第一篇：綠葉中色素的提取和分離的實(shí)驗(yàn)報(bào)告

綠葉中色素的提取和分離的實(shí)驗(yàn)報(bào)告

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.學(xué)會(huì)提取和分離葉綠體中色素的方法。2.比較、觀察葉綠體中四種色素：理解它們的特點(diǎn)及與光合作用的關(guān)系

二、實(shí)驗(yàn)原理 光合色素主要存在于高等植物葉綠體的基粒片層上，而葉綠體中的色素能溶于有機(jī)溶劑 中。故要提取色素，要破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，破壞葉綠體膜，使基粒片層結(jié)構(gòu)直接與有機(jī)溶劑接 觸，使色素溶解在有機(jī)溶劑中。葉綠體中的色素有四種，不同色素在層析液(脂溶性強(qiáng)的有機(jī)溶劑)中的溶解度不同，因而隨層析液的擴(kuò)散速度也不同。

三、材料用具 取新鮮的綠色葉片、定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、紗布、剪刀、小試管、培養(yǎng)皿、毛細(xì)吸管、量筒、有機(jī)溶劑、層析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸鈣。

四、實(shí)驗(yàn)過程（見書Ｐ54）1.提取色素： 2.制備濾紙條： 3.色素分離，紙層析法。（不要讓濾液細(xì)線觸及層析液）4.觀察： 層析后，取出濾紙，在通風(fēng)處吹干。觀察濾紙條上出現(xiàn)色素帶的數(shù)目、顏色、位置和寬窄。結(jié)果是：4條色素帶從上而下依次是：胡蘿卜素(橙黃色)、葉黃素(黃色)、葉綠素a(藍(lán)綠色)、葉綠素b(黃綠色)。

五、討論 1.濾紙條上的濾液細(xì)線為什么不能接觸到層析液？ 2．提取和分離葉綠體中色素的關(guān)鍵是什么？

第二篇：《綠葉中色素的提取和分離》教學(xué)反思

增加高中生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)，注重分析能力培養(yǎng)

由于生物學(xué)科的地位在高考中不高，在很多學(xué)校，領(lǐng)導(dǎo)和教師普遍認(rèn)為由于高考基本是重視對(duì)實(shí)驗(yàn)的理論原理，實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)步驟和實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象及結(jié)論的考察，所以講講實(shí)驗(yàn)就行了，而且組織學(xué)生實(shí)驗(yàn)教學(xué)費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。然而這樣的想法不但違背了《新課程標(biāo)準(zhǔn)》的理念，也嚴(yán)重影響了學(xué)生生物科學(xué)素養(yǎng)的發(fā)展。所以在新課程的改革中，就要求我們的教師要合理安排教學(xué)進(jìn)度，我們不但要把實(shí)驗(yàn)時(shí)間還給學(xué)生，同時(shí)還要加強(qiáng)對(duì)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)。把演示實(shí)驗(yàn)變成學(xué)生實(shí)驗(yàn)，提高動(dòng)手能力。實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)不僅能夠培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手操作的能力，同時(shí)還能培養(yǎng)學(xué)生分析問題的能力，提高創(chuàng)新能力。

在新課程改革下的實(shí)驗(yàn)教學(xué)可以采用讓學(xué)生自主探究，合作互動(dòng)的教學(xué)模式，教師通過精心設(shè)計(jì)教學(xué)程序，為學(xué)生創(chuàng)設(shè)于實(shí)驗(yàn)內(nèi)容密切相關(guān)的學(xué)習(xí)情境，讓學(xué)生在創(chuàng)設(shè)的學(xué)習(xí)情境中去發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，去補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)所必需的認(rèn)知和操作經(jīng)驗(yàn)，并在實(shí)驗(yàn)過程中培養(yǎng)自主探究意識(shí)、科學(xué)思維方法、嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)態(tài)度和創(chuàng)新實(shí)踐能力。

第三篇：《葉綠體色素的提取和分離》 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

《葉綠體色素的提取和分離》 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)葉綠體色素的提取、分離方法。

