第一篇：有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡介

有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡介

（CDE網(wǎng)站2006年2月8號發(fā)表的電子刊物）

摘要：本文介紹了在對有關(guān)物質(zhì)檢查所用的分析方法進行方法學(xué)驗證時，各項指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。

關(guān)鍵詞：有關(guān)物質(zhì)檢查 分析方法驗證 可接收標(biāo)準(zhǔn)

藥品中的有關(guān)物質(zhì)泛指在藥品的生產(chǎn)與儲存過程中產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)或降解產(chǎn)物。由于這些有關(guān)物質(zhì)的存在會影響到藥品的純度，進而可能會產(chǎn)生毒副作用，所以有關(guān)物質(zhì)的控制是藥品研發(fā)的一個重要方面，也是我們在藥品審評中一直重點關(guān)注的要點之一。而要對有關(guān)物質(zhì)進行嚴(yán)格的控制，就離不開專屬性強、靈敏度高的分析方法，這就涉及到分析方法的篩選與驗證。從現(xiàn)有的申報資料看，藥品研發(fā)單位已基本上意識到分析方法驗證的重要性，但是對驗證時各具體指標(biāo)是否可行尚沒有一個明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)，從而難以對驗證結(jié)果進行評判。為解決這一問題，本文結(jié)合國外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對有關(guān)物質(zhì)檢查方法進行驗證時的可接受標(biāo)準(zhǔn)，供國內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進行研究時參考。

1．準(zhǔn)確度

該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1％、0.2％和0.3％的雜質(zhì)溶液），分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，并計算9個回收率數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）。

該項目的可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。

2．線性

線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：

在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質(zhì)峰的面積，計算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進行線性回歸分析。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的25％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。

3．精密度

1）重復(fù)性

配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%。

2）中間精密度

配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%。

4．專屬性

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對照應(yīng)無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。

5．檢測限

雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于3。

6．定量限

雜質(zhì)峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質(zhì)峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%。

7．耐用性

分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20％以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1％以內(nèi)。

8、系統(tǒng)適應(yīng)性

配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進行分析，該雜質(zhì)峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

9．溶液穩(wěn)定性

按照分析方法分別配置對照品溶液與供試品溶液，平行測定兩次主成分與雜質(zhì)的含量，然后將上述溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室（4℃）中，在1、2、3、5和7天時分別平行測定兩次主成分與雜質(zhì)的含量。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主成分的含量變化的絕對值應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對值在±0.1％以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報告限度的雜質(zhì)。

第二篇：含量測定分析方法驗證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡介

含量測定分析方法驗證的可接受標(biāo)準(zhǔn)簡介

摘要：本文介紹了在對含量測定所用的分析方法進行方法學(xué)驗證時，各項指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。

關(guān)鍵詞：含量測定 分析方法驗證 可接收標(biāo)準(zhǔn)

為規(guī)范對各種分析方法的驗證要求，我國已于2005年頒布了分析方法驗證的指導(dǎo)原則。該指導(dǎo)原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標(biāo)做了比較詳細的闡述。但是文中未涉及各具體指標(biāo)在驗證時的可接受標(biāo)準(zhǔn)，國際上已頒布的指導(dǎo)原則中也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的要求。

1．準(zhǔn)確度

該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。

2．線性

線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：

在80％至120％的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進行線性回歸分析。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的2％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

3．精密度

1）重復(fù)性

配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

2）中間精密度

配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數(shù)據(jù)的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

4．專屬性

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應(yīng)大于980。

5．檢測限

主峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于3。

6．定量限

主峰與噪音峰信號的強度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

7．耐用性

分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對值變化±20％時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

8、系統(tǒng)適應(yīng)性

配制6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

第三篇：HPLC測定有關(guān)物質(zhì)和含量方法驗證小結(jié)

本貼的目的：討論目前審評尺度下，藥品研發(fā)過程中，分析方法的驗證項目及目的，試驗方法，試驗要求

本帖僅僅針對于HPLC方法進行討論

方法開發(fā)的內(nèi)容不在本帖討論范圍內(nèi)

