第一篇：微生物分離實驗報告（定稿）

微生物分離實驗報告

實驗儀器及材料

土樣：18號土樣 試劑及培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：果膠酶篩選培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶真菌篩選培養(yǎng)基；果膠酶劃線分

離培養(yǎng)基；幾丁質(zhì)酶劃線培養(yǎng)基；細(xì)菌半固體培養(yǎng)基；淀粉培養(yǎng)基；葡萄糖酵解培養(yǎng)基；乳糖酵解培養(yǎng)基；蛋白胨水培養(yǎng)基

a)試劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、番紅復(fù)染液等各種染料以及盧戈氏碘液、95%

乙醇、5%孔雀綠水溶液、無菌水等

儀器

錐形瓶（500mL×2；300mL×2；100mL×3）、培養(yǎng)皿（20套）、試管（20支）、移液管（3支）、燒杯、玻璃棒、載玻片、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、涂布棒、U型管、德漢氏小管、酒精燈、漏斗、接種環(huán)、濾紙、棉塞、牛皮紙、無菌操作臺、滅菌鍋、紗布等

細(xì)菌的篩選，分離純化及鑒定 細(xì)菌的篩選

土樣處理

配制生理鹽水：在燒杯中配置200ml0.85％的生理鹽水，用移液管各移取9ml于五支潔凈試管，再移取90ml配置好的生理鹽水于三角燒瓶，并放入少許玻璃珠，包好滅菌；

加土樣：冷卻后準(zhǔn)確稱取10g土樣放入盛有90ml無菌生理鹽水并帶有少許玻璃珠的三角燒瓶中，充分震蕩搖勻，然后放在30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置15min。

果膠酶菌種篩選

梯度稀釋：用一支無菌吸管吸取1ml土壤懸液加入到盛有9ml無菌水的試管中充分混勻，此為10-1稀釋液，以此類推制成10-

2、10-3兩種稀釋度的土壤溶液（如下圖）；

涂布：配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號筆做好標(biāo)記，分別寫上10-

1、10-3兩種稀釋度字樣，每稀釋度標(biāo)記三皿，然后用無菌吸管分別由10-

3、10-1兩管土壤稀釋液中吸取適量對好放入已寫好稀釋度的平板中央位置，每皿準(zhǔn)確放入0.2ml，用無菌玻璃棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，其方法是將菌液先沿一條直線輕輕地來回推動，使之均勻分布，然后改變方向90度沿另一垂直線來回推動，平板內(nèi)邊緣處改變方向用涂布棒再涂布幾次；

培養(yǎng)：將平板倒置于30℃恒溫箱中培養(yǎng)1-2天；

果膠酶透明圈平板檢測：取10-1涂布平皿，用0.5％的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，則說明水解圈內(nèi)的菌有水解果膠的能力；

菌落描述：取此菌進(jìn)行菌落形態(tài)描述，就菌落的大?。ù?、中，?。?，顏色（白，黃，粉紅等），干濕（干、濕），邊緣（整齊，不整齊），表面（光滑，粗糙，有無突起等）分別進(jìn)行闡述并詳細(xì)記錄； 細(xì)菌的分離純化

劃線分離：制備果膠酶劃線培養(yǎng)基，滅菌后倒平板，挑取具有水解圈的菌種，第一次劃線分離培養(yǎng)1-2天后取分離所得單菌落再進(jìn)行第二次劃線分離，劃線分離的具體方法是：先在平皿上劃定區(qū)域，然后將接種針在火焰上進(jìn)行滅菌操作，取含菌種的培養(yǎng)皿，在火焰上方（注意：不

圖 細(xì)菌的劃線分離示意圖

能離火焰太近）打開培養(yǎng)皿蓋，先拿接種針在上蓋處劃線以降溫，然后用接種針輕挑所選菌落一到兩下，將平皿蓋上放好，再取剛剛冷卻了的干凈平皿在1區(qū)進(jìn)行劃線接種操作。操作完畢后對接種針進(jìn)行滅菌操作，完成后在火焰上方打開平皿蓋，將接種針冷卻后從1區(qū)引線到2區(qū)，再如圖所示劃線，劃完后引線到3區(qū)，同上進(jìn)行劃線，劃線完畢后蓋蓋平放；

