再融合得到四源雜交瘤，或?qū)⒁恢觌s交瘤細(xì)胞與免疫的脾細(xì)胞融合得到三源雜交瘤，這兩種雜交瘤被稱為二次雜交瘤)。多倍雜交瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性差，BsAb的產(chǎn)量少且活性低，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，臨床應(yīng)用時(shí)存在人抗鼠抗體免疫反應(yīng)(HAMA)，因此不適用于臨床。20世紀(jì)90年代起，基因工程和蛋白質(zhì)工程在抗體生產(chǎn)和改造中得到了成功應(yīng)用，由此產(chǎn)生了抗體工程。應(yīng)用抗體工程生產(chǎn)BsAb，具有分子量小、方法穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)、成本顯著降低和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

四、治療性抗體的研究方向與存在問題

抗體應(yīng)用于人類疾病的治療已有很長(zhǎng)的歷史，但其發(fā)展歷程是曲折的，自單克隆抗體;雜交瘤技術(shù)宣告誕生以來，歷經(jīng)多年反復(fù)。目前，F(xiàn)DA 已經(jīng)批準(zhǔn)21 個(gè)治療性單抗上市。近年來，科學(xué)界和醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界都對(duì)治療性抗體的研究表現(xiàn)出越來越多的關(guān)注。人源化抗體和人抗體的出現(xiàn)為治療性抗體的廣泛應(yīng)用帶來了新的希望。但人抗體是否可以解決鼠抗體臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的所有問題，還有待大量臨床試驗(yàn)的檢驗(yàn)。影響抗體免疫原性的因素很多，如抗原呈遞方式、次級(jí)信號(hào)系統(tǒng)以及患者的個(gè)體差異性等，而抗體的人源化只能解決一個(gè)方面的問題。同樣，抗體衍生物也會(huì)面臨諸如免疫原性、毒副作用等自身固有的問題，所以可行的發(fā)展方向是在完善人抗體技術(shù)的同時(shí)，推進(jìn)治療性小分子抗體衍生物的研究。根據(jù)臨床實(shí)際設(shè)計(jì)靈活的治療方案，使人源化抗體和抗體衍生物互為補(bǔ)充，達(dá)到最佳治療效果。從已上市的抗體藥物不難看出，未來的治療性抗體將朝著人源化和小型化發(fā)展，兩條途徑的結(jié)合將最大程度地克服鼠單抗的缺陷使抗體藥物得到更為深入和廣泛的應(yīng)用。

五、治療性抗體的發(fā)展前景

單克隆抗體技術(shù)的問世,使研究和生產(chǎn)治療性單抗藥物成為現(xiàn)實(shí)。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,新型的重組抗體技術(shù)也隨之而生。

人們可以利用DNA重組技術(shù)對(duì)鼠源抗體進(jìn)行人源化改造、構(gòu)建合成或半合成抗體庫及噬菌體抗體庫,從中篩選獲得人源抗體,甚至利用轉(zhuǎn)基因小鼠直接獲得人源抗體?？贵w藥物發(fā)展的趨勢(shì)也從鼠源、人-鼠嵌合、人源化到全人源。近年獲得批準(zhǔn)的抗體藥物以全人源為主。1996年至2008年間進(jìn)入臨床研究的人源化單克隆抗體中45%用于治療腫瘤,28%個(gè)用于治療免疫紊亂?？贵w藥物的發(fā)展進(jìn)入研發(fā)、回報(bào)的良性循環(huán),成了國(guó)際制藥業(yè)爭(zhēng)奪的焦點(diǎn)。文章就治療性抗體發(fā)展的歷史、現(xiàn)狀、市場(chǎng)及未來展望作了簡(jiǎn)要綜述。利用抗體工程研制更有效的治療性抗體的前景非常光明盡管還存在很多問題。實(shí)踐已經(jīng)證明，許多新型工程抗體可以在原核或真核細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)，它們具有較長(zhǎng)的半衰期和生物學(xué)效應(yīng)，大多為ScFv、Fab或它們的多聚體，能夠有效進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，具有比較理想的治療效果。新型抗體工程技術(shù)的不斷出現(xiàn)，將為抗體改造提供了強(qiáng)有力的技術(shù)平臺(tái)。相信不久的將來，治療性抗體會(huì)在人類疾病的治療中扮演重要的角色。

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第二篇：細(xì)胞研究論文

骨缺損(尤其是大型骨缺損)的治療，由局部傷情復(fù)雜和缺乏理想的修復(fù)材料，一直是困擾臨床醫(yī)生和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)工作者的一大難題，而尋找一種盡可能達(dá)到或接近自體骨移植效果的理想的骨替代材料更是無數(shù)學(xué)者熱切探索、孜孜以求的目標(biāo)。近年來日趨活躍的骨組織工程(bone tissue engineering)技術(shù)為這一課題的研究帶來了新的亮點(diǎn)和希望。目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已能從骨膜、骨髓等定向性骨祖細(xì)胞(determined osteogenic precursor cells, DOpC)密集處分離培養(yǎng)出成骨細(xì)胞，經(jīng)體外擴(kuò)增并與載體結(jié)合，回植體內(nèi)骨缺損處取得骨缺損修復(fù)的成功［1］。與此同時(shí)，基于對(duì)患者易接受性、可操作性和更簡(jiǎn)單易行性等方面的考慮，研究者又開始把目光投向誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞(inducible osteogenic precursor cells, IOpC)。其中，在體內(nèi)分布廣泛、數(shù)量巨大、部位表淺、取材方便、培養(yǎng)傳代易行、分裂增殖迅速的成纖維細(xì)胞首先成為了研究的焦點(diǎn)。由于目前許多相關(guān)研究尚處于實(shí)驗(yàn)階段，為此，本文著重就成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性及其成骨作用等作一綜述。

1　成纖維細(xì)胞的來源及其生物學(xué)特性

成纖維細(xì)胞(fibroblast)是結(jié)締組織中最常見的細(xì)胞，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymal cell)分化而來。在結(jié)締組織中，成纖維細(xì)胞還以其成熟狀態(tài)—纖維細(xì)胞(fibrocyte)的形式存在，二者在一定條件下可以互相轉(zhuǎn)變。

不同類型的結(jié)締組織含成纖維細(xì)胞的數(shù)量不同。通常，疏松結(jié)締組織中成纖維細(xì)胞的數(shù)量比同樣體積的致密結(jié)締組織中所含成纖維細(xì)胞的數(shù)量要少，故分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞多以真皮等致密結(jié)締組織為取材部位［2，3］。

成纖維細(xì)胞形態(tài)多樣，常見的有梭形、大多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。成纖維細(xì)胞胞體較大，胞質(zhì)弱嗜堿性，胞核較大呈橢圓形，染色質(zhì)疏松著色淺，核仁明顯。電鏡下，其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體，表明它具有合成和分泌蛋白質(zhì)的功能。成纖維細(xì)胞尚可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)。它合成的前膠原蛋白分子經(jīng)內(nèi)切酶作用，聚合和重排，可形成與成骨細(xì)胞合成分泌的膠原原纖維一樣具有64nm(640?)周期橫紋的膠原原纖維，膠原原纖維經(jīng)互相粘合形成膠原纖維。經(jīng)檢測(cè)，這兩種細(xì)胞合成分泌的膠原纖維均是Ⅰ型膠原纖維，在形態(tài)和生化結(jié)構(gòu)上完全相同［4,5］。

處于成熟期或稱靜止?fàn)顟B(tài)的成纖維細(xì)胞，胞體變小，呈長(zhǎng)梭形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體均不發(fā)達(dá)，被稱為纖維細(xì)胞。在外傷等因素刺激下，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞，其功能活動(dòng)也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。另外，在結(jié)締組織中，仍保留著少量具有分化潛能的間充質(zhì)細(xì)胞，它們?cè)趧?chuàng)傷修復(fù)等情況下可增殖分化為成纖維細(xì)胞。

2　成纖維細(xì)胞在一般創(chuàng)傷修復(fù)中的表現(xiàn)

