第一篇：豬肉中瘦肉精的檢測

豬肉中瘦肉精的檢測

摘 要

鑒于鹽酸克倫特羅(瘦肉精)在動物性食品中的殘留對人體和國民經(jīng)濟造成了巨大的危害，本文介紹了動物肌肉組織中殘留鹽酸克倫特羅(瘦肉精)的幾種分析檢測方法，并對未來的發(fā)展方向作了展望。

關(guān)鍵詞：瘦肉精 GC-MS HPLC ELISA 引言

瘦肉精是一類藥物，而不是某一種特定的藥物，任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。在中國，通常所說的瘦肉精是指克倫特羅(Clenbuterol，CLB)【1】，而普通消費者則把此類藥物統(tǒng)稱為瘦肉精。當(dāng)它們以超過治療劑量5—10倍的用量用于家畜飼養(yǎng)時，即有顯著的營養(yǎng)“再分配效應(yīng)”——促進動物體蛋白質(zhì)沉積、促進脂肪分解抑制脂肪沉積，能顯著提高胴體的瘦肉率、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率，因此，β—受體激動劑被大量非法用于畜牧生產(chǎn)，其中最常用的有克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等。長期食用含有β—受體激動劑殘留的食品將對人體健康產(chǎn)生極大的危害，可誘發(fā)和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、臉、頸部骨骼肌震顫；另外還能引起代謝紊亂，對糖尿病人可發(fā)生酸中毒或酮中毒【2】。

鹽酸克倫特羅(Clenbuteerol，CLB)，又名克喘素、氨哮素、雙氯醇胺，俗名瘦肉精，化學(xué)名為α—[(叔丁氨基)甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇鹽酸鹽，分子式為C12 H18Cl12N2O?HCl，相對分子質(zhì)量為313.65。

目前，檢測瘦肉精殘留常用的色譜技術(shù)有高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法(GC—MS)、高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC—MS)、毛細管電泳法(CE)等。中國已將高效液相色譜法（HPLC）作為檢測飼料中鹽酸克倫特羅殘留的半確證法，將GC—MS 法定為確證性方法，主要用于最后確認和仲裁。對于動物性食品，GB/T 5009.192—2003 “動物性食品中克倫特羅殘留量的測定”規(guī)定的第一法為氣相色譜—質(zhì)譜法，第二法為高效液相色譜法，第三法為酶聯(lián)免疫法。下面將會對這三種方法逐一進行說明，并簡單介紹毛細管電泳法（CE）【3】。2 動物性食品（豬肉）中鹽酸克倫特羅的檢測方法

2.1 氣相色譜—質(zhì)譜法(GC—MS)

GC—MS法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機結(jié)合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。GC—MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低【4】。下面將以島津公司采用的GC—MS法檢測瘦肉精為例，對儀器與試劑的選擇、樣品的處理方法等方面進行介紹。

2.1.1儀器與試劑

儀器：島津GCMS—QP2010 Plus；

試劑：鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CLB）標準品，內(nèi)標（Clenbuterol—D9，CLB—D9），N，O—雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA），C18固相萃取小柱（100 mg，3 mL）標準溶液的配制：準確稱取鹽酸克倫特羅和內(nèi)標的標準品，用甲醇配成濃度為1 mg/mL的標準儲備液，放置于4℃冰箱中避光保存，使用時用甲醇稀釋成1μg/mL的標準使用液和內(nèi)標使用液。

2.1.2 分析條件

色譜柱：Rtx—5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)進樣口溫度：220℃ 柱溫程序：70℃(0.6 min)—25℃/min—220℃(6 min)—25℃/min—280℃(5 min)恒線速度方式，柱流量0.9 mL/min 不分流進樣，進樣時間1 min 接口溫度：280 ℃ 離子源溫度：200 ℃ 溶劑切割時間：8 min 檢測離子：

CLB：檢測 m/z 86，187，243，262，CLB—D9：檢測 m/z 95，187，262 以克倫特羅(m/z86)與內(nèi)標峰(m/z 95)的峰面積比校準定量。

2.1.3 樣品制備

精密稱取(2 ± 0.01)g 己絞碎的豬肉于具塞離心管中，加入4 mL 0.1 mol/L 鹽酸溶液，旋渦振蕩5 min，超聲10 min，12000 r/min 離心5 min后，傾出上清液，沉淀再分別用0.1 mol/L 鹽酸4 mL，2 mL 兩次提取，提取方法同上，合并上清液。

