第一篇：液相色譜法為您解決“瘦肉精”檢測

液相色譜法為您解決“瘦肉精”檢測

自瘦肉精事件發(fā)生以來，北京賽恩森科技一直密切關注，通過參考各種檢測方法，迅速作出了力親實驗的行動，作出并規(guī)范了動物組織中鹽酸克倫特羅（瘦肉精）檢測的全套解決方案。

具體測定方法如下：

1.適用范圍

適用于動物肌肉和肝臟中鹽酸克倫特羅藥物的檢測。

2.提取

將5g動物組織、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸鈉溶液置于50 mL離心管中，10000 rpm均質2 min。6000 rpm下離心2 min，將上清液轉至另一離心管中。用15 mL乙酸乙酯重復提取一次，合并提取液。

向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液，渦動1 min，然后再6000 rpm下離心1 min，收集下層水相。重復萃取一次，合并下層水相，用2.5 mol/L NaOH溶液調節(jié)pH至5.2，待凈化。

3.凈化

活化/平衡：依次向Welchrom? P-SCX（60mg/3mL）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L鹽酸溶液，流出液棄去；

上樣：將上述提取液加入柱中，流出液棄去；

淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液棄去，并將小柱抽干；

洗脫：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，40℃下氮氣吹干；

4.檢測

50% 甲醇溶解殘渣，渦動振蕩1 min,過0.22μm濾膜，裝入進樣小瓶，進樣10μL分析。

5.色譜條件：

儀器： LC-3010系列HPLC（二元高壓梯度）

色譜柱： C18 液相色譜柱（4.6 mm x 150 mm, 3 μm）

流動相： 0.01 M磷酸緩沖液：甲醇=65:35 流速： 0.7 mL/min 進樣量： 20 μL 柱溫： 30 °C

檢測波長： 244 nm 運行時間：11 min

如需詳細信息，請致電詳詢。

北京賽恩森科技

2011.08.22

第二篇：肉類食品中瘦肉精的檢測-液相色譜法

液相色譜法測定肉類食品中瘦肉精殘留量

摘要 瘦肉精是一種動物用藥，將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。近期，國內雙匯火腿腸出現食品安全問題所引發(fā)的“瘦肉精”事件令國人對食品安全頗為堪憂，因此 ,對動物肉類或內臟中鹽酸克倫特羅的監(jiān)督檢測顯得十分必要。為此南京科捷應用LC-600液相色譜儀，探討肉類樣品中瘦肉精（鹽酸克倫特羅）的前處理方法 ,了解本市肉品中鹽酸克倫特羅的殘留情況。用水提取肉品中鹽酸克倫特羅殘留量 ,我們用固相萃取法對肉類樣品提取液進行凈化和濃縮 ,可以有效去除干擾 ,簡便 ,靈敏度高 ,適于在日常檢測工作中推廣使用。殘留監(jiān)測作為食品安全的重要課題。使之越來越廣泛地應用于不同類型獸藥、農藥及毒素類有毒有害物質的檢測分析之中。

關鍵詞

瘦肉精 鹽酸克倫特羅 獸藥 農藥殘留

高效液相色譜法 1.本方法的應用范圍

本方法的檢測思路可供食品中農藥、獸藥殘留檢測的借鑒。如獸藥殘留動物源食品中硝基呋喃類殘留(呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋馬唑酮)磺胺類藥物殘留(磺胺對甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹嚼啉)喹諾酮類(嚼喹酸、萘啶酸)氯羥吡啶、莫能菌素和鹽霉素、乙氧酰胺苯甲酯、氯霉素、伊維菌素、克倫特羅、尼卡巴嗪、土霉素、四環(huán)素、金霉素(國標GBT14931．1)阿莫西林、盤尼西林及喹乙醇等。農藥殘留氨基甲酸酯農藥、有機磷農藥、百草枯、殺草快、草甘膦及氨基膦酸、苯并瞇唑類殺菌劑、利谷隆、滅草隆及敵草隆、三嗪類多種農藥的檢測。2.實驗步驟

(1)儀器和設備

①LC-600高效液相色譜儀整套配置如下

P600寶石恒流泵 1臺 UV600紫外檢測器

1臺 7725i六通進樣閥 1只 WS600色譜工作站

1套

②勻漿機 ③旋轉蒸發(fā)儀 ④電子天平：0.01mg ⑤紫外分光光度計 ⑥離心機 ⑦固相萃取儀 HGC-8 ⑧固相小柱（2）試劑

①鹽酸克倫特羅標準品 ②乙醚；分析純 ③正己烷：分析純 ④甲醇：色譜純 ⑤鹽酸克倫特羅標準液 ⑥lmol／I。鹽酸溶液 ⑦0．05mol／L乙酸緩沖液 ⑧0．3mol／L乙酸緩沖液 ⑨lmol／LNaOH溶液 ’ ⑩甲醇液：甲醇—重蒸水(75+25)(2)儀器和設備

