第一篇：6 丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒注冊技術審查指導原則(征求意見稿)

丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒

注冊技術審查指導原則（征求意見稿）

本指導原則的主要目的是規(guī)范丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒的技術審評工作，幫助審評人員理解和掌握該類產(chǎn)品的原理、組成、性能、預期用途等內容，明確技術審評過程中應該關注和重點把握的內容，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價。

本指導原則是對丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒的一般要求，審評人員應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內容是否適用并對注冊申報資料的內容進行補充要求。

本指導原則是對技術審查人員的指導性文件，但不包括注冊 審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)、國家標準、行業(yè)標準的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將進行適時的調整。

一、適用范圍

丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒用于體外定量測定人血清或血漿中的丙氨酸氨基轉移酶的活性。本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產(chǎn)品。

丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法目前主要有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等。丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法目前主要為丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下，L-丙氨酸的氨基轉移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應生成乳酸和NAD+。NADH在特定波長

— 1 —（如：340nm處）有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在此波長處測定NADH吸光度下降的速率，即可計算出ALT活性。從方法學考慮，本指導原則主要指采用丙氨酸氨基轉移酶催化L-丙酮酸和α-酮戊二酸之間的氨基轉移反應，通過在特定波長處吸光度的變化，計算丙氨酸氨基轉移酶活性，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學實驗室進行丙氨酸氨基轉移酶定量測定所使用的臨床化學體外診斷試劑。本文不適用于干式丙氨酸氨基轉移酶測定試劑。丙氨酸氨基轉移酶同工酶試劑不屬于本指導原則涵蓋的范疇。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》、《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑屬于酶類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料要求》（2014年第44號）的相關要求。相關描述應至少包含如下內容： 1.產(chǎn)品預期用途及相關的臨床適應癥背景情況：

（1）丙氨酸氨基轉移酶的生物學特征、結構與功能，在體內正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

（2）與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，如臨床相關疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程，質控品、校準品的制備方法及溯源（定值）情況。— 2 — 3.有關生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質制備而成，人源性材料須對有關傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關的證明文件。其他動物源及微生物來源的材料，應當提供相應的說明文件，為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，應提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。

4.有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內外批準上市的情況。相關產(chǎn)品所采用的技術方法及臨床應用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

包括主要反應成分、質控品、校準品等的選擇、制備、質量標準確定的方法及研究資料；校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質控品應提供詳細的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：配制、分裝等描述及確定依據(jù)，應包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關鍵控制點；反應體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應條件（溫度、時間等）等研究資料。不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應當提交產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體的研究項目、實驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結論等詳細資料。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗時間、地點、檢驗人員、— 3 — 適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準品和質控品、臨床樣本來源等。

性能評估應至少包括準確度、精密度、線性區(qū)間、最低檢測限、分析靈敏度、分析特異性、其它影響檢測的因素等。1.準確度

對測量準確度的評價包括：與國家標準物質（和/或國際標準物質）的偏差分析、方法學比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

1.1與國家（國際）參考物質的比對研究

使用國家參考物質或國際參考物質作為樣本進行測試，重復測定3次，計算平均值與標示值的相對偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清對試劑盒進行測試，每個濃度樣品重復測定3次，分別取測試結果均值，計算相對偏差。1.2回收試驗

在人血清樣品中加入一定體積標準或校準品溶液或純品，每個濃度重復測定3次，計算回收率?；厥赵囼炞⒁馐马棧?/p>

1.2.1加入的標準溶液體積與血清體積比應不大于1:20或其體積比不會產(chǎn)生基質的變化；

1.2.2加入標準溶液或校準品溶液后樣品總濃度應在試劑（盒）測定線性范圍內；

1.2.3標準溶液或校準品應有溯源性； 1.3比對試驗

采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或— 4 — 在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。2精密度 2.1批內精密度

測量精密度的評估應至少包括高、低兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近和異常高值樣本。批內精密度應不大于5.0%。2.2批間精密度

用一份樣本分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測定3次，測定均值。按相對極差（R）＝（Xmax-Xmin）/Xt×100% 公式計算。相對極差應不大于10.0%。3.線性區(qū)間

建立試劑線性區(qū)間所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。

以接近線性范圍上限的高濃度（活性）樣品和接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣品，混合成至少5個稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程，并計算線性相關系數(shù)（r）。線性范圍上限至少達500U/L, 線性相關系數(shù)r應不小于0.9900。

— 5 — 4.最低檢測限

最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準品（或樣品稀釋液）進行至少20次重復檢測，平均值加2倍SD（≥95%置信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。5.分析靈敏度 5.1 速率法

用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化應符合企業(yè)給定區(qū)間。5.2 終點法

稀釋一定濃度樣品（n單位被測物），測定吸光度，計算吸光度值與空白吸光度值有差別的樣品濃度應符合企業(yè)給定區(qū)間。6.分析特異性

對樣本中常見的干擾物質進行檢測，如膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等。方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，樣本量選擇應體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學意義，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質極限濃度。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

7.校準品溯源及質控品賦值

校準品、質控品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源SOP文件等。應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算記錄，提供質控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

— 6 — 8.其他需注意問題

應當對多批產(chǎn)品進行性能評估，對結果進行統(tǒng)計分析。不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料

應提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。應明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應低于120例。若引用針對中國人群參考值范圍研究的相關文獻，應明確說明出處，并進行驗證。參考值研究結論應在說明書【參考區(qū)間】的相應描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等，申請人應至少提供3個生產(chǎn)批次的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結論等，研究應涵蓋產(chǎn)品的主要性能指標，申請人應至少能提供穩(wěn)定性末期的除裝量和批間差外的評價資料。試劑的穩(wěn)定性研究應注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究（例如：校準品穩(wěn)定性應選取最易受影響的最小裝量，干粉劑型應提供復溶穩(wěn)定性研究資料），實時穩(wěn)定性研究的時間間隔應不大于3個月。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗

— 7 — 證，可以在合理溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗研究

臨床評價資料應符合《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關的規(guī)定。下面僅對臨床實驗中的基本問題進行闡述。1.研究方法

選擇境內已批準上市的性能不低于擬申報產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。2.臨床研究單位的選擇

應選擇至少兩家臨床試驗機構，體外診斷試劑的臨床試驗機構應獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質認可。臨床試驗機構實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和對照試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構的方案設置應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意— 8 — 改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的參比試劑應保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。4.研究對象選擇

臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應不低于試驗總量的30%。樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。應明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應考慮其影響。如果待評試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究，同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結果間的一致性（采用待評試劑檢測），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進行試驗，異常值參照上述規(guī)定。

涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類

— 9 — 型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于30%。5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。6.臨床試驗總結報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。6.1臨床試驗總體設計及方案描述

6.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標準、不同人群的預期選擇例數(shù)及標準。6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。6.1.4統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準。6.2具體的臨床試驗情況

6.2.1待評價試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信— 10 — 息。

6.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2.3質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估。6.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。6.3統(tǒng)計學分析

6.3.1數(shù)據(jù)預處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

6.3.2定量值相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。6.4討論和結論

對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

（八）產(chǎn)品風險分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié),從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，形成風險管理報告。應當符合相關行業(yè)標準的要求。

風險分析應包含但不僅限于以下方面的內容：預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、— 11 — 原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組份、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產(chǎn)品說明書設置參數(shù)或使用。與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結果,依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求，內容主要包含產(chǎn)品性能指標和檢驗方法。

進口產(chǎn)品的產(chǎn)品技術要求應當包括英文版和中文版，英文版應當由申請人簽章，中文版由申請人或其代理人簽章。

下面就產(chǎn)品技術要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關標準和主要性能指標等相關內容作簡要敘述。產(chǎn)品適用的相關標準：

（1）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（2）YY/T 0638—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質物中酶催化濃度賦值的計量學溯源性（3）GB/T 26124-2011 臨床化學體外診斷試劑（盒）

（4）YY/T 1197-2013丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒（IFCC法）（5）WS/T 404.1-2012臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶和γ-谷氨?；D移酶 — 12 — 2.主要性能指標： 2.1外觀：

符合制造商規(guī)定的正常外觀要求。2.2裝量：

液體試劑的裝量應不少于標示量。2.3試劑空白 2.3.1空白吸光度：

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度應不小于1.0（340nm,1cm)。2.3.2空白吸光度變化率（終點法不適用）：

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度變化率△A/min(37℃，340nm,1cm)應不大于0.004。

2.4分析靈敏度

2.4.1速率法：用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化應符合制造商給定區(qū)間。

2.4.2終點法：稀釋一定濃度（n單位）的樣品（檢測限樣品），測定吸光度，計算吸光度值能夠與空白吸光度區(qū)分的樣品濃度應符合制造商給定區(qū)間。2.5線性區(qū)間

線性區(qū)間上限至少達到500 U/L。2.5.1相關系數(shù)（r）

線性相關系數(shù)r應不小于0.9900（線性范圍下限應不低于產(chǎn)品的最低檢測線，不高于參考區(qū)間下限）。2.5.2線性偏差

— 13 — 線性偏差應不超過申請人給定值。線性偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應注意分段點的確定。2.6精密度 2.6.1批內精密度

測量精密度的評估應至少包括高、低兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近和異常高值樣本。批內精密度應不大于5.0%。2.6.2 批間精密度

用一份質控品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測定3次，測定均值。相對極差應不大于10.0%。2.7準確度

2.7.1相對偏差 提供參考物質或用參考方法定值的血清測定，實測值與標示值偏差應在±15.0%范圍內。

2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應不會產(chǎn)生基質的變化，加入標準溶液后樣品總濃度必須在試劑（盒）測定線性范圍內）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行，回收率應在90%～110%之間。

2.7.3比對試驗 用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結果的相關系數(shù)r≥0.990以及每個濃度點的偏差，偏差應不超過申請人給定值。偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應注意分段點的確定。

建議按上述優(yōu)先順序，采用上述方法之一測試試劑盒的準確度。2.8穩(wěn)定性

檢測申請人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、精密度、準確度要求。凍干品應同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，— 14 — 產(chǎn)品性能應符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、測量精密度、準確度要求。

2.9校準品和質控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質控品還應檢測批內瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

（十）注冊檢驗

具有相應醫(yī)療器械檢驗資質的醫(yī)療器械檢驗機構出具的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術要求預評價意見。丙氨酸氨基轉移酶項目目前有國家參考物質和國際參考物質，應當使用國家參考品或國際參考物質進行注冊檢驗，并符合相關要求。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、檢驗原理、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒說明書的重點內容進行詳細說明。1.【產(chǎn)品名稱】