將上清液全部上樣至C18 柱，用5 mL 水清洗小柱后，使用0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸溶液=1：1(v/v)的酸化甲醇解析，加磷酸緩沖液調(diào)至pH=7，定容至2 mL。將該溶液以0.1 mL/min的流速推過聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）毛細管整體柱萃取后，用0.2 mL 的甲醇解析，加50 μL 的內(nèi)標使用液后以氮吹儀濃縮至干。加入100 μL 甲苯和100 μLBSTFA，渦旋混勻30 s，置于微波爐中小火衍生5 min。衍生反應(yīng)完成后取出冷卻至室溫后再加入300 μL 甲苯，充分混勻，待氣質(zhì)聯(lián)用儀進樣。

2.1.4 結(jié)論

該法在樣品提取后，用C18 小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整體柱進一步富集凈化，經(jīng)N，O—雙三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，選擇離子監(jiān)測方式進行氣相色譜質(zhì)譜測定。

該方法具有檢測限低、重現(xiàn)性好、回收率高、樣品用量少等特點，適合于豬肉樣品中鹽酸克倫特羅的定性、定量測定。但GC—MS的缺點是檢測過程煩瑣、檢測時間長、需貴重儀器、難于操作、價格昂貴。

2.2 高效液相色譜法(HPLC)【5】

HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強極性的β—激動劑及其代謝產(chǎn)物，而且HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用，容易實現(xiàn)分析過程的自動化。

HPLC 法【6】中常用的檢測器有電化學(xué)檢測器、紫外檢測器。

2.2.1 材料與儀器

甲醇：色譜純；

試驗用水：均為超純水； 其余試劑：均為分析純；

鹽酸克倫特羅標準品：中國藥品生物制品檢定所；

鹽酸克倫特羅標準溶液： 取鹽酸克倫特羅標準品24.98 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配成含鹽酸克倫特羅1 mg/mL的標準貯備液，貯于冰箱中，不同濃度的系列標準溶液由標準儲備液稀釋而得；

Dionex AT330(美國)高效液相色譜儀：由P680四元泵、UVD170U紫外檢測器和AT330恒溫箱組成；

超聲波提取器(SB25200BTD)； 離心機(6 000 r/min)；

DSY22型電熱恒溫水浴鍋。

2.2.2 色譜條件

色譜柱采用Diamonsil ODS2C18 柱(5 μm，150 mm ×4.6 mm I.D)；檢測波長為244 nm； 流動相甲醇∶水=26 ∶74；流速1.0 mL /min； 柱溫30 ℃；進樣量20μL。

2.2.3 樣品制備

取10 g絞碎肉試樣，加0.1 mol/L高氯酸20 mL 勻漿，超聲提取20 min，80℃ 加熱30 min，冷卻后離心(4 000 r/min)15 min。沉淀加0.1 mol/L高氯酸5 mL洗滌、離心，將上清液合并，用1 mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至11，加入25 mL乙醚，振蕩提取20 min，回收有機相，再用20 mL乙醚重復(fù)萃取2次，合并有機相，蒸發(fā)至干。用0.1 mol/L HC1溶解，純水定容至10 mL。

2.2.4 結(jié)論

目前，中國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15ng/g，其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高，而且假陽性率低，與GC—MS 法相比樣品不必衍生【7】；缺點是樣品處理時間長，檢測

過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實際應(yīng)用中受到一定的限制【8】。2.3 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA）

目前，檢測CLB較高效的免疫分析技術(shù)是ELISA技術(shù)。早在1992年，Oriundi就通過ELISA法對尿液和血清中的β—興奮劑殘留進行直接分析，該方法既適于實驗室大量樣品的檢測，也適于屠宰場地少量樣品的迅速檢測【9】。目前，英國的Randox Laborato—ries Ltd和德國的r—biopharm公司均開發(fā)出了檢測肉品、飼料中CLB殘留的ELISA試劑盒。中國在應(yīng)用EIA檢測CLB方面的研究起步晚，但近幾年取得了明顯的進展，目前已有幾種試劑盒研制開發(fā)成功【10】。