2.通過葉綠體色素提取、分離方法的學(xué)習(xí)了解葉綠體色素的相關(guān)理化性質(zhì)。

3.為進(jìn)一步研究各葉綠體色素性質(zhì)、功能等奠定基礎(chǔ)。

實(shí)驗(yàn)原理

葉綠體色素包括綠色的葉綠素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色的類胡蘿卜素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類，它們均以色素蛋白復(fù)合體形式存在于類囊體膜上。兩類色素均不溶于水而溶于有機(jī)溶劑，故可用乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑提取。由于提取液中不同色素在固定相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同，所以可借助分配層析方法將其分離。

實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

1.綠色植物如菠菜等的葉片。

2.研缽、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康維皿、圓形濾紙（直徑11cm）。

3.95％乙醇、石英砂、碳酸鈣、展層劑。展層劑按石油醚：丙酮：苯10:2:1的比例配制（V／V）。實(shí)驗(yàn)步驟

1.葉綠體色素的提取

（1）取菠菜或其它新鮮植物葉片4～5片（4g左右），將其洗凈、擦干并去掉中脈，剪碎后置入研缽中。

（2）研缽中加入95％乙醇2～3 ml及少許石英砂、碳酸鈣研磨至勻漿，再加95％乙醇5ml，然后以漏斗過濾之，即為色素提取液。

2.葉綠體色素的分離

（1）取圓形定性濾紙一張（直徑應(yīng)小于康維皿直徑）于其中心扎一圓形小孔（直徑約3mm），另取長(zhǎng)方形濾紙條一張（5cm×1.5cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液沿濾紙條的長(zhǎng)度方向涂抹，注意涂抹色素?cái)U(kuò)散寬度應(yīng)限制在0.5cm以內(nèi)，風(fēng)干后再重復(fù)操作數(shù)次。然后沿長(zhǎng)度方向?qū)V紙條卷成紙捻，使涂抹過葉綠體色素溶液的一側(cè)恰在紙捻的一端。

（2）將紙捻帶有色素的一端插入圓形濾紙的小孔中，使與濾紙剛剛平齊（勿突出）。

（3）在康維皿中央小室中加入適量的展層劑，把帶有紙捻的圓形濾紙平放在康維皿中央小室上，使紙捻下端浸入展層劑中，迅速蓋好培養(yǎng)皿。展層劑將借助毛細(xì)管作用順紙捻擴(kuò)散至圓形濾紙上，使葉綠體色素在固定相（濾紙中吸附有水分的纖維素）和流動(dòng)相（展層劑）間反復(fù)分配，從而使不同色素得到分離，分離結(jié)果為濾紙上可見到各種色素的同心圓環(huán)。無康維皿時(shí)亦可用底、蓋直徑相同的培養(yǎng)皿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)時(shí)可在培養(yǎng)皿底中放入一平底短玻管或塑料藥瓶蓋以替代康維皿中央小室盛裝展層劑，其余相同。

（4）當(dāng)展層劑前沿接近濾紙邊緣時(shí)便可結(jié)束實(shí)驗(yàn)，此時(shí)可看到不同色素的同心圓環(huán)，各色素由內(nèi)往外的順序?yàn)椋喝~綠素b（黃綠色）、葉綠素a（藍(lán)綠色）、葉黃素（鮮黃色）、胡蘿卜素（橙黃色），再用鉛

筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

葉綠體色素分為葉綠體素類和類胡蘿卜素類兩類，前者為雙羧酸酯，后者為類萜，所以均為脂溶性，提取時(shí)應(yīng)選用有機(jī)溶劑，常用的有機(jī)溶劑為酒精等。本試驗(yàn)采用分配層析方法分離葉綠體色素，此法基本原理為利用混合物中不同成分在固定相和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同意分離各成分。本實(shí)驗(yàn)中葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素在流動(dòng)相中分配系數(shù)依次增大，所以分離形成的4個(gè)同心圓環(huán)由內(nèi)向外依次為葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素，這可從4種色素的不同顏色直觀看出。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.為保證色素提取效率應(yīng)注意研磨要充分、殘?jiān)鼞?yīng)用提取溶劑多沖洗幾次。

2.濾紙應(yīng)質(zhì)地均勻，折疊、揉捏均會(huì)影響濾紙均勻度因而影響分離效果。

3.點(diǎn)樣量應(yīng)足夠大但樣點(diǎn)直徑應(yīng)盡量小，所以一次點(diǎn)樣不要過多，待風(fēng)干后再點(diǎn)樣，如此反復(fù)多次。

