第一篇：實(shí)驗(yàn)十四水中總大腸桿菌的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)十四水中總大腸桿菌的測(cè)定

1原理

總大腸桿菌群可用多管發(fā)酵法或?yàn)V膜法檢測(cè)。多管發(fā)酵法的原理是根據(jù)大腸菌群細(xì)菌能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣以及具備革蘭氏染色陰性，無(wú)芽孢，呈桿狀等有關(guān)特性，通過(guò)三個(gè)步驟進(jìn)行檢驗(yàn)，求得水樣中的總大腸菌群數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以最可能數(shù)（most probable number），簡(jiǎn)稱(chēng)MPN表示。儀器

2.1 高壓蒸汽滅菌器。

2.2 恒溫培養(yǎng)箱，冰箱。

2.3 生物顯微鏡，載玻片。

2.4 酒精燈，鎳鉻絲接種棒。

2.5 培養(yǎng)皿(直徑100mm)，試管(5×150mm)，小倒管，吸管(1，5，10ml)，燒杯(200，500，2000ml)，錐形瓶(500，1000ml)，采樣瓶。

3培養(yǎng)基及染色劑的制備

3.1乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：

將10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、3g乳糖和5g氯化鈉加熱溶于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為7.2－7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于試管（內(nèi)有倒管）中，于121℃高壓滅菌器中滅菌15min，貯存于冷暗處備用。

3.2三倍濃縮蛋白胨溶液：

按上述乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的制備方法制備。除蒸餾水外，各組分用量增加至三倍。

3.3品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基

3.3.1貯備培養(yǎng)基的制備

于2000mL燒杯中，先將20-30g瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然后加入

3.5g磷酸氫二鉀及10g蛋白胨，混勻，使其溶解，再用蒸餾水補(bǔ)充到1000mL調(diào)節(jié)溶液pH至7.2-7.4。趁熱用脫脂棉或絨布過(guò)濾，再加10g乳糖，混勻，定量分裝于250或500mL

錐形瓶?jī)?nèi)，置于高壓滅菌器中，在121℃滅菌15min，貯存與冷暗處備用。

3.3.2平皿培養(yǎng)基的制備

將上法制備的貯備培養(yǎng)基加熱融化。根據(jù)錐形瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的容量，用滅菌吸管按1：50比例吸取5%堿性品紅乙醇溶液，置于滅菌空試管中；再按1：200比例稱(chēng)取無(wú)水亞硫酸鈉，置于另一滅菌空試管內(nèi)，加滅菌水少許使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（滅菌）。用滅菌吸管吸取已滅菌的亞硫酸鈉溶液，滴加于堿性品紅乙醇溶液內(nèi)至深紅色再褪至淡紅色為止（不宜加多）。將此混合液全部加入已融化的貯備培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻（防止產(chǎn)生氣泡）。立即將此培養(yǎng)基適量（約15mL）傾入已滅菌的平皿內(nèi)，再冷卻凝固后置于冰箱內(nèi)備用，但保存時(shí)間不宜超過(guò)2周。如培養(yǎng)基由淡紅色變成深紅色則不能再用。

3.4伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基制備

于2000mL燒杯中，先將20g瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，再加入2g磷酸二氫鉀及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸餾水補(bǔ)充至1000mL，調(diào)節(jié)溶液pH值至7.2-7.4，趁熱用脫脂棉或絨布過(guò)濾，加入2%伊紅水溶液（0.4g伊紅溶于20mL水中）20ml和0.5%美藍(lán)水溶液（0.065g美藍(lán)溶于13mL水中）13ml，再加入10g乳糖，混勻后定量分裝于250或500mL錐形瓶?jī)?nèi)，于121℃高壓滅菌15min，放冷至45℃左右，無(wú)菌操作下將此培養(yǎng)基適量?jī)A入已滅菌的空平皿內(nèi)，待冷卻凝固后，置于冰箱內(nèi)備用。

3.5革蘭氏染色劑 3.5.1結(jié)晶紫染色液：

將20mL結(jié)晶紫乙醇飽和溶液（稱(chēng)取4-8g結(jié)晶紫溶于100mL95%乙醇中）和80mL1%草酸銨溶液混合并過(guò)濾。該溶液放置過(guò)久會(huì)產(chǎn)生沉淀，不能再用。