2.3.1 測定原理

“瘦肉精”（克侖特羅）競爭酶標免疫檢測的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。酶聯(lián)板的微孔包被有針對兔抗克侖特羅特異性抗體的羊抗體【11】（第2抗體）。加入兔抗克侖特羅特異性抗體（第1抗體）與第2抗體結(jié)合而被固定，洗滌后加入標準液或樣品溶液與酶結(jié)合物（酶標記抗原），標準液或樣品中的游離抗原與酶標抗原競爭兔抗克侖特羅特異性抗體上有限的結(jié)合位點【12】。通過洗滌除去沒有與特異性抗體結(jié)合的酶標抗原，加入酶基質(zhì)（過氧化脲）和發(fā)色劑（四甲基聯(lián)苯胺）并孵育，結(jié)合到板上的酶標記物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍色的底物。加酸終止反應(yīng)后，顏色由藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。【13】在單波長450納米處測吸光度，吸收光強度與樣品中的克侖特羅濃度成反比。

2.3.2 樣品制備

取粉碎的肉樣5克，與25毫升50 mmol/L HCl混合，振蕩1.5小時。稱6克均質(zhì)物，加入離心管中。10~15℃條件下4 000轉(zhuǎn)/分鐘或更高的轉(zhuǎn)速離心15分鐘。轉(zhuǎn)移上清液到另1個離心管中，加300微升1摩爾/升氫氧化鈉混合15分鐘。加入4毫升500毫摩爾/升磷酸二氫鉀緩沖液（pH值3.0），簡單混合，并在4℃保存至少1.5小時或過夜。10~15℃條件下4 000轉(zhuǎn)/分鐘或更高的轉(zhuǎn)速離心15分鐘。分離全部上清液，使其升至室溫，然后用C18柱純化【14】。

C18柱純化樣品必須在室溫條件下，并嚴格控制過柱時流速。用3毫升甲醇洗滌柱子，控制流速為1滴/秒。用2毫升洗滌液（50毫摩爾/升磷酸二氫鉀緩沖液pH值3.0）洗滌柱子。將肉樣的全部上清液進柱，控制流速為每4秒1滴。用2毫升洗滌液，洗滌柱子，流速為1滴/秒。用正壓除去殘留的流體并用空氣或氮氣吹2分鐘，干燥柱子。用1毫升甲醇洗脫樣品，控制流速為每4秒1滴。在50~60℃并在弱空氣或氮氣流下完全蒸發(fā)甲醇溶劑【15】。用1毫升蒸餾水溶解干燥的殘留物，取20微升進行分析。取10克飼料樣品，用10毫摩爾/升鹽酸溶解，連續(xù)震蕩10分鐘，用濾紙過濾，在濾液中加入120微升1毫摩爾/升氫氧化鈉進行中和，檢查pH值，用氫氧化鈉控制pH值在6.5~7.5之間，取上清液20微升進行分析，稀釋倍數(shù)為25。

2.3.3 測定步驟

所有試劑及樣品在開始檢測前必須回升至室溫，測定操作在20~24℃下進行。用盒中緩沖液以體積1∶10的比例稀釋實際用量的克侖特羅抗體濃縮液，稀釋前混勻抗體，不要猛烈振蕩。取出試驗需要數(shù)量的微孔板條，足夠標準品和樣品，標準品和樣品做2個平行試驗，記錄標準品和樣品的位置。剩余的微孔板條

放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，2~8℃冷藏。

每個微孔底部加100微升稀釋后的抗體溶液，室溫孵育微孔板15分鐘，避免光線照射。孵育的同時進行酶標記物的稀釋，洗板，甩出孔中液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打，直到紙上無明顯水跡（拍打3次），以保證完全除去孔中的液體。

用250微升蒸餾水充入孔中，再次甩掉微孔中液體，并在吸水紙上拍打，重復(fù)操作2次。加洗滌水的移液器管尖必須置于微孔上方約0.5厘米處打出洗滌水，避免將板孔中的游離抗體帶入洗滌水中。洗板后立即進行下步操作，不要讓板孔干燥【16】。加入20微升標準品和處理好的樣品到各自的微孔底部，標準品和樣品做2個平行實驗。加入100微升稀釋的酶標記物至微孔底部，輕輕震蕩微孔，并在桌面上作圓周運動以混勻。移液器管尖不要接觸到孔中的混合物，避免交叉污染。室溫孵育微孔板30分鐘，避免放置，盡可能每隔10分鐘輕輕振蕩1次，準備好酶基質(zhì)，并注意避光放置。