純種保藏：再配制一份普通細(xì)菌培養(yǎng)基，分裝試管后滅菌，制得斜面，將純種劃線接種在斜面上培養(yǎng)保存并進(jìn)行下一步的鑒定。

a)純種果膠酶水解能力的測定

配制果膠酶篩選培養(yǎng)基，110度滅菌20-30分鐘，冷卻后倒平板在培養(yǎng)皿蓋周邊用記號筆做好標(biāo)記，將分離純化的細(xì)菌點種于平板上（注意：點種的量不宜過多，以3～4個為宜），在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2天，取培養(yǎng)后的平皿用0.5％的剛果紅染色15-20min后，倒掉剛果紅，用1mol/L的NaCl脫色幾分鐘至觀察到透明圈，測量并記錄透明圈的大小

b)簡單染色步驟 i.涂片 取一塊載玻片，在上邊用膠頭滴管加半滴無菌水，用接種環(huán)無菌操作將沾有菌的接種環(huán)置于載玻片上的無菌水種涂抹，待看到微弱的渾濁即可；（注意取菌不要太多）

ii.干燥與固定

涂菌面朝上，通過火焰以干燥并固定菌物，固定過程應(yīng)使載玻片通過火焰2-3次，注意溫度的控制，過熱的溫度會將細(xì)菌殺死，溫度以手背感覺微微發(fā)燙為標(biāo)準(zhǔn)；

iii.染色

將載玻片平放于載波片支架上，滴加結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位即可，染色1.5min iv.水洗

傾去染液，將載玻片的涂菌面朝下，自來水沖洗，水流不宜太急、太大，至洗出水無色為止；

v.干燥

用吸水紙吸去多余水分后自然干燥； vi.鏡檢

將制備好的樣片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)。

c)革蘭氏染色步驟 i.涂片

先在載玻片一側(cè)用記號筆標(biāo)記間隔的四個區(qū)域，在另一側(cè)四個區(qū)域的位置分別滴加半滴無菌水。分別取四種活躍生長期菌種（大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草桿菌和一種自選菌）按常規(guī)方法涂片（不宜過厚），用酒精燈按照簡單染色中所述干燥和固定的方法對四種菌進(jìn)行干燥和固定。

ii.初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染液使之覆蓋涂菌部位，染色1.5min后水洗； iii.媒染

先用盧戈氏碘液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1min后水洗； iv.脫色

先用乙醇沖去水跡，然后用95%乙醇覆蓋脫去色素，脫色約30s，立即用水沖洗；

v.復(fù)染

先用番紅洗去水跡，然后滴加番紅復(fù)染1.5min后水洗； vi.鏡檢

將制備好的樣片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂?，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油，用油鏡觀察細(xì)菌。分別以大腸桿菌與金黃色葡萄球菌所染顏色作為對照，來判斷枯草桿菌以及另一種自選菌的染色結(jié)果。

d)芽孢染色步驟 i.涂片，加熱干燥及固定

在潔凈蓋玻片接近中部兩處分別滴一滴無菌水，分別接種枯草芽孢桿菌及梭狀芽孢桿菌。然后按照常規(guī)方法加熱干燥及固定；

ii.孔雀綠加熱染色

用木夾夾住載玻片，向載玻片上滴加5%孔雀綠水溶液使之完全覆蓋涂菌部位，然后在酒精燈上微微加熱（孔雀綠著色能力強，加熱可使較難染色的芽孢染成綠色，且再難洗脫）至染液冒蒸汽開始計時并維持5min，注意加熱時應(yīng)以有蒸汽微微冒出為宜，過熱或加熱不足均會影響觀察效果，且加熱時在載玻片上隨時補加染液，切勿讓涂片干涸；

iii.水洗

水洗一定要等載玻片冷卻后進(jìn)行，否則可能導(dǎo)致載玻片的破裂。具體水洗按常規(guī)方法進(jìn)行； iv.復(fù)染

用0.5%番紅水溶液復(fù)染2min； v.水洗并干燥

按常規(guī)方法水洗后自然干燥； vi.鏡檢

先在低倍鏡下尋找視野范圍，然后換用高倍鏡調(diào)焦，最后加香柏油在油鏡下仔細(xì)尋找兩種細(xì)菌以及其周圍或內(nèi)部染成綠色的芽孢。

e)半固體穿刺法觀察細(xì)菌運動性 i.配制培養(yǎng)基

配制半固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，分裝于4支試管內(nèi)，110度滅菌20-30分鐘，正立于燒杯中冷卻至室溫；

ii.在無菌操作臺上右手握接種針,以針挑取菌苔.垂直刺入半固體瓊脂培養(yǎng)的中心直至接近(但勿觸及)試管底,然后循原路退出。如圖所示：

iii.接種完成后在30℃條件下培養(yǎng)兩天觀察并判斷其運動性。

第二篇：土壤微生物的分離培養(yǎng)技術(shù)實驗報告

重慶大學(xué)研究生專業(yè)實驗教學(xué)

