第一篇：食品微生物綜合實驗報告

食品微生物綜合實驗報告

項目一:食品中細菌總數(shù)的測定…………………………1

項目二： 革蘭氏染色技術(shù)………………………………5

項目三：飲用水中大腸菌群測定………………………7

指導老師：郭永班級:食品1002班學號：2010040734

姓名：任冠華

食品微生物綜合實驗報告

項目一：食品中細菌總數(shù)的測定

1.目的

本方法規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法。本方法適合于各類食品中菌落總數(shù)的測定。2.設(shè)備和材料

溫箱：36±1℃。恒溫水?。?6±1℃。電爐 吸管。廣口瓶或三角瓶：容量為500ml玻璃珠：直徑約5mm。平皿：直徑為90mm。試管。酒精燈。試管架。滅菌刀或剪子。滅菌鑷子。3.測定步驟 檢樣稀釋及培養(yǎng)

（1）以無菌操作，將檢樣25g(或mL)剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1∶10的均勻稀釋液。（2）用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水 或其他稀釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成1∶100的稀釋液。（3）另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1mL火菌吸管。

（4）根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)吮疚廴厩闆r的估計，選擇2～3個適宜稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46±1℃水浴保溫)注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照

（6）待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。菌落計數(shù)方法

做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

菌落計數(shù)的報告

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（1）平板菌落數(shù)的選擇

選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。（2）稀釋度的選擇

應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。

若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。

若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。菌落數(shù)的報告

菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮4.出現(xiàn)的問題

①接種過程操作速度太慢，導致培養(yǎng)基與接種液無法充分混合。②平板劃線不規(guī)律。③儀器使用不熟練，配合不夠默契。5.參照國標得出結(jié)論部分食品國標 短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。

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瓶（桶）裝飲用水菌落總數(shù)限量是≤20CFUmL，/總大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出，耐熱大腸菌群（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出，大腸埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL）不得檢出常溫液態(tài)奶≤10cfu/ml。6.結(jié)論：

自來水（或啤酒）的培養(yǎng)基均未培養(yǎng)出菌落，表示自來水（或啤酒）中菌落總數(shù)合格。土壤（或污水）的培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)有大量菌落，則自來水和啤酒中無超標現(xiàn)象，符合衛(wèi)生標準。

項目二:細菌涂片制作及革蘭氏染色技術(shù)

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一．目的

學習金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等細菌涂片制作、干燥和固定技術(shù)。掌握細菌的簡單染色和革蘭氏染色技術(shù) 二．設(shè)備和材料

菌種

大腸桿菌16h 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌16h 牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物。溶液和試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液，革蘭氏碘液，95%乙醇，番紅復染液等。儀器和其他用品

酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，接種環(huán)，試管架，鑷子，載玻片夾子，濾紙，滴管和無菌生理鹽水等。三．測定步驟

1、細菌涂片制作

（1）涂片。用接種環(huán)從試管培養(yǎng)液中取一環(huán)菌，于載玻片中央涂成薄層即可，或先滴一滴無菌水于載玻片中央，用接種環(huán)從斜面挑出少許

（2）干燥。涂片后自然干燥，也可在酒精燈上略加熱，使之迅速干燥。

（3）固定。固定的方法主要取決于勇什么染色方法，常用的有火焰固定法和化學固定法，火焰固定法的主要操作要領(lǐng)是：手持載玻片一端，標本面向上，在燈的火焰外側(cè)迅速來回移動3~4次，約3~4s.2、革蘭氏染色法

涂片→干燥→草酸銨結(jié)晶紫（60s）→水洗→革蘭氏碘液媒染（60s）→95%酒精脫色（30s）→水洗→番紅（2min）→水洗→干燥→鏡檢。

脫色是革蘭氏染色關(guān)鍵的一步，可直接用95%酒精沖洗脫色，直到流下的酒精無明顯的紫色為止。然后，應(yīng)立即用水沖洗，以避免脫色時間過長而影響最終染色結(jié)果。另外，挑菌量、固定溫度、染色時間也是影響結(jié)果的重要因素，只有通過反復實踐，才能獲得滿意的結(jié)果。

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四．注意事項: 1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。

2.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。

項目三：飲用水中大腸菌群測定

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一、目的：

1.學習食品中大腸菌群檢測程序、方法。2.掌握食品中大腸菌群檢測結(jié)果的報告方式

二、實驗器材

1.培養(yǎng)基：乳糖膽鹽發(fā)酵管，伊紅美藍瓊脂、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨 2.試劑：革蘭氏染液