在洗板過程中加洗滌水的移液器置于微孔板上方0.5厘米處打出洗滌水，避免將板孔中的游離酶標記物帶入洗滌水中。不要讓板孔干燥，迅速加入100微升酶基質(zhì)到每個孔中，操作步驟要迅速，避免反應(yīng)時間相差過長。移液器管尖不要接觸微孔中的混合物，避免交叉污染。室溫暗處孵育微孔板15分鐘，暗處避光放置，同時，準備好反應(yīng)停止液。每孔加入100微升反應(yīng)停止液，混勻，60分鐘內(nèi)用酶標儀測量450納米處波長吸光度值【17】。

2.3.4 結(jié)論

ELISA的優(yōu)點是靈敏度高、操作簡便、檢測迅速、價格便宜；缺點是仍不能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測，而且假陽性率高。

故而，ELISA方法只是一種大范圍的篩選方法，它不能起到定性和定量的作用，檢測結(jié)果出現(xiàn)可疑，可以用其他檢測方法進行定性和定量分析。

2.4 毛細管電泳法（CE）【18】

毛細管電泳法（CE）非常適用于難以用傳統(tǒng)的液相色譜法分離的離子化樣品的分離與分析。優(yōu)點是有很大的靈活性許多分離參數(shù)如緩沖液的組成和pH 值毛細管的類型以及所使用的電場的波形都可以調(diào)節(jié)，操作簡便，所需樣品量極少，一般只需幾納升。缺點是檢測時間仍很長，不能滿足在線檢測，儀器復(fù)雜、缺乏配套的檢測器 CLB檢測技術(shù)的未來趨勢和發(fā)展方向

當(dāng)前，造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國內(nèi)外檢測CLB 的方法、手段還不完善，還沒有建立準確、迅速、方便、精確的檢測方法。鑒于目前國內(nèi)外檢測CLB 各種方法的進展情況以及CLB 濫用及殘留的嚴峻性，建立一種克服上述各種檢測方法缺點的簡便、快速、精確、可實現(xiàn)在線檢測的CLB 技術(shù)勢在必行。

生物傳感器技術(shù)(Biosensor，BS)【19】和滴金免疫技術(shù)(DIGFA)【20】是兩種快速、高效的殘留物分析技術(shù)，如能研究、開發(fā)運用到檢測生物樣品中CLB的殘留可能會產(chǎn)生理想的效果。

納米材料是非常敏感的化學(xué)和生物傳感器，固定有能選擇性結(jié)合靶分子的生物探針的納米傳感器稱為納米生物傳感器。它們能和生物芯片、免疫技術(shù)、標記

技術(shù)等技術(shù)手段結(jié)合，從而使檢測更加高效、簡便。與液質(zhì)聯(lián)用分析克倫特羅的方法相比，基于碳納米管的無標記電化學(xué)免疫傳感器免除了樣品分析前的固相萃取及純化步驟，使得操作方法更簡便。與ELISA 法相比，該傳感器同樣具有樣品處理簡單及高能量的優(yōu)點。此外，該傳感器的方法很少受到基質(zhì)效應(yīng)的影響，或者至少比在ELISA 方法中的影響小【21】。

納米金免疫標記技術(shù)，是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到納米金顆粒表面的包被過程，由于金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)標記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中【22】。

可以預(yù)見的是，在未來一定會有更加靈敏、快捷、方便的檢測方法問世，從而使豬肉中瘦肉精的檢測問題得到徹底解決。

參考文獻

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第二篇：瘦肉精檢測

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所關(guān)于

外銷生豬“瘦肉精”檢測的報告

開封市動物衛(wèi)生監(jiān)督所：

為了保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全，保障人民身體健康，全面推進和諧社會的創(chuàng)建，2010年6月21日，通許縣畜牧局下發(fā)文件開展世博會期間整頓生豬經(jīng)營處等檢疫秩序活動，特別是重點開展 “瘦肉精”的檢測工作，堅決杜絕在飼料中使用萊克多巴胺及克倫特羅等違禁藥物，整頓和規(guī)范飼料、獸藥市場，嚴厲打擊假冒偽劣產(chǎn)品，實現(xiàn)全縣生豬生產(chǎn)的安全無污染，確保外銷到市場的是“放心豬”。

