第一篇：植物病理學實驗大綱

實驗部分

實驗

一、植物病原學（3學時）

實驗?zāi)康模赫J識植物傳染性病原物的主要類型及其形態(tài)特征、致病機制等，明確重要病原生物的主要分類鑒別特征及其致病特點，初步掌握不同類型病原生物的診斷和鑒定要點，學會識別診斷和防治不同類型病原物所引起病害的一般方法。

實驗內(nèi)容：植物病害的描述方法，包括的病害的病狀和病癥，病狀類型主要有變色、壞死、萎蔫、腐爛、畸形等，病癥主要有霉狀物、點狀物、粉狀物等類型；非侵染型病害主要包括缺素、環(huán)境因素、藥害等類型。

實驗

二、植物病原真菌形態(tài)與分類（3學時）

實驗?zāi)康模赫J識病原物致病性因素及其變異,明確寄主抗病性的類型及其復(fù)雜性,初步掌握寄主─病原物相互關(guān)系的理論學說，學會用運所學理論分析解決生產(chǎn)上品種抗性喪失問題及其相應(yīng)的對策。

實驗內(nèi)容：植物病害病原物的營養(yǎng)體形態(tài)特征、營養(yǎng)體的變態(tài)與組織，真菌繁殖方式：有性無性繁殖類型，以及繁殖體孢子類型；真菌分類概述；病原生物其他類型如：原核生物、病毒、線蟲、寄生性種子植物等形態(tài)特征。

實驗

三、植物病害循環(huán)與病程與防治（3學時）

實驗?zāi)康模赫J識病害循環(huán)和侵染過程，明確病害流行的時空動態(tài)、流行類型及影響因素，掌握病害預(yù)測預(yù)報的一般方法，為今后制訂有效的防治病害對策提供理論依據(jù)。

實驗內(nèi)容：了解植物病害侵染植物原物侵染植物病發(fā)病的過程，影響病程的因素，以及植物病害循環(huán)的特點，越冬越夏場所，了解植物病害的防治方法，保護作用、治療作用，并掌握病害防治的常用技術(shù)。

實驗

四、小麥病害和雜谷病害（3學時）

實驗?zāi)康模赫莆招←満碗s谷主要病害的癥狀和病原菌形態(tài)。

實驗內(nèi)容：小麥三種銹??；小麥白粉?。恍←湼。恍←滭S矮?。挥衩状蟀卟?；玉米小斑?。挥衩捉z黑穗；玉米病毒病等的癥狀標本和玻片標本。

實驗

五、薯類和棉花病害（3學時）

實驗?zāi)康模赫莆帐眍惡兔藁ㄖ饕『Φ陌Y狀和病原菌形態(tài)。

實驗內(nèi)容：馬鈴薯晚病??；馬鈴薯病毒?。获R鈴薯環(huán)腐??；棉花苗期病害；棉花枯萎病；棉花黃萎病的癥狀標本和玻片標本。

主要實驗用書及參考書：

《普通植物病理學實驗指導(dǎo)》，許志剛主編，中國農(nóng)業(yè)出版社1997； 《農(nóng)業(yè)植物病理學實驗實習指導(dǎo)》，李宏連主編，北京農(nóng)業(yè)出版社2001 《植病研究方法》，方中達主編，中國農(nóng)業(yè)出版社1996

第二篇：植物病理學 實驗講稿

園藝植物病理學實驗講稿

生命科學與農(nóng)林學院

2014年8月

目錄

實驗一

植物病害癥狀的觀察 實驗二

植物病理徒手切片制作 實驗三

真菌的形態(tài)觀察

實驗四

鞭毛菌亞門真菌形態(tài)觀察 實驗五

接合菌亞門真菌形態(tài)觀察 實驗六

子囊菌亞門真菌形態(tài)觀察 實驗七

擔子菌亞門真菌形態(tài)觀察 實驗八

半知菌亞門真菌形態(tài)觀察 實驗九

培養(yǎng)基的制作 實驗十

病原菌的分離培養(yǎng) 實驗十一

植物的抗病性鑒定

實驗一

植物病害癥狀的觀察

一、實驗?zāi)康?/p>

1.認識各類病害對植物造成的危害，了解植物病害的種類及其多樣性，2.初步掌握主要病害的癥狀表現(xiàn)及其特點，學會植物病害癥狀的描述，為今后病害的診斷奠定基礎(chǔ)。

二、實驗原理

植物病害的癥狀是植物患病后由于異常生理活動而發(fā)生在細胞和組織上的病理變化，最后表現(xiàn)為肉眼可見的形態(tài)變化。有些癥狀也可用嗅覺、味覺或觸摸進行觀察。有的癥狀是單個細胞表現(xiàn)的癥狀，在這類癥狀中，最常見的是受某種病毒侵染的植株中所見到的細胞質(zhì)內(nèi)含體。

植物病害的癥狀可區(qū)別為兩類不同性質(zhì)的特征：病狀和病征。病狀是一定的寄主植物和病原在一定外界條件的影響下相互作用結(jié)果的外部表現(xiàn)，是以各自的生理機能或特性為基礎(chǔ)的，而每種生物的生理機能，都是在質(zhì)上有特異性，并且是相對穩(wěn)定的。病變，作為這種相互作用過程的結(jié)果，一般說其發(fā)展是定向的。病狀作為病變過程的表現(xiàn)，其特征也是較穩(wěn)定的和具有特異性的。這就是利用病狀診斷植物病害的基礎(chǔ)。

病征是由病原微生物的群體或器官著生在病體表面所構(gòu)成的，它更直接地暴露了病原物在質(zhì)上的特點。如真菌子實體在寄主表面形成的霉層、黑點等。由植物病毒、植原體、許多病原細菌、非侵染性植物病害等沒有病征的表現(xiàn)。病征的出現(xiàn)與否和出現(xiàn)的明顯程度，雖受環(huán)境條件的影響很大，但一經(jīng)表現(xiàn)出來卻是相當穩(wěn)定的特征，所以根據(jù)病征能夠正確的判定病害。不同植物的任何病害都具有其獨特癥狀，通常在病害發(fā)生過程中按一定順序出現(xiàn)。病理學家正是根據(jù)這種順序出現(xiàn)的癥狀在田間診斷植物病害。

病狀和病征，尤其是前者，作為診斷病害的依據(jù)也有其局限性。首先是許多植物病害常產(chǎn)生相似的病狀，因此要從各方面的特點去綜合判斷；其次，植物常因作物品種的變化或受害器官的不同，而使病狀有一定幅度的變化；第三，病害的發(fā)生發(fā)展是一個過程，有初期和后期，病狀也隨之而發(fā)展變化；第四，環(huán)境條件對病狀和病征有一定的影響，尤其是濕度對病征的產(chǎn)生有顯著地作用，加之發(fā)病后期病部往往會長出一些腐生菌的繁殖器官。因此，癥狀的穩(wěn)定性和特異性只是相對的，要認識癥狀的特異性和變化的規(guī)律，在觀察植物病害時，須認真地從癥狀的發(fā)展變化

中去研究和掌握癥狀的特殊性；觀察和采集植物病害標本，仔細地區(qū)別病征的那種微小的、似同而異的特征，這樣才能正確地診斷病害。

三、實驗材料、試劑與器材

1.按照植物病害的病狀類型（變色、壞死、斑點、腐爛、畸形）和病征類型（粉狀物、霉狀物、點狀物、菌核、溢膿等）準備植物病害的盒裝標本、瓶裝浸漬標本及新鮮標本（不同類型的病狀和病征的標本可根據(jù)當?shù)氐那闆r準備）。

2.各類癥狀的掛圖、模型、多媒體課件等。3.實體顯微鏡、手持擴大鏡、水果刀、載玻片等。

四、實驗步驟

（一）病狀的觀察

1．斑點 觀察玉米大斑病、棉花角斑病、棉花黑斑病、大麥條紋病、小麥根腐葉斑病、大蔥或大蒜紫斑病、花生網(wǎng)斑病、番茄早疫病、十字花科霜霉病等標本，注意不同類型病害所表現(xiàn)病斑的形狀、大小、顏色等的異同以及病斑上有無輪紋、花紋伴生，同時注意觀察各類病斑上有無病征以及病征的特點。斑點類發(fā)生在葉、莖、果等部位，受病組織局部壞死，一般有明顯的邊緣。斑點中還可以伴生輪紋、花紋等特點，根據(jù)病斑的顏色、形狀等特點而分為褐斑、黑斑、紫斑、角斑、條斑、大斑、小斑、胡麻斑、輪紋斑、網(wǎng)斑等多種類型。

2．腐爛 觀察甘薯黑斑病和干腐病病薯、馬鈴薯晚疫病和環(huán)腐病病薯、棉苗立枯病、柑桔潰瘍病等病害標本，認識該類病害對植物所造成的危害，同時掌握這類病害的病狀特點。腐爛類病狀發(fā)生在植物的各個部位，由于組織分解的程度不同，有軟腐、干腐之分。根據(jù)腐爛的部位，有根腐、基腐、莖腐、果腐、花腐等名稱，還伴隨有各種顏色變化的特點，如褐腐、白腐、黑腐等。

3．萎蔫 觀察棉花、黃瓜等植物枯萎病、棉花和茄子黃萎病、玉米和茄科植物青枯病、馬鈴薯環(huán)腐病等標本，注意區(qū)別枯萎、黃萎、青枯等病狀類型，必要時可以剖開病株莖桿觀察微管束是否褐變。典型的萎蔫病狀是植物根、莖的維官束組織受到破壞而發(fā)生的葉片或枝條萎垂現(xiàn)象，皮層組織完好，萎蔫病害常無外表的病征。植物受萎蔫菌侵染后，不一定都能引起萎蔫，發(fā)病初期有半邊葉片、半個枝條萎垂的現(xiàn)象，但更常見的是全株性萎蔫。

提示 對于萎蔫類病害病狀的觀察應(yīng)以新鮮標本為主，有條件時最好在田間進行，這類病害發(fā)生具有一定的地域性，觀察時要注意其微管束組織的病變，干標本則失去了原有的特點。

4．變色 變色主要有兩種類型。一種表現(xiàn)為黃化，是整個植株或葉片部分地或全部地均勻褪綠、變黃，或呈現(xiàn)其它的顏色。多數(shù)伴生有整株或部分的畸形。另一種為花葉，病株葉片色澤濃淡不均，深綠與淺綠部分相間夾雜，一般遍及全株，上部葉片較為顯著，無病征表現(xiàn)。比較觀察煙草花葉病、蘋果花葉病、小麥黃矮病、瓜類、十字花科和茄科植物的病毒病病狀、注意每一種病害的病狀特點。

5．畸形 畸形類病狀由不同組織、器官的病變，如葉片的膨腫、皺縮、小葉、蕨葉；果實的縮果及其它畸形；整個植株的徒長、矮縮；局部器官如花器和種子的退化變形和促進性的變態(tài)等。瘤、癭、癌、叢枝和發(fā)根也是常見的畸形病狀。觀察桃縮葉病、十字花科根腫病、馬鈴薯癌腫病、果樹根癌病、桑樹根結(jié)線蟲病、油菜白銹病、番茄蕨葉病、棗瘋病、泡桐叢枝病、玉米黑粉病、小麥粒線蟲病、水稻惡苗病等，歸納各類標本的病狀類型。

（二）病征的觀察

1．粉狀物 借助手持擴大鏡或?qū)嶓w解剖鏡觀察麥類銹病、十字花科白銹病、麥類白粉病、、玉米黑粉病和麥類黑粉病等病害標本，注意粉狀物的顏色、質(zhì)地和著生狀況等。

2．霉狀物 借助手持擴大鏡或?qū)嶓w解剖鏡觀察黃瓜霜霉病、甘薯軟腐病、瓜類軟腐病、柑桔青霉病、番茄灰霉病和番茄葉霉病等病害標本或瓶裝標本。注意區(qū)別霜霉、黑霉、綿霉、青霉和灰霉等不同類型的霉狀物。

3．點狀物 取小麥白粉病、瓜類炭疽病、棉花莖枯病、芹菜斑枯病、蘋果樹腐爛病和麥類赤霉病等病害標本，借助手持擴大鏡或?qū)嶓w解剖鏡觀察，注意點狀物是埋生、半埋生還是表生，以及在寄主表面的排列狀況、顏色等。

4．菌核 觀察油菜菌核病和水稻紋枯病等病害標本，注意菌核的大小、形狀、顏色、質(zhì)地等，并觀察菌核萌發(fā)狀況。

5．溢膿 溢濃為細菌性病害特有的病征。觀察水稻白葉枯病、水稻細菌性條斑病、十字花科細菌性軟腐病、棉花角斑病和黃瓜角斑病等病害標本，注意溢膿的顏色、出現(xiàn)位置等。用剪刀將植物病組織剪成 4mm 2的小塊，放于載玻片上，加一滴水，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察或直接用載玻片對光觀察噴菌現(xiàn)象。

五、實驗報告及作業(yè)

將上述病害標本的發(fā)病部位，病狀類型和病癥類型，填于下表：

植物病害癥狀觀察表

病害名稱

發(fā)病部位

病狀類型

病癥類型

1.植物病害的主要特征是什么? 2.癥狀在病害診斷上有什么作用? 3.植物病害對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的危害性如何?

實驗二

植物病理徒手切片制作

一、實驗?zāi)康?/p>

觀察植物病害病原物的形態(tài)，進行病原物的分類鑒定，研究受病組織的組織結(jié)構(gòu)病變，受病植物組織與病原物的解剖學關(guān)系，以及對于難得一見病原物的保存?zhèn)溆玫?，都需將材料制成適當?shù)娘@微玻片標本。因此，徒手制片技術(shù)也是植物病理學研究的重要手段之一。通過本次實驗系統(tǒng)學習實踐常用的徒手制片技術(shù)，為以后開展植物病理學的有關(guān)研究工作奠定堅實的制片技術(shù)基礎(chǔ)。

二、實驗材料、試劑和器材 1．受病植物組織

2.解剖針、刀片、剃刀、移置環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、毛筆、淺玻皿、浮載劑、70%酒精、乳酚油、展片臺、光學顯微鏡

三、實驗內(nèi)容及方法

徒手制片的方法有整體封藏法、徒手切片法、組織透明制片法和涂抹制片法等多種。限于時間本實驗實踐最為常用的整體封藏法和徒手切片法兩種。(一)

整體封藏法

對于生長在植物病部表面或培基上的菌絲體、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及線蟲等，可直接擇取少許封藏在適當?shù)母≥d劑中，在顯微鏡下觀察，根據(jù)材料的特點和觀察的目的可采用不同的方法封藏制片。常用的方法的概括為挑、刮、撥、撕四種。

1挑：對于在植物受病部位或基質(zhì)表面生長繁茂的霉狀病原體(如霜霉菌)粉狀病原體(如銹菌、白粉菌)以及培養(yǎng)基上的許多培養(yǎng)菌，可用尖細的解剖針等直接挑取封埋制片，挑取病原體的量，在保證選材典型的前提下，越少越好，以免互相重疊，分辯不清。

取黃瓜霜霉病葉，小麥白粉病葉分別挑取霉狀物和粉狀物鏡檢病原菌的形態(tài)特點。

2刮：對病部病原體稀少，或用放大鏡也難辯認霉層的病害標本，可采用兩側(cè)具刀的三角刮針(或可用刀片代替)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮針的一刃，蘸浮載劑少許，在病部順同一個方向刮取2—3次，將刮得的病原蘸在載玻片的浮載劑

中封片鏡檢。浮載劑在保證浮載質(zhì)量的前提下要盡量少，否則少量的病原體在大滴的浮載劑中極易分散漂流，在顯微鏡下難以尋找。取玉米小斑病葉，在病斑背面刮制片，鏡檢分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)。

3撥：對于產(chǎn)生在植物表皮下或半埋生于基物內(nèi)的病原體孢子器官。如子囊殼、分生孢子器、閉囊殼等，可將病原體連同寄主組織一同撥下，放入浮載劑中，用兩支解剖針，一支穩(wěn)定材料，另一支撥出植物組織，使病原體外露制片。取小麥全蝕病或白粉病標本，撥小黑點制片，鏡檢子囊果的形態(tài)。