各種創(chuàng)傷均會(huì)造成不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損，必須通過細(xì)胞增生和細(xì)胞間基質(zhì)的形成來進(jìn)行組織修復(fù)。在此修復(fù)過程中，成纖維細(xì)胞起著十分重要的作用。以傷口愈合過程為例，成纖維細(xì)胞通過有絲分裂大量增殖，并從4～5天或6天開始合成和分泌大量的膠原纖維和基質(zhì)成分，與新生毛細(xì)血管等共同形成肉芽組織，填補(bǔ)傷口組織缺損，為表皮細(xì)胞的覆蓋創(chuàng)造條件。在傷口愈合中，成纖維細(xì)胞主要來源于真皮乳頭層的局部成纖維細(xì)胞和未分化的間充質(zhì)細(xì)胞，以及血管周圍的成纖維細(xì)胞和周細(xì)胞。內(nèi)臟損傷時(shí)，參與修復(fù)過程的成纖維細(xì)胞多來自間質(zhì)和包膜，以及粘膜下或漿膜下層的結(jié)締組織。有人認(rèn)為創(chuàng)傷愈合過程中傷處聚集的大量成纖維細(xì)胞，一方面是由成纖維細(xì)胞通過分裂增殖而來，另一方面，更多地是由鄰近的間充質(zhì)細(xì)胞、纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管周細(xì)胞等演變或游走到傷處。在創(chuàng)傷修復(fù)的后期，成纖維細(xì)胞通過分泌膠原酶參與修復(fù)后組織的改建。在某些病理?xiàng)l件下，以成纖維細(xì)胞為主要細(xì)胞成分的肉芽組織或增生組織塊還可以在非骨組織內(nèi)發(fā)生鈣化，引起異位骨化(ectopic ossification)。但對(duì)于異位骨化的參與細(xì)胞及其機(jī)制尚不十分清楚，未分化間充質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和毛細(xì)血管周細(xì)胞等可劃歸為誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞的細(xì)胞都有可能參與這一過程［6，8］。

3　成纖維細(xì)胞在骨創(chuàng)傷修復(fù)過程中的表現(xiàn)

最簡(jiǎn)單和常見的骨創(chuàng)傷即是骨折，其愈合過程須經(jīng)過炎性反應(yīng)、清掃、纖維骨痂和骨性骨痂4個(gè)階段［4］。不同階段參與的細(xì)胞主體不同。成纖維細(xì)胞從骨折第3天起就出現(xiàn)于骨折局部血腫中［6］，骨折后5天即在機(jī)化血腫及骨折斷端的間隙及其周圍大量存在，是參與纖維骨痂階段的主要細(xì)胞成分［4，5］。在此階段成纖維細(xì)胞一方面大量分裂增殖，一方面又合成和分泌大量Ⅰ型膠原，使肉芽組織逐步變成疏松的結(jié)締組織，將骨斷端包圍起來，形成接合兩骨折斷端的巨大的纖維骨痂。然而，這種由無數(shù)成纖維細(xì)胞和豐富的肉芽組織為主體構(gòu)成的纖維結(jié)締組織卻不會(huì)演變?yōu)樵谄渌M織創(chuàng)傷修復(fù)時(shí)常見的瘢痕組織，而是通過鈣鹽結(jié)晶在其內(nèi)部不斷沉積，逐漸演變?yōu)楣切怨丘瑁构钦劬植康男迯?fù)達(dá)到骨性愈合，恢復(fù)骨組織的結(jié)構(gòu)。此時(shí)，骨折愈合部只有骨組織而不再存在成纖維細(xì)胞［4，5，9～11］。

4　成纖維細(xì)胞的成骨作用

成纖維細(xì)胞在骨折愈合過程中不同于其它組織創(chuàng)傷修復(fù)的表現(xiàn)，以及在某些病理?xiàng)l件下可以參與異位骨化［6，7］，使人們對(duì)成纖維細(xì)胞的分化能力、鈣化骨化能力以及在成骨過程中其成骨能力如何發(fā)揮、細(xì)胞演變的最終歸宿如何等等問題產(chǎn)生了濃厚的興趣。對(duì)成纖維細(xì)胞成骨能力的研究也正是開始于對(duì)骨折愈合過程中成纖維細(xì)胞表現(xiàn)的觀察。

對(duì)骨折局部骨形成區(qū)的電鏡觀察顯示，除了成骨細(xì)胞在此發(fā)揮成骨作用外，成纖維細(xì)胞確實(shí)也存在著類似的成骨表現(xiàn)［4，5，9～13］。例如，在其線粒體內(nèi)可清晰見到鈣鹽顆粒，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)可見成熟的膠原纖維，分泌到其四周的膠原纖維內(nèi)可見高密度的鈣鹽結(jié)晶沉積。不僅如此，成纖維細(xì)胞還能象成骨細(xì)胞一樣產(chǎn)生基質(zhì)小泡并引起小泡內(nèi)的鈣鹽沉積。鈣化的基質(zhì)小泡形成叢毛球狀的鈣球，鈣球隨后合并、融合為骨組織。以上種種現(xiàn)象表明，成纖維細(xì)胞與成骨細(xì)胞一樣具備提供鈣鹽沉積及骨形成所必需的條件。在從纖維性骨痂到骨性骨痂的演變過程中，成纖維細(xì)胞也隨之演變?yōu)楣羌?xì)胞，與成骨細(xì)胞的歸宿相一致。但二者在演變過程中的表現(xiàn)又不盡相同，主要有以下幾點(diǎn)可資鑒別［9，13］：①成纖維細(xì)胞及其細(xì)胞核均呈不規(guī)則的橢圓形或長(zhǎng)方形，而成骨細(xì)胞及其細(xì)胞核則為邊緣比較光整的橢圓形；②成纖維細(xì)胞均單獨(dú)存在，細(xì)胞之間有眾多的膠原纖維相隔，成骨細(xì)胞則以連續(xù)排列的形式出現(xiàn)；③成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)溶酶體少見，而成骨細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)則常有溶酶體可見；④成纖維細(xì)胞四周的骨組織都由叢毛球狀鈣球或針狀鈣鹽結(jié)晶組成，成骨細(xì)胞則都有一面緊貼比較成熟與致密的骨組織；⑤成骨細(xì)胞是一個(gè)一個(gè)地被骨組織(類骨質(zhì))包圍變?yōu)楣羌?xì)胞，而成纖維細(xì)胞則可以是兩個(gè)或兩個(gè)以上同時(shí)被骨組織包圍在一個(gè)陷窩內(nèi)，然后再隨著細(xì)胞之間基質(zhì)的鈣化而分隔為各占一個(gè)骨陷窩。

對(duì)成纖維細(xì)胞的成骨作用，有學(xué)者認(rèn)為這是成纖維細(xì)胞的固有特性在骨折這一特定情況下得以表達(dá)的結(jié)果［9，11］。骨折局部活的和失活的骨組織及軟骨組織，以及骨基質(zhì)中的某些大分子都有可能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞表達(dá)其成骨作用進(jìn)而演變?yōu)楣羌?xì)胞［14，15］。較早在骨基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein, BMp)即對(duì)成纖維細(xì)胞有一定的誘導(dǎo)作用。對(duì)骨折愈合中BMp作用的研究［16，17］，表明創(chuàng)傷使內(nèi)源性BMp呈階段性合成與釋放，并誘導(dǎo)周圍軟組織中的間充質(zhì)細(xì)胞或/和成纖維細(xì)胞等向成骨方向轉(zhuǎn)化。應(yīng)用pAp法發(fā)現(xiàn)［16］，骨折后第3、5天局部纖維肉芽組織中的成纖維細(xì)胞樣間充質(zhì)細(xì)胞內(nèi)以及第14天新生骨小梁間纖維組織中的成纖維細(xì)胞樣間充質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，都與成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和骨基質(zhì)一樣存在BMp，表明這些成纖維細(xì)胞樣間充質(zhì)細(xì)胞已被誘導(dǎo)為可合成分泌BMp、具有成骨作用的細(xì)胞。而Sampath［15］從牛骨基質(zhì)中分離提純得到的成骨素對(duì)成纖維細(xì)胞的骨誘導(dǎo)能力更是超過了BMp和當(dāng)時(shí)已知的其它骨生長(zhǎng)因子。

成纖維細(xì)胞在其成骨作用得以表達(dá)后，可能通過兩種方式成骨：①膜內(nèi)成骨；②在環(huán)繞軟骨的纖維層內(nèi)成骨。開始分泌膠原纖維后，參與成骨的成纖維細(xì)胞只有兩個(gè)歸宿［4，5，9，13］：①變性、死亡、碎裂直至消失，這種演變發(fā)生早、范圍廣，故從纖維性骨痂形成開始，就逐漸有基質(zhì)成分發(fā)生鈣化，進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)楣腔|(zhì)；②演變?yōu)楣羌?xì)胞，這一過程出現(xiàn)較晚，并穿插在前一過程之中，故在形成骨組織的細(xì)胞成分的同時(shí)，還使豐富的纖維骨痂演變?yōu)楣切怨丘瑁纬晒墙M織。但這種由成纖維細(xì)胞演變成的骨細(xì)胞，其結(jié)局如何、其生物學(xué)特性與由成骨細(xì)胞演化而來的骨細(xì)胞是否相同仍不清楚。例如，骨細(xì)胞從骨陷窩脫離后，可恢復(fù)為功能活躍的成骨細(xì)胞，再次參與骨組織的形成；而由成纖維細(xì)胞演變成的骨細(xì)胞在脫離骨陷窩后，是成為成骨細(xì)胞還是恢復(fù)為成纖維細(xì)胞、此時(shí)是否還具備成骨作用等一系列問題尚缺乏研究。

