第一篇：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法是否適合于相應(yīng)檢測要求。在建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證；在處方、工藝等變更或改變原分析方法時(shí)，也需對分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草說明或修訂說明中。

需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、限量檢查和含量測定，以及其他需控制成分（如殘留物、添加劑等）的測定。中藥制劑溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等檢測方法也應(yīng)作必要驗(yàn)證。

驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度(包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性)、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。應(yīng)視具體方法擬訂驗(yàn)證的內(nèi)容。附表中列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證內(nèi)容可供參考。

方法驗(yàn)證內(nèi)容如下。

一、準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率(%)表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。用于定量測定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證

1.測定方法的準(zhǔn)確度

可用已知純度的對照品做加樣回收測定，即于已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實(shí)測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計(jì)算回收率。

在加樣回收試驗(yàn)中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對照品的量要適當(dāng)，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實(shí)性差。

回收率%＝（C－A）/ B ×100%

A：供試品所含被測成分量B：加入對照品量C：實(shí)測值

2.數(shù)據(jù)要求

在規(guī)定范圍內(nèi)，用6～9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)，設(shè)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備2～3份供試品溶液進(jìn)行測定，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1:1左右。應(yīng)報(bào)告供試品中含有量、對照品加入量、測定結(jié)果和回收率（%）計(jì)算值，以及回收率（%）的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）或可信限。

二、精密度

精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

精密度包含重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。

在相同操作條件下，由同一個(gè)分析人員在較短的間隔時(shí)間內(nèi)測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度。在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。

用于定量測定的分析方法均應(yīng)考察方法的精密度。

1.重復(fù)性

實(shí)驗(yàn)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的樣品，用6個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)；或制備3個(gè)不同濃度的樣品，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測定，用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。

2.中間精密度

為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對精密度的影響，應(yīng)進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備等。

3.重現(xiàn)性

當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如建立藥典分析方法時(shí)通過不同實(shí)驗(yàn)室的復(fù)核檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果。復(fù)核檢驗(yàn)的目的、過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果

4.數(shù)據(jù)要求

均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。

三、專屬性

專屬性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正確測定出被測成分的特性。鑒別、限量檢查、含量測定等方法，均應(yīng)考察其專屬性。

1.鑒別

應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均不得干擾測定,顯微鑒別、色譜光譜鑒別等應(yīng)附相應(yīng)的代表性圖象或圖譜。

2.含量測定和限量檢查

色譜法和其他分析方法，應(yīng)附代表性圖譜，以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬復(fù)方）試驗(yàn)說明方法的專屬性。并標(biāo)明相關(guān)成分在圖中的位置，色譜

法中的分離度應(yīng)符合要求。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測或質(zhì)譜檢測進(jìn)行驗(yàn)證。

四、檢測限

檢測限系指供試品中被測物能被檢測出的最低量。確定檢測限常用的方法如下。1.直觀法

可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。

用一系列已知濃度的供試品進(jìn)行分析，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2.信噪比法

僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品測出的信號(hào)與空白樣品測出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。3.數(shù)據(jù)要求

應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。

五、定量限

定量限系指供試品中被測成分能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。用于定量測定的分析方法均應(yīng)確定定量限。

常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。

六、線性

線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與供試品中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)行測定，至少制備5個(gè)濃度的樣品。以測得的響應(yīng)信號(hào)作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。

數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。

七、范圍

范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。中藥由于含量差異大，對于有毒的、特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍應(yīng)為限度的±20%。

八、耐用性

耐用性系指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。典型的變動(dòng)因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動(dòng)因素有：不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體、柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。薄層色譜的變動(dòng)因素有：不同廠牌的薄層板，點(diǎn)樣方式及薄層展開時(shí)溫度及相對濕度的變化等。

經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動(dòng)能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。

附表

①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。②重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)做。③如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。

上表中列舉了在不同類型的分析方法驗(yàn)證中被認(rèn)為是最重要的項(xiàng)目，“-”表示通常不需要驗(yàn)證的項(xiàng)目，“+”表示通常需要驗(yàn)證的項(xiàng)目，如遇特殊情況，仍應(yīng)根據(jù)具體分析對象和情況而定。