4撕：對于寄生在植物表皮細胞上的病原真菌，也可以將此有病原物的表皮撕下來制片鏡檢，這種方法不僅能看到病原物形態(tài)，而且可以觀察病原物與寄主的解剖學關(guān)系。

在毛毛雨天自田間取回感染白粉病的麥苗(或在保溫箱中取接種染病的麥苗)。用刀片割破葉背表皮再用小鑷子輕輕撕下，放在浮載劑中制片鏡檢白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形態(tài)。(二)徒手切片法

欲觀察受病組織病變，病菌侵入和寄主體內(nèi)擴展過程，以及埋生在基物內(nèi)真菌子實體的形態(tài)結(jié)構(gòu)等，都需將有關(guān)材料切成薄片，進行鏡檢，徒手切片是最常用的簡便易行的方法，不需要特殊的設(shè)備，而且節(jié)省時間，切成的片子不僅可作臨時觀察，也可進一步制成永久性玻片標本。

徒手切片的基本用具是剃刀或刀片。切片時先選取材料并作適當?shù)男拚?，以左手的食指和姆指捏住材料，中指頂住材料下端，使材料上端突出于手指以?—3毫米。右手握穩(wěn)刀，從左向右后方斜向切割。注意刀口必須以材料面垂直。否則所得切面不正。同時雙手不應(yīng)緊靠身體，而是要活動自如。用臂力均勻地沿刀口后部起拉向前方，連續(xù)切割4—5片后，用毛筆蘸水輕輕沿刀口取下，放入盛有水的淺玻皿中，在此過程中左手握著的材料不要放下，否則再切時難按原位置拿材料，此外，在切片過程中，必須常用毛筆蘸水濕潤材料，以免材料干涸不便切割。

對于過于柔軟或較薄的材料，可以夾在“夾持物”中，進行切片更為方便。新鮮胡鮮卜和馬鈴薯塊都可作“夾持物”用。實驗室中通常將通草、接骨木或向日葵的莖髓，剪成適當大小，浸于70%酒精中備用。

切割一定數(shù)量的薄片后，用移置環(huán)在淺玻皿中選取合用的材料薄片，放在載玻片的水滴中，鏡檢合格者即酒精燈上將水烘干并擺正材料，然后加一滴乳酚油或其浮載劑；放在展片臺上略加熱，鏡檢如無氣泡，即可小心加蓋片，用吸水紙吸除多余的浮載劑，最后貼好標簽，平放于切片板上，待干燥適宜時封固。

徒手切片的缺點是對于微小或過大，柔軟、多汁、肉質(zhì)及堅硬的材料不易切取，也難制成連續(xù)切片，此外切片的厚薄也難一致。切片機切片即可克服這些缺點。

病名： 學名： 制片人： 時間：

切片的標簽制法

四、實驗報告及作業(yè)

1．每人交兩片符合質(zhì)量要求的玻片標本。

2.整體封藏法和徒手切片法兩種基本徒手制片技術(shù)都在什么情況下使用? 徒手切法制片有什么優(yōu)缺點? 怎樣解決這種方法本身存在的問題? 附：常用浮載劑及封固劑

1.水作浮載劑：最常用，但易于干燥，僅適于暫時性檢查，不易封固保存，且易形成氣泡(檢查材料以酒精、5%明膠、水或稀肥皂水稍浸，洗凈后再以水浮載可除去氣泡)。

2.乳酚油：也較常用，成分及配比如下：

苯酚結(jié)晶(加熱熔化)20ml

乳酸20ml

甘油40ml

蒸餾水20ml

乳酚油不易干燥，標本可存放幾天以上，為使標本易于辯別，常在其中加染料苯胺藍(棉藍)，用量是0.05—0.1%(也有的加0.2—0.5%的錐蟲藍等)，因其是酸性染料，可染真菌原生質(zhì)而不染細胞壁，故對分隔難辨的真菌孢子等可由此染色而看清。此法一般只用觀察菌態(tài)，不適于測量孢子的大小(因為乳酚油的折射率近于孢子和菌絲體，1.43左右)。另一方面，此法制片，封固比較困難(因為乳酚油易于和封固劑起化學作用而分解)，可用達馬樹脂(和乳酚油不起化學作用)和等量蜂蠟混配做封固劑，蜂蠟放于玻璃皿中在水槽上熔化(溫度勿過高)，達馬樹脂在鐵罐中熔化(溫勿過度)，然后將蜂蠟倒入熔化的達馬樹脂中攪和而成(加少量的貼金膠水，可增進與玻璃的附著力)，封固時以“L”形銅棒等在煤氣燈上燒熱后，蘸少許封固劑在蓋玻片周圍封固，此封固劑干燥快，經(jīng)久不壞。但由于其致癌作用而逐漸被淘汰而改用甘油乳酸液。

3.甘油乳酸液：也可加苯胺藍等染料，其成分如下：

乳酸

500ml

甘油

1000ml

蒸餾水

500ml

4.水合氯醛碘液：成分配比如下：

水合氯醛

100g

碘化鉀

5g

碘

1.5g

水

100ml

碘與碘化鉀研和，加水溶解。然后與水合氯醛混合，此浮載劑較好，能使真菌組織透明，并染上顏色，能彌補乳酚油的不足，一一看清細胞壁和其它結(jié)構(gòu)，此法制片只可保存幾天，不宜久存，為保存，可除去碘液再用乳酚油浮載后封存。5.甘油：此浮載劑適于保存藻類、水霉菌等柔軟標本將標本放在一滴10%的甘油中，加蓋玻片，水分蒸發(fā)后，隨時補加甘油至水分蒸發(fā)凈，制成的標本玻片平放可經(jīng)久不壞，(擦去多余甘油，用香脂油或其它封固劑封固，可永久保存)。6.甘油明膠：成分及配方如下：

明膠

5g

甘油

35ml

水

30ml

明膠在水中浸透，加熱至35℃溶化，加甘油攪和，用紗布過濾后使用。

徒手切片及其它標本，都可用此劑浮載制片，標本染色(或不染)后，先用甘油脫水(干燥標本可不脫水)，挑取小團甘油明膠放在載片上，微加熱，待其熔化而氣泡消失后，將標本取出吸除去多余甘油后移入熔化的甘油明膠中，加蓋玻片輕輕下壓，擦去蓋玻片周圍的多余甘油明膠。平放十幾天，干后長期保存，用香脂或其它固劑封固后長久保存。

此浮載劑對于干燥標本易出氣泡，用醋酸甘油先予處理可防此弊，成分配比如下：

醋酸鉀(2%水溶液)300ml

甘油

120ml

酒精

180ml

標本放在載玻片上加小滴醋酸甘油，微加熱以除氣泡，并蒸去大部分油劑，趁熱加入小團甘油明膠，熔化后加蓋玻片，其后步驟同上。

實驗三

真菌的形態(tài)觀察

真菌分布廣泛，種類繁多，已報導(dǎo)的將近

45000多種，是植物病原生物中最主要的一大類群，它所引起的病害占植物病害的80%以上，盡管真菌形態(tài)差異很大，但基本結(jié)構(gòu)相似，大多數(shù)真菌有營養(yǎng)體和繁殖體之分，營養(yǎng)體是指吸收養(yǎng)分的器官，繁殖體是指從營養(yǎng)體上產(chǎn)生的各種類型的孢子。

真菌產(chǎn)生孢子的機構(gòu)，無論是有形性的還是無性的，統(tǒng)稱為子實體。真菌的孢子分為無性孢子和有性孢子兩類。無性孢子有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子；有性孢子有休眠孢子囊、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子。真菌孢子的形態(tài)特征是鑒定和分類學上的重要依據(jù)，其營養(yǎng)體及其變態(tài)和菌組織體則是真菌分類的重要參考依據(jù)，有的還是重要的鑒別特征和分類依據(jù)。

一、實驗?zāi)康?/p>

通過本次實驗熟悉真菌的營養(yǎng)體和繁殖體的基本形態(tài)，為以后真菌病害的病原物鑒定和真菌分類奠定初步基礎(chǔ)。

二、實驗內(nèi)容、材料和方法(一)真菌的營養(yǎng)體 1菌絲和菌絲體

除少數(shù)原始的類群以外，真菌典型的營養(yǎng)體是極為細小的絲狀體，這種絲狀體稱為菌絲，生長成叢的菌絲稱為菌絲體，低等真菌的菌絲是無隔的，大多數(shù)真菌是有隔的。

(1)挑取馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)或瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)制片，鏡檢無隔菌絲。

(2)挑取立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)制片鏡檢有隔菌絲。

(3)觀察各種病原真菌在平面和斜面培養(yǎng)基上形成的菌落，注意菌落大小、形狀、厚薄、質(zhì)地、顏色等形態(tài)特點。2菌絲組織體

有些真菌的菌絲體，在一定的條件下或一定的發(fā)育階段，可形成特殊的組織體，常見有菌核、子座和根狀菌索。

(1)菌核：菌核是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的一種休眠體，既是真菌貯藏養(yǎng)分的器官，又是真菌用以度過不良環(huán)境的休眠機構(gòu)，菌核大小不一，色澤和形狀也各不相同。菌核中的菌絲組織已有分化現(xiàn)象，外皮組織細胞排列緊密，色深壁厚，具有保護作用，為擬薄壁組織；內(nèi)層細胞壁薄色淡，排列疏松，仍可維持營養(yǎng)作用，為疏絲組織。

肉眼觀察麥角病、油菜菌核病、黃瓜菌核病和大蔥菌核病標本，比較菌核形狀、大小、顏色；鏡檢細辛菌核病的菌核制片，注意比較表皮與內(nèi)部組織細胞的排列特點。

(2)子座：子座是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的容納子實體的座墊狀結(jié)構(gòu)，或由菌絲體與部分寄主組織結(jié)合而成的稱為假子座。子座是真菌從營養(yǎng)體到繁殖體的過渡機構(gòu)，除可在其上或其內(nèi)形成子實體外，也有度過不良環(huán)境的作用。

肉眼觀察稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的分生孢子座；鏡檢蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)和稻

香

柱菌(Epichloe typhina)所形成的子座制片，注意子座形狀，著生部位及內(nèi)部繁殖體類別。

(3)根狀菌索：少數(shù)高等真菌的菌絲體還可糾結(jié)成繩索狀的組織體，形如高等植物的根，故稱根狀菌索，其作用是幫助菌體蔓延和抵抗不良環(huán)境，根狀菌縈組織也有表皮和內(nèi)部組織的分化。

肉眼觀察林木上根狀菌索的外部形狀，注意和菌核比較，找出二者區(qū)別。

3菌絲體上分化出的吸收養(yǎng)分組織

(1)吸器：是寄生在細胞間的真菌，特別是一些專性寄生菌在菌絲體上形成的吸收養(yǎng)分的器官，形狀有球狀、絲狀、掌狀、裂片狀等。

鏡檢小麥白粉病菌(Blumeria graminis)吸器制備片，注意吸器的形狀及其形成的部位。

(2)假根：為伸入基物內(nèi)的菌絲體，形如高等植物的根系，故稱假根。假根除用其吸收養(yǎng)分外，還有固著菌體的作用。

挑取培養(yǎng)基中培養(yǎng)的甘薯軟腐病菌(Rhizopus nigricans)的菌絲(注意針尖要插入培養(yǎng)基內(nèi))制片鏡檢或鏡檢根足霉(Rhizopus sp.)制備片，注意假根與普通營養(yǎng)菌絲的區(qū)別。

(3)附著胞：從幻燈片或照片觀察病菌侵染寄主植物形成附著胞的形態(tài)。

(4)菌環(huán)和菌網(wǎng)：捕食性真菌常由菌絲分化成菌環(huán)和菌網(wǎng)組織來捕捉線蟲等小動物，然后再由菌絲侵入線蟲體內(nèi)吸取營養(yǎng)。(二)真菌的繁殖體——孢子

真菌的繁殖方式分無性和有性兩種，分別產(chǎn)生無性孢子和有性孢子兩大類型。真菌的無性繁殖包括斷裂、出芽和產(chǎn)生孢子等，真菌的有性生殖包括質(zhì)配、核配和減數(shù)分裂三個階段。

1無性孢子：不經(jīng)過性細胞或性器官的結(jié)合便能產(chǎn)生孢子，稱為無性孢子。真菌產(chǎn)生的無性孢子類型很多，主要的有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子。

(1)游動孢子：游動孢子為鞭毛菌亞門真菌特有的無性孢子，產(chǎn)生在由菌絲頂端細胞或由菌絲分化成的孢子囊梗的頂端細胞膨大形成的孢子囊內(nèi)、具鞭毛，能游動。

制片鏡檢用線麻粒誘發(fā)的綿霉和水霉的游動孢子囊和游動孢子，鏡檢番茄晚疫病菌(Phytophthora infestans)的游動孢囊梗、游動孢子囊和游動孢子。(2)孢囊孢子：孢囊孢子為接合菌亞門真菌特有的無性孢子，生成方式和游動孢子相似，也是內(nèi)生的，但無鞭毛，不能游動。

挑取黑根霉(Rhizopus sp.)制片(或取制備片)鏡檢孢子囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意觀察孢子囊的形態(tài)及其著生位置及孢囊孢子的形態(tài)，顏色和產(chǎn)生的數(shù)目。(3)分生孢子：子囊菌亞門真菌和大部分半知菌亞門真菌都產(chǎn)生分生孢子，分生孢子外生在分生孢子梗上，形狀、大小、顏色不一，單生，鏈生或集生，分生孢子梗

有的散生，有的束生，有的產(chǎn)生在分生孢子盤上或分生孢子器內(nèi)，產(chǎn)生在分生孢子器內(nèi)的分生孢子也叫器孢子。

取玉米大斑病(Exserohilum turcicum)的病葉，用刀片輕輕刮取病斑上的霉狀物制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子或挑取斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)的小麥根腐病菌(Bipolaris sativum)制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子，另取蘋果灰斑病(Phyllosticta pirina)制片鏡檢分生孢子器和器孢子，注意分生孢子的形狀，色澤，細胞數(shù)目及著生情況。(4)厚垣孢子：鏡檢厚垣孢子制備片，菌絲中或孢子中個別細胞膨大、細胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。

2有性孢子：由兩個不同的性細胞或性器官相結(jié)合而產(chǎn)生的孢子叫有性孢子，有性孢子主要有以下4種。

(1)卵孢子：部分鞭毛菌亞門真菌的有性孢子，由菌絲上產(chǎn)生的兩種異形配子囊交配產(chǎn)生。制片鏡檢谷子白發(fā)病菌(Sclerospora graminicola)的卵孢子或鏡檢大豆霜霉病菌(Peronospora manshurica)卵孢子制備片，注意卵孢子形狀、大小、顏色，孢壁形態(tài)。

(2)接合孢子：為接合菌亞門真菌的有性孢子，由兩個同形配子囊交配而成。鏡檢毛霉(Mucor)接合孢子制片，注意接合孢子的大小，形狀，顏色及表現(xiàn)特點。(3)子囊孢子：為子囊菌亞門真菌產(chǎn)生的有性孢子，由兩個異形配子囊交配生成，子囊孢子產(chǎn)生在子囊內(nèi)，多為8個，子囊除極少數(shù)子囊菌裸生外，多數(shù)子囊菌生于子囊果中。取山楂白粉病(Podosphaera oxyacanthae)病葉，用解剖針將白粉上的小黑點(閉囊殼)仔細撥至載玻片上的水滴中，加蓋片并輕輕壓破閉囊殼，鏡檢閉囊殼，子囊、子囊孢子和附屬絲的形態(tài)，特別注意子囊的數(shù)目和附屬絲的特點，另取油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotium 132)制備片，鏡檢子囊盤、子囊和子囊孢子。

(4)擔孢子：為擔子菌亞門真菌的有性孢子，由菌絲結(jié)合后減數(shù)分裂而成，外生于擔子或先菌絲上。挑取萌發(fā)的玉米絲黑穗病菌(Sphacelotheca reiliana)制片鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態(tài)，另取小麥腥黑穗病菌(Tilletia caries)冬孢子萌發(fā)的制備

片，鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態(tài)，比較兩種黑粉病菌的區(qū)別。

另外還有一種有性孢子為休眠孢子囊，由兩個游動配子結(jié)合而成，為二倍體，萌發(fā)時減數(shù)分裂釋放出單倍體的游動孢子。如壺菌、根腫菌可產(chǎn)生休眠孢子囊，根腫菌產(chǎn)生的休眠孢子囊萌發(fā)時通常只釋放出一個游動孢子，有時也稱為休眠孢子。

三、實驗報告及作業(yè)

1繪有隔菌絲，無隔菌絲和菌核剖面圖。

2繪分生孢子、孢囊孢子、卵孢子及子囊孢子的形態(tài)圖。 3菌絲有無隔膜是否反應(yīng)一定的進化關(guān)系? 4菌核和子座在形態(tài)和功能上有何不同?