（1）通用名稱，試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒（丙氨酸底物法）。通用名稱應當按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》規(guī)定的命名原則進行命名，可適當參考相關“分類目錄”和/或國家標準及行業(yè)標準。（2）英文名稱應當正確、完整、直譯，不宜只寫縮寫。2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，— 15 — 除國際通用計量單位外，其余內容均應采用中文進行表述。包裝規(guī)格應明確單、雙或其他多試劑類型。

3.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容：

3.1說明試劑盒用于體外定量檢測血清/血漿中丙氨酸氨基轉移酶的活性；同時應明確與目的檢測物相關的臨床適應癥背景情況。3.2丙氨酸氨基轉移酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋。

如：丙氨酸氨基轉移酶主要用于輔助評價肝功能。ALT是反映肝損傷的靈敏指標，各種急性肝損傷（如急性傳染性肝炎及藥物或酒精中毒）時，血清ALT可在臨床癥狀（如黃疸）出現(xiàn)之前急劇升高等，并一般與病情輕重和恢復情況相平行；慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝淤血等血清ALT也可升高。另外，膽囊炎、膽石癥、胰腺炎、心肌梗死及服用某些藥物（如氯丙嗪、奎寧、水楊酸制劑等）時可見血清ALT升高。作為支持性資料，申請人應提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關臨床適應癥背景的資料。

4.【檢驗原理】應結合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢測原理的描述應結合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關系進行描述：

如：在ALT的催化下，丙氨酸的氨基轉移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應生成乳酸和NAD-。NADH在波長340nm有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在340nm處測定NADH吸光度下降的速率，即可計算出ALT活性。

ALT??? 谷氨酸+丙氨酸 丙氨酸+α-酮戊二酸 ?LDH?? 乳酸+NAD 丙氨酸+NADH+H??+

+5.【主要組成成份】應明確以下內容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；— 16 — 如含有校準品或質控品，除明確組成成份及生物學來源外，還應明確其定值及溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發(fā)布單位及編號，質控品應明確靶值范圍。例如：

本試劑盒由試劑

1、試劑2和校準品（選購）組成：

試劑1： 三羥甲基氨基甲烷緩沖液 100mmol/L，L-丙氨酸 500mmol/L，乳酸脫氫酶 1700U/L 試劑2：α-酮戊二酸15mmol/L，NADH 0.18mmol/L 校準品：含有丙氨酸氨基轉移酶的溶液，校準品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標示，量值可溯源至國家參考物質或國際參考物質。6.【儲存條件及有效期】應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后的待機穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應明確復溶穩(wěn)定期。注：保存條件不應有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。7.【適用儀器】應明確可適用的具體品牌、型號的生化分析儀器。8.【樣本要求】重點明確以下內容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運輸條件,對已知干擾物的抗干擾性（如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度）等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求（如：草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對丙氨酸氨基轉移酶活性造成干擾，應明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，可凍融次數(shù)。

9.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟，包括： 9.1試劑配制方法、注意事項；

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項；

— 17 — 9.3校準程序：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。9.4質量控制程序：質控品的使用方法、質量控制方法。

9.5試驗結果的計算或讀取：應明確檢驗結果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。

10.【參考區(qū)間】應注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并說明參考值確定方法。

11.【檢驗結果的解釋】說明可能對檢驗結果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】說明該檢驗方法的局限性。當測定值超出線性上限時，應說明使用廠家提供的專用稀釋液或明確稀釋方法，并給出稀釋最大倍數(shù)說明。

13.【產(chǎn)品性能指標】至少應詳述以下性能指標，性能指標應與技術要求有關技術指標的要求一致。13.1試劑空白； 13.2分析靈敏度； 13.3準確度；

13.4精密度（批內精密度和批間精密度）； 13.5線性區(qū)間（線性相關系數(shù)和線性偏差）。14.【注意事項】應至少包括以下內容：

14.1本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學的試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋。

14.4 有關人源組分的警告，如：試劑盒內的質控品、校準品或其他— 18 — 人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.5對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。14.6其他有關丙氨酸氨基轉移酶測定的注意事項。

15.【標識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。16.【參考文獻】注明引用參考文獻，其書寫應清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。17.【基本信息】 17.1境內體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息： 注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號，生產(chǎn)日期 17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：

注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號，生產(chǎn)日期 17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式，生產(chǎn)日期 18 【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號】應當寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號 【說明書核準日期及修改日期】應注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、參考文獻：

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第

— 19 — 5號）

2.《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）

3.《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）

4.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）

5.《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）

6.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）（原中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司）

7.GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》

8.GB/T 26124-2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》

9.YY/T 0638—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質物中酶催化濃度賦值的計量學溯源性

10.YY/T 1197-2013《丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒（IFCC法）》 11.YY/T 1227-2014《臨床化學體外診斷試劑（盒）命名》 12.WS/T 404.1-2012臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶和γ-谷氨?；D移酶

— 20 — 丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒 注冊技術審查指導原則編寫說明

一、編寫原則

編制本指導原則旨在指導和規(guī)范注冊申請人對丙氨酸氨基轉移酶(Alanine aminotransferase，簡稱ALT)測定試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫工作，同時幫助審查人員理解和掌握該類產(chǎn)品原理、組成、性能、預期用途等內容，把握技術審評工作基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價。

由于丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒產(chǎn)品仍在不斷發(fā)展，審查人員仍需從風險分析的角度認真確定申報產(chǎn)品的預期用途與風險管理是否相當；由于我國醫(yī)療器械法規(guī)框架仍在構建中，審查人員仍需密切關注相關法規(guī)、標準及最新進展，關注審評產(chǎn)品實際組成、原理、預期用途等方面的個性特征，以保證產(chǎn)品審評符合現(xiàn)行法規(guī)安全、有效的要求。

二、指導原則部分內容說明

（一）指導原則主要根據(jù)體外診斷試劑產(chǎn)品注冊申報資料的要求，借鑒國家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關產(chǎn)品注冊技術審查指導原則的體例進行編寫，以便于注冊技術審評人員理解。

（二）產(chǎn)品的主要技術指標制定主要參考相關國家標準、行業(yè)標準YY/T 1197—2013《丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒（IFCC法）》、GB/T 26124—2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》。

（三）關于檢測樣本類型說明：本指導原則起草過程中檢索了全國范圍內已上市同類產(chǎn)品的注冊信息，同時查閱了有關臨床專著，未能查詢到其他樣本類型中丙氨酸氨基轉移酶與臨床適應癥的直接對應關系。為避免對注冊申報企業(yè)和審評人員造成誤導，本指導原則的適用范圍僅限于血清、血漿兩種樣本類型。

（四）關于產(chǎn)品名稱說明：本指導原則關于產(chǎn)品方法學名稱的舉例參考YY/T 1227-2014《臨床化學體外診斷試劑（盒）命名》，同時參考了已上市的丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒產(chǎn)品（如：將連續(xù)監(jiān)測法/速率法規(guī)范為丙氨酸底物法，將賴氏法規(guī)范為2,4-二硝基苯肼法）。

（五）關于注冊檢驗使用有證參考物質說明：本指導原則編寫過程中充分參考了產(chǎn)品專業(yè)廠家代表意見，丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒配套校準品可溯源至國家標準物質（GBW(E)090593）或國際標準物質（ERM?-AD454/IFCC），故建議注冊檢驗應當使用國家參考品或國際參考物質進行注冊檢驗，并符合相關要求。

（六）關于綜述資料、產(chǎn)品說明書中有關與丙氨酸氨基轉移酶檢測相關的臨床適應癥背景的說明：臨床意義的描述參考自《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）》

（七）關于參考區(qū)間的驗證資料中對健康個體至少120例的說明：此例數(shù)的規(guī)定，結合已發(fā)布產(chǎn)品技術審查指導原則，并參考《WS/T 402-2012臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》以及《C28-A2 如何確定臨床檢驗的參考區(qū)間：批準指南（2000）》。

（八）產(chǎn)品的原材料選擇、生產(chǎn)工藝、使用方法等因素，需按照企業(yè)的研發(fā)資料設計，企業(yè)的注冊資料中應包括此方面的研究資料，由于各企業(yè)對產(chǎn)品的研發(fā)情況不一定相同，故本指導原則中不作強制性要求，注冊審評人員應按照企業(yè)具體的研究資料進行審查。

三、編寫人員

本指導原則編寫人員由浙江省醫(yī)療器械技術審評人員、行政審批人員、檢驗和臨床專家、產(chǎn)品專業(yè)廠家代表等共同組成，起草過程中廣泛征求了國家總局醫(yī)療器械技術審評中心、相關省局、有關體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)和臨床使用單位的意見，以充分利用各方面的信息和資源，綜— 22 — 合考慮指導原則中各個方面的內容，盡量保證指導原則可操作性和指導性。

第二篇：甘油三酯測定試劑盒注冊技術審查指導原則

附件5

甘油三酯測定試劑盒注冊技術審查指導原

則

本指導原則旨在指導注冊申請人對甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對甘油三酯測定試劑盒的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

甘油三酯測定試劑盒是指利用酶法對人血清、血漿或其他體液中的甘油三酯含量進行體外定量測定的試劑。本指導原則適用于進行產(chǎn)品注冊和相關許可事項變更的產(chǎn)品。

脂肪酶分解血清中甘油三酯為甘油和脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶將甘油磷酸化成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫。過氧化氫與過氧化物酶、4-氨基比林進行顯色反應，生成有色苯醌亞胺，在500nm（480nm—550nm）處吸光度值與甘油三酯含量成正比。本文不適用于干化學類測定試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），甘油三酯檢測試劑屬于酯類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

甘油三酯（Triglyceride，TG）是3分子長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人體內含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。人血清中甘油三酯水平呈明顯正偏態(tài)分布。病理性升高：原發(fā)性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發(fā)性見于無β-脂蛋白血癥和低β-脂蛋白血癥。繼發(fā)性見于繼發(fā)性脂質代謝異常，如消化道疾?。ǜ渭不?、吸收不良綜合征）、內分泌疾患（甲狀腺功能亢進癥、慢性腎上腺皮質不全）及肝素等藥物的應用。綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

包括主要反應成分、質控品、校準品等的選擇、制備、質量標準確定的方法及研究資料；校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質控品應提供詳細的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應體系的研究資料（如需提供）1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并說明主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。包括：工作液的配制和分裝，顯色系統(tǒng)的描述和確定依據(jù)等。