5　成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性［18］

成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究細(xì)胞的老化、各種外來因子對(duì)細(xì)胞的損傷、細(xì)胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細(xì)胞易于獲取，又易于在體外生長(zhǎng)，故目前皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運(yùn)用，其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對(duì)成熟，對(duì)其體外生長(zhǎng)規(guī)律也有了較全面的認(rèn)識(shí)。

成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法，其中組織塊法又因其操作簡(jiǎn)便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常，以酶消化法獲得的成纖維細(xì)胞懸液在接種后5～10min即可見細(xì)胞以偽足初期附著，與底物形成一些接觸點(diǎn)；然后細(xì)胞逐漸呈放射狀伸展，胞體的中心部分亦隨之變扁平；最快者大約在接種后30min，細(xì)胞貼附底物即較為完全，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2～3天［2，3］到1周左右，在接種的皮膚組織塊周圍長(zhǎng)出細(xì)胞。待細(xì)胞融合成片，鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時(shí)即可進(jìn)行傳代。一般都采用胰蛋白酶(trypsin)，將成纖維細(xì)胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細(xì)胞分裂時(shí)變?yōu)榍蛐?；分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平?xì)胞。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，其生命期限與物種等因素有關(guān)。例如：人胚成纖維細(xì)胞約可培養(yǎng)50代；恒河猴皮膚成纖維細(xì)胞能傳代超過40代；雞胚成纖維細(xì)胞則只有少數(shù)能培養(yǎng)30代；而小鼠成纖維細(xì)胞多數(shù)只能生長(zhǎng)8代左右。另外，從老年個(gè)體取得的成纖維細(xì)胞的壽命要比取自年輕者短。由于在細(xì)胞傳代和進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的生物學(xué)特性會(huì)逐漸發(fā)生一些不同于體內(nèi)的改變，故通常只將前10代視這正常細(xì)胞，可在此時(shí)將生長(zhǎng)旺盛的成纖維細(xì)胞凍存起來，以備將來復(fù)蘇使用，這在將培養(yǎng)的細(xì)胞由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)向人體實(shí)驗(yàn)過渡的過程中必須給予足夠的重視。

6　成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)中的成骨作用

徐榮輝［2］等通過體外培養(yǎng)家兔皮膚成纖維細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，經(jīng)傳代培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞至第8天時(shí)，其細(xì)胞集落中有不透光的骨小結(jié)節(jié)形成；到37天時(shí)，小結(jié)節(jié)擴(kuò)大、延伸，形成骨小梁樣結(jié)構(gòu)。經(jīng)活體四環(huán)素標(biāo)記顯示，所形成的結(jié)構(gòu)為新生骨組織。他們還注意到，成纖維細(xì)胞在參與骨形成的過程中并無分化為成軟骨細(xì)胞或成骨細(xì)胞的明確跡象，故推測(cè)并未發(fā)生此種分化，而成纖維細(xì)胞之所以能發(fā)揮成骨作用，很可能是受某些誘導(dǎo)因素作用的緣故。他們認(rèn)為用以培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的中厚皮片中混雜存在的上皮細(xì)胞(或/與內(nèi)皮細(xì)胞)，可能是誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞形成骨組織的一種誘導(dǎo)因素。而Friedenstein［6，19］較早的實(shí)驗(yàn)則認(rèn)為，屬于誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞之一種的成纖維細(xì)胞，在上皮細(xì)胞(如膀胱上皮)或脫鈣骨基質(zhì)等誘導(dǎo)因子作用下，可以分化為成骨細(xì)胞進(jìn)而形成骨組織。鄧廉夫［20］等分離培養(yǎng)取自關(guān)節(jié)內(nèi)的損傷性和晚期骨關(guān)節(jié)炎性的滑膜細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其中的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞增殖迅速，呈束狀或交叉鋪展并可形成多層結(jié)構(gòu)，細(xì)胞表面有其分泌物形成的不透光結(jié)節(jié)，經(jīng)四環(huán)素標(biāo)記、ARS(Alizarinred s)和甲苯胺藍(lán)(Toluidine blue)染色，顯示結(jié)節(jié)為新生骨組織。在缺乏常規(guī)的誘導(dǎo)因子——上皮細(xì)胞的作用下，取自滑膜的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞也能發(fā)生成骨作用，他們推測(cè)是在關(guān)節(jié)損傷后或骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生與發(fā)展過程中，改變的關(guān)節(jié)微環(huán)境(如TNF樣活性物質(zhì)增多等)可能會(huì)觸發(fā)滑膜的成纖維細(xì)胞與骨形成相關(guān)的多基因表達(dá)，使其向成骨型細(xì)胞分化，這樣，滑膜成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞在體內(nèi)時(shí)即已具備成骨性能，故在培養(yǎng)條件下可發(fā)揮成骨作用。Dodda［21］等的研究則指出，變性滑膜細(xì)胞多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的表達(dá)、關(guān)節(jié)液內(nèi)多種細(xì)胞因子的出現(xiàn)，可能是滑膜成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞成骨表型表達(dá)的重要始動(dòng)因素。這些相關(guān)的研究表明成纖維細(xì)胞成骨表型的表達(dá)可能存在著較復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制，而其誘導(dǎo)因素也是多樣的。

為獲取大量具有成骨表型的成纖維細(xì)胞并了解其轉(zhuǎn)化機(jī)制，鄧廉夫［22］等將分離純化的人皮膚成纖維細(xì)胞置于加有不同濃度EGF、IL-

6、TNF-α、BMp-2的培養(yǎng)液中進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用生物化學(xué)、組織化學(xué)和電鏡觀察等方法檢測(cè)成纖維細(xì)胞成骨性標(biāo)記物的形成狀況，發(fā)現(xiàn)TNF-α和BMp-2聯(lián)合應(yīng)用，可使成纖維細(xì)胞分泌堿性磷酸酶、骨鈣素及膠原纖維的量增加；成纖維細(xì)胞可由梭形向圓形或多突形轉(zhuǎn)化，蛋白分泌旺盛；細(xì)胞外基質(zhì)中，豐富的膠原纖維定向或雜亂排列，其間散在較多的鈣顆粒；細(xì)胞可重疊交織形成多層結(jié)構(gòu)，其表面有分泌顆粒和鈣鹽結(jié)晶堆積，并不斷融合擴(kuò)大成骨結(jié)節(jié)，表明TNF-α和BMp-2可以誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞成骨。但這種完全由成纖維細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)而形成的骨組織，在缺乏典型的成骨細(xì)胞參與下是否能在體外或植入體內(nèi)后經(jīng)改建成為成熟的板層骨及其改建過程如何?仍有待進(jìn)一步研究。

7　展望

盡管成纖維細(xì)胞受哪些因素誘導(dǎo)可以產(chǎn)生成骨作用、這些因素的誘導(dǎo)方式及其機(jī)制如何以及成纖維細(xì)胞在骨形成中是否分化為成骨細(xì)胞等等問題尚未完全解決，但成纖維細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)可以形成骨組織這一現(xiàn)象已逐漸為廣大科學(xué)工作者所接受。由于成纖維細(xì)胞直接參與了骨折愈合過程中纖維性骨痂的形成，其自身又具備被誘導(dǎo)成骨的能力，可以設(shè)想，利用成纖維細(xì)胞分布廣泛、取材方便、對(duì)機(jī)體損傷較小、體外培養(yǎng)容易成活、增生繁殖較快等較其它具有成骨作用的細(xì)胞(如骨膜成骨細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞等)優(yōu)越之處，在體外大量培養(yǎng)擴(kuò)增成纖維細(xì)胞，并施以有效的誘導(dǎo)因素(如上皮細(xì)胞、TNG-α和BMp等)使其具備成骨效能，然后與合適的生物材料載體復(fù)合，同時(shí)使該復(fù)合體在體外或體內(nèi)保持良好的成骨能力并進(jìn)行一定程度的成骨，則有望獲得具有一定的生物力學(xué)支撐強(qiáng)度而成骨作用又保持活躍的“活骨”復(fù)合體，用以替代自體骨或異體骨回植體內(nèi)治療難以自身修復(fù)的較大的骨缺損，這無疑將為骨缺損的修復(fù)治療開辟一條新的有輝煌前景的道路。在組織工程技術(shù)和生物材料科學(xué)已有較大發(fā)展的今天，這一設(shè)想是極有可能實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)然，從目前所處的實(shí)驗(yàn)階段過渡到臨床應(yīng)用尚有很大一段距離，需要解決的問題還很多，而且隨著研究的展開和深入，問題可能還會(huì)越來越多，但這確實(shí)是一項(xiàng)很有臨床應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益的重大課題，值得廣大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)工作者和臨床科研人員為之而努力。