實驗報告書

實驗課程名稱： 實驗指導(dǎo)教師： 學(xué)

院： 專業(yè)及類別： 學(xué)

號： 姓

名： 實驗日期： 成績：

重慶大學(xué)研究生院制

一、實驗?zāi)康?/p>

1、了解分離與純化微生物的基本原理及方法；

2、了解倒平板配制土豆培養(yǎng)基的方法與平板劃線分離的基本操作技術(shù)；；

3、學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計數(shù)的基本原理和方法，并掌握其基本技能；

4、初步觀察來自土壤中的幾類微生物的菌落形態(tài)特征，并能判斷菌的類型。

二、實驗原理

1、培養(yǎng)基的種類

培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒別、保存各種微生物或積累代謝產(chǎn)物。一般的培養(yǎng)基應(yīng)包含適合微生物生長的6大營養(yǎng)素即水分、碳源、氮源、能源、無機鹽和生長因子。培養(yǎng)基的種類很多，根據(jù)培養(yǎng)成分的不同可分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基與半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)的不同又可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。微生物的分離、純化、記數(shù)等方面的研究常常使用的就是固體培養(yǎng)基。本實驗就是使用的固體培養(yǎng)基。

已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，如來不及滅菌，應(yīng)暫存冰箱，以防止其中微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分和改變培養(yǎng)基酸堿度所帶來不利影響。

培養(yǎng)基的原材料來源十分廣泛，本實驗采用的原材料為土豆。

2、接種方法與無菌接種

將微生物的培養(yǎng)物或含有微生物的樣品移植到培養(yǎng)基上的操作技術(shù)稱之為接種。接種是微生物實驗及科學(xué)研究中的一項最基本的操作技術(shù)。接種的關(guān)鍵是要嚴(yán)格的進(jìn)行無菌操作。微生物的接種方法很多，劃線接種、三點接種、穿刺接種、混澆接種與涂布接種是幾種常用的接種方法。

劃線接種是最常用的接種方法，即在固體培養(yǎng)基表面作來回直線形的移動，就可以達(dá)到接種的目的。常用的接種工具為接種環(huán)、針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。三點接種是把少量的微生物接種在平板表面，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落后，來觀察研究它們的形態(tài)。研究霉菌形態(tài)時就常用此法。

穿刺接種是用針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺。該法常用于厭氧菌種的保藏或微生物的動力研究。

混澆接種是先將待接的微生物放入培養(yǎng)皿中再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就被稀釋了。待平板凝固后，置于適宜溫度下培養(yǎng)，就可以長出單個菌落的微生物。

涂布接種是將菌液倒入平板上，再用涂布棒在表面迅速的作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可以長出單個菌落的微生物。

本實驗采用的是劃線接種。為了防止接種時引入其它微生物，整個操作過程均需在無菌操作臺上進(jìn)行，還需對操作員的雙手進(jìn)行酒精消毒，每次劃線前都需灼燒接種環(huán)，接種時才打開培養(yǎng)皿且不能全部打開，接種完馬上關(guān)上。

三、實驗器材

1、儀器

培養(yǎng)皿、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、15ml離心管、試管架、鑷子、電磁爐、鍋、恒溫培養(yǎng)箱、高溫滅菌鍋、無菌操作臺、酒精燈、天平、濾紙等。

2、材料

土豆、瓊脂、蒸餾水、酒精、土壤樣品

四、實驗步驟

1、土壤稀釋液的配制

① 在菜地用九點取樣法取適量土壤樣品，具體操作為：在菜地選取九個取樣點，在每個取樣點取相同量的表層土壤（10cm左右），然后將其混合均勻；

② 稱取1g土壤樣品與99ml蒸餾水，將其配制成100ml的土壤溶液； ③ 用移液管取9ml蒸餾水于15ml離心管中，再用移液槍取1ml前一步已配制的土壤溶液于離心管中，搖勻，即為10-3的土壤溶液；