1．有關(guān)物質(zhì)（適用于API，制劑，也適用于起始物料，中間體）

有關(guān)物質(zhì)方法驗證的前提條件：

1.各雜質(zhì)與主峰的混合溶液能用擬定的分析方法有效分離

2.根據(jù)混合溶液中各峰的紫外吸收波長（或單獨測定各組分紫外吸收），選擇合適的檢測波長。多波長檢測（如有）則分別考察。

3.在檢測波長下，選擇峰高最小的，計算S/N，預(yù)估主成分濃度 4.各雜質(zhì)純度已知

5.根據(jù)合成跟蹤檢測，合理制定各雜質(zhì)的限度 6.供試品溶解方法和提取方法得到合理證明

1.1專屬性： 1.1.1概念

在其他成分（如其他雜質(zhì)，輔料，溶劑）可能存在的情況下，擬定的分析方法能正確測定被檢測物的能力。1.1.2試驗方法 1.1.2.1定位試驗： A.目的

對各已知雜質(zhì)和主峰進行定位 B.試驗方法：

a．配制一定濃度（能夠顯示出峰純度，一般為0.1mg/ml）的各已知雜質(zhì)溶液、擬檢測濃度的主成分作為定位溶液

b．配制限度濃度各已知雜質(zhì)與檢測濃度的主成分的混合溶液作為分離度試驗溶液 c．使用擬定分析方法分別進行定位。C.試驗要求：

a．空白應(yīng)不干擾各雜質(zhì)的測定：如雜質(zhì)附近有空白峰，二者分離度應(yīng)大于1.5；雜質(zhì)峰保留時間處不得為梯度峰拐點

b．定位溶液中，已知雜質(zhì)與主峰的峰純度應(yīng)符合規(guī)定

c．分離度試驗溶液中，主峰與相鄰雜質(zhì)的分離度應(yīng)大于2.0（至少1.5）；各已知雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)大于1.5（至少1.2）； 1.1.2.2強制降解試驗 A.目的

一是通過考察藥品在一系列劇烈條件下的穩(wěn)定性，了解該藥品內(nèi)在的穩(wěn)定特性及其降解途徑與降解產(chǎn)物。其二，這些試驗也能在一定程度上對有關(guān)物質(zhì)分析方法用于檢查降解產(chǎn)物的專屬性進行驗證。B.試驗方法

對于高溫、光照、強酸、強堿及強氧化劑的濃度及時間、取樣方式等沒有明確的規(guī)定。具體品種具體模索，初步試驗了解樣品對影響的因素（高溫、光照、酸、堿、氧化）等條件基本穩(wěn)定情況后，進一步調(diào)整破壞試驗條件，只要使主藥有一定量的降解，并對可能的降解途徑和降解機制進行分析，保證實驗的意義即可。試驗一般的范圍為：

強酸：0.1~5.0mol/L HCl溶液或視情況調(diào)節(jié)時間，溫度，體積 強堿：0.1~5.0mol/L NaOH溶液或視情況調(diào)節(jié)時間，溫度，體積

強氧化劑：30%的H2O2或視情況配制不同濃度的溶液或視情況調(diào)節(jié)時間，溫度 高溫：固體狀態(tài)下穩(wěn)定的主藥，可以考慮溶解后以液體狀態(tài)進行試驗 光照：固體狀態(tài)下穩(wěn)定的主藥，可以考慮溶解后以液體狀態(tài)進行試驗 C.試驗要求

a.一般樣品含量控制在85%—90%范圍（歸一化法），不一定要求每個條件都能降解出來。

b.在進行酸、堿、強氧化破壞試驗時，每個試驗最好都要做相應(yīng)的空白（溶劑，空白輔料，復(fù)方制劑還包括除去某一主藥的其他組分）破壞試驗作為輔助。

c.主峰純度符合規(guī)定，與相鄰雜質(zhì)分離度大于2.0（至少1.5），已知雜質(zhì)與相鄰雜質(zhì)分離度大于1.2 d.物料守恒，即未破壞主藥的C/A與破壞后的C/A值相比，結(jié)果在0.9~1.1之間