3.器皿：水浴、均質(zhì)器或乳缽、載片等 三．內(nèi)容、方法與步棸 1.檢樣稀釋

以無菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)予置適當數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。

另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。

根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)z樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管、2.乳糖發(fā)酵試驗

將待檢樣品接種于乳糖 膽鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)24±2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進 7

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行。3.分離培養(yǎng)

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內(nèi),培養(yǎng)18-24h,然后取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實試驗。4.證實試驗

在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發(fā)酵管,置 36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。5.報告

根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù),查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。

食品微生物綜合實驗報告

四．總結(jié)

1.實驗步驟多且繁瑣，因此需要小組成員的共同協(xié)作，從實驗器材的刷洗到檢樣的稀釋，以及培養(yǎng)基的配制等等都是需要每個成員認真密切配合的，如果哪位成員粗心大意或者偷懶少做步驟都會導致實驗結(jié)果的變化，而這是我們食品工作者的禁忌。所以說，與隊友的配合

食品微生物綜合實驗報告

和一絲不茍、任勞任怨的精神是至關(guān)重要的。

2.作為一個學生，很多東西都不懂，因此做實驗的時候，必須要閱讀實驗步驟和實驗要求，最重要的是認真聽取老師的觀點和方法以及注意事項。

3.實驗過程中，我們每個人都難免會有出錯或者是不懂得地方，這時候一定要虛心求教，不能不懂裝懂。尤其是當隊友提出我們不正確的時候，不能不服氣，更不能莽撞惡語傷人。

5.做實驗時我覺得我的技術(shù)還不嫻熟，一些細節(jié)還掌握不夠比如涂片始終涂不均勻，導致鏡檢時觀察到的現(xiàn)象總是一團一團或一對一對的。還有一個問題就是，雖然按照嚴格的步驟進行了操作，但就是做不出結(jié)果，現(xiàn)實與期望的相差太遠，我想這里面的原因就是因為技術(shù)和細節(jié)沒有達到標準要求。

6.通過這次試驗我認識到團隊的力量是無窮的，個人太過渺小了。一粒沙雖微不足道，但聚沙能成塔；一滴水渺小無比，但匯集能成海。這個實驗要想成功團隊各個成員要有明確的分工，我們小組做的實驗之所以不太成功，一方面的原因就是分工不太明確，每個人對自己的任務(wù)都不太清楚，尤其是我自己更不清楚，做實驗時有點無所事事。7.這次做實驗雖然出現(xiàn)了諸多問題，但是我還是受益匪淺學到了很多知識。

第二篇：食品微生物講稿學生實驗報告

實驗一顯微鏡構(gòu)造和使用及微生物檢測

一、實驗?zāi)康?/p>

1.掌握顯微鏡的構(gòu)造、性能和使用方法，重點掌握普通光學顯微鏡油鏡的使用。2.了解和利用普通光學顯微鏡油鏡對細菌、放線菌進行個體形態(tài)觀察。3.觀察并比較不同來源的微生物生長的數(shù)量和類型。

二、實驗原理

1.油鏡使用香柏油原理： 1）.增加照明亮度

油鏡的放大倍數(shù)可達100Χ，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。從承載標本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時須在油鏡與玻片之間加入與玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油鏡（通常用香柏游，其折射率n=1.52）。2）.增加顯微鏡的分辨率

顯微鏡的分辨率或分辨力(resolutionorresolvingpower)是指顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。從物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：（公式P16）式中λ=光波波長；NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。

光學顯微鏡的光源不可能超出可見光的波長范圍（0.4--0.7μm），而數(shù)值孔徑值則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：NA=n×sinα

式中α為光線最大入射角的半數(shù)。它取決于物鏡的直徑和焦距，一般來說在實際應(yīng)用中最大只能達到120O，而n為介質(zhì)折射率。由于香柏油的折射率（1.52）比空氣及水的折射率（分別為1.0和1.33）要高，因此以香柏油作為鏡頭于玻片之間介質(zhì)的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑值（NA一般在1.2~1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等干鏡（NA都低于1.0）。若以可見光的平均波長0.55μm來計算，數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨出距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。2．微生物檢測原理

微生物的基本特點是微生物在自然界分布廣泛，實驗室內(nèi)亦不例外。由于其個體微小，絕大部分微生物是用肉眼看不到的，因此，只有通過微生物的大量繁殖形成微生物群體，即菌落，才能通過肉眼直觀地看到它們。