④ 重復(fù)前一步，將土壤溶液稀釋為10-

4、10-

5、10-

6、10-

7、10-8一系列稀釋液。

2、土豆培養(yǎng)基的制備

① 用天平稱取200g土豆，清洗干凈后去皮切??；

② 用量筒量取1000ml蒸餾水與電磁爐鍋中，再加入已準(zhǔn)備好的土豆，將其煮爛；

③ 從鍋中取出已煮爛的土豆，用紗布過濾，濾液待用； ④ 稱取20g瓊脂與濾液中，再用蒸餾水定容至1000ml；

⑤ 在制備好的濾液中加入0.1ml菌液，然后放入高溫滅菌鍋中，在121℃下滅菌20min；

⑥ 取出已滅菌的土豆培養(yǎng)基，待其熔化后冷卻至60℃，倒入每付平板約15-20ml，待其凝固后便可使用。

3、微生物的接種與分離

① 將接種需要的所有器材均放置于無菌操作臺上；

② 用浸泡在酒精里棉花給雙手滅菌，點燃酒精燈，右手拿接種環(huán)，左手拿培養(yǎng)基；

③ 將接種環(huán)放在火焰上燒灼，待其冷卻后在10-6土壤稀釋液中蘸取少量液體，打開培養(yǎng)基的一部分，采用劃線接種，使之形成單菌落，一共劃線3-4次，每劃線一次就需在火焰上燒灼一次；

④ 重復(fù)上步，接種10-

7、10-8的土壤稀釋液的微生物；

⑤ 接種完的培養(yǎng)基放在恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48h，取出觀察。

五、結(jié)果與思考

1、實驗結(jié)果

圖1 實驗結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，采用劃線接種土壤微生物的培養(yǎng)皿里有單菌落出現(xiàn)，這說明劃線接種能達(dá)到分離培養(yǎng)的目的。

學(xué)習(xí)過微生物這門課程的同學(xué)都知道，真菌的菌落較大且疏松，菌絲細(xì)長，呈絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀、棉絮狀，無固定大小，多有光澤，不易挑，孢子會呈現(xiàn)紅色、褐色、綠色、黑色、黃色等不同的顏色；細(xì)菌的菌落較小，形狀表面或光滑黏稠，或粗糙干燥，易挑起，多為白色。由此可知土壤里既含有真菌又含有細(xì)菌。

2、思考題

⑴在平板劃線法中，為什么每次都需要將接種環(huán)上的剩余物燒掉？

答：這么做的主要目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，以使下次劃線的菌種直接來自于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少，從而達(dá)到分離菌株的目的。

⑵為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？

答：①操作時培養(yǎng)皿蓋上可能粘有水珠或者細(xì)菌，倒著培養(yǎng)可以避免培養(yǎng)皿蓋上的水珠或者微生物落在培養(yǎng)皿上；

②培養(yǎng)過程中，細(xì)菌在代謝繁殖過程中會產(chǎn)生一些有害于細(xì)菌生長繁殖的代謝物，釋放熱量及有水排出，如果不倒著培養(yǎng)會有水珠滴落到培養(yǎng)基中，影響菌落的生長;③如果培養(yǎng)目標(biāo)是收集細(xì)菌代謝物，而且代謝物易溶于水，倒著培養(yǎng)可能會方便收集。

六、實驗總結(jié) 我本科所學(xué)專業(yè)是材料科學(xué)與工程，本次實驗是我高中后第一次接觸微生物方面的知識。在本次實驗課里，段老師先給我們詳細(xì)講解了微生物分離培養(yǎng)方面的許多理論知識，然后才進(jìn)入了理論環(huán)節(jié)。在實驗操作過程中段老師一直在我們旁邊觀察我們的實驗操作過程，一旦出現(xiàn)錯誤，會立即指出并耐心的給我們講解應(yīng)該怎么做，我擔(dān)心自己從來沒做過微生物培養(yǎng)方面的實驗會做不好，段老師還一直在旁邊鼓勵我，并給我講解了許多微生物分離培養(yǎng)方面的知識，最后我獨立完成了本次實驗。此次實驗課，我真的是受益匪淺，學(xué)到了許多微生物分離培養(yǎng)方面的知識，十分感謝段老師。

圖2 如圖2所示，本次微生物分離培養(yǎng)實驗中，有些培養(yǎng)皿里菌落很少，只有一個，有的甚至沒有。我認(rèn)為出現(xiàn)這種情況原因可能是：劃線接種時，未等接種環(huán)冷卻就開始接種，微生物可能被高溫殺死；在接種時，酒精燈火焰太大，進(jìn)行接種操作的全過程又離酒精燈火焰很近，這也可能將微生物殺死。

第三篇：微生物實驗報告

微生物實驗報告

姓名：阿曼古麗

學(xué)號：09070401042

班級：生物科學(xué)08-班

微生物實驗課程已經(jīng)接近尾聲，同時訓(xùn)練我們實際動手能力的實驗課程也已經(jīng)全部結(jié)束，通過自己切身動手設(shè)計，操作實驗，感到收獲頗多。