5真菌吸器的有無與寄生性的強弱是否有一定關(guān)系?

6分生孢子和孢囊孢子的生成過程，形成數(shù)量(與產(chǎn)孢細胞比較)及著生部位等方面

有何不同?

7卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子在有性生殖過程中形成的時期有何不同?

實驗四

鞭毛菌亞門真菌形態(tài)觀察

鞭毛菌是一類低等真菌，其中不少是水生的。它們的共同特征是無性繁殖時產(chǎn)生有鞭毛的游動孢子。根據(jù)菌體的形態(tài)和游動孢子鞭毛的特征分為根腫菌綱、壺菌綱、絲壺菌綱和卵菌綱。其中與植物病害關(guān)系較為密切的有根腫菌綱、壺菌綱、卵菌綱。

一、實驗?zāi)康?/p>

了解鞭毛菌亞門中根腫菌綱、壺菌綱和卵菌綱真菌的主要形態(tài)特征，掌握與植物病害有關(guān)的重要屬的形態(tài)特征、分類依據(jù)及所致病害的癥狀特點，同時學習使用檢索表來鑒定病菌，為分類鑒定打下初步基礎(chǔ)。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設(shè)備；載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、酒精燈、無菌水等。

三、實驗材料

1．蕓苔根腫菌（Plasmodiophora brassicae）2.馬鈴薯粉痂菌（Spongospora subterranea）3．禾谷多粘霉（Polymyxa graminis）

4.玉蜀黍節(jié)壺菌（Physoderma maydis）

5．串囊水霉（Saprolegnia.monilifera）

6.稻綿霉（Achlya oryzae）

7.瓜果腐霉（Ｐythium aphanidermatum）

8.致病疫霉（Phytophthora infestans）

9.禾生指梗霉(Sclerospora graminicola)

10.葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola）

11.寄生霜霉（Peronopora parasitica）

12.瓜類霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）

13.萵苣盤梗霉（Bremia lactucae）

14.十字花科白銹病菌（Albugo candida）

以上病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片，多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）以及水霉和腐霉游動孢子形成與釋放的錄相帶等。

四、實驗內(nèi)容和方法

（一）根腫菌綱（Plasmodiophoromycetes）

1.蕓苔根腫菌 取甘藍根腫菌切片，鏡檢切片中的病原菌。有的寄主細胞內(nèi)可見到許多堆集在一起的魚籽狀顆粒，是病菌的休眠孢子。休眠孢子近球形。

2.馬鈴薯粉痂菌 鏡檢馬鈴薯粉痂病菌切片，在寄主根的皮層組織的受害細胞中可看

到病原菌的休眠孢子，球形至多角形，多個休眠孢子聚集呈海綿狀或空心球。

3.禾谷多粘霉 選取有褐點的根，用解剖刀或鑷子撕取小麥根基皮層，制成臨時玻片，鏡檢。病菌的休眠孢子常有規(guī)律地呈條狀排列。

提示 被寄生的表皮細胞呈褐色小點，必須仔細觀察才能見到。

（二）壺菌綱（Chytridiomycetes）

玉蜀黍節(jié)壺菌（Physoderma maydis）觀察由玉蜀黍節(jié)壺菌引起的玉米褐斑病標本。用針挑取受害病組織內(nèi)呈黃色粉末狀物制成臨時玻片，或?qū)Σ〗M織作徒手切片，鏡檢可見到許多金黃色扁球狀的休眠孢子，休眠孢子橢圓形，一面扁平有蓋。

（三）卵菌綱(Oomycetes)水霉目(Saprolegniales)

1.串囊水霉 引起水稻爛秧，又稱水稻爛秧水霉菌。孢子囊圓筒形或棍棒狀，層出式，即新的孢子囊從老的空孢子囊內(nèi)基部長出，游動孢子具明顯的兩游現(xiàn)象。

2.水稻爛秧綿霉菌 孢子囊圓筒形或棍棒狀，合軸分枝，新的孢子囊從老孢子囊的基部外側(cè)長出，呈聚傘形排列，游動孢子第一個活動時期很短，休止孢在孢子囊頂部孔口處聚集成團。

霜霉目（Peronosorales）

1.腐霉屬（Pythium）觀察瓜果的腐爛病病果上的白色菌絲體，將生長旺盛的小塊菌絲體移至清水中培養(yǎng)24～48h，菌絲頂端即形成大量游動孢子囊，用針挑取在清水中培養(yǎng)過的菌絲，觀察腐霉菌的游動孢子囊，絲狀、姜瓣狀或球狀等，頂生或間生，無特殊分化的孢囊梗。孢子囊不脫落，萌發(fā)時在其頂端產(chǎn)生一管狀物，原生質(zhì)經(jīng)管狀物排出而形成泡囊。游動孢子產(chǎn)生在泡囊內(nèi)。

2.疫霉屬（Phytophthora）取馬鈴薯或番茄晚疫病標本制片觀察。孢囊梗2~3支成叢自氣孔伸出，假軸狀分枝，小?；颗虼螅啻萎a(chǎn)生孢子囊，使孢子囊梗上部呈節(jié)狀；孢子囊近球狀、卵形或梨形等，具乳突。

3.霜疫霉屬（Peronophthora）取荔枝霜疫霉病標本挑取霉層觀察，孢囊梗直立，雙叉銳角分枝，孢囊梗多級有限生長。孢子囊檸檬形、橢圓形，乳突明顯。

4.霜霉屬（Peronospora）取十字花科植物（油菜、白菜等）的霜霉病標本從葉背面刮取霉層觀察，孢囊梗二叉狀銳角分枝，末端尖銳。

按照寄生霜霉的觀察方法，選取禾生指梗霉、葡萄霜霉病菌、瓜類霜霉病菌、萵苣盤梗霉等材料，對照下列檢索表，制片觀察各種霜霉病的病原菌或觀察病菌永久玻片標本，掌握霜霉科幾個常見屬的主要形態(tài)特征。霜霉科主要屬的檢索表

1.孢囊梗粗壯，上部為重復(fù)2～3次的不規(guī)則二叉分枝…………指梗霉屬（Sclerospora）1.孢囊梗較細……………………………………………………………………………………2 2.孢囊梗單軸分枝，小軸與主軸成直角，分枝末端平鈍………單軸霉屬（Plasmopara）2.孢囊梗呈現(xiàn)銳角二叉分枝……………………………………………………………………3 3.分枝兩側(cè)不對稱，頂端尖銳……………………………假霜霉屬（Pseudoperonospora）3.分枝兩側(cè)對稱…………………………………………………………………………………4 4.分枝頂端尖細……………………………………………………… 霜霉屬（Peronospora）4.分枝頂部膨大，呈盤狀，具3～4個指狀周生小?！P梗霉屬（Bremia）5.白銹菌屬（Albugo）鏡檢莧菜白銹病菌組織切片，或取以上病葉徒手切片制成臨時玻片鏡檢。孢囊梗平行排列在寄主表皮下，短棍棒形，孢子囊串生。白銹菌危害癥狀是在寄主表面產(chǎn)生乳白色或粉狀的皰斑，這是病菌在寄主表皮下形成的孢子囊堆，白色粉狀物是成熟的孢子囊。

五、實驗報告及作業(yè)

1.鞭毛菌亞門真菌的共同特征和分類依據(jù)是什么？

2.以營養(yǎng)體、無性繁殖、有性生殖來比較鞭毛菌亞門三個綱的區(qū)別。

3.觀察十字花科蔬菜根腫病菌、馬鈴薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或綿霉菌，繪休眠孢子囊或游動孢子囊圖。

4.繪瓜果腐霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白銹病菌孢囊梗、孢子囊，卵孢子圖。

5.繪瓜類霜霉病菌、萵苣霜霉病菌、葡萄霜霉病菌孢囊梗、孢子囊圖。6.詳繪大白菜霜霉病和粟白發(fā)病的病原形態(tài)圖（包括無性繁殖和有性生殖）。7.卵菌綱真菌有哪些特點？結(jié)合它們的生物學特性、寄生性及病害特點說明本綱真菌進化的情況。

實驗五

接合菌亞門真菌形態(tài)觀察

接合菌亞門真菌的共同特征是有性生殖產(chǎn)生接合孢子。大多數(shù)是腐生的，少數(shù)可以引起農(nóng)產(chǎn)品的腐爛。接合菌營養(yǎng)體為發(fā)達的無隔菌絲體，無性繁殖產(chǎn)生具細胞壁的孢囊孢子，有性生殖產(chǎn)生接合孢子。孢子囊的形態(tài)、孢囊孢子釋放以及寄生性等是重要的分類依據(jù)。

一、實驗?zāi)康?/p>

通過實驗掌握接合菌的一般形態(tài)及其所致病害的癥狀類型，了解同宗配合和異宗配合的含義及同型配子囊、異型配子囊的差別。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設(shè)備；滅菌培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子等。

三、實驗材料

甘薯軟腐病新鮮標本、掛圖、病原菌永久玻片，多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）等；根霉屬的甘薯軟腐病、犁頭霉和毛霉“﹢、﹣”菌株的斜面培養(yǎng)物或培養(yǎng)皿平板培養(yǎng)物；三角瓶裝PDA培養(yǎng)基。

四、實驗內(nèi)容和方法

（一）甘薯軟腐病癥狀觀察

受害甘薯變軟腐爛，有時散發(fā)出酒味，病薯表面長出白色、灰色至黑色毛狀物。仔細觀察，能見到白色菌絲體中有許多小黑點。小黑點是病菌的孢子囊。

用針挑取霉層制片、鏡檢，觀察孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗及囊軸、假根的形態(tài)。

（二）匐枝根霉培養(yǎng)物的鏡檢觀察

用挑針仔細地從培養(yǎng)的匐枝根霉菌中挑取少許連有培養(yǎng)基的培養(yǎng)物，制成臨時玻片，在低倍鏡下檢查?；蛘哂脤嶓w解剖鏡直接觀察培養(yǎng)皿上的菌體。觀察菌絲的形態(tài)和具有分枝的孢囊梗及其基部的假根，孢囊梗之間有匍枝狀的菌絲相連，在孢囊?；坑猩钊爰闹骷毎蚧|(zhì)中分枝狀的假根。在每一個孢囊梗的頂端產(chǎn)生一個圓球狀的孢子囊，用高倍鏡觀察孢子囊內(nèi)部的構(gòu)造，在未成熟的孢子囊內(nèi)，往往只有大量的小顆粒體，接近成熟的或成熟的孢子囊內(nèi)則充滿了許多褐色圓形的孢囊孢

子。孢子囊壁破裂后，孢子散出，露出鑼錘形的囊軸。

（三）接合孢子觀察

取根霉屬和犁頭霉屬接合孢子玻片觀察，并注意原配子囊、配囊柄及配子囊的發(fā)育特點。成熟的接合孢子深褐色，表面粗糙。犁頭霉菌的接合孢子在配子囊柄的著生處有附屬絲，注意觀察配囊柄的形狀及大小。

（四）異宗配合現(xiàn)象觀察

取融化了的PDA培養(yǎng)基、滅菌培養(yǎng)皿置于鋪有濕紗布的桌上，在灑精燈火焰附近，按無菌操作要求，將培養(yǎng)基倒進滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個 9cm 皿內(nèi)倒入10～15ml培養(yǎng)基，冷卻后即成平板。取具有“﹢、﹣”性征分化并有親和性的匐枝根霉、犁頭霉或毛霉兩個菌株，分別按下列圖示方式接種到三個培養(yǎng)皿的平板上，在培養(yǎng)皿的底部寫上所接種的菌株編號、接種日期，在 25°C 溫箱中培養(yǎng)一周，觀察異宗配合現(xiàn)象。記錄哪個培養(yǎng)皿中形成了接合孢子。

五、實驗報告及作業(yè)

1.接合菌亞門真菌的主要特點是什么？與鞭毛菌亞門有何區(qū)別？

2.根據(jù)+、-菌株平板接種培養(yǎng)結(jié)果，說明其產(chǎn)生接合孢子的原因？

3.何為同型配子囊、異型配子囊？

4.哪些接合菌與病蟲害的生物防治有關(guān)？怎樣利用它們？

5.繪匍枝根霉菌孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌絲和接合孢子形態(tài)圖。

實驗六

子囊菌亞門真菌形態(tài)觀察

子囊菌是一類高等真菌。菌絲體一般都很發(fā)達，有隔膜，具分枝，有的菌絲體可以形成菌核、子座等機構(gòu)。子囊菌的共同特點是有性生殖產(chǎn)生子囊和子囊孢子。子囊菌所致病害的種類很多，其中許多是重要的經(jīng)濟作物病害。子囊菌亞門分綱的主要依據(jù)是子囊果及子實層的有無、子囊果的類型、子囊的特征等。據(jù)此分6個綱：半子囊菌綱、不整囊菌綱、核菌綱、腔菌綱、盤菌綱和蟲囊菌綱。

一、實驗?zāi)康?/p>

通過實驗，了解子囊菌亞門各個綱病原菌的主要形態(tài)特征，掌握子囊菌中與植物病害有關(guān)的重要屬的形態(tài)特征、分類依據(jù)及所致主要病害的癥狀特點。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設(shè)備；滅菌培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、擦鏡紙、無菌水等。

三、實驗材料

1.桃縮葉病(Tapharina deformans)和李袋果病(T.pruni)2.散囊菌(Eurotium sp.)3.禾白粉病菌(Blumeria graminis)

4.向日葵白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)5.瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)

6.桃白粉病菌(Podosphaera tridactyla)7.洋槐白粉病菌(Microsphaera sp.)

