第一篇：環(huán)境微生物學(xué)

一．緒論

1）微生物：微生物是肉眼看不見(jiàn)的，必須在電子顯微鏡或光學(xué)顯微鏡下才能看見(jiàn)的所有微小生物的總稱。

2）微生物的特點(diǎn)：1個(gè)體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細(xì)胞核，原核微生物只有擬核。第一章

4）病毒：病毒是沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，專性寄生在活的敏感宿主體內(nèi)的超微小生物。

5）病毒的特點(diǎn)：只能在電子顯微鏡下看見(jiàn)。沒(méi)有核糖體，沒(méi)有酶系統(tǒng)，不具備代謝能力，必須專性寄生在活的敏感宿主細(xì)胞內(nèi)。

6）病毒的分類：按專性宿主分類：動(dòng)物病毒，植物病毒，細(xì)菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。按核算分類：DNA病毒，RNA病毒。7）類病毒：類病毒是比病毒更加小的致病感染因子。

8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質(zhì)感染顆粒）。9）病毒的繁殖過(guò)程：1吸附2侵入3復(fù)制與聚集4宿主細(xì)胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，隨即引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。溫和噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復(fù)制，宿主細(xì)胞不裂解而繼續(xù)生長(zhǎng)，不引起宿主細(xì)胞裂解。含有溫和噬菌體宿主細(xì)胞被稱作溶原細(xì)胞。溶原細(xì)胞內(nèi)的溫和噬菌體核酸，稱為原噬菌體。

11）噬菌體：噬菌體是感染細(xì)菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。第二章

12）細(xì)菌的形態(tài)：球狀，桿狀，螺旋狀和絲狀。分別稱為球菌，桿菌，螺旋菌和絲狀菌。13）細(xì)菌：一大類細(xì)胞核無(wú)核膜包裹，只存在稱作擬核區(qū)的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物。14）細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：細(xì)菌為單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所有的細(xì)菌均有如下結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。部分細(xì)菌有特殊結(jié)構(gòu)：芽孢，鞭毛，莢膜，黏液層，衣鞘及光合作用片等。

15）細(xì)胞壁：細(xì)胞壁是包圍在細(xì)菌體表最外層的，堅(jiān)韌而有彈性的薄膜。16）原生質(zhì)體：原生質(zhì)體包括細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。

17）細(xì)胞質(zhì)膜：細(xì)胞質(zhì)膜是緊貼在細(xì)胞壁的內(nèi)側(cè)而包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的膜。（半滲透膜），含有蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和多糖。脂質(zhì)是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。18）細(xì)胞質(zhì)膜的生理功能：1,維持滲透壓的梯度和溶質(zhì)的轉(zhuǎn)移2，膜上含有合成細(xì)胞壁和形成橫膈膜組分的膜，故在膜的外表面合成細(xì)胞壁3，膜內(nèi)的中間體含有細(xì)胞色素，參與呼吸作用。4，細(xì)胞質(zhì)膜上含有酶，進(jìn)行物質(zhì)代謝和能量代謝5，細(xì)胞質(zhì)膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長(zhǎng)出，為鞭毛提供附著點(diǎn)。19）核糖體;合成蛋白質(zhì)

20）擬核：細(xì)胞的核因沒(méi)有核膜和核仁，故稱為原始核或擬核。21）鞭毛：有細(xì)胞質(zhì)膜上的鞭毛基粒長(zhǎng)出穿過(guò)細(xì)胞壁伸向體外的一條纖細(xì)的波浪狀的絲狀物叫鞭毛。

22）細(xì)菌的染色方法簡(jiǎn)單染色法和復(fù)合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無(wú)菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。2用草酸銨結(jié)晶紫染色1MIN，水洗去掉浮色。3用碘-碘化鉀溶液媒染1MIN，傾去多余染液。4用中性脫色劑如乙醇或丙醇脫色，革蘭氏陽(yáng)性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無(wú)色。5，用番紅溶液復(fù)染1MIN，革蘭氏陽(yáng)性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。24）革蘭氏染色的機(jī)制：1）革蘭氏染色與細(xì)菌等電點(diǎn)有關(guān)系：革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)比革蘭氏陰性菌的等電點(diǎn)低，說(shuō)明革蘭氏陽(yáng)性菌帶的負(fù)電荷比革蘭氏陰性菌多。革蘭氏陽(yáng)性菌的等電點(diǎn)低，與草酸銨結(jié)晶紫結(jié)合的牢固，對(duì)乙醇脫色抵抗力強(qiáng)，所以革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。2，革蘭氏染色與細(xì)胞壁有關(guān)：革蘭氏陽(yáng)性菌的脂質(zhì)的含量很低，肽聚糖含量高，革蘭氏陰性菌則相反，因此用乙醇脫色時(shí)革蘭氏陰性菌的脂質(zhì)被乙醇溶解，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的孔徑和通透性，乙醇很易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)將結(jié)晶紫和碘-碘化鉀復(fù)合物提取出來(lái)，噬菌體呈現(xiàn)無(wú)色。3,*革蘭氏陽(yáng)性菌含特殊的RNA-Mg2+鹽與革蘭氏染色有關(guān)。25）放線菌：放線菌因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。分為三類營(yíng)養(yǎng)菌絲，氣生菌絲，孢子絲。

26）放線菌的結(jié)構(gòu)：放線菌的菌體由纖細(xì)的，長(zhǎng)短不一的菌絲組成，菌絲分枝，為單細(xì)胞，在菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中，核物質(zhì)不斷復(fù)制分裂，然后細(xì)胞不形成橫膈膜，也不分裂，而是無(wú)數(shù)分枝的菌絲組成很細(xì)密的菌絲體。第三章

27）原生動(dòng)物：原生動(dòng)物是動(dòng)物中最原始，最低等，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的單細(xì)胞動(dòng)物。28）原生動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)類型：1全動(dòng)性營(yíng)養(yǎng)2植物性營(yíng)養(yǎng)3腐生性營(yíng)養(yǎng)

29）原生動(dòng)物的繁殖：有性生殖和無(wú)性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動(dòng)物的作用：所有原生動(dòng)物在污水生物處理過(guò)程中都起著指示生物的作用。31）主要的原生動(dòng)物：P71 32）微型后生動(dòng)物：原生動(dòng)物以外的多細(xì)胞動(dòng)物叫后生動(dòng)物。因有些后生動(dòng)物體型微小，要借助光學(xué)顯微鏡方可看得清楚，故叫微型后生動(dòng)物。33）藻類的繁殖;有性生殖和無(wú)性生殖。P84 34）真菌：真菌屬低等生物，種類繁多，形態(tài)，大小各異，包括酵母菌，霉菌及各種傘菌。真菌屬真核微生物，有單細(xì)胞和多細(xì)胞之分。

35）酵母菌：酵母菌是單細(xì)胞真菌。分發(fā)酵型和氧化型兩種。氧化型的酵母菌則是無(wú)發(fā)酵能力或發(fā)酵能力弱而氧化能力強(qiáng)的酵母菌。球擬酵母菌，白色假絲酵母菌，類酵母的阿氏囊霉屬，短梗霉屬在石油加工業(yè)中起積極作用，如石油脫蠟，降低石油的凝固點(diǎn)等。處理廢水及用酵母菌檢測(cè)重金屬。

36）酵母菌的繁殖：有性生殖和無(wú)性生殖（芽生殖和裂殖)37）霉菌：分為腐生和寄生

38）霉菌的繁殖：有性孢子和無(wú)性孢子繁殖，也可借助菌絲的片段繁殖。39）傘菌：無(wú)毒的有機(jī)廢水可用于培養(yǎng)食用菌的菌絲體。40）酶：酶是由細(xì)胞產(chǎn)生的，能在體內(nèi)或體外起催化作用的一類具有活性中心和特殊構(gòu)想的生物大分子。

41）酶的分類：化學(xué)組分；單成分酶（只含有蛋白質(zhì)）和全酶（蛋白質(zhì)及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時(shí)存在起作用）

42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物2酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子

43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶類，裂解酶類，異構(gòu)酶類和合成（連接）酶類。

44）酶的反應(yīng)通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2

轉(zhuǎn)移酶類：AR+B=A+BR

水解酶類：AB+H2O=AOH+BH

裂解酶類：AB=A+B

異構(gòu)酶：---------葡萄糖=果糖（例）

合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi

或

A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質(zhì)）3酶的催化反應(yīng)條件溫和4酶對(duì)環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高