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所認真學(xué)習(xí)貫徹了縣局文件精神，開展以“瘦肉精”和重大動物疫病為主的檢測檢驗；加大對使用“瘦肉精”的打擊力度，建立生豬疫病防治體系，確保生豬及其加工產(chǎn)品的質(zhì)量安全。對檢測出“瘦肉精”的生豬產(chǎn)地在3個月內(nèi)禁止外銷，經(jīng)檢測合格后重新申請進入市場。逐步推行生豬產(chǎn)品市場準入制度、“一豬一標一碼”標識管理制度。對生豬“瘦肉精”進行重點抽檢，檢驗中凡發(fā)現(xiàn)有“瘦肉精”的生豬均進行銷毀，并向產(chǎn)地通報和封停該地生豬進入市場。

據(jù)匯總統(tǒng)計，2010年6月至8月份我縣共外銷生豬8603頭。分批次發(fā)往浙江省慈溪市、江蘇省無錫市、安徽省和縣、浙江省寧波市、江蘇省常州市、廣東省湛江市、安徽省合肥市、安徽省淮南市、安徽蒙城縣等九個城市和地區(qū)。“瘦肉精”檢測全部呈現(xiàn)陰性。其中6月份外銷生豬2053頭，抽檢生豬尿樣110多個，檢測結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，合格率達到100%。7月份外銷生豬3190頭，抽檢生豬尿樣160多個，檢測結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，合格率達到100%。8月份外銷生豬3360頭，抽檢生豬尿樣170多個，檢測結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，合格率達到100%。

二○一○年九月八日

主題詞：瘦肉精 抽檢 報告

通許縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所二○一○年九月八日印

第三篇：(瘦肉精)檢測制度

第十節(jié)

屠宰企業(yè)違禁藥物（瘦肉精）檢測制度

（適用實行瘦肉精企業(yè)自檢的地區(qū)）

一、為規(guī)范生豬定點屠宰廠（場）待宰生豬尿樣違禁藥物“瘦肉精”的日常檢驗工作，制定本制度。

二、定點屠宰廠（場）必須有滿足日常檢測需要的工作場所及實驗室，并應(yīng)保持光線充足，通風(fēng)良好，室內(nèi)環(huán)境整潔，基本設(shè)施齊全。

實驗室必須配備能滿足檢測工作需要的檢測人員和審核人員。

三、檢測人員必須經(jīng)過有關(guān)單位的培訓(xùn)，能獨立操作，包括樣本的采取和檢測。

四、定點屠宰廠（場）必須建立瘦肉精檢測臺帳，并建立人員崗位責(zé)任制，所有檢測設(shè)施、器材、記錄等都要專人妥善保管。

五、嚴格執(zhí)行省政府的有關(guān)要求，生豬宰前必須進行瘦肉精檢測，并實行每批必檢制度（一個檢疫證號為一批）。

六、檢測結(jié)果應(yīng)在屠宰廠（場）內(nèi)固定場所以醒目方式對外公示。

七、若檢測出現(xiàn)陽性結(jié)果，屠宰廠（場）必須將檢測結(jié)果立即報送當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機構(gòu)處理。

八、檢測方法按照《動物組織中鹽酸克倫特羅的測定 氣相色譜/質(zhì)譜法》NY/T 468-2006的規(guī)定執(zhí)行。

九、屠宰廠（場）應(yīng)自覺接受屠宰管理機構(gòu)和動物防疫監(jiān)督機構(gòu)對檢測工作開展監(jiān)督檢查、指導(dǎo)。

第四篇：瘦肉精檢測方法

目前，檢測瘦肉精的方法主要有四種，即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質(zhì)譜法（GC－MS）、毛細管區(qū)帶電泳法（CE）和免疫分析技術(shù)（IA）。而我國結(jié)合自己的實際情況，2001年農(nóng)業(yè)部首先組織制定了飼料中鹽酸克倫特羅的測定標淮。該標準選擇確定了兩種：即高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜一質(zhì)譜法（GC－MS）。其中將HPLC法作為檢測瘦肉精的半確證性方法，其最低檢測限為 0．05μg/kg，優(yōu)點是檢測精確度高，而且假陽性率低；缺點是檢測過程煩瑣、檢測時間長，需貴重儀器、難于操作、價格昂貴。而GC一MS法優(yōu)點是能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析。GC－MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低，已將GC－MS法定為檢測瘦肉精的確證性方法。GC－MS法的缺點同HPLC相似。

(1)試劑和材料 以下所有試劑，除特別注明外，均為分析純試劑；水為符合GB／T6682規(guī)定的二級水。

①鹽酸克倫特羅對照品：含鹽酸克倫特羅不得少于98．5％

②鹽酸

③無水甲醇

④氫氧化鈉

⑤磷酸二氫鉀

⑥磷酸

⑦鹽酸溶液 取鹽酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀68g，加水800ml溶解并用磷酸調(diào)pH值至3．O，用水稀釋至1000ml，即得。