我覺得最重要的就是實驗過程中操作實驗的重要性。實驗操作可以說是實驗成功與否的關(guān)鍵部分，可是馬虎不得。對于需要團隊合作的實驗，個人認(rèn)為要有強勢的人員搭檔，不說是精通實驗操作規(guī)程，最少也得知道實驗的基本操作，掌握要做實驗的基本放法，這對于后續(xù)的實驗無疑是有決定性作用的。對于個人的實驗?zāi)芰?，關(guān)鍵還是要看平時的實驗積累，有些實驗操作繁瑣復(fù)雜，需要極大的耐心，這些都應(yīng)該是逐漸培養(yǎng)起來的。

在這里我以學(xué)過的幾個實驗為例，簡單談一下自己的心得體會。

（一）環(huán)境因素對微生物生長的影響

溫度對微生物學(xué)報的大分子（蛋白質(zhì)、核酸等）穩(wěn)定性、酶的活性、細(xì)胞膜的流動性和完整性等方面有重要的影響。過高溫度會導(dǎo)致蛋白質(zhì)（酶）及核酸變性失活，細(xì)胞膜破壞等，而過低溫度會使酶活性受抑制，細(xì)胞新陳代謝活動減弱

pH值過高或過低會使蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子所帶電荷發(fā)生變化，影響其生物活性，甚至導(dǎo)致變性失活，還可以引起細(xì)胞膜電荷變化，影響學(xué)報對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，同時還會改變環(huán)境中物質(zhì)的可給性及有害物質(zhì)的毒性。紫外線誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶二聚體和DNA交聯(lián)，從而抑制DNA的復(fù)制。此外，細(xì)菌具有光復(fù)合效應(yīng)。紫外線穿透力弱，加一張蠟光紙即可阻止其穿過。

在自然界中普遍存在微生物間的拮抗現(xiàn)象，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性地抑制或殺死其他微生物。

常用化學(xué)消毒劑包括有機溶劑（酚、醇、醛等）、重金屬、鹵素元素及其化合物、染料和表面活性劑。有機溶劑使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，破壞細(xì)胞膜；重金屬鹽也可使使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，或與細(xì)胞代謝產(chǎn)物螯合使之變成無效化合物；碘與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活；低濃度染料可抑制細(xì)菌生長，革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌對染料更加敏感。

影響微生物生長的外界因素很多，其一是前面討論過的營養(yǎng)物質(zhì)，其二是許多物理、化學(xué)因素。當(dāng)環(huán)境條件的改變，在一定限度內(nèi)，可引起微生物形態(tài)、生理、生長、繁殖等特征的改變；當(dāng)環(huán)境條件的變化超過一定極限時，則導(dǎo)致微生物的死亡。研究環(huán)境條件與微生物之間的相互關(guān)系，有助于了解微生物在自然界的分布與作用，也可指導(dǎo)人們在食品加工中有效地控制微生物的生命活動，保證食品的安全性，延長食品的貨架期。

（二）革

蘭

氏

染

色

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

革蘭氏陰性菌，以[大腸桿菌]為代表。大腸桿菌為兼氣性菌種，一般生存於腸道中及厭氧的還境中。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的特徵為有一層out member 與陽性菌種不同。目前對大腸桿菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指標(biāo)外，很多分子生物學(xué)方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當(dāng)作實驗宿主。

臨床應(yīng)用：用于革蘭氏細(xì)菌分類形態(tài)觀察前的染色。主要應(yīng)用于細(xì)菌分類和鑒定，革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。

適用范圍：適宜石蠟切片、涂片等染色。

（三）活菌計數(shù)

菌計數(shù)法

此法又稱活菌計數(shù)法，其原理是每個活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。將待測樣品經(jīng)一系列 10 倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取 0.2ml 放入無菌平皿，再倒入適量的已熔化并冷至 45 ℃ 左右的培養(yǎng)基，與菌液混勻，冷卻、待凝固后，放入適宜溫度的培養(yǎng)箱或溫室培養(yǎng)，長出菌落后，計數(shù)，按下面公式計算出原菌液的含菌數(shù)：