8.桑里白粉病菌(Phyllactinia corylea)9.葡萄白粉病菌(Uncinula necator)

10.甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata)11.玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)

12.蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali)13.小麥全蝕病菌(Gaeumannomyces graminis)14.黑麥麥角菌(Claviceps purpurea)15.竹多腔菌(Myriangium haraeanum)

16.蔥葉枯病菌(Mycosphaerella sp.)17.苜蓿輪紋病菌(Pleospora herbarum)

18.核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）

19.紫云英菌核病菌(S.trifoliorum)

以上病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片、多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

四、實驗內(nèi)容和方法

（一）半子囊菌綱(Hemiascomycetes)

外囊菌屬(Taphrina)取桃縮葉病或李袋果病材料作臨時玻片，在顯微鏡下檢

查?？煽匆娮幽以诩闹魅~片的表皮下排列成柵欄狀，形成無包被的子囊層，子囊下有足胞，常含孢子4～8個。子囊圓筒形，近球形或橢圓形。

（二）不整囊菌綱(Plectomycetes)

散囊菌屬(Eurotium)觀察示范鏡下散囊菌的閉囊殼、子囊或散在閉囊殼內(nèi)的子囊孢子。閉囊殼壁薄，只有2~3層細胞構(gòu)成。子囊孢子單胞、近圓形。

（三）核菌綱(Pyrenomycetes)白粉菌目(Erysiphales)

本目是專性寄生菌。白粉菌侵染植物可引起多種植物的白粉病。白粉菌菌絲表生，在寄主體表擴展蔓延。一般在葉部引起褪綠或黃色斑，以后葉面出現(xiàn)白色或灰白色的粉狀物，即白粉菌的無性繁殖形成的分生孢子。生長后期，在病部形成許多黑色小顆粒。這些小黑點是白粉菌的閉囊殼。閉囊殼有附屬絲，附屬絲呈絲狀，其形態(tài)因種而異。閉囊殼內(nèi)子囊數(shù)目也不一樣，一至多個。附屬絲的形狀和子囊數(shù)目的多少是分屬的依據(jù)。

選取小麥白粉病、向日葵白粉病、瓜白粉病、桃白粉病、洋槐白粉病、桑里白粉病、葡萄白粉病等不同材料。在實體解剖鏡下觀察閉囊殼及附屬絲的輪廓及形態(tài)。挑取閉囊殼作臨時玻片，在顯微鏡下檢查。注意閉囊殼的形狀、有無孔口、閉囊殼表面附屬絲的形狀和著生部位。然后輕輕擠壓蓋玻片，使閉囊殼破裂。觀察閉囊殼內(nèi)的子囊，數(shù)數(shù)是單子囊還是多子囊。

對照下列檢索表，觀察各種白粉病的病原菌永久玻片或標本，掌握白粉菌科幾個常見屬的主要形態(tài)特征及所致病害癥狀。白粉菌主要屬檢索表

1.閉囊殼內(nèi)單個子囊……………………………………………………………………………2 1.閉囊殼內(nèi)多個子囊……………………………………………………………………………3 2.附屬絲菌絲狀…………………………………………………… 單囊殼屬(Sphaerotheca)2.附屬絲剛直，較粗，頂端二叉狀重復(fù)分枝，分枝末端螺旋狀卷曲………… ………………………………………………………………叉絲單囊殼屬(Podosphaera)3.附屬絲菌絲狀…………………………………………………………………………………4 3.附屬絲非菌絲狀………………………………………………………………………………5 4.附屬絲發(fā)育不良，較短……………………………………… 布氏白粉菌屬（Blumeria）

4.附屬絲較長………………………………………………………………粉菌屬(Erysiphe)5.附屬絲剛直，基部膨大，頂端尖銳…………………………………球針殼屬(Phyllactinia)5.附屬絲基部不膨大……………………………………………………………………………6 6.附屬絲粗，剛直，頂端二叉狀重復(fù)分枝，分枝末端卷曲……叉絲殼屬(Microsphaera)6.附屬絲不分枝，頂端卷曲………………………………………… 鉤絲殼屬(Uncinula)

球殼菌目（Sphaeriales）

1.長喙殼屬(Ceratocystis)觀察甘薯黑斑病菌培養(yǎng)物，挑取病菌灰白色物中間深褐色或黑色毛刺狀小點，觀察病菌的子囊殼。子囊殼深色、球形，有長頸，開口處有須狀物，稱口須。輕壓蓋玻片將子囊殼壓破，成熟的子囊孢子頭盔狀，子囊壁早期膠化消解。

2.赤霉屬（Gibberella）取培養(yǎng)在麥粒上的玉蜀黍赤霉菌子囊殼，制成臨時玻片鏡檢，在顯微鏡下觀察。子囊殼藍色或紫色，散生或聚生。子囊孢子多個細胞，梭形。

3.黑腐皮殼屬（Valsa）取蘋果樹腐爛病菌切片鏡檢，子囊殼埋生在子座內(nèi)，有長頸伸出子座。子囊孢子單細胞，香蕉形。

4.頂囊殼屬（Gaeumannomyces）觀察小麥全蝕病害標本，注意病株基部根系生長不良，莖基部葉鞘枯腐，葉鞘內(nèi)有黑色小顆粒狀物，即病菌的子囊殼。取含有子囊殼葉鞘做切片，置顯微鏡下觀察子囊殼形態(tài)，子囊殼頂端有短喙；子囊孢子細線狀，多細胞。

5.麥角菌屬（Claviceps）取黑麥麥角菌切片，置顯微鏡下觀察，頭狀子座內(nèi)壁周圍有瓶狀子囊殼，子囊殼開口向外。子囊殼內(nèi)有子囊和子囊孢子。子囊細長，子囊孢子線形。

（四）腔菌綱(Loculoascomycetes)

1.多腔菌屬（Myriangium）取竹多腔菌切片置顯微鏡下觀察，可見到很發(fā)達的子囊座組織。子囊球形，單生，子囊孢子有縱橫隔膜, 磚格狀。

2.球腔菌屬（Mycosphaerella）取蔥葉枯病菌切片，置顯微鏡下觀察,單腔多子囊。子囊圓柱形至棍棒形，有雙層壁。子囊初期束生，后平行排列；子囊孢子橢圓形，雙胞。

3.格孢腔菌屬（(Pleospora)取苜蓿輪紋病病菌切片，置顯微鏡下觀察，囊孢子長圓

形或卵圓形，磚格狀（多細胞，有縱橫分隔）。

(五)盤菌綱(Discomycetes)核盤菌屬（Sclerotinia）取油菜菌核病菌子囊盤切片，置顯微鏡下觀察，子囊盤具長柄；子囊孢子橢圓形或紡錘形。觀察油菜菌核病癥狀及菌核萌發(fā)標本，菌核球形至豆瓣形，鼠糞狀，一般生子囊盤4～5個。菌核上形成的子囊盤具長柄。

五、實驗報告及作業(yè)

1.子囊菌亞門各綱的主要特征是什么？ 2.繪外囊菌屬和散囊菌屬的形態(tài)圖。

3.白粉屬和單絲殼屬、叉絲殼屬和叉絲單囊殼屬的主要區(qū)別是什么？ 4.繪白粉屬、叉絲單囊殼屬、球針殼屬、鉤絲殼屬的形態(tài)圖。5.繪赤霉屬、多腔菌屬、核盤菌屬形態(tài)圖。6.子囊菌有性繁殖體的病征類型和特點是什么？

實驗七

擔子菌亞門真菌形態(tài)觀察

擔子菌亞門真菌一般稱作擔子菌，是真菌中最高等的。其共同特征是有性生殖產(chǎn)生擔孢子。擔子菌亞門的分綱依據(jù)是擔子果的有無，擔子果的發(fā)育類型可分為三個綱：冬孢菌綱、層菌綱、腹菌綱。與植物病害關(guān)系密切的是冬孢菌綱。根據(jù)擔子的來源及特征，擔孢子的數(shù)目及位置，冬孢菌綱分為銹菌目和黑粉菌目。銹菌的分類主要依據(jù)冬孢子的形態(tài)，排列和萌發(fā)的方式。而黑粉菌的分類主要依據(jù)冬孢子的萌發(fā)方式，孢子的分隔，排列及其大小，形狀及是否有不孕細胞等進行分類。

一、實驗?zāi)康?/p>

通過實驗了解擔子菌亞門冬孢菌綱主要病原菌的形態(tài)特征，掌握銹菌目和黑粉菌目中與植物病害有關(guān)的重要屬的形態(tài)特征、分類依據(jù)及所致主要病害的癥狀特點。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設(shè)備，滅菌培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、蒸餾水滴瓶、通草、刀片、擦鏡紙、酒精燈、無菌水、PDA培養(yǎng)基等。

三、實驗材料

銹菌目（Uredinales）：

1.菜豆銹菌（Uromyces.appendiculatus）2.禾柄銹菌（Puccinia graminis f.sp.tritici）3.禾葉銹菌（Puccinia recondita）

4.禾條銹菌（Puccinia striiformis）

5.梨膠銹菌（Gymnosporangium haraeanum）6.薔薇多胞銹菌（Phragmidium rosae-multiflorae）7.亞麻銹菌（Melampsora lini）

8.花椒鞘銹菌（Coleosporium xanthoxyli）9.松櫟銹菌（Cronartium quercum）

10.棗層銹菌（Phakopsora zizyphi-vulgaris）

黑粉菌目（Ustilaginales）：

1.小麥散黑粉菌（Ustilago tritici）

2.玉蜀黍黑粉菌（U.maydis）

3.絲軸黑粉菌（Sphacelotheca reiliana）

4.高粱堅粒黑粉菌（Sphacelotheca sorghi）5.高粱散粒黑粉菌（Sphacelotheca cruenta）6.高粱團黑粉菌（Sorosporium ehrenbergii）7.小麥網(wǎng)腥黑穗菌（Tilletia caries）

8.小麥光腥黑穗菌（Tilletia tritici）9.稻尾孢黑粉菌（Neovossia horrida）

10.稻葉黑粉菌（Entyloma oryzae）11.小麥條黑粉菌（Urocystis tritici）

以上病菌引起的病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片和病菌的PDA培養(yǎng)物;多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

四、實驗內(nèi)容和方法

（一）冬孢子萌發(fā)試驗

冬孢菌綱不同類型冬孢子萌發(fā)方法是不同的，幾種常見的冬孢子的萌發(fā)方法如下：

1．小麥網(wǎng)腥黑穗菌和光腥黑穗菌 將冬孢子撒在保濕器皿內(nèi)的用1%硝酸鈣液潤濕的濾紙上，在17～ 22℃ 下培養(yǎng)，每天于日光燈下照射4h，3d后檢查萌發(fā)情況。

2．小麥條銹病菌 取帶冬孢子病葉在0.5～1%檸檬酸中浸15min，再放于兩層潮濕的濾紙之間，于-2~-5℃ 下冷凍5d后，挑取冬孢子置于水滴內(nèi)，在冰箱內(nèi)（4℃）保存48h即可萌發(fā)。

（二）銹菌目（Uredinales）

1.單胞銹菌屬（Uromyces）觀察菜豆銹病或茭白銹病標本，挑取冬孢子制成玻片觀察。冬孢子具柄，單細胞。

2.柄銹菌屬 觀察小麥桿銹病、小麥葉銹病或小麥條銹病標本，冬孢子堆黑色。將有冬孢子堆的寄主葉片組織切下，制切片于顯微鏡下觀察。冬孢子有一隔膜，分隔處稍縊縮，柄不膠化。

4.膠銹菌屬（Gymnosporangium）從用水浸泡過的膠銹菌冬孢子角上用挑針挑取冬孢子制片觀察，冬孢子雙胞，分隔處不縊縮或稍縊縮。柄絲狀，很長，含膠質(zhì)。

5.多胞銹屬（Phragmidium）挑取玫瑰銹病組織上的冬孢子，制片觀察，冬孢子多細胞，通常下部膨大易膠化。

6.柵銹菌屬（Melampsora）取亞麻銹菌病組織制作徒手切片觀察。冬孢子無柄，集成殼狀或墊狀，冬孢子僅側(cè)面結(jié)合成一層，埋生于寄主表皮下。

7.鞘銹菌屬（Coleosporium）取花椒銹病組織制作切片觀察，冬孢子堆生于葉背或排列成環(huán)狀，圓形黃褐色。冬孢子無柄，集成殼狀或墊狀的孢子粒，集生于寄主表皮層下。

8.柱銹菌屬（Cronartium）取馬尾松銹病標本制片觀察，冬孢子堆生于葉背，毛狀，冬孢子梭形。

9.層銹菌屬（Phakopsora）取棗銹病組織制作切片觀察，冬孢子堆呈黑色，冬孢子

排成2～4層，長橢圓形或多角形。

（三）黑粉菌目（Ustilaginales）

1.黑粉菌屬（Ustilago）孢子堆外露，很少由寄主組織長期包裹，擔子分隔，擔孢子生在擔子每一細胞的側(cè)面。

挑取小麥散黑粉（穗）病組織上的冬孢子制成玻片觀察。冬孢子球形或近球形。另取冬孢子萌發(fā)切片觀察。冬孢子萌發(fā)產(chǎn)生4個細胞的擔子，從擔子的不同細胞分別生出絲狀分枝，不產(chǎn)生擔孢子。

挑取玉米瘤黑粉病組織上的冬孢子制片觀察，冬孢子球形至卵形。另取冬孢子萌發(fā)切片觀察。冬孢子萌發(fā)時產(chǎn)生有隔擔子，擔子頂端或分隔處側(cè)生梭形的擔孢子。

2.軸黑粉菌屬（Sphacelotheca）冬孢子堆周圍有膜（不孕菌絲），中央有寄主組織，擔子分隔，擔孢子生在擔子每一細胞的側(cè)面。

挑取高粱絲黑穗病組織上的冬孢子制片觀察。冬孢子卵圓形或球形，暗褐色，有時混生有不孕細胞，不孕細胞無色透明。

取高粱堅粒黑穗病標本觀察。孢子堆生于子房中，冬孢子多圓形或近圓形，不孕細胞長圓形至近圓形。

取高粱散粒黑穗病標本觀察。冬孢子堆有由菌絲體組成的灰白色被膜，冬孢子球形，分散。

3.團黑粉菌屬（Sorosporium）觀察高粱長粒黑穗病標本，病粒（即菌癭）外層包有一層淺黃色薄膜。孢子堆結(jié)合成孢子球，孢子球的結(jié)合很松。稍加壓就分散，無不孕細胞。

4.腥黑粉菌屬（Tilletia）取小麥網(wǎng)腥黑穗病或小麥光腥黑穗病標本觀察。冬孢子單生，孢子堆成熟時呈粉未狀，冬孢子較小。孢子堆生于子房內(nèi)，外包果皮，內(nèi)部充滿黑紫色粉狀孢子，有腥味。

5.尾孢黑粉菌屬（Neovossia）取水稻粒黑穗病標本挑片觀察，孢子堆寄生于子房內(nèi)，產(chǎn)生黑粉。挑取黑粉制片，顯微鏡下可見，孢子球形，常有一部分未成熟的透明孢子。

6.葉黑粉菌屬（Entyloma）取水稻葉黑粉病標本，切片觀察。孢子堆生于葉的兩面，圓形至長條形。孢子多角形，結(jié)合緊密。取萌發(fā)的擔孢子玻片觀察，擔孢子頂

生于擔子上，紡錘形。

7.條黑粉菌屬（Urocystis）取小麥稈黑粉病標本，制片觀察。一至多個厚垣孢子集結(jié)成牢固的孢子球，孢子球外有淡色而小的不孕細胞包圍。

五、實驗報告及作業(yè)

1.繪黑粉菌屬、腥黑粉菌屬和條黑粉菌屬冬孢子形態(tài)圖。2.繪腥黑粉菌屬冬孢子萌發(fā)圖。

3.繪柄銹菌屬、單胞銹菌屬、柵銹菌屬和膠銹菌屬冬孢子形態(tài)圖。

實驗八

半知菌亞門真菌形態(tài)觀察

半知菌亞門真菌的種類很多，其中不少是植物病害的重要病原菌。半知菌的分類主要是根據(jù)無性階段的形態(tài)特征，包括分生孢子的形態(tài)、載孢體的類型、產(chǎn)孢方式等。半知菌亞門分3個綱。芽孢綱：營養(yǎng)體為單細胞或發(fā)育程度不同的菌絲體或假菌絲，通過產(chǎn)生芽孢子繁殖；絲孢綱：營養(yǎng)體是發(fā)達的菌絲體，分生孢子不產(chǎn)生在分生孢子盤或分生孢子器內(nèi)；腔孢綱：分生孢子產(chǎn)生在分生孢子盤或分生孢子器內(nèi)。與植物病害關(guān)系比較密切的是絲孢綱和腔孢綱。

一、實驗?zāi)康?/p>

通過實驗認識半知菌子實體的類型及重要致病菌屬的形態(tài)特征，掌握常見植物病原半知菌屬的鑒別特征。

二、實驗儀器與用品

顯微鏡、幻燈機、投影儀、計算機及多媒體教學設(shè)備，滅菌培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、吸水紙、解剖刀、挑針、鑷子、紗布、刀片、通草、酒精燈、放大鏡，恒溫箱，方木塊，剪刀等。

三、實驗材料

半知菌引起的病害標本或新鮮材料、掛圖、病原菌永久玻片和病菌的PDA培養(yǎng)物；多媒體教學課件（包括幻燈片、錄象帶、光盤等影像資料）。

絲孢綱（Hyphomycetes）

1.立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）

2.齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）

3.稻梨孢（Pyricularia oryzae）

4.玉蜀黍平臍蠕孢（Bipolaris maydis）

5.玉米大斑突臍蠕孢（Exserohilum turcicum）

6.大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）

7.蕓苔鏈格孢（Alternaria brassicae）

8.球座尾孢（Cercospora personata）

9.梨黑星孢（Fusicladium virescens）

10.灰葡萄孢（Botrytis cinerea）

11.粉紅聚端孢（Trichothecium roseum）

12.意大利青霉（Penicillium italicum）

13.褐孢霉（Fulvia fulva）

14.尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）

腔孢綱（Coelomycetes）

1.膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）2.葡萄痂圓孢（Sphaceloma ampelinum）