46）酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程式：

E酶S底物ES中間產(chǎn)物P最終產(chǎn)物

47）酶的濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：下圖

48)底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P116 49)溫度對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：上圖 50)PH對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：P117 51)激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：凡能激活酶的物質(zhì)稱酶的激活劑。分為無(wú)機(jī)離子激活劑和有機(jī)化合物兩類。

52)抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速率的影響：引起抑制作用的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。抑制作用是指由于某些物質(zhì)與酶的活性部位結(jié)合。分為不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。

53)培養(yǎng)基;根據(jù)各種微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需要，包括水，碳源，能源，氮源，無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子等按一定的比例配置而成的，用以培養(yǎng)微生物的基質(zhì)，稱為培養(yǎng)基。

54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營(yíng)養(yǎng)物的濃度及配比3調(diào)PH值4考慮加生長(zhǎng)因子5培養(yǎng)基物美價(jià)廉

55)培養(yǎng)基的種類：按培養(yǎng)基組成物的性質(zhì)分類：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基），復(fù)合培養(yǎng)基。按物理性質(zhì)分為;液體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基對(duì)微生物的功能和用途不同：選擇培養(yǎng)基，鑒別培養(yǎng)基，加富培養(yǎng)基。56)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入微生物細(xì)胞的方式：?jiǎn)渭償U(kuò)散，促進(jìn)擴(kuò)散，主動(dòng)運(yùn)輸，基團(tuán)轉(zhuǎn)位

57)單純擴(kuò)散：?jiǎn)渭償U(kuò)散是物理過(guò)程，不包括細(xì)胞的主動(dòng)代謝。雜亂運(yùn)動(dòng)的，水溶性的溶質(zhì)分子（水，無(wú)機(jī)鹽，O2，CO2）通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜中含水的小孔從高濃度區(qū)向低濃度區(qū)擴(kuò)散，不與膜上的分子發(fā)生反應(yīng)，這種擴(kuò)散是非特異的，擴(kuò)散速度慢。

58)促進(jìn)擴(kuò)散：細(xì)胞膜上的載體蛋白分子有和被運(yùn)輸物質(zhì)特異結(jié)合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質(zhì)結(jié)合，形成的底物-載體蛋白復(fù)合體，便從高濃度向低濃度區(qū)域擴(kuò)散或越膜。由于被運(yùn)輸物質(zhì)的濃度在膜的內(nèi)表面較低，所以復(fù)合體傾向解離，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)就留在細(xì)胞內(nèi)，而載體回到膜的外表面，只要存在需要運(yùn)輸物質(zhì)的越膜濃度梯度，這個(gè)過(guò)程就將繼續(xù)進(jìn)行，從而加快了物質(zhì)的運(yùn)輸速度。不消耗能量。

59)主動(dòng)運(yùn)輸：當(dāng)微生物細(xì)胞內(nèi)積累的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度高于細(xì)胞外的濃度時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)就不能按濃度梯度擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)，而是逆濃度梯度被“抽”進(jìn)細(xì)胞內(nèi)。這一過(guò)程需要滲透酶和消耗能量。滲透酶在此過(guò)程中起改變平衡點(diǎn)的作用，這種需要能量和滲透酶的逆濃度梯度積累營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程。60)基團(tuán)轉(zhuǎn)位：基團(tuán)轉(zhuǎn)位是存在于某些原核生物中的一種物質(zhì)運(yùn)輸方式。與主動(dòng)運(yùn)輸相比，有一個(gè)復(fù)雜的運(yùn)輸系統(tǒng)，被運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)發(fā)生了化學(xué)變化，主要用于糖的運(yùn)輸，運(yùn)輸總效果與主動(dòng)運(yùn)輸相似，可以逆濃度梯度將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)移向細(xì)胞內(nèi)，結(jié)果使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的物質(zhì)濃度大大超過(guò)未改變結(jié)構(gòu)的同類物質(zhì)的濃度。需要代謝能量。61)微生物的能量代謝：P135-P150

62）微生物的生長(zhǎng)：微生物在適宜的環(huán)境條件下，不斷吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，按照自己的代謝方式進(jìn)行新陳代謝活動(dòng)。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細(xì)胞質(zhì)量不斷迅速增長(zhǎng)，稱為生長(zhǎng)。

63）微生物的發(fā)育：從生長(zhǎng)到繁殖這個(gè)由量變到質(zhì)變的過(guò)程叫發(fā)育 64）代時(shí)：細(xì)菌兩次細(xì)胞分裂之時(shí)的時(shí)間。65）生長(zhǎng)曲線：

66)微生物的生存因子：微生物除了需要營(yíng)養(yǎng)外，還需要環(huán)境中合適的生存因子，例如：溫度，PH，氧化還原電位，溶解氧，太陽(yáng)輻射，活度與滲透壓，表面張力等。

67)根據(jù)微生物對(duì)溫度的最適生長(zhǎng)需求，可將微生物分為4大類：嗜冷菌，嗜中溫菌，嗜熱菌及嗜超熱菌。

68)大多數(shù)細(xì)菌，藻類和原生動(dòng)物的最適PH為6.5-7.5，他們對(duì)PH的適應(yīng)范圍為4-10。69)任何兩種濃度的溶液被半滲透膜隔開(kāi)，均會(huì)產(chǎn)生滲透壓。

70)微生物之間的關(guān)系：微生物之間的關(guān)系有種內(nèi)的關(guān)系和種間的關(guān)系。相同種內(nèi)的關(guān)系有競(jìng)爭(zhēng)和互助。不同種間關(guān)系有6種，競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，原始合作關(guān)系，共生關(guān)系，偏害關(guān)系，捕食關(guān)系，寄生關(guān)系。

71)競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系：競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系是指不同的微生物種群在同一環(huán)境中，對(duì)食物等營(yíng)養(yǎng)，溶解氧，空間和其他共同要求的物質(zhì)互相競(jìng)爭(zhēng)，互相收到不利影響。

72)原始合作關(guān)系：原始合作關(guān)系是指兩種可以單獨(dú)生活的生物共存于同一環(huán)境中，相互提供營(yíng)養(yǎng)及其他生活條件，雙方互為有利，相互受益。當(dāng)兩者分開(kāi)時(shí)各自可單獨(dú)生存。

73)共生關(guān)系：共生關(guān)系是指兩種不能單獨(dú)生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中，各自執(zhí)行優(yōu)勢(shì)的生理功能，在營(yíng)養(yǎng)上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關(guān)系就叫共生關(guān)系。74)偏害關(guān)系：共存于同一環(huán)境的兩種微生物，甲方對(duì)乙方有害，乙方對(duì)甲方無(wú)任何影響。一種微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，其中有的產(chǎn)物對(duì)一種（或一類）微生物生長(zhǎng)不利，或者抑制或者殺死對(duì)方。上述這種微生物與微生物之間的對(duì)抗關(guān)系叫偏害關(guān)系。分非特異性偏害和特異性偏害。

75)捕食關(guān)系：有的微生物不是通過(guò)代謝產(chǎn)物對(duì)抗對(duì)方，而是吞食對(duì)方，這種關(guān)系稱為捕食關(guān)系。

76)寄生關(guān)系：一種生物需要在另一種生物體內(nèi)生活，從中社區(qū)營(yíng)養(yǎng)才得以生長(zhǎng)繁殖，這種關(guān)系成為寄生關(guān)系。77)微生物在土壤中的分布：土壤中微生物的類群、數(shù)量與分布，由于土壤質(zhì)地發(fā)育母質(zhì)、發(fā)育歷史、肥力、季節(jié)、作物種植狀況、土壤深度和層次等等不同而有很大差異。土壤微生物中細(xì)菌最多，作用強(qiáng)度和影響最大，放線菌和真菌類次之，藻類和原生動(dòng)物等數(shù) 量較少，影響也小。土壤中微生物的水平分布取決于碳源。土壤中微生物的垂直分布與紫外輻射的照射，營(yíng)養(yǎng)，水，溫度等因素有關(guān)。78)遺傳和變異是一切生物最本質(zhì)的屬性。

79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中形成的系統(tǒng)。80)遺傳可改變的一面是變異

81)遺傳是相對(duì)的，變異是絕對(duì)的。82)遺傳和變異的物質(zhì)基礎(chǔ)DNA：P203 83)基因突變：基因突變即微生物的DNA被某種因素引起堿基的缺失，置換或插入，改變了基因內(nèi)部原有的堿基排列順序，從而引起其后代表現(xiàn)型的改變。當(dāng)后代突然變現(xiàn)和親代顯然不同的，能遺傳的性狀時(shí)，就稱為突變。