第三篇：細(xì)胞克隆培養(yǎng)論文

細(xì)胞克隆培養(yǎng)論文

摘要：隨著生命科學(xué)時(shí)代的帶來，基因研究已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)展，克隆技術(shù)特別是人的克隆技術(shù)作為基因研究的重要組成部分，引起了社會(huì)各界的廣泛關(guān)注?？寺“瑒?dòng)物、植物等方面，動(dòng)物克隆在畜牧業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)藥生產(chǎn)、疾病治療、生物學(xué)基礎(chǔ)理論研究、以及動(dòng)物轉(zhuǎn)基因工程等諸多領(lǐng)域蘊(yùn)藏著巨大的應(yīng)用潛力。通過科學(xué)研究者的努力，哺乳動(dòng)物的克隆技術(shù)在農(nóng)業(yè)和生物制藥等方面取得了進(jìn)步，展示了克隆技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值和發(fā)展前景。

關(guān)鍵詞：動(dòng)物克隆技術(shù)

1、克隆技術(shù)含義: “克隆”，即無性細(xì)胞繁殖系，又稱為一個(gè)細(xì)胞株或細(xì)胞系，細(xì)胞株與細(xì)胞系沒有本質(zhì)的區(qū)別。也可以理解為復(fù)制，拷貝，就是從原型中產(chǎn)生出同樣的復(fù)制品，它的外表及遺傳基因與原型完全相同，但大多行為思想不同。無性繁殖的手段有很多種，包括孤雌生殖，胚胎切割和細(xì)胞核移植等等。而產(chǎn)生克隆動(dòng)物的方法則稱為動(dòng)物克隆技術(shù)。

在《中國(guó)大百科全書·生物學(xué)者》中，對(duì)“克隆”的解釋是：克隆又稱無性繁殖細(xì)胞系和無性繁殖系，是一個(gè)細(xì)胞或個(gè)體以無性繁殖重復(fù)分裂或繁殖所產(chǎn)生的一群細(xì)胞或一群個(gè)體，在不發(fā)生突變的情況下，具有完全相同的遺傳結(jié)構(gòu)?？寺〖夹g(shù)同整個(gè)生物界的進(jìn)程一樣，是由低級(jí)到高級(jí)，有簡(jiǎn)單的復(fù)雜不斷發(fā)展和進(jìn)步的。它由單個(gè)細(xì)胞獲得2個(gè)以上細(xì)胞、生物體，發(fā)展到生物體內(nèi)的生物大分子的自我復(fù)制，在DNA復(fù)制酶的作用下，復(fù)制生成倆個(gè)一模一樣的DNA分子。

2、動(dòng)物克隆的進(jìn)程：

1938年，國(guó)外就有人提出提出成年動(dòng)物的細(xì)胞核入卵子法克隆哺乳動(dòng)物的設(shè)想。

1978年，我國(guó)著名科學(xué)家童第周成功地進(jìn)行看了克隆黑斑蛙的實(shí)驗(yàn)，他將黑斑蛙的紅細(xì)胞核移入到事先去除了核的黑斑蛙卵中，這種換核卵發(fā)育成了黑斑蛙的蝌蚪。

1996年，用成年哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆出的哺乳動(dòng)物個(gè)體克隆羊多莉出世，開創(chuàng)了體細(xì)胞繁殖哺乳動(dòng)物的成功先例。

2003年，克隆馬出世，是世界上首例哺乳動(dòng)物生下自己的克隆體。

2003年8月，中國(guó)科學(xué)家在世界上首次采用克隆技術(shù)培育出含人免DNA混合物胚胎。

2003年9月，沃斯宣布他已克隆出了含人，牛DNA的混合胚胎。

2008年1月7日，2頭具有綠色熒光遺傳特征的小豬在哈爾濱誕生。

3、動(dòng)物克隆技術(shù)的應(yīng)用：

動(dòng)物克隆近幾年取得的一些突破性進(jìn)展，為動(dòng)物發(fā)育過程中基因表達(dá)的調(diào)控及發(fā)育生物學(xué)，遺產(chǎn)學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展必將產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。雖然目前這種方法尚不成熟，但它已顯示出誘人的應(yīng)用前景。

動(dòng)物克隆技術(shù)將首先應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。利用體細(xì)胞供體經(jīng)核移植生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，可望降低生產(chǎn)成本。到目前為止，產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法仍主要是1985年Hammer等建立的原核顯微注射法。但是，這種方法只能使大約5%的動(dòng)物攜帶外源基因外源基因整合動(dòng)物基因組是個(gè)隨機(jī)的過程，這導(dǎo)致外源基因在許多轉(zhuǎn)基因動(dòng)物系中的表達(dá)量不夠高，而且因整合進(jìn)生殖細(xì)胞的幾率低難以遺傳給下一代。Schnieke等發(fā)現(xiàn)，利用體細(xì)胞克隆技術(shù)生產(chǎn)含人凝血因子IX的轉(zhuǎn)基因羊比原核顯微注射法要有效得多。其中，兩者最顯著的差異是體細(xì)胞克隆的中的受體母羊全都攜帶外源基因，而原核顯微注射法會(huì)產(chǎn)生許多不帶外源基因的羊羔。這是由于，原核微注射法中所用胚胎在體外培養(yǎng)的時(shí)間較短，在此期間被檢測(cè)為陽性的轉(zhuǎn)基因可能會(huì)在以后的發(fā)育過程中丟失。用作核移植供體的細(xì)胞在體外培養(yǎng)的時(shí)間則較長(zhǎng)，有較多的檢測(cè)機(jī)會(huì)。另外，顯微注射法制備的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的性別只有等到動(dòng)物出世后才能得知，而核移植可以通過鑒別核供體的核型而預(yù)先得知轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的性別，可選擇性的制備雌性的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，有利于在母乳中表達(dá)外源基因。

克隆技術(shù)除了可以生產(chǎn)各種醫(yī)用人體蛋白外，對(duì)人類的細(xì)胞和組織治療也大有好處。利用克隆技術(shù)，可以用患者本人細(xì)胞培養(yǎng)出新組織，用來治療糖尿病、帕金森氏病、神經(jīng)損傷等多種疾病。用這種方法培養(yǎng)出的組織具有與患者正常組織完全相同的基因構(gòu)成，因此不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。但是這些都涉及到克隆人這個(gè)敏感話題，目前克隆人在許多國(guó)家是法律禁止的。隨著人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的完善。目前已有兩家美國(guó)公司開始研究利用克隆技術(shù)培育人胚胎，希望大批量生產(chǎn)治療疾病的干細(xì)胞。事實(shí)上，幾年前人們就曾把人胎兒神經(jīng)組織用來治療帕金森氏癥?？紤]到倫理上的原因，人們也可以用克隆動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞作異源移植，以解決人類移植器官供求矛盾。

動(dòng)物克隆技術(shù)還有助于加速動(dòng)物育種的進(jìn)程。利用優(yōu)良動(dòng)物品種的體細(xì)胞作核供體克隆動(dòng)物，可以避免自然條件下選種所受到的動(dòng)物生育周期和生育效率的限制，從而大大縮短了育種年限，提高育種效率。動(dòng)物克隆技術(shù)用于拯救瀕危動(dòng)物也受到廣泛的關(guān)注。中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所陳大元研究員提出用動(dòng)物克隆技術(shù)拯救大熊貓的計(jì)劃，在國(guó)內(nèi)外均引起一定的反響。

4、動(dòng)物克隆技術(shù)的不足及未來發(fā)展方向

動(dòng)物克隆技術(shù)然取得了一定的進(jìn)展，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域也得到了初步的應(yīng)用。但是，該技術(shù)目前還很不完善。存活率低是當(dāng)今核移植技術(shù)的最大缺陷。它突出表現(xiàn)為：孕期流產(chǎn)率高，圍產(chǎn)期死亡率高，新生兒體重較重及產(chǎn)生后對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性較差。以成體細(xì)胞核作核供體問題更為嚴(yán)重。最近，Shiels等報(bào)道克隆羊的端粒較同年羊短。Renard等報(bào)道，體細(xì)胞核移植可能影響克隆動(dòng)物免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育。他們用胚胎細(xì)胞克隆牛的耳細(xì)胞通過核移植克隆出一頭牛。牛犢看起來很健康，但出生一個(gè)半月后，它體內(nèi)的淋巴細(xì)胞和紅血球急劇減少，不久就死于貧血。尸體解剖發(fā)現(xiàn)，該牛犢脾臟、胸腺和淋巴結(jié)等淋巴組織都沒有得到正常發(fā)育。

導(dǎo)致動(dòng)物克隆存活率低和異常發(fā)育的原因很多，缺乏基礎(chǔ)理論支持是其中之一。動(dòng)物克隆技術(shù)的不斷完善，還需要分子遺傳學(xué)、細(xì)胞學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等相關(guān)基礎(chǔ)學(xué)科的進(jìn)一步研究和發(fā)展。迄今為止，人們雖然在動(dòng)物克隆過程中已經(jīng)積累不少數(shù)據(jù)，但一些很基本的問題任亟需解決。