3.5.2助染劑：

將1g碘與2g碘化鉀混合后，加入少許蒸餾水，充分振蕩，待完全溶解后，用蒸餾水補(bǔ)充至300mL。此溶液2周內(nèi)有效。當(dāng)溶液由棕黃色變?yōu)榈S色時(shí)應(yīng)棄去。為易于貯備，可將上述碘與碘化鉀溶于30mL蒸餾水中，臨用前再加水稀釋。

3.5.3脫色劑：95%乙醇。

3.5.4復(fù)染劑：將0.25g沙黃加到10mL95%乙醇中待完全溶解后，加90mL蒸餾水。4 測(cè)定步驟

4.1生活飲用水

4.1.1初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：在兩個(gè)裝有已滅菌的50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的大試管或燒瓶中（內(nèi)有倒管），以無(wú)菌操作加入充分混勻的水樣10mL，混勻后置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。

4.1.2平板分離：上述各發(fā)酵管經(jīng)培養(yǎng)24h后，將產(chǎn)酸，產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管分別接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，挑選符合下列特征的菌落。

a.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落：淡紫紅色，中心色較深的菌落。

b.品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上：紫紅色，具有金屬光澤的菌落；深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心顏色較深的菌落。

4.1.3取有上述特特征的群落進(jìn)行革蘭氏染色 a、用已培養(yǎng)18－24h的培養(yǎng)物涂片，涂層要薄。

b、將涂片在火焰上加溫固定，待冷卻后滴加結(jié)晶紫溶液，1min后用水洗去。c、滴加助染劑，1min后用水洗去。

d、滴加脫色劑，搖動(dòng)玻片，直至無(wú)紫色脫落為止（約20－30s），用水洗去。e、滴加復(fù)染劑，1min后用水洗去，晾干、鏡檢，呈紫色者為革蘭氏陽(yáng)性菌，呈紅

色者為陰性菌。

4、復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢的桿菌，則挑選該菌落的另一部分接種于裝有普通濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中（內(nèi)有倒管），每管可接種分離自同一初發(fā)酵管（瓶）的最典型菌落1－3個(gè)，然后置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣者（不論倒管內(nèi)氣體多少皆作為產(chǎn)氣論），即證實(shí)有大腸菌群存在。根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的陽(yáng)性管（瓶）數(shù)查表2-5“大腸菌群檢數(shù)表”，報(bào)告每升水樣中的大腸菌群數(shù)。

4.2 水源水

4.2.1 于各裝有5ml三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），分別加入10ml水樣；于各裝有10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），分別加入

1ml水樣；再于各裝有10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5個(gè)試管中（內(nèi)有倒管），分別加入1ml 1：10稀釋的水樣。共計(jì)15管，三個(gè)稀釋度。將各管充分混勻，置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。

4.2.2平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)的檢驗(yàn)步驟同“生活飲用水檢驗(yàn)方法”。

4.2.3根據(jù)證實(shí)總大腸菌群存在的陽(yáng)性管數(shù)，查附表2-6“最可能數(shù)（MPN）表”，即求得每100ml水樣中存在的總大腸菌群數(shù)。我國(guó)目前系以1L為報(bào)告單位，故MPN值再乘以10，即為1L水樣中的總大腸菌群數(shù)。

對(duì)污染嚴(yán)重的地表水和廢水，初發(fā)酵試驗(yàn)的接種水樣應(yīng)作1：

10、1：100、1：1000或更高倍數(shù)的稀釋?zhuān)瑱z驗(yàn)步驟同“水源水”檢驗(yàn)方法。

如果接種水的水樣量不是10ml、1ml和0.1ml，而是較低或較高的三個(gè)濃度的水樣量，也可查表求得MPN指數(shù)，再經(jīng)下面公式換算成每100ml的MPN值。

MPN值＝MPN指數(shù)×10（ml）/接種量最大的一管（ml）

表2-5大腸菌群檢數(shù)表

接種水樣總量300ml（100ml 2份，10ml 2份）

100mL水量的陽(yáng)性瓶數(shù)

10mL水量的陽(yáng)性管數(shù)

1L水樣中大腸菌群數(shù)