三、實驗步驟 1.油鏡觀察：（1）上升聚光器，全開虹彩光圈。（2）用粗調(diào)節(jié)輪提起鏡筒或下降載物臺，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒正下方。在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。右手順時針方向慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)輪使鏡筒下降或載物臺上升，與此同時，從顯微鏡的側(cè)面觀察使油鏡浸入油中，直到幾乎與標本接觸時為止。注意不要壓到標本，以免壓碎玻片，甚至損壞油鏡頭。（3）從接目鏡內(nèi)觀察，進一步調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗調(diào)節(jié)輪將鏡筒徐徐上升或?qū)⑤d物臺徐徐下降，直到視野內(nèi)出現(xiàn)物像為止，然后用細調(diào)節(jié)輪校正焦距。如油鏡已離開油面而仍未見物象，必須再從側(cè)面觀察，將油鏡降下，重復操作至物象看清為止。2.環(huán)境中微生物的檢測

熔化培養(yǎng)基→倒平板→冷卻→無菌接種（頭發(fā)、牙垢、指甲、手指觸摸、暴露空氣5’、其它）

四、實驗結(jié)果；

1.選繪三種細菌個體形態(tài)圖(鉛筆)2．觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征，并記錄結(jié)果。

五、討論分析（完成指定的思考題和作業(yè)題）

1.簡述利用顯微鏡油鏡觀察細菌、放線菌個體形態(tài)圖的方法 參考答案：

.顯微鏡是光學精密儀器，在使用時要特別小心，使用前要熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和性能，檢查各總零件是否完好無損。鏡身有無灰塵，鏡頭是否清潔，做好必要的清潔和調(diào)整工作。

2.拿取顯微鏡必須一只手拿著鏡臂，一只手托著鏡座，并保持鏡身的上下垂直，應(yīng)避免震動，輕放臺上。切不可一只手提起，以防顯微鏡、反光鏡功目鏡墜落。

3.使用前應(yīng)將鏡身擦拭一遍、用擦鏡紙將鏡頭擦凈（切不可用手指擦抹）。若遇到鏡臺或鏡頭上有干香柏油，可用擦鏡紙沾取少量二甲苯將其擦去。

4.使用時如發(fā)現(xiàn)顯微鏡操作不靈活或有損壞，不要擅自拆卸修理，應(yīng)立即報告指導教師處理。5.注意保護鏡頭，切不可壓碎標本被片，損壞鏡頭

6.顯微鏡使用完畢，應(yīng)登記顯微鏡使用卡經(jīng)指導教師檢查后放回鏡箱。

六、改進實驗建議。

實驗參考網(wǎng)址:http://202.192.164.81/index.htm 電話:Email:fswuguoming@yahoo.com.cn 4．6 菌落特征觀察內(nèi)容

（1）菌落大小

用格尺測量菌落的直徑。大菌落（5mm以上）、中等菌落（3~5mm）、小菌落（1~2mm）、露滴狀菌落（1mm以下）。（2）表面形狀

分光滑、皺褶、顆粒狀、龜裂狀、同心環(huán)狀等（圖9-1A）。（3）凸起情況

分擴展、扁平、低凸起、凸起、高凸起、臺狀、草帽狀、臍狀、乳頭狀等（圖9-1B）。（4）邊緣狀況

分整齊、波浪狀、裂葉狀、齒輪狀、鋸齒形等（圖9-1A）。（5）菌落形狀

分圓形、放射狀、假根狀、不規(guī)則狀等（圖9-1A）。（6）表面光澤

分閃光、金屬光澤、無光澤等。（7）菌落質(zhì)地

分油脂狀、膜狀、松軟（粘稠）、脆硬等。于酒精燈旁以無菌操作打開平皿蓋，用接種環(huán)挑動菌落，判別菌落質(zhì)地是否為松軟或脆硬等。（8）菌落顏色

分乳白色、灰白色、檸檬色、橘黃色、金黃色、玫瑰紅色、粉紅色等。注意觀察平皿正反面或菌落邊緣與中央部位的顏色不同。（9）透明程度

分透明、半透明、不透明等。

A.菌落的形狀及邊緣狀況 1.圓形、邊緣整齊、表面光滑；2.不規(guī)則狀；3.邊緣波浪狀；

4.邊緣鋸齒狀；5.同心圓狀；6.邊緣缺刻狀、表面呈顆粒狀；7.絲狀；8.假根狀

B.菌落的凸起情況 1.扁平、擴展；2.低凸面，3.高凸面；4.臺狀；

5.臍狀；6.草帽狀；7.乳頭狀；8.褶皺凸面

圖1 細菌的菌落特征示意圖

同組同學實驗結(jié)果匯總：

記錄實驗結(jié)果于下表并描述你處理的培養(yǎng)皿中長出的菌落形態(tài)特征（如形狀、顏色、大小、邊緣等）。

微生物來源 菌落數(shù) 大 小 空 氣 塵 土 水 其它（）

顏 色

形 狀

邊 緣

是否形成菌苔

第三篇：微生物實驗報告

微生物實驗報告

姓名：阿曼古麗

學號：09070401042

班級：生物科學08-班

微生物實驗課程已經(jīng)接近尾聲，同時訓練我們實際動手能力的實驗課程也已經(jīng)全部結(jié)束，通過自己切身動手設(shè)計，操作實驗，感到收獲頗多。