e.關(guān)于破壞試驗，更多內(nèi)容請參閱lyslinjiu版主在帖子【討論】2013-專屬性實驗（強制降解試驗）2013-專屬性實驗（強制降解試驗）-丁香園論壇

f.在此處做梯度時間（如有）延長驗證試驗。即將分析方法的梯度中，有機相比例最大的時長延長（建議延長時間為主峰保留時間或10~20min），考察是否降解出難以洗脫的物質(zhì)在擬定方法的梯度周期內(nèi)能有效檢出。進一步考察分析方法的合理性

1.2定量限 1.2.1概念

樣品中能被定量測定的最低量，有定量意義。1.2.2驗證方法 A.目的

考察雜質(zhì)的能被定量的最低量，同時評判供試品濃度的選擇是否合理 B.試驗方法

配制限度濃度的各已知雜質(zhì)與主成分的混合溶液作為貯備液，進樣，逐步稀釋至S/N約為10時，得定量限。C.試驗要求

定量限濃度不得高（修正，原為低）于限度濃度的1/5

1.3檢測限 1.3.1概念

樣品中能被檢測出的最低量，僅作為限度試驗指標(biāo)和定性鑒別的依據(jù)，沒有定量意義。1.3.2驗證方法 A.目的

考察雜質(zhì)的最低檢出量，同時評判供試品濃度的選擇是否合理 B.試驗方法

配制限度濃度的各已知雜質(zhì)與主成分的混合溶液作為貯備液，進樣，逐步稀釋至S/N約為3時，得檢測限。C.試驗要求

檢測限濃度不得高（修正，原為低）于限度濃度的1/10

1.4溶液穩(wěn)定性 1.4.1目的

考察被測各溶液在特定時間周期內(nèi)的穩(wěn)定性 1.4.2試驗方法

a.配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液、供試品溶液、對照品溶液，在室溫條件下，分別在各時間點進樣 b.如不穩(wěn)定，需考察在低溫條件下的溶液穩(wěn)定性

c.時間范圍根據(jù)試驗需要來確定。比如做回收率中需要至少連續(xù)測定9份供試品，是所有單個驗證項目中最長的，選擇這個時間點是可以的。也有考慮到以后需要測定更多的樣品，選擇更長的時間范圍。1.4.3試驗要求

a.系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，各峰之間分離度應(yīng)符合要求。b.對照品溶液峰面積RSD應(yīng)小于2.0% c.供試品溶液，雜質(zhì)個數(shù)和雜質(zhì)量應(yīng)一致，峰面積RSD應(yīng)小于5.0%；不得檢出新增雜質(zhì) d.如不穩(wěn)定，需臨用現(xiàn)配或低溫保存

1.5儀器精密度 1.5.1概念

同一溶液，連續(xù)進樣6次，其tR和峰面積的精密度，考察儀器的進樣精密度 1.5.2試驗方法

配制限度濃度的各雜質(zhì)和主成分的混合溶液，連續(xù)進樣6次 1.5.3試驗要求 a.tR的RSD小于2.0% b.各峰面積RSD小于2.0%

1.6線性與校正因子 1.6.1概念

在設(shè)計的范圍內(nèi)，被測物濃度與峰面積的線性關(guān)系 1.6.2試驗方法

配制各雜質(zhì)和主成分的混合溶液，逐步稀釋，濃度范圍從定量限至限度濃度的120%以上，至少配制5份以上溶液。由2人分別進行。1.6..3試驗要求

a.線性關(guān)系系數(shù)r大于0.990 b.Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的25％以內(nèi) c.響應(yīng)因子的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10% d.2人測得斜率之比在0.98~1.02之間

e.計算出來的校正因子應(yīng)進行修約，在0.9~1.1范圍內(nèi)的，修約為1.0進行計算；0.2~5.0范圍內(nèi)的，按校正因子計算；0.2~5.0范圍外的，按外標(biāo)法計算。