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 103 7 11 14 18 22 27 31 36 40

1L水樣中大腸菌群數(shù)8 13 18 24 30 36 43 51 60 69

1L水樣中大腸菌群數(shù)18 27 38 52 70 92 120 161 230 230

表2-6 最可能數(shù)（MPN）表

（接種5份10ml水樣、5份0.1ml水樣時(shí)，不同陽(yáng)性及陰性情況下100ml水樣中細(xì)

菌數(shù)的最可能數(shù)和95％可信限值）

出現(xiàn)陽(yáng)性份數(shù) 10ml 1ml 0.1ml 管 0 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4

管 0 0 1 2 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 3 0 0 1 1 2 2 3 0 0 1 1 1 2

管 0 1 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 1 0 1 2 0

每100ml水樣中 95％可信

細(xì)菌數(shù)的 最可能數(shù) <2 2 2 4 2 4 4 6 6 5 7 7 9 9 12 8 11 11 14 14 17 17 13 17 17 21 26 22

<0.5 <0.5 <0.57 7

出現(xiàn)陽(yáng)性份數(shù) 管 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

管 2 3 3 4 0 0 0 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5

管 1 0 1 0 0 1 2 0 1 2 0 1 2 0 1 2 3 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 5

每100ml水樣中 95％可信限值

細(xì)菌數(shù)的 最可能數(shù) 26 27 33 34 23 34 43 33 46 63 49 70 94 79 110 140 180 130 170 220 280 350 240 350 540 920 1600 ≥2400

下限9 9 11 12 7 11 15 11 16 21 17 23 28 25 31 37 44 35 43 57 90 120 68 120 180 300 640

上限78 80 93 93 70 89 110 93 120 150 130 170 220 190 250 310 500 300 190 700 850 1000 750 1000 1400 3200 5800

下限 上限 10ml 1ml 0.1ml

<0.5 11 <0.5 11 <0.5 11 <0.5 15 <0.5 15 <0.5 13 1 1 2 2 3 1 2 2 4 4 5 5 3 5 5 7 9 717 21 21 28 19 25 25 34 34 46 46 31 46 46 63 78 67

第二篇：水中大腸桿菌的檢測(cè)(多管發(fā)酵法)

水中大腸桿菌群書(shū)的檢測(cè)（發(fā)酵法）

一、試驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1.了解和學(xué)習(xí)水中大腸桿菌的測(cè)定原理和測(cè)定意義。

2.學(xué)習(xí)和掌握水中大腸桿菌的檢測(cè)方法。

二、試驗(yàn)原理：

水的微生物學(xué)的檢驗(yàn)，特別是大腸桿菌的檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評(píng)價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。國(guó)家飲用水的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定飲用水中大腸桿菌群書(shū)每升中不超過(guò)3個(gè)，細(xì)菌總數(shù)每毫升不超過(guò)100個(gè)。

水中大腸桿菌的檢驗(yàn)方法，常用多管發(fā)酵發(fā)和濾膜法。多管發(fā)酵發(fā)可運(yùn)用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要時(shí)間長(zhǎng)。濾膜法僅用于自來(lái)水和深井水。操作簡(jiǎn)潔快速，但不適用于雜質(zhì)較多，易于阻塞濾孔的水樣。

三、實(shí)驗(yàn)器材：

1.水樣：自來(lái)水

2.試劑 ：乳糖蛋白胨發(fā)酵管內(nèi)有倒置小套管三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管瓶內(nèi)有倒置小套管

伊紅美藍(lán)或復(fù)紅亞硫酸鈉瓊脂平板革蘭氏染液。3.儀器及其它用品：載玻片滅菌帶玻璃塞空瓶滅菌吸管滅菌試管革蘭氏染液顯微鏡香柏油二甲苯擦鏡紙吸水紙滅菌三角瓶等

四、實(shí)驗(yàn)步驟：

第一步：

1.水樣的采集

自來(lái)水洗將自來(lái)水龍頭用酒精燈火焰灼燒滅菌，在開(kāi)放水龍頭取水流5ｍｈ，以滅菌山角瓶接水取樣以備分析。

2.用發(fā)酵法檢查大腸桿菌

（1）生活飲用水的檢驗(yàn)