我覺得最重要的就是實驗過程中操作實驗的重要性。實驗操作可以說是實驗成功與否的關(guān)鍵部分，可是馬虎不得。對于需要團隊合作的實驗，個人認為要有強勢的人員搭檔，不說是精通實驗操作規(guī)程，最少也得知道實驗的基本操作，掌握要做實驗的基本放法，這對于后續(xù)的實驗無疑是有決定性作用的。對于個人的實驗?zāi)芰?，關(guān)鍵還是要看平時的實驗積累，有些實驗操作繁瑣復雜，需要極大的耐心，這些都應(yīng)該是逐漸培養(yǎng)起來的。

在這里我以學過的幾個實驗為例，簡單談一下自己的心得體會。

（一）環(huán)境因素對微生物生長的影響

溫度對微生物學報的大分子（蛋白質(zhì)、核酸等）穩(wěn)定性、酶的活性、細胞膜的流動性和完整性等方面有重要的影響。過高溫度會導致蛋白質(zhì)（酶）及核酸變性失活，細胞膜破壞等，而過低溫度會使酶活性受抑制，細胞新陳代謝活動減弱

pH值過高或過低會使蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子所帶電荷發(fā)生變化，影響其生物活性，甚至導致變性失活，還可以引起細胞膜電荷變化，影響學報對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，同時還會改變環(huán)境中物質(zhì)的可給性及有害物質(zhì)的毒性。紫外線誘導形成胸腺嘧啶二聚體和DNA交聯(lián)，從而抑制DNA的復制。此外，細菌具有光復合效應(yīng)。紫外線穿透力弱，加一張蠟光紙即可阻止其穿過。

在自然界中普遍存在微生物間的拮抗現(xiàn)象，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性地抑制或殺死其他微生物。

常用化學消毒劑包括有機溶劑（酚、醇、醛等）、重金屬、鹵素元素及其化合物、染料和表面活性劑。有機溶劑使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，破壞細胞膜；重金屬鹽也可使使蛋白質(zhì)（酶）和核酸變性失活，或與細胞代謝產(chǎn)物螯合使之變成無效化合物；碘與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活；低濃度染料可抑制細菌生長，革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌對染料更加敏感。

影響微生物生長的外界因素很多，其一是前面討論過的營養(yǎng)物質(zhì)，其二是許多物理、化學因素。當環(huán)境條件的改變，在一定限度內(nèi)，可引起微生物形態(tài)、生理、生長、繁殖等特征的改變；當環(huán)境條件的變化超過一定極限時，則導致微生物的死亡。研究環(huán)境條件與微生物之間的相互關(guān)系，有助于了解微生物在自然界的分布與作用，也可指導人們在食品加工中有效地控制微生物的生命活動，保證食品的安全性，延長食品的貨架期。

（二）革

蘭

氏

染

色

通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

革蘭氏陰性菌，以[大腸桿菌]為代表。大腸桿菌為兼氣性菌種，一般生存於腸道中及厭氧的還境中。革蘭氏陰性菌細胞壁的特徵為有一層out member 與陽性菌種不同。目前對大腸桿菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指標外，很多分子生物學方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當作實驗宿主。

臨床應(yīng)用：用于革蘭氏細菌分類形態(tài)觀察前的染色。主要應(yīng)用于細菌分類和鑒定，革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。

適用范圍：適宜石蠟切片、涂片等染色。

（三）活菌計數(shù)

菌計數(shù)法

此法又稱活菌計數(shù)法，其原理是每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。將待測樣品經(jīng)一系列 10 倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取 0.2ml 放入無菌平皿，再倒入適量的已熔化并冷至 45 ℃ 左右的培養(yǎng)基，與菌液混勻，冷卻、待凝固后，放入適宜溫度的培養(yǎng)箱或溫室培養(yǎng)，長出菌落后，計數(shù)，按下面公式計算出原菌液的含菌數(shù)：