2.主要反應體系的研究資料，包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應溫度、時間、緩沖體系比較等條件的確認資料及試驗數(shù)據(jù)，確定樣本和試劑盒組分加樣量的確認資料及試驗數(shù)據(jù)，校準方法、質控方法等。

（四）分析性能評估資料

申請人應當提交產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體的研究項目、實驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結論等詳細資料。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準品和質控品、臨床樣本來源等。

性能評估應至少包括準確度、精密度、線性范圍、最低檢測限、分析靈敏度、分析特異性、其他影響檢測的因素等。

1.準確度

對測量準確度的評價方法依次包括：相對偏差、回收試驗、比對試驗等方法，甘油三酯項目目前有國家標準品和國際參考物質，建議申請人優(yōu)先采用相對偏差的方法，申請人也可根據(jù)實際情況選擇其他合理方法進行研究。

1.1相對偏差

使用國家標準品或國際參考物質作為樣本進行測試，重復測定3次，計算平均值與標示值的相對偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清對試劑盒進行測試，每個濃度樣品重復測定3次，分別取測試結果均值，計算相對偏差。

1.2回收試驗

在人血清樣品中加入一定體積標準或校準品溶液或純品，每個濃度重復測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

1.2.1加入的標準液體積與血清體積比應不大于1:20或其體積比不會產(chǎn)生基質的變化；

1.2.2加入標準或校準品溶液后樣品總濃度應在試劑盒測定線性范圍內；

1.2.3標準品或校準品應有溯源性； 1.3比對試驗

采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。

2.精密度

測量精密度的評估應至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的臨界值附近樣本和異常高值樣本。

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應做相關研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應注意基質效應影響，必要時應提供基質效應研究有關的資料。

4.最低檢測限

最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準品（或樣品稀釋液）進行至少20次重復檢測，平均值加2倍SD（≥95%臵信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。

5.分析靈敏度

試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（ΔA）應符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。6.分析特異性

應明確已知干擾因素對測定結果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸對檢測結果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質濃度。待評價的甘油三酯樣本濃度至少應為高、中、低三個水平，選取線性范圍內有臨床代表性意義的濃度。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

7.校準品溯源及質控品賦值（如產(chǎn)品中包含）校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質控品應提供詳細的定值資料。應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算記錄，提供質控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

8.其他需注意問題

不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料

應明確研究采用的樣本來源、詳細的試驗資料、統(tǒng)計方法等，參考區(qū)間可參考文獻資料，但應當對至少120例的健康個體進行驗證。研究結論應與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性等，申請人應至少提供3個生產(chǎn)批次的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結論等。試劑的穩(wěn)定性研究應注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究（例如：校準品穩(wěn)定性應選取最易受影響的最小裝量）。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

臨床試驗資料應符合《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關的規(guī)定。下面僅對臨床實驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法

選擇境內已批準上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗機構的選擇

應選擇至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質認可的臨床試驗機構，臨床試驗機構實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構的方案設臵應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的參比試劑應保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。

4.研究對象選擇

臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于80例。樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

應明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應考慮其影響。

如果聲稱待評試劑同時適用于血清或血漿樣本類型，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進行比對研究，異常值樣本不少于40例進行臨床研究，其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進行試驗，異常值樣本數(shù)不少于80例。

涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于40例。

5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.臨床試驗總結報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。

6.1臨床試驗總體設計及方案描述

6.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標準、不同人群的預期選擇例數(shù)及標準。6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。6.1.4統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準。6.2具體的臨床試驗情況

6.2.1待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

6.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2.3質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估。

6.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

6.3統(tǒng)計學分析

6.3.1數(shù)據(jù)預處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

6.3.2定量值相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。

6.4討論和結論

對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

（八）產(chǎn)品風險分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié),從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，形成風險管理報告。應當符合相關行業(yè)標準的要求。

風險分析應包含但不僅限于以下方面的內容：預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容。可能的使用錯誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組份、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產(chǎn)品說明書設臵參數(shù)或使用。與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求，內容主要包含產(chǎn)品性能指標和檢驗方法。

進口產(chǎn)品的產(chǎn)品技術要求應當包括英文版和中文版，英文版應當由申請人簽章，中文版由申請人或其代理人簽章。

下面就產(chǎn)品技術要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關標準和主要性能指標等相關內容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品適用的相關標準：（1）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（2）GB/T 26124—2011臨床化學體外診斷試劑（盒）（3）YY/T 1199—2013甘油三酯測定試劑盒（酶法）2.主要性能指標： 2.1外觀

應與申請人聲稱試劑外觀一致。這里可以包括試劑盒包裝外觀、試劑內包裝外觀、試劑的外觀。

2.2裝量

試劑裝量應不少于標示裝量。2.3試劑空白吸光度

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度A(申請人指定的波長，37℃，1.0 cm)≤0.2。

2.4分析靈敏度

試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（ΔA）應符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。

2.5線性范圍

線性范圍應至少達到1.13 mmol/L—9.04 mmol/L。2.5.1相關系數(shù)（r）

線性相關系數(shù)r應不小于0.990（線性范圍下限應不低于產(chǎn)品的最低檢測線，不高于參考區(qū)間下限）。

2.5.2線性偏差

線性偏差應不超過申請人給定值。線性偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應注意分段點的確定。

2.6精密度 2.6.1重復性

用同一樣本或質控品重復測試至少10次，所得結果的精密度（變異系數(shù)CV）應≤5.0%。

測定樣本應至少包含兩個濃度點，一般應按醫(yī)學決定水平取甘油三酯臨界值和異常高值濃度點。

2.6.2批間差

試劑（盒）批間相對極差應≤10.0%。樣本選取同前。2.7準確度

2.7.1相對偏差 提供參考物質或用參考方法定值的血清測定，實測值與標示值偏差應在±15.0%范圍內。

2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應不會產(chǎn)生基質的變化，加入標準溶液后樣品總濃度必須在試劑（盒）測定線性范圍內）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行，回收率應在90%—110%之間。

2.7.3比對試驗 用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結果的相關系數(shù)r≥0.990以及每個濃度點的偏差，偏差應不超過申請人給定值。偏差可分段描述或連續(xù)描述，若分段描述，應注意分段點的確定。

建議按上述優(yōu)先順序，采用上述方法之一測試試劑盒的準確度。

2.8穩(wěn)定性

檢測申請人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、精密度、準確度要求。凍干品應同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，復溶后放臵到有效期末，產(chǎn)品性能應符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性、測量精密度、準確度要求。

2.9校準品和質控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）應至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質控品還應檢測批內瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

具有相應醫(yī)療器械檢驗資質和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構出具的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術要求預評價意見。甘油三酯項目目前有國家標準品，應當使用國家標準品進行注冊檢驗，并符合相關要求。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、檢驗方法、對檢驗結果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結合《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對甘油三酯測定試劑盒說明書的重點內容進行詳細說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》中的命名原則，產(chǎn)品名稱通常由被測物質的名稱、用途、方法或原理三部分組成，方法或原理部分應能體現(xiàn)具體反應原理，建議參考分類目錄或行業(yè)標準。2.【包裝規(guī)格】

包裝規(guī)格應明確單、雙或其他多試劑類型；如不同包裝規(guī)格有與之特定對應的機型，則應同時明確適用機型。如有貨號，可增加貨號信息。

如:試劑1:1×40 mL,試劑2: 1×20 mL 日立7170生化分析儀

3.【預期用途】應至少包括以下幾部分內容： 3.1說明試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他體液中甘油三酯的含量。

3.2明確與甘油三酯檢測相關的臨床適應癥背景情況。如：病理性升高：原發(fā)性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發(fā)性見于無β-脂蛋白血癥和低β-脂蛋白血癥。繼發(fā)性見于繼發(fā)性脂質代謝異常，如消化道疾病（肝疾患、吸收不良綜合征）、內分泌疾患（甲狀腺功能亢進癥、慢性腎上腺皮質不全）及肝素等藥物的應用。

4.【檢驗原理】應結合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢驗原理的描述應結合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關系進行描述：

如：用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中的甘油三酯（TG）水解成甘油與脂肪酸，將生成的甘油用甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）磷酸化。以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P），然后以過氧化物酶（POD），4-氨基安替比林（4-AAP）與4-氯酚（三者合稱PAP）反應顯色，在特定波長處監(jiān)測吸光度值，可計算甘油三酯含量。

反應式如下：

5.【主要組成成分】應明確以下內容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準品或質控品，除明確組成成份及生物學來源外，還應明確其定值及溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發(fā)布單位及編號，質控品應明確靶值范圍。

例如：

本試劑盒由試劑1、2和校準品組成：

試劑1：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100 mmol/L、三磷酸腺苷（ATP）0.20 mmol/L、甘油激酶（GK）1200 U/L、甘油磷酸氧化酶4000 U/L、氯化鎂23 mmol/L、過氧化物酶5 KU/L；

試劑2：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100 mmol/L、4-氨基安替比林1.0 mmol/L、脂蛋白脂酶2500 U/L、三磷酸腺苷0.20 mmol/L、3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉2.0 mmol/L； 校準品：為甘油三酯溶液，校準品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標示，量值可溯源至GBW09148或國際參考物質SRM1595。

6.【儲存條件及有效期】應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后在生化分析儀上待機穩(wěn)定期。干粉校準品（如適用）應明確復溶穩(wěn)定性。

注：保存條件不應有模糊表述，如“室溫”、“常溫”。7.【適用儀器】應明確可適用的具體品牌、型號的儀器。8.【樣本要求】重點明確以下內容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運輸條件等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求（如果草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽等對甘油三酯濃度造成干擾，應明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，可凍融次數(shù)。特殊體液標本還應詳細描述對采集條件、保存液、容器要求等可能影響檢測結果的要求。應對已知的干擾物進行說明，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、藥物等干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。

9.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的各個步驟，包括： 9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

9.4質量控制：質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質控結果與預期不符，提示檢測結果不可靠，不應出具檢測報告。

9.5檢驗結果的計算：應明確檢驗結果的計算方法。超出線性范圍的樣本如進行稀釋，應結合可檢測范圍研究結果明確稀釋液類型和最大可稀釋比例。

10.【參考區(qū)間】應注明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明其確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結果的解釋】說明可能對檢驗結果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】說明該檢驗方法的局限性。