①初步發(fā)酵試驗(yàn)：在2個(gè)各裝有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的三角瓶中，以無(wú)菌操作各自加水樣10ｍｈ。搖勻后，37℃培養(yǎng)24ｈ

第二步：

②平板分離：經(jīng)24ｈ培養(yǎng)后。特產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管，分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板（EMD培養(yǎng)基上），37℃培養(yǎng)18～24ｈ。大腸桿菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略帶或不帶有金屬光澤，或者呈淡紫紅色，僅中心顏色較深，挑取符合上述特征的菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

第三步 ：

③復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：將革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌的菌落的剩余部分接于單倍乳糖發(fā)酵管中，為防止遺漏，每管可接種來(lái)自同一初發(fā)酵管的平板上同一類(lèi)型菌群1～3個(gè)，37℃培養(yǎng)24ｈ，如果產(chǎn)酸又產(chǎn)氣者，即證實(shí)有大腸菌群存在。

第四步 ：

④報(bào)告：根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的復(fù)發(fā)酵管的陽(yáng)性管，查表，報(bào)告每升水樣品中大腸菌群數(shù)（MPN）.

第三篇：5.水中大腸桿菌的檢測(cè)(多管發(fā)酵法)

水中大腸桿菌群書(shū)的監(jiān)測(cè)（發(fā)酵法）

一、試驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1.了解和學(xué)習(xí)水中大腸桿菌的測(cè)定原理和測(cè)定意義。

2.學(xué)習(xí)和掌握水中大腸桿菌的監(jiān)測(cè)方法。

二、試驗(yàn)原理：

水的微生物學(xué)的檢驗(yàn)，特別是大腸桿菌的檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評(píng)價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。國(guó)家飲用水的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定飲用水中大腸桿菌群書(shū)每升中不超過(guò)3個(gè)，細(xì)菌總數(shù)每毫升不超過(guò)100個(gè)。

水中大腸桿菌的檢驗(yàn)方法，常用多管發(fā)酵發(fā)和濾膜法。多管發(fā)酵發(fā)可運(yùn)用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要時(shí)間長(zhǎng)。濾膜法僅用于自來(lái)水和深井水。操作簡(jiǎn)潔快速，但不適用于雜質(zhì)較多，易于阻塞濾孔的水樣。

三、試驗(yàn)材料：

1.培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基

2.器材：滅菌三角瓶、無(wú)菌平皿、無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管等。

四、試驗(yàn)內(nèi)容

第一天 ：

1.水樣的采集

自來(lái)水洗將自來(lái)水龍頭用酒精燈火焰灼燒滅菌，在開(kāi)放水龍頭取水流5ｍｈ，以滅菌山角瓶接水取樣以備分析。

2.用發(fā)酵法檢查大腸桿菌

（1）生活飲用水的檢驗(yàn)

①初步發(fā)酵試驗(yàn)：在2個(gè)各裝有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的三角瓶中，以無(wú)菌操作各自加水樣10ｍｈ。搖勻后，37℃培養(yǎng)24ｈ

第二天 ：

②平板分離：經(jīng)24ｈ培養(yǎng)后。特產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管，分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板（EMD培養(yǎng)基上），37℃培養(yǎng)18～24ｈ。大腸桿菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略帶或不帶有金屬光澤，或者呈淡紫紅色，僅中心顏色較深，挑取符合上述特征的菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

第三天 ：

③復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：將革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌的菌落的剩余部分接于單倍乳糖發(fā)酵管中，為防止遺漏，每管可接種來(lái)自同一初發(fā)酵管的平板上同一類(lèi)型菌群1～3個(gè)，37℃培養(yǎng)24ｈ，如果產(chǎn)酸又產(chǎn)氣者，即證實(shí)有大腸菌群存在。第四天 ：

④報(bào)告：根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的復(fù)發(fā)酵管的陽(yáng)性管，查附錄1或2，報(bào)告每升水樣品中大腸菌群數(shù)（MPN）

五、思考題

記錄試驗(yàn)結(jié)果，并對(duì)所測(cè)樣品作出評(píng)價(jià)。

第四篇：《儀器分析實(shí)驗(yàn)》(離子選擇性電極測(cè)定水中氟含量)