第二篇：中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法是否適合于相應(yīng)檢測要求。在建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證；在處方、工藝等變更或改變原分析方法時(shí)，也需要對分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明或修訂說明中。

需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、限量檢查和含量測定，以及其他需控制成分（如殘留物、添加劑等）的測定。中藥制劑溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等檢測方法也應(yīng)坐必要驗(yàn)證。

驗(yàn)證內(nèi)容有：精確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。應(yīng)視具體方法擬定驗(yàn)證的內(nèi)容。附表中列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證內(nèi)容可供參考。

第三篇：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證

一、目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求。

二、用途

（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。

（二）藥物生產(chǎn)方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。

三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目

1.鑒別試驗(yàn)；

2.雜質(zhì)定量或限度檢查；

3.原料或制劑中有效成分含量測定；

4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；

5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法

四、驗(yàn)證內(nèi)容

準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性

（一）線性（Linearity）

在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

?方法：應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系。可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法進(jìn)行測定（n≥5）。以測得的響應(yīng)信號(hào)作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。

?數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖

UV法：吸光度A一般在0.2～0.8，濃度點(diǎn)n＝5。用濃度c對A作線性回歸處理，得一直線方程，r應(yīng)達(dá)到0.9999(n＝5)，方程的截距應(yīng)近于零。

HPLC法: 用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點(diǎn)n應(yīng)為5～7，用濃度c對峰高h(yuǎn)或被測物的響應(yīng)值(峰面積A)之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，r應(yīng)大于0.999，截距應(yīng)趨于零。

（二）準(zhǔn)確度（accuracy）

準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用百分回收率表示。

測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。回收試驗(yàn)：空白+已知量的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M

回收率R?測定平均值?空白?100% 加入量

加樣回收試驗(yàn) ： 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為MR?M?P?100% A

數(shù)據(jù)要求：可向制劑中加入已知量的被測物對照品進(jìn)行測定規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備高、中、低三個(gè)不同濃度樣品各測三次。

（三）精密度（precision）

精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示。

相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）

RSD?S?100%S?2??x??i

n?

11.重復(fù)性(repeatability):

在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進(jìn)行評價(jià)。

2.中間精密度同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。

3.重現(xiàn)性(reproducibility)不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。

數(shù)據(jù)要求：需報(bào)告RD，RSD和可信限。

（四）檢測限（LOD）

檢測限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。

1．非儀器分析目視法

用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

2．信噪比法

用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號(hào)與空白樣品測出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。

（1）空白值＝0時(shí)；①測定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差S空。②將S空乘以三倍；③在工作曲線上求出3 S空相對應(yīng)的濃度X；即為方法的檢出值；

（2）空白值不等于0；①測定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差S空；②在工作曲線上求出3 S空 相對應(yīng)的濃度X； ③ 將求得的對應(yīng)濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。

（五）定量限（LOQ）

指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求。

常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可按1984年國際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IVPAC)規(guī)定：用儀器所測空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定方法的實(shí)際測定下限。

儀器分析：通過測定一組空的樣品的背景信號(hào)后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差S。以1OS來估算定量限度。（以定量限度制備的樣品來驗(yàn)證）

非儀器分析：通過分析己知被測物濃度的樣品并確定一個(gè)樣品中被測物可被準(zhǔn)確和精密測定出的最低濃度（量）。

（六）耐用性

指測定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。

分析方法重現(xiàn)性的測定是通過在不同的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同的實(shí)驗(yàn)者對同一樣品的分別測試而獲得的。（獲得的這種再與正常檢定下的精密度進(jìn)行比較，從而確定該法的耐用性）

（七）專屬性

（八）范圍

?典型的變動(dòng)因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。

?液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類色譜柱，柱溫，流速等。

?氣相色譜法變動(dòng)因素有：不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體、柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。

經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動(dòng)能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。

含量測定需進(jìn)行的方法學(xué)驗(yàn)證項(xiàng)目：準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性