4.由于紙捻上端為點(diǎn)樣部位，所以紙捻上端應(yīng)與濾紙平齊以保證展層劑推動(dòng)不同色素的分離。

5.由于展層劑由幾種極易揮發(fā)的溶劑組成，所以實(shí)驗(yàn)中應(yīng)保證康維皿的密封，否則會(huì)因展層劑揮發(fā)損失影響分離效果，此問題在以培養(yǎng)皿替代康維皿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)尤應(yīng)注意。

陜西師范大學(xué)遠(yuǎn)程教育學(xué)院

生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

報(bào)告題目《葉綠體色素的提取和分離》

姓名

學(xué)號(hào)

專業(yè)

批次/層次

指導(dǎo)教師

學(xué)習(xí)中心實(shí)驗(yàn)報(bào)告

第四篇：綠色植物中色素的提取和分離

綠色植物中色素的提取和分離

一、實(shí)驗(yàn)的目的：

1、學(xué)習(xí)從植物中提取色素的方法。

2、學(xué)習(xí)柱色譜(層析)的原理及其操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

柱色譜是通過色譜柱來實(shí)現(xiàn)分離的。在色譜柱內(nèi)裝有固體吸附劑(固定相)如氧化鋁或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當(dāng)液體流經(jīng)吸附劑時(shí)，由于吸附劑表面對(duì)液體中各組分吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從柱頂加入洗脫劑(流動(dòng)相)，樣品中的各組分隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，根據(jù)不同顏色分段收集。

三、器材與試劑

氧化鋁,石油醚,乙酸乙酯,色譜柱,乙醇,綠葉 ,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

四、實(shí)驗(yàn)步驟

菠菜色素的提取過程

取3g 新鮮菠菜葉于研缽中拌勻研磨5 分鐘，殘?jiān)?0mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液進(jìn)行提取，共提取兩次。把浸取液合并過濾，濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入等體積的水洗滌后棄去下層的水-乙醇層，石油醚層再用等體積的水洗滌兩次，以除去乙醇和其它水溶性物質(zhì)。石油醚層用無水Na2SO4進(jìn)行干燥、濃縮為2 mL。取一半做柱層析分離，其余留作薄層層析分析。

（4）上樣：將要分離的混合物用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂?，用滴管沿柱壁慢慢加入吸附劑表面?/p>

（5）淋洗分離：當(dāng)被分離物的溶液面降至吸附劑表面時(shí)，立即加入洗脫劑進(jìn)行淋洗，此時(shí)可以配合薄層層析來確定各組分的分離情況。

取15-20g 中性氧化鋁進(jìn)行濕法裝柱。填料裝好后，從柱頂加入上述濃縮液，先用9:1的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)橙黃色色帶（胡蘿卜素）即將流出時(shí)，換一接收瓶接收，約需要洗脫劑40 mL。換用7:3的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，當(dāng)?shù)诙€(gè)棕黃色色帶（葉黃素）即將流出時(shí)，換一接收瓶接收。此時(shí)，繼續(xù)更換洗脫劑，用3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脫，分別在層析柱的上端可見藍(lán)綠色和黃綠色的兩個(gè)色帶，此為葉綠素a和葉綠素b。

(1)用10g中性氧化鋁和石油醚裝層析柱。

(2)將綠色植物色素濃溶液用滴管小心加到層析柱頂部。加完后打開下部活塞，讓液面下降到柱面以下1mm左右關(guān)閉活塞。加入數(shù)滴石油醚，重新打開活塞使液面下降，重復(fù)幾次使有色物質(zhì)全部進(jìn)入柱體內(nèi)。

(3)依次用不同洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集各色帶

五、注意事項(xiàng)

1.石油醚有毒，請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)良好處使用；

2.柱中不可有空氣，必要時(shí)用裝在玻棒上的橡皮塞輕輕敲擊柱身；

3.柱中氧化鋁表面任何時(shí)候都不得露出液面，以防有空氣進(jìn)入；

4.待色素全部進(jìn)入柱體后，方可進(jìn)行洗脫，以防有拖尾影響分離效果。

第五篇：綠色植物中色素的提取和分離

綠色植物中色素的提取和分離

[實(shí)驗(yàn)名稱] 綠色植物色素的提取及色譜分離

[教學(xué)目標(biāo)] 知識(shí)與技能: 通過對(duì)綠色植物色素的提取與分離，了解天然產(chǎn)物分離提純的方法 [教學(xué)重點(diǎn)] 學(xué)習(xí)柱色譜和薄層色譜分離的基本原理及操作方法 [教學(xué)難點(diǎn)] 薄層色譜、柱層析實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)的掌握和應(yīng)用 [教學(xué)方法] 陳述法，講演法