13.【產(chǎn)品性能指標】 至少應詳述以下性能指標，性能指標應與產(chǎn)品技術要求中相關技術指標保持一致。

13.1試劑空白吸光度； 13.2分析靈敏度； 13.3準確度；

13.4精密度（重復性和批間差）； 13.5線性范圍； 13.6特異性。

14.【注意事項】應至少包括以下內容：

14.1本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學的試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。

14.4有關人源組分的警告，如：試劑盒內的質控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組份作為潛在傳染源對待。

14.5樣本：（1）采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；（2）對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

14.6其他有關甘油三酯測定的注意事項。

15.【標識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】應當注明在編制說明書時所引用的參考文獻。

17.【基本信息】 17.1境內體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息： 注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號

17.2進口體外診斷試劑 按照以下格式標注基本信息： 注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號】應當寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號。

19.【說明書核準日期及修改日期】應注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、參考文獻

（一）《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）

（二）《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）

（三）《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）

（四）《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的那廣告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）

（五）《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）

（六）《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）

（七）《關于含有牛、羊源性材料醫(yī)療器械注冊有關事宜的公告》（國食藥監(jiān)械〔2006〕407號）

（八）國家食品藥品監(jiān)督管理部門發(fā)布的其他規(guī)范性文件

（九）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（十）GB/T 26124-2011臨床化學體外診斷試劑（盒）

（十一）YY/T 0316—2008醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應用

（十二）YY/T 1199—2013甘油三酯測定試劑盒（酶法）

甘油三酯測定試劑盒注冊技術審查指導原

則編寫說明

一、指導原則編寫目的

編制本指導原則旨在指導和規(guī)范注冊申請人對甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫工作，同時幫助審查人員理解和掌握該類產(chǎn)品原理、組成、性能、預期用途等內容，把握技術審評工作基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價。

由于甘油三酯測定試劑盒產(chǎn)品仍在不斷發(fā)展，審查人員仍需從風險分析的角度認真確定申報產(chǎn)品的預期用途與風險管理是否相當；由于我國醫(yī)療器械法規(guī)框架仍在構建中，審查人員仍需密切關注相關法規(guī)、標準及最新進展，關注審評產(chǎn)品實際組成、原理、預期用途等方面的個性特征，以保證產(chǎn)品審評符合現(xiàn)行法規(guī)安全、有效的要求。

二、指導原則部分內容說明

（一）指導原則主要根據(jù)體外診斷試劑產(chǎn)品注冊申報資料的要求，借鑒國家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關產(chǎn)品注冊技術審查指導原則的體例進行編寫，以便于注冊技術審評人員理解。

（二）產(chǎn)品應適用相關標準中給出了現(xiàn)行有效的國家標準、行業(yè)標準（包括產(chǎn)品標準、基礎標準）。

（三）產(chǎn)品的主要性能指標中給出了產(chǎn)品需要考慮的各個方面，主要提出共性要求，具體量化指標需要參照相關的國家標準、行業(yè)標準和生產(chǎn)商技術能力予以確定。

（四）關于線性偏差以及準確度偏差說明：考慮到，如技術要求中線性偏差以及準確度（比對試驗）偏差均采用相對偏差進行表述，當對線性范圍中某一極低值樣本進行線性范圍以及準確度（比對試驗）試驗時，其試驗結果采用絕對偏差符合申請人的規(guī)定更為合理。因此，本指導原則建議企業(yè)可對產(chǎn)品線性偏差以及準確度（比對試驗）偏差進行分段要求，分別采用絕對偏差和相對偏差進行表述。

（五）關于產(chǎn)品技術要求中分析靈敏度描述的說明：行業(yè)標準YY/T 1199—2013中分析靈敏度指的是產(chǎn)品功能靈敏度，而國家標準GB/T 26124—2011中分析靈敏度，指的是產(chǎn)品校準曲線斜率。鑒于甘油三酯測定試劑盒功能靈敏度指標目前并沒有實際臨床意義，本指導原則中分析靈敏度要求采用國家標準GB/T 26124—2011中校準曲線斜率的描述。

（六）關于參考區(qū)間的驗證資料中對健康個體至少120例的說明：此例數(shù)的規(guī)定，結合已發(fā)布產(chǎn)品技術審查指導原則，并參考《WS/T 402—2012臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》以及《C28-A2 如何確定臨床檢驗的參考區(qū)間：批準指南（2000）》。

（七）關于臨床試驗“總體樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于80例”的說明：參照國家局已發(fā)布實施的缺血修飾白蛋白、肌酸激酶、堿性磷酸酶產(chǎn)品注冊技術指導原則。

（八）關于綜述資料、產(chǎn)品說明書中有關與甘油三酯檢測相關的臨床適應癥背景的說明：臨床意義的描述參考自《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）》。

三、指導原則編寫單位和人員

本指導原則編寫人員由浙江省醫(yī)療器械技術審評人員、行政審批人員、檢驗和臨床專家、產(chǎn)品專業(yè)廠家代表等共同組成。

第三篇：乳酸脫氫酶測定試劑盒注冊技術審查指導原則

附件3

乳酸脫氫酶測定試劑盒注冊技術

審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對乳酸脫氫酶測定試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對乳酸脫氫酶測定試劑盒的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

乳酸脫氫酶測定試劑盒是指基于分光光度法原理，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，對血清、血漿或其他體液中的乳酸脫氫酶活性進行體外定量分析的試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），乳酸脫氫酶測定試劑盒管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。

乳酸脫氫酶活性的測定方法目前主要有乳酸→丙酮酸乳酸底物法（L→P）和丙酮酸 →乳酸丙酮酸底物法（P→L）

1.乳酸→丙酮酸乳酸底物法（L→P）

在堿性條件下，乳酸脫氫酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同時將NAD+（氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）還原成NADH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH生成的速率與血清中乳酸脫氫酶的活性成正比，340nm波長處監(jiān)測NADH吸光度上升時變化速率，計算乳酸脫氫酶的活性。（國際臨床化學聯(lián)合會IFCC參考方法）

2.丙酮酸→乳酸丙酮酸底物法（P→L）

中性條件下，乳酸脫氫酶催化丙酮酸生成L-乳酸，同時將NADH（還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）氧化成NAD+（氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH消耗的速率與血清中乳酸脫氫酶的活性成正比，340nm波長處監(jiān)測NADH吸光度下降時變化速率，計算乳酸脫氫酶的活性。

從方法學考慮，本指導原則主要指乳酸脫氫酶催化丙酮酸和乳酸之間的氧化或還原反應的相互轉化的同時，NADH量的下降或上升速率，通過在340nm處吸光度的變化，計算乳酸脫氫酶活性。不包括干化學、酶聯(lián)免疫類檢測試劑及電泳等檢測方法。

二、注冊申報材料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。相關描述應至少包含如下內容：

1.產(chǎn)品預期用途及輔助診斷的臨床適應癥背景情況：（1）乳酸脫氫酶的生物學特征、結構與功能，在體內正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

（2）與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，如臨床相關疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術原理，主要原材料的來源、質量控制及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程及關鍵控制點，質控品、校準品的制備方法及溯源情況。

3.有關生物安全性方面的說明：如果體外診斷試劑中的主要原材料，采用各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質制備而成，為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，研究者應提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。

4.有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內外批準上市的情況。相關產(chǎn)品所采用的技術方法及臨床應用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）應提供主要原材料、校準品（如產(chǎn)品包含）、質控品（如產(chǎn)品包含）的選擇、制備、質量標準及驗證有關的研究資料，質控品、校準品的定值試驗材料，校準品的溯源性文件等。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應體系的研究資料（如需提供）主要工藝包括：配制、分裝等描述及確定依據(jù)，應包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關鍵控制點；反應體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應條件（溫度、時間等）等研究資料。

（四）分析性能評估資料

應至少提供多個批次樣品的分析性能評估資料，包括具體的研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結論等。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。

性能評估應至少包括準確度、精密度、線性范圍、分析特異性（抗干擾能力）、分析靈敏度、其他影響檢測的因素等。

1.準確度

對測量準確度的評價依次包括：與國家標準品（和/或國際標準品）的偏差分析、方法學比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

1.1與國家（國際）標準品的比對研究

該研究項目已有相應國家（國際）標準品，優(yōu)先使用國家（國際）標準品進行驗證，重點觀察對相應標準品檢測結果的偏差情況。

1.2方法學比對

采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。其中，濃度分布應覆蓋產(chǎn)品的可報告范圍。

2.精密度

測量精密度的評估應至少包括生理和病理兩個濃度水平的樣本進行。

測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征或申請人的研究習慣進行，建議參考CLSI EP15-A。

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應作相關研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應注意基質效應影響，必要時應提供基質效應研究有關的資料。

4.分析特異性 應明確已知干擾因素對測定結果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸、脂血對檢測結果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質濃度，明確干擾物質影響的最大濃度。藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

5.分析靈敏度

用已知活性的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為n單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化（ΔA/min）即為本產(chǎn)品的分析靈敏度。

6.其他需注意問題

6.1不同適用機型的反應條件如果有差異應分別評估，不同樣本類型應分別進行分析性能評估。

分析性能評估報告應明確所用儀器設備型號、試劑、校準品、質控品等的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)名稱、產(chǎn)品批號、注冊證等信息。

6.2校準品溯源及質控品賦值

應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度的研究資料，提供質控品賦值及其靶值范圍確定的研究資料。

（五）參考區(qū)間確定資料

提供參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料, 建議參考CLSI/NCCLS C28-A2。研究結論應與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。這里主要指試劑的穩(wěn)定性，通常包括保存期穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、復溶穩(wěn)定性等（各3個批次）。申請人應至少提供保存期穩(wěn)定性和開瓶穩(wěn)定性、干粉試劑同時應提供復溶穩(wěn)定性研究資料。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論，應涵蓋產(chǎn)品中受穩(wěn)定性影響的性能指標（如準確度、線性范圍等）。

保存期穩(wěn)定性研究，應提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

臨床研究資料應符合《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》中臨床研究資料有關的規(guī)定。臨床實驗中的基本要求：

1.研究方法

選擇境內已批準上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。2.臨床試驗機構的選擇

應選擇至少兩家獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質認可的臨床試驗機構，臨床試驗機構實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設臵應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應與產(chǎn)品說明書一致，且不應超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應當按照試驗用體外診斷試劑的類別、風險、預期用途等特性，組織制定科學、合理的臨床試驗方案。一般應當包括以下內容：