五、各種含量測定方法對效能指標(biāo)的要求

1.容量分析法：用原料藥精制品(含量>99.5％)或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相對?biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.2％；進(jìn)行回收率試驗(yàn)?；厥章室话阍?9.7～100.3％之間。

2.UV法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測定，其RSD一般不大于應(yīng)在98％～102％之間。

3.HPLC法：要求

第四篇：分析方法的驗(yàn)證(精)

分析方法的驗(yàn)證

分析方法的驗(yàn)證，就是對藥品分析實(shí)驗(yàn)所采用的分析方法是否完全達(dá)到了預(yù)期目的，或證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進(jìn)行的科學(xué)證明。

分析方法的驗(yàn)證以驗(yàn)證參數(shù)表示。在制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可通過這些參數(shù)證明所建立的分析方法是否適當(dāng)。本文所述分析方法驗(yàn)證是指下述情況：藥局方新收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立；藥局方已收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂；根據(jù)藥局方的通則建立替代方法。

定量限界是指樣品中所含的被測物質(zhì)可被進(jìn)行定量的最小量或最低濃度。定量限界所述樣品測定值的精度，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，一般為10%。2.5.2 評價(jià)方法：通常定量限界可以通過空白樣品或被測物定量限界附近的樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差以及定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率算出。例如，根據(jù)定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

slope：定量限界附近標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

應(yīng)用色譜法時(shí)，測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。2.6 線性關(guān)系

2.6.1 定義：線性關(guān)系是指分析方法能夠得到與被測物質(zhì)的量或濃度具有直線關(guān)系的測定值的能力，必要時(shí)，被測物質(zhì)的量或濃度的測定值也可以是從數(shù)學(xué)公式中得到的變換值。

2.6.2 評價(jià)方法：準(zhǔn)備一系列不同濃度(量)的被測樣品，按照分析方法的操作步驟進(jìn)行測定，用測定值得到的回歸方程及相關(guān)系數(shù)對線性關(guān)系進(jìn)行評價(jià)。必要時(shí)，將測定值由回歸方程算出的殘差對被測物質(zhì)的量(濃度)作圖，不應(yīng)具有某種特定的趨勢。通常，采用5個(gè)不同量(濃度)的樣品作線性關(guān)系的研究。2.7 范圍(Range)

2.7.1 定義：分析方法驗(yàn)證中所述范圍是指具有一定精度和準(zhǔn)確度的被測物質(zhì)上限及下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。對于上述具有線性關(guān)系的分析方法則指：具有一定精度和準(zhǔn)確度，并且使線性關(guān)系成立的被測物質(zhì)上下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。

2.7.2 評價(jià)方法：分析方法驗(yàn)證的范圍一般為標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值的±20%左右，對范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進(jìn)行精度、真度及線性的研究討論。

驗(yàn)證參數(shù)

類型Ⅰ

類型Ⅱ

類型Ⅲ

定量試驗(yàn) 限度試驗(yàn) 準(zhǔn)確度+ 精密度 并行精度+ 室內(nèi)再現(xiàn)精度-* 室間再現(xiàn)精度+* 專屬性 + + + + 檢出限界定量限界-直線性+ 范圍

+

+

注：-：一般不需要；+：需要；*：視情況而定。室內(nèi)或室間再現(xiàn)精度選擇其一進(jìn)行評價(jià)，日本藥局方通常選擇后者進(jìn)行評價(jià)。

類型Ⅰ需做鑒別試驗(yàn)，即對藥品中的主要成分及其特征進(jìn)行鑒別。類型Ⅱ需做檢查試驗(yàn)，即對藥品中的雜質(zhì)或不純物的量進(jìn)行測定。類型Ⅲ需做含量測定和溶出度試驗(yàn)，即對藥品中的成分進(jìn)行測定(成分包括穩(wěn)定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗(yàn)。分析方法驗(yàn)證用語