1.7精密度 1.7.1概念

同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定結(jié)果之間的接近程度。1.7.2重復(fù)性 1.7.2.1試驗方法

由同一試驗人員，取同一均勻供試品，平行配制6份供試品溶液，測定雜質(zhì)百分含量。1.7.2.2試驗要求

a.檢出雜質(zhì)個數(shù)，雜質(zhì)相對保留時間，各雜質(zhì)百分含量均應(yīng)一致 b.單個雜質(zhì)的百分含量的極差應(yīng)在其含量±10%以內(nèi) c.雜質(zhì)總量的RSD應(yīng)小于5.0% 1.7.3中間精密度 1.7.3.1試驗方法 同一實驗室，由不同試驗人員在不同時間使用不同設(shè)備，平行配制6份供試品溶液，測定雜質(zhì)百分含量。1.7.3.2試驗要求 a.同1.7.2.2-a和b b.單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量的RSD應(yīng)小于10.0%

1.8回收率 1.8.1概念

用擬定分析方法所測得結(jié)果與真實值接近的程度。1.8.2試驗方法

a.配制各雜質(zhì)的混合貯備液

b.稱取供試品適量，精密加入混合雜質(zhì)貯備液適量，配制成溶液，使供試品濃度為測定濃度，雜質(zhì)濃度分別為限度濃度的50%，100%，150%。各濃度均平行配制3份 c.配制混合雜質(zhì)對照品溶液和自身對照溶液 1.8.3試驗要求

a.各濃度下的回收率應(yīng)在90%~110%之間 b.回收率（N=9）的RSD應(yīng)小于10.0% c.用加校正因子的自身對照法計算結(jié)果應(yīng)與雜質(zhì)外標(biāo)法計算結(jié)果一致

1.9耐用性 1.9.1概念

在擬定的分析方法有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為所建立的分析方法用于常規(guī)檢測提供依據(jù)

1.9.2試驗方法

a.分析方法中可變動的因素有：流動相組成比例，水相pH，柱溫，色譜柱（同一品牌不同批次，不同品牌的常用色譜柱），流速，檢測波長

b.配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，供試品溶液，對照品溶液進行測定 1.9.3試驗要求

a.系統(tǒng)適應(yīng)性溶液應(yīng)符合規(guī)定；如不符合規(guī)定，則需更嚴(yán)格控制所變化的因素，直至找到一個合適的范圍；如指定色譜柱，嚴(yán)格控制pH等等

b.檢測雜質(zhì)個數(shù)，雜質(zhì)的相對保留時間應(yīng)與精密度結(jié)果一致 c.測得雜質(zhì)量應(yīng)與精密度結(jié)果一致

2．含量測定（適用于API，制劑，也適用于單個雜質(zhì)控制）含量測定方法驗證的前提條件：

1.空白（溶劑和輔料）和各雜質(zhì)不干擾主峰的測定

2.根據(jù)主成分的紫外吸收波長（復(fù)方需分別單獨測定各組分紫外吸收），選擇合適的檢測波長。多波長檢測（如有）則分別考察。

3.在檢測波長下，計算S/N，預(yù)估主成分濃度 4.供試品溶解方法和提取方法得到合理證明

2.1專屬性： 2.1.1概念

在其他成分（如其他雜質(zhì)，輔料，溶劑）可能存在的情況下，擬定的分析方法能正確測定主成分的能力。2.1.2試驗方法 2.1.2.1定位試驗： A.目的同1.1.2.1-A B.試驗方法同1.1.2.1-B C.試驗要求：

a．空白應(yīng)和各雜質(zhì)不得干擾主成分的測定，主峰保留時間處不得為梯度峰拐點（如有）b．定位溶液中，主峰的峰純度應(yīng)符合規(guī)定

c．分離度試驗溶液中，主峰與相鄰雜質(zhì)的分離度應(yīng)大于2.0 2.1.2.2強制降解試驗 A.目的

一是通過考察藥品在一系列劇烈條件下的穩(wěn)定性，了解該藥品內(nèi)在的穩(wěn)定特性及其降解途徑與降解產(chǎn)物。其二，這些試驗也能在一定程度上對含量測定分析方法用于檢查主成分的專屬性進行驗證。B.試驗方法 同1.1.2.2-B C.試驗要求