（1）一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關信息、申請人相關信息等）；

（2）臨床試驗的背景資料；（3）試驗目的；（4）試驗設計；（5）評價方法；（6）統(tǒng)計方法；

（7）對臨床試驗方案修正的規(guī)定；

（8）臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）；

（9）數(shù)據(jù)處理與記錄保存;（10）其他需要說明的內容。4.研究對象選擇

臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。總體樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于60例。

血漿應明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

申報的樣本類型均應在臨床試驗中進行驗證。如果聲稱同時適用于血清和血漿樣本，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進行比對研究（采用考核試劑評價），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應一致。

如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少兩家臨床試驗機構開展臨床試驗；變更參考區(qū)間及增加臨床適應癥等變更事項，應根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.結果差異樣本的驗證

對于比較研究試驗中測定結果不符的樣本，應采用―金標準‖或其他合理的方法進行復核，以便對臨床試驗結果進行分析。如無需復核，應詳細說明理由。

7.臨床試驗總結報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。申請人或臨床試驗牽頭單位應對各臨床試驗機構的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結報告。臨床試驗報告的格式及內容如下：

7.1首篇

首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應包含該部分內容。

7.1.1封面標題

包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構（蓋章）、統(tǒng)計學負責人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄

列出整個臨床試驗報告的內容目錄和對應頁碼。7.1.3研究摘要

對臨床試驗情況進行簡單的介紹。7.1.4試驗研究人員

列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語

臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。7.2正文內容和報告格式 7.2.1基本內容 引言：介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關的背景情況，包括（1）被測物的來源、生物及理化性質；（2）臨床預期使用目的，所針對的目標適應癥人群，目前針對該適應癥所采用的臨床或實驗室診斷方法等；（3）所采用的方法、原理、技術要求等；（4）國內外已批準上市產(chǎn)品的應用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構間的合作關系。

7.2.2研究目的。

說明本臨床試驗所要達到的目的。7.2.3試驗管理。

對試驗管理結構的描述：管理結構包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設計。

7.2.4.1試驗總體設計及方案的描述。

試驗的總體設計和方案的描述應清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應詳細敘述。應包括：

7.2.4.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

7.2.4.1.2病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數(shù)及標準；

7.2.4.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等； 7.2.4.1.4統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準 7.2.4.2試驗設計及試驗方法選擇。試驗設計中應包括以下內容： 7.2.4.2.1樣本量及樣本量確定的依據(jù)； 7.2.4.2.2樣本選擇依據(jù)、入選標準、排除標準和剔除標準；

7.2.4.2.3樣本采集、保存、運輸方法等； 7.2.4.2.4對比試劑的確立；

7.2.4.2.5臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況。考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

7.2.4.2.6質量控制方法：對質量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；

7.2.4.2.7臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法：對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

7.2.4.2.7.1數(shù)據(jù)預處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

7.2.4.2.7.2定量值相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應給出b的95%（或99%）臵信區(qū)間，定量值結果應無明顯統(tǒng)計學差異。

7.2.4.2.8具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。

7.2.4.2.9試驗過程中方案的修改。一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結果及分析。

7.2.6討論和結論。對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

7.3有關臨床試驗中特別情況的說明 7.4附件

7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復核者簽字，臨床試驗機構蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻。7.4.4主要研究者簡歷。

7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產(chǎn)品風險分析研究資料

申請人應考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知及可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析，應符合YY/T 0316—2008/ISO 14971：2007《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術要求

產(chǎn)品技術要求應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》、《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》和《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關規(guī)定。

該產(chǎn)品技術要求中涉及的產(chǎn)品適用的引用文件和主要性能指標等相關內容：

產(chǎn)品適用的相關文件：

（1）GB/T 21415—2008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（2）GB/T 191—2008 包裝儲運圖示標志

（3）GB/T 26124—2011 臨床化學體外診斷試劑（盒）（4）YY/T 0316—2008 醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應用

（5）YY/T 0638—2008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質物中酶催化濃度賦值的計量學溯源性

（6）YY/T 0466.1—2009 醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號 第1部分：通用要求

（7）YY/T 1241—2014 乳酸脫氫酶測定試劑(盒)2.主要性能指標： 2.1外觀

應與技術要求中表明的試劑外觀一致。這里應當包括試劑（盒）包裝外觀、試劑內包裝外觀、試劑的外觀。

2.2裝量

試劑裝量應不少于標示裝量或規(guī)定限。2.3試劑空白 2.3.1試劑空白吸光度

在37℃、340nm、1cm光徑條件下試劑空白吸光度應不大于0.50。

2.3.2試劑空白吸光度變化率

在37℃、340nm、1cm光徑條件下，用生理鹽水作為樣品加入試劑測試時，試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)應不大于0.002。

用生理鹽水測試試劑（盒），在37℃、340nm、1cm光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1）和約5min(t)后的吸光度（A2），A2測試結果即為試劑空白吸光度測試值，計算出吸光度變化值（｜A2-A1｜/t）(t為測量時間間隔)即為試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)。

2.4分析靈敏度

用已知活性的樣本測試試劑（盒），記錄在試劑（盒）在37℃、340nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度，應符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。

2.5線性區(qū)間

測試血清樣本，試劑線性在25U/L—750U/L(37℃)區(qū)間內；

2.5.1線性相關系數(shù)（r）應不小于0.990；

2.5.2 25U/L—100U/L區(qū)間內，線性絕對偏差應不超過±10U/L；101U/L—750U/L區(qū)間內，線性相對偏差應不超過10%。

用接近線性區(qū)間下限的低活性樣品稀釋接近線性區(qū)間上限的高活性樣品，混合成至少5個有效稀釋濃度（xi），分別測試試劑（盒），每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關系數(shù)（r）。

r? ?[(x-x)(y?y)]?(x-x)?(y-y)ii2ii……………………（1）

2稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差或絕對偏差。

2.6精密度 2.6.1重復性

在重復性條件下，用（200±20）U/L的血清樣本或質控樣品，重復測試至少20次，分別計算測量值的平均值（x）和標準差（SD）。計算變異系數(shù)（CV）應不大于5%。

2.6.2批內瓶間差（適用于干粉或凍干試劑）

用(200±20)U/L的血清樣本或質控樣品分別測試同一批號的10個待檢試劑（盒），并計算10個測量值的平均值（x1）和標準差（SD1）。

用(200±20)U/L的血清樣本或質控樣品對該批號的1個待檢試劑（盒）重復測試10次，計算結果的均值（x2）和標準差（SD2）。按式（2）、式（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內瓶間差均應不大于5%。

當s1＜s2時，令CV=0

2.6.3批間差

用(200±20)U/L的血清樣本或質控樣品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值xi(i=1,2,3)，按公式（4）、（5）計算相對極差（R）。

式中：

xmax——xi中的最大值； xmin——xi中的最小值。

試劑（盒）批間相對極差應不大于10%。2.7準確度

可選用以下方法進行驗證；優(yōu)先采用相對偏差的方法。2.7.1相對偏差：相對偏差應不超過±10%。

用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質（CRM）對試劑（盒）進行測試，重復檢測3次，取測試結果均值（M）按式（6）計算相對偏差（B）。

或用由IFCC乳酸脫氫酶參考測量程序定值的參考范圍上限和上限2—5倍濃度水平各一個人源樣品（可適當添加被測物，以獲得高濃度的樣品）對試劑（盒）進行測試，每個濃度樣品重復檢測3次，分別取測試結果均值按式（6）計算相對偏差（B）。

B?M?TT?100% ………………………（6）

式中： B–相對偏差； M–測試結果均值；

T–有證參考物質標示值，或各濃度人源樣本定值。2.7.2比對試驗：相關系數(shù)r2≥0.95,相對偏差應不超過±10%。

參照CLSL EP9-A2的方法，用不少于40個在檢測范圍內不同濃度的人源樣品，用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法，每份樣品按待測試劑（盒）操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結果的相關系數(shù)及每個濃度點的相對偏差。

2.8穩(wěn)定性

可選用以下方法之一進行驗證：

2.8.1效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測，線性區(qū)間、準確度應符合技術要求。

2.8.2熱穩(wěn)定性試驗：檢測線性區(qū)間、準確度應符合技術要求。

注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導公式。

注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇a)、b)方法的任意組合，但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在有效期內產(chǎn)品的性能符合技術要求。凍干品應同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，復溶后放臵到有效期末，產(chǎn)品性能應符合線性區(qū)間、準確度的技術要求。

2.9校準品和質控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）應至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質控品還應檢測批內瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

首次申請注冊的乳酸脫氫酶測定試劑盒，應該在具有相應醫(yī)療器械檢驗資質和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構進行注冊檢驗。出具注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術要求預評價意見。

(十一)產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導使用人員正確操作、臨床醫(yī)生準確理解和合理應用試驗結果的重要技術性文件。產(chǎn)品說明書的格式應符合《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014第17號）的要求。下面對乳酸脫氫酶測定試劑說明書的重點內容進行詳細說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱應當按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》規(guī)定的命名原則進行命名，可適當參考相關―分類目錄‖和/或國家標準及行業(yè)標準。

（1）試劑（盒）名稱：乳酸脫氫酶測定試劑盒（乳酸底物法）或（丙酮酸底物法）

（2）英文名稱：例如：L-Lactate dehydrogenase test reagent（kit）

2.【包裝規(guī)格】 注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內容均應采用中文進行表述。如產(chǎn)品有不同組分,可以寫明組分名稱。如有貨號，可增加貨號信息。

（1）包裝規(guī)格應明確單、雙試劑類型；（2）不得多于技術要求中所列的包裝規(guī)格；

（3）如不同包裝規(guī)格有與之特定對應的機型，應同時明確適用機型。

3.【預期用途】

應至少包括以下幾部分內容：

（1）乳酸脫氫酶測定試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿和/或其他體液中乳酸脫氫酶的活性；

（2）應明確與目的檢測物相關的臨床適應癥背景情況。乳酸脫氫酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋。

作為支持性資料，申請人應提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關臨床適應癥背景的資料。

4.【檢驗原理】

應結合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。

如：在堿性條件下，乳酸脫氫酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同時將NAD+ 還原為NADH，因此在37℃、340nm波長下監(jiān)測吸光度上升速率，可得出乳酸脫氫酶的活性。

反應式如下：

????丙酮酸+NADH+H+ L-乳酸+NAD+?LDH5.【主要組成成分】 應明確以下內容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應體系中的比例或濃度。

如檢測中需使用校準品或質控品，應明確說明，并提供校準品溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發(fā)布單位及編號，質控品應明確靶值范圍等。