每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個以上重復平皿

菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)× 5

此法還可以將稀釋的菌液取 0.2m 1 加到已制備好的平板上，然后用無菌涂棒將菌液涂布整個平板表面，放入適宜溫度下培養(yǎng)，計算菌落數(shù)，再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數(shù)。此法可因操作不熟練造成污染，或因培養(yǎng)基溫度過高損傷細胞等原因造成結(jié)果不穩(wěn)定。盡管如此，由于該方法能測出樣品中微量的菌數(shù)，仍是教學、科研和生產(chǎn)上常用的一種測定細菌數(shù)的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養(yǎng)體等。

隨著微生態(tài)學的發(fā)展，微生態(tài)療法通過調(diào)整腸道菌群作為部分疾病的輔助治療已應(yīng)用于臨床。糞便標本腸道菌群的定量檢測方法——平板活菌計數(shù)法能夠較好地判定其療效以及腸道菌群是否存在失調(diào)和失調(diào)的程度。此種方法計數(shù)的線性范圍大，能較好的反映菌落的疏密程度。重復性、平行性好，但操作較繁瑣，且測定值常受各種因素的影響，需要操作者有熟練的技術(shù)。

在同學們的相互配合和老師的耐心指導下，這門實驗課也接近了尾聲，在這一學的這門實驗課中我也學到了很多的實驗室知識。為了保證實驗過程高質(zhì)高量完成，除了實驗準備及實驗過程外，還要求實驗技術(shù)人員必須具備相應(yīng)的素質(zhì)，實驗操作人員必須具備較扎實的專業(yè)基礎(chǔ)、熟練的實驗技能及高度的責任心，在工作中要善于總結(jié)，同時一定要和老師積極溝通，不懂得地方及時向他請教，在以后的學習和工作中，我會繼續(xù)保持這種態(tài)度，認真完成老師交給的各項任務(wù)。

第四篇：水及食品中微生物的檢測(實驗報告)

水及食品中微生物的檢測

××××××××××

食品微生物檢驗方法為食品監(jiān)測必不可少的重要組成部分。它不僅是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標之一，也是判定被檢食品能否食用的科學依據(jù)之一。通過食品微生物檢驗，可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生環(huán)境,能夠?qū)κ称繁患毦廴镜某潭茸鞒稣_的評價，為各項衛(wèi)生管理工作提供科學依據(jù),提供傳染病和人類，動物和食物中毒的防治措施[1]。食品微生物檢驗是以貫徹“預防為主”的衛(wèi)生方針，可以有效地防止或者減少食物中毒人畜共患病的發(fā)生，保障人民的身體健康；同時，它對提高產(chǎn)品質(zhì)量，避免經(jīng)濟損失，保證出口等方面具有政治上和經(jīng)濟上的重要意義。

水是食品生產(chǎn)中的重要原料，必須符合飲用水的標準、水是否合乎標準，除需對其感官質(zhì)量、放射性物質(zhì)、與健康有關(guān)的無機成分等進行分析測定外，還必須對微生物進行檢測。通常通過水中細菌總數(shù)和大腸桿菌群數(shù)來確定水的衛(wèi)生質(zhì)量，如果水源被糞便污染，則有可能也被腸道病原菌污染而引起傷寒、痢疾、霍亂等腸道疾病的流行，但腸道病原菌在水中數(shù)量較少，又容易變異死亡。因此，從水中特別是自來水中分離病原菌有困難。而大腸桿菌是腸道好氧菌中最普遍和數(shù)量最多的一種，所以，常將其作為糞便污染的標志，即根據(jù)水中大腸桿菌的數(shù)目來判斷水源是否被污染，并間接測水源受腸道病原菌污染的可能性。一般規(guī)定，1ml自來水總的總菌數(shù)不得超過100個；每1000ml自來水中大腸菌群不超過3個。同樣，細菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)也是大多數(shù)食品微生物指標中的兩項指標，只是數(shù)量要求隨不同的食品而異。

細菌總數(shù)是指被檢樣品經(jīng)過處理（如剪碎、研勻），在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數(shù)。由于一個活細胞能形成一個菌落，因此，菌落就是待測樣品所含的活菌數(shù)。由于每種細菌都有一定的生理要求（如對氧、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基的pH等），所以，培養(yǎng)時應(yīng)該用不同的培養(yǎng)條件及不同的生理條件去滿足其要求，才能將各種細菌都培養(yǎng)出來。但在實際工作中，一般都只用一種常用的方法去作細菌菌落總數(shù)的測定，所得結(jié)果指包括一群能在牛肉膏蛋白胨瓊脂上或其他培養(yǎng)基上生長的嗜中溫性需氧菌的菌落總數(shù)。本實驗通過取樣對自來水和黃酒中的微生物進行了檢測，以期了解該兩樣樣品中微生物含量是否符合飲用標準，并熟悉水及食品中微生物的檢測方法。