a.主峰純度符合規(guī)定，與相鄰雜質(zhì)分離度大于2.0 其他同1.1.2.2-C

2.2定量限 2.2.1概念

樣品中能被定量測定的最低量，有定量意義。2.3.2驗證方法 A.目的

考察主成分的能被定量的最低量，同時評判供試品濃度的選擇是否合理 B.試驗方法

配制檢測濃度的主成分溶液，進樣，逐步稀釋至S/N約為10時，得定量限。C.試驗要求

定量限濃度不得高（修正，原為低）于檢測濃度的1/10

2.3溶液穩(wěn)定性

試驗要求為主成分峰面積RSD小于2.0% 如溶出檢測方法同含量，建議考察一個溶出曲線周期內(nèi)的溶液穩(wěn)定性 其他同1.4項下 2.4儀器精密度

試驗要求為主成分峰面積RSD小于2.0% 其他同1.5項下

2.5線性與校正因子 2.5.1概念

在設(shè)計的范圍內(nèi)，被測物濃度與峰面積的線性關(guān)系 2.5.2試驗方法

配制主成分貯備液，逐步稀釋，濃度范圍從檢測濃度80%至120%，至少配制5份以上溶液。由2人分別進行。2.5.3試驗要求 同1.6.3

2.6精密度 2.6.1概念

同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定結(jié)果之間的接近程度。2.6.2重復(fù)性 2.6.2.1試驗方法

由同一試驗人員，取同一均勻供試品，平行配制6份供試品溶液，測定主成分百分含量。2.6.2.2試驗要求

6份供試品含量結(jié)果RSD應(yīng)小于2.0% 2.6.3中間精密度 2.6.3.1試驗方法

同一實驗室，由不同試驗人員在不同時間使用不同設(shè)備，平行配制6份供試品溶液，測定主成分百分含量。2.6.3.2試驗要求

a.6份供試品含量結(jié)果RSD應(yīng)小于2.0% b.12份供試品含量結(jié)果RSD應(yīng)小于2.0%

2.7回收率 2.7.1概念

用擬定分析方法所測得結(jié)果與真實值接近的程度。2.7.2試驗方法

a.API在精密度，線性和專屬性推算出來的情況下可豁免驗證

b.制劑：稱取空白輔料適量（相當(dāng)于100%檢測濃度的主藥），精密加入對照品（或已知含量的主藥）適量，配制成溶液，使供試品濃度分別為測定濃度80%，100%，120%。各濃度均平行配制3份 c.配制對照品溶液 2.7.3試驗要求

a.各濃度下的回收率應(yīng)在99%~101%之間 b.回收率（N=9）的RSD應(yīng)小于2.0%

2.8耐用性 2.8.1概念

2.8.2試驗方法：同1.9.1 2.8.3試驗要求：同1.9.2 測得結(jié)果應(yīng)與精密度結(jié)果一致 其他同1.9.3

第四篇：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證

一、目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求。

二、用途

（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時，分析方法需經(jīng)驗證。

（二）藥物生產(chǎn)方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，分析方法需經(jīng)驗證。

三、需驗證的分析項目

1.鑒別試驗；

2.雜質(zhì)定量或限度檢查；

3.原料或制劑中有效成分含量測定；

4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；

5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法

四、驗證內(nèi)容

準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性

（一）線性（Linearity）

在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

?方法：應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法進行測定（n≥5）。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。

?數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖

UV法：吸光度A一般在0.2～0.8，濃度點n＝5。用濃度c對A作線性回歸處理，得一直線方程，r應(yīng)達到0.9999(n＝5)，方程的截距應(yīng)近于零。

HPLC法: 用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點n應(yīng)為5～7，用濃度c對峰高h或被測物的響應(yīng)值(峰面積A)之比進行回歸處理，建立回歸方程，r應(yīng)大于0.999，截距應(yīng)趨于零。