例如：

本試劑盒由試劑

1、試劑2和校準品（選配）組成： 試劑1：Tris緩沖液，80mmol/L（pH9.0±0.1）；L-乳酸，70mmol/L。

試劑2：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+），5.0mmol/L。試劑盒如果配備校準品，需注明校準品定值信息及溯源性（量值最終溯源至國際參考物質ERM-AD453/IFCC）。試劑盒如果配備質控品，需注明質控品靶值范圍。

6.【儲存條件及有效期】

（1）應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應明確復溶穩(wěn)定期。

（2）說明產(chǎn)品的儲存條件，如：2—8℃、避免／禁止冷凍或-18℃以下等。其他影響穩(wěn)定性的條件，如：光線、濕度等也必須說明。

（3）如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

7.【適用儀器】

說明可適用的儀器及型號，并提供與儀器有關的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

8.【樣本要求】 重點明確以下內容：

樣本類型、為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等、保存期限及保存條件（短期、長期），能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法、已知的干擾物等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求（如草酸鹽既可與丙酮酸或乳酸發(fā)生競爭性抑制，又能與LDH及NADH或NAD+形成復合物。從而抑制催化的還原或氧化反應。應明確避免使用的提示）。特殊體液標本還應詳細描述對采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結果的要求。

中度及重度溶血時，因紅細胞內的乳酸脫氫酶濃度很高（約為血漿中360倍），避免使用此類樣本。

9.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：（1）試劑配制方法、注意事項。

（2）試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項。

（3）校準程序（如果需要）：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

（4）質量控制程序：質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等。

（5）檢驗結果的計算：應明確檢驗結果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應舉例說明。如果超出線性范圍，樣本需要稀釋測定時，應根據(jù)試劑特性說明稀釋液的種類及最大稀釋倍數(shù)。

10.【參考區(qū)間】

應注明常用樣本類型及反應方式的參考區(qū)間，并說明參考區(qū)間確定方法。注明―由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）‖。

11.【檢驗結果的解釋】

說明可能對檢驗結果產(chǎn)生影響的因素。說明在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】

說明該檢驗方法的局限性，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。

13.【產(chǎn)品性能指標】

至少應詳述以下性能指標，性能指標應不低于標準有關技術指標的要求。

（1）試劑空白吸光度及試劑空白吸光度變化率；（2）分析靈敏度；（3）準確度；

（4）精密度（重復性和批間差）；

（5）線性區(qū)間（線性相關系數(shù)和線性偏差）；（6）特異性。14.【注意事項】 應至少包括以下內容：

（1）本試劑盒僅供體外檢測使用，試劑中含有的化學成分應說明接觸人體后產(chǎn)生不良的影響后果。（2）采用不同方法學的試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。

（3）有關人源組分的警告，如：試劑盒內的質控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。

（4）樣本：對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

（5）其他有關乳酸脫氫酶測定的注意事項。15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。16.【參考文獻】

應當注明在編制說明書時所引用的參考文獻。17.【基本信息】

符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》對基本信息的要求。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號】 產(chǎn)品的注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號 19.【說明書核準日期及修改日期】

注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關注點

（一）關注產(chǎn)品預期用途有關的描述是否與臨床研究結論一致。臨床研究用參比試劑和第三方確認試劑的預期用途應與申請產(chǎn)品預期用途一致。申報樣本類型應在臨床研究中進行驗證。

（二）審查產(chǎn)品技術要求時應注意產(chǎn)品應不低于YY/T 1241—2014《乳酸脫氫酶測定試劑（盒）》的有關規(guī)定。

（三）說明書中預期用途（樣本類型）、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標等描述應分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應體系研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結論相一致。

（四）干粉試劑應提供復溶穩(wěn)定性研究資料并在說明書儲存條件及有效期中說明。

四、名詞解釋

（一）準確度（Accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

（二）分析特異性（Analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。用于描述檢測程序在樣本中有其他物質存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學相關濃度值水平的分析干擾程度。（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應物）

（三）線性（Linearity）：在給定測量范圍內，給出的測量結果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結果相關于樣本的賦值符合直線的屬性。

（四）精密度（Precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

五、參考文獻

（一）《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）

（二）《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）

（三）《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）

（四）《全國臨床檢驗操作規(guī)范》（第三版），中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司

（五）《臨床化學常用項目自動分析法》（第三版），遼寧科技出版社

（六）GB/T 21415—2008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

（七）GB/T 26124—2011 臨床化學體外診斷試劑（盒）

（八）YY/T 0638—2008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質物中酶催化濃度賦值的計量學溯源性

（九）YY/T0466.1—2009 醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號 第1部分：通用要求

（十）YY/T 1241—2014 乳酸脫氫酶測定試劑(盒)

（十一）YY/T 1227—2014 臨床化學體外診斷試劑(盒)命名

乳酸脫氫酶測定試劑盒

注冊技術審查指導原則編寫說明

一、編寫目的和背景

（一）本指導原則編寫的目的是用于指導和規(guī)范乳酸脫氫酶測定試劑盒產(chǎn)品注冊申報過程中審查人員對注冊材料的技術審評；同時也可指導注冊申請人的產(chǎn)品注冊申報。

（二）本指導原則旨在讓初次接觸該類產(chǎn)品的注冊審查人員對產(chǎn)品診斷方法或原理、主要組分、主要性能指標、臨床用途等各個方面進行基本了解，同時讓技術審查人員在產(chǎn)品注冊技術審評時把握基本的要求尺度，以確保產(chǎn)品的安全、有效。

（三）本指導原則中的乳酸脫氫酶測定試劑盒是指基于分光光度法原理對人血清、血漿或其他體液中的乳酸脫氫酶活性進行體外定量分析的試劑。

（四）本指導原則中的術語、定義采用GB/T 26124—2011《臨床化學體外診斷試劑(盒)》標準的術語和定義。

二、編寫依據(jù)

（一）《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務院令第650號）

（二）《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）

（三）《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）

（四）《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）

（五）《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）

（六）《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）

（七）GB/T 26124—2011臨床化學體外診斷試劑(盒)

（八）YY/T 1241—2014 乳酸脫氫酶測定試劑（盒）

（九）YY/T 1227—2014 臨床化學體外診斷試劑(盒)命名

（十）國家食品藥品監(jiān)督管理部門發(fā)布的其他規(guī)范性文件

三、重點內容說明

（一）指導原則主要根據(jù)體外診斷試劑產(chǎn)品注冊申報資料的要求，借鑒國家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關產(chǎn)品注冊技術審查指導原則的體例進行編寫，以便于注冊技術審評人員理解。

（二）在產(chǎn)品綜述資料中，全面介紹了該類體外診斷試劑產(chǎn)品的預期用途、產(chǎn)品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內容。

（三）本指導原則不涉及產(chǎn)品作用機理的內容，主要描述相應的診斷方法和原理。

（四）產(chǎn)品應適用的相關標準中給出了現(xiàn)行有效的國家標準、行業(yè)標準（包括產(chǎn)品標準、基礎標準），以及相應的國際標準。

（五）產(chǎn)品的主要性能指標中給出了產(chǎn)品需要考慮的各個方面，主要提出共性要求，具體量化指標需要參照相關的國家標準、行業(yè)標準和生產(chǎn)商技術能力予以確定。

四、指導原則編寫單位和人員

本指導原則的編寫成員由河北省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械監(jiān)管處注冊技術審評人員、行政審批人員、河北省醫(yī)療器械與藥品包裝材料檢驗研究院、臨床專家及相關企業(yè)技術人員共同組成。

第四篇：2016-《人類體外輔助生殖技術用液注冊技術審查指導原則》(征求意見稿)

附件1

人類體外輔助生殖技術用液注冊技術審查指導原則

（征求意見稿）

一、前言

本指導原則旨在為食品藥品監(jiān)管部門對注冊申報資料的技術審評提供技術指導，同時也為注冊申請人/生產(chǎn)企業(yè)進行人類體外輔助生殖用液體類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊申報提供參考。

本指導原則系對人類體外輔助生殖技術用液體類醫(yī)療器械產(chǎn)品的一般要求，注冊申請人/生產(chǎn)企業(yè)應依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內容是否適用。

本指導原則是對注冊申請人/生產(chǎn)企業(yè)和審評人員的技術指導性文件，不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行。如果有其他科學合理的替代方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)和標準的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將進行適時的調整。

二、適用范圍

本指導原則所涉及的人類體外輔助生殖技術用液，是指與人類配子和/或胚胎發(fā)生直接或間接接觸，以獲取、制備、培養(yǎng)、移植或貯存人類配子和/或胚胎的液體類醫(yī)療器械產(chǎn)品，如：取卵液、洗精液、精子梯度分離液、精子制動劑、配子緩沖液、卵裂胚培養(yǎng)液、囊胚培養(yǎng)液、胚胎冷凍液、胚胎解凍液、石蠟培養(yǎng)油等。

本指導原則不適用于非按照醫(yī)療器械管理的用以添加到培養(yǎng)基中以改善其性能的培養(yǎng)基補充劑類產(chǎn)品（如白蛋白、血清、抗生素等）。

三、注冊單元劃分

化學成分或配比不同的產(chǎn)品應劃分為不同的注冊單元（用于同一操作步驟的配套產(chǎn)品除外）。

四、注冊申報資料要求

注冊申報資料按照國家食品藥品監(jiān)督管理總局2014年第43號公告《醫(yī)療器械注冊申報資料要求及說明》進行提供，尤其注意以下幾方面內容：

（一）綜述資料

1.詳述產(chǎn)品作用原理，提供在取卵、取精、受精、體外培養(yǎng)、胚胎移植等過程中產(chǎn)品預期與人體、配子、合子/胚胎接觸的情況，包括接觸部位、接觸方式、接觸時間（包括多量次產(chǎn)品的積累時間），提供預期的最長接觸時間的確定依據(jù)及相關研究資料。

2.以表格形式提供產(chǎn)品配方（投料比）及終產(chǎn)品中所有組成成分的中文標準化學名稱、各組分所占濃度、作用。

3.提供產(chǎn)品原材料相關資料，包括各原材料來源、質量控制標準及驗證數(shù)據(jù)等。申請人/生產(chǎn)企業(yè)應提交相關資料以說明各組分的安全性、有效性，如材料安全性數(shù)據(jù)表、相關毒理學數(shù)據(jù)、臨床應用史等支持資料。說明組成材料中是否含有藥品成分，若有請對其中所含藥品提供獲我國注冊或獲生產(chǎn)國（地區(qū)）批準上市的證明性文件。關于產(chǎn)品用水，請?zhí)峁┢滟|量控制標準和驗證報告。