3.梨殼囊孢（Cytospora carphosperma）

4.芹菜生殼針孢（Septoria apiicola）

5.高粱生殼二孢（Ascochyta sorghina）

6.甜菜蛇眼病菌（Phoma beta）

7.梨葉點霉（Phyllosticta pyrina）

四、實驗內(nèi)容和方法

（一）絲孢綱

1.絲核菌屬（Rhizoctonia）觀察預(yù)先培養(yǎng)的棉花立枯病菌或小麥紋枯病菌菌落。菌核褐色至黑褐色。挑取菌絲制片觀察，菌絲粗壯，菌絲分枝呈直角，分隔處?？O縮。

2.小核菌屬（Sclerotium）取花生白絹病或小麥、大豆、棉花、煙草等白絹病菌標本或培養(yǎng)觀察，病菌菌絲白色絹絲狀；菌核圓形至長圓形，褐色至黑色，表面暗色，中心無色，組織致密，干時極硬，彼此無菌絲相連。

3.梨孢屬（Pyricularia）取水稻稻瘟病標本，用挑針挑取病葉上的霉狀物制片觀察。分生孢子梗細長，淡褐色，頂部以合軸式延伸，呈曲膝狀，分生孢子多胞，梨形。

4.平臍蠕孢屬（Bipolaris）取玉米小斑病葉，挑取病斑上的霉層觀察。分生孢子梗單生或叢生，上部呈曲膝狀彎曲；分生孢子蠕蟲形或長橢圓形，多胞，臍點稍微突出，平截狀。

5.突臍蠕孢屬（Exserohilum）取玉米大斑病病葉，用挑針挑或刮取其上的黑色霉狀物制片，置顯微鏡下觀察。其分生孢子梗暗色，具分隔，一般少分枝，上部呈曲膝狀。分生孢子棱形，多胞，臍點明顯突出于基細胞外部。

提示 觀察時注意與平臍蠕孢屬的區(qū)別，主要在于其臍點是否突出。

6．鐮孢屬（Fusarium）取瓜類枯萎病菌培養(yǎng)觀察，氣生菌絲白色，絨毛狀，在PDA培養(yǎng)基上底部呈淡黃色或淡紫色；挑針挑取培養(yǎng)物制片觀察，小型分生孢子量大，無色，卵圓形，單胞，偶爾雙胞；大型分生孢子無色，紡鍾形或鐮刀形，1～5個隔膜，基部有時有一顯著的突起，稱足胞。

提示 有時可觀察到厚垣孢子，頂生或間生于菌絲體上。

7.輪枝孢屬（Verticillium）取培養(yǎng)好的棉花黃萎病菌平皿，直接放于顯微鏡載物臺上觀察，其分生孢子梗細長直立具分隔，呈輪狀分枝。分生孢子梗呈直角分枝，分生孢子單胞，生于分枝頂端。

提示 培養(yǎng)菌用的培養(yǎng)基不宜太厚以便透射光能穿透，平皿放到載物臺上小心移動，使視野覆蓋菌落邊緣，這樣才能找到理想的輪狀分枝結(jié)構(gòu)。

8.鏈格孢屬（Alternaria）取白菜黑斑病病葉，用挑針挑取病斑上的黑色霉狀物制片，顯微鏡下觀察。分生孢子長棍棒狀，具縱橫分隔，呈磚格狀，頂端有一長條形喙狀細胞。

9.尾孢屬（Cercospora）取芹菜早疫?。ò唿c?。┎∪~，挑取霉層制片，分生孢子梗不分枝或少有分枝；分生孢子單生，鞭狀，具多數(shù)分隔。

10.黑星孢屬（Fusicladium）挑取梨黑星病葉上的煤煙狀霉層制片，分生孢子梗暗色，頂部稍屈曲，孢痕明顯；分生孢子淡褐色，1～2胞，瓜子形。

提示 注意分生孢子梗的孢痕，在顯微鏡透射光源照射下呈現(xiàn)亮點。

11.葡萄孢屬（Botrytis）取黃瓜或番茄灰霉病標本，挑取其上的灰霉狀物制片觀察。分生孢子梗頂端分枝，末端膨大并產(chǎn)生小突起，其上著生多數(shù)分生孢子，外觀呈葡萄穗狀。

12.聚端孢屬（Trichothecium）取棉鈴紅粉病標本，挑取霉層制片觀察，分生孢子梗直立，少分隔或不分隔，分生孢子無色雙胞，洋梨形，常以基部交錯相連的方式在孢子梗頂端聚集成孢子鏈。

13.青霉屬（Penicillium）取柑桔青霉病標本或病菌培養(yǎng)，挑片觀察。分生孢子梗集結(jié)成束，“掃帚狀”分枝，分枝末端為瓶狀小梗，生孢子著生在瓶狀小梗上。褐孢霉屬（Fulvia）取番茄葉霉病標本，挑取霉層制片顯微鏡下觀察。分生孢子?；考?，上部粗，分生孢子串生，孢子鏈常分枝并有芽狀突起。

（二）腔孢綱

1.炭疽菌屬（Colletotrichum）取蘋果炭疽病標本制片觀察，分生孢子盤埋生于寄主表皮下，墊狀無剛毛，成熟后突破表皮，分生孢子梗平行排列成一層，分生孢子單胞。

提示 切片時最好用新鮮采集的標本，如果標本干燥可用蒸餾水濕潤一下再進行切片，切出的絲條越薄越好，若用乳酚油作浮載劑效果更好。

2.痂圓孢屬（Sphaceloma）取葡萄黑痘病標本，切片觀察，孢子梗排列緊密，自盤狀子座基部產(chǎn)生；分生孢子盤黑色；分生孢子梗極短，緊密排列于子座上，分生孢子無色單胞，中部縊縮，內(nèi)含1—2個油球。

3．殼囊孢屬（Cytospora）取梨樹腐爛病病樹皮，徒手切片觀察，子座暗褐色，多腔室，似迷宮狀，分生孢子器著生于瘤狀子座組織內(nèi)；分生孢子香蕉形。分生孢子與膠體物質(zhì)混合，吸水膨脹后連同孢子自孔口擠出成為分生孢子角。

4．殼針孢屬（Septoria）取芹菜斑枯病病葉，做徒手切片，分生孢子器球形；分生孢子無色，針狀，多胞。

提示 分生孢子的橫隔須經(jīng)染色后才能觀察清楚；切片操作的最后一步即將切片放到載物臺上時再加水浮載樣品，這樣立即觀察可看到分生孢子自孔口向外噴射的現(xiàn)象。

5.殼二孢屬（Ascochyta）取高粱粗斑病標本制作切片觀察，分生孢子器黑色，分生孢子器扁球形，分生孢子圓筒形，雙胞無色。

6．莖點霉屬（Phoma）取甜菜蛇眼病標本，切片觀察，分生孢子器著生于寄主表皮下，呈輪紋狀排列，分生孢子器球形，分生孢子無色單胞，卵圓形。

7．葉點霉屬（Phyllosticta）多寄生于葉上。取蘋果灰斑病葉，制作徒手切片觀察，分生孢子器球形，有孔口，分生孢子極小（小于15μm），卵圓形。

提示 葉點霉屬的形態(tài)與莖點霉屬很難區(qū)分，應(yīng)結(jié)合發(fā)病部位一起認識。

五、實驗報告及作業(yè)

1.繪梨孢屬、尾孢屬和鐮孢霉屬的分生孢子梗和分生孢子形態(tài)圖。2.繪炭疽菌屬、盤二孢屬的分生孢子盤和分生孢子形態(tài)圖。

實驗九

培養(yǎng)基的制作

一、實驗?zāi)康?/p>

了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握培養(yǎng)基的制備方法。

二、實驗原理

在植物病理學研究工作中經(jīng)常要使用各種不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是按照生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)，用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。其中含有碳源、氮源、無機鹽、維生素以及水份等。微生物在培養(yǎng)基上生長繁殖還必須在最適pH范圍內(nèi)才能生長得更好，因此對不同種類的微生物應(yīng)將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到一定的pH值范圍。

培養(yǎng)基的種類很多，不同的微生物所需要的培養(yǎng)基不同。依物理性狀可分為液體的、固體的和半固體的三種。固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入1.5～2%的瓊脂，半固體培養(yǎng)基是加入0.2～0.5%的瓊脂。瓊脂（agar）又稱瓊膠或洋菜，是由海藻加工而成，其化學性質(zhì)穩(wěn)定，一般微生物均不能分解利用。它在 95℃ 熱水中溶化成溶膠，冷卻到 45℃ 以下時又重新凝固，故一般實驗中常用它作為凝固劑。

根據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)來源的不同，培養(yǎng)基可分為天然、半合成和合成培養(yǎng)基三類。天然培養(yǎng)基是以自然界原有的有機物為材料經(jīng)滅菌后制成，如馬鈴薯、胡蘿卜、水果、大麥粒、高粱粒等。半合成培養(yǎng)基中既有一些天然的有機物質(zhì)，又有一些成分簡單或明確的化合物。如常用的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA），肉汁胨培養(yǎng)基（NA）等。合成培養(yǎng)基是由一些成分明確的化合物配制而成的，沒有任何成分不明確的物質(zhì)，常用于研究微生物的生理生化性狀，如查氏（Czapek）培養(yǎng)基等。

根據(jù)培養(yǎng)基用途不同，可分為生長繁殖培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基、貯存培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基等。在植物病理學研究中，最常用培養(yǎng)基有馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，主要用于分離培養(yǎng)病原真菌。

在培養(yǎng)基配制完之后，必須經(jīng)過滅菌，以便徹底殺死其中原有的一切微生物。

三、實驗材料、試劑與儀器

1．材料 馬鈴薯。

2．試劑 葡萄糖、瓊脂等。

3．儀器與用品 高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙（或酸度計）、試管、鋁鍋、攪拌棒、三角瓶、燒杯、漏斗、量筒、紗布、棉花、天平等。

四、實驗步驟

PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基）配方

去皮馬鈴薯 200g

葡萄糖 20g 瓊脂 15～20g

蒸餾水 1000ml 自然pH

在PDA培養(yǎng)基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，這樣配制的培養(yǎng)基也稱為PSA培養(yǎng)基。1．稱量 稱量去皮馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，瓊脂15-20g。

提示 瓊脂加入的量取決于瓊脂的質(zhì)量，質(zhì)量好的 15g 就夠了，質(zhì)量差的應(yīng)適當增加。另外，在夏天氣溫較高時，適當增加用量。

2．將馬鈴薯切成小塊，放入鍋中，加水1000ml，煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。

3．將馬鈴薯濾液放回鍋中，加入瓊脂，加熱熔化。

提示在瓊脂融化的過程中，需要用玻璃棒不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。

4．加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分，定容至1000ml。

提示 通常在制作培養(yǎng)基的鍋內(nèi)用紅藍鉛筆標記出不同體積的刻度，1000ml，2000ml等，在定容時直接將水加至已標記的刻度即可。

5．分裝 根據(jù)不同的實驗?zāi)康?，可將配制的培養(yǎng)基分裝于試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)。分裝試管，其量為管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。

6．加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經(jīng)彈松的棉花，棉塞可過濾空氣，防止雜菌侵入并可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)，故在植物病理學研究工作中普遍使用。正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口完全適合，過緊時妨礙空氣流通，操作不便；過松則達不到濾菌的目的且棉塞過小往往容易掉進試管內(nèi)。正確的棉塞頭較大，約有1/3在外，2/3在試管內(nèi)。分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾染在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽，為讓空氣可以自由進出，橡皮塞不要過緊，滅菌前應(yīng)夾一紗線在管口。

7．包扎 加塞后，將試管用線繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、組別、制作人等

8．滅菌 將上述培養(yǎng)基以0.103Mpa，121C , 高壓蒸氣滅菌20min。

9．擱置斜面 將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至 50C 左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。

培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在 37℃ 溫箱培養(yǎng)24h，無菌生長者方可使用。PDA培養(yǎng)基一般不需要調(diào)pH。對于要調(diào)節(jié)pH的培養(yǎng)基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液進行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)時應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞培養(yǎng)基成分。

提示 pH不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養(yǎng)基時，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調(diào)整pH。

五、實驗報告及作業(yè)

各組上交按計劃制備的培養(yǎng)基。

1．為什么有的培養(yǎng)基要調(diào)pH值，有的可以不調(diào)

2．加壓蒸氣滅菌為什么比干熱滅菌所要求的溫度低、時間短

3．想一想，試一試，將幾只試管包扎在一起比較牢固？

第三篇：園藝植物病理學教學實習大綱

《園藝植物病理學》實習教學大綱

課程編號:

課程名稱：《園藝植物病理學》實習教學

課程類型：專業(yè)必修教學實習

英文名稱：Horticultural Plant Pathology practice

適用專業(yè)：園藝專業(yè)

總 學 時：0.5周一、課程的性質(zhì)、目的和任務(wù)

1、《園藝植物病理學》是園藝專業(yè)的一門專業(yè)必修課。本課程主要講授園藝植物病害的基本概念、癥狀類型、發(fā)生原因、病害發(fā)生發(fā)展規(guī)律，植物與病原物之間的相互作用機制以及植物病害防治的基本原理等。其實習目的是使學生更好的理論聯(lián)系實際，準確認識病害，診斷病害，分析病害發(fā)生流行因素，學會園林植物、花卉、蔬菜等園藝植物病害診斷的基本技術(shù)，為今后解決生產(chǎn)實踐中問題，指導(dǎo)病害的防治與研究，打下堅實的基礎(chǔ)。

二、課程教學的基本要求

1、實習教學方式：采取校內(nèi)外集中實習方式，在植物病害盛發(fā)期帶領(lǐng)學生到植物病害發(fā)生比較典型的地區(qū)進行實地觀察，校內(nèi)外采集蔬菜、果樹、花卉病害。采集的標本則帶回實驗室進行病原形態(tài)觀察、制片和病害鑒定。

2、每班為4-5組，以小組為單位領(lǐng)取標本夾、繩、紙一套，放大鏡、剪子、小刀各一把。

3、標本采集應(yīng)注意：①癥狀典型、單一，不與其他病混雜。②癥狀最好有病癥（真菌、細菌）。③及時晾曬，壓制標本，以免卷葉或發(fā)霉。

4、每組交合格標本10種以上，每種10份以上。

三、課程教學內(nèi)容

2、田間采集病害：采集蔬菜、果樹、花卉等各種病害。

3、晾曬、壓制病害標本：對于易卷葉病害，邊采集邊壓制；其他病害利用休息時間集中壓制，晾曬，力爭提高標本質(zhì)量。

4、鑒定標本：利用顯微鏡進行室內(nèi)鑒定所采集病害。

5、將鑒定準確的標本分類：將鑒定標本分類，一部分裝盒（瓶）補充過去年久褪色或不合格標本；大部分裝袋，供學生用作實驗材料。

四、實習指導(dǎo)書

1、教材：園藝植物病理學，及實驗指導(dǎo)。

2、真菌、細菌、線蟲學等鑒定手冊及圖譜

五、實習教學成績考核

1、點名：早晚點名，不參加者或參加2天以下者不及格。

2、交標本：每組交標本少于10種以下不及格。

根據(jù)交標本及出席情況，成績分：及格和不及格。結(jié)合本課程期末考試給綜合成績。

六、實習教學注意事項

1、加強實習紀律，注意群眾影響。一切行動聽指揮。不準私自擅離班級，禁止早出晚歸，不準爬山，游泳，做到安全第一。班長、組長各負其責，及時清點人數(shù)，發(fā)現(xiàn)問題，及時匯報。注意群眾影響，在實習期間，不準男女同學搭肩摟腰，談情說愛。