動(dòng)物克隆技術(shù)條件的優(yōu)化還沒有解決。如核供體和卵細(xì)胞的選材、核質(zhì)比的選擇、重組胚胎的激活方式、是否需要做連續(xù)核移植等。

綜上所述，動(dòng)物克隆研究已在理論基礎(chǔ)、技術(shù)優(yōu)化及實(shí)際應(yīng)用等方面取得很大的進(jìn)步。但該技術(shù)目前還很不完善，相關(guān)理論研究還很薄弱，人們要提高動(dòng)物克隆的成功率還需不懈的努力。另外克隆動(dòng)物與正常胚胎的發(fā)育有何異同，也值得深入研究。這些問題的解決將有助于人們對(duì)動(dòng)物胚胎發(fā)育過程中分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)。

5、結(jié)束語

要緊跟世界科技發(fā)展的潮流，充分利用克隆技術(shù)為人類帶來巨大的利益，又要嚴(yán)格控制可能造成混亂的克隆人出現(xiàn)。

參考文獻(xiàn)：

《生命倫理學(xué)》、《生命的化學(xué)》 學(xué)院：呼和浩特職業(yè)學(xué)院

專業(yè)：生物技術(shù)及應(yīng)用 年級(jí)：12級(jí)

姓名：郝媛 學(xué)號(hào)：12305060023

第四篇：過敏性哮喘血清免疫學(xué)論文

1資料與方法

1.1一般資料

2012年10月—2013年10月，選取我院兒科門診收治的穩(wěn)定期輕中度過敏性哮喘病兒62例。過敏性哮喘診斷參照兒童支氣管哮喘診斷與防治指南（2008年修訂）[1]的診斷與分度標(biāo)準(zhǔn)。入選條件：

①年齡5~14歲；

②有典型的常年性支氣管哮喘病史，伴或不伴變應(yīng)性鼻炎；

③經(jīng)體外過敏原檢測(cè)，均對(duì)戶塵螨和粉塵螨過敏，其特異性IgE為Ⅲ~Ⅵ級(jí)；

④穩(wěn)定期輕中度病兒；

⑤4周內(nèi)未使用過全身性糖皮質(zhì)激素，1周內(nèi)未吸入糖皮質(zhì)激素。

排除標(biāo)準(zhǔn)：

①患免疫性疾病或心血管病病兒；

②重度哮喘病兒；

③曾進(jìn)行過脫敏治療的病兒；

④患其他變應(yīng)性疾病病兒。按治療方法的不同分為治療組32例和對(duì)照組30例。治療組男15例，女17例；年齡5~12歲，平均年齡（7.6±1.8）歲。對(duì)照組男16例，女14例；年齡5~14歲，平均年齡（7.9±2.4）歲。

1.2治療方法

對(duì)照組按常規(guī)進(jìn)行對(duì)癥治療。治療組在常規(guī)治療的同時(shí)給予粉塵螨滴劑（暢迪，浙江我武生物科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20060012）舌下含服（將粉塵螨滴劑滴于舌下，含1~3min后吞咽）。該滴劑按濃度不同分為1~4號(hào)（粉塵螨變應(yīng)原活性蛋白濃度分別為1、10、100、333mg/L），1、2、3號(hào)分別服用1周，從1號(hào)開始，共3周，每周第1~7天用量分別為1、2、3、4、6、8、10滴；從第4周開始服用4號(hào)，每天3滴，直到滿1年。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法

分別于治療前和治療1年后采集病兒靜脈血，提取血清。應(yīng)用UniCAP100儀器，采用熒光酶聯(lián)免疫法定量檢測(cè)治療前后血清總IgE（TIgE）、戶塵螨SIgG4、粉塵螨SIgG4及嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白（ECP）的水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料結(jié)果以x±s表示，治療前后比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0。05為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1組內(nèi)比較

治療組病兒治療前后血清TIgE濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后戶塵螨SIgG4和粉塵螨SIgG4水平升高，ECP水平下降，治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝2.178~12.707，P＜0.05）。對(duì)照組病兒治療前后血清上述指標(biāo)濃度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2組間比較治療前兩組各指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后治療組戶塵螨SIgG4、粉塵螨SIgG4水平與對(duì)照組相比差異有顯著意義（t＝6.060、5.582，P＜0.05），而ECP和TIgE水平與對(duì)照組相比差異無顯著性（P＞0.05）。見表1。

3討論

SIT是針對(duì)IgE介導(dǎo)的變應(yīng)性疾病的對(duì)因治療方法，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生長(zhǎng)期的臨床免疫耐受[2]。SIT對(duì)IgE介導(dǎo)的變應(yīng)性疾病有效，尤其適用于藥物治療無效的人群[3]。SIT的具體機(jī)制尚不清楚。近年來研究表明，SIT后產(chǎn)生IgG尤其是IgG4抗體增多[2Ｇ4]。IgG4抗體能與IgE競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原，阻斷sIgE與相應(yīng)受體的結(jié)合，從而阻斷IgE介導(dǎo)的變應(yīng)原提呈及后續(xù)的效應(yīng)Th2細(xì)胞活化[5Ｇ6]。IgG4抗體在阻斷嗜堿性粒細(xì)胞組胺釋放中也有功能性作用[7]。IgG4不能形成免疫復(fù)合物，不能固定補(bǔ)體，是一種非炎癥性免疫球蛋白。總之，IgG4能夠有效抑制變應(yīng)原和IgE相互作用，抑制其他類型免疫球蛋白復(fù)合物的形成，在免疫反應(yīng)中有抗炎作用。本文結(jié)果顯示，接受SLIT后，過敏性哮喘病兒血清sIgG4水平較治療前顯著增高，與肖曉雄等[8]的研究結(jié)果一致。這表明粉塵螨滴劑SLIT對(duì)病兒體內(nèi)的免疫狀態(tài)有明顯的調(diào)節(jié)作用，IgG4能競(jìng)爭(zhēng)性阻斷sIgE介導(dǎo)的過敏性哮喘發(fā)生發(fā)展的免疫病理進(jìn)程，從而有利于改善哮喘病兒的癥狀和體征。粉塵螨滴劑SLIT所產(chǎn)生的IgG4抗體能同時(shí)識(shí)別戶塵螨抗原和粉塵螨抗原，從而使機(jī)體產(chǎn)生對(duì)這兩種致敏原的免疫保護(hù)作用，對(duì)屋塵螨和粉塵螨的過敏性疾病同時(shí)有效。

但由于本研究觀察時(shí)間較短，對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的治療以及治療結(jié)束后血清IgG4水平增高的效果如何，及其與臨床癥狀體征的相關(guān)性，能否作為評(píng)價(jià)SLIT有效性的客觀指標(biāo)，還有待進(jìn)一步研究。ECP是嗜酸性粒細(xì)胞釋放的毒性蛋白之一，在過敏性哮喘的病理生理過程中起重要作用。SIT可減少嗜酸性粒細(xì)胞聚集和活化，文獻(xiàn)報(bào)道，過敏性鼻炎病兒經(jīng)SLIT后血清及靶器官ECP水平顯著低于治療前[9]。但也有研究結(jié)果顯示，SIT治療前后血清ECP水平無差異[10]。本文結(jié)果顯示，過敏性哮喘病兒經(jīng)1年粉塵螨滴劑SLIT后ECP水平下降，但與對(duì)照組相比差異無顯著意義。目前尚未證實(shí)ECP水平與SIT療效有明確的相關(guān)性，其在SIT療效評(píng)估中的作用有限。KIM等[11]對(duì)過敏性鼻炎的研究顯示，TIgE在SIT前后差異無顯著性。本研究中哮喘病兒粉塵螨滴劑SLIT前后TIgE差異也無顯著性。提示血清TIgE水平不能作為評(píng)估SIT療效的指標(biāo)。本文對(duì)照組治療前后各指標(biāo)差異無顯著性，表明常規(guī)治療不能影響過敏性疾病的基礎(chǔ)機(jī)制，不能阻斷過敏性疾病的發(fā)生與發(fā)展。SLIT對(duì)兒童過敏性哮喘安全、有效，采用SLIT聯(lián)合藥物對(duì)癥治療的效果優(yōu)于單純使用對(duì)癥藥物治療[12]。

綜上所述，過敏性哮喘病兒經(jīng)粉塵螨滴劑SLIT1年后，血清屋塵螨和粉塵螨特異性IgG4濃度明顯增高，血清TIgE水平和ECP水平無明顯變化。停止SLIT后塵螨過敏性哮喘病兒的免疫學(xué)改變情況還需要更長(zhǎng)時(shí)間的監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)。