每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個以上重復(fù)平皿

菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)× 5

此法還可以將稀釋的菌液取 0.2m 1 加到已制備好的平板上，然后用無菌涂棒將菌液涂布整個平板表面，放入適宜溫度下培養(yǎng)，計算菌落數(shù)，再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數(shù)。此法可因操作不熟練造成污染，或因培養(yǎng)基溫度過高損傷細(xì)胞等原因造成結(jié)果不穩(wěn)定。盡管如此，由于該方法能測出樣品中微量的菌數(shù)，仍是教學(xué)、科研和生產(chǎn)上常用的一種測定細(xì)菌數(shù)的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽抱與抱子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等。

隨著微生態(tài)學(xué)的發(fā)展，微生態(tài)療法通過調(diào)整腸道菌群作為部分疾病的輔助治療已應(yīng)用于臨床。糞便標(biāo)本腸道菌群的定量檢測方法——平板活菌計數(shù)法能夠較好地判定其療效以及腸道菌群是否存在失調(diào)和失調(diào)的程度。此種方法計數(shù)的線性范圍大，能較好的反映菌落的疏密程度。重復(fù)性、平行性好，但操作較繁瑣，且測定值常受各種因素的影響，需要操作者有熟練的技術(shù)。

在同學(xué)們的相互配合和老師的耐心指導(dǎo)下，這門實驗課也接近了尾聲，在這一學(xué)的這門實驗課中我也學(xué)到了很多的實驗室知識。為了保證實驗過程高質(zhì)高量完成，除了實驗準(zhǔn)備及實驗過程外，還要求實驗技術(shù)人員必須具備相應(yīng)的素質(zhì)，實驗操作人員必須具備較扎實的專業(yè)基礎(chǔ)、熟練的實驗技能及高度的責(zé)任心，在工作中要善于總結(jié)，同時一定要和老師積極溝通，不懂得地方及時向他請教，在以后的學(xué)習(xí)和工作中，我會繼續(xù)保持這種態(tài)度，認(rèn)真完成老師交給的各項任務(wù)。

第四篇：環(huán)境中微生物的檢測和分離純化實驗報告

環(huán)境中微生物的檢測和分離純化

一． 實驗原理

1.微生物的分離與純化

土壤中含有豐富的微生物，可以從中分離純化得到很多有價值的菌株。

微生物常用的分離方法是平板分離法，根據(jù)某種微生物對生長條件的不同要求供給它適宜的培養(yǎng)環(huán)境，再用稀釋涂布平板法或稀釋后平板劃線分離，純化該微生物，直到得到純菌株。

2.平板菌落計數(shù)法

將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中微生物充分分散成單個細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中含的菌落數(shù)。

二． 實驗材料與試劑

1.土壤稀釋溶液

2.取液器（1000ml 1支），培養(yǎng)箱，培養(yǎng)皿（12個），無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環(huán)，1000ml無菌吸頭若干，記號筆，酒精燈，火柴，試管架。

三． 實驗步驟

（一）.無菌平板制備

1.采用疊皿法把牛肉凍蛋白膏培養(yǎng)基倒入滅好菌的培養(yǎng)皿中，制作無菌平板

（二）.周圍環(huán)境中微生物的檢測

2.取一平板，分成6個區(qū)，做好標(biāo)記。同一個人同一根手指頭按如下要求用力一致進(jìn)行操作：分別用未洗過的手指頭，自來水打濕的手指頭，自來水認(rèn)真洗過的手指頭，洗手液洗過一遍的手指頭，洗過兩遍的，洗手液洗過又用酒精棉球消毒后的手指頭 在六個區(qū)上涂抹。（平板1）

3.取一平板，分區(qū)，分別用使用過的紙巾，硬幣，舊紙幣，餐卡在不同區(qū)拖動。（平板2）

4.在培養(yǎng)基上方抖動頭發(fā)數(shù)次。（平板3）

5.取一平板，分區(qū)，用無菌接種環(huán)分別蘸一滴自來水，河水，豆?jié){在不同區(qū)劃線。（平板4）

6.用無菌牙簽取一點牙垢在培養(yǎng)基上劃線。（平板5）

7.取兩個平板，一個打開在實驗臺上放置30分鐘，另一個在酒精燈火焰邊打開皿蓋1分鐘。（平板6）

8.取一平板，打開蓋，咳幾下。（平板7）

（三）.從土壤中分離微生物

1.采土樣

2.制備土壤稀溶液

3.涂布

吸取100ml稀釋好的土壤稀溶液，較均勻地滴在平板上，再用無菌涂棒涂布均勻，涂1—2分鐘

4.培養(yǎng)

將培養(yǎng)基平板倒置于37℃下培養(yǎng)24小時

5.菌落計數(shù)