②勻漿機 ③旋轉蒸發(fā)儀 ④電子天平：0.01mg ⑤紫外分光光度計

⑥離心機 ⑦固相萃取儀 HGC-8 ⑧固相小柱(3)測定步驟

①提取和凈化 取組織樣品10g，加入30ml lmol／L鹽酸溶液勻漿，超聲波振蕩3h，5000r／mln的速度離心10min，—上清液用lmo]／LNaOH溶液滴至堿性，乙醚或正已烷抽三3次，抽提液在水浴鍋上蒸發(fā)至5ml后上Silioa小柱，以除去大部分雜質，洗脫液上Alu—mina A小柱，將待測成分吸附在小柱上，用0．05mol幾乙酸緩沖液(pH7．0)洗滌小柱3次，o．3mol／L乙酸緩沖液洗脫待測成分，冷凍干燥，用0．5ml甲醇液溶解后取100uL供高效液相色譜儀檢測。②測定

a．色譜條件

色譜柱：C18柱，250mmX4.6mm 流動相：甲醇—水(75+25)流速：0．65ml／mill 檢測波長：243nm 進樣量：100uL b．色譜測定 分析樣品按上述儀器操作條件供高效液相色譜儀分析。③空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進行。(4)檢測限和回收率

本方法在豬的肌肉和肝臟組織中的檢測限為0．001ug/g’回收率范圍為80％±20％

第三篇：瘦肉精檢測

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所關于

外銷生豬“瘦肉精”檢測的報告

開封市動物衛(wèi)生監(jiān)督所：

為了保證畜產品質量安全，保障人民身體健康，全面推進和諧社會的創(chuàng)建，2010年6月21日，通許縣畜牧局下發(fā)文件開展世博會期間整頓生豬經營處等檢疫秩序活動，特別是重點開展 “瘦肉精”的檢測工作，堅決杜絕在飼料中使用萊克多巴胺及克倫特羅等違禁藥物，整頓和規(guī)范飼料、獸藥市場，嚴厲打擊假冒偽劣產品，實現全縣生豬生產的安全無污染，確保外銷到市場的是“放心豬”。

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所認真學習貫徹了縣局文件精神，開展以“瘦肉精”和重大動物疫病為主的檢測檢驗；加大對使用“瘦肉精”的打擊力度，建立生豬疫病防治體系，確保生豬及其加工產品的質量安全。對檢測出“瘦肉精”的生豬產地在3個月內禁止外銷，經檢測合格后重新申請進入市場。逐步推行生豬產品市場準入制度、“一豬一標一碼”標識管理制度。對生豬“瘦肉精”進行重點抽檢，檢驗中凡發(fā)現有“瘦肉精”的生豬均進行銷毀，并向產地通報和封停該地生豬進入市場。

據匯總統(tǒng)計，2010年6月至8月份我縣共外銷生豬8603頭。分批次發(fā)往浙江省慈溪市、江蘇省無錫市、安徽省和縣、浙江省寧波市、江蘇省常州市、廣東省湛江市、安徽省合肥市、安徽省淮南市、安徽蒙城縣等九個城市和地區(qū)?！笆萑饩睓z測全部呈現陰性。其中6月份外銷生豬2053頭，抽檢生豬尿樣110多個，檢測結果全部呈現陰性，合格率達到100%。7月份外銷生豬3190頭，抽檢生豬尿樣160多個，檢測結果全部呈現陰性，合格率達到100%。8月份外銷生豬3360頭，抽檢生豬尿樣170多個，檢測結果全部呈現陰性，合格率達到100%。

二○一○年九月八日

主題詞：瘦肉精 抽檢 報告

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所二○一○年九月八日印

第四篇：(瘦肉精)檢測制度

第十節(jié)