4.1 適應(yīng)性/牢固性(Robustness)指故意將分析條件在小范圍內(nèi)變化時(shí)，測定值不受影響的能力。例如，反應(yīng)的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)改變時(shí)，對測定值的穩(wěn)定性進(jìn)行研究討論。測定值對于分析條件不穩(wěn)定時(shí)，應(yīng)對方法加以改進(jìn)。適應(yīng)性的研究結(jié)果在分析方法中以表示分析條件的有效數(shù)字或注意事項(xiàng)的形式得以體現(xiàn)。

4.2 實(shí)驗(yàn)室 指試驗(yàn)進(jìn)行的場所、設(shè)施。分析方法驗(yàn)證中所述改變實(shí)驗(yàn)室是指試驗(yàn)者、裝置以及試藥的批號(hào)等試驗(yàn)條件發(fā)生變化。

4.3 試驗(yàn)法 指藥局方中的試驗(yàn)方法，例如鑒別試驗(yàn)、檢查試驗(yàn)等。試驗(yàn)方法應(yīng)包括樣品的制備、規(guī)定值、分析方法等。

4.4 生產(chǎn)者危險(xiǎn)率 指合格的制品由于試驗(yàn)原因而錯(cuò)判為不合格制品的發(fā)生概率。一般以α表示，也叫第一過失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說的假陽性率。4.5 消費(fèi)者危險(xiǎn)率 指不合格的制品由于試驗(yàn)原因而錯(cuò)判為合格制品的發(fā)生概率。一般以β表示，也叫第二過失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說的假陰性率。4.6 測定次數(shù) 指分析方法操作程序中規(guī)定的次數(shù)，為了提高分析方法的精度，有些試驗(yàn)明確規(guī)定試驗(yàn)次數(shù)在2次以上，分析方法驗(yàn)證是對包括分析方法所規(guī)定的測定次數(shù)在內(nèi)的分析方法的評價(jià)。它與為了提高分析方法的精度進(jìn)行重復(fù)分析時(shí)的重復(fù)次數(shù)不同。

4.7 測定值 一次分析所得到的一個(gè)數(shù)值。

第五篇：JP13分析方法的驗(yàn)證

JP13分析方法的驗(yàn)證

JP13分析方法的驗(yàn)證

分析方法的驗(yàn)證，就是對藥品分析實(shí)驗(yàn)所采用的分析方法是否完全達(dá)到了預(yù)期目的，或證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進(jìn)行的科學(xué)證明。

分析方法的驗(yàn)證以驗(yàn)證參數(shù)表示。在制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可通過這些參數(shù)證明所建立的分析方法是否適當(dāng)。本文所述分析方法驗(yàn)證是指下述情況：藥局方新收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立；藥局方已收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂；根據(jù)藥局方的通則建立替代方法。

1、日本藥局方收載分析方法所需資料

1.1 概要 對分析方法作簡要說明，包括所采用分析方法的必要性，特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn)及有關(guān)驗(yàn)證的要點(diǎn)。如系分析方法的修訂，則需闡明新方法與原方法的區(qū)別以及新方法的優(yōu)勢。

1.2 分析方法 本項(xiàng)記載的有關(guān)分析方法的內(nèi)容要足以能對分析方法進(jìn)行評價(jià)，并且必要時(shí)可用復(fù)核試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)。分析方法主要記載內(nèi)容包括：分析的步驟、標(biāo)準(zhǔn)品及樣品的制備方法、試劑與試藥的調(diào)配、注意事項(xiàng)、分析系統(tǒng)是否正常運(yùn)轉(zhuǎn)的檢驗(yàn)證明方法(例如高效液相色譜法中的分離效率的研究)、分析結(jié)果的計(jì)算公式、測定次數(shù)等。并且，如果使用了藥局方以外的裝置，還需詳述有關(guān)內(nèi)容；如果使用了新的標(biāo)準(zhǔn)品，則必須提供其物理、化學(xué)及生物學(xué)特征數(shù)據(jù)，并提供其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 有關(guān)分析方法驗(yàn)證的資料 本項(xiàng)應(yīng)包括求導(dǎo)各驗(yàn)證參數(shù)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、計(jì)算結(jié)果及檢定結(jié)果等。