4.型號規(guī)格：對于存在多種型號規(guī)格的產(chǎn)品，應當明確各型號規(guī)格的區(qū)別，對于各型號規(guī)格的結構組成、功能及性能指標等方面加以描述。

5.描述產(chǎn)品具體采用的包裝容器的材料和規(guī)格。采用的產(chǎn)品包裝容器材料應通過毒理學評價試驗，提供其來源、質量控制標準及包裝容器材料的安全性證明資料。明確包裝容器材料是否含有具有潛在致癌、致畸及致突性風險的成分（如鄰苯二甲酸鹽等）。

6.適用范圍和禁忌癥：申請人應根據(jù)臨床資料規(guī)范申報產(chǎn)品的適用范圍，明確產(chǎn)品適用的體外輔助生殖階段及其具體作用。如適用，應當說明產(chǎn)品不適宜應用的某些情況或特定的人群。7.以表格形式提供國內外同類產(chǎn)品動態(tài)分析情況，包括國內外同類產(chǎn)品的上市情況及與申報產(chǎn)品在工作原理、組成成分及含量、性能指標、適用范圍等方面的對比情況。

（二）研究資料 1.產(chǎn)品性能研究

（1）詳述產(chǎn)品技術要求中性能指標及檢驗方法的確定依據(jù)，提供采用的原因及理論基礎，提供涉及到的研究性資料、文獻資料和/或標準文本。

（2）提供各成分濃度選擇的依據(jù)。

（3）若申報產(chǎn)品的成分及含量與已在國內上市同類產(chǎn)品差別較大，則需提供產(chǎn)品對配子功能、合子形成、著床前及著床后胚胎生長發(fā)育、行為發(fā)育影響的臨床前研究資料。必要時，需進行動物實驗研究。

（4）提供本企業(yè)系列產(chǎn)品合用后對胚胎形成的整體性研究資料。

（5）提供藥物與其他成分相互作用及穩(wěn)定性研究資料。（6）提供產(chǎn)品與市場上其它培養(yǎng)基和輔助生殖技術溶液兼容性的研究資料。

（7）若含有抗生素成分，請分析說明抗生素對配子、合子或胚胎的影響。

（8）產(chǎn)品可降解成分的降解可導致組分濃度降低以及有害副產(chǎn)物形成，提供存貯有效期內申報產(chǎn)品中可降解成分降解情況的研究資料，包括關鍵性組分的降解情況、有害生物副產(chǎn)品的生成情況，分析說明降解產(chǎn)物對終產(chǎn)品潛在安全有效性的影響。

2.生物相容性評價研究

需對成品中與患者、配子或胚胎直接或間接接觸的材料的生物相容性進行評價。

生物相容性評價研究資料需包括：（1）生物相容性評價的依據(jù)和方法。

（2）產(chǎn)品所用材料的描述及與人體接觸的性質。（3）實施或豁免生物學試驗的理由和論證。（4）對于現(xiàn)有數(shù)據(jù)或試驗結果的評價。

對于可能接觸母體的產(chǎn)品，需考慮進行的生物相容性評價/試驗項目包括細胞毒性、致敏和陰道刺激；對于可能接觸卵子、合子或胚胎的產(chǎn)品，需考慮進行的生物相容性評價/試驗項目包括鼠胚形成和遺傳毒性；對于可能接觸精子的產(chǎn)品，需考慮進行的生物相容性評價/試驗項目包括人精子存活和遺傳毒性。由于囊胚細胞數(shù)是一項評價胚胎發(fā)育狀況的敏感和定量指標，因此在具備技術條件的情況下，鼓勵鼠胚試驗兼用囊胚細胞計數(shù)法對發(fā)育期的胚胎進行分析（試驗品處理組與陰性對照組相比囊胚細胞數(shù)應無明顯差異）。

對于以上不適用的項目，應提供充分的理由和論證。如對于高滲溶液（如配子/胚胎冷凍復蘇液），可能有些生物相容性評價項目不適用。

若可能，各項生物相容性試驗需采用樣品原液進行。若采用原液進行試驗不可操作，則進行適當稀釋/浸提，并提供不使用原液的理由以及稀釋/浸提比例的依據(jù)。

若申報產(chǎn)品中（包括包裝容器）所含成分具有致癌、致畸及致突性潛在風險，生產(chǎn)商應對該成分的應用進行詳細的分析說明，說明有無相關替代成分，并提供產(chǎn)品致癌性、致突變性及生殖毒性的生物相容性評價資料。

3.生物安全性研究

如產(chǎn)品中含有人源性成分和/或動物源性成分，請?zhí)峁╆P于病毒和/或傳染性病原體感染以及免疫原性的風險分析及控制措施的描述和驗證資料（可參考《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗證指導原則》和《動物源性醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊申報資料指導原則》）。對于含有同種異體材料、動物源性材料或生物活性物質的產(chǎn)品，生物安全性研究資料應包括以下內容：說明材料的獲取、加工、保存、測試和處理過程；闡述來源（包括捐獻者篩選細節(jié)）,并提供生產(chǎn)過程中對病毒、其他病原體及免疫源性物質去除或滅活方法的驗證報告、工藝驗證的簡要總結等。對于人源性成分，還應對其人源供體的病毒傳染風險進行分析說明。

4.滅菌/消毒工藝研究

描述用于保證產(chǎn)品無菌的質量保證體系，明確產(chǎn)品滅菌工藝（方法和參數(shù)）和無菌保證水平（SAL），提供滅菌確認報告。如滅菌使用的方法容易出現(xiàn)殘留,需明確殘留物信息及采取的處理方法，并提供研究資料。

5.產(chǎn)品有效期和包裝研究

提供產(chǎn)品有效期的驗證報告（包括產(chǎn)品物理、化學穩(wěn)定性和包裝密封穩(wěn)定性的驗證資料），及開瓶后拋棄日期的驗證資料，不同包裝或容器的產(chǎn)品需分別提供。

6.臨床前動物試驗

如適用，需包括動物試驗研究的目的、結果及記錄。7.其他資料

證明產(chǎn)品安全、有效的其他研究資料。

（三）生產(chǎn)制造信息

1.詳述產(chǎn)品生產(chǎn)加工過程，明確產(chǎn)品生產(chǎn)加工工藝，注明關鍵工藝和特殊工藝，并說明其過程控制點。如適用，請明確產(chǎn)品生產(chǎn)過程中各種加工助劑的使用情況及對雜質（如殘留單體、小分子殘留物等）的控制情況并提交相應的驗證資料。

2.有多個研制、生產(chǎn)場地的，需概述每個研制、生產(chǎn)場地的實際情況。

（四）臨床評價資料

按照《醫(yī)療器械臨床評價技術指導原則》提交臨床評價資料。進口醫(yī)療器械還應提供境外政府醫(yī)療器械主管部門批準該產(chǎn)品上市時的臨床評價資料。

（五）風險分析資料

體外輔助生殖用液體類產(chǎn)品風險分析資料應注意危害發(fā)生的對象包括患者/母體（包括捐獻者）、配子、合子和/或胚胎，應注意判定產(chǎn)品對患者、配子、合子和/或胚胎每一種可能的潛在危害，以及危害發(fā)生的原因、危害水平以及采取的降低危害的措施。另外，體外輔助生殖液體類產(chǎn)品應注意提供單個組分的風險分析，尤其是生物源性成分。

（六）產(chǎn)品技術要求

1.性能指標需根據(jù)產(chǎn)品特性制定，包括但不限于：（1）理化性能：外觀、裝量、pH值、滲透壓、重金屬總含量。對于精子梯度分離液等密度梯度離心介質，需制定密度性能指標，組織培養(yǎng)油、精子制動液需制定黏度要求。

（2）對于所含藥品成分（如胰島素、抗生素、白蛋白等），需制定藥物定性、定量指標。

（3）建議增加特征性組分（除以保持pH值和滲透壓為目的以外的所有水溶性成分）要求和檢測方法并檢測，并提供相關指標的確定依據(jù)。關于特征性檢測指標的要求，如無法在檢測中心進行檢測，則請以技術資料形式提供該產(chǎn)品特征性組分的定性定量測試數(shù)據(jù)。若在終產(chǎn)品中無法測定，則請進行說明，并提供由醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)進行的其原材料的定性鑒別測試數(shù)據(jù)。（4）產(chǎn)品使用性能相關指標要求：如對于精子梯度分離液等精子優(yōu)選產(chǎn)品應制定精子回收率等指標，精子制動劑應制定精子制動性能指標要求。

（5）相關雜質控制指標（如適用，如組織培養(yǎng)油等）。（6）無菌，細菌內毒素。

（七）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書需按照總局令第6號《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》的要求制訂，此外需注意：

1.說明書中應明確產(chǎn)品中易降解成分和關鍵成分在有效期內損失情況信息（如谷胱甘肽、丙酮酸、維生素等）。

2.產(chǎn)品說明書及標簽中應對產(chǎn)品及包裝材料中相關致癌、致畸及致突變性成分予以明確（如有，如包裝容器含有鄰苯二甲酸鹽成分等），提示相關的風險及應采取的安全預防措施。

3.根據(jù)產(chǎn)品與市場上其它培養(yǎng)基和輔助生殖技術溶液兼容性的研究資料，增加相關警示信息。

5.明確產(chǎn)品貯存條件及開瓶拋棄日期。

五、參考文獻

[1] GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學評價》系列標準 [2]《中華人民共和國藥典》

[3] YY/T 0995-2015《人類輔助生殖技術用醫(yī)療器械 術語和定義》 [4] YY/T 1434-2016《人類體外輔助生殖技術用醫(yī)療器械體外鼠胚試驗》

[5]《無源植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊申報資料指導原則》 [6]《動物源性醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊申報資料指導原則》 [7]《無源植入性醫(yī)療器械貨架壽命申報資料指導原則》

第五篇：《ABO、RhD血型抗原檢測卡(柱凝集法)注冊技術審查指導原則》(征求意見稿)

ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）

注冊技術審查指導原則（征求意見稿）

本指導原則旨在指導注冊申請人對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內容，可自行補充。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、范圍

ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）是指使用凝膠、玻璃微珠等材料進行填充微柱，以免疫血液學、顆粒過篩和離心技術結合原理，進行人ABO血型的正定型鑒定及RhD抗原的檢測。

