第一篇：臨床定量PCR實驗室設計建設及管理

臨床定量PCR實驗室設計建設及管理SICOLAB

一、近年來，PCR技術在臨床醫(yī)學中得以快速應用，特別是在肝炎、結核、艾滋病、性病、SARS等病原微生物診斷以及部分遺傳性疾病診斷和癌癥的輔助診斷等方面的應用。

二、臨床定量PCR實驗室管理

臨床定量PCR實驗室由衛(wèi)生部管理，依據(jù)國家衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號）《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》、（衛(wèi)檢字[2002]8號）、《臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準》（2002-1-14）、《臨床基因擴增實驗室申請表》及《臨床基因擴增實驗室驗收表》執(zhí)行。實驗室申辦程序包括：

（1）填寫調查表，由省臨檢中心審核；

（2）正式填寫申請表，上報衛(wèi)生部臨檢中心；

（3）評審由衛(wèi)生部、省專家參加，并報省衛(wèi)生廳備案；（4）合格單位名單由衛(wèi)生行政部門在媒體公示。臨床定量PCR實驗室應具備以下條件：標準的實驗室設計設置、專業(yè)的技術人員、標準操作程序（SOP）和質量管理文件等。

1、實驗室設置及人員管理在實驗室設計上，建立單流向、一體化的臨床定量PCR實驗室是安全準確進行基因擴增檢驗和保障生物安全的重要措施。其具有理想的布局結構、標準的風向設置、嚴謹?shù)姆雷o措施、簡明潔凈的外觀、合適的環(huán)境條件與參數(shù)等。它具體包括建設好“3個實驗區(qū)”（試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)和PCR擴增區(qū)及其各自緩沖區(qū)）和“3個系統(tǒng)”（單向氣流控制系統(tǒng)、單向物品傳送系統(tǒng)、生物安全控制系統(tǒng)）。對于人員管理，首先應制定一系列規(guī)章制度。檢驗人員要嚴格遵守操作規(guī)程，制定日常工作中的質量控制流程，嚴格執(zhí)行查對制度和考核制度，具有實事求是的工作作風。檢驗人員必須滿足以下條件：

（1）經(jīng)有資質的單位培訓，考試合格取得上崗證后持證上崗。（2）專業(yè)主管為本科以上學歷和中級以上職稱3a以上工作經(jīng)歷。（3）工作人員須有專業(yè)技術職稱。

（4）培訓單位須由省衛(wèi)生廳指定，經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認可。

2、實驗室操作規(guī)程的規(guī)范化建立符合當今實驗室的管理模式，形成管理文件，包括質量手冊、質量體系程序文件和標準操作程序（SOP）等。質量手冊主要包括目錄、批準頁、前言、質量方針、組織結構、人員管理、實驗室設施環(huán)境、儀器設備、生物防護措施、標準操作程序、標本管理、記錄、報告、應急處理及實驗室的工作制度等。SOP文件是最具體、最具可操作性，也是使用頻率最高的文件，其精髓就是使所有與實驗室檢驗質量有關的環(huán)節(jié)都有章可循，要讓每一個操作人員都了解并嚴格遵照執(zhí)行管理制度和標準操作程序。此外，所有實驗的原始資料均應存檔；所有的記錄均應規(guī)范登記在冊；原始登記表應記錄試劑來源、批號，質控血清的來源及測定值，并注明是否在控；檢驗者及審核者應簽名。如果實驗結果對臨床診斷有決定意義，其樣本應留存，至少要與病歷的保存期一致。規(guī)范化的管理和操作保證了實驗結果的準確性和可靠性，而且便于各項數(shù)據(jù)資料的核實。

三、臨床定量PCR實驗室的質量控制

PCR技術自Mullis創(chuàng)立以來廣泛應用于多種疾病檢測，但PCR測定不同于一般臨床檢測，由于其靈敏性很高，即使有極少量DNA污染也會造成假陽性，因此對實驗條件要求非常嚴格。檢驗者在操作過程中必需牢固樹立“無基因觀念”，嚴格操作規(guī)程，防止一切可能的污染，包括以前的擴增產物、天然基因組DNA、試劑配置、氣溶膠、實驗所用的器具等。一旦發(fā)生污染，實驗即不能進行，而且查找污染源非常困難，因此避免發(fā)生污染重在預防，并貫穿于PCR檢測的全過程。因此質量控制在PCR檢測過程中尤為重要。