2、驗(yàn)證參數(shù)(validationcharacterisitics)

分析方法適當(dāng)與否可通過驗(yàn)證參數(shù)進(jìn)行評價(jià)，下面列舉了最典型的分析方法驗(yàn)證參數(shù)的定義及其評價(jià)方法。

驗(yàn)證參數(shù)的有關(guān)術(shù)語及定義因分析方法的應(yīng)用領(lǐng)域不同而不同，本文所使用的術(shù)語及定義僅限于日本藥局方。評價(jià)方法項(xiàng)下所述內(nèi)容也僅為簡要概述。確定驗(yàn)證參數(shù)的方法很多，采用何種方法沒有具體限制。但是，驗(yàn)證參數(shù)的限值常因確定方法的不同而發(fā)生變化。故此，確定驗(yàn)證參數(shù)的實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、計(jì)算方法等應(yīng)盡可能詳細(xì)地記述。

本文分析方法驗(yàn)證中未包括驗(yàn)證參數(shù)適應(yīng)性/牢固性(Robustness)的討論，這是由于牢固性的研究主要在分析方法的開發(fā)設(shè)計(jì)階段進(jìn)行，其研究結(jié)果可以在方法的分析條件或注意事項(xiàng)中得到體現(xiàn)。

2.1 真度/準(zhǔn)確度(Accuracy/Trueness)

2.1.1 定義：所謂準(zhǔn)確度，指分析方法所得測定值的偏離程度，通常以測定值的總平均值與真值之間的差來表示。

2.1.2 評價(jià)方法：準(zhǔn)確度一般以測定室內(nèi)重現(xiàn)精度或室間再現(xiàn)精度時(shí)所得總平均值與真值的差表示。真值一般使用理論值(如滴定法)，如果理論值不存在或即使存在但很難求出的情況下，可采用經(jīng)過確證或認(rèn)可的數(shù)值來代替(如制劑分析常以原料藥的測定值作為真值)。分析方法的專屬性強(qiáng)，可以推斷其分析方法的誤差就小。由推出的真值與室內(nèi)(室間)再現(xiàn)精度的標(biāo)準(zhǔn)偏差即可計(jì)算出真值的95%置信區(qū)間，并可判斷這個(gè)區(qū)間是否包括0點(diǎn)，或區(qū)間的上下限值是否在分析方法

1所要求的精度范圍之內(nèi)。

2.2 精密度(Precision)

2.2.1 定義：精密度是指從均勻樣品中抽取的復(fù)數(shù)個(gè)供試品進(jìn)行重復(fù)分析測定時(shí)，所得到的一系列測定數(shù)據(jù)彼此之間的一致程度。測定值的誤差以偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示。精度根據(jù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的條件不同以三個(gè)水平表示，分別稱為：并行精度、室內(nèi)再現(xiàn)精度、室間再現(xiàn)精度。

并行精度(Repeatability/Intra-assayprecision)：指實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、裝置、器具以及試藥的批號(hào)等實(shí)驗(yàn)條件均未改變的情況下，從均勻樣品中抽取的復(fù)數(shù)個(gè)供試品短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行重復(fù)分析測定時(shí)(并行條件)的精度。

室內(nèi)再現(xiàn)精度(Intermediateprecision)：指同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、裝置、器具以及試藥的批號(hào)等實(shí)驗(yàn)條件一部分或全部改變的情況下，從均勻樣品中抽取的復(fù)數(shù)個(gè)供試品進(jìn)行重復(fù)分析測定時(shí)(室內(nèi)再現(xiàn)條件)的精度。

室間再現(xiàn)精度(Reproducibility)：指在不同實(shí)驗(yàn)室間，從均勻樣品中抽取的多個(gè)供試品進(jìn)行重復(fù)分析測定時(shí)(室間再現(xiàn)條件)的精度。