第五篇：免疫學(xué)名詞解釋

瀟湘行內(nèi)部資料

by 凌霄焰鷹

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免疫學(xué)名詞解釋

1、免疫（Immunity）：免疫是指機(jī)體識(shí)別和清除一切抗原異物以保持自身穩(wěn)定的生理反應(yīng)，如果免疫系統(tǒng)失調(diào)，免疫反應(yīng)過強(qiáng)、過弱或?qū)ψ陨沓煞职l(fā)生免疫應(yīng)答都將對(duì)機(jī)體造成損害。

2、免疫防御（immunologic defense）：免疫防御指防止外界病原體入侵和清除已入侵病原體及有害的生物性分子，此功能就是機(jī)體的抗感染免疫。但異常情況下，免疫反應(yīng)過強(qiáng)可引起超敏反應(yīng)，而免疫功能過低則表現(xiàn)為易受感染或免疫缺陷病等。

3、免疫自穩(wěn)：（immune homeostasis）：免疫自穩(wěn)指機(jī)體對(duì)自身成分的耐受，對(duì)自身衰老和損傷細(xì)胞的清除，阻止外來異物入侵并通過免疫調(diào)節(jié)達(dá)到維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能。

4、免疫監(jiān)視（immunologic surveillance）：免疫監(jiān)視是指監(jiān)督機(jī)體內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)的突變細(xì)胞及早期腫瘤，并予以清除。若此功能失調(diào)，體內(nèi)突變細(xì)胞失控，可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，若病毒感染不能及時(shí)被清除，而出現(xiàn)病毒持續(xù)性感染狀態(tài)。

5、淋巴細(xì)胞歸巢(lymphocyte homing)：成熟淋巴細(xì)胞離開中樞淋巴器官后，經(jīng)血液循環(huán)趨向性遷移并定居在外周淋巴器官或組織的特定區(qū)域，稱為淋巴細(xì)胞歸巢。

6、淋巴細(xì)胞再循環(huán)(lymphocyte recirculation)：定居在外周淋巴器官的淋巴細(xì)胞，可由輸出淋巴管經(jīng)淋巴干、胸導(dǎo)管或右淋巴導(dǎo)管進(jìn)入血液循環(huán)，淋巴細(xì)胞隨血液循環(huán)到達(dá)外周免疫器官后，可穿越HEV，并重新分布于全身淋巴器官和組織。淋巴細(xì)胞在血液、淋巴液、淋巴器官或組織間反復(fù)循環(huán)的過程稱為淋巴細(xì)胞再循環(huán)。

7、抗原（Antigen，Ag）：是一類能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答,并能 瀟湘行內(nèi)部資料

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與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。

免疫原性(Immunogenicity):是指抗原能刺激特定的免疫細(xì)胞（克?。?使之活化、增殖、分化,產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)(抗體和致敏淋巴細(xì)胞)的特性.免疫反應(yīng)性(Immunoreactivity)；也稱抗原性(Antigenicity):是指抗原與相應(yīng)的免疫效應(yīng)物質(zhì)(抗體或/和致敏淋巴細(xì)胞）,在體內(nèi)體外發(fā)生特異性結(jié)合的特性.8、半抗原（hapten）： 僅有免疫反應(yīng)性而無免疫原性的物質(zhì)。如:大多數(shù)多糖、類脂、某些藥物。半抗原+載體(蛋白質(zhì))→完全抗原。

9、抗原決定簇（antigenic determinant ；epitope)：指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)功能基團(tuán)。它是TCR/BCR及抗體特異結(jié)合的基本單位，又稱表位。其性質(zhì)、數(shù)目、空間構(gòu)型決定了抗原的特異性。

10、構(gòu)象決定簇（conformational determinants）：序列上不連續(xù)的多肽或多糖，由空間構(gòu)象形成的決定簇，能被B細(xì)胞或抗體識(shí)別，可直接與B細(xì)胞表面的抗原受體結(jié)合，無需APC加工遞呈和MHC類分子。

11、順序決定簇(sequential determinant)；線性決定簇（linear determinants）：一段序列上相連續(xù)的氨基酸片段所形成的決定簇，位于分子表面或分子內(nèi)部，主要被T細(xì)胞識(shí)別；有些也能被B細(xì)胞識(shí)別。需經(jīng)歷APC加工遞呈，并與MHC類分子結(jié)合后，才能被抗原受體識(shí)別。

12、胸腺依賴性抗原（thymus dependent Ag，TD-Ag）：1）絕大多數(shù)是蛋白質(zhì)抗原，由B細(xì)胞表位（半抗原）及T細(xì)胞表位（載體）構(gòu)成；２）產(chǎn)生的抗體主要是IgG；３）可引起細(xì)胞免疫、體液免疫；４）可產(chǎn)生免疫記憶，需T細(xì)胞輔助才能激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab抗原物質(zhì)。

13、胸腺非依賴性抗原（thymus independent Ag，TI-Ag）：1）絕大多數(shù)為多糖類物質(zhì)；2）含有多個(gè)重復(fù)排列的B細(xì)胞表位；3）抗體主要是IgM；4）不引起細(xì) 瀟湘行內(nèi)部資料

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胞免疫應(yīng)答；5）不產(chǎn)生免疫記憶，無需T細(xì)胞輔助便能產(chǎn)生抗體。

14、腫瘤特異性抗原（Tumor specific antigens，TSA）：只存在于腫瘤細(xì)胞而不存在于正常細(xì)胞的新抗原，即腫瘤細(xì)胞所特有的抗原。

15、腫瘤相關(guān)性抗原（Tumor associated antigens，TAA）：非腫瘤細(xì)胞所特有，正常細(xì)胞上也存在；只是正常細(xì)胞中微量表達(dá)，細(xì)胞癌變時(shí)，其含量明顯增高。

16、異嗜性抗原（hetreophilic Ag）：一類與種屬特異性無關(guān)，存在于不同種系生物間的共同抗原。意義（1）引起某些病理反應(yīng)（2）協(xié)助診斷某些疾病

17、共同抗原（common antigen）： 存在于兩種不同的抗原之間的相同或相似的抗原決定簇，稱為共同抗原。

18、交叉反應(yīng)（cross reaction）：由于存在共同抗原造成抗體對(duì)具有相同或相似決定簇的不同抗原發(fā)生反應(yīng)，此稱為交叉反應(yīng)。

19、超抗原（Superantigens）：某些抗原物質(zhì)只需極低濃度（1-10ng/ml）即可激活大量T或B細(xì)胞克?。?-20%），產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫應(yīng)答，這類抗原稱為超抗原?？煞譃椋海约?xì)胞超抗原，Ｂ細(xì)胞超抗原和TCRγδT 超抗原。

20、佐劑（Adjuvants）：指與抗原一起或預(yù)先注射到機(jī)體，能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)。

21、抗體（Antibody）：指B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后活化、增殖、分化成為漿細(xì)胞，產(chǎn)生的能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。存在形式： B細(xì)胞膜上的膜型抗原受體；分泌進(jìn)入體液, 介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答的分泌型抗體。

22、免疫球蛋白（Immunoglobulin）：指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白，包括：具有免疫活性的正?？贵w；沒有抗體活性的異常免疫球蛋白?？贵w一定是免疫球蛋白；免疫球蛋白不一定都是抗體。

23、決定簇互補(bǔ)區(qū)（complementarity—determining region，CDR）：VL、VH的超 瀟湘行內(nèi)部資料

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變區(qū)受鏈內(nèi)二硫鍵作用而折疊成特定的空間構(gòu)型，供抗原決定簇互補(bǔ)結(jié)合，故將超變區(qū)又稱為互補(bǔ)決定區(qū)。

24、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)（antibody dependent cell mediated cytoxicity，ADCC）：當(dāng)IgG與靶細(xì)胞特異性結(jié)合后，其Fc段可與NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞的FcγR結(jié)合，促使細(xì)胞毒顆粒的釋放，發(fā)揮ADCC作用，導(dǎo)致靶細(xì)胞的溶解。

25、多克隆抗體（Polyclonal Ab）：第一代抗體指由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)抗原物質(zhì)中多種抗原決定簇的多種抗體混合物。如:免疫血清（含多種特異性、抗體）。實(shí)際意義（1）預(yù)防、治療感染性疾病（2）臨床診斷。

26、單克隆抗體（Monoclonal Ab）：第二代抗體由單一克隆B細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生的，只識(shí)別抗原分子某一特定抗原決定簇的特異性抗體。其特點(diǎn)：具有高度均一性。

27、基因工程抗體（genetic engineering Ab）：第三代抗體由基因重組技術(shù)制備的抗體,稱為基因工程抗體。

28、同種型（isotype）：指同一物種內(nèi)所有個(gè)體共有的Ig的抗原特異性結(jié)構(gòu)。同種型抗原決定簇存在于Ig的CH、CL區(qū)。

29、同種異型（Allotype）：指同一物種內(nèi)不同個(gè)體間的Ig在抗原性上的差異。同種異型抗原決定簇存在于Ig的CH1、CL區(qū)的特定部位。