⑨0．05mol幾磷酸二氫鉀溶液 取磷酸二氫鉀6．88，加水800ml溶解并用磷酸調(diào)pH值至3．0，用水稀釋至1000mi，即得。

a．氫氧化鈉溶液 取氫氧化鈉48，加水使溶解成100mi，即得。

b．鹽酸克倫特羅對照品儲備液(1mg／mi)準確稱取28．3mg鹽酸克倫特羅對照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩鹽酸克倫特羅對照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi儲備液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1個月。

⑾鹽酸克倫特羅對照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1個月。

⑿鹽酸克倫特羅檢測試劑盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)儀器和設(shè)備

①酶聯(lián)免疫反應(yīng)讀數(shù)儀

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷凍離心機

⑤50mi具塞離心管

⑥勻漿機

⑦微型振蕩器

⑧回旋振蕩器

⑨微量移液器 單道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干熱濃縮器

①空氣壓縮機

(3)測定步驟

①試料的制備(尿)

取供試尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為供試試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

取空白尿lml，于3000r／min離心l0min，上清液作為空白試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

取空白尿2ml，于3000r／min離心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克倫特羅對照溶液20／H。作為2ug/l空白添加試料，直接供酶聯(lián)免疫測定法測定。

②試料的制備(肝)

取約l00g新鮮或冷凍后融化的空白或供試豬肝,用勻漿機以10000r／rain勻漿1-2min，使均勻呈糊狀，一20~C以下冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

取均漿后的供試肝樣，作為供試試料。

取均漿后的空白肝樣，作為空白試料。

取均漿后的空白肝樣(1土0．05)e添加l00ng／m1的克倫特羅對照溶液20tzL作為2ng／g空白添加試料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z試料，置50ml離心管中；加鹽酸溶液5.0mi，旋渦混勻，中速振蕩1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度離心15min；上清液移人另一50ml離心管中，加入氫氧化鈉溶液300gL，混勻，振蕩15min；加0.5mol／l磷酸二氫鉀溶液4。0ml，混勻，2—8~C放置過夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度離心15min，上清液備用。

b．凈化(肝)C，固相萃取柱依次用無水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液2mi預(yù)洗，不使柱床干涸；將備用上清液全部過柱；用0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液2ml淋洗，擠干，棄去所有淋洗液；用無水甲醇2mi洗脫，流速控制在0.5ml／mm以下，擠干，收集洗脫液；于50～60~C下用氮氣或空氣緩緩吹干洗脫液；殘余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度離心15rain，清液作為試樣溶液供酶聯(lián)免疫測定法測定。

③測定

a．室溫應(yīng)控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的試劑盒，按每個標準溶液和試樣溶液至少兩孔計算所需酶聯(lián)板條的數(shù)量，插入框架。每個微孔加入用緩沖溶液100倍稀釋的抗體100~tL，封口膜封板，室溫孵育30min。

c倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒有殘余液體。用多道移液器加水250pL到酶聯(lián)板的微?L內(nèi)，稍后倒出孔內(nèi)液體，再將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，如此重復(fù)操作洗板3次。

d．分別吸取標準溶液、空白試料、空白添加試料和供試試料各20uL，分別放入不同微孔底中央，并在每孔內(nèi)加入用緩沖溶液100倍稀釋的酶結(jié)合物100~I。，在微型振蕩器上混勻，用封口膜封好，室溫孵育30min。

e．倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒有殘余液體，重復(fù)洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物緩沖溶液10倍稀釋的底物100uL，室溫避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加終止液100uL。

h．在1h內(nèi)將酶聯(lián)板放于酶標儀內(nèi)，于450nm波長處測定吸光度值。

(4)計算 用數(shù)據(jù)分析軟件對結(jié)果進行分析，繪出標準曲線，并得出試料中克倫特羅的含量。

(5)靈敏度和回收率

本方法的平均檢測下限為0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加濃度水平上豬尿回收率范圍為60％一120％，豬肝回收率范圍為40％～120％。