84)自發(fā)突變：自發(fā)突變是指某種微生物的自然條件下，沒(méi)有人工參與而發(fā)生的基因突變。原因有多因素低劑量的誘變效應(yīng)，互變異構(gòu)效應(yīng)。

85)誘發(fā)突變：誘發(fā)突變是利用物理或化學(xué)的因素處理微生物群體，促使少數(shù)個(gè)體細(xì)胞的DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，在基因內(nèi)部堿基配對(duì)發(fā)生錯(cuò)差，引起微生物的遺傳性狀發(fā)生突變。分物理誘變，化學(xué)誘變，復(fù)合處理及其協(xié)同效應(yīng)，定向培育和馴化。

86)基因重組：兩個(gè)不同形狀個(gè)體細(xì)胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發(fā)生遺傳變異，產(chǎn)生新品種，此過(guò)程稱為基因重組。

87)雜交;雜交是通過(guò)雙親細(xì)胞的融合，使整套染色體的基因重組；或者是通過(guò)雙親細(xì)胞的溝通，使部分染色體基因重組。

88)轉(zhuǎn)化：受體細(xì)胞直接吸收來(lái)自供體細(xì)胞的DNA片段，并把它整合到自己的基因組里，從而獲得了供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)象，成為轉(zhuǎn)化。

89)轉(zhuǎn)導(dǎo);通過(guò)溫和噬菌體的媒介作用，把供體細(xì)胞內(nèi)特定的基因攜帶至受體細(xì)胞中，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。

90)質(zhì)粒：質(zhì)粒在原核微生物中除有染色體外，還含有另一種較小的，攜帶少量遺傳基因的環(huán)狀DNA分子，稱為質(zhì)粒，也叫染色體外DNA。質(zhì)粒在基因工程中常被用作基因轉(zhuǎn)移的運(yùn)載工具-載體。

91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，又叫基因剪接或核酸體外重組?；蚬こ淌怯萌斯し椒ò阉枰哪骋还w生物的DNA提取出來(lái)，在離體的條件下用限制性內(nèi)切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長(zhǎng)度有幾千個(gè)核苷酸，用DNA連接酶把它和質(zhì)粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導(dǎo)入某一受體細(xì)胞中，以便外來(lái)的遺傳物質(zhì)在其中進(jìn)行復(fù)制，擴(kuò)增和表達(dá)，再進(jìn)行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對(duì)外源基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離提純，從而獲得新品種。92)基因工程操作分5步：1先從供體細(xì)胞中選擇獲取帶有目的基因的DNA片段（基因分離）； 2將目的DNA的片段和質(zhì)粒在體外重組；（體外重組）3將重組體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞（載體傳遞）；4重組體克隆的篩選與鑒定（復(fù)制表達(dá)）；5外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離與提純（篩選，繁殖）

93）天然淡水水體是人類生活和工業(yè)生產(chǎn)用水的水源，也是水生動(dòng)物和植物生長(zhǎng)繁殖的場(chǎng)所。

94）水體自凈過(guò)程;1有機(jī)污染物排入水體后被水體稀釋，有機(jī)和無(wú)機(jī)固體物沉降至河底。2水體中好氧細(xì)菌利用溶解氧把有機(jī)物分解為簡(jiǎn)單有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，并用以組成自身有機(jī)體，水中溶解氧急速下降至零，此時(shí)魚(yú)類絕跡，原生動(dòng)物，輪蟲(chóng)，浮游甲殼動(dòng)物死亡，厭氧細(xì)菌大量繁殖，對(duì)有機(jī)物進(jìn)行厭氧分解。3水體中溶解氧在異樣菌分解有機(jī)物時(shí)被消耗，大氣中的氧剛?cè)苡谒捅谎杆儆玫?，盡管水中藻類在白天進(jìn)行光合作用放出氧氣，但復(fù)氧速率小于耗氧速率，氧垂曲線下降。在最缺氧點(diǎn)，有機(jī)物的耗氧速率等于河流的復(fù)氧速率。再往下游的有機(jī)物減少，復(fù)氧速率大于耗氧速率，氧垂1曲線上升。如果河流不再被有機(jī)物污染，河水中溶解氧恢復(fù)到原來(lái)的水平，甚至達(dá)到飽和。4隨著水體的自凈，有機(jī)物缺乏和其他原因（例如陽(yáng)光照射，溫度，PH變化，毒物及生物的抗?jié)嵶饔玫龋┦辜?xì)菌死亡。據(jù)測(cè)定，細(xì)菌死亡數(shù)大約為80%-90%.95）碳循環(huán)：

96）脂質(zhì)的轉(zhuǎn)化：P274 97）氮循環(huán)：P278 98）顯微鏡的分辨率：指顯微鏡能分辨出物體兩點(diǎn)間的最小距離

分辨力=0.61xλ/N.A.計(jì)算題

采用目鏡為16X，物鏡為40/0.65的光學(xué)系統(tǒng)，直徑為0.3μm的微生物在顯微鏡下是否可分辨 解：

分辨率=0.61xλ/N.A.由題目知：N.A.=0.65

λ=0.55

分辨率=0.61x（0.55/0.65）=0.516μm>0.3μm

不可分辨

第二篇：環(huán)境微生物學(xué)總結(jié)。

古細(xì)菌：無(wú)胞壁酸。真細(xì)菌：有胞壁酸。G+G-。真核生物：幾丁質(zhì)

細(xì)菌包括不變部分、可變部分 細(xì)菌細(xì)胞壁：肽聚糖 細(xì)胞壁功能：○維持保護(hù)細(xì)胞形狀 ○細(xì)胞壁化學(xué)成分的差異可使不同的細(xì)菌具有抗原性、致病性和對(duì)噬菌體的敏感性 ○細(xì)胞壁有通道可以允許水和空氣、小分子化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入，大分子不能進(jìn)入 ○細(xì)胞壁是鞭毛運(yùn)動(dòng)的力學(xué)支點(diǎn)

革蘭氏染色法

G+（深紫色）細(xì)胞壁：磷壁酸 1234狀態(tài)時(shí)開(kāi)啟操縱子的表達(dá)。基因突變：由于DNA鏈上的1對(duì)或少數(shù)幾對(duì)堿基被另1個(gè)或少數(shù)堿基對(duì)取代發(fā)生改變的突變類型。

突變類型：形態(tài)突變型、生化突變型（營(yíng)養(yǎng)缺陷型、抗性突變型、抗原突變型）、致死突變型，條件致死突變型。

基因突變的機(jī)理：1.自發(fā)突變：不對(duì)應(yīng)性、自發(fā)性、稀有性、獨(dú)立性、誘變性、穩(wěn)定性、可逆性；2.誘發(fā)突變：堿基置換、移碼突變、染色體畸變。的生化過(guò)程，但影響該過(guò)程是否產(chǎn)生及其活性強(qiáng)度。

芳香族化合物降解基因的遺傳定位有3種類型：1.質(zhì)粒編碼降解途徑的一部分，染色體編碼剩余部分2.質(zhì)粒與染色體分別編碼不同途徑的酶3.某些特殊無(wú)知的講解由質(zhì)粒編碼，另一些菌種同樣的降解途徑則由染色體編碼。

一般微生物位于染色體上的性狀比較穩(wěn)定，而位于質(zhì)粒上的性狀則很容易在不同的菌之間進(jìn)行水平轉(zhuǎn)移，使得降解基因在不同菌株之間擴(kuò)散，有G-（紅色）

內(nèi)壁層、外壁層（脂多糖、脂蛋白）

原因：細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)和厚度不同，染色劑通透性和抗脫色能力不同

細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌：用溶菌酶處理,在培養(yǎng)基中加入青霉素阻止其細(xì)胞壁形成。

原生質(zhì)體：在G+加入溶菌酶、青霉素組織其細(xì)胞壁合成

原生質(zhì)球：G-加入溶菌酶、青霉素 細(xì)菌L-型：基因突變產(chǎn)生的無(wú)壁類型

周質(zhì)空間：細(xì)胞壁與細(xì)胞膜之間的空間，內(nèi)含質(zhì)外酶

中間體：類似于真核生物的線粒體 芽孢：度過(guò)不良環(huán)境的休眠體

伴孢晶體：在形成芽孢的同時(shí)，產(chǎn)生一顆菱形雙錐形的堿性蛋白晶體 細(xì)菌的繁殖：裂殖

酵母菌的繁殖：出芽繁殖

放線菌包括：基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲。放線菌的繁殖主要通過(guò)無(wú)性菌絲和菌絲片段進(jìn)行繁殖，分生孢子為主