四．實驗結(jié)果

1.平板1：從未洗到用酒精消毒總體趨勢是菌落數(shù)越來越少，用自來水洗過和用洗手液洗過一遍的菌落數(shù)差不多；

平板2：舊紙幣和硬幣的菌落數(shù)要多；

平板3：抖頭發(fā)的地方附近長出許多菌落；

平板4：自來水菌落最多，其次是河水，河水的菌落分布成“?！弊中?，和當(dāng)時劃線的形狀一樣，再其次是豆?jié){；

平板5：劃線的地方長出許多菌落；

平板6：放在試驗臺上的平板長出各種形狀的菌斑菌塊，在酒精燈旁的基本沒有菌落；平板7：咳幾下的基本沒有菌落。

2.三張平板均被大片菌苔完全覆蓋，無法計數(shù)。

五． 實驗討論

1.有關(guān)洗手液我了解到大部分洗手液都只有殺菌而沒有除垢作用，因為其中含有60%到

70%的酒精，酒精含量低于60%，殺菌效果會很差，我們用的洗手液可能是酒精含量偏低，所以只用洗手液洗手是不夠的。最好的洗手方法是，先用肥皂洗手去除污垢，再使用洗手液殺菌潤膚。錢上有很多細(xì)菌，少接觸，勤洗手。經(jīng)查閱有關(guān)資料我了解到，牙垢中的細(xì)菌主要是正?？谇粌?nèi)存在的鏈球菌、厭氧菌等。牙垢堆積到一定厚度之后，其內(nèi)部緊挨牙齒表面的細(xì)菌因為與空氣隔絕開始轉(zhuǎn)入無氧呼吸。無氧呼吸在此處產(chǎn)生的酸不能及時被唾液沖走，因此會腐蝕琺瑯質(zhì)中的礦物成分，并進(jìn)一步促進(jìn)齲齒的形成。在牙根處堆積的牙垢也會刺激牙齦，導(dǎo)致牙周炎等牙周疾病。所以要飯后刷牙?？諝庵杏卸喾N多樣的細(xì)菌?？葞紫聸]有細(xì)菌的原因可能是沒有使口腔中噴出的氣流或飛沫落到培養(yǎng)基上。

2.第二個實驗失敗的原因可能是滴加的溶液過多，或是取液位置不對細(xì)菌濃度很大

第五篇：微生物觀察實驗報告

廣西大學(xué)環(huán)境工程基礎(chǔ)實驗

實驗題目: 湖塘水體和沉積物中微生物的觀察

姓名：學(xué)號：

班級：組別：

指導(dǎo)教師：

實驗（1）湖塘水體和沉積物中微生物的觀察和計數(shù)

1.實驗概述

1.1實驗?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場所。本實驗通過實地調(diào)查和實驗室觀察實驗，對湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對水體凈化的正面和負(fù)面的影響。

1.2實驗原理

（1）顯微鏡的原理

（2）血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和計算方法。

血球計數(shù)板是一塊比較厚的特制玻片。玻片中央刻有4條槽，中央兩條槽之間的平面比其他平面略低，中央有一個小槽，槽兩邊的平面上刻有9個大方格，中間的一個大方格為計數(shù)室，其長和寬均為1mm，深度0.1mm，體積0.1m3。計數(shù)室的規(guī)格是把大方格分成16個中方格，每一個中方格有分成25個小方格，總共有400個小格。

血球計數(shù)板的計算方法是：先求得每個中方格中微生物的平均值，乘以中格數(shù)，即為一個大格中的總微生物數(shù)，再乘以10000，即為稀釋后的溶液中的總微生物數(shù)。如要換成原液中的微生物總數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)即可。

為簡化計，通常取4個角上的4個中格進(jìn)行計數(shù)，取其平均值，作為每個中格中微生物的平均值。

計算公式：微生物數(shù)（mL）=（100個小格內(nèi)的微生物數(shù)/100）*400*10000*稀釋倍數(shù)

2.實驗內(nèi)容

2.1實驗方案設(shè)計

選擇一個池塘，對湖塘和水體和沉積物采樣，觀察其中微生物并計數(shù)。要求手繪觀察圖像，計算微生物數(shù)量。

2.1.1實驗設(shè)備和材料

（1）實驗設(shè)備

顯微鏡、血球計數(shù)板、載玻片、蓋玻片、滴管、移液管

（2）實驗材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實驗過程（實驗步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）用壓滴法制作表本片