食品在食用前的各個環(huán)節(jié)中，被微生物污染往往是不可避免的。評價食品被微生物污染的程度，要采用微生物檢驗指標采進行。常采用的微生物檢驗指標為三項細菌指標，即細菌

數(shù)量(主要是菌落總數(shù))、大腸菌群最近似數(shù)（MPN）和致病菌[2]。

1.材料與方法

1.1材料

湖水、黃酒

1.2培養(yǎng)基

肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基；乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基；伊紅美藍固體培養(yǎng)基；乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基；

1.3儀器

恒溫培養(yǎng)箱（溫州康鼎凈化工程有限公司）；超凈工作臺（蘇州宏瑞凈化科技有限公司）；蒸汽式高壓滅菌鍋（諸城市永泰機械有限公司）。

1.4細菌總數(shù)的測定

1.4.1采樣

瓶裝發(fā)酵酒的取樣：用點燃的酒精棉球灼燒瓶口滅菌，用石炭酸紗布蓋好，再用滅菌開瓶器將瓶啟開，倒入500ml滅菌磨口瓶中，覆蓋一滅菌紗布，輕輕震蕩使氣體逸出，待檢。

湖水的取樣：將無菌帶玻璃塞的廣口瓶浸入離湖面10-15cm水下，盛滿后將瓶口蓋好，再從水中取出，待檢或保存于4℃冰箱保存。1.4.2檢樣稀釋

將1ml待測液加入含9ml無菌水的試管中，制成10-1稀釋液，再吸取1ml稀釋液加入到含含9ml無菌水的試管中，制成10-2稀釋液，同法，配制稀釋度為10-

3、10-

4、10-5的稀釋液。1.4.3傾注培養(yǎng)

選擇10-4和10-5兩個稀釋液，分別取1ml于平皿內(nèi)，及時倒入約45℃肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基約15ml，搖動混勻，待凝固后將平皿倒置于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h后取出，計算平板內(nèi)菌落總數(shù)。

1.5大腸菌群檢驗

1.5.1 檢樣稀釋

將1ml待測液加入含9ml無菌水的試管中，制成10-1稀釋液，再吸取1ml稀釋液加入到含含9ml無菌水的試管中，制成10-2稀釋液。1.5.2乳糖膽鹽發(fā)酵

分別取1、10-

1、10-2稀釋液1ml注入乳糖膽鹽發(fā)酵管，每個稀釋度接種3管，于36±1℃的恒溫箱里倒置培養(yǎng)24±2h，如乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)氣則可報告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進行。1.5.3分離培養(yǎng)

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別接種于伊紅美藍瓊脂平板上，于36±1℃恒溫箱倒置培養(yǎng)18-24h。觀察菌落形態(tài)，做革蘭氏染色和復發(fā)酵證實實驗。1.5.4復發(fā)酵證實實驗

在伊紅美藍瓊脂平板上挑?。孩僮霞t色，具有金屬光澤的菌落；②深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；③淡紅色，中心較深的菌落。具有以上特征的菌落均為可疑大腸桿群菌落，挑取1-2個進行革蘭氏染色，同時對應(yīng)接種到乳糖發(fā)酵管內(nèi)進行復發(fā)酵，于36±1℃的恒溫箱倒置培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡在乳糖發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性；如不產(chǎn)氣或革蘭氏陽性，則可報告大腸軍群陰性。

2結(jié)果與分析

2.1細菌總數(shù)

表1 湖水的細菌總數(shù)測定結(jié)果

樣品 1 2平均菌落數(shù) 菌落總數(shù)（個/ml)

取湖水、黃酒稀釋度為10-4和10-5的稀釋液于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi)混合培養(yǎng)，每一稀釋度2個平板。將平皿倒置于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h后取出，采用肉眼直接觀察計數(shù)各平板的菌落數(shù)，并計算兩者的菌落數(shù)，結(jié)果如表1所示。

由表可知湖水的細菌含量為1.25*105個/ml，比黃酒的細菌含量高。查閱資料得，1ml自來水的總菌數(shù)不得超過100個，本實驗所測的樣品湖水和黃酒中的菌落總數(shù)均超過100個，所以細菌都超標，不符合安全標準。