2、愛護莊稼，嚴禁違犯群眾紀律，不準采摘無病瓜果，踐踏莊稼，違者包賠損失，各人負責。

第四篇：華農(nóng)普通植物病理學實驗指導(dǎo)

實驗

一、植物病害的認識

一、目的要求

通過室內(nèi)、外觀察，對什么是病害，病害的病狀表現(xiàn)，病害發(fā)生原因及條件，病害對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的危害性等問題，有一個感性認識，從而加深對病害基本概念的理解，并為病害的診斷打下基礎(chǔ)。

二、內(nèi)容及方法

癥狀是植物生病后所表現(xiàn)的病態(tài)。病狀和病征總稱為癥狀，病狀是指植物本身所表現(xiàn)出來的不正常的疾病狀態(tài)（如植株矮縮、黃化、萎蔫、壞死、斑點等），病征是指植物病部上病原物所構(gòu)成的宏觀外貌（如霉狀物、粉狀物、溢膿等）。

癥狀是診斷病害的佐證，也是病害命名的依據(jù)之一，有的病害病狀顯著（如花葉病等），有的病害則病征顯著（如白粉病等），有的病害則二者都顯著（如黑穗病、甘薯軟腐病等），不少病害就是以病狀（如水稻徒長病、花生叢枝病等）或病征（如小麥黑穗病、銹病、白粉病等）命名的。

通過下列病害癥狀的觀察，初步掌握植物病害癥狀的主要類型。根據(jù)病害的表現(xiàn)，可把病狀分為：變色、壞死、腐爛、萎蔫和畸形五類：

（一）變色類：植物受害后，局部或全株失去正常的綠色，稱為變色。1．黃化——植物綠色部分的葉綠素形成受抑制呈退綠或被破壞呈黃化。2．花葉——植物綠色部分局部的葉綠素受抑制或破壞，呈現(xiàn)黃綠相間。3．條紋——黃色部分呈條狀稱為條紋。

4．紅葉——葉綠素形成受抑制，花青素形成過旺，葉片變成紅色或紫色。

（二）班點狀：植物的細胞和組織受到病原物的破壞而死亡，形成各式各樣的病斑。由于病斑的顏色不同，有黑斑、褐斑、灰斑、白斑等。病斑的形狀不一，有圓形、橢圓形、棱形、不規(guī)則形等。有時具有輪紋或花紋，有的病斑受葉脈限制而形成角斑。有的沿葉脈發(fā)展而形成的條紋或條斑。有的病斑周圍有明顯的邊緣，有的邊緣不明顯。在根、莖、葉、葉柄、果和穗等部位都可以發(fā)生壞死性病斑。

（三）腐爛類：植物組織細胞受到病原物的破壞和分解而發(fā)生腐爛。如根腐、莖基腐、塊莖和塊根腐爛等。

1．軟腐和干腐——含水分較多的軟柔組織，有的細胞間的中膠層被病原物所分泌的酶所分解，導(dǎo)致細胞分離，組織崩潰，造成軟腐或濕病，組織腐爛后，水分散失而干硬收縮，成為干腐。

2．立枯及猝倒——幼苗的根或莖基腐爛、幼苗直立枯死而不倒伏，稱為立枯，幼苗迅速整株倒伏稱為猝倒。

（四）萎蔫：植株的根或莖部的維管束受病原物的侵害，大量菌體堵塞導(dǎo)管或產(chǎn)生毒素，阻礙或影響水分運輸，使枝葉失去膨脹狀態(tài)而下垂，葉片枯黃，凋萎，以致植株死亡。

（五）畸形：植物受害后，發(fā)生增生性或抑制性的病變，造成不正常的形態(tài)結(jié)構(gòu)的狀態(tài)，稱為畸形。

1．腫瘤——植物受害后，組織細胞增生，生長發(fā)育過度，病部膨大而形成腫瘤。2．叢枝和發(fā)根——枝或根過度分枝，產(chǎn)生叢枝或發(fā)根現(xiàn)象。

3．矮縮、皺縮——植物受病后，發(fā)生抑制性病變，生長發(fā)育不良，使植株或器官萎縮、皺縮。4．畸形、卷葉、線葉和葉變——病部組織發(fā)育不均勻，呈現(xiàn)扭曲畸形、卷葉、葉片畸形變成細線狀，稱為線葉。有的器官轉(zhuǎn)化為葉狀，稱為葉變。

病原物的營養(yǎng)體或繁殖體在植物病部上的宏觀結(jié)構(gòu)，稱為癥征，主要有下列幾類：

①霉狀物——真菌的繁殖體或營養(yǎng)體在植株病部上表現(xiàn)為明顯的霉層，因顏色不同，有綠霉（柑桔青綠霉?。?，黑霉（甘薯軟腐病），灰霉（稻瘟?。?，赤霉（小麥赤霉病，水稻徒長?。┑?，有些呈白色或灰色如霜狀，則稱為霜霉（霜霉?。?。

②粉狀物——真菌的繁殖體在病部上表現(xiàn)各種粉狀結(jié)構(gòu)。1．白粉狀物——在病部上呈白粉狀，如白粉病。2．黑粉狀物——在病部上呈黑色粉狀，如黑穗病。

3．銹色粉狀物——自病部表皮下泡狀病斑破裂后，散出鮮黃色或深褐色粉末，狀如鐵銹。如銹病。

③小黑?；蛐『邳c——病原真菌的繁殖體在植物病部產(chǎn)生表面較粗糙的黑色小點（分生孢子盤），如炭疽病、或產(chǎn)生表面較光滑的黑色粒狀結(jié)構(gòu)（分生孢子器、子囊殼），稱為小黑粒，如黃麻立枯病、小麥白粉病，小麥赤霉病等。

④菌核——病原真菌的營養(yǎng)體在植物受病部位的表面或組織內(nèi)，形成形狀及大小不一的團粒結(jié)構(gòu)，如水稻紋枯病、菌核桿腐病等。

⑤菌膿狀物或膠狀物——病原細菌在病部常涌出黃色或污白色的膿狀或粘膠狀溢滴，或用水擠壓病部常見污白色混濁液，如水稻白葉枯病，花生青枯病等。

三、注意事項

1．癥狀及為害情況，常因病原和寄主的種類及不同的發(fā)病部位、不同的生育期及環(huán)境條件的不同而有差異。

2．細心觀察和比較健株與受害后的異常表現(xiàn)，比較各種類型癥狀的差異及特點。

四、作業(yè)

1． 思考題：

①什么叫病害？病害與蟲害，機械傷有何不同？ ②認識病害的癥狀有何意義？ 實驗二 植物原真菌——鞭毛菌亞門（Mastigomycotina）

鞭毛菌亞門的真菌多為水生，少數(shù)為土生和陸生。

低等的鞭毛菌其營養(yǎng)體為原質(zhì)團。其它為無隔、多核、發(fā)達的菌絲體。

無性繁殖均較發(fā)達，產(chǎn)生孢子囊和游動孢子。游動孢子有一根或二根鞭毛，前生、后生或側(cè)生，鞭毛又分尾鞭和茸鞭二種，是鞭毛菌分類的主要依據(jù)之一。

有性生殖均以同形配偶子配合產(chǎn)生休眠孢子（囊）或異形配偶配合產(chǎn)生卵孢子。

根據(jù)鞭毛特點，鞭毛菌亞門分為四個綱：

1．根鐘菌綱（Plasmodiophoromycetes）不等長雙根尾鞭。2．壺菌綱（Chytridiomycetes）后生單根尾鞭。3．絲壺菌綱（Hyphochytridiomycets）前生單根茸鞭。4．卵菌綱（Oomycetes）側(cè)生一根尾鞭一根茸鞭。

一、實驗內(nèi)容和材料

1．根腫菌目（Plasmodiophorales）——蕓苔根腫菌（Plasmodiophora brassicae）。和十字花科根腫病。2．壺菌目（Chtridiales）——玉米節(jié)壺菌（Physoderma maydis）和玉米褐斑病。

3．水霉目（Saprolegniales）——水霉屬（Saprolegnia）和綿霉屬（Achlya）及水稻綿腐?。€秧）。4．霜霉目（Peronosporales）

（1）瓜果綿腐菌（Pythium aphanidermatum）和猝倒病。

（2）致病疫霉菌（Phytophthora infestans）和馬鈴薯晚疫病。（3）荔枝霜疫霉菌（Peronophthora litchii）和荔枝霜疫霉病。

（4）禾生梗霉菌（Sclerospora graminicola）和谷子白發(fā)病。

（5）古巴擬霜霉菌（Pseudoperonospora cubensis）和黃瓜霜霉病。

（6）寄生霜霉菌（Peronospora parasitica）和十字花科霜霉病。

（7）白銹菌（Albugo candida）和十字花科白銹病。

（8）1~2個霜霉病未鑒定的標本，要求鑒定到屬。

二、實驗方法與步驟

1． 顯微鏡觀察十字花科根腫病組織切片，有無見到膨大的根細胞內(nèi)不定形的蕓苔根腫菌的原質(zhì)團？有無見到根細胞內(nèi)有大量圓球形、厚壁、密集呈魚卵塊狀的休眠孢子囊堆？（繪圖）

觀察白菜根腫病標本，根部的癥狀屬何種類型？地上部表現(xiàn)什么癥狀？

2．顯微鏡觀察玉米褐斑病組織切片，有無見到病組織的細胞內(nèi)有許多扁球形、深黃色的菌體，這是什么？菌體上有蓋狀的痕跡這又是什么？

觀察玉米褐斑病標本，病斑發(fā)生在什么部位，有什么特點？

3．顯微鏡觀察水霉菌和綿霉菌玻片（或新鮮材料），比較兩個屬的孢子囊釋放游動孢子和孢子囊再生方法有何不同？

觀察水霉菌或綿霉菌的卵孢子，雄器和藏卵器是什么形狀？如何配合？藏卵器內(nèi)有幾個卵球？

觀察水稻綿腐病（爛秧）標本，表現(xiàn)什么特征？癥狀屬何種類型？

4．從培養(yǎng)皿內(nèi)挑取少許瓜果綿腐菌制成玻片，在顯微鏡下觀察其菌絲體，有無分隔？有無見到姜瓣狀或不規(guī)則形的孢子囊（繪圖）？孢子囊如何釋放游動孢子的？有無見到排孢管和泡囊？

雄器和藏卵器如何配合？藏卵器內(nèi)有幾個卵球？ 觀察蔬菜苗期猝倒病和瓜果綿腐病的標本，其癥狀屬何種類型？

5．顯微鏡觀察致病疫霉菌玻片，其孢子囊梗與Pythium有何不同？有無見到呈節(jié)狀膨大的部分？孢子囊什么形態(tài)？（繪圖）

觀察馬鈴薯晚疫病的標本，病塊莖和病葉各表現(xiàn)什么特征？有無見到病葉上的霉輪？這是什么？

6．從培養(yǎng)皿上挑取少許荔枝霜疫霉菌制片，在顯微鏡下觀察注意其孢子囊梗與Phytophthora的有何不同？有無見到卵孢子，什么形態(tài)？

觀察荔枝霜疫霉病的標本，葉部、花穗和果實等部位各表現(xiàn)什么癥狀？有無見到霉狀物？

7．顯微鏡觀察禾生指梗霉的玻片，其孢子囊梗有何特征？孢子囊什么形態(tài)？

取谷子白發(fā)病株，有無見到病部有許多黃色粉末狀物，這是什么？取一塊載玻片滴一滴清水其上，輕輕抖動病株讓黃色粉末狀物落在水滴上，制成玻片在顯微境下觀察，卵孢子什么形態(tài)？顏色？外壁分多少層？觀察谷子白發(fā)病各階段的癥狀（灰背、白尖、白發(fā)）。

8．顯微鏡觀察十字花科白銹組織切片，可見到寄主表皮下面的孢子囊堆，什么形狀？孢子囊便什么形狀？孢子囊如何著生？病組織內(nèi)有無見到卵孢子，什么形狀？外壁有無花紋？

觀察十字花科白銹病標本，葉部和花梗上的癥狀有何區(qū)別？病征有什么特點？

9．任意選取所供的1~2種作物霜霉病標本（黃瓜霜霉病、白菜霜霉病、葡萄霜霉病、菠菜霜霉病、萵苣霜霉病等），挑取病斑背面的霜霉狀物少許制成玻片，在顯微境下觀察，注意其孢子囊梗分枝的方式，孢子囊的形態(tài)，查霜霉菌科分屬檢索表，鑒定出其屬名。

觀察上述各種霜霉病的標本，注意葉部和莖部的癥狀有無區(qū)別比較其病斑形態(tài)和霜霉狀物的顏色有無不同？

附：霜霉科主要屬簡明分類檢索表

1．孢囊梗菌絲狀，短，很少分枝······················ 指梗疫霉屬（Sclcrophthora）1．孢囊梗分枝明顯······················· 2 2．孢囊梗上部膨大，分枝呈指掌狀·············· 指梗霉屬（Sclerospora）2．孢囊梗細長，直徑均勻···················· 3 3．孢囊梗單軸，直角分枝，頂端平切狀············ 單軸霉屬（Plasmopara）3．孢囊梗叉狀銳角分枝········· ··········· 4 4．分枝不對稱···················

· 假霜霉屬（Pseudoperonospora）4．分枝兩側(cè)對稱························ 5 5．頂端尖細······················· 霜霉屬（Peronospora）5．頂端膨大呈掌狀，上生小梗，小梗上生孢子囊······· 盤梗霉屬（Beremia）

三、作業(yè)

1．指明繪圖的，按要求繪出，并注明所繪各部分的名稱。2． 未知霜霉病菌分屬鑒定。實驗三

植物病原真菌——接合菌亞門（Zygomycotina）

接合菌亞門的真菌大多數(shù)為腐生菌，少數(shù)寄生于人、動物、植物及其它真菌上。有一類與高等植物的根共生，結(jié)合成互為有利的共生體——內(nèi)生菌根。

接合菌的營養(yǎng)體多數(shù)為發(fā)達的、多分枝的無隔菌絲體。無性繁殖在孢子囊內(nèi)形成不動的孢囊孢子。

有性生殖多以同形配偶囊接觸配合的方式產(chǎn)生接合孢子。

接合菌亞門包括接合菌綱（Zygomycetes）和毛菌綱（Trichomycetes）。其中接合菌綱的毛霉目（Mucorales）內(nèi)有一些是植物的兼寄生菌。

一、實驗內(nèi)容和材料

毛霉目，毛霉科（Mucoraceae）

1．匍枝根霉菌（Rhizopus stolonifer）和番薯軟腐病。2．生長在培養(yǎng)基上的毛霉屬（Mucor）或犁頭霉屬（Absidia）。3．接合菌有性生殖異宗結(jié)合形成接合孢子的示范材料。

二、實驗方法與步驟

1．顯微境觀察匍枝根霉的營養(yǎng)體和無性繁殖體，注意分清其匍伏枝、假根、孢囊梗、孢子囊、孢囊孢子、囊軸等各部，觀察匍枝根霉的接合孢子（繪圖）。

觀察番薯軟腐病標本，其癥狀屬何種類型？

2．從培養(yǎng)皿中挑取少許毛霉或犁頭霉的菌落制成玻片，在顯微境下觀察，與根霉有何差別？ 3．觀察接合菌異宗結(jié)合的示范材料，在（＋＋）（――）和（＋－）三個組合中哪一個組合才能產(chǎn)生接合孢子。

三、作業(yè)

繪匍枝根霉的無性階段和接合孢子圖，并注明各部分名稱。實驗四 植物病原真菌——子囊菌亞門（Ascomycotina）

子囊菌是真菌中種類最多的一個亞門，多數(shù)為腐生菌，也有不少植物的寄生菌，引起許多重要的植物病害。有一些寄生在昆蟲上可作生防菌。子囊菌的營養(yǎng)體除一些低等的種類為單細胞或不發(fā)達的絲狀體外，大多數(shù)均為分枝發(fā)達的有隔菌絲體。菌絲體有的還可以構(gòu)成菌核、子座和子實體等各種組織結(jié)構(gòu)。

無性繁殖：多數(shù)子囊菌的無性繁殖很發(fā)達，低等的以芽殖方式產(chǎn)生芽孢子。多數(shù)子囊以分生孢子梗產(chǎn)生各種類型的分生孢子。