室內質量控制室內質量控制是指一個實驗室內（藎藎下轉第87頁藎藎）部對所有影響質量的各個環(huán)節(jié)進行系統(tǒng)控制。目的是控制本試驗室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。臨床PCR實驗室應開展所有檢驗項目的室內質量控制，并做好記錄和分析[5]。PCR檢測包括標本采集、核酸提取、基因擴增、產物檢測等步驟，每個步驟都應有相應的質控措施。其中最關鍵的是標本采集和核酸提取，按照衛(wèi)生部臨床檢驗中心《臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范》嚴格執(zhí)行。室內質控貴在堅持，重在不斷總結提高。3.2室間質量評價室間質量評價是實驗室質量控制體系中的重要部分，是保證患者檢驗結果及其報告的準確性和可靠性，以及各實驗室間結果可比性的重要手段。衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的全國性室間質量評價活動現(xiàn)已擴展到細菌、免疫、血液、體液、治療藥物監(jiān)測、分子診斷等領域。臨床PCR實驗室應積極參加省、市及衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的各項活動，如實驗室室間質量評價、質量評價總結會議、研討會和學習班，各醫(yī)院間相互學習、溝通和交流，不斷改進和完善本實驗室的質量管理。實事求是地匯報室間質評結果，認真地研究反饋的評價信息。接受衛(wèi)生部或省臨檢中心的現(xiàn)場調查，如果1個質評項目連續(xù)2次成績不合格，整改并停止項目收費3個月。及時發(fā)現(xiàn)問題，做好失控分析和記錄，找出問題所在，采取相應措施，力求實驗室結果準確、可靠、及時、可比，更好地服務于臨床。

隨著PCR實驗室管理方法的不斷完善，新試劑盒的相繼推出，實驗室設備的改良及實驗方法的不斷改進，定量PCR技術已經(jīng)發(fā)展成為日益強大和用途廣泛的技術。此外，PCR技術不同于常規(guī)的檢驗技術，必須按照PCR實驗室的一系列要求開展工作才能保證操作的安全性和結果的可靠性?？梢灶A計，PCR技術將會給臨床醫(yī)學檢驗方法帶來一場巨大的變革，并逐步進入我國衛(wèi)生機構的各級實驗室，更好地為臨床某些疾病的早期診斷和治療提供服務。

第二篇：臨床中PCR擴增的實驗室設計

臨床基因擴增（PCR）實驗室設計

★

介紹了什么叫做基因擴增實驗室以及基因擴增實驗室是如何保證實驗結果的安全性和可靠性的。并從平面布置、通風空調系統(tǒng)設計、污染的預防與控制幾個方面探討了基因擴增實驗室設計的主要特點和應注意的問題。

★概述

臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗，是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內所含的基因進行擴增的方法，測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點，因此被臨床醫(yī)生廣為認可，已廣泛應用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是，這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視，因為它對檢測結果的可靠性、準確性和安全性起到至關重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局，空調通風系統(tǒng)設計、氣流控制和污染的防制幾個方面對實驗室設計中的主要特點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核心問題是如何避免污染。因此，實驗室的平面布局、空調通風系統(tǒng)設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。

PCR實驗室平面布局

臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。

實驗室通風空調系統(tǒng)設計及壓力控制

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。1.試劑貯存和準備區(qū)

該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內，并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。2.標本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)內不必要的走動。

3.擴增反應混合物配制和擴增區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。4.擴增產物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設。

本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。

污染的預防與控制

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應是預防，而不是排除。1.工作區(qū)域的嚴格劃分

（1）各個實驗區(qū)域設置合理；

（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標記（如，醒目的門牌或不同的地面顏色等），以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。2.合理的系統(tǒng)設置

（1）合理的空調通風系統(tǒng)設置，盡量采用全送全排的空調系統(tǒng)；（2）嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內不同的壓力要求。3.規(guī)范的操作（1）臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓，經(jīng)培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；

（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；

（3）清潔工作及時、正確。實驗工作結束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。4.嚴格的管理

（1）嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；

（2）在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服（如，不同顏色），當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域；

（3）盡量減少在實驗區(qū)內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。（4）擴增產物分析區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；