離子選擇性電極測(cè)定水中氟含量

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握直接電位法的基本原理。

2、了解加入總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖溶液的意義和作用。

3、掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定水中微量F離子的方法和實(shí)驗(yàn)操作。

二、實(shí)驗(yàn)原理

將兩電極與酸度計(jì)相連，氟離子選擇性電極為指示電極，雙液接甘汞電極為參比電極，插入試液中組成工作電池。

在一定的條件下，電池電動(dòng)勢(shì)與氟離子活度的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系：

2.303RT

E電池?K?lgaF F當(dāng)保持待測(cè)液離子強(qiáng)度為一定值時(shí)

2.303RT

E電池?K?lgcF F本實(shí)驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法（標(biāo)準(zhǔn)加入法）進(jìn)行測(cè)定。

??

三、儀器與試劑

1、試劑：

①.1×10-1mol/L氟離子標(biāo)準(zhǔn)溶液 ②.總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖溶液TISAB ③.未知水樣

2、儀器： ①.精密酸度計(jì)或離子計(jì) ②.氟電極 ③.飽和甘汞電極 ④.塑料燒杯、攪拌子和容量瓶等

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、儀器準(zhǔn)備

2、水樣中氟離子濃度測(cè)定（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）

3、水樣中氟離子濃度測(cè)定（標(biāo)準(zhǔn)加入法）

五、數(shù)據(jù)處理

六、思考題

1、氟電極在使用時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？

2、本實(shí)驗(yàn)中加入總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖溶液的目的是什么？

3、為什么要把氟電極的空白電位洗至-300mv(視電極生產(chǎn)廠家不同數(shù)據(jù)略有差別)？

4、標(biāo)準(zhǔn)系列的測(cè)定為什么一定要由稀至濃？

5、電極響應(yīng)時(shí)間是什么？如何縮短電極的響應(yīng)時(shí)間？

離子選擇性電極測(cè)定水中氟含量

6、標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行定量分析時(shí)應(yīng)滿(mǎn)足的條件是什么？

附：思考題答案

2、本實(shí)驗(yàn)中加入總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖溶液的目的是什么？

惰性電解質(zhì)

TISAB

pH緩沖劑

(總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖溶

掩蔽劑

4、標(biāo)準(zhǔn)系列的測(cè)定為什么一定要由稀至濃？ 避免遲滯效應(yīng)。

5、電極響應(yīng)時(shí)間是什么？如何縮短電極的響應(yīng)時(shí)間？

響應(yīng)時(shí)間：從兩電極剛接觸溶液時(shí)起，到電池電動(dòng)勢(shì)達(dá)到穩(wěn)定數(shù)值(E變化在±1mV之內(nèi))所需時(shí)間。

攪拌是縮短響應(yīng)時(shí)間的有效方法。

6、標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行定量分析時(shí)應(yīng)滿(mǎn)足的條件是什么？

①Vx>>Vs ②Cs>>Cx

{

附：使用飽和甘汞電極的注意事項(xiàng)

1、使用前取下電極小膠帽

2、檢查飽和KCl的液位和晶體

3、檢查電極內(nèi)有無(wú)氣泡

4、檢查多孔性物質(zhì)是否暢通

5、電極插入液面位置要適中

6、電極應(yīng)在一定溫度下使用

7、為避免干擾可使用雙液接型飽和甘汞電極

8、使用完畢電極應(yīng)按要求保存

附：標(biāo)準(zhǔn)加入法

Ex = k + SlgCx

Cx, Vx 加入標(biāo)準(zhǔn)溶液Cs, Vs后

和并得

E?k?SlgCxVx?CsVsVs?Vx

?E?|E?EX|?SlgCxVx?CsVs(Vs?Vx)Cx

離子選擇性電極測(cè)定水中氟含量

當(dāng)Vx>>Vs時(shí)