有性生殖：子囊菌有性生殖的共同特征是通過多種方式進行性結(jié)合后均產(chǎn)生囊狀結(jié)構(gòu)的子囊，子囊內(nèi)再形成一定數(shù)目的子囊孢子。低等的子囊菌其子囊為裸生的。多數(shù)子囊菌的子囊形成于發(fā)育不同、形態(tài)有別的組織結(jié)構(gòu)——有性子實體（子囊果）內(nèi)，子囊的壁有單層和雙層的。

子囊菌亞門便根據(jù)其子囊果的類型、子囊壁是單層還是雙層等特點分為6個綱。1．半子囊菌綱（Hemiascomycetes）2．不整囊菌綱（Plectomycetes）3．核菌綱（Pyrenomycetes）4．腔菌綱（Loculoascomycetes）5．盤菌綱（Discomycetes）6．蟲囊菌綱（Laboulbeniomycetes）

一、實驗內(nèi)容和材料

除蟲囊菌綱外的五個綱，以核菌綱和腔菌綱為主。1．畸形外囊菌（Taphrina deformans）和桃縮葉病。2．紫紅曲霉（Monascus purpureus）的閉囊殼玻片。3．禾白粉菌（Erysiphe graminis）和小麥白粉病。4．待鑒定的幾種白粉菌標本。

5．番薯長喙殼菌（Ceratocystis fimbriata）和番薯黑斑病。6．圍小絲殼菌（Glomerella cingulata）和炭疽病。7．黑腐皮殼菌（Valsa）和樹木腐爛病。8．玉蜀黍赤霉菌（Gibberella zeae）和小麥赤霉病。9．痂囊腔菌（Elsinoe）和瘡痂病。

10．球腔菌（Mycosphaerella）和瓜類褐斑病。11．黑星菌屬（Venturia）和瓜類褐斑病。

12．核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）和十字花科蔬菜菌核腐爛病。

二、實驗方法與步驟

（一）半子囊菌綱，外囊菌目（Taphrinales）

顯微境觀察桃縮葉病的組織切片，有無見到病葉角質(zhì)層下有一層排列整齊的裸生子囊層，子囊內(nèi)有幾個子囊孢子？有無見到成熟子囊基部的腳胞？（繪圖）注意病葉的柵欄組織發(fā)生何種變形？病葉屬何種病變？

（二）不整囊菌綱，散囊菌目（Eurotiales）

顯微境觀察紫紅曲霉菌的閉囊殼玻片，其外壁有幾層細胞，是緊密的還是松散的？閉囊殼內(nèi)有無見到完整的子囊，為什么不易見到？

（三）核菌綱

1．白粉菌目（Erysiphales）

（1）顯微鏡觀察白粉菌的分生孢子玻片（或挑取少許禾谷類作物白粉病的白粉狀物制片），分生孢子呈什么狀態(tài)著生？什么形態(tài)？

挑取白粉病葉上的小黑粒點制片，在顯微鏡下觀察，有無見到褐色圓球形的閉囊殼？附屬絲什么形狀？在低倍視野下用小針尖對準成熟的閉囊殼，輕壓蓋玻片將閉囊殼的外壁壓破，閉囊殼內(nèi)有幾個子囊，什么形狀？有無見到成熟的子囊孢子，什么形狀？每個子囊內(nèi)有幾個子囊孢子？（繪一壓破的閉囊殼圖，有附屬絲、子囊、子囊孢子）顯微鏡觀察禾白粉菌吸器玻片，什么形狀？

（2）觀察所供的幾種植物的白粉病標本，其癥狀有何共同特點？

任選1~2種白粉病標本，挑取其上的黑褐色小粒點制成玻片，在顯微鏡下觀察，查下列檢索表，鑒定出其屬名。附：白粉菌科主要屬簡明分屬檢索表 1．閉囊殼內(nèi)有多個子囊 2 1．閉囊殼內(nèi)只有一個子囊 3 2．附屬絲針形，基部膨大 球針殼屬（Phyllactinia）2．附屬絲菌絲狀 白粉屬（Erysiphe）

3．附屬絲頂部卷曲呈鉤狀 鉤絲殼屬（Uncinula）3．附屬絲頂部呈叉狀分枝 叉絲殼屬（Microsphaera）4．附屬絲菌絲狀，不分枝 單絲殼屬（Sphaerotheca）4．附屬絲頂部呈叉狀分枝 叉絲單囊殼屬（Podosphaera）

球殼菌目（Sphaeriales）

（1）顯微鏡觀察番薯長喙殼菌，有無見到具一根長喙的子囊殼？子囊殼內(nèi)有無完整的子囊？為什么不易見到？子囊孢子什么形狀？（繪圖）

從病組織上挑取少量黑色霉狀物制片，在顯微鏡下觀察，可見到幾種類型的內(nèi)生分生孢子？其形狀和細胞壁的厚薄有無區(qū)別？

觀察番薯黑斑病標本，病苗和病薯塊表現(xiàn)什么癥狀？病部有無見到黑色刺狀物和霉層？（2）在顯微鏡下觀察圍小絲殼菌引起的炭疽病切片，注意其子囊殼與子座的關(guān)系，子囊殼什么形狀、顏色？子囊什么形狀，如何排列，子囊間有無側(cè)絲？子囊孢子什么形狀，單胞？多胞？有無顏色？

觀察各種植物的炭疽病標本，有什么病征？

（3）顯微鏡下觀察蘋果樹腐爛病組織切片，有無見到黑色子座組織，子囊殼什么形狀，有無長頸，與子座的關(guān)系怎樣？子囊內(nèi)有幾個子囊孢子，什么形狀、單胞或多胞？有無顏色？ 觀察黑腐皮殼菌的無性階段（Cytospora）、分生孢子器什么形狀？有無見到發(fā)達的子座組織，孢子器有幾個腔室？分生孢子什么形狀？單胞、多胞？有無色澤？

觀察果樹腐皮病標本，屬何種類型的癥狀？病部有無見到黑色小粒點或孢子角？

（4）顯微鏡觀察小麥赤霉病穗的組織切片，注意子囊殼與子座的關(guān)系？子囊殼什么形狀、顏色？子囊什么形狀？有無見到子囊間的擬側(cè)絲？子囊內(nèi)有幾個子囊孢子，怎樣排列？子囊孢子什么形狀、顏色、有幾個分隔？（繪圖）

觀察小麥赤霉病標本，病穗上有無見到粉紅色霉層和藍黑色小粒點，是什么？ 3．

（四）腔囊菌綱

1．多腔菌目（Myriangiales）

顯微鏡觀察痂囊腔菌引起的瘡痂病組織切片，可見到子座內(nèi)有許多散亂排列的子囊腔，每個子囊腔內(nèi)有幾個子囊？什么形狀？子囊壁是單層還是雙層的？子囊孢子什么形狀，有幾個分隔？ 觀察柑桔瘡痂病、葡萄黑痘病標本，在葉、莖和果實上的癥狀有何特點？ 2．座囊菌目（Dothidiales）

顯微鏡觀察瓜褐斑病組織切片，子座內(nèi)的假囊殼什么形狀？假囊殼內(nèi)的子囊什么形狀？如何排列？子囊孢子什么形狀，單胞還是雙胞？有無色（繪圖）

觀察瓜褐斑病標本，莖部和葉部的癥狀為何不同，有無見到黑色小粒點，是什么？ 3．格孢腔菌目（Pleosporales）

顯微鏡觀察梨或蘋果黑星病組織切片，假囊殼什么形態(tài)？假囊殼內(nèi)的子囊什么形態(tài)？如何排列？有無見到子囊間的擬側(cè)絲？子囊孢子在子囊內(nèi)如何排列？什么形狀？什么顏色？雙細胞是否大小均等？（繪圖）

觀察黑星病標本，葉、枝、果實等部的癥狀各有何特征？

（五）盤囊菌綱，柔膜菌目（Helotiales）

觀察核盤菌的菌核萌發(fā)形成子囊盤的標本，每一菌核可形成幾個子囊盤？子囊盤外觀呈什么形狀？

顯微鏡觀察核盤菌子囊盤切片，子囊盤可分為子實層、囊層基和囊盤被等部分，仔細觀察子囊層的構(gòu)造，子囊什么形狀？如何排列？有無見到子囊間的側(cè)絲？子囊內(nèi)有幾個子囊孢子，什么形狀？單胞還是多胞（繪圖）

觀察核盤菌引起的十字花科作物菌核腐爛病標本，寄主被害部的癥狀屬何種類型？有無見到黑色鼠糞狀的菌核？

三、作業(yè)

1．上述指明的繪圖。2．白粉菌鑒定到屬的結(jié)果。

實驗五 植物病原真菌——擔子菌亞門（Basidiomycotina）

擔子菌亞門的真菌其中低等的多為寄生或?qū)Ｐ约纳ɑ钗餇I養(yǎng)寄生菌），引起許多重要的植物病害，如多種作物上的黑粉病和銹病，高等擔子菌多數(shù)為腐生的，亦有一些兼寄生菌，一些高等擔子菌與高等植物的根共生聯(lián)結(jié)成互為有利的外生菌根。

擔子菌的營養(yǎng)體為發(fā)達的，分枝有隔菌絲體。一些擔子菌的菌絲體上有鎖狀聯(lián)合。高等擔子菌的營養(yǎng)體能組織成結(jié)構(gòu)緊密的大型子實體，如蘑菇。

擔子菌的無性繁殖除銹菌產(chǎn)生雙核的夏孢子外，多數(shù)都不很發(fā)達。有性生殖配合方式簡單，性結(jié)合后從擔子上形成外生型的擔孢子。

擔子菌根據(jù)擔子果有無和擔子果的發(fā)育類型分為三個綱。1．冬孢菌綱（Teliomycetes）2．層菌綱（Hymenomycetes）3．腹菌綱（Gasteromycetes）

一、實驗內(nèi)容和材料

僅做冬孢菌綱

1．柵銹屬（Melampsora）和亞麻銹?。∕.lini）。

2．柄銹屬（Puccinia）和小麥稈銹?。≒.graminis）、條銹?。≒.striiformis）和葉銹?。≒.recondita）3．單孢銹屬（Uromyces）和豆類銹病。

4．膠銹屬（Gymnosporangium）和蘋果銹?。℅.yamadai）的性子器和銹子腔階段以及檜柏上的冬孢子角。

5．黑粉屬（Ustilago）和腥黑粉屬（Tilletia）典型的冬孢子萌發(fā)玻片。6．黑粉菌的主要屬及其引起的黑粉、黑穗病。

（1）黑粉屬：小麥散黑穗病（Ustilago tritici）或玉米黑粉?。║.maydis）。（2）軸黑粉屬（Sphacelotheca）和高梁或玉米絲黑穗?。⊿.reiliana）。（3）腥黑粉屬：小麥腥黑穗?。═illetia caries）。（4）條黑粉屬（Urocystis）和小麥桿黑粉?。║.tritici）。

二、實驗方法與步驟

（1）銹菌目（Uredinales）

1.顯微鏡觀察觀察亞麻銹病的組織切片，有無見到寄主角質(zhì)層下排列整齊的冬孢子堆？冬孢子什么形狀？有沒有柄？相互如何聯(lián)結(jié)的？

觀察亞麻銹病標本，表現(xiàn)什么癥狀？

2．顯微鏡觀察并比較小麥三種銹病的冬抱子有何差別？（給其中一個冬孢子圖）

顯微鏡觀察小麥銹菌的夏孢子，什么形狀、什么顏色，有無見到外壁的微刺？有無見到發(fā)芽孔？（繪圖）

觀察小麥三種銹病標本，比較其夏孢子堆和冬孢子堆有何差別？

3．從豆類銹病病葉上挑取少許夏孢子和冬孢子分別制片，在顯微鏡下觀察，（繪圖）和柄銹屬的冬孢子比較有何不同？

4．顯微鏡觀察蘋果銹病組織切片，可見到病葉的表面有瓶狀的性子器，有無見到性抱子和受精絲？病葉的背面有袋狀的銹子腔，銹孢子是如何著生？ 從檜柏上的冬孢子堆挑取少量膠狀物制片，在顯微鏡下觀察，有無見到有長柄、雙細胞的冬孢子（繪圖）？從細胞壁的厚薄程度、冬孢子柄的長短、是否膠化等，比較膠銹屬和柄銹屬的冬孢子，有什么不同？

觀察蘋果銹病在蘋果葉上和檜柏枝條上的癥狀，分別為膠銹菌的什么發(fā)育階段？

（二）黑粉菌目（Ustilaginales）

1．顯微鏡觀察黑粉菌屬和腥黑粉屬的冬孢子萌發(fā)的玻片，比較它們的萌發(fā)方式有什么不同（擔子有無分隔、擔孢子側(cè)生還是頂生、擔抱子的數(shù)目和形態(tài)）。（繪圖）

2．取小麥散黑穗病或玉米黑粉病、高粱或玉米絲黑穗病、小麥黑穗病和小麥稈黑粉病的標本，分別挑取少許黑粉狀物制片，在顯微鏡下觀察，比較黑粉屬、軸黑粉屬、腥黑粉屬和條黑粉屬的冬孢子有什么不同。（繪2個屬的冬孢子圖）

觀察上述各種黑穗、黑粉病的標本，注意其發(fā)病部位，是局部性的還是全株性？

三、作業(yè)

上述指明的幾個繪圖。

實驗六

植物病原真菌——半知菌亞門（Deuteromycotina）

半知菌亞門的真菌很多是腐生的。有些在工業(yè)上有重要的用途；有些是人和動物的寄生菌；還有一些可引起重要的植物病害。

其共同特點是不進行或自然情況下不常進行有性生殖；營養(yǎng)體除少數(shù)為單細胞外，大多數(shù)為發(fā)達的有隔菌絲；無性繁殖產(chǎn)生各種類型的分生孢子。

半知菌根據(jù)其營養(yǎng)體、無性繁殖體的形態(tài)以及分生孢子發(fā)育的特點分為三個形式綱。芽孢綱（Blastomycetes）：營養(yǎng)體單細胞，以芽殖方式產(chǎn)生芽孢子。

絲孢綱（Hyphomycetes）：營養(yǎng)體為菌絲體，分生孢子產(chǎn)生于散生的孢子?；蚍稚咦幼稀＿€有一些不產(chǎn)生任何分生孢子，只有營養(yǎng)菌絲和菌核。

腔孢綱（Coelomycetes）：營養(yǎng)體為菌絲體，分生孢子產(chǎn)生于孢子盤上或孢子器內(nèi)。

一、實驗內(nèi)容和材料

（一）絲孢綱

1．稻梨形孢菌（Pyicularia oryzae）和稻瘟病。

2． 黃萎輪枝菌（Verticilium albo-atrum）或大麗花輪枝菌（V.dahliae）和植物的黃萎病。3． 長蠕孢屬（Bipolaria）和玉米小斑病（B.maydis）。4．尾孢屬（Cercospora）和芹菜葉斑病（C.apii）。5．鐮孢屬（Fusarium）和植物的枯萎病。

6．立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）和植物的幼苗立枯病。7．齊整小核菌（Sclerotium rolfsii）和植物的白絹病。

（二）腔孢綱

8．刺盤孢屬（Colletotrichum）和盤長孢屬（Gloeosporium）和植物的炭疽病。9．莖點屬（Phoma）或大莖點屬（Macrophoma）和果實的黑腐病。10．殼針孢屬（Septoria）和芹菜斑枯?。⊿.apii）。

二、實驗方法和步驟

1．顯微境下觀察稻梨孢菌的玻片，分生孢子梗什么形態(tài)？分生孢子什么形狀？有幾個分隔？有無顏色？（繪圖）

2．顯微鏡觀察輪枝菌的玻片，分生孢子梗什么形態(tài)？怎樣分枝？

3．顯微鏡觀察玉米小斑病菌，分生孢子什么形狀，有幾個分隔？有無顏色？（繪圖）4．顯微鏡觀察芹菜葉斑病菌（自制玻片）：分生孢子梗和分生孢子什么形態(tài)？幾個分隔？有無顏色？（繪圖）