第五篇：瘦肉精相關(guān)檢測標準匯總

瘦肉精相關(guān)檢測標準匯總

央視曝光雙匯濟源分公司收購含“瘦肉精”豬肉，瘦肉精再次引起人們的關(guān)注，因此匯總整理出瘦肉精相關(guān)檢測標準，供大家參考。

GB/T5009.192-2003動物性食品中克倫特羅殘留量的測定

本標準規(guī)定了動物性食品中克倫特羅的測定方法。本標準適用于新鮮或冷凍的畜、禽肉與內(nèi)臟及其制品中克倫特羅殘留的測定。本標準也適用于生物材料(人或動物 血液、尿液)中克倫特羅的測定。本方法檢出限：第一法氣相色譜—質(zhì)譜法為0.5μg/kg;第二法高效液相色譜法為0.5μg/kg；第三法酶聯(lián)免疫法為0.5μg/kg。線性范圍：第一法氣相色譜—質(zhì)譜法為0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色譜法為0.5ng～4ng；第三法酶聯(lián)免疫法為 0．004ng～0.054ng。

GB/T20189-2006飼料中萊克多巴胺的測定高效液相色譜法

本標準規(guī)定了檢測動物飼料中萊克多巴胺含量的高效液相色譜（HPLC）方法。本標準適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中萊克多巴胺含量的測定。

GB/T21036-2007飼料中鹽酸多巴胺的測定高效液相色譜法

本標準適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中鹽酸多巴胺含量的測定。

GB/T22147-2008飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測定液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

本標準規(guī)定了同步測定飼料中β-激動劑沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。GB/T21313-2007動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了β-受體激動劑類獸藥殘留檢測的制樣方法和高效液相色譜/質(zhì)譜確證方法。本標準適用于豬肉、豬肝、豬腎等動物源性食品以豬屎中克倫特羅、沙丁胺醇、妥布特羅、特布它林、非諾特羅、福莫特羅、萊克多巴胺、異丙喘寧等8種β-受體激動劑類殘留量的高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。

GB/T22286-2008動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了動物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特羅（cimat-erol）、塞布特羅（cimbuterol）、萊克多巴胺（ractompamine）、克侖特羅（clenbuterol）、溴布特羅（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、馬布特羅（mabuterol）、馬賁特羅（mapenterol）、溴代克侖特羅（brom-chlorbuterol）殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測定方法。

本標準適用于豬肝和豬肉中沙丁胺醇，特布他林、塞曼特羅、塞布特羅、萊克多巴胺、克侖特羅、溴布特羅、苯氧丙酚胺、馬布特羅、馬賁特羅、溴代克侖特羅殘留量的檢驗。

NY438-2001飼料中鹽酸克侖特羅的測定

本標準規(guī)定了以高效液相色譜(HPLC)法和氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法測定飼料中鹽酸克侖特羅的方法，規(guī)定GC-MS法為仲裁法。本標準適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中鹽酸克侖特羅的測定與仲裁。HPLC法的最低檢測限為0.5ng(取樣5g時，最低檢測濃度為0.05mg/kg)。GC-MS法最低檢測限為0.025ng(取樣5g時，最低檢測濃度為0.01mg/kg)。

NY/T933-2005尿液中鹽酸克侖特羅的測定膠體金免疫層析法 本標準規(guī)定了用膠體金免疫層析法檢測尿液中鹽酸克侖特羅。本標準適用于豬、牛尿液中鹽酸克侖特羅的快速檢測。檢測限為3ng/mL。

NY/T468-2006動物組織中鹽酸克倫特羅的測定氣相色譜-質(zhì)譜法

該標準替代NY/T 468-2001 動物組織中鹽酸克倫特羅的測定氣相色譜-質(zhì)譜法本標準規(guī)定了以氣相色譜/質(zhì)譜（GC/MS）法測定動物組織中鹽酸克倫特羅殘留的方法。本標準適用于動物肝組織中鹽酸克倫特羅的測定。方法的檢出限為2.0ug/kg。

NY/T1030-2006飼料中沙丁胺醇的測定氣相色譜-質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了用氣相色譜/質(zhì)譜法（GC/MS）測定飼料中沙丁胺醇的含量。本標準適用于配合飼料、濃縮飼料及添加劑預(yù)混合飼料中沙丁胺醇的測定，最低檢測濃度為0.02mg/kg。

NY/T1460-2007飼料中鹽酸克侖特羅的測定酶聯(lián)免疫吸附法

本標準適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中鹽酸克侖特羅的測定。SN/T1116-2002進出口飼料中克倫特羅、沙丁胺醇殘留量的檢驗方法液相色譜法