30、獨(dú)特型（idiotype）：同一個(gè)體內(nèi)不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的Ig V區(qū)的抗原特異性各不相同，其超變區(qū)各自具備的獨(dú)特抗原決定簇結(jié)構(gòu)，稱為抗體的獨(dú)特型。獨(dú)特型決定簇存在于Ig的超變區(qū)。

31、補(bǔ)體系統(tǒng)（complement system)：存在于正常人和動(dòng)物體液或細(xì)胞表面的一組糖蛋白，正常以酶原的形式存在，被抗體或微生物等激活物激活后產(chǎn)生具有生物活性的片段，不僅在固有免疫中發(fā)揮作用，而且參入適應(yīng)性免疫。瀟湘行內(nèi)部資料

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32、攻膜復(fù)合體（membrane attack complex, MAC)：在補(bǔ)體活化過程中形成的、具有溶細(xì)胞效應(yīng)的復(fù)合物---由C5b、C6、C7、C8、C9組成的貫穿靶細(xì)胞膜，內(nèi)徑約11nm的跨膜通道，即C5b6789。

33、調(diào)理作用（opsonization)：通過抗體或補(bǔ)體的介導(dǎo)而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能的現(xiàn)象。包括抗體的調(diào)理作用和補(bǔ)體的調(diào)理作用。具有調(diào)理作用的成分：抗體的Fc段、C3b、C4b。

34、細(xì)胞因子（Cytokines，CKs）：由多種細(xì)胞產(chǎn)生的一組高活性、多功能、低分子量多肽，主要介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)。

35、白細(xì)胞介素（Interleukins, IL）：由單核-巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞所分泌的介導(dǎo)并調(diào)節(jié)固有免疫、適應(yīng)性免疫，在炎癥反應(yīng)中起作用的重要細(xì)胞因子。

36、干擾素（interferons，IFNs）：是一類由病毒感染細(xì)胞或活化T細(xì)胞分泌的，具有抑制病毒復(fù)制和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答作用的糖蛋白?？煞譃棰裥透蓴_素：IFN-?、IFN-?；Ⅱ型干擾素：IFN-?。

37、集落刺激因子（Colony stimulating factor，CSF）：CSF是指能夠刺激多能造血干細(xì)胞和不同分化發(fā)育階段的血細(xì)胞增殖分化，在半固體培養(yǎng)基上形成相應(yīng)細(xì)胞集落的細(xì)胞因子。

38、細(xì)胞黏附分子（AMs)（cell adhesion molecules, CAMs）：分布于細(xì)胞表面介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互接觸、識(shí)別、激活和移行的糖蛋白，是免疫應(yīng)答、炎癥、凝血、腫瘤轉(zhuǎn)移以及創(chuàng)傷愈合等多種生理和病理過程的分子基礎(chǔ)。

39、CD分子（CD molecule；分化群：cluster of differentiation）：是指血細(xì)胞在正常分化成熟為不同譜系、不同階段以及活化及失活過程中，出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面分子。瀟湘行內(nèi)部資料

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40、主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)：指脊椎動(dòng)物某一染色體上一組大的、緊密連鎖的基因群，所編碼的分子在免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的作用，并參入器官移植的排斥反應(yīng)。

41、人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）：人類的主要組織相容性抗原，分布在人體所有有核細(xì)胞表面，首先發(fā)現(xiàn)于白細(xì)胞表面，且白細(xì)胞是進(jìn)行此類抗原研究的最適宜材料來源。

42、HLA復(fù)合體（HLA complex）：人類的主要組織相容性復(fù)合體（MHC），位于第6號(hào)染色體的一組緊密連鎖的基因群，編碼人類的主要組織相容性抗原（HLA）。

43、單元（體）型遺傳（Haplotype)：指HLA以緊密連鎖在一條染色體上的基因作為一個(gè)單位遺傳給下一代。

44、連鎖不平衡（Linkage disequilibrium）：指在某一群體中，不同座位上某兩個(gè)基因出現(xiàn)在同一條單元型上的頻率與期望值之間有顯著差異的現(xiàn)象。

45、MHC高度多態(tài)性（MHC Polymorphism）：一群體概念，指一隨機(jī)婚配的人群中，在一特定基因座位上以穩(wěn)定頻率出現(xiàn)的兩種或兩種以上的基因產(chǎn)物，包括復(fù)等位基因和共顯性表達(dá)。

46、MHC限制性（MHC restriction）：具有同一MHC表型的免疫細(xì)胞才能有效的相互作用，這一現(xiàn)象稱為MHC限制性。例如在抗原提呈過程中，Th細(xì)胞的TCR識(shí)別APC提呈的抗原肽-MHC Ⅱ類分子復(fù)合物，CD4分子識(shí)別MHC Ⅱ類分子。

47、病原體相關(guān)分子識(shí)別模式（Pathogen associated molecular pattern，PAMP）：某些病原體或衰老細(xì)胞表面能被固有免疫系統(tǒng)識(shí)別的高度保守和特異的分子結(jié)構(gòu)。PAMP數(shù)量有限，但在病原微生物分布廣泛。如，甘露糖，LPS、磷脂等。

48、模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRR）：固有免疫細(xì)胞表面能夠識(shí)別某些病原體或衰老細(xì)胞表面高度保守特異分子結(jié)構(gòu)的受體。如，甘露糖 瀟湘行內(nèi)部資料

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受體、Toll樣受體、清道夫受體等。

49、Toll樣受體（Toll Like receptor）：TRL是一種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的膜分子，因其胞外區(qū)與果蠅的Toll蛋白同源，故名為Toll樣受體。它表達(dá)于不同免疫細(xì)胞表面，不同的TLR識(shí)別的配體不同，包括細(xì)菌細(xì)胞壁成分，非甲基化CpG、dsRNA等病原體特有成分，TLRs在機(jī)體對(duì)LPS的應(yīng)答中起重要作用。

50、免疫受體酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motif，ITAM）：．某些分子胞漿區(qū)有含酪氨酸易于被PTK作用而發(fā)生磷酸化的特定基序，稱為ITAM，可引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，傳遞細(xì)胞活化信號(hào)。如與TCR或BCR非共價(jià)鍵相連的CD3分子或Igα／β。

51、免疫受體酪氨酸抑制基序（immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif，ITIM）：某些分子胞漿區(qū)可活化SHP和SHIP磷酸酶，將酪氨酸激酶催化的磷酸基去除的特定序列稱ITIM，產(chǎn)生抑制性信號(hào)，抑制T細(xì)胞增殖分化（負(fù)調(diào)節(jié)）。如與B7結(jié)合的CTLA-4。

52、抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)：能夠攝取、加工、處理抗原并將Ag以抗原肽-MHC復(fù)合物形式遞呈給T淋巴細(xì)胞的一類免疫細(xì)胞。專職APC包括巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、成熟B細(xì)胞等。

53、內(nèi)源性抗原（endogenous antigens）：指細(xì)胞產(chǎn)生的自身固有蛋白質(zhì)、胞內(nèi)寄生病毒或其它病原體產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化后產(chǎn)生的突變蛋白，即腫瘤抗原等由細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)抗原，在有核細(xì)胞內(nèi)加工，由MHCⅠ分子遞呈。

54、外源性抗原(exogenous antigens)：外源性抗原指細(xì)胞攝入的各種病原體和疫苗、在吞噬體和內(nèi)體中生長(zhǎng)的病原體、攝入的自身蛋白等由細(xì)胞外進(jìn)入細(xì)胞的蛋白質(zhì)抗原經(jīng)抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)加工，由MHCⅡ分子遞呈。瀟湘行內(nèi)部資料

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55、CLIP（Class Ⅱ-associated invariant chain peptide）：Ⅱ類分子相關(guān)的不變鏈多肽，Ⅰi鏈中81位至104位氨基酸殘基的肽段結(jié)構(gòu)，能與所有MHCⅡ類分子抗原結(jié)合槽相結(jié)合。

56、T細(xì)胞抗原受體（T cell receptor，TCR）：是T細(xì)胞表面特征性標(biāo)記，與一組CD3分子以非共價(jià)鍵結(jié)合而成的復(fù)合物，TCR由兩條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體，主要識(shí)別特異性抗原肽-MHC分子復(fù)合物。

57、B細(xì)胞抗原受體（B cell receptor，BCR）：是B細(xì)胞表面特征性標(biāo)記，其組成為膜表面免疫球蛋白（mIg），與CD79а/CD79β二聚體組成復(fù)合物，是B細(xì)胞的抗原識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的結(jié)構(gòu)。

58、免疫活性細(xì)胞(immunocompetent cell，ICC)：T、B細(xì)胞均有特異性抗原受體，接受抗原刺激后能發(fā)生活化、增殖和分化，產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，故稱免疫活性細(xì)胞。