（5）擴增產物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質，應特別注意實驗人員的安全防護。

5.完備的實驗室配套設施

完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據(jù)各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如，超凈工作臺、離心機、加樣器等。

第三篇：PCR實驗室設計及建設要求-SLD中檢實驗室技術

PCR實驗室設計及建設要求

PCR實驗指的是基因擴增實驗，其特點是能將微量的DNA大幅增加，是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法，PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領域，例如：乙型肝炎，禽疫病、艾滋病檢測，癌基因的檢測和診斷，個體識別，DNA指紋，親子鑒定及法醫(yī)物證等等。SLD中檢實驗室技術就PCR實驗室設計和建設要求逐一給大家解釋：

一、PCR實驗室布局

1、PCR實驗室原則上分為：①試劑準備區(qū)；②樣品制備區(qū)；③擴增區(qū)；④擴增產物分析區(qū)，共四個單獨的工作區(qū)域。并設有專用走廊，各工作區(qū)域應設緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。

2、不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標志，不能直通，如果緊密連接，需安裝物品傳遞窗。

①試劑準備區(qū)和樣品制備區(qū)為擴增前區(qū)；

②擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)為為擴增后區(qū)，即從：試劑準備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴增室——產物分析室，不得逆向流動。

3、實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，不得逆向流動。

4、各工作區(qū)的頂部應該安裝紫外燈，紫外燈波長一般為254mm,配置要求為每20㎡一支40W的紫外燈。

二、實驗室各區(qū)功能及主要設備

1、試劑準備區(qū)：

①主要進行試劑的制備，分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)域。②試劑原材料必須貯存在本區(qū)內，并在本區(qū)內制備成所需的試劑。③本區(qū)主要設備有冰箱，天平，離心機，加樣器，振蕩器等。④本區(qū)對氣流壓力的控制，并沒有嚴格的要求，一般為+10Pa。

2、樣品制備區(qū)：

①主要進行樣品的保存，核酸提取，貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。

②本區(qū)主要設備有冰箱，生物安全柜，離心機，加樣器，振蕩器等。③本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染，壓力一般設計為+10Pa。

3、擴增區(qū)：

①主要進行DNA擴增項目。

②已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。

③本區(qū)主要設備有：冰箱，加樣器，離心機，擴增儀等。

④本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶從本區(qū)漏出，壓力一般設計為-25Pa。

4、擴增產物分析區(qū)： ① 主要進行擴增產物的測定。

②本區(qū)主要設備有加樣器，洗板機、酶標儀和水浴箱等。

③本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域，壓力一般設計為-25Pa。

三、PCR實驗室通風系統(tǒng)及壓力控制

①各區(qū)域之間應具備單間的實驗工藝流、氣流、物流與人流，形成單向流程的保護屏障。避免實驗室之間的相互干擾，也防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

②PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴格控制送風、排風的比例，以保證整個實驗區(qū)的壓力要求。

四、PCR實驗室裝飾

①實驗室圍護結構應牢固，氣密性好;②所有陰陽角宜采用圓弧過度;③墻體內壁光潔，不積塵、易清洗、易消毒、耐腐蝕;④地面使用環(huán)氧樹脂自流坪或PVC卷材，材料應滿足光潔、耐腐蝕、無縫隙、無滲漏的基本要求。

五、PCR實驗室注意事項

1、區(qū)域大小設置：樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應大一些。而試劑準備區(qū)，擴增區(qū)，擴增產物分析區(qū)，空間可以相對小一些。

2、應急裝置配備：試劑準備區(qū)，樣品制備區(qū)應設緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。

以上內容是SLD中檢實驗室技術給各位分享的PCR實驗室設計及建設要求的內容，想要了解更多實驗室規(guī)劃設計、建設施工、運營管理、認證/認可等知識，請繼續(xù)關注SLD中檢實驗室官方網(wǎng)站的最新資訊。