本標準規(guī)定了進出口飼料中克倫特羅、沙丁胺醇殘留量檢驗的抽樣、制樣和液相色譜測定方法。本標準適用于進出口全價飼料和預(yù)混飼料中克倫特羅、沙丁胺醇殘留量的檢驗。

SN/T1924-2007進出口動物源性食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了動物源性食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的制樣和測定方法。本標準適用于動物源性食品肌肉和肝臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測本標準2011年7月1日起被SN/T1924-2011代替。

農(nóng)業(yè)部958號公告-3-2007動物源食品中萊克多巴胺殘留量的測定高效液相色譜法-質(zhì)譜法 本標準適用于豬肌肉、豬肝和豬腎中萊克多巴胺殘留量的測定。

農(nóng)業(yè)部958號公告-4-2007動物組織及動物尿液中萊克多巴胺殘留檢測方法氣相色譜-質(zhì)譜法 本標準適用于豬肌肉、豬肝、豬尿和牛尿中萊克多巴胺殘留量的測定。

農(nóng)業(yè)部958號公告-8-2007?？墒承越M織中克侖特羅殘留檢測方法氣相色譜-質(zhì)譜法 本標準適用于牛的肌肉、肝臟、腎臟中克侖特羅殘留量的定量檢測。

農(nóng)業(yè)部1025號公告-6-2008動物性食品中萊克多巴胺殘留檢測酶聯(lián)免疫吸附法

本標準規(guī)定了檢測動物性食品中萊克多巴胺殘留量的酶聯(lián)免疫吸附測定法。本標準適用于豬肉、豬肝和豬尿液中萊克多巴胺殘留量的檢測。

農(nóng)業(yè)部1025號公告-11-2008豬尿中β-受體激動劑多殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

本標準適用于豬尿中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和西馬特羅單個或混合物殘留量的檢測。農(nóng)業(yè)部1025號公告-16-2008動物尿液中鹽酸克倫特羅殘留檢測氣相色譜-質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了動物尿液中鹽酸克倫特羅殘留量檢測的制樣和氣相色譜-質(zhì)譜的測定方法。本標準適用于豬尿中鹽酸克倫特羅的殘留量檢測。農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

本標準適用于豬肝、豬肉、牛奶和雞蛋中特步他林、西馬特羅、沙丁胺醇、非諾特羅、氯丙那林、萊克多巴胺、克侖特羅、妥布特羅和噴布特羅單個或混合物殘留量的檢測。

農(nóng)業(yè)部1031號公告-3-2008豬肝和豬尿中β-受體激動劑殘留檢測氣相色譜-質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了豬肝和豬尿中β-受體激動劑類藥物（馬布特羅、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、班布特羅和萊克多巴胺）含量檢測的制樣和氣相色譜質(zhì)譜法的測定方法。本標準適用于豬肝和豬尿中β-受體激動劑類藥物（馬布特羅、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、班布特羅和萊克多巴胺）含量的檢測。

農(nóng)業(yè)部1063號公告-3-2008動物尿液中11種β-受體激動劑的檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了動物尿液中克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、齊帕特羅、氯丙那林、特步他林、西馬特羅、西布特羅、馬布特羅、溴布特羅、班布特羅等11種β-受體激動劑的液相色譜--串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標準適用于動物尿液中克侖特羅等11種β-受體激動劑的測定。方法檢測限為0.1ng/mL，定量限為0.2ng/mL。

農(nóng)業(yè)部1063號公告-6-2008飼料中13種β-受體激動劑的檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了飼料中克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、齊帕特羅、氯丙那林、特布他林、西馬特羅、西布特羅、馬布特羅、溴布特羅、克侖普羅、班布特羅、妥布特羅等13種β-受體激動劑的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標準適用于飼料中克侖特羅等13種β-受體激動劑殘留量的測定。方法檢測限為0.01mg/kg，定限量為0.05mg/kg。

農(nóng)業(yè)部1063號公告-7-2008飼料中8種β-受體激動劑的檢測氣相色譜-質(zhì)譜法

本標準規(guī)定了測定飼料中8種β-受體激動劑的氣象色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）。本標準適用于配合飼料中氯丙那林、馬布特羅、特步他林、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、齊帕特羅、班布特羅、萊克多巴胺的測定。本方法的定量限和檢出限：萊克多巴胺為0.5mg/kg和0.1mg/kg,其他7種類藥物分別為0.05mg/kg0.01mg/kg。