2.2.2 評價(jià)方法：首先，要保證精度研究所用樣品的數(shù)量和均勻性。溶液應(yīng)為均勻性樣品，在得不到均勻性樣品時(shí)，通常將大量制劑粉碎混合至認(rèn)為均勻或制劑的各組分混合至認(rèn)為均勻的樣品作為均勻性樣品使用。如果同時(shí)做兩個(gè)水平以上的精度評價(jià)時(shí)，可以采用諸如單因素方差分析等實(shí)驗(yàn)方法，但為了正確得出分析方法的精度，必須有足夠的實(shí)驗(yàn)次數(shù)、分析條件的水平數(shù)及實(shí)驗(yàn)室數(shù)。并且要對可預(yù)想到的致使分析發(fā)生變化的要因進(jìn)行研究。各水平的精度以偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差、偏差的90%置信區(qū)間以及與其相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的區(qū)間來表示。將其與分析方法所要求精度的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行對照，以確定分析方法是否可行。通常是以室內(nèi)(間)的再現(xiàn)精度作為方法取舍的依據(jù)。

2.3 專屬性/特異性(Specificity)

2.3.1 定義：專屬性指分析樣品中有共存物質(zhì)的情況下，對被測物質(zhì)進(jìn)行正確測定的能力，即表示分析方法的識(shí)別能力。如果分析方法的專屬性有個(gè)別缺陷，可以用其他方法加以補(bǔ)充。

2.3.2 評價(jià)方法：確證分析方法是否達(dá)到試驗(yàn)?zāi)康?，確實(shí)能夠?qū)Ρ粶y物質(zhì)進(jìn)行鑒別或定量。例如，分析方法的專屬性可以通過比較A為僅含被測物質(zhì)樣品(陽性對照)；B為含有制劑的其他各組成成分及不純物或分解產(chǎn)物中添加被測物質(zhì)的樣品；C為不含被測物質(zhì)，僅含制劑的其他組分、不純物及分解產(chǎn)物的樣品(陰性對照)，根據(jù)A、B、C三種樣品的分析結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。如果不純物不易得到時(shí)，可以用含有不純物的樣品(如經(jīng)時(shí)發(fā)生變化的樣品)替代。

2.4 檢出限界(Detection Limit)

2.4.1 定義：檢出限界是指樣品中所含的被測物質(zhì)可被檢出的最低量或濃度。在檢出限界內(nèi)并不意味著一定就能夠進(jìn)行定量。

2.4.2 評價(jià)方法：通常以消費(fèi)者危險(xiǎn)率及生產(chǎn)者危險(xiǎn)率在5%以下來規(guī)定檢出限界。檢出限界可以通過空白樣品或檢出限界附近的樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差以及檢出限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率算出。例如，根據(jù)檢出限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出檢出限界。

DL=3.3σ/slope

DL：檢出限界

σ：空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

slope：檢出限界附近標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

應(yīng)用色譜法時(shí)，測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差可以用信噪比代替。分析方法的檢出限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。

2.5 定量限界(Quantitation Limit)

2.5.1 定義：定量限界是指樣品中所含的被測物質(zhì)可被進(jìn)行定量的最小量或最低濃度。定量限界所述樣品測定值的精度，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，一般為10%。

2.5.2 評價(jià)方法：通常定量限界可以通過空白樣品或被測物定量限界附近的樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差以及定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率算出。例如，根據(jù)定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

slope：定量限界附近標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

應(yīng)用色譜法時(shí)，測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。

2.6 線性關(guān)系

2.6.1 定義：線性關(guān)系是指分析方法能夠得到與被測物質(zhì)的量或濃度具有直線關(guān)系的測定值的能力，必要時(shí)，被測物質(zhì)的量或濃度的測定值也可以是從數(shù)學(xué)公式中得到的變換值。

2.6.2 評價(jià)方法：準(zhǔn)備一系列不同濃度(量)的被測樣品，按照分析方法的操作步驟進(jìn)行測定，用測定值得到的回歸方程及相關(guān)系數(shù)對線性關(guān)系進(jìn)行評價(jià)。必要時(shí)，將測定值由回歸方程算出的殘差對被測物質(zhì)的量(濃度)作圖，不應(yīng)具有某種特定的趨勢。通常，采用5個(gè)不同量(濃度)的樣品作線性關(guān)系的研究。