湖水10-4 12 13 12.5

1.3×105

湖水10-55 5

黃酒10-4

0 0 0

<1×104

黃酒10-5

0 0 0

2.2大腸菌群檢驗結(jié)果

表2 湖水及黃酒的大腸菌群檢驗的結(jié)果

伊紅美籃平板上

稀釋度 管號 乳糖膽鹽發(fā)酵

有無可疑菌落

1003 1

10-13 1

10-23

分別取黃酒和湖水1、10-

1、10-2稀釋液1ml注入乳糖膽鹽發(fā)酵管，每個稀釋度接種3管，進行乳糖膽鹽發(fā)酵的實驗。結(jié)果如表2所示。湖水的三個稀釋度的九只試管中大腸菌群均為陽性，即都含有大腸桿菌。而黃酒的三個稀釋度的九只試管中大腸菌群均為陰性。查MPN檢索表可得出每100ml湖水中大腸菌群最可能數(shù)>2400個，每100ml黃酒中大腸菌群最可能數(shù)<30個。這表明了湖水中大腸桿菌含量較高，而黃酒中大腸桿菌含量較低。

無氣泡

無

紅色

無氣泡 大腸桿菌群陰性

無氣泡

無

紅色

無氣泡 大腸桿菌群陰性

無氣泡

無

紅色

無氣泡 大腸桿菌群陰性

革蘭氏染色 復發(fā)酵

結(jié)論

3討論

食品中的微生物有許多種類，有的可導致人類產(chǎn)生疾病，有的對人類無害，也有的可產(chǎn)生一些不能令人忽視的代謝產(chǎn)物，因此食品中的微生物，尤其是一些致病微生物常常是作為人類是否能夠食用該食品的重要指標。特別是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，可導致人類感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物對人類的威脅越來越大。在食品生產(chǎn)、加工、儲存、運輸、銷售等各個環(huán)節(jié)中都有污染致病微生物的可能。一旦污染，微生物將大量繁殖而引起食品腐敗變質(zhì)，或?qū)е率吃葱愿腥竞褪澄镏卸?，對人們的危害極大，快速檢驗方法是社會的迫切需要。

參考文獻 ：

[1] 龍夫.食品微生物快速檢測技術(shù)動向[J].食品安全, 2004, 6:55-56

[2] 陳慶森, 馮永強.食品中致病菌的快速檢測技術(shù)的研究現(xiàn)狀與進展[J].食品科學, 2003, 24(11): 148-152

第五篇：微生物觀察實驗報告

廣西大學環(huán)境工程基礎(chǔ)實驗

實驗題目: 湖塘水體和沉積物中微生物的觀察

姓名：學號：

班級：組別：

指導教師：

實驗（1）湖塘水體和沉積物中微生物的觀察和計數(shù)

1.實驗概述

1.1實驗?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場所。本實驗通過實地調(diào)查和實驗室觀察實驗，對湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對水體凈化的正面和負面的影響。

1.2實驗原理

（1）顯微鏡的原理

（2）血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)和計算方法。

血球計數(shù)板是一塊比較厚的特制玻片。玻片中央刻有4條槽，中央兩條槽之間的平面比其他平面略低，中央有一個小槽，槽兩邊的平面上刻有9個大方格，中間的一個大方格為計數(shù)室，其長和寬均為1mm，深度0.1mm，體積0.1m3。計數(shù)室的規(guī)格是把大方格分成16個中方格，每一個中方格有分成25個小方格，總共有400個小格。

血球計數(shù)板的計算方法是：先求得每個中方格中微生物的平均值，乘以中格數(shù)，即為一個大格中的總微生物數(shù)，再乘以10000，即為稀釋后的溶液中的總微生物數(shù)。如要換成原液中的微生物總數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)即可。

為簡化計，通常取4個角上的4個中格進行計數(shù)，取其平均值，作為每個中格中微生物的平均值。

計算公式：微生物數(shù)（mL）=（100個小格內(nèi)的微生物數(shù)/100）*400*10000*稀釋倍數(shù)

2.實驗內(nèi)容

2.1實驗方案設(shè)計

選擇一個池塘，對湖塘和水體和沉積物采樣，觀察其中微生物并計數(shù)。要求手繪觀察圖像，計算微生物數(shù)量。

2.1.1實驗設(shè)備和材料

（1）實驗設(shè)備

顯微鏡、血球計數(shù)板、載玻片、蓋玻片、滴管、移液管

（2）實驗材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實驗過程（實驗步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）用壓滴法制作表本片