Cx?10?E/S?CxVx?CsVs(Vs?Vx)Cx?E/SCsVsVs?Vx(10?VxVx?Vs)?1

Cx?CsVsVx(10?E/S?1)?1

第五篇：水中揮發(fā)酚測(cè)定注意事項(xiàng)（最終版）

《生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范》中揮發(fā)酚的測(cè)定方法是4-氨基安替比林（4-AAP）分光光度法，樣品處理需經(jīng)過(guò)蒸餾，蒸餾樣品量大，費(fèi)時(shí)費(fèi)電，而且顯色后用氯仿萃取，氯仿毒性大，操作繁鎖 ［1］用乙醚萃取，4-氨基安替比林直接分光光度法測(cè)定揮發(fā)酚，檢出限完全滿(mǎn)足生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求，而且操作簡(jiǎn)便快速，適用于日常檢測(cè)工作的需要。

材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 分光光度計(jì)。

1.1.2 試劑 酚標(biāo)準(zhǔn)溶液:1000mg/L（苯酚計(jì)），購(gòu)買(mǎi)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心生產(chǎn)的酚標(biāo)準(zhǔn)溶液;酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液為臨用前用無(wú)酚水稀釋成1.00μg/ml;氫氧化鈉溶液（2mol/L）;4-氨基安替比林溶液（20g/L），臨用新配;鐵氰化鉀溶液（80g/L），臨用新配;氨水-氯化銨緩沖溶液（pH9.8）:20g氯化銨，溶于100ml氨水中。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取8個(gè)500ml分液漏斗，每個(gè)分液漏斗中加入純水250ml，然后分別加入酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml，加入5ml硫酸（1+1）溶液混勻，分別以30、10、10ml乙醚萃取，合并乙醚液于100ml分液漏斗中，分別以2.0ml、2.0ml、2.0ml氫氧化鈉溶液（2mol/L）進(jìn)行反提取，合并氫氧化鈉于25ml比色管中，用硫酸溶液中和至中性后供測(cè)定。

1.2.2 測(cè)定 于標(biāo)準(zhǔn)及樣品提取液（提取方法同標(biāo)準(zhǔn)品提取法）中各加入1.0ml氨水-氯化銨緩沖溶液（pH9.8）搖勻。加入1.0ml4-AAP溶液，搖勻.最后加入1.0ml鐵氰化鉀溶液，搖勻。用純水稀釋至10.0ml，混勻。放置10min，于510nm波長(zhǎng)處，用2cm比色皿，空白管作參比，測(cè)量吸光度值A(chǔ)。以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，酚標(biāo)準(zhǔn)含量值M（μg）為橫坐標(biāo)作線性回歸。

1.2.3 結(jié)果計(jì)算

X=M V

X為水中揮發(fā)酚的含量（mg/L）;M為標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中揮發(fā)酚的含量（μg）;V為取水樣的體積（ml）。結(jié)果與討論

2.1 方法的精密度、回收率 在已知濃度（0.002mg/L）樣品中分別加入不同量的酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用上述方法重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算方法的精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。在濃度為0.002mg/L的水樣分別加入不同量的酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加標(biāo)水樣測(cè)定的精密度（n=6）（略）

表2 加標(biāo)水樣的回收率（略）

2.2 方法的線性范圍和最小檢出限 該方法在檢出范圍為0.002～0.04mg/L內(nèi)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明該范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.002mg/L，結(jié) 果見(jiàn)表3。

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及相關(guān)系數(shù)（略）

2.3 實(shí)際應(yīng)用 利用乙醚萃取4-AAP直接分光光度法（新方法）測(cè)定102份井水、生活飲用水、水源水及地面水中的揮發(fā)酚，其中有10份檢測(cè)結(jié)果值>0.002mg/L，與《生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范》中揮發(fā)酚的測(cè)定方法4-氨基安替比林萃取分光光度法（國(guó)標(biāo)法）所測(cè)定的結(jié)果比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)配對(duì)檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 兩種方法測(cè)定結(jié)果（略）

2.4 樣品萃取條件控制 酚類(lèi)為弱酸性物質(zhì)，在堿性條件下，以各種鹽的形式存在于水中，幾乎不溶于乙醚;在酸性條件下，以酸的形式存在，在水中溶解度很小，用乙醚幾乎可以完全萃取。以硫酸調(diào)節(jié)樣品呈酸性（pH<1.0）后，用乙醚萃取，以氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH>12再進(jìn)行反提取，操作簡(jiǎn)便，避免蒸餾帶來(lái)的耗時(shí)耗電。