第四篇：301醫(yī)院 PCR實驗室建設說明

301中國人民解放軍總院臨床藥學 實驗室工程裝飾設計施工說明

一、工程概況

本工程為301中國人民解放軍總院臨床藥學實驗室改造工程,本工程位于門診大樓后側1層,本工程包括:上部PCR凈化區(qū)、下側試劑存儲準備區(qū)全面改造。及相鄰輔房裝飾、通風改造,具體施工范圍參見裝飾圖紙。凈化區(qū)墻板采用50厚巖棉夾芯彩鋼板圍護結構,配以凈化鋁合金附;頂板為50厚單面玻鎂手工彩鋼板吊頂?shù)讟烁?.5米;地面為2mn厚PVC地板。輔房吊頂為600×600礦棉板吊頂,墻體做粉刷處理。

二、設計依據(jù)

1、《醫(yī)疔機枘臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》(2010修訂)

2、《潔凈室施工及驗收規(guī)范》(GB5059591-2010)

3、《潔凈廠房設計規(guī)范》(GB50073-2013)

4、《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》(GB50346-2011)

5、甲方提供的相關圖紙及甲乙方雙方所簽訂的合同

三、施工材料要求

1、對工程所用的各種材料、設備、配件要根據(jù)設計及用料表進行反復核對、檢查,對不符合要求的材料、設備、配件要及時更換，杜絕不耐用及質量達不到技術要求的材料、設備及配件用到工程中去

2、各種材料進廠后,要按照其不同的規(guī)格及使用順序分別存放。材料存放地要避免妨礙工程的順利施工。要注意防瀨、防損、防盜。

四、墻內裝飾,吊頂,豎板

1、放樣前應復核土建結構的實際尺寸，并對照圖紙檢查與圖紙不符合的地方,以便作出相應的調整。要求沒單間的尺寸偏差單面墻長度小于5米的不應大于5‰,單面墻長度大于5m的不應大于3%。

2、地槽鋁底座處須緊貼地面,與放樣線尺寸不大于3m。如因地面不平而造成地槽鋁不能緊貼地面時,應在地槽鋁下加墊片處理。地槽鋁每隔800-1000mm.用鋼釘或用射釘槍進行固定。確保地槽鋁縱橫對接處達到90度,以保證兩塊立板的互相垂直,并進而保證圓弧線安裝緊密

3、墻板的安裝要求平整、嚴密,板與板之間的連接縫隙控側在3mm之內,并保證每單間房的墻板縫隙各板之間一致，墻板上下一致。墻角垂直交接,墻板的垂直偏差不大于2‰。每一面墻的墻板立完后,應將全部墻板進行拉線校正,保證每塊墻板的高度一致在安裝好垂直交接的墻板后,應及時地用圓弧底座將垂直交接的墻板固定好。圓弧線底座每隔250-300m)用自攻螺絲進行固定。

4、頂板安裝應在墻板主體基本完成后進行。頂板與墻板的連接要平整、嚴密,加載符合后,應保持平整。如頂板的跨度較大,則應用吊筋加固。頂板吊直徑為8-10m.吊)的安裝應根據(jù)現(xiàn)場的實際,靈活安裝。如現(xiàn)場實際不允許使用吊筋,吊掛加固也可用8-10號多股鐵絲代替。

五、窗、門鋁合金的安裝

1、門、窗所采用的密封膠條均采用優(yōu)質膠條。不得使用老化無彈性、易折斷的劣質膠條密封用膠采用硅玻璃脈及優(yōu)質密封膠。

2、成品鋼制凈化密閉門到達現(xiàn)場后,需確認外觀完整度、門體嚴密性后,放置于指定區(qū)城安裝前確認核實門體開啟方向,依據(jù)設定編號順次安裝。

3、在墻板、頂板安裝完畢后,應在開孔安裝風口、燈具的同時,安裝R50圓弧線。圓弧線的兩邊應緊貼墻板和頂板。兩條圓弧線之間應連接緊密,不得留有縫隙,各處陰角均用三維角過渡,各處陽角均用R50圓角過渡;地面圓弧線的門縫用大的,實驗室區(qū)城上下有地圓線。

4、所用開孔位置應考慮開孔是否適應生產的需要,風口、燈具距離是否保持對稱美觀。

5、用專用工具在放樣位量開孔，開孔放置上下偏差。所有正、長方形的開孔均用鋁型材收邊。收邊的型材角均為45度。

6、風口、燈具安裝時,應保持四周平整,結合嚴密。各類管道、線管進入潔凈區(qū)域,其密封處理嚴密可靠。

7、在揭掉彩鋼板保護膜前,應對房間進行清掃,除塵。待除塵完畢后,開始揭掉保護膜。清理撕下的薄膜及一切多余物,再次進行嚴格的清掃和擦洗。

8、彩鋼板安裝完成后,應進行打膠密封工作,打膠前應對需嵌填位的表面和間槽,進行嚴格清理,除去雜質、油污確保粘貼密實。打膠先打頂板上部,待上部拼縫完成后,再進行下部及墻板與各角的打膠。