藍(lán)細(xì)菌：芽生方式繁殖G-鐵細(xì)菌：鐵質(zhì)水管的腐蝕和堵塞引起的

極端嗜鹽高細(xì)菌群的條件：G-,T在35~50°，ph 5.5~8.5 極端嗜熱高細(xì)菌群的條件：T 45~110°,ph 1~3 真菌的繁殖與繁殖體：既有有性繁殖，又有無(wú)性繁殖（主要）

無(wú)性繁殖：○1菌絲體的斷裂片段可以產(chǎn)生新個(gè)體○2裂殖○3出芽繁殖○4孢子繁殖

無(wú)性孢子的類型：游動(dòng)孢子、孢囊孢子、分生孢子、節(jié)孢子、厚垣孢子、芽孢子。

擔(dān)子菌綱：主要產(chǎn)生擔(dān)孢子，菌絲可分為初生菌體、次生菌體和三生菌絲

原生動(dòng)物異氧型生活，以吞食細(xì)菌、真菌、藻類等有機(jī)體為食。

原生動(dòng)物有無(wú)性繁殖和有性繁殖。無(wú)性繁殖一般為二分裂。

亞病毒包括擬病毒、類病毒、朊病毒。朊病毒只含有蛋白質(zhì)。

烈性噬菌體：凡侵入宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制增值，導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。

烈性噬菌體的過(guò)程：吸附、侵入、復(fù)制、裝配、釋放。

溫和噬菌體：侵入宿主細(xì)胞后隨宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖而傳代下去，一般不引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。

微生物菌種保藏的原理：將微生物的菌種保存于不良環(huán)境中，是微生物的代謝速率極為緩慢或處于休眠狀態(tài)。而一旦恢復(fù)所保存菌種生長(zhǎng)的正常環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)條件，即可獲得具有高生理活性和保持原種優(yōu)良性狀的菌種培養(yǎng)物。

保藏方法：培養(yǎng)物傳代保藏法、干燥保藏法、低溫保藏法。

微生物的營(yíng)養(yǎng)類型：光能自養(yǎng)型（藻類、藍(lán)細(xì)菌）、光能異養(yǎng)型（紫色與綠色非硫細(xì)菌）、化能自養(yǎng)型、化能異養(yǎng)型。EMP：糖酵解 PP：磷酸戊糖 TCA：三羧酸循環(huán)

能量轉(zhuǎn)換：底物水平磷酸化、氧化磷酸化、光合磷酸化。

采用厭氧消化法處理高濃度有機(jī)廢水的原因：進(jìn)行發(fā)酵作用的厭氧微生物，需要大量的基質(zhì)才能滿足其生命活動(dòng)所需要的能量，因而其對(duì)基質(zhì)的轉(zhuǎn)化率較呼吸作用高。

微生物合成作用必須的三要素：小分子的前體物質(zhì)、能量、還原力。

分批培養(yǎng)的階段：遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期（出現(xiàn)芽孢）、衰亡期。

穩(wěn)定期特點(diǎn)：細(xì)胞增殖率與死亡率平衡、細(xì)胞總數(shù)不再增加、單位體積中細(xì)菌數(shù)目達(dá)到最高。連續(xù)培養(yǎng)：如果在細(xì)菌進(jìn)入對(duì)數(shù)期以一定得速度不斷補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)以同樣的速度排出培養(yǎng)物，就可以延長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的培養(yǎng)方法。

環(huán)境對(duì)微生物的影響：好氧微生物生長(zhǎng)的適宜的氧化還原電位值為0.3~0.4V，在0.1V以上即能生長(zhǎng)。厭氧微生物只能在0.1V以下甚至為負(fù)值時(shí)才能生長(zhǎng)。兼性厭氧微生物在0.1V以上時(shí)有氧呼吸，0.1V以下時(shí)無(wú)氧呼吸或發(fā)酵作用。

真核微生物含細(xì)胞器：葉綠體、線粒體、中心粒、毛基體。原核微生物含有質(zhì)粒（DNA）。

質(zhì)粒特性：可轉(zhuǎn)移性、可整合性、可重組性、可消除性。

根據(jù)酶量的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控機(jī)制分為正轉(zhuǎn)錄調(diào)控和負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控。負(fù)轉(zhuǎn)錄是當(dāng)調(diào)節(jié)蛋白處于激活狀態(tài)時(shí)關(guān)閉操縱子的表達(dá)；正轉(zhuǎn)錄是當(dāng)調(diào)節(jié)處于激活細(xì)菌接合：通過(guò)供體菌和受體菌完整細(xì)胞間性菌毛的直接接觸而傳遞大段DNA的過(guò)程。

轉(zhuǎn)導(dǎo)：通過(guò)缺陷型噬菌體的媒介，把供體細(xì)胞的DNA片段攜帶帶到受體細(xì)胞中，從而是后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象。轉(zhuǎn)化：受體菌接受供體菌的DNA片段，經(jīng)過(guò)交換將它組合到自己的基因組中，從而獲得了供體菌的部分遺傳性狀的現(xiàn)象。準(zhǔn)性生殖（半知菌）：是同種生物兩個(gè)不同菌株的體細(xì)胞發(fā)生融合，且不經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而導(dǎo)致低頻率基因重組并產(chǎn)生重組子?；蚬こ蹋河萌斯し椒ㄈ〉霉w菌DNA上的目標(biāo)基因，加以改造，在體外重組于載體DNA上，再導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)，使其轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)和復(fù)制，獲得供體基因的性狀，從而獲得大量的基因產(chǎn)物或使受體生物表現(xiàn)出新的表型。

基因工程的步驟：取得目的基因、選擇載體、目的基因與載體DNA的體外重組、重組載體引入受體細(xì)胞。根土比：是反映根圈效應(yīng)的重要指標(biāo)，一般在5~20之間。

水中細(xì)菌90%為革蘭氏陰性菌。（假單胞菌）嗜熱微生物分為：耐熱菌（45~55）、兼性嗜熱菌（50~65）、專心嗜熱菌（65~70）、極端嗜熱菌（70+）、超嗜熱菌（80~110）

嗜冷微生物分為：專性（不超過(guò)20）和兼性兩類。嗜酸微生物（PH 3~3.5）嗜堿微生物（PH>9）嗜鹽微生物（大多數(shù)海洋生物類別）

互生關(guān)系舉例：分解纖維素的細(xì)菌與固氮菌 共生關(guān)系舉例：地衣。

寄生關(guān)系舉例：噬菌體的寄生。拮抗關(guān)系舉例：毛霉抑制黑青霉。

微生物轉(zhuǎn)化氮素的一般途徑：

1、綠色植物和微生物的生命活動(dòng)過(guò)程中，吸收硝態(tài)氮和銨態(tài)氮，組成蛋白質(zhì)、核酸等 含氮有機(jī)物質(zhì)，使無(wú)態(tài)氮同化為有機(jī)態(tài)氮；

2、動(dòng)植物和微生物遺體中的有機(jī)氮化物，經(jīng)微生物的分解作用，使無(wú)機(jī)質(zhì)化為氨態(tài)氮（NH4-N）；

3、氨態(tài)氮在有氧條件下，經(jīng)硝化細(xì)菌的作 用氧化成硝態(tài)氮；

4、硝酸鹽由于反硝化細(xì)菌的作用，還原為 分子態(tài)氮，逸散到大氣中；

5、空氣中的分子態(tài)氮，通過(guò)固氮微生物的 作用，還原為氨，進(jìn)而合成有機(jī)氮化物。

1、氨化作用：有機(jī)氮化物在微生物的分解作用中釋放出氨的過(guò)程；

2、硝化作用：氨經(jīng)過(guò)微生物作用氧化成亞硝酸，再進(jìn)一步氧化成硝酸的過(guò)程；

3、反硝化作用：硝酸鹽在通氣不良情況下經(jīng)微生物作用而還原的過(guò)程。

參與尿素分解的微生物有脲芽孢八疊球菌。

各種固氮微生物，在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中均形成一種防氧保護(hù)機(jī)制。（根瘤菌在根瘤中被富含豆血紅蛋白的類菌體周膜所包圍，豆血紅蛋白課發(fā)揮氧氣緩沖劑的作用；有的固氮藍(lán)細(xì)菌能形成不能放氧氣的異形胞，固氮作用在其中進(jìn)行。）

生物轉(zhuǎn)化：通過(guò)微生物代謝導(dǎo)致有機(jī)或無(wú)機(jī)化合物的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生某種改變、生成新化合物的過(guò)程。