2.7 范圍(Range)

2.7.1 定義：分析方法驗(yàn)證中所述范圍是指具有一定精度和準(zhǔn)確度的被測物質(zhì)上限及下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。對于上述具有線性關(guān)系的分析方法則指：具有一定精度和準(zhǔn)確度，并且使線性關(guān)系成立的被測物質(zhì)上下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。

2.7.2 評價(jià)方法：分析方法驗(yàn)證的范圍一般為標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值的±20%左右，對范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進(jìn)行精度、真度及線性的研究討論。

3、試驗(yàn)分析方法的分類

根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，試?yàn)方法主要可以分為以下3種類型，各類型分析試驗(yàn)方法的驗(yàn)證所要求的驗(yàn)證參數(shù)見表1。應(yīng)該指出，這僅是一個(gè)原則，評價(jià)分析方法所必需的驗(yàn)證參數(shù)將隨分析方法的特點(diǎn)及試驗(yàn)?zāi)康亩淖儭?/p>

表1 試驗(yàn)類型與所要求的驗(yàn)證參數(shù)

其一進(jìn)行評價(jià)，日本藥局方通常選擇后者進(jìn)行評價(jià)。

類型Ⅰ需做鑒別試驗(yàn)，即對藥品中的主要成分及其特征進(jìn)行鑒別。類型Ⅱ需做檢查試驗(yàn)，即對藥品中的雜質(zhì)或不純物的量進(jìn)行測定。類型Ⅲ需做含量測定和溶出度試驗(yàn)，即對藥品中的成分進(jìn)行測定(成分包括穩(wěn)定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗(yàn)。

4、分析方法驗(yàn)證用語

4.1 適應(yīng)性/牢固性(Robustness)指故意將分析條件在小范圍內(nèi)變化時(shí)，測定值不受影響的能力。例如，反應(yīng)的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)改變時(shí)，對測定值的穩(wěn)定性進(jìn)行研究討論。測定值對于分析條件不穩(wěn)定時(shí)，應(yīng)對方法加以改進(jìn)。適應(yīng)性的研究結(jié)果在分析方法中以表示分析條件的有效數(shù)字或注意事項(xiàng)的形式得以體現(xiàn)。

4.2 實(shí)驗(yàn)室 指試驗(yàn)進(jìn)行的場所、設(shè)施。分析方法驗(yàn)證中所述改變實(shí)驗(yàn)室是指試驗(yàn)者、裝置以及試藥的批號(hào)等試驗(yàn)條件發(fā)生變化。

4.3 試驗(yàn)法 指藥局方中的試驗(yàn)方法，例如鑒別試驗(yàn)、檢查試驗(yàn)等。試驗(yàn)方法應(yīng)包括樣品的制備、規(guī)定值、分析方法等。

4.4 生產(chǎn)者危險(xiǎn)率 指合格的制品由于試驗(yàn)原因而錯(cuò)判為不合格制品的發(fā)生概率。一般以α表示，也叫第一過失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說的假陽性率。

4.5 消費(fèi)者危險(xiǎn)率 指不合格的制品由于試驗(yàn)原因而錯(cuò)判為合格制品的發(fā)生概率。一般以β表示，也叫第二過失率，也就是在限度試驗(yàn)中所說的假陰性率。

4.6 測定次數(shù) 指分析方法操作程序中規(guī)定的次數(shù)，為了提高分析方法的精度，有些試驗(yàn)明確規(guī)定試驗(yàn)次數(shù)在2次以上，分析方法驗(yàn)證是對包括分析方法所規(guī)定的測定次數(shù)在內(nèi)的分析方法的評價(jià)。它與為了提高分析方法的精度進(jìn)行重復(fù)分析時(shí)的重復(fù)次數(shù)不同。

4.7 測定值 一次分析所得到的一個(gè)數(shù)值。

本文譯自第13版日本藥局方附錄參考資料3所載內(nèi)容。