屠宰企業(yè)違禁藥物（瘦肉精）檢測制度

（適用實行瘦肉精企業(yè)自檢的地區(qū)）

一、為規(guī)范生豬定點屠宰廠（場）待宰生豬尿樣違禁藥物“瘦肉精”的日常檢驗工作，制定本制度。

二、定點屠宰廠（場）必須有滿足日常檢測需要的工作場所及實驗室，并應保持光線充足，通風良好，室內環(huán)境整潔，基本設施齊全。

實驗室必須配備能滿足檢測工作需要的檢測人員和審核人員。

三、檢測人員必須經過有關單位的培訓，能獨立操作，包括樣本的采取和檢測。

四、定點屠宰廠（場）必須建立瘦肉精檢測臺帳，并建立人員崗位責任制，所有檢測設施、器材、記錄等都要專人妥善保管。

五、嚴格執(zhí)行省政府的有關要求，生豬宰前必須進行瘦肉精檢測，并實行每批必檢制度（一個檢疫證號為一批）。

六、檢測結果應在屠宰廠（場）內固定場所以醒目方式對外公示。

七、若檢測出現陽性結果，屠宰廠（場）必須將檢測結果立即報送當地動物防疫監(jiān)督機構處理。

八、檢測方法按照《動物組織中鹽酸克倫特羅的測定 氣相色譜/質譜法》NY/T 468-2006的規(guī)定執(zhí)行。

九、屠宰廠（場）應自覺接受屠宰管理機構和動物防疫監(jiān)督機構對檢測工作開展監(jiān)督檢查、指導。

第五篇：瘦肉精檢測方法

目前，檢測瘦肉精的方法主要有四種，即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質譜法（GC－MS）、毛細管區(qū)帶電泳法（CE）和免疫分析技術（IA）。而我國結合自己的實際情況，2001年農業(yè)部首先組織制定了飼料中鹽酸克倫特羅的測定標淮。該標準選擇確定了兩種：即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質譜法（GC－MS）。其中將HPLC法作為檢測瘦肉精的半確證性方法，其最低檢測限為 0．05μg/kg，優(yōu)點是檢測精確度高，而且假陽性率低；缺點是檢測過程煩瑣、檢測時間長，需貴重儀器、難于操作、價格昂貴。而GC一MS法優(yōu)點是能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析。GC－MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低，已將GC－MS法定為檢測瘦肉精的確證性方法。GC－MS法的缺點同HPLC相似。

(1)試劑和材料 以下所有試劑，除特別注明外，均為分析純試劑；水為符合GB／T6682規(guī)定的二級水。

①鹽酸克倫特羅對照品：含鹽酸克倫特羅不得少于98．5％

②鹽酸

③無水甲醇

④氫氧化鈉

⑤磷酸二氫鉀

⑥磷酸

⑦鹽酸溶液 取鹽酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀68g，加水800ml溶解并用磷酸調pH值至3．O，用水稀釋至1000ml，即得。

⑨0．05mol幾磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀6．88，加水800ml溶解并用磷酸調pH值至3．0，用水稀釋至1000mi，即得。

a．氫氧化鈉溶液 取氫氧化鈉48，加水使溶解成100mi，即得。

b．鹽酸克倫特羅對照品儲備液(1mg／mi)準確稱取28．3mg鹽酸克倫特羅對照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩鹽酸克倫特羅對照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi儲備液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1個月。

⑾鹽酸克倫特羅對照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1個月。

⑿鹽酸克倫特羅檢測試劑盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)儀器和設備

①酶聯(lián)免疫反應讀數儀

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷凍離心機

⑤50mi具塞離心管

⑥勻漿機

⑦微型振蕩器

⑧回旋振蕩器

⑨微量移液器 單道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干熱濃縮器

①空氣壓縮機

(3)測定步驟

①試料的制備(尿)

取供試尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為供試試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

取空白尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為空白試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

取空白尿2ml，于3000r／min離心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克倫特羅對照溶液20／H。作為2ug/l空白添加試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

②試料的制備(肝)

取約l00g新鮮或冷凍后融化的空白或供試豬肝,用勻漿機以10000r／rain勻漿1-2min，使均勻呈糊狀，一20~C以下冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

取均漿后的供試肝樣，作為供試試料。

取均漿后的空白肝樣，作為空白試料。

取均漿后的空白肝樣(1土0．05)e添加l00ng／m1的克倫特羅對照溶液20tzL作為2ng／g空白添加試料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z試料，置50ml離心管中；加鹽酸溶液5.0mi，旋渦混勻，中速振蕩1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度離心15min；上清液移人另一50ml離心管中，加入氫氧化鈉溶液300gL，混勻，振蕩15min；加0.5mol／l磷酸二氫鉀溶液4。0ml，混勻，2—8~C放置過夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度離心15min，上清液備用。

b．凈化(肝)C，固相萃取柱依次用無水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液2mi預洗，不使柱床干涸；將備用上清液全部過柱；用0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液2ml淋洗，擠干，棄去所有淋洗液；用無水甲醇2mi洗脫，流速控制在0.5ml／mm以下，擠干，收集洗脫液；于50～60~C下用氮氣或空氣緩緩吹干洗脫液；殘余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度離心15rain，清液作為試樣溶液供酶聯(lián)免疫測定法測定。

③測定

a．室溫應控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的試劑盒，按每個標準溶液和試樣溶液至少兩孔計算所需酶聯(lián)板條的數量，插入框架。每個微孔加入用緩沖溶液100倍稀釋的抗體100~tL，封口膜封板，室溫孵育30min。

c倒出孔內液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內沒有殘余液體。用多道移液器加水250pL到酶聯(lián)板的微?L內，稍后倒出孔內液體，再將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，如此重復操作洗板3次。

d．分別吸取標準溶液、空白試料、空白添加試料和供試試料各20uL，分別放入不同微孔底中央，并在每孔內加入用緩沖溶液100倍稀釋的酶結合物100~I。，在微型振蕩器上混勻，用封口膜封好，室溫孵育30min。

e．倒出孔內液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內沒有殘余液體，重復洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物緩沖溶液10倍稀釋的底物100uL，室溫避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加終止液100uL。

h．在1h內將酶聯(lián)板放于酶標儀內，于450nm波長處測定吸光度值。

(4)計算 用數據分析軟件對結果進行分析，繪出標準曲線，并得出試料中克倫特羅的含量。

(5)靈敏度和回收率

本方法的平均檢測下限為0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加濃度水平上豬尿回收率范圍為60％一120％，豬肝回收率范圍為40％～120％。