基質(zhì)的生化呼吸曲線：表示投加基質(zhì)后微生物的耗氧狀況，投加基質(zhì)后的耗氧量或耗氧速度隨時(shí)間變化關(guān)系的基質(zhì)呼吸線。

內(nèi)源呼吸線：不投加基質(zhì)的條件下，微生物處于內(nèi)源呼吸狀態(tài)是利用自體細(xì)胞物質(zhì)作為呼吸基質(zhì)，其耗氧量隨時(shí)間變化而變化繪制的曲線。由于在此情況下微生物的耗氧速度恒定不變，所以內(nèi)源呼吸線的耗氧量與時(shí)間呈直線關(guān)系。

微生物降解實(shí)驗(yàn)：土壤消毒實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)液中降解實(shí)驗(yàn)。

礦化作用：指有機(jī)污染物在一種或多種微生物的作用下徹底分解為H2O,CO2和簡(jiǎn)單無(wú)機(jī)化合物如含氮化合物、含磷化合物、含硫化合物和含氯化合物等的過(guò)程。

共代謝作用：一些難降解的有機(jī)化合物不能直接作為碳源或能源物質(zhì)被微生物利用，當(dāng)環(huán)境中存在其他可利用的碳源或能源時(shí)，難降解有機(jī)化合物才能被利用。

共代謝作用發(fā)生的情況：1.靠降解其他有機(jī)物提供能源2.靠其他微生物協(xié)同作用3,先經(jīng)別的物質(zhì)誘導(dǎo)。

微生物對(duì)石油的降解能力：烯烴最易分解，烷烴次之，芳烴難，多環(huán)芳烴更難，脂環(huán)烴類對(duì)微生物作用最不敏感。

共代謝作用及抑減效應(yīng)：有的烴類單獨(dú)存在時(shí)不能降解，但在石油混合物中則由于微生物利用其他烴類生長(zhǎng)而使該難降解烴在酶作用下降解。相反，也有抑減效應(yīng)存在，如醋酸鹽存在可抑制對(duì)十六烷的降解；十六烷存在時(shí)可抑減樸日斯烷的降解作用，其機(jī)理未明，此種效應(yīng)并不改變降解

利于微生物對(duì)不利環(huán)境的適應(yīng)。

微生物對(duì)農(nóng)藥的降解：有些微生物可以農(nóng)藥作為唯一碳源、能源，直接利用或通過(guò)產(chǎn)生誘導(dǎo)酶進(jìn)行降解；許多微生物通過(guò)共代謝作用使農(nóng)藥降解，結(jié)構(gòu)復(fù)雜的農(nóng)藥多靠此得以轉(zhuǎn)化消失。

有機(jī)磷農(nóng)藥較之有機(jī)氯農(nóng)藥容易降解得多。微生物降解這些殺蟲(chóng)劑的最常見(jiàn)反應(yīng)機(jī)制是脂酶水解過(guò)程。

擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥在環(huán)境中的降解方式有：水降解、光降解、生物降解。

塑料可被微生物作用，但分解速度極慢，屬于極難生物降解的頑固化合物。微生物主要是作用于塑料制品種所含的增塑劑。由于增塑劑代謝變化而使塑料物理性質(zhì)發(fā)生變化，但組成塑料聚合物的組分本身的化學(xué)性質(zhì)卻無(wú)改變。POPs：持久性污染物

污水一級(jí)處理：主要通過(guò)過(guò)濾、沉淀等物理方法去除污水中粗大固形物及部分懸浮物。二級(jí)處理：去除水中有機(jī)物。

三級(jí)處理：使各種有機(jī)和無(wú)機(jī)污染物去除率達(dá)98%以上

生物絮凝作用：在活性污泥形成初期，細(xì)菌多以游離態(tài)存在，隨著活性污泥成熟，細(xì)菌增多而聚集成菌膠團(tuán)，進(jìn)而形成活性污泥絮狀體。絮凝作用：形成活性污泥絮狀體的過(guò)程。

普通活性污泥發(fā)的工藝流程：污水→初沉池→曝氣池→二沉池→處理后出水

污泥沉降比：混合水樣靜置30min后，污泥體積占混合水樣體積的百分?jǐn)?shù)。

生物修復(fù)：利用微生物將存在于土壤、地下水和海洋等環(huán)境中的有毒、有害污染物降解為二氧化碳和水，或轉(zhuǎn)化為無(wú)害物質(zhì)。從而使污染生態(tài)環(huán)境修復(fù)為正常生態(tài)環(huán)境的工程技術(shù)體系。

革蘭氏染色機(jī)制:革蘭氏染色結(jié)果的差異主要基于細(xì)菌細(xì)胞壁的構(gòu)造和化學(xué)組分不同。通過(guò)初染和媒染，在細(xì)菌細(xì)胞膜或原生質(zhì)體上染上了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的大分子復(fù)合物。G+ 細(xì)菌由于細(xì)胞壁較厚、肽聚糖含量較高,故用乙醇洗脫時(shí)，肽聚糖層網(wǎng)孔會(huì)因脫水而收縮，再加上的G+ 細(xì)菌細(xì)胞壁基本上不含類脂，故乙醇處理不能在壁上溶出縫隙，因此，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物仍牢牢阻留在其細(xì)胞壁內(nèi)，使其呈現(xiàn)藍(lán)紫色。G-細(xì)菌因其細(xì)胞壁薄、肽聚糖含量低，故遇乙醇后，肽聚糖層網(wǎng)孔不易收縮，加上它的類脂含量高，所以當(dāng)乙醇將類脂溶解后，在細(xì)胞壁上就會(huì)出現(xiàn)較大的縫，這樣結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物就極易被溶出細(xì)胞壁。因此，通過(guò)乙醇脫色，細(xì)胞又呈現(xiàn)無(wú)色。這時(shí)，再經(jīng)番紅等紅色染料復(fù)染，使G-細(xì)菌變成紅色，而G+ 細(xì)菌則仍呈藍(lán)紫色。

為什么說(shuō)炎癥既是一種病理過(guò)程又是一種防御病原體入侵的積極的免疫反應(yīng)？

1、通過(guò)炎癥反應(yīng)可以聚集大量的吞噬細(xì)胞聚集在炎癥部位；

2、血流的加速使得血液中的抗菌因子以及抗體發(fā)生局部濃縮；

3、死亡的宿主細(xì)胞聚集可以釋放一部分抗菌物質(zhì)；

4、炎癥部位的鹽氧濃度下降和乳酸濃度提高，可以抑制多種病原體的生長(zhǎng)

5、炎癥部位的溫度升高可以降低某些病原體的繁殖速度。

藍(lán)細(xì)菌固氮酶的抗氧保護(hù)機(jī)制

藍(lán)細(xì)菌光照下會(huì)因光合作用放出的氧而使細(xì)胞內(nèi)氧濃度急劇增高

⑴分化出特殊的還原性異形胞:缺乏產(chǎn)氧光合系統(tǒng)Ⅱ,脫氫酶和氫化酶的活性高,維持很強(qiáng)的還原態(tài);SOD活性高,解除氧的毒害;呼吸強(qiáng)度高,可消耗過(guò)多的氧.⑵非異形胞藍(lán)細(xì)菌固氮酶的保護(hù): 能通過(guò)將固氮作用與光合作用進(jìn)行時(shí)間上的分隔來(lái)達(dá)到;通過(guò)束狀群體中央處于厭氧環(huán)境下的細(xì)胞失去能產(chǎn)氧的光合系統(tǒng) II,以便于進(jìn)行固氮反應(yīng);通過(guò)提高過(guò)氧化物酶和SOD的活性來(lái)除去有毒過(guò)氧化合物.