[教學(xué)過程] [講述] 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

1.通過綠色植物色素的提取和分離，了解天然物質(zhì)分離提純方法；

2.通過對(duì)柱色譜和薄層色譜操作方法的掌握，加深了解微量有機(jī)物色譜分離、鑒定的原理。

[講述] 【背景知識(shí)】

綠色植物的葉、莖中，如菠菜葉，含有葉綠素（綠）、胡蘿卜素（橙）和葉黃素（黃）等多種天然色素。葉綠素存在兩種結(jié)構(gòu)相似的形式即葉綠素a(C55H72O5N4Mg)和葉綠素b(C55H70O6N4Mg)，其差別僅是葉綠素a中一個(gè)甲基被甲?；〈鷱亩纬闪巳~綠素b。它們都是吡咯衍生物與金屬鎂的絡(luò)合物，是植物進(jìn)行光合作用所必需的催化劑。植物中葉綠素a的含量通常是b的3 倍。盡管葉綠素分子中含有一些極性基團(tuán)，但大的烴基結(jié)構(gòu)使它易溶于醚、石油醚等一些非極性的溶劑。胡蘿卜素（C40H56）是具有長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)的共軛多烯。它有三種異構(gòu)體，即a-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和γ-胡蘿卜素，其中β-胡蘿卜素含量最多，也最重要。葉黃素（C40H56O2）是胡蘿卜素的羥基衍生物，它在綠葉中的含量通常是胡蘿卜素的兩倍。與胡蘿卜素相比，葉黃素較易溶于醇而在石油醚中溶解度較小。

本實(shí)驗(yàn)先根據(jù)各種植物色素的溶解度情況將胡蘿卜素（橙）、葉黃素（黃）、葉綠素a和葉綠素b從菠菜葉中提取出來，然后根據(jù)各化合物物理性質(zhì)的不同用色譜法進(jìn)行分離和鑒定。[圖示] 【分離產(chǎn)物結(jié)構(gòu)式】

葉綠素a、葉綠素b、葉黃素（黃）和β-胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)式如下圖所示：

[講述] 【色譜法原理】

色譜法是分離、提純和鑒定有機(jī)化合物的重要方法。其分離原理是利用混合物中各個(gè)成分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，當(dāng)選擇某一個(gè)條件使各個(gè)成分流過支持劑或吸附劑時(shí)，各成分可由于其物理性質(zhì)的不同而得到分離。與經(jīng)典的分離提純手段（重結(jié)晶，升華，萃取和蒸餾等）相比，色譜法具有微量、快速、簡(jiǎn)便和高效等優(yōu)點(diǎn)。按其操作不同，色譜可分為薄層色譜、柱色譜、紙色譜、氣相色譜和高壓液相色譜等。在此，我們學(xué)習(xí)柱色譜和薄層色譜（TLC）。1.柱色譜原理

液體樣品從柱頂加入，流經(jīng)吸附柱時(shí)，即被吸附在柱中固定相（吸附劑）的上端，然后從柱頂加入流動(dòng)相（洗脫劑）淋洗，由于固定相對(duì)各組分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，吸附能力弱的組分隨洗脫劑首先流出，吸附能力強(qiáng)的組分后流出，分段接收，以此達(dá)到分離、提純的目的。2.薄層色譜原理

由于混合物中的各個(gè)組分對(duì)吸附劑（固定相）的吸附能力不同，當(dāng)展開劑（流動(dòng)相）流經(jīng)吸附劑時(shí)，發(fā)生無數(shù)次吸附和解吸過程，吸附力弱的組分隨流動(dòng)相迅速向前移動(dòng)，吸附力強(qiáng)的組分滯留在后，由于各組分具有不同的移動(dòng)速率，最終得以在固定相薄層上分離。其應(yīng)用主要有：跟蹤反應(yīng)進(jìn)程；鑒定少量有機(jī)混合物的組成；分離；尋找柱色譜的最佳分離條件等。