（二）準(zhǔn)確度（accuracy）

準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值接近的程度，用百分回收率表示。

測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗法”和“加樣回收試驗法”?；厥赵囼灒嚎瞻?已知量的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M

回收率R?測定平均值?空白?100% 加入量

加樣回收試驗 ： 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為MR?M?P?100% A

數(shù)據(jù)要求：可向制劑中加入已知量的被測物對照品進行測定規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。

（三）精密度（precision）

精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示。

相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）

RSD?S?100%S?2??x??i

n?

11.重復(fù)性(repeatability):

在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進行評價。

2.中間精密度同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。

3.重現(xiàn)性(reproducibility)不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。

數(shù)據(jù)要求：需報告RD，RSD和可信限。

（四）檢測限（LOD）

檢測限系指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。是限度檢驗效能指標(biāo)，無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。

1．非儀器分析目視法

用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

2．信噪比法

用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。

（1）空白值＝0時；①測定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差S空。②將S空乘以三倍；③在工作曲線上求出3 S空相對應(yīng)的濃度X；即為方法的檢出值；

（2）空白值不等于0；①測定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)差S空；②在工作曲線上求出3 S空 相對應(yīng)的濃度X； ③ 將求得的對應(yīng)濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。

（五）定量限（LOQ）

指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求。

常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進行確定，也可按1984年國際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IVPAC)規(guī)定：用儀器所測空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計值，再經(jīng)試驗確定方法的實際測定下限。

儀器分析：通過測定一組空的樣品的背景信號后計算標(biāo)準(zhǔn)差S。以1OS來估算定量限度。（以定量限度制備的樣品來驗證）

非儀器分析：通過分析己知被測物濃度的樣品并確定一個樣品中被測物可被準(zhǔn)確和精密測定出的最低濃度（量）。

（六）耐用性

指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。是衡量在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。

分析方法重現(xiàn)性的測定是通過在不同的實驗室內(nèi)不同的實驗者對同一樣品的分別測試而獲得的。（獲得的這種再與正常檢定下的精密度進行比較，從而確定該法的耐用性）

（七）專屬性

（八）范圍

?典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間等。

?液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類色譜柱，柱溫，流速等。

?氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體、柱溫，進樣口和檢測器溫度等。

經(jīng)試驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效。

含量測定需進行的方法學(xué)驗證項目：準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性

五、各種含量測定方法對效能指標(biāo)的要求

1.容量分析法：用原料藥精制品(含量>99.5％)或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，相對?biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.2％；進行回收率試驗?；厥章室话阍?9.7～100.3％之間。

2.UV法：用適當(dāng)濃度的精制品進行測定，其RSD一般不大于應(yīng)在98％～102％之間。

3.HPLC法：要求

第五篇：分析方法的驗證(精)

分析方法的驗證

分析方法的驗證，就是對藥品分析實驗所采用的分析方法是否完全達到了預(yù)期目的，或證明由分析方法誤差而導(dǎo)致試驗結(jié)果判斷錯誤的概率是否在允許范圍之內(nèi)，而進行的科學(xué)證明。

分析方法的驗證以驗證參數(shù)表示。在制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，可通過這些參數(shù)證明所建立的分析方法是否適當(dāng)。本文所述分析方法驗證是指下述情況：藥局方新收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立；藥局方已收載品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂；根據(jù)藥局方的通則建立替代方法。

定量限界是指樣品中所含的被測物質(zhì)可被進行定量的最小量或最低濃度。定量限界所述樣品測定值的精度，以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，一般為10%。2.5.2 評價方法：通常定量限界可以通過空白樣品或被測物定量限界附近的樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差以及定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率算出。例如，根據(jù)定量限界附近的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率以及空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白樣品測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

slope：定量限界附近標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

應(yīng)用色譜法時，測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界應(yīng)比質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值要小。2.6 線性關(guān)系