第三篇：學(xué)習(xí)《環(huán)境微生物學(xué)》感受

學(xué)習(xí)《環(huán)境微生物學(xué)》后的感受

在大三上學(xué)期我有機(jī)會(huì)學(xué)習(xí)了《環(huán)境微生物學(xué)》，在此期間我們?cè)诶蠋煹膸ьI(lǐng)下學(xué)習(xí)了微生物學(xué)的前七章的內(nèi)容，在學(xué)習(xí)的過(guò)程中我逐漸詳細(xì)的學(xué)到什么是微生物，微生物是怎樣存在我們周圍的，微生物是怎么進(jìn)行新陳代謝作用的，以及微生物跟我們的生活和環(huán)境的緊密聯(lián)系等，雖然他們一直都環(huán)繞在我們的身邊。認(rèn)識(shí)到哪些微生物對(duì)我們的生活有利，哪些微生物是對(duì)我們有害的，哪些微生物我們可以加以利用，哪些我們要進(jìn)行預(yù)防和自我保護(hù)、、、、、、學(xué)到了怎樣去分更好地養(yǎng)成良好的生活習(xí)慣，給自己和周圍的人打造一個(gè)健康、安全的生活環(huán)境。

但是在學(xué)習(xí)的過(guò)程中我也遇到過(guò)問(wèn)題，比如說(shuō)，環(huán)境中微生物之間有沒(méi)有像植物之間的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，下互利共生關(guān)系等，這個(gè)我也沒(méi)有想明白和看到過(guò)哪有資料來(lái)清楚的講解。還有在之前我也一直想到過(guò)這樣一個(gè)問(wèn)題的，地球上為什么會(huì)先形成了微生物，那是必然嗎？我當(dāng)時(shí)想通過(guò)學(xué)這本課程的找到答案，但學(xué)完后也沒(méi)有實(shí)質(zhì)的進(jìn)展。感覺(jué)自己學(xué)習(xí)微生物學(xué)時(shí)沒(méi)有很大的主動(dòng)性，遇到了問(wèn)題也只是抱著遇到了機(jī)會(huì)就會(huì)解決的態(tài)度，沒(méi)有主動(dòng)的去查找資料，因而到了學(xué)完這門(mén)課當(dāng)初那些想到的沒(méi)有解決的問(wèn)題還是在那里。這點(diǎn)我想在以后的學(xué)習(xí)中要學(xué)著去主動(dòng)，才能更好地學(xué)到更多的知識(shí)。

老師給我們上這門(mén)課的方式還是很好的，剛開(kāi)始那種在每節(jié)課的開(kāi)始能抽些同學(xué)來(lái)溫習(xí)下上次課所學(xué)的東西，我覺(jué)得這種方法是很好的，能很好地幫助我們鞏固學(xué)到的知識(shí)。但老師不應(yīng)該就因?yàn)橐恍┩瑢W(xué)的話就放棄了這種方法的。同時(shí)我們學(xué)完這門(mén)課程也沒(méi)有用到足夠的課時(shí)，雖然是由于特殊的原因，但我們還是希望我們?cè)搶W(xué)的東西還是能有足夠的時(shí)間保證來(lái)完成的。我認(rèn)為微生物學(xué)是一門(mén)很有趣的學(xué)科的，老師在教我們時(shí)候沒(méi)有能很有重點(diǎn)的教給我們當(dāng)前微生在實(shí)際中的重要應(yīng)用，而是把主要經(jīng)歷放在了完成教學(xué)任務(wù)上了，這與最后讓我們分成小組來(lái)完成一片類似于論文的作業(yè)是有點(diǎn)不符的，我們?cè)谕瓿勺鳂I(yè)剛開(kāi)始根本就看不懂這個(gè)題目該往哪個(gè)方向來(lái)寫(xiě)，沒(méi)有實(shí)際的應(yīng)用接觸和了解，后來(lái)花了不少的功夫才找到了一點(diǎn)眉目的。

總的來(lái)說(shuō)這次微生物學(xué)的學(xué)習(xí)雖然顯的有些短暫，但是我還是從中真正學(xué)到了東西的，也發(fā)現(xiàn)了自己的一些缺點(diǎn)，我覺(jué)得這也是一個(gè)很大的收獲。

第四篇：環(huán)境微生物學(xué)課程總結(jié)(修改)

環(huán)境微生物學(xué)課程小結(jié)

名詞解釋

1． 細(xì)菌：是一類細(xì)胞細(xì)短、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、胞壁堅(jiān)韌、多以二分裂方式繁殖和水生性較強(qiáng)的原核生物。

2． 革蘭氏染色：微生物學(xué)中最重要的染色方法，主要根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁化學(xué)成分的差異而引起物理特性（脫色能力）的不同，決定最終染色反應(yīng)的不同的染色法。3． 鞭毛：生長(zhǎng)在某些細(xì)菌表面的長(zhǎng)絲狀、波曲的蛋白質(zhì)附屬物。

4． 芽孢：某些細(xì)菌在其生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成的一個(gè)圓形或橢圓形、厚壁、含水量低、抗逆性強(qiáng)的休眠構(gòu)造。

5． 裂殖：指一個(gè)細(xì)胞通過(guò)分裂而形成兩個(gè)子細(xì)胞的過(guò)程。

6． 芽殖：指在母細(xì)胞表面（尤其在其一端）先形成一個(gè)小突起，待其長(zhǎng)大到與母細(xì)胞相彷后再相互分離并獨(dú)立生活的一種繁殖方式。

7． 菌落：就是在固體培養(yǎng)基上（內(nèi)）以母細(xì)胞為中心的一堆內(nèi)眼可見(jiàn)的，有一定形態(tài)構(gòu)造等特征的子細(xì)胞集團(tuán)。

8． 病毒：一類由核酸和蛋白質(zhì)等少數(shù)幾種成分組成的超顯微“非細(xì)胞生物”，其本質(zhì)是一種只含DNA或RNA的遺傳因子，它們能以感染態(tài)和非感染太兩種狀態(tài)存在。9． 噬菌體：感染原核生物的病毒。10． 異養(yǎng)微生物：必須利用有機(jī)碳源的微生物。11． 自養(yǎng)微生物：以無(wú)機(jī)碳源作主要碳源的微生物。12． 生長(zhǎng)因子：一類調(diào)節(jié)微生物正常代謝所必需，但不能用簡(jiǎn)單的碳、氮源自行合成的有機(jī)物。13． 營(yíng)養(yǎng)類型：指根據(jù)微生物生長(zhǎng)所需要的主要營(yíng)養(yǎng)要素的不同而劃分的微生物類型。14． 單純擴(kuò)散：指疏水性雙分子層細(xì)胞膜在無(wú)載體蛋白參與下，單純依靠物理擴(kuò)散讓許多小分子、非電離分子尤其是親水性分子被動(dòng)通過(guò)的一種物質(zhì)運(yùn)送方式。15． 促進(jìn)擴(kuò)散：指溶質(zhì)在運(yùn)送過(guò)程中須借助于細(xì)胞膜上的底物特異載體蛋白的協(xié)助，但不消耗能量的一類擴(kuò)散性運(yùn)送方式。16． 主動(dòng)運(yùn)送：指一類須提供能量并通過(guò)細(xì)胞膜上特異載體蛋白構(gòu)象的變化，而使膜外環(huán)境中低濃度的溶質(zhì)運(yùn)入膜內(nèi)的運(yùn)送方式。17． 基因移位：指一類既需特異載體蛋白的參與，又需耗能的物質(zhì)運(yùn)送方式，其特點(diǎn)是溶質(zhì)在運(yùn)送前后會(huì)發(fā)生分子結(jié)構(gòu)的變化。18． 選擇性培養(yǎng)基：一類根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。19． 水活度（aw）：是指在一定的溫度和壓力條件下，溶液的蒸氣壓力與同樣條件下純水蒸氣壓力之比。表示能被微生物利用的實(shí)際含水量。20． 滅菌：采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施。21． 富營(yíng)養(yǎng)化：指水體中因氮、磷等元素含量過(guò)高而引起水體表層的藍(lán)細(xì)菌和藻類過(guò)度生長(zhǎng)繁殖的現(xiàn)象。22． 富營(yíng)養(yǎng)水體：指富含有機(jī)物的水體，該類水體中化能異養(yǎng)型微生物數(shù)量較大。23． 自凈容量：水體單位時(shí)間內(nèi)通過(guò)正常生物循環(huán)中能夠同化有機(jī)污染物的最大數(shù)量 24． BIP指數(shù)：BIP =（無(wú)葉綠素的微生物數(shù)量）/（全部微生物數(shù)量）≈H/（P+H）×100%

25． 活性污泥法：是以廢水中的有機(jī)污染物為培養(yǎng)基，在人工曝氣充氧條件下對(duì)各種微生物群體進(jìn)行混合連續(xù)培養(yǎng)，使之形成活性污泥。利用活性污泥在水中的凝聚、吸附、氧化、分解和沉淀作用，去除有機(jī)廢水中的污染物的處理方法

26． 生物膜法：使指廢水流過(guò)生長(zhǎng)在固定支撐物表面的生物膜，并通過(guò)生物氧化和各相之間的物質(zhì)交換作用，去除廢水中的有機(jī)污染物的處理方法