[提問] 試比較葉綠素、葉黃素和胡蘿卜素三種色素的極性，為什么胡蘿卜素在層析柱中移動(dòng)最快？

[講述] 【實(shí)驗(yàn)試劑】

新鮮菠菜3g、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、硅膠G、中性氧化鋁

[講述和演示] 【實(shí)驗(yàn)步驟】 1.菠菜色素的提取過程

取3g 新鮮菠菜葉于研缽中拌勻研磨5 分鐘，殘?jiān)?0mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液進(jìn)行提取，共提取兩次。把浸取液合并過濾，濾液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入等體積的水洗滌后棄去下層的水-乙醇層，石油醚層再用等體積的水洗滌兩次，以除去乙醇和其它水溶性物質(zhì)。石油醚層用無水Na2SO4進(jìn)行干燥、濃縮為2 mL。取一半做柱層析分離，其余留作薄層層析分析。2.柱色譜的一般過程及菠菜色素的分離： 【柱色譜的一般過程】

（1）選擇吸附劑：

常用的吸附劑：氧化鋁，硅膠，氧化鎂，碳酸鈣，活性炭等

選擇規(guī)則：吸附劑必須與被吸附物質(zhì)和展開劑無化學(xué)作用；吸附劑的顆粒大小要適中；可以根據(jù)被提純物質(zhì)的酸、堿性選擇合適的吸附劑。

化合物的吸附能力與分子極性的關(guān)系：分子極性越強(qiáng)（或分子中所含極性較大的基團(tuán)）其吸附能力也較強(qiáng)。極性基團(tuán)的吸附能力排序如下：

Cl-, Br-, I-<<（2）選洗脫劑：

CC<-OCH3 <-CO2R

CO<-CHO <-SH <-NH2 <-OH <-CO2H根據(jù)被分離物各組分的極性和溶解度選擇相應(yīng)極性的溶劑，當(dāng)單一溶劑無法很好洗脫時(shí)，可考慮選擇混合溶劑。

溶劑的洗脫能力按遞增次序排列如下：己烷（石油醚）、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水。

（3）裝柱：色譜柱的大小應(yīng)視處理量而定，柱長(zhǎng)與直徑之比，一般為10:1 ~ 20:1。固定相用量與分離物質(zhì)用量比約為50:1 ~ 100:1。

裝柱的方法分濕法和干法兩種，無論哪一種，裝柱的過程中都要嚴(yán)格排除空氣，吸附劑不能有裂縫。上樣前必須使吸附劑在洗脫劑的流動(dòng)過程中進(jìn)行沉降至高度不變?yōu)橹梗藶閴褐?/p>

（4）上樣：將要分離的混合物用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂?，用滴管沿柱壁慢慢加入吸附劑表面?/p>

（5）淋洗分離：當(dāng)被分離物的溶液面降至吸附劑表面時(shí)，立即加入洗脫劑進(jìn)行淋洗，此時(shí)可以配合薄層層析來確定各組分的分離情況?！静げ松氐姆蛛x】

取15-20g 中性氧化鋁進(jìn)行濕法裝柱。填料裝好后，從柱頂加入上述濃縮液，先用9:1的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)橙黃色色帶（胡蘿卜素）即將流出時(shí)，換一接收瓶接收，約需要洗脫劑40 mL。換用7:3的石油醚-丙酮進(jìn)行洗脫，當(dāng)?shù)诙€(gè)棕黃色色帶（葉黃素）即將流出時(shí)，換一接收瓶接收。此時(shí)，繼續(xù)更換洗脫劑，用3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脫，分別在層析柱的上端可見藍(lán)綠色和黃綠色的兩個(gè)色帶，此為葉綠素a和葉綠素b。3.薄層色譜（Thin Layer Chromatography）的操作方法： 【薄層色譜的操作方法】

（1）點(diǎn)樣：將樣品用低沸點(diǎn)的溶劑配成1-5％的溶液，用內(nèi)徑小于1 mm的毛細(xì)管點(diǎn)樣。點(diǎn)樣前，先用鉛筆在薄層板上距一端1 cm處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直徑不超過2 mm；如果需要重復(fù)點(diǎn)樣，則待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后，方可重復(fù)點(diǎn)樣，以防止樣點(diǎn)過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，影響分離效果。若在同一板上點(diǎn)兩個(gè)樣，樣點(diǎn)之間距離在1-1.5 cm為宜。待樣點(diǎn)干燥后，方可進(jìn)行展開。