六、地面

1、本工程凈化區(qū)地面為2mm厚PVC地板。

2、維護和保養(yǎng):嚴禁帶釘?shù)男釉诘孛嫔闲凶?嚴禁硬物,硬件在地面上刻劃;

七、其他

1本工程均以毫米(mm)計算單位

2、本工程所用材料,規(guī)格,質量,施工要求及驗收標準均應符合國家有關施工及設計標準

3、圖中未盡事宜請參照國家現(xiàn)行施工安裝驗收規(guī)范執(zhí)行。

附：工程圖紙

第五篇：標準的PCR實驗室建設方案

標準的PCR實驗室建設方案

發(fā)布時間： 2009-11-5 10:15:17

一、主體結構

主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金50內圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。

二、標準的三區(qū)分隔和氣壓調節(jié)

將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調節(jié)，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環(huán)境的污染。

可打開緩沖區(qū)Ⅰ，緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調的回風口，空氣通過回風口向室內換氣。

三、消毒

在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。

在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū) 還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。

四、機械連鎖不銹鋼傳遞窗

試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。

五、地面

地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm。

六、照明

燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的特點。

在建設的過程中應注意：

（1）規(guī)范的安裝流程和全面的服務流程。

（2）嚴格按照規(guī)范科學設計的安裝流程。

（3）安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進線位置，電話網(wǎng)絡線進線位置，進水水壓，最小安裝空間，地面平整度，通風孔、進水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的空間尺寸和通風口尺寸。

臨床基因擴增（PCR）實驗室設計探討

發(fā)布時間： 2009-4-10 10:39:25

簡介： 介紹了什么叫做基因擴增實驗室以及基因擴增實驗室是如何保證實驗結果的安全性和可靠性的。并從平面布置、通風空調系統(tǒng)設計、污染的預防與控制幾個方面探討了基因擴增實驗室設計的主要特點和應注意的問題。

關鍵字：基因擴增 基因擴增實驗室

相關站中站： 潔凈實驗室/生物實驗室概述

臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗，是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內所含的基因進行擴增的方法，測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點，因此被臨床醫(yī)生廣為認可，已廣泛應用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是，這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設越來越得到重視，因為它對檢測結果的可靠性、準確性和安全性起到至關重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局，空調通風系統(tǒng)設計、氣流控制和污染的防制幾個方面對

實驗室設計中的主要特點進行了闡述。

臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核心問題是如何避免污染。因此，實驗室的平面布局、空調通風系統(tǒng)設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。2 PCR實驗室平面布局

臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)。

各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。PCR實驗室平面布置示意圖如圖1所示。

圖1 PCR實驗室平面布置示意圖 3 實驗室空調通風系統(tǒng)設計及壓力控制

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。3.1 試劑貯存和準備區(qū)

該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內，并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。

對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求。3.2 標本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)內不必要的走動。3.3 擴增反應混合物配制和擴增區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內進行。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。3.4 擴增產物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設。本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。4 污染的預防與控制

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應是預防，而不是排除。4.1 工作區(qū)域的嚴格劃分

（1）各個實驗區(qū)域設置合理；

（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等），以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2 合理的系統(tǒng)設置

（1）合理的空調通風系統(tǒng)設置，盡量采用全送全排的空調系統(tǒng)；

（2）嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內不同的壓力要求。4.3 規(guī)范的操作

（1）臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓，經(jīng)培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；

（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；

（3）清潔工作及時、正確。實驗工作結束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。4.4 嚴格的管理

（1）嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；

（2）在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服（如不同顏色），當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域；

（3）盡量減少在實驗區(qū)內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。

（4）擴增產物分析區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；

（5）擴增產物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質，應特別注意實驗人員的安全防護。4.5 完備的實驗室配套設施

完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據(jù)各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈工作臺、離心機、加樣器等。