5．從培養(yǎng)皿的菌落上挑取少許鐮孢菌制成玻片，在顯微鏡下觀察，有無見到兩種分生孢子？各呈什么形態(tài)？分生孢子梗什么形態(tài)？

6．從培養(yǎng)皿的菌落上挑取少許立枯絲核菌制成玻片，在顯微鏡下觀察，菌絲如何分枝的。（繪圖）

7．觀察齊整小核菌的培養(yǎng)特性，培養(yǎng)基表面生長的菌絲有何特征？菌核什么形狀？顯微鏡觀察菌核的切片，表層細胞和內(nèi)部細胞有何不同？

8．顯微鏡觀察炭疽病的組織切片，分生孢子盤什么形狀？分生孢子梗和分生孢子什么形狀？

有無見到黑色的剛毛？（繪圖）

9，顯微鏡觀察果實黑腐病的組織切片，分生孢子器什么形狀？有無見到孔口？分生孢子什么形狀？有無分隔？有無顏色？（繪圖）

10．顯微鏡觀察芹菜斑枯病的組織切片，分生孢子什么形狀？有幾個分隔？ 11．觀察半知菌主要屬引起的植物病害，屬何種類型的癥狀？產(chǎn)生什么病征？

實驗七

植物細菌病害的癥狀觀察及細菌病害的室內(nèi)診斷

一、實驗材料及用具

各種細菌病害癥狀類型的標本、圖片、掛圖；待診斷的細菌病害的新鮮病株，已知血清的稀釋液；手持放大鏡、干凈的載玻片、蓋玻片、生理鹽水、吸水紙、刀、針、剪等用具。

二、實驗步驟

（一）癥狀觀察

1．腐爛

柔嫩多計肥厚的植物器官或組織，尤其是貯藏器官組織、受病原細菌寄生后往往發(fā)生腐爛，造成這類癥狀的細菌，大多是從植物的傷口侵人的。歐氏桿菌屬（Erwinia）中的許多種都可以引起多種植物發(fā)生腐爛，如白菜軟腐病。

2．葉斑、葉枯

葉斑病主要是葉片局部的細胞或組織受細菌侵染后壞死而形成的癥狀。在具有網(wǎng)狀葉脈的寄主植物上葉斑常呈多角形，如黃單胞桿菌（Xanthomonas sp.）引起的棉花角斑病、豆類葉斑等。在禾谷類作物及其它具平行脈的植物上葉斑多呈現(xiàn)為長條形，如水稻白葉枯病和水稻細菌性條斑病等。

細菌性葉斑病發(fā)生初期常呈現(xiàn)半透明的水漬狀，大多數(shù)葉斑病的病斑周圍由于毒素的作用，有一黃色的暈圈所包圍，有些葉斑病的壞死部分，容易在后期脫落形成穿孔，如黃單胞桿菌（Xanthomonas sp.）引起的桃細菌性穿孔病。

3．萎蔫

是侵染維管束組織的細菌所引起的癥狀，如棒狀桿菌（Clavibacter sp.）所引起的馬鈴薯環(huán)腐病，假單胞桿菌（Pseudomonas sp.）引起的花生、煙草、番茄、桑樹等的青枯病。4．癌腫和其它畸形

植物的薄壁組織局部受病原細菌侵染后發(fā)生的刺激性病變，引起癌腫的病原細菌可以產(chǎn)生一些生長激素，刺激細胞分裂增多或體積增大，而呈現(xiàn)癭瘤或簇生等現(xiàn)象，如癌腫野桿菌（Agrobacterium tumefaciens）所引致的蘋果毛根病，仁果類，核果類及葡萄的根癌病。

（二）細菌病害的室內(nèi)診斷 1．顯微鏡檢驗法

將典型、新鮮的病組織洗刷干凈，用解剖刀或剪刀在病健交界處剪取一小塊病組織，置于干凈的載玻片上，加一滴無菌水，蓋上蓋玻片，在低倍顯微鏡下觀察，若有大量的細菌從病組織中溢出，則可初步診斷該病組織可能是由細菌引起的病害。

2．血清反應(yīng)法（載玻片凝集反應(yīng)）

（1）在干凈的載玻片上滴一滴生理鹽水，取一小塊病組織浸于其中，靜置片刻，讓細菌自行涌出，（可在顯微鏡下觀察）制成細菌懸浮液。

（2）將病組織移去，加一滴已知病原細菌的抗血清，充分混合，觀察是否有凝集集物形成，可另設(shè)一滴不加抗血清的作對照。

三、作業(yè)

1． 描述所觀察的各類細菌病害的癥狀特點。2． 細菌病害血清診斷法的檢驗結(jié)果。

實驗八 植物病原細菌的分離

一、目的

學習從感病的植物組織中分離出病原細菌純培養(yǎng)物的操作技術(shù)。

二、實驗材料及用具 新鮮的病組織。

酒精燈、滅菌的細菌培養(yǎng)基、滅菌的干凈培養(yǎng)皿、分離接種用具、升汞液（0.1%）、漂白粉液（1:14）70％酒精、油性筆、火柴。

三、分離前的準備工作

1．將實驗室打掃干凈，關(guān)閉門窗，減少空氣流通； 2．用0.1％升汞液將實驗臺面抹洗干凈，再鋪上濕毛巾； 3．將所需用品都放好在工作臺，操作時盡量避免走動。

四、病原細菌的分離

（一）平板劃線分離法

1．將沖洗干凈的新鮮病組織剪切成小塊，在70%酒精中浸一會迅速移入0.1%升汞液中處理1－2分鐘（時間的長短因材料不同而異），后移入漂白粉液中浸1－2分鐘，再用無菌水沖洗干凈。（如分離的材料為肥厚多汁的組織或較粗的莖、根、枝條等，可將其表面蘸上酒精并在火焰上灼燒進行表面清毒，然后以滅菌的解剖刀削去表皮，在病部邊緣挑取一小病組織塊）。

2．取一滅菌的培養(yǎng)皿，加一滴無菌水在皿內(nèi)，將上述已經(jīng)過表面消毒的病組織置于其中，用滅菌的解剖刀將病組織切碎，靜置片刻，制成細菌懸浮液。

3．用滅菌的移植環(huán)蘸少許細菌懸浮液，在瓊脂平板上自左至右劃數(shù)條線，使用過的移植環(huán)再經(jīng)火焰滅菌，移動培養(yǎng)皿的位置，移植環(huán)，連接上線末再劃數(shù)條線，如此操作。在該培養(yǎng)皿的瓊脂平板上重劃3－4次，便可能獲得分散的單個菌落。

4．將培養(yǎng)皿倒置，在26－28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1－2天后，觀察檢查，如見分散的單個細菌落則進行移種，純化并保存。

（二）平皿稀釋法 1．取四個滅菌的培養(yǎng)皿按順序排列，每一個皿內(nèi)各加入一滴無菌水。2．細菌懸浮液的制備（同上項2）

3．用滅菌的移植環(huán)蘸取1－2環(huán)菌液移入第二個培養(yǎng)皿中，略略攪動，再從第二個培養(yǎng)皿內(nèi)蘸取1－2環(huán)稀釋后的菌液移入第三個培養(yǎng)皿內(nèi)，如此依次移至第四個培養(yǎng)皿或至最后一個培養(yǎng)皿為止。

4．將已完全熔化的培養(yǎng)基待其冷卻至45℃左右，在各培養(yǎng)皿內(nèi)倒入10－15毫升培養(yǎng)基，輕輕搖動使其與皿內(nèi)的細菌懸液充分混勻，靜置待其冷凝后即按上項方法培養(yǎng)、檢查、純化和保存。

五、作業(yè)

交分離所得的純培養(yǎng)菌種1支。

實驗九

植物病毒的傳染試驗

一、實驗材料

TMV病葉

健康的心葉煙植株

白菜花葉病

健康的白菜植株

無毒菜蚜

金鋼砂、紗布、消毒研缽、毛筆、標簽等。

二、實驗步驟和方法

（一）植物病毒汁液摩擦傳染試驗 1．制備病毒汁液：取一小塊TMV病葉，用水洗干凈，放在研缽中磨碎，加蒸餾水2~10倍再進行研磨使得到病毒汁液。

2．用肥皂洗凈雙手，取健康的心葉煙植株一盆，在其上部已展開的三片葉的正面撒上一層薄薄的金鋼砂。

3．左手托住葉片，用右手的拇指和食指夾住紗布沾取少許病毒汁液，輕抹葉片，注意葉片各部位都要抹到，但不要重復(fù)以免擦傷葉表面，抹后用蒸餾水沖洗葉面以去除多余的病毒汁液及殘存的金鋼砂，接種后即告完畢。

4．用肥皂將雙手充分洗干凈，按上法用健株煙葉研磨的汁液進行接種作對照。5．將接過種的植株及對照植株放入無蟲溫室中，三天后觀察發(fā)病情況，記錄結(jié)果。

（二）介體蚜蟲傳染試驗

1．用毛筆取無毒菜蚜20頭，放在小皿中餓半小時后，移到白菜花葉病株上（病葉上先放上一張1平方厘米的白紙，將蚜蟲先移到紙片上，讓其慢慢爬到病葉上）飼毒5－10分鐘。

2．將飼過毒的蚜蟲用毛筆轉(zhuǎn)移到4株白菜健苗上，每株5頭（每一健苗先放一張1平方厘米的白紙片，將帶毒蚜蟲移到紙片上，任其爬到葉片上取食）傳毒接種24小時后，噴樂果將所有蚜蟲殺死。

3．用無毒菜蚜直接移到白菜健苗取食作為對照。4．2－3周后，觀察發(fā)病情況并記錄。

三、作業(yè)

兩種傳染病毒試驗記錄結(jié)果及寫出分析報告。

實驗十

植物病毒的物理性質(zhì)測定

一、實驗材料 TMV病

健康的心葉煙幼苗

消毒研缽、紗布、薄壁小管、燒杯、水浴箱、試管、棉花、1毫升及10毫升吸管、小碟等。

二、實驗步驟和方法

（一）失毒溫度的測定

1．取TMV病葉在研缽中研碎，用雙層紗布過濾壓取汁液，1毫升吸管將病毒汁液分別裝入5個薄壁小管中，分別標記處理的溫度。

2．將恒溫水浴箱調(diào)至95℃、90℃、80℃、70℃和60℃五個溫度等級。

3．從高溫至低溫，依次每種溫度放入一支裝有TMV病毒汁液的薄壁小試管，各處理10分鐘，取出立即置冷水中冷卻。

4．按常規(guī)汁液摩擦接種法，分別將五種不同溫度處理過的病毒汁液接種在心葉煙的健康植株上，掛好標簽，放置于無蟲溫室中。

5．接種后第三天觀察接種過的葉片壞死枯斑出現(xiàn)的情況，記錄結(jié)果。失去侵染力的最低溫度即為該病毒的失毒溫度。

（二）稀釋終點的測定

l．取六個小碟分別標記稀釋度為1:10，1:102，1:103，1:104，1:105、1:106。2．用10毫升的吸管吸取蒸餾水分別放入六個小碟內(nèi)，每碟9毫升。吸取1毫升TMV汁液，放入1:10的小碟中，攪勻。

4．從1:10的小碟中吸取1毫升稀釋1O倍的病毒汁液移入第二個小碟中，獲得1:102的病毒稀釋液。按同法依次稀釋至第六個小碟，分別獲得六種不同稀釋度的病毒汁液。5．從稀至濃，將六種不同稀釋度的病毒汁液分別用常規(guī)接種法接種在健康的心葉煙植株上，置無蟲的溫室中。

6．接種后第三天觀察接種過的葉片壞死枯斑出現(xiàn)的情況，記錄結(jié)果。失去浸染力前一個稀釋度即為該病毒的稀釋終點。

三、作業(yè)

病毒致死溫度和稀釋終點試驗記錄結(jié)果及寫出分析報告。

實驗十一 植物線蟲病的癥狀觀察、病原線蟲的識別及線蟲的常規(guī)分離方法

一、實驗材料及用具

1．常見的農(nóng)作物線蟲病害標本：小麥粒線蟲病；甘薯莖線蟲?。换ㄉ蚋探鄹Y(jié)線蟲??；大豆胞囊線蟲??；水稻潛根線蟲??；水稻干尖線蟲病等。

2．顯微鏡鏡檢用具。

3．帶有活線蟲的植物病組織或土壤標樣。

4．分離線蟲用的漏斗、紗布、小燒杯、吸管、離心管等。

二、實驗步驟和方法

1． 取所提供的各種植物線蟲病害的標本，觀察其受害部位及癥狀特點并作記載。

2．顯微鏡觀察幾種植物線蟲各蟲態(tài)的形態(tài)特征。注意其是雌雄同形還是雌雄異形，及其內(nèi)部主要器官。

3． 用漏斗法分離病植物或土壤中的活線蟲，取病組織或土壤20克，置于盛有清水的紗網(wǎng)漏斗中（用雙層紗布包扎亦可），在20－25℃的室溫下靜置24小時。線蟲即會慢慢游出滑落到漏斗底部的乳膠管中，然后輕輕打開乳膠管的止水夾，用小燒杯收集漏斗底部的液體，用每分鐘約1000轉(zhuǎn)的離心機將此液體進行離心去掉上層清液，用吸管吸取一滴沉淀液置載玻片上，在低倍顯微鏡下檢查有無活動的線蟲？注意區(qū)別土壤中的寄生線蟲和非寄生線蟲。

三、作業(yè)

1．描述2－3種線蟲病的癥狀特點。2．繪一種植物病原線蟲的形態(tài)圖。

3．記述線蟲分離的結(jié)果。

第五篇：農(nóng)業(yè)植物病理學實驗室守則及實驗指南

農(nóng)業(yè)植物病理學實驗室守則及實驗指南

一、實驗須知

1、實驗前須充分預(yù)習實驗指導(dǎo)書的內(nèi)容，明確本次實驗的目的要求，準備好當次實驗所需用具。

2、實驗操作要細心謹慎，認真進行觀察，獨立完成實驗作業(yè)。

3、實驗用品和材料用后必須放回原處，以免丟失，也方便他人取用，對于需清潔的用具須及時清潔。

4、實驗儀器設(shè)備等由于操作不當或其他原因等引起損壞或遺失的，應(yīng)及時登記并按照學校有關(guān)規(guī)定處理。

5、實驗完畢應(yīng)將儀器放回原處，擦凈桌面，收拾整齊。離開實驗時注意關(guān)閉門、窗、水、燈等。

二、實驗指南

農(nóng)業(yè)植物病理學實驗是農(nóng)業(yè)植物病理學課程的重要組成部分，目的是以植物病理學和其它相關(guān)學科知識為基礎(chǔ)，追溯引起植物病害發(fā)生的原因及過程，認識不同病原所致病害的癥狀特點及病原形態(tài)特征。掌握植物病害實驗及研究的基本技能及方法，注重學生觀察、思考、分析、解決實際問題的能力培養(yǎng)，為將來的研究工作打下基礎(chǔ)。

本實驗適用于植保學科各專業(yè)方向（植物病理學、植物檢疫學、農(nóng)業(yè)昆蟲學等）《農(nóng)業(yè)植物病理學》課程的實驗教學，共分為9次實驗，30個學時，前1～7次實驗，重點要求學生認識和掌握水稻、麥類、棉花、雜糧、煙草、油料作物、果樹和蔬菜病害等的癥狀和病原物的形態(tài)特點、學習顯微繪圖、制片技術(shù)；實驗8～9為綜合型實驗，要求學生掌握田間一般病害的診斷和鑒定方法，以及學會田間病害調(diào)查方法，做到將所學知識真正應(yīng)用到生產(chǎn)實踐中。要求學生在實驗課前預(yù)習實驗指導(dǎo)，明確實驗的目的意義，復(fù)習實驗相關(guān)理論知識，了解實驗的方法、步驟及重難點；實驗課上在教師指導(dǎo)下，按照要求的內(nèi)容和方法，認真、獨立地進行實驗，分析實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果，認真完成實驗報告，總結(jié)實驗所得并找出實驗中不足之處的原因，培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W態(tài)度。