27． 厭氧生物處理法：是在厭氧條件或缺氧條件下，利用厭氧性微生物分解污水中的有機(jī)物的方法。28． MPN細(xì)菌計(jì)數(shù)法：(最大可能數(shù)法)是一種應(yīng)用概率理論來(lái)估算細(xì)菌濃度的方法。它利用微生物在平行樣本中培養(yǎng)所表現(xiàn)出生理生化現(xiàn)象的差異（數(shù)字表現(xiàn)），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值表的查對(duì)，估算細(xì)菌濃度。

29．指示微生物：常規(guī)環(huán)境監(jiān)測(cè)中，用以指示環(huán)境樣品污染性質(zhì)與程度，并評(píng)價(jià)環(huán)境衛(wèi)生狀況的具有代表性的微生物。

認(rèn)識(shí)和掌握

1． 裂殖的方式：二分裂、三分裂和復(fù)分裂 2． G+和G-細(xì)菌細(xì)胞壁的差異（結(jié)構(gòu)和成分）：

3． 四大類微生物（細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌）的菌落特征：

單細(xì)胞微生物 細(xì)菌： 濕、小突或平坦、透明有異味；

酵母菌： 較濕、大突、稍透明有醇香味；

菌絲狀微生物 放線菌： 干躁、小而密、不透明有腥味；

霉菌： 干躁、大而疏、不透明有霉味。

4． 病毒的形態(tài)及代表：病毒的基本形態(tài)為三種：桿狀(煙草病毒)、球狀（腺病毒）和這兩種形態(tài)結(jié)合的復(fù)合型（噬菌體）。病毒粒子通常形成螺旋對(duì)稱、二十面體對(duì)稱和復(fù)合對(duì)稱（前二種接合）。

5． 微生物對(duì)生長(zhǎng)因子需求的分類：生長(zhǎng)因子自養(yǎng)型微生物、生長(zhǎng)因子異養(yǎng)型微生物、生長(zhǎng)因子過(guò)量合成微生物。

6． 微生物的營(yíng)養(yǎng)類型及舉例：光能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)型（藍(lán)細(xì)菌）；光能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型（紫色無(wú)硫細(xì)菌）；化能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)型（硝化細(xì)菌）；化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型（絕大多數(shù)細(xì)菌和全部真核微生物）。7． 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的方式：。單純擴(kuò)散、促進(jìn)擴(kuò)散、主動(dòng)運(yùn)送、基團(tuán)移位、膜泡運(yùn)輸 8． 培養(yǎng)基種類：按成分（天然、組合、半組合）；按物理狀態(tài)（液體、固體、半固體、脫水）；按功能（選擇性、鑒別性）。

9． 微生物可利用的能源：有機(jī)物 日光 還原態(tài)無(wú)機(jī)物 10． 單細(xì)胞微生物的典型生長(zhǎng)曲線：

11． 影響指數(shù)期微生物代時(shí)長(zhǎng)短的因素：細(xì)菌種類、營(yíng)養(yǎng)成分和濃度、溫度 12． 影響微生物生長(zhǎng)的主要因素：溫度、氧氣、PH、水活度。13． 控制有害菌的措施：殺滅法——滅菌（徹底殺滅：殺菌和溶菌）和消毒（部分殺滅：僅殺滅病原菌）；抑制法——防腐（抑制霉腐微生物）和化療（抑制宿主體內(nèi)的病原菌）。14． 物理滅菌的方法：溫度、滲透壓、干燥、pH的影響、輻射、超聲波、壓力

15． 化學(xué)滅菌的方法：

無(wú)機(jī)藥劑---重金屬、氧化劑、酸堿

有機(jī)藥劑----醇、甲醛、表面活性劑（酚類、合成洗滌劑、染料）、抗生素 16． 不同水域中微生物的分布：

17． 微生物與物質(zhì)循環(huán)：碳、氮、磷、硫、鐵循環(huán)（圖示）18． 富營(yíng)養(yǎng)化發(fā)生條件：（1）總磷、總氮等營(yíng)養(yǎng)鹽相對(duì)比較充足；（2）緩慢的水流流態(tài)；（3）適宜的溫度條件；只有在三方面條件都比較適宜的情況下，才會(huì)出現(xiàn)某種優(yōu)勢(shì)藻類“瘋”長(zhǎng)現(xiàn)象，爆發(fā)富營(yíng)養(yǎng)化。19． 赤潮對(duì)海洋漁業(yè)和水產(chǎn)資源的破壞： 1.破壞漁場(chǎng)的鉺料基礎(chǔ)，造成漁業(yè)減產(chǎn)。

2.赤潮生物的異常發(fā)制繁殖，可引起魚(yú)、蝦、貝等經(jīng)濟(jì)生物瓣機(jī)械堵塞，造成這些生物窒息而死。

3.赤潮后期，赤潮生物大量死亡，在細(xì)菌分解作用下，可造成環(huán)境嚴(yán)重缺氧或者產(chǎn)生硫化氫等有害物質(zhì)，使海洋生物缺氧或中毒死亡。

4.有些赤潮的體內(nèi)或代謝產(chǎn)物中含有生物毒素，能直接毒死魚(yú)、蝦、貝類等生物。20． 衡量河段水體污染與自凈所處階段的表現(xiàn)指標(biāo)：水體外觀、化學(xué)指標(biāo)、生物種類、數(shù)量及比例關(guān)系、溶解氧等的變化 21． 活性污泥法、生物膜法、厭氧生物處理法的基本流程： 22． 環(huán)境生物修復(fù)的方式和方法： 環(huán)境生物修復(fù)的方式：

（１）原位方式即是在污染環(huán)境原地進(jìn)行技術(shù)性生物治理，不需將污染的土壤或水體轉(zhuǎn)移。（２）異位方式是將污染土壤或水體轉(zhuǎn)移至指定地點(diǎn)進(jìn)行集中處理。生物修復(fù)的基本方法：

（1）.生物擴(kuò)增：即種植或接種具有降解和富集功能的植物或微生物；

（2）生物性刺激：即施加生物活性物質(zhì)，刺激和促進(jìn)土著微生物的生長(zhǎng)和增殖，發(fā)揮其分解作用。23． 微生物檢測(cè)環(huán)境污染的四種方法（發(fā)光細(xì)菌、硝化細(xì)菌、單細(xì)胞藻類、微型生物群落）的原理和方法： 24． 劃平板的程序： 25． 革蘭氏染色流程： 26． 懸滴法的實(shí)驗(yàn)流程： 27． 水域環(huán)境細(xì)菌種類測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方案 28． 水域環(huán)境細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方案 29． 生活飲用水衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測(cè)的原理和主要方法

考試題型

1.名詞解釋（每題4分，共20分）2.選擇題（每題 1 分，共10分）3.判斷題（每題1分，共20分）4.填空題（每題 1分，共10分）5.論述題（每題10分，共40分）

第五篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

細(xì)菌群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過(guò)濾法(membrane filtration)等。測(cè)定細(xì)胞物質(zhì)的方法有細(xì)胞干重的測(cè)定，細(xì)胞某種成分如氮的含量、RNA和DNA的含量測(cè)定，代謝產(chǎn)物的測(cè)定等?？傊瑴y(cè)定微生物生長(zhǎng)量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。本實(shí)驗(yàn)主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。

一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

（一）目的要求

1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理。

2．掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。

（二）基本原理

顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。目前國(guó)內(nèi)外常用的計(jì)菌器有：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、Peteroff-Hauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等，它們都可用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等懸液的計(jì)數(shù)，基本原理相同。后兩種計(jì)菌器由于蓋上蓋玻片后，總?cè)莘e為0.02mm3，而且蓋玻片和載波片之間的距離只有0.02mm，因此可用油浸物鏡對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。除了用這些計(jì)菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細(xì)菌學(xué)檢查。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡(jiǎn)單。但此法的缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時(shí)間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來(lái)達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。本實(shí)驗(yàn)以血球計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行顯微鏡直接計(jì)數(shù)。另外兩種計(jì)菌器的使用方法可參看各廠商的說(shuō)明書(shū)。

用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各列有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖l5-1。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為lmm，則每一個(gè)大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.lmm3(萬(wàn)分之一毫升)。

圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造

（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造

（二）A.正面圖；B.縱切面圖； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板；2.蓋玻片；3.計(jì)數(shù)室

計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。

設(shè)五個(gè)中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，則

1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×25×104×B=50000A·B（個(gè)）

同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5×16×104×B=32000A·B（個(gè)）

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母

2．儀器或其他用具 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無(wú)菌毛細(xì)滴管。

（四）操作步驟

l．菌懸液制備

以無(wú)菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙骸?/p>

2．鏡檢計(jì)數(shù)室

在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3．加樣品

將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無(wú)菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。

取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。

4．顯微鏡計(jì)數(shù)

加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。

調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對(duì)于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見(jiàn)豎線或只見(jiàn)橫線。

在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格(可選4個(gè)角和中央的一個(gè)中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算樣品的含菌量。

5．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

使用完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。

（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

l．結(jié)果

將結(jié)果記錄于下表中。A表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml

12345

第一室

第二室

2．思考題

(1)根據(jù)你的體會(huì)，說(shuō)明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?