取一塊潔凈的載玻片置于實驗平臺上，用滴管吸取湖水或含有沉積物的混合液，滴加在載玻片中央，用干凈的蓋玻片覆蓋在滴液上，不要有氣泡，即制成標(biāo)本片。

（2）用顯微鏡觀察標(biāo)本片上的微生物。

（3）加被測樣品到血球計數(shù)板

取干凈的血球計數(shù)板，用蓋玻片蓋住計數(shù)室，用細(xì)口滴管吸取少量已經(jīng)充分搖勻的湖水和沉積物的混合液，滴于蓋玻片邊緣，微生物自行深入計數(shù)室，靜止5-10min，待微生物自然沉降穩(wěn)定后計數(shù)。

（4）計數(shù)

先用低倍鏡尋找大方格網(wǎng)的位置（視野不要太亮），找到計數(shù)格后，換用40倍物鏡觀察計數(shù)。

2.3結(jié)論

手繪觀察到的微生物的形狀，相對大小(見附圖)

計算樣品微生物數(shù)量

2.4 建議（如果有）

實驗（2）湖塘水體和沉積物中微生物的革蘭氏染色和定性

1.實驗概述

1.1實驗?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場所。本實驗通過實地調(diào)查和實驗室觀察實驗，對湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對水體凈化的正面和負(fù)面的影響。

1.2實驗原理

微生物細(xì)胞由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其它成分組成，表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。細(xì)菌的等電點pI在2-5之間，所以當(dāng)pH>5時，細(xì)菌帶負(fù)電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。微生物體內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)和染料的結(jié)合能力不同，故可用不同染料對微生物的不同結(jié)構(gòu)分別染色。

2.實驗內(nèi)容

2.1實驗方案設(shè)計

對池塘水體和沉積物中得細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色和定性，進(jìn)行微生物形態(tài)圖的繪制。

2.1.1實驗設(shè)備和材料

（1）實驗設(shè)備

顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。

（2）試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、95%乙醇、番紅

（3）實驗材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實驗過程（實驗步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）涂片

取干凈的載玻片于實驗臺上，在正面邊角作記號，滴一滴無菌蒸餾水在玻片中央，灼燒接種環(huán)，冷卻后取樣品，與玻片上水滴混勻，在玻片上涂布成一層均勻的薄層，涂布面不宜過大。

（2）固定

即干燥，干燥過程最好在空氣中晾干。為加速干燥，可在微小火焰上烘干，烘干后在火焰上方快速通過3-4次，使菌體完全固定在載玻片上。不宜長時間高溫烘烤，易致急速失水使菌體變形。

（3）初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液染色1-2min，水洗。

（4）媒染

滴加革蘭氏碘液，染1-2min，水洗。

（5）脫色

滴加95%乙醇，洗約45s，接著水洗?；虻渭?5%乙醇，將玻片搖晃幾次即傾倒乙醇，如此重復(fù)2-3次后水洗。

（6）復(fù)染

滴加番紅，染2-3min，水洗并干燥。

（7）鏡檢

顯微鏡觀察。

2.3結(jié)論

觀察顏色，并判斷是G（紫色）還是G（紅色）。手繪觀察到的微生物圖像，標(biāo)明顏色。

2.3.1注意事項：

（1）涂片所用載玻片要潔凈無油漬。

（2）細(xì)菌不宜多，涂片不宜厚，宜薄而均勻。

（3）染色過程中勿使染色液干涸。用水洗后，應(yīng)該甩去玻片上殘水以免染色液被稀釋而影響染色效果。

（4）革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時間是否合適。如脫色過度，G易被誤認(rèn)為G。而脫色時間過短，G易被誤認(rèn)為G。脫色時間長短還受涂片厚薄，脫色時玻片晃動程度影響。

2.4 建議（如果有）

2.思考題

（1）涂片為何要固定？固定時要注意什么？

答：原因有三

1、固定細(xì)菌，防止沖掉

2、變形蛋白易染色

3、殺死細(xì)菌，防止感染。實驗中固定是用酒精燈烘干水樣，應(yīng)注意控制溫度，控制時間，防止將菌體燒成灰燼，無法染色。固定時用載玻片背面靠近火源，而不是直接烘載玻片正面。

（2）革蘭氏染色如果只做1-4步，不用番紅復(fù)染，能否分辨革蘭氏染色結(jié)果？為什么？

答：能。在酒精脫色后，不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G＋），被酒精脫色為革蘭氏陰性菌。最后一步用番紅染液復(fù)染，是為了讓結(jié)果更清楚。

（3）革蘭氏染色在微生物學(xué)中有何實踐意義？

指導(dǎo)教師評語及成績：

成績：指導(dǎo)教師簽名

批閱日期