2.5 4-AAP的凈化 4-AAP經(jīng)過(guò)苯凈化處理后的空白測(cè)定值大為降低，能提高低濃度標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定的精密度和準(zhǔn)確度。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋及試劑配制用水必須用無(wú)酚的純水，以便降低空白測(cè)定值。

參考文獻(xiàn):

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范［S］.2001.酚類(lèi)為原生質(zhì)毒物，屬高毒類(lèi)物質(zhì)，在人體富集時(shí)出現(xiàn)頭痛、貧血，水中酚濃度達(dá)5g/L時(shí)，水生生物中毒。酚類(lèi)污染物主要來(lái)自煉油廠、洗煤廠和煉焦廠等。

根據(jù)酚類(lèi)能否與水蒸氣一起蒸出，分為揮發(fā)酚（沸點(diǎn)在230度以下）與不揮發(fā)酚（沸點(diǎn)在230度以上）。

揮發(fā)酚類(lèi)的測(cè)定方法有容量法、分光光度法、色譜法等。尤以4-氨基安替比林分光光度法應(yīng)用最廣，對(duì)高濃度含酚廢水可采用溴化容量法。無(wú)論哪種方法，當(dāng)水樣中存在氧化劑、還原劑、油類(lèi)及某些金屬離子時(shí)，均應(yīng)設(shè)法消除并進(jìn)行預(yù)蒸餾。預(yù)蒸餾作用有二，一是分離出揮發(fā)酚，二是消除顏色、渾濁和金屬離子等的干擾。

溴化容量法

測(cè)定原理：在含過(guò)量溴（由溴酸鉀和KBr產(chǎn)生）的溶液中，酚與溴反應(yīng)生成三溴酚，進(jìn)一步生成溴代三溴酚。剩余的溴與KI作用放出游離碘，與此同時(shí)，溴代三溴酚也與KI反應(yīng)生成游離碘，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定釋出的游離碘，并根據(jù)其耗量，計(jì)算出以苯酚計(jì)的揮發(fā)酚含量。

計(jì)算公式：

揮發(fā)酚（以苯酚計(jì)，mg/L）=（V1-V2）×C × 15.68 × 1000/V

水中揮發(fā)酚測(cè)定注意事項(xiàng)

揮發(fā)酚的測(cè)定有很多種方法, 通常有蒸餾后的4-氨基安替比林比色法及蒸餾后溴化容量法紫外法、氣相色譜法等，4-氨基安替比林氯仿萃取法適用于低濃度揮發(fā)酚的測(cè)定，該方法選擇性高且穩(wěn)定，市環(huán)境監(jiān)測(cè)分析人員經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)比對(duì)，在前人工作的基礎(chǔ)上總結(jié)了水中揮發(fā)酚測(cè)定注意事項(xiàng)； 1.樣品保存：酚類(lèi)化合物在水中不穩(wěn)定尤其是低濃度樣品，所以必須加磷酸和硫酸銅固定劑，保證樣品存儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)挠行浴?/p>

2.顯色劑4-氨基安替比林容易受光照氧化變色，進(jìn)而影響試劑空白，使測(cè)量空白偏高，須對(duì)配制好的4-氨基安替比林溶液進(jìn)行純化處理，可使用氯仿萃取法提純，遵循少量多次萃取原則，每次使用5ml左右氯仿萃取三次，因?yàn)?-氨基安替比林易溶于氯仿，氯仿用量過(guò)大會(huì)大幅降低溶液中4-氨基安替比林的濃度影響顯色；

3.蒸餾完后樣品，需加入氯化銨緩沖溶液、4-氨基安替比林顯色劑、鐵氰化鉀三種試劑進(jìn)行反應(yīng)顯色，必須先加氯化銨緩沖溶液是樣品保持溶液呈堿性pH約10±0.2，在鐵氰化鉀的存在下，4-氨基安替比林與酚類(lèi)化合物反應(yīng)，如果先加入4-氨基安替比林和鐵氰化鉀，兩種試劑會(huì)在非堿性條件下反應(yīng)，使實(shí)驗(yàn)失敗;4.萃取結(jié)束后在分液漏斗底部加入一小塊棉花，可防止收集萃取液過(guò)程中水溶液流入比色皿中,影響比色結(jié)果.