（2）展開和展開劑：薄層展開要在密閉的器皿中進(jìn)行，加入展開劑高度為0.5 cm。把帶有樣點(diǎn)的板（樣點(diǎn)一端向下）放在展開器中，并與器皿成一定的角度。蓋上蓋子，當(dāng)展開劑上升到離板的頂部約1 cm處時(shí)取出，并立即標(biāo)出展開劑的前沿位置，待展開劑干燥后，觀察斑點(diǎn)的位置。

（3）顯色：若化合物不帶色，可用碘薰或噴顯色劑后觀察，若化合物有熒光，可在紫外燈下觀察斑點(diǎn)的位置。

（4）Rf值：一個(gè)化合物在薄層板上上升的高度與展開劑上升高度的比值稱為該化合物的Rf值：

[7]

[8][6]

Rf?

【薄層色譜應(yīng)用】

化合物移動(dòng)的距離

展開劑移動(dòng)的距離當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件嚴(yán)格控制時(shí)，每種化合物在選定的固定相和流動(dòng)相體系中有特定的R值，把不同的化合物的Rf值的數(shù)據(jù)積累起來可以供鑒定化合物使用。但是，在實(shí)際工作中，Rf值的重復(fù)性較差，因此不能孤立地用比較Rf值來進(jìn)行鑒定。然而，當(dāng)未知物與已知物在同一薄層板上，用幾種不同的展開劑展開時(shí)都有相同的Rf值時(shí)，那么就可以確定未知物與已知物相同。當(dāng)未知物的鑒定被限定到只是幾個(gè)已知物中的一個(gè)時(shí)，利用TLC就可以確定，如圖1（a）所示。

TLC也可以用于監(jiān)測(cè)某些化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行的情況，以尋找出該反應(yīng)的最佳反應(yīng)時(shí)間和達(dá)到的最高反應(yīng)產(chǎn)率。如圖1（b）所示，反應(yīng)進(jìn)行一段時(shí)間后，將反應(yīng)混合物、原料和產(chǎn)物的樣點(diǎn)分別點(diǎn)在同一塊薄層板上，展開后觀察反應(yīng)混合物斑點(diǎn)體積不斷減小體積不斷減小和產(chǎn)物斑點(diǎn)體積逐步增加了解反應(yīng)進(jìn)行的情況。

展開劑前沿ABCDE1小時(shí)FD'EF（a）未知物鑒定2小時(shí)（b）利用薄層監(jiān)測(cè)化學(xué)反應(yīng)圖1 A：已知物；B：未知物；C：未知物D，D'：反應(yīng)混合物；E：反應(yīng)物；F：產(chǎn)物

[板書] 薄板層析結(jié)果記錄

展開劑前沿碘苯二苯醚碘苯 反應(yīng)液 二苯醚（a）第一步：點(diǎn)樣（b）展開以后

圖2 TLC跟蹤反應(yīng)記錄[講述] 【菠菜色素的鑒定】

取一塊硅膠板，分別點(diǎn)上色素提取液樣點(diǎn)，胡蘿卜素樣點(diǎn)和葉黃素樣點(diǎn)，分別用石油醚-丙酮（8:2）或石油醚-乙酸乙酯（6:4）兩種溶劑系統(tǒng)展開，觀察斑點(diǎn)的位置并排列出胡蘿卜素樣點(diǎn)和葉黃素Rf值大小的次序。[板書] 【菠菜色素的提取與分離】

研磨菠菜過濾菠菜汁石油醚-乙醇萃取液萃取析層柱色帶、溶液水洗滌旋蒸石油醚濃縮液薄層層析Rf值

[講述] 【注意事項(xiàng)】

由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間有限，只接收全部的胡蘿卜素。在接收葉黃素的同時(shí)，進(jìn)行柱上葉綠素的分離，不接收葉綠素，葉黃素也不必全部接收。[作業(yè)] 1.色譜法分離是根據(jù)什么原理進(jìn)行的？ 2.柱色譜和薄層色譜主要應(yīng)用在哪些方面？

3.TLC分析中常用展開劑的極性大小順序是怎樣的？展開劑極性對(duì)樣品的分離有何影響？點(diǎn)樣、展開、顯色這三個(gè)步驟各要注意什么？