2.6.1 定義：線性關(guān)系是指分析方法能夠得到與被測物質(zhì)的量或濃度具有直線關(guān)系的測定值的能力，必要時，被測物質(zhì)的量或濃度的測定值也可以是從數(shù)學(xué)公式中得到的變換值。

2.6.2 評價方法：準(zhǔn)備一系列不同濃度(量)的被測樣品，按照分析方法的操作步驟進行測定，用測定值得到的回歸方程及相關(guān)系數(shù)對線性關(guān)系進行評價。必要時，將測定值由回歸方程算出的殘差對被測物質(zhì)的量(濃度)作圖，不應(yīng)具有某種特定的趨勢。通常，采用5個不同量(濃度)的樣品作線性關(guān)系的研究。2.7 范圍(Range)

2.7.1 定義：分析方法驗證中所述范圍是指具有一定精度和準(zhǔn)確度的被測物質(zhì)上限及下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。對于上述具有線性關(guān)系的分析方法則指：具有一定精度和準(zhǔn)確度，并且使線性關(guān)系成立的被測物質(zhì)上下限量(濃度)之間的領(lǐng)域。

2.7.2 評價方法：分析方法驗證的范圍一般為標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定值的±20%左右，對范圍的上下限值及范圍中央值附近的樣品進行精度、真度及線性的研究討論。

驗證參數(shù)

類型Ⅰ

類型Ⅱ

類型Ⅲ

定量試驗 限度試驗 準(zhǔn)確度+ 精密度 并行精度+ 室內(nèi)再現(xiàn)精度-* 室間再現(xiàn)精度+* 專屬性 + + + + 檢出限界定量限界-直線性+ 范圍

+

+

注：-：一般不需要；+：需要；*：視情況而定。室內(nèi)或室間再現(xiàn)精度選擇其一進行評價，日本藥局方通常選擇后者進行評價。

類型Ⅰ需做鑒別試驗，即對藥品中的主要成分及其特征進行鑒別。類型Ⅱ需做檢查試驗，即對藥品中的雜質(zhì)或不純物的量進行測定。類型Ⅲ需做含量測定和溶出度試驗，即對藥品中的成分進行測定(成分包括穩(wěn)定劑、添加劑等)和藥品有效性試驗。分析方法驗證用語

4.1 適應(yīng)性/牢固性(Robustness)指故意將分析條件在小范圍內(nèi)變化時，測定值不受影響的能力。例如，反應(yīng)的pH值、溫度、室間及試藥的量等分析條件在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)改變時，對測定值的穩(wěn)定性進行研究討論。測定值對于分析條件不穩(wěn)定時，應(yīng)對方法加以改進。適應(yīng)性的研究結(jié)果在分析方法中以表示分析條件的有效數(shù)字或注意事項的形式得以體現(xiàn)。

4.2 實驗室 指試驗進行的場所、設(shè)施。分析方法驗證中所述改變實驗室是指試驗者、裝置以及試藥的批號等試驗條件發(fā)生變化。

4.3 試驗法 指藥局方中的試驗方法，例如鑒別試驗、檢查試驗等。試驗方法應(yīng)包括樣品的制備、規(guī)定值、分析方法等。

4.4 生產(chǎn)者危險率 指合格的制品由于試驗原因而錯判為不合格制品的發(fā)生概率。一般以α表示，也叫第一過失率，也就是在限度試驗中所說的假陽性率。4.5 消費者危險率 指不合格的制品由于試驗原因而錯判為合格制品的發(fā)生概率。一般以β表示，也叫第二過失率，也就是在限度試驗中所說的假陰性率。4.6 測定次數(shù) 指分析方法操作程序中規(guī)定的次數(shù)，為了提高分析方法的精度，有些試驗明確規(guī)定試驗次數(shù)在2次以上，分析方法驗證是對包括分析方法所規(guī)定的測定次數(shù)在內(nèi)的分析方法的評價。它與為了提高分析方法的精度進行重復(fù)分析時的重復(fù)次數(shù)不同。

4.7 測定值 一次分析所得到的一個數(shù)值。