取一塊潔凈的載玻片置于實驗平臺上，用滴管吸取湖水或含有沉積物的混合液，滴加在載玻片中央，用干凈的蓋玻片覆蓋在滴液上，不要有氣泡，即制成標本片。

（2）用顯微鏡觀察標本片上的微生物。

（3）加被測樣品到血球計數(shù)板

取干凈的血球計數(shù)板，用蓋玻片蓋住計數(shù)室，用細口滴管吸取少量已經(jīng)充分搖勻的湖水和沉積物的混合液，滴于蓋玻片邊緣，微生物自行深入計數(shù)室，靜止5-10min，待微生物自然沉降穩(wěn)定后計數(shù)。

（4）計數(shù)

先用低倍鏡尋找大方格網(wǎng)的位置（視野不要太亮），找到計數(shù)格后，換用40倍物鏡觀察計數(shù)。

2.3結(jié)論

手繪觀察到的微生物的形狀，相對大小(見附圖)

計算樣品微生物數(shù)量

2.4 建議（如果有）

實驗（2）湖塘水體和沉積物中微生物的革蘭氏染色和定性

1.實驗概述

1.1實驗?zāi)康募耙?/p>

水體和沉積物是水生生物繁衍生息的基本場所。本實驗通過實地調(diào)查和實驗室觀察實驗，對湖塘水體和沉積物中微生物觀察和定性，初步了解湖塘水體和沉積物中微生物的種類和分類；了解其對水體凈化的正面和負面的影響。

1.2實驗原理

微生物細胞由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其它成分組成，表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。細菌的等電點pI在2-5之間，所以當pH>5時，細菌帶負電荷，容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。微生物體內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)和染料的結(jié)合能力不同，故可用不同染料對微生物的不同結(jié)構(gòu)分別染色。

2.實驗內(nèi)容

2.1實驗方案設(shè)計

對池塘水體和沉積物中得細菌進行革蘭氏染色和定性，進行微生物形態(tài)圖的繪制。

2.1.1實驗設(shè)備和材料

（1）實驗設(shè)備

顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。

（2）試劑

草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、95%乙醇、番紅

（3）實驗材料

校園池塘的水體和沉積物

2.2實驗過程（實驗步驟、記錄、數(shù)據(jù)、分析）

（1）涂片

取干凈的載玻片于實驗臺上，在正面邊角作記號，滴一滴無菌蒸餾水在玻片中央，灼燒接種環(huán)，冷卻后取樣品，與玻片上水滴混勻，在玻片上涂布成一層均勻的薄層，涂布面不宜過大。

（2）固定

即干燥，干燥過程最好在空氣中晾干。為加速干燥，可在微小火焰上烘干，烘干后在火焰上方快速通過3-4次，使菌體完全固定在載玻片上。不宜長時間高溫烘烤，易致急速失水使菌體變形。

（3）初染

滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液染色1-2min，水洗。

（4）媒染

滴加革蘭氏碘液，染1-2min，水洗。

（5）脫色

滴加95%乙醇，洗約45s，接著水洗?；虻渭?5%乙醇，將玻片搖晃幾次即傾倒乙醇，如此重復2-3次后水洗。

（6）復染

滴加番紅，染2-3min，水洗并干燥。

（7）鏡檢

顯微鏡觀察。

2.3結(jié)論

觀察顏色，并判斷是G（紫色）還是G（紅色）。手繪觀察到的微生物圖像，標明顏色。

2.3.1注意事項：

（1）涂片所用載玻片要潔凈無油漬。

（2）細菌不宜多，涂片不宜厚，宜薄而均勻。

（3）染色過程中勿使染色液干涸。用水洗后，應(yīng)該甩去玻片上殘水以免染色液被稀釋而影響染色效果。

（4）革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時間是否合適。如脫色過度，G易被誤認為G。而脫色時間過短，G易被誤認為G。脫色時間長短還受涂片厚薄，脫色時玻片晃動程度影響。

2.4 建議（如果有）

2.思考題

（1）涂片為何要固定？固定時要注意什么？

答：原因有三

1、固定細菌，防止沖掉

2、變形蛋白易染色

3、殺死細菌，防止感染。實驗中固定是用酒精燈烘干水樣，應(yīng)注意控制溫度，控制時間，防止將菌體燒成灰燼，無法染色。固定時用載玻片背面靠近火源，而不是直接烘載玻片正面。

（2）革蘭氏染色如果只做1-4步，不用番紅復染，能否分辨革蘭氏染色結(jié)果？為什么？

答：能。在酒精脫色后，不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G＋），被酒精脫色為革蘭氏陰性菌。最后一步用番紅染液復染，是為了讓結(jié)果更清楚。

（3）革蘭氏染色在微生物學中有何實踐意義？

指導教師評語及成績：

成績：指導教師簽名

批閱日期