(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測(cè)方法。

二平板菌落計(jì)數(shù)法

（一）目的要求

學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。

（二）、基本原理

平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可來(lái)自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來(lái)表示樣品的活菌含量。

平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測(cè)。

（三）器材

1．菌種 大腸桿菌菌懸液。

2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。

3．儀器或其他用具lm1無(wú)菌吸管，無(wú)菌平皿，盛有4.5ml無(wú)菌水的試管，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。

（四）操作步驟

l．編號(hào)

取無(wú)菌平皿9套，分別用記號(hào)筆標(biāo)明10-

4、10-

5、10-6。(稀釋度)各3套。另取6支盛有4.5mL無(wú)菌水的試管，依次標(biāo)是10-

1、10-

2、10-

3、10-

4、10-

5、10-6。

2．稀釋

用lmL無(wú)菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測(cè)樣品)，精確地放0.5ml至10-1的試管中，此即為10倍稀釋。將多余的菌液放回原菌液中。

OptionsEmail Replies將10-1試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。另取一支lml吸管插入10?1試管中來(lái)回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。吹吸菌液時(shí)不要太猛太快，吸時(shí)吸管伸人管底，吹時(shí)離開(kāi)液面，以免將吸管中的過(guò)濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋。……其余依次類推，整個(gè)過(guò)程如圖15-3所示。

放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。

3，取樣

用三支1mL無(wú)菌吸管分別吸取10-

4、10-5和10-6。的稀釋菌懸液各lmL，對(duì)號(hào)放入編好號(hào)的無(wú)菌平皿中，每個(gè)平皿放0.2mL。

不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀釋菌液放入平皿臼，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復(fù)平板間的操作誤差。

圖15—3平板菌落計(jì)數(shù)操作步驟

4．倒平板．

盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。由于細(xì)菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細(xì)菌將不易分散或長(zhǎng)成的菌落連在一起，影響計(jì)數(shù)。

待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5．計(jì)數(shù)

培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5

一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。實(shí)際工作中同一稀釋度重復(fù)對(duì)照平板不能少于三個(gè)，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，減少誤差。由10-

4、10-

5、10-6三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。

平板菌落計(jì)數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。

平板菌落計(jì)數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號(hào)，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺(tái)上適當(dāng)吹干，然后用無(wú)菌吸管吸取稀釋好的菌液對(duì)號(hào)接種于不同稀釋度編號(hào)的平板上，并盡快用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。

涂布平板用的菌懸液量一般以0.1ml較為適宜，如果過(guò)少菌液不易涂布開(kāi)，過(guò)多則在涂布完后或在培養(yǎng)時(shí)菌液仍會(huì)在平板表面流動(dòng)，不易形成單菌落。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．結(jié)果

2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表

稀釋度10-410-510-6

Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均

每毫升中的cfu

2．思考題

(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?

(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?

(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。

(4)當(dāng)你的平板上長(zhǎng)出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問(wèn)題出在哪里?

(5)用倒平板法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長(zhǎng)出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間(48h)后觀察結(jié)果?

三 光電比濁計(jì)數(shù)法

一、目的要求

1．了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理。

2．學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。

二、基本原理

當(dāng)光線通過(guò)微生物菌懸液時(shí)，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過(guò)量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測(cè)出(圖15-4)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測(cè)定光密度，作出光密度—菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，以樣品液所測(cè)得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的菌數(shù)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，菌體計(jì)數(shù)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測(cè)定等方法。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

光電比濁計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、迅速，可以連續(xù)測(cè)定，適合于自動(dòng)控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長(zhǎng)等因素的影響。因此，對(duì)于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計(jì)數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過(guò)最大吸收波長(zhǎng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)確定。另外，對(duì)于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進(jìn)行測(cè)定。

圖15—4 比濁法測(cè)定細(xì)胞濃度的原理

（三）器材

1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液

2．儀器或其他用具 721型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無(wú)菌吸管，無(wú)菌生理鹽水等。

（四）操作步驟

1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

（1）編號(hào) 取無(wú)菌試管7支，分別用記號(hào)筆將試管編號(hào)為1、2、3、4、5、6、7。

（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無(wú)菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106、12×106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。再分別裝入已編好號(hào)的1至7號(hào)無(wú)菌試管中。

（3）測(cè)OD值 將1至7號(hào)不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長(zhǎng)、1cm比色皿中測(cè)定OD值。比色測(cè)定時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照，并將OD值填入下表

管號(hào)12345678

細(xì)胞數(shù)106/ml

光密度（OD）

每管菌懸液在測(cè)定OD值時(shí)均必須先搖勻后再倒入比色皿中測(cè)定

(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2．樣品測(cè)定

將待測(cè)樣品用無(wú)菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，搖均勻后，用560nm波長(zhǎng)、lcm比色皿測(cè)定光密度。測(cè)定時(shí)用無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照。

各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的相同，否則，測(cè)得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。

3．根據(jù)所測(cè)得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。

（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告

l．結(jié)果

每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)×稀釋倍數(shù)

2．思考題

(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?

(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)用價(jià)值?

(3)本實(shí)驗(yàn)為什么采用560nm波長(zhǎng)測(cè)定酵母菌懸液的光密度?如果你在實(shí)驗(yàn)中需要測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)的OD值，你將如何選擇波長(zhǎng)?

四 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

(一)目的要求

1．通過(guò)細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)線。

2．復(fù)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法。

(二)基本原理

大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時(shí)期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線，了解其生長(zhǎng)繁殖規(guī)律，這對(duì)人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長(zhǎng)具有重要意義。

用于測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實(shí)驗(yàn)作了介紹。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。也可以直接用試管或帶有測(cè)定管的三角瓶(圖15-5)測(cè)定“klett units”值的光度計(jì)。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個(gè)帶測(cè)定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時(shí)間(橫坐標(biāo))取樣測(cè)定，以測(cè)得的klett units為縱坐標(biāo)，便可很方便地繪制出細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/0.002換算出所測(cè)菌懸液的OD值。

圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶

(三)器材

1．菌種 大腸桿菌

2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。

3．儀器或其他用具 722型分光光度計(jì)，水浴振蕩搖床，無(wú)菌試管，無(wú)菌吸管等。

圖15—6 直接用試管測(cè)OD值

(四)操作步驟

1．標(biāo)記

取11支無(wú)菌大試管，用記號(hào)筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。

2．接種

分別用5ml無(wú)菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過(guò)夜培養(yǎng)液(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌大試管中。

3．培養(yǎng)

將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測(cè)定其光密度值。

4．比濁測(cè)定

用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照，選用600nm波長(zhǎng)進(jìn)行光電比濁測(cè)定。從早取出的培養(yǎng)液開(kāi)始依次測(cè)定，對(duì)細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其光密度值在0.1~0.65之內(nèi)(測(cè)定OD值前，將待測(cè)定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。

本操作步驟也可用簡(jiǎn)便的方法代替：

1．用1ml無(wú)菌吸管取0.25ml大腸桿菌過(guò)夜培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入盛有3~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計(jì)的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個(gè)大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒(méi)有接種的試管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測(cè)定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。

2．分別在培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測(cè)定OD值。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測(cè)定的準(zhǔn)確度愈高。

(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．結(jié)果

(1)將測(cè)定的OD600值填入下表：

培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值OD600

(2)繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。

2．思考題

(1)如果用活菌計(jì)數(shù)法制作生長(zhǎng)曲線，你認(rèn)為會(huì)有什么不同？?jī)烧吒饔惺裁磧?yōu)缺點(diǎn)？

(2)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所經(jīng)歷的四個(gè)時(shí)期中，哪個(gè)時(shí)期其代時(shí)最短？若細(xì)胞密度為103/ml，培養(yǎng)4.5h后，其密度高達(dá)2×108/ml，計(jì)計(jì)算出其代時(shí)。

(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期？根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？

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