59、同種型排斥（isotypic exclusion）：一個(gè)B細(xì)胞中，κ鏈基因和λ鏈基因只有其中的一種能夠表達(dá)，使得一個(gè)B細(xì)胞只能表達(dá)κ或λ鏈中的一種。60、等位排斥（allelic exclusion）：Ig 基因重排時(shí)，兩條同源染色體上的兩個(gè)等位基因中只有一個(gè)能表達(dá)，使得一個(gè)B細(xì)胞只能表達(dá)一種輕鏈和一種重鏈。61、體細(xì)胞高頻突變（Somatic hypermutation）：在初次免疫應(yīng)答后期和再次免疫應(yīng)答分裂中的生發(fā)中心母細(xì)胞的每次細(xì)胞分裂中，IgV區(qū)基因易發(fā)生隨機(jī)點(diǎn)突變，導(dǎo)致B細(xì)胞產(chǎn)生突變的Ig分子，這種突變稱為體細(xì)胞高頻突變。CDR的核苷酸序列最容易發(fā)生突變。Ig基因的體細(xì)胞高頻突變與Ig基因重排導(dǎo)致了體液免疫應(yīng)答的多樣性。

62、抗體清和力成熟（Affinity maturation）：生發(fā)中心的B細(xì)胞經(jīng)體細(xì)胞高頻突變后，其中表達(dá)高親和力BCR的B細(xì)胞才能有效地結(jié)合抗原，并在抗原特異性 瀟湘行內(nèi)部資料

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Th細(xì)胞輔助下增殖，產(chǎn)生高親和力的抗體，此為抗體親和力成熟。

63、Ig同種型轉(zhuǎn)換（Class switch或isotype switching）：B淋巴細(xì)胞完成IgV基因重排后的子代細(xì)胞，在抗原的誘導(dǎo)和Th細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)下，其IgV基因表達(dá)不變，而C基因的表達(dá)從一種類型轉(zhuǎn)變到另—種類型，進(jìn)而導(dǎo)致Ig類型的改變，稱為Ig同種型轉(zhuǎn)換，也叫做Ig類別轉(zhuǎn)換，如從IgM到IgG的轉(zhuǎn)變。64、陰性選擇（negative selection）： 胸腺表面的TCR分子能與基質(zhì)細(xì)胞表面的抗原多肽-自身MHC分子復(fù)合物呈高親和力結(jié)合的細(xì)胞發(fā)生凋亡，而TCR與基質(zhì)細(xì)胞表面自身肽-MHC分子低親和力結(jié)合的胸腺細(xì)胞則存活成熟，從而清除自身反應(yīng)性T細(xì)胞，獲得自身耐受稱為陰性選擇。

65、陽性選擇（positive selection）：在胸腺皮質(zhì)層，有些T細(xì)胞的TCR分子能與基質(zhì)細(xì)胞的自身MHC分子結(jié)合，這些細(xì)胞就得到刺激、存活、增殖并繼續(xù)分化，那些TCR不能與自身肽MHC分子結(jié)合的胸腺細(xì)胞就發(fā)生凋亡，從而獲得自身MHC限制性，稱為陽性選擇。

66、免疫突觸（immunological synapses）： APC和T細(xì)胞相互作用過程中，在細(xì)胞與細(xì)胞接觸部位形成的多種跨膜分子聚合的一個(gè)特殊結(jié)構(gòu)，稱T細(xì)胞突觸，又稱為免疫突觸。此結(jié)構(gòu)有助于增強(qiáng)TCR與抗原肽-MHC分子復(fù)合物相互作用的親和力、促進(jìn)T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的相互作用等。TCR和肽-MHC位于中心，CD2，CD58和B7，CD28位于內(nèi)層，LFA-1，ICAM-1位于外圍，CD45位于最外層。

67、體液免疫（Humoral immunity）：由B細(xì)胞介導(dǎo)，其終末分化的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體為主要效應(yīng)分子的免疫應(yīng)答。

68、細(xì)胞免疫（Cellular immunity）：包括由TH1經(jīng)活化巨噬細(xì)胞而誘導(dǎo)炎癥性遲發(fā)型超敏反應(yīng)，及CD8+CTL通過表達(dá)或分泌細(xì)胞毒物質(zhì)殺傷攜帶特異性抗原的靶細(xì)胞。特異性細(xì)胞免疫在清除胞內(nèi)病原體，抗腫瘤和排斥異體移植物中具有重 瀟湘行內(nèi)部資料

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要作用。

69、免疫耐受（Immunological tolerance）：機(jī)體免疫系統(tǒng)接觸某種抗原后產(chǎn)生的特異性免疫無應(yīng)答狀態(tài)，機(jī)體再次接觸同一抗原時(shí)不發(fā)生可查見的反應(yīng)，但對(duì)其他抗原仍可產(chǎn)生正常免疫應(yīng)答。是正常的機(jī)體免疫功能表現(xiàn)，具有特異性和記憶性。

70、耐受原（Tolerogens）：誘導(dǎo)免疫耐受的抗原稱為耐受原。

71、中樞耐受（central tolerance）：在胚胎期未成熟T、B淋巴細(xì)胞在中樞淋巴器官遇到自身抗原形成的耐受稱為中樞耐受。

72、外周耐受（Peripheral tolerance）：成熟淋巴細(xì)胞在外周淋巴器官遇到自身抗原或非己抗原形成的耐受稱為外周耐受。

73、克隆排除（Clonal deletion）：在胚胎發(fā)育中，機(jī)體存在針對(duì)不同抗原的T、B淋巴細(xì)胞克隆，凡是能與相應(yīng)抗原結(jié)合的克隆通過陰性選擇或BCR交聯(lián)產(chǎn)生抑制信號(hào)，從而被排除或被抑制，因而出生后機(jī)體對(duì)這些抗原產(chǎn)生自身耐受。74、克隆無能（Clonal anergy）：由于缺乏協(xié)同刺激信號(hào)等原因（如缺乏B7），自身反應(yīng)性T、B淋巴細(xì)胞不能完全活化，再有足夠的抗原信號(hào)刺激時(shí)，無能的T、B淋巴細(xì)胞仍不能活化。

75、免疫忽視（Immunological ignorance）：外周某些自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞與相應(yīng)組織特異性抗原并存，既不導(dǎo)致自身免疫應(yīng)答，也不導(dǎo)致克隆無能和克隆清除的現(xiàn)象。

76、超敏反應(yīng)(Hypersensitivity)：是指機(jī)體受到某些抗原刺激時(shí), 出現(xiàn)以機(jī)體生理功能紊亂或組織損傷為主的異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答(特異性免疫應(yīng)答)。77、變態(tài)反應(yīng)(allergy)：Ⅰ型超敏反應(yīng)又稱變態(tài)反應(yīng)，是由特異性IgE抗體介導(dǎo)的超敏反應(yīng)。其特征是①發(fā)生快，消退也快；②通常使機(jī)體出現(xiàn)功能性紊亂，不 瀟湘行內(nèi)部資料

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發(fā)生嚴(yán)重的組織細(xì)胞損傷；③具有明顯的個(gè)體差異和遺傳背景。

78、變應(yīng)原(allergen)：是指能夠選擇性誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性IgE抗體的免疫應(yīng)答，引起速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的抗原性物質(zhì)。

79、直接識(shí)別(Direct recognition)：不需要抗原的加工過程，受者T細(xì)胞直接識(shí)別供者APC細(xì)胞表面完整的同種異型MHC分子。

80、間接識(shí)別(Indirect recognition)：受者T識(shí)別由受者APC加工、自身MHC提呈的供者M(jìn)HC分子（抗原）。

81、移植物抗宿主病(Graft versus host disease，GVHD)：由供者移植物中的特異免疫活性細(xì)胞識(shí)別宿主的組織抗原而發(fā)生排斥反應(yīng)，損傷宿主，主要見于骨髓移植。

82、抗原調(diào)變（antigenic modulation）：宿主對(duì)腫瘤 抗原的體液免疫應(yīng)答可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面抗原的減少或丟失，使腫瘤細(xì)胞不易被宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別，從而逃避免疫攻擊。

83、活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡（activation induced cell death，AICD）：指活化T細(xì)胞高表達(dá)的Fas與Fasl結(jié)合，可導(dǎo)致自身和旁鄰活化T細(xì)胞凋亡，從而對(duì)免疫應(yīng)答進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)并維持自身耐受。

immunity，immunologic defense，immune homeostasis，immunologic surveillance，lymphocyte homing，lymphocyte recirculation，antigen（Ag），Immunogenicity，Immunoreactivity，hapten，antigenic determinant（epitope），conformational determinants，sequential determinant（linear determinants），thymus dependent Ag（TD-Ag），thymus independent Ag（TI-Ag），tumor specific antigens（TSA），tumor associated antigens（TAA），hetreophilic Ag，common antigen，cross reaction，superantigens，adjuvants，antibody，immunoglobulin，瀟湘行內(nèi)部資料

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