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本指導原則適用于ABO、RhD血型抗原檢測卡(柱凝集法)以及包含ABO、RhD血型抗原檢測用途的柱凝集法的血型檢測卡，但不適用于血源篩查用血型正定型試劑。

本指導原則僅包括對ABO、RhD血型抗原檢測卡(柱凝集法)注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（總局2014年第44號公告）（以下簡稱“44號公告”）的相關要求。內容主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價以及同類產(chǎn)品在國內外批準上市的情況介紹等內容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應著重從抗體生物學來源、抗體效價、特異性、靈敏度、有效期等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠或其他填充物、緩沖液等）的選擇、制備及其質量標準的研究資料。

1.抗體的選擇及質量標準。應明確寫明抗體的供應來源、生物學來源或克隆號，抗D抗體應明確抗體屬性，是IgM型或IgG型或兩者均含有。

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1.1提供抗體純度。1.2抗體效價：

將抗A、抗B抗體進行倍比稀釋，應用試管法分別與A1型、A2型紅細胞試劑和B型紅細胞試劑反應，與國家標準品比對，抗體效價不得低于國家標準品。

將抗D抗體進行倍比稀釋，應用試管法與RhD陽性紅細胞試劑反應，考察抗體效價。

1.3特異性

抗A抗體應與A1型、A2型、A1B、A2B型試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗B抗體應與B型、A1B、A2B型試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗D抗體應與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反應。

所有陽性反應不應有雙群現(xiàn)象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

1.4應提供不同批次抗體的驗證資料。

1.5如為兩株抗體混合，應提交驗證資料說明混合比例。2.填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質量控制要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。

3.填充緩沖液：應說明組成成分,并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

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2.產(chǎn)品基本反應原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件（如介質、時間、溫度等）的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質量控制的要求。

4.主要反應體系的研究資料、每一步反應體系的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。

反應體系的設臵應符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認標準操作規(guī)范、指南或標準的要求。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、溫度、時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數(shù)和時間的方式設臵離心條件。

（四）分析性能評估資料

申請人應提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究目的、實驗設計、研究方法、可接受標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內或國際有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則進行。

產(chǎn)品性能研究所采用的儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內或境外已批準上市的產(chǎn)品，如紅細胞試劑、抗人球蛋白試劑、離心機等。

分析性能評估試驗中應明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法。所有試驗方法應符合 4 / 13

產(chǎn)品說明書的具體操作要求。

分析性能研究應采用至少三批產(chǎn)品進行。如檢測卡同時適用于手工法及全自動血型分析儀，應分別進行性能驗證并對兩者性能進行比較。

建議著重對以下分析性能進行研究。

1.外觀：檢測卡應標識清晰，不同抗體對應不同顏色，封口應嚴密且能夠整條撕脫，檢測卡內填充物均勻，無干枯現(xiàn)象，液面高度一致，無明顯傾斜，離心后應無氣泡。

2.特異性：

抗A柱應與A1型、A2型、A1B、A2B型試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗B柱應與B型、A1B、A2B型試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗D柱應與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反應。

Ctl柱（如有）均呈陰性反應。

所有陽性反應不應有雙群現(xiàn)象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

3.靈敏度 3.1凝集強度要求

抗A柱與A1型試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于4+，與A2 型及A2B試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于2+；與A1B試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于3+；

抗B柱與B型試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于4+，與AB型（A1B或A2B）試劑紅細胞發(fā)生凝集反應

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時，反應強度應不小于3+；

抗D柱與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于4+。

3.2與試管法的比對試驗

采用同樣的A1型、A2型、AB型、B型、RhD陽性試劑紅細胞，將試劑卡檢測結果與試劑卡使用的抗體采用試管法的檢測結果進行比較，依據(jù)各自的結果判定方法進行凝集強度的判讀，試劑卡凝集強度不得低于試管法。

所有陽性反應不應有雙群現(xiàn)象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

4.重復性

采用A1型、A2型、B型、AB型、O型試劑紅細胞分別對抗A柱和抗B柱進行重復性試驗，采用RhD陽性和陰性試劑紅細胞對抗D柱進行重復性試驗，使用上述所有試劑紅細胞對Ctl柱（如有）進行重復性試驗。

批內重復性采用同一批次檢測卡重復檢測上述試劑紅細胞，重復次數(shù)不少于10次，比較同一批次檢測卡不同次檢測之間的檢測結果；

日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復檢測上述試劑紅細胞，重復天數(shù)不少于10天，比較同一批次檢測卡不同天檢測之間的檢測結果；

批間重復性采用至少三批檢測卡對上述試劑紅細胞進行重復檢測，比較不同批次間的檢測結果。

批內、日間、批間重復性檢測結果應分別對應一致，對同一試劑紅細胞的檢測結果凝集強度差異不超過1+。陰性結果不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

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5.臨床樣本驗證

收集各ABO血型臨床樣本，包括RhD陰性樣本，采用試劑卡進行檢測，將血型鑒定和凝集強度結果與已上市試劑結果進行比較。臨床樣本的收集應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源。

6.收集臨床弱凝集紅細胞樣本，驗證A、B、O、AB、RhD陽性小于3+及各種凝集強度的情況，并提供各種凝集強度的圖片。

7.收集各種血型的直接抗人球蛋白試驗陽性紅細胞進行檢測驗證。并提供直接抗人球蛋白試驗試劑及檢測結果信息。

8.收集弱D、部分D紅細胞，考察驗證抗D柱能否檢出，并明確上述RhD血型的具體確定方法。

9.溶血、脂血、黃疸等樣本的干擾評價。10.抗凝劑的適用性研究驗證。

（五）陽性判斷值

提供充分的驗證試驗，體現(xiàn)不同凝集強度的結果，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報檢測卡的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實驗項目應至少包括靈敏度、特異性、重復性。

穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實

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施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內容的研究結果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內容應符合《體外診斷試劑臨床試驗指導原則》、《辦法》、“44號公告”的規(guī)定，以下僅結合ABO、RhD血型抗原檢測卡的具體特點對其臨床試驗中應重點關注的內容進行闡述。

1.研究方法

按照法規(guī)要求應選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品或試管法等效。

2.臨床試驗單位的選擇

應選擇符合法規(guī)要求資質的臨床試驗機構進行臨床試驗，不得選擇血站進行臨床試驗。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應不少于3000例。應采用臨床患者進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應包括血型

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鑒定易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。血型分布盡量均衡，ABO血型每種均應有統(tǒng)計學意義，RhD陰性樣本建議不少于50例。

4.實驗過程

分別采用考核試劑與對比試劑依據(jù)各自的說明書對入組臨床樣本進行血型檢測，記錄結果應具體到凝集強度。

5.統(tǒng)計學分析

應分別進行考核試劑與對比試劑對不同ABO血型、RhD血型的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，對定性結果進行Kappa檢驗以驗證檢測結果的一致性。

6.結果差異樣本的驗證

對于兩種試劑檢測結果不一致（包括考核試劑與對比試劑定型結果不一致、考核試劑與對比試劑凝集強度差異較大,如≥2+）的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應結合樣本的復測結果進行綜合分析，最終應采用適合的方法進行樣本血型的最終確認。

如臨床樣本中包含凝集強度小于3+的樣本，應進行進一步確認，明確出現(xiàn)弱凝集的原因。

7.臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強度和血型定型結果，如有不符樣本應列明第三方確認的結果。

8.臨床試驗中應注意考核試劑與對比試劑應嚴格遵守說明書操作要求，如紅細胞懸液濃度、離心條件等，應與說明

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書一致。

（八）產(chǎn)品風險分析資料

產(chǎn)品風險分析資料應符合“44號公告”的基本要求，并參照相應的行業(yè)標準進行風險分析。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行血型定型檢測時可能存在一定的干擾、抗體效價隨放臵時間延長的減弱對結果的影響等，申請人應根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應用可能存在的風險。

（九）產(chǎn)品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》（總局2014年第9號通告）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求。產(chǎn)品技術要求應符合《辦法》和“44號公告”的相關規(guī)定。

如果擬申報試劑已有相應的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。

產(chǎn)品技術要求的性能指標應至少包括外觀、靈敏度、特異性、重復性、穩(wěn)定性。

產(chǎn)品技術要求的附錄應包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應明確抗體來源、克隆號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質量控制要求，緩沖液應明確組成、pH值等特性及質控要求；主要生產(chǎn)工藝應以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質量控制點；半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

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根據(jù)《辦法》要求，申請注冊的第三類體外診斷試劑應在國家食品藥品監(jiān)督管理局認可的、具有相應承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構進行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、試驗原理、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（總局2014年第17號通告）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。

以下內容僅對ABO、RhD血型抗原檢測卡說明書的重點內容進行詳細說明，說明書其他內容應根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。

1.【預期用途】

1.1寫明本試劑用于人ABO血型的正定型檢測及RhD血型抗原的檢測，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。

1.2說明與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法。

2.【儲存條件及有效期】 說明試劑的儲存條件及有效期。

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3.【樣本要求】

明確紅細胞制備和濃度要求，明確配套紅細胞稀釋液，應使用生理鹽水，說明溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結果寫明樣本穩(wěn)定性要求，明確抗凝劑要求。

4.【陽性判斷值】

明確結果判斷方法及標準，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細解釋。

5.【檢驗方法】

寫明具體方法及操作步驟。

明確質控要求：應根據(jù)相關規(guī)定進行每日質控試驗。6.【檢驗方法的局限性】

6.1未完全去除纖維蛋白原的標本，可能因纖維蛋白阻礙紅細胞沉降而影響檢測結果，造成假陽性，建議洗滌后重新檢測。

6.2被檢標本染菌可能造成假陽性結果。

6.3實驗室溫度低可能導致凝膠顆?；顒有詼p少，單個紅細胞穿過困難，從而導致假陽性結果。

6.4使用陳舊樣本可能因細胞破碎，細胞膜浮于膠中或膠面呈弱陽性反應。

6.5對弱D等檢測情況進行說明。

6.6對檢測結果凝集強度小于3+的情況應如何進行后續(xù)處理進行詳細說明。

7.【注意事項】

7.1檢測卡在使用前應離心，并小心解開封口膜，避免迸濺。

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7.2強調紅細胞懸液濃度范圍，不得過高或過低。7.3微柱中出現(xiàn)溶血情況的處理。

7.4樣本離心時間和離心力應嚴格按照說明書要求操作。7.5其他。

三